Гистидиновая кислая фитаза Pantoea brenneri: экспрессия в метилотрофных дрожжах, свойства и практическое применение тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Бульмакова Дарья Сергеевна

• Бульмакова Дарья Сергеевна
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Бульмакова Дарья Сергеевна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Цель и задачи исследования

Научная новизна полученных результатов

Методология и методы исследования

Достоверность результатов

Теоретическая и практическая значимость работы

Основные положения, выносимые на защиту

Апробация работы

Место выполнения работы и личный вклад автора

Связь работы с научными программами

Публикация результатов исследования

Объем и структура диссертации

Благодарности

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Фитаты и фитазы

1.1.1 Инозитолфосфаты: структура, свойства, распространение и роль

1.1.2 Фитазы: классификация и свойства

1.2 Генная инженерия бактериальных фитаз

1.2.1 Системы экспрессии на основе дрожжей

1.2.2 Кодон-оптимизация и выбор промоторов

1.2.3 Оптимизация секреции на основе подбора сигнальных пептидов

1.3 Геномные исследования бактериальных фитаз

1.4 Практическое применение микробных фитаз

1.4.1 Области применения микробных фитаз

1.4.2 Микробные фитазы как кормовые добавки в птицеводстве

1.4.3 Анализ микробиоты кишечника птиц при использовании

кормовых добавок на основе бактериальной фитазы

Заключение

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Штаммы микроорганизмов

2.2 Питательные среды и условия культивирования микроорганизмов

2.3 Последовательность гена фитазы

2.4 Коммерческий набор для создания систем экспрессии PichiaPink

2.5 Конструирование экспрессионных конструкций

2.6 Трансформация клеток E. coli DH5a

2.7 Выделение плазмидной ДНК

2.8 Трансформация клеток P. pastoris

2.9 Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.10 Электрофорез ДНК

2.11 Анализ экспрессии фитазы в рекомбинантных штаммах дрожжей

2.12 Электрофорез белков и вестерн-блоттинг

2.13 Определение концентрации белка

2.14 Определение активности фитазы

2.15 Выделение и очистка фитазы

2.16 Энзиматические свойства фитазы

2.16.1 рН-Оптимум и рН-стабильность

2.16.2 Температурный оптимум и температурная стабильность

2.16.3 Влияние ионов металлов на ферментативную активность

2.16.4 Влияние желчи на ферментативную активность

2.16.5 Оценка способности фитазы к гидролизу фитата в составе 69 природных субстратов

2.17 Ферментация дрожжей в биореакторе

2.18 Научно-практический эксперимент по использованию фитазы в 71 рационе цыплят бройлеров

2.18.1 Птицы, корма и условия эксперимента

2.18.2 Продуктивность птицы и усвояемость питательных веществ 72 кормосмеси

2.18.3 Анализ гематологических и биохимических показателей 73 сыворотки крови

2.18.4 Ветеринарно-санитарные показатели качества мяса

2.19 Изучение влияния фитазы на микрофлору слепого отростка 74 кишечника цыплят

2.19.1 Подготовка образцов, выделение и секвенирование ДНК

2.19.2 Обработка данных секвенирования

2.20 Биоинформатика

2.21 Статистическая обработка результатов 76 3 РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Конструирование гетерологичных систем экспрессии гена фитазы 77 P. brenneri AS3 на основе дрожжевых интегративных векторов pPINK-

HC и pPINK-LC и набора сигнальных пептидов

3.2 Получение штаммов P. pastoris с геном фитазы P. brenneri AS3

3.3 Анализ экспрессии бактериальной фитазы P. brenneri AS3 82 рекомбинантными штаммами P. pastoris

3.4 Получение, очистка и свойства рекомбинантной фитазы P. brenneri 84 AS3

3.5 Ферментация рекомбинантных штаммов дрожжей в биореакторе и 91 выделение фитазы из культуральной жидкости методом ультрафильтрации

3.6 Тестирование фитазы P. brenneri AS3 в экспериментах in vivo в 94 качестве кормовой добавки к рациону цыплят бройлеров

3.6.1 Влияние фитазы на продуктивность, перевариваемость и 94 усвояемость питательных веществ цыплятами бройлерами

3.6.2 Влияние кормовой добавки на основе фитазы на 98 гематологические и биохимические показатели крови цыплят бройлеров

3.6.3 Ветеринарно-санитарная оценка качества мяса птицы и

гистологическая характеристика внутренних органов цыплят

3.7 Анализ микробиоты слепого отростка кишечника цыплят

бройлеров при применении в рационе рекомбинантной фитазы

Р. Ътвппвп ЛБ3 в качестве кормовой добавки

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АДФ Аденозиндифосфат

АМФ Аденозинмонофосфат

АТФ Аденозинтрифосфат

БСА Бычий сывороточный альбумин

ГЦ-состав Содержание гуанина и цитозина

ДНК Дезоксирибонуклеиновая кислота

кДа Килодальтон

мРНК Матричная рибонуклеиновая кислота

ПААГ Полиакриламид

п.о. Пары оснований

ПЦР Полимеразная цепная реакция

РНК Рибонуклеиновая кислота

тРНК Транспортная рибонуклеиновая кислота

ЭДТА Этилендиаминтетраацетат

ЭПР Эндоплазматический ретикулум

АА Акриламид

AOX Алкогольоксидаза

Bis AA Бис-акриламид

BPPs ß-пропеллерные фитазы

CPs Цистеиновые фитазы

DHAS Дигидроксиацетон синтаза

dNTP Дезоксирибонуклеозидтрифосфат

DTT Дитиотреитол

FDH Формиат дегидрогеназа

FLD Формальдегид дегидрогеназа

GAPDH Глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа

HAPs Гистидиновые кислые фитазы

His-tag Гистидиновый таг

LA Агаризованная питательная среда Лурия-Бертани

LB Питательная среда Лурия-Бертани

PAPs Пурпурно-кислые фитазы

PBS Фосфатный буфер

PGK 3-фосфоглицерат киназа

PMSF Фенилметилсульфонил фторид

PSA Персульфат аммония

PTPs Протеин-тирозиновые фосфатазы

PVDF Поливинилиденфторид

SDH Сорбитолдегидрогеназа

SDS Додецилсульфат натрия

TEMED Тетраметилетилендиамин

Аминокислоты:

D Аспарагиновая кислота

G Глицин

H Гистидин

P Пролин

R Аргинин

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Основу сбалансированного питания живых организмов составляют органические и минеральные соединения. Необходимым минералом для осуществления жизненно важных процессов в клетке является фосфор [Kolodiazhnyi, 2021; Serna, Bergwitz, 2020]. Неуклонное сокращение природных запасов минерального фосфора является серьезной проблемой, на решение которой сосредоточено внимание исследователей [Alewell et al., 2020; Kunhikrishnan et al., 2022]. Одно из решений - использовать фитаты, широко распространенные в окружающей среде фосфорорганические соединения. В природе гидролиз фитатов осуществляется специфическими ферментами фитазами, которые продуцируются многими почвенными микроорганизмами и являются ключевыми ферментами в круговороте фосфорорганических соединений почвы [Jatuwong et al., 2020; Kumar et al., 2019]. Фитазы характеризуются большим разнообразием: они выделены из различных видов микромицетов, бактерий, дрожжей, а также обнаружены в тканях растений и животных и различаются по механизмам катализа, биохимическим свойствам и стереоспецифичности. Фитазы микробного происхождения отличаются высокой ферментативной активностью в отличие от растительных и животных ферментов и обладают высоким потенциалом практического применения [Jatuwong et al., 2020; Savita et al., 2017].

Активное изучение микробных фитаз связывают с их применением в сельском хозяйстве в качестве кормовых добавок, поскольку фитаты являются основной составляющей кормов растительного происхождения и не способны к усвоению в пищеварительном тракте животных с однокамерным желудком и птиц [Raboy, 2020; Wali et al., 2021]. Ввиду структурных особенностей фитаты также активно связывают катионы металлов, остатки аминокислот, белки и углеводы, снижая их биодоступность [Wang, Guo, 2021]. Неспособность животных метаболизировать фитаты имеет негативное

воздействие на экологическую обстановку: они выделяются с отходами сельскохозяйственного производства и накапливаются в окружающей среде, приводя к закислению почв и эвтрофикации водных экосистем [ЛЬЬав1 ег а/., 2019; Wali ег а/., 2021]. Поиск и применение фитаз микробного происхождения становится эффективным способом повышения биодоступности и утилизации фитатов. Поэтому разработка биотехнологий на основе новых высокоэффективных гетерологичных систем экспрессии микробных фитаз направлена на получение достаточного количества ферментов для практического применения. Перспективными экспрессионными системами являются дрожжевые, в частности, метилотрофные дрожжи РгеЫа раягопя. Они широко используется для производства ферментов различного назначения [Е^ип ег а/., 2021; Karbalaei ег а/., 2020].

Цель и задачи исследования

Целью работы явилось создание системы экспрессии гистидиновой кислой фитазы Рапгоеа Ъгеппеп AS3 на основе метилотрофных дрожжей РгеЫа раягопя, разработка методов препаративного получения фермента и его тестирование в качестве кормовой добавки к рациону птиц.

В работе решались следующие задачи:

1. Разработка экспрессионной векторной системы с геном гистидиновой кислой фитазы Р. Ъгеппеп AS3 под контролем гетерологичного промотора и сигнальных пептидов в клетках метилотрофных дрожжей Р. раягопя.

2. Очистка фитазы Р. Ъгеппеп AS3 из культуральной жидкости рекомбинантного штамма Р. раягопя и изучение физико-химических и каталитических свойств фермента.

3. Получение препаративного количества фитазы Р. Ъгеппеп ЛБ3 из культуральной жидкости Р. раягопя в условиях биореактора и тестирование

фермента в качестве кормовой добавки в экспериментах in vivo на цыплятах бройлерах.

4. Изучение влияния кормовой добавки на основе фитазы P. brenneri AS3 на структуру и динамику формирования микробиоты слепых отростков кишечника цыплят бройлеров.

Научная новизна полученных результатов

Впервые разработана экспрессионная система бактериальной гистидиновой кислой 3-фитазы P. brenneri AS3 в клетках метилотрофных дрожжей P. pastoris, максимальный уровень экспрессии фитазы получен под контролем индуцибельного дрожжевого промотора гена алкогольоксидазы AOX1 и сигнального пептида гена инулиназы Kluyveromyces maxianus. Установлено, что фитаза P. brenneri при экспрессии в дрожжах модифицируется путем гликозилирования и обладает повышенным оптимумом температуры, а также увеличенным диапазоном рН- и термостабильности по сравнении с нативным ферментом. Разработаны условия культивирования рекомбинантных дрожжей в биореакторе для получения препаративного количества фитазы с целью тестирования в качестве кормовой добавки к рациону бройлеров. Впервые показано, что добавление фитазы P. brenneri AS3 к рациону цыплят приводило к увеличению коэффициента перевариваемости фосфора и уменьшению его экскреции в окружающую среду, повышению продуктивности птицы и снижению потребления корма. Получены приоритетные данные о положительном влиянии применения фитазы на разнообразие микробиоты слепого отростка кишечника цыплят и увеличению доли представителей семейств Rikenellaceae (Alistipes spp.) и Prevotellaceae (Prevotella spp.).

Методология и методы исследования

Теоретической базой диссертационной работы явились публикации российских и зарубежных ученых, посвященные фитат-гидролизующим

ферментам фитазам, дрожжевым экспрессионным системам, применяемым в птицеводстве биопрепаратам и их оценке по влиянию на организм птицы. Экспериментальное решение задач диссертационной работы осуществлено с применением современных методов молекулярной биологии, генной инженерии, биоинформатики и классических методов микробиологии, биохимии и зоотехнии.

Достоверность результатов

Степень достоверности результатов подтверждена значительным количеством лабораторных и научно-производственных экспериментов, проведенных с привлечением целого арсенала методов микробиологии, биохимии, молекулярной биологии, генной инженерии и зоотехнии с использованием современного высокотехнологичного оборудования, результаты которых проанализированы с помощью соответствующих программных обеспечений. Представленные в работе результаты являются воспроизводимыми и статистически достоверными. Включенные в диссертационное исследование результаты опубликованы в рецензируемых российских и зарубежных журналах и доложены на всероссийских, региональных и международных конференциях.

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретическая значимость исследования определяется новизной полученных результатов и состоит в разработке фундаментальной и методической базы для создания новых эффективных гетерологичных систем экспрессии бактериальных фитаз в дрожжах и оценки их практического потенциала.

Практическая значимость работы заключается в получении и оценке эффективности новой кормовой фитазы, включающее создание экспрессионной системы и последующую разработку алгоритма масштабирования получения фермента. Полученные данные представляют

основу для создания новых биопрепаратов и расширения рынка кормовых фитаз. Рекомбинантный штамм-продуцент фитазы депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов как РгеЫа раягош БТ10 с регистрационным номером ВКПМ У-4396.

Результаты научно-практических экспериментов по использованию рекомбинантной фитазы в рационах цыплят бройлеров показали, что фермент оказывал положительное влияние на продуктивность птицы, снижая при этом потребление корма, и способствовал увеличению коэффициентов перевариваемости как органических, так и минеральных веществ корма. На основе полученных результатов можно сделать заключение о перспективах использования рекомбинантной фитазы Р. Ъгеппеп ЛБ3 в рационах цыплят бройлеров для более полного усвоения ими питательных веществ кормов и прироста биомассы, а также снижения экскреции неусвоенного фосфора в окружающую среду.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработана система экспрессии гена гистидиновой кислой фитазы Р. Ъгеппеп AS3 в метилотрофных дрожжах Р. раягопя и способ получения препаративного количества фермента в условиях биореактора. В результате гетерологичной экспрессии увеличиваются рН- и термостабильность белка.

2. Добавление фитазы Р. Ъгеппеп AS3 к рациону цыплят бройлеров в условиях фермерского хозяйства показывает улучшение переваримости фосфора и снижение его экскреции в окружающую среду, увеличение продуктивности птицы и снижение потребления корма. По основным характеристикам фитаза Р. Ъгеппеп является перспективной для практического использования в качестве кормовой добавки в птицеводстве.

3. Применение фитазы Р. Ъгеппеп ЛБ3 в качестве кормовой добавки к рациону цыплят бройлеров вызывает увеличение разнообразия микробиоты слепого отростка кишечника цыплят и способствует росту доли полезных

микроорганизмов Alistipes spp., оказывающих защитное действие против заболеваний пищеварительного тракта, и Prevotella spp., разлагающих клетчатку и продуцирующих летучие жирные кислоты.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гистидиновая кислая фитаза Pantoea brenneri: экспрессия в метилотрофных дрожжах, свойства и практическое применение»

Апробация работы

Материалы диссертационной работы представлены на международных, всероссийских и региональных конференциях: Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2017, 2018), Международном конгрессе Федерации европейских биохимических сообществ «FEBS» (Иерусалим, 2017; Прага 2018), Всероссийской школе-конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Материалы и технологии XXI века» (Казань, 2018), Международном молодежном научном форуме «ЛОМОНОСОВ» (Москва, 2018, 2019), Всероссийской научно-практической конференции «Микробные технологии в птицеводстве и животноводстве» (Казань, 2019), Всероссийской школе-конференции молодых ученых «Биохимия - основа наук о жизни» (Казань,

2019), Всероссийской с международным участием школе-конференции молодых ученых «Биосистемы: организация, поведение, управление» (Нижний Новгород 2019, 2020), Международной конференции «Современные биотехнологии для науки и практики» (Санкт-Петербург,

2020), Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы совершенствования технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства: Мосоловские чтения» (Йошкар-Ола, 2020), Международной научно-практической конференции «Биотехнология: наука и практика» (Крым, 2021).

Место выполнения работы и личный вклад автора

Работа выполнена лично автором на кафедре микробиологии и НИЛ «Агробиоинженерия» Института фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета. Автором

диссертационного исследования совместно с научным руководителем разработан план, сформулирована цель и поставлены задачи работы. Представленные результаты получены лично автором либо при его непосредственном участии. Диссертант лично проанализировал данные литературы, освоил методы работы, выполнил лабораторные эксперименты, провел анализ и статистическую обработку результатов, сформулировал выводы. Секвенирование образцов ДНК выполняли на базе Междисциплинарного центра протеомных исследований КФУ и в коммерческой фирме «Литех» (Россия). Культивирование дрожжей в биореакторе осуществляли на базе компании ООО «Бионоватик». Научно-практические эксперименты на цыплятах проводили в условиях вивария фермерского хозяйства КФК Алимчуевой З.И. (Россия, Республика Марий Эл, Медведевский район, деревня Среднее Азяково).

Связь работы с научными программами

Работа выполнена в рамках гранта РНФ 16-16-04062 (2016-2018 гг. с продлением на 2019-2020 гг.) «Разработка новых подходов с применением бактериальных ферментов и пробиотиков для повышения усвояемости корма сельскохозяйственной птицы на основе изучения физиологии ее пищеварения» и в рамках Программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета.

Публикация результатов исследования

По материалам работы опубликовано 24 научные работы, среди которых 6 статей в рецензируемых научных журналах, индексируемых в базах данных Web of Science и Scopus и входящих в перечень ВАК, а также 18 тезисов, из которых 2 опубликованы в журналах, входящих в перечень базы данных Web of Science и Scopus.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, заключения и списка цитируемой литературы. Текст изложен на 159 страницах, проиллюстрирован 33 рисунками, включает 12 таблиц, список литературы содержит 217 библиографических источников.

Благодарности

Автор выражает глубокую признательность научному руководителю д.б.н., профессору кафедры микробиологии КФУ М.Р. Шариповой за постановку проблемы, плодотворное обсуждение результатов и внимательное отношение к работе; к.б.н., доценту кафедры микробиологии КФУ А.Д. Сулеймановой за помощь в освоении теоретического материала, новых методических подходов и обсуждении результатов; д.б.н., профессору кафедры технологии производства продукции животноводства МарГУ С.Ю. Смоленцеву за помощь в организации экспериментов научно-хозяйственного опыта на цыплятах и обсуждении результатов экспериментов; к.х.н. Р.Ф. Хайруллину и с.н.с. компании ООО «Бионоватик» Д.Д. Зиганшину за помощь при работе на биореакторе; м.н.с М.Т. Лутфуллину и м.н.с. Г.Ф. Лутфуллиной за помощь в проведении экспериментов научно-хозяйственного опыта; м.н.с. Д.С. Пудовой за консультации при проведении биоинформатического анализа данных секвенирования; к.б.н., в.н.с. НИЛ Молекулярная вирусология КФУ Е.И. Шагимардановой и к.б.н., в.н.с. НИЛ «Экологическая метагеномика» Н.Е. Гоголевой за помощь в проведении секвенирования образцов.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Фитаты и фитазы

1.1.1 Инозитолфосфаты: структура, свойства, распространение и роль

Фосфор - важнейший макроэлемент живой клетки. Он входит в состав нуклеиновых кислот, фосфолипидов, макроэргических молекул, коферментов, гормонов и необходим для функционирования основных биологических процессов в организме [Jez et al., 2016]. Среди органических соединений фосфора, используемых живыми организмами, особое место занимают инозитолфосфаты. Ключевым компонентом инозитолфосфатов является циклический шестиатомный спирт инозитол, или циклогексан(1,2,3,4,5,6)гексол, который в зависимости от расположения связей может образовывать множественные стереоизомеры. Гидроксильные группы стереоизомеров ориентированы в пространстве либо экваториально, либо аксиально, что приводит к девяти возможным конформациям инозитола - мио-, нео-, эпи-, сцилло-, D-IL-хиро- муко-, алло-, и цис- [Al-Suod et al., 2017; Tanaka et al, 2017; Thomas et al, 2016]. В природе наиболее распространенными являются мио-, сцилло-, хиро- и нео-инозитолфосфаты, среди которых часто встречается мио-инозитол, имеющий стабильную конформацию с одной аксиальной и пятью экваториальными гидроксильными группами (рисунок 1А). При замещении гидроксильных групп инозитольного кольца на остатки фосфорной кислоты образуется фосфорилированный спирт - инозитолфосфат. В зависимости от количества фосфатов могут быть образованы различные соединения - от инозитолмонофосфата до инозитолгексакисфосфатов. К примеру, мио-инозитол гексакисфосфат представляет соединение в виде сложного эфира мио-инозитола и шести остатков фосфорной кислоты (рисунок 1Б). Согласно официальной номенклатуре, это соединение представляет мио-инозитол(1,2,3,4,5,6)гексакисфосфат (фитат). Фосфорилированные формы большинства изомеров инозитола обнаружены в окружающей среде, в

основном в растениях, хотя некоторые из этих изомеров были синтезированы химическим путем [Al-Suod et al., 2017]. Первоначально считалось, что возможны только 63 изомера инозитол фосфатов, сегодня идентифицируют до 357 изомеров [Agranoff, 2009; Thomas et al., 2016].

А

Б

но

он

Рисунок 1 - Химическая структура мио-инозитола (А) и мио-инозитол гексакисфосфата (фитата) (Б) [Duong et al., 2018].

Остатки фосфорной кислоты в составе инозитолфосфатов химически активны, в связи с чем эти соединения являются сильными природными полианионными хелаторами биологически важных молекул. Среди них катионы металлов - Са2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+, Cu2+, Fe2+ и Al2+. Одна фосфатная группа может образовывать более одной водородной связи с ионами металлов, создавая стабильные и прочные хелатные комплексы (рисунок 2). Такие комплексы обнаруживаются в растворенном, либо в осажденном состоянии [Marolt et al., 2020]. Отрицательно заряженные фосфатные остатки в молекулах инозитолфосфатов могут связывать положительно заряженные аминокислотные остатки как в пептидах, так и нативных белках, что приводит к образованию комплексов, стабильность которых во многом зависит от pH среды, концентрации и типа катиона. Формирование комплексов инозитолфосфатов с ионами металлов и аминокислотами может происходить в кислых и в щелочных условиях [Kies et al., 2006].

Рисунок 2 - Комплекс мио-инозитол гексакисфосфата (фитата) с ионами железа (Fe2+), кальция (Ca2+), цинка (Zn2+) и магния (Mg2+) [Majumder

et al, 2019].

Инозитолфосфаты повсеместно распространены в окружающей среде и входят в состав живых организмов и объектов неживой природы. Инозитолфосфаты составляют большую часть всех моноэфиров почв, где представлены четырьмя стереоизомерами - мио-, сцилло-, хиро- и нео-инозитолфосфаты, среди которых доминирует мио-инозитолгексакисфосфат (фитат). Донные осадки водоемов также содержат большое количество инозитолфосфатов, некоторые формы которых не встречаются в природе [Vucenik et al, 2019]. Как и в почве, основной формой инозитолфосфатов в составе живых организмов является фитат, который обнаружен в тканях растений и семенах, а также присутствует у других эукариот. Сцилло-изомер инозитола в монофосфатной форме обнаружен в алейроновом слое семян ячменя. Гексакисфосфаты D-хиро-инозитола в небольших количествах присутствуют в хвое сосны и в листьях цветущих деревьев [Turner, 2007]. От общего содержания фосфора в растении на долю фитата приходится до 30 % в корнях и до 80% в семенах и злаках [Coban, Demirci, 2017]. В семенах фитат часто присутствует в виде комплексов с солями кальция, магния и других металлов и хранится в глобулярных включениях (глобоидах) алейронового слоя и в вакуолях зародыша. В растениях фитат является

резервуаром фосфора и других минеральных соединений, участвует в запасании энергии, инициирует состояние покоя семени и играет важную роль в дальнейших процессах роста и развития [Phillippy et al., 2015]. В меньшем количестве фитаты содержатся в орехах, бобах, различных овощах и фруктах [Chatree et al., 2020]. Мио-инозитолфосфаты обнаруживаются в тканях млекопитающих, в частности, в тканях печени, головного мозга, почек и легких у крыс, а также в человеческих эритроцитах и лейкоцитах [Letcher et al., 2008].

В клетках мио-инозитол фосфаты синтезируются из глюкозо-6-фосфата в два этапа с участием ферментов мио-инозитол-1-фосфатсинтазы и мио-инозитол-1-фосфатазы [Hazra, Nandy Datta, 2016]. Образование мио-инозитол фосфатов также возможно в результате сложного метаболизма инозитол полифосфатов внутри клеток [Desfougeres et al., 2019; Shah et al., 2017]. В целом, биологическая роль и функции инозитолфосфатов и, в частности, фитатов в клетках организмов многогранны. Показано их участие в сигнальной трансдукции, отмечена способность инозитолфосфатов действовать в качестве кофакторов и их участие в процессах редактирования и экспорта РНК, транскрипции мРНК, восстановлении двуцепочечных разрывов ДНК, экспрессии генов, поддержании гомеостаза фосфатов [Chatree et al., 2020; Li et al., 2020; Lopez-Sanchez et al., 2020; Okamura et al., 2019; Thomas et al., 2016; Wilson et al., 2019]. Таким образом, фитаты широко распространены в природе и входят в состав растительного сырья, пригодного для корма животных.

1.1.2 Фитазы: классификация и свойства

Фитазы, или мио-инозитолгексакисфосфат фосфогидролазы, представляют группу ферментов, гидролизующих фосфомоноэфирные связи в составе фитата (мио-инозитолгексакисфосфата) с образованием его менее фосфорилированных производных и свободного неорганического фосфора [Kumar et al., 2019]. Отщепление фосфатной группы начинается с полностью

фосфорилированной молекулы инозитолгексакисфосфата, которая гидролизуется до пента-, тетра-, три-, ди- и моноэфиров инозитола в порядке убывания. Фитазы сначала гидролизуют доступную фосфорилированную форму инозитола до пентаэфиров, прежде чем будет осуществляться гидролиз последнего до тетраэфиров инозитола. Продуктами реакции при полном гидролизе фитата являются одна молекула мио-инозитола и шесть молекул фосфата. Если фитат находится в комплексе с аминокислотами, белками и ионами металлов, то конечными продуктами гидролиза будут являться соответствующие соединения [Dersjant-Li et al., 2015].

Существует несколько критериев для классификации фитаз в зависимости от:

- сайта, инициирующего дефосфорилирование молекулы фитата в различных положениях углерода в инозитольном кольце (С-3, С-5 и С-6), образуя группы 3-, 5- и 6-фитаз, соответственно;

- биохимических свойств и каталитических механизмов, выделяя гистидиновые кислые фитазы (HAPs), пурпурнокислые фитазы (PAPs), цистеиновые фитазы (CPs) и Р-пропеллерные фитазы (BPPs);

- оптимального значения pH, необходимого для проявления каталитической активности фермента, с образованием группы кислых (HAPs, PAPs, CPs) и щелочных (BPPs) фитаз [Joshi, 2014].

Международным Союзом теоретической и прикладной химии и Международным союзом биохимии и молекулярной биологии (IUPAC-IUBMB) на основании сайта инициации дефосфорилирования фитата предложена классификация фитаз на три группы: 3-фитазы, или мио-инозитолгексакисфосфат-3-фосфогидролазы (EC 3.1.3.8), 5-фитазы, или мио-инозитолгексакисфосфат-5-фосфогидролазы (EC 3.1.3.72) и 6-фитазы, или мио- инозитолгексакисфосфат-6-фосфогидролазы (EC 3.1.3.26) [Kumar et al, 2019]. Первые инициируют дефосфорилирование фитата в положении C3, тогда как последние в положениях C5 и C6, соответственно. При гидролизе образуются изомеры эфиров низших мио-инозитолфосфатов путем реакций

ступенчатого дефосфорилирования, что приводит к образованию свободного мио-инозитола. Каждый класс фитаз отличается по свойствам и механизму гидролиза фитатов. Большинство фитаз обладают выраженной стереоспецифичностью и предпочитают фосфатные группы в экваториальном положении вместо аксиальных групп [Lei, Porres, 2003]. 3-Фитазы являются ферментами микробного происхождения, и это самая обширная группа среди обнаруженных фитаз. По первичной структуре они гомологичны гистидиновым кислым и Р-пропеллерным фитазам. Конечным продуктом гидролиза фитата 3-фитазами является инозитолтрифосфаты [Kumar et al., 2019]. 5-фитазы являются ферментами растительного происхождения. Показано, что структурная конформация выделенной из пыльцы лилии 5-фитазы сравнима с конформацией гистидиновой кислой фитазы, однако более высокая гомология выявлена в отношении множественной инозитолполифосфатфосфатазы, обнаруженной в тканях человека и крыс [Jog et al., 2005]. 6-фитазы обнаружены у бактерий E. coli, инфузорий Paramecium, а также выделены из корней табака и пшеницы [Li et al., 2007]. В этой группе фосфатаз идентифицировано множество различных по структуре ферментов, включая пурпурную кислую фитазу, АДФ-фосфоглицерат фосфатазу и кислую фосфатазу [Kumar et al., 2019].

Основываясь на pH-оптимуме активности фермента, фитазы делят на два основных класса: кислые и щелочные фитазы. Диапазон pH для активности кислых фитаз составляет 3.0-5.5, а для щелочных - 7.0-8.0 [Vijayaraghavan et al., 2013; Yin et al., 2007]. На основе биохимических свойств и каталитических механизмов фитазы разделены на четыре класса: гистидиновые кислые фосфатазы (HAPs), пурпурнокислые фосфатазы (PAPs), цистеиновые фосфатазы (CPs) и Р-пропеллерные фитазы (BPPs). Первые три группы относятся к кислыми фитазам, последняя является щелочной. К кислым фитазам также следует отнести тирозиновые фосфатазы (PTP)-подобные фитазы (инозитолполифосфатазы). Кислые фитазы могут высвобождать до пяти из шести фосфатных групп из молекулы фитата с

образованием мио-инозитол монофосфата. Имеются данные, что продуктом гидролиза фитата может также являться свободный мио-инозитол [Kumar et al., 2019]. В отличие от кислых фитаз, которые имеют широкую субстратную специфичность, группа щелочных фитаз обладает строгой субстратной специфичностью. Щелочные фитазы не способны использовать в качестве субстрата для катализа мио-инозитол фосфаты с тремя или меньшим количеством фосфатных групп и, таким образом, осуществляют гидролиз фитата до мио-инозитол трифосфата [Kumar et al., 2019; Mullaney, Ullah, 2007].

Гистидиновые кислые фосфатазы (HAPs). Одним из наиболее широко исследованных классов фитаз, куда входит большинство грибных, бактериальных и растительных ферментов, гидролизующих фитат, являются кислые фитазы, и в частности, гистидиновые кислые фосфатазы [Selle et al., 2007]. Все ферменты этого класса имеют уникальный общий консервативный мотив активного сайта RHGXRXP. На основе результатов по сайт-направленному мутагенезу предложен следующий каталитический механизм гидролиза фосфомоноэфирной связи HAPs ферментами: остаток гистидина в N-концевом консервативном мотиве (RHGXRXP) служит нуклеофилом при образовании ковалентного фосфогистидинового интермедиата, а остаток аспарагиновой кислоты на С-концевом мотиве (HD) служит донором протона для атома кислорода фосфомоноэфирной связи. Не смотря на общую последовательность аминокислот активного центра фермента, фитазы этой группы имеют различную каталитическую активность [Mullaney, Ullah, 2007].

HAPs фитазы обладают широкой субстратной специфичностью и помимо фитата в качестве субстратов могут использовать другие фосфорилированные соединения, среди которых глюко-6-фосфат, фруктозо-6-фосфат, глицерофосфат, рибозо-5-фосфат, АМФ, АДФ, АТФ и др. С учетом субстратной специфичности HAPs можно подразделить на 2 группы, которые обладают узкой либо широкой субстратной специфичностью, а

также высокой либо низкой по отношению к фитату активностью, соответственно [Bohn et al., 2008].

По структуре гистидиновые кислые фитазы являются в основном мономерными белками, хотя имеются и исключения. Так, фитаза микромицета A. niger и фитаза дрожжей Debaryomyces castellii являются тетрамерами [Ragon et al., 2009]. Немаловажным для поддержания третичной структуры белка является формирование дисульфидных мостиков в молекуле. Показано, что удаление одного из мостиков в структуре фермента приводит к повышению его специфической активности [Lei, Porress, 2007]. В формировании правильно свернутой и стабильной молекулы гистидиновых кислых фитаз важное значение имеет гликозилирование. Практически все описанные в настоящее время фитазы дрожжей и грибов являются по структуре гликопротеинами. Гликозилирование также влияет на специфическую активность и термостабильность фитаз [Karbalaei et al., 2020].

Одними из продуцентов гистидиновых кислых фитаз являются представители семейства Enterobacteriaceae (E. coli, Klebsiella sp, Citrobacter braakii, Pantoea agglomerans, Shigella sp., Enterobacter sp), фитат-гидролизующие ферменты которых широко изучены [Kalsi et al., 2016; Kumar et al, 2019; Pal Roy et al, 2016].

Фитаза бактерии Pantoea brenneri AS3 представляет собой мономерный белок с молекулярной массой 60.8 кДа, фермент локализован в периплазматическом пространстве клеток бактерий. Анализ первичной структуры и свойств фермента позволил отнести его к семейству гистидиновых кислых фосфатаз [Suleimanova et al., 2015 a, b; Suleimanova et al., 2016]. Показано, что pH-оптимум фитазы составляет 4.5, а стабильность фермента поддерживается в пределах pH 3.0 - 6.0. Стабильность фитазы сохраняется в пределах температуры 10-45°C с оптимумом 37°C. Ионы Са2+, Mn2+ и Mg2+ повышали активность белка, ионы Zn2+, Cu2+ и Fe2+ ингибировали активность фермента, тогда как ионы Со2+ не влияли на его

активность. Фитаза P. brenneri AS3 обладает широкой субстратной специфичностью по гидролизу таких фосфорилированных соединений, как фитат, глюкозо-1-фосфат и глюкозо-6-фосфат. Исследование

стереоспецифичности показало, что фермент является 3-фитазой и отщепляет остаток фосфорной кислоты у третьего атома углерода в инозитольном кольце. Конечным продуктом ферментативного гидролиза фитата является В^-мио-инозитол-1,2,4,5,6-пентакисфосфат [Suleimanova et al., 2015 b].

Пурпурнокислые фитазы (PAPs). Класс пурпурнокислых фитаз включает ферменты различного происхождения, обнаруженные у растений, грибов, бактерий и в тканях животных. PAPs являются металлогидролазами, для проявления активности которых необходимо наличие в активном центре двух ионов металлов. В качестве одного из ионов в большинстве случаев выступает трехвалентное железо, вторым могут быть ионы марганца, цинка или двухвалентного железа. Фитазы этого класса характеризуются пурпурным цветом, что является результатом перехода заряда от тирозина на трехвалентное железо при длине волны 560 нм, что обуславливает их название [Vogel et al., 2006].

Многие пурпурнокислые фитазы не проявляют строгой специфичности по гидролизу фитата, некоторые из них являются фосфатазами с широкой субстратной специфичностью [Lei, Porress, 2007]. Выделенные из тканей млекопитающих PAPs, в активном центре которых содержатся ионы трех и двухвалентного железа, по структуре представляют мономеры и являются высококонсервативными с более, чем 85% гомологией аминокислотных последовательностей. Большинство растительных PAPs являются димерными белками. Подобно ферментам млекопитающих, растительные пурпурнокислые фитазы по последовательности аминокислот схожи между собой, и имеют гомологию 65% и более. Однако при сравнении PAPs ферменты млекопитающих и растений обладают идентичностью последовательностей менее 20%. Растительные PAPs также различаются между собой по ионам двухвалентных металлов, присутствующих в

активном центре: чаще всего они представляют собой ионы цинка, реже -ионы марганца [Vogel et al2006].

Цистеиновые фитазы (CPs). Цистеиновые фитазы - сравнительно новый и менее изученный класс фитаз. Эти ферменты обнаружены у анаэробных бактерий рубца жвачных животных - Selenomonas ruminantium, Prevotella ruminicola и Mitsuokella multiacidu. Выделенная впервые у S. ruminantium фитаза не имела гомологии с другими микробными фитазами. pH-оптимум фермента находится в диапазоне pH от 4.0 до 5.0, а оптимальная температура 50-55°C. Активный сайт фермента расположен рядом с консервативной цистеинсодержащей P-петлей (Cys241), которая играет роль субстратсвязывающего кармана, определяющего специфичность фермента. Фитаза S. ruminantium обладает широкой субстратной специфичностью в отношении фосфорилированных производных мио-инозитола. В результате реакции ступенчатого дефосфорилирования из мио-инозитол гексакисфосфата образуется мио-инозитол (2,4)-дифосфат [Puhl et al., 2007].

К классу CPs относят группу протеин-тирозиновых фосфатаз (PTP-подобных фитаз). Первый охарактеризованный фермент этой группы выделен из анаэробной бактерии рубца Megasphaera elsdenii [Yao et al., 2012]. PTP-подобные фитазы обнаружены у миксобактерии Stigmatella aurentiaca, хищной бактерии Bdellovibrio bacteriovorus, патогенов животных и растений, среди которых Legionella pneumophila, Clostridium botulinum, Xanthomonas campestris и Pseudomonas syringae [Gruninger et al., 2014]. Метагеномное исследование образцов почвы позволило выявить первую почвенную тирозиновую фосфатазу (Pho16B), обладающую фитазной активностью [Villamizar et al., 2019].

ß-пропеллерные фитазы (BPPs). ß-пропеллерные фитазы представлявляют собой класс щелочных фитаз, имеющих в структуре ß-складчатые слои. BPPs первоначально обнаружены у бактерий рода Bacillus и их близкородственных видов, но позже в этот класс включили щелочные фитазы растений и грибов. Среди микроорганизмов ß-пропеллерные фитазы

обнаружены у архей и цианобактерий [Kumar et al., 2017]. Характерным для данного класса фитаз является их pH-оптимум ферментативной активности, находящийся в пределах pH 7.0-8.0. Благодаря этому щелочные фитазы перспективны для применения при гидролизе фитата в водных экосистемах, где уровень pH находится в нейтральных и щелочных значениях [Yao et al., 2014]. Общим для Р-пропеллерных фитаз является высокая термостабильность, при которой ферментативная активность ферментов наблюдается в пределах 60-90°C [Kumar et al., 2017].

Класс Р-пропеллерных фитаз уникален кальций-зависимой каталитической активностью и узкой субстратной специфичностью. Этот класс ферментов высокоспецифичен в отношении фитата, в частности фитата кальция и не активен в отношении гидролиза других сложных эфиров фосфорной кислоты [Elkhalil et al., 2007; Rao et al., 2009]. Установлено, что гидролиз фитата незначителен в отсутствии ионов кальция, что подтверждает кальций-зависимою природу BPPs. Это связано с образованием мостика между ионами Ca2+ и двумя оксианионами соседних фосфатных групп фитата. В структуре щелочных фитаз в активном центре фермента выявлены множественные сайты связывания с ионами кальция, что обеспечивает благоприятную электростатическую среду для образования кальций-фитатных комплексов [Oh et al., 2004].

1.2 Генная инженерия бактериальных фитаз

1.2.1 Системы экспрессии на основе дрожжей

В настоящее время для получения практически ценных гетерологичных белков, применяемых в практических целях, разрабатывают и используют эффективные системы экспрессии [Gomes et al., 2016]. Такие разработки нацелены на получение большого количества рекомбинантных белков, обладающих необходимыми характеристиками и свойствами. Используют как прокариотические, так и эукариотические экспрессионные системы, которые имеет достоинства и недостатки, различаются в аппаратах

транскрипции и трансляции, механизмах посттрансляционной модификации белков, способах регуляции метаболизма [Karbalaei et al., 2020]. Для создания систем экспрессии используют бактерии, грибы, дрожжи, клеточные культуры растений и животных. Прокариотическая система экспрессии, основанная на грамотрицательной бактерии E. coli, является одной из первых используемых в генной инженерии и имеет несколько преимуществ: быстрое размножение бактерий, простые и недорогие источники питания, высокий уровень экспрессии, а также быстрый и легкий процесс культивирования. Тем не менее, бактериальные системы E. coli имеют недостатки, среди которых внутриклеточная агрегация и неправильный фолдинг гетерологичных белков, отсутствие посттрансляционной модификации и протеолитическая деградация белков, продукция контаминирующих липополисахаридов [Rosano, Ceccarelli, 2014].

Другая группа систем экспрессии представляет собой эукариотические клетки, к которым относят культуры клеток насекомых и млекопитающих. Значительным преимуществом таких экспрессионных систем является аутентичный фолдинг белков, корректность посттрансляционных модификаций и гликозилирование рекомбинантных белков по определенным сайтам, что важно для поддержания их стабильности [Khan, 2013]. Однако экспрессионные системы на основе культуры клеток насекомых и млекопитающих медленно культивируются, а потребность в соответствующих питательных средах и оборудовании требует больших финансовых затрат. Потенциальное загрязнение питательных сред вирусами ограничивает использование таких систем в крупномасштабном производстве [Yin et al., 2007].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бульмакова Дарья Сергеевна, 2023 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Винецкий, Ю. П. Пат. 2288267 С2 РФ. Способ получения кормового комплексного ферментного препарата (варианты) и штамм PenicШium canescens (варианты) [Текст] / Ю. П. Винецкий, Е. А. Вавилова, А. М. Чулкин, О. Н. Окунев, Л. М. Соколова, А. П. Синицын, В. М. Черноглазов, О. А. Синицына - № 2004126995/13; заявл. 09.09.2004; опубл. 27.11.2006, Бюл. № 33. - 19 с.

2. Выборная, Т. В. Пат. 2504579 С2 РФ. Рекомбинантный штамм дрожжей Yarrowia lipolytica - продуцент фитазы [Текст] / Т. В. Выборная, Т. В. Юзбашев, А. С. Федоров, Е. Ю. Юзбашева, А.С. Ларина, С. П. Синеокий -№ 2012114468/10; заявл. 12.04.2012; опубл. 20.01.2014, Бюл. № 2. - 7 с.

3. Гордеева, Т. Л. Пат. 2472855 С2 РФ. Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза (варианты), фрагмент ДНК, кодирующий указанную фитазу (варианты), штамм Pichia pastoris - продуцент указанной фитазы (варианты) [Текст] / Т. Л. Гордеева, Л. Н. Борщевская, С. П. Синеокий - № 2009146172/10; заявл. 15.12.2009; опубл. 20.01.2013, Бюл. № 2. - 37 с.

4. Лемеш, В. М. Методические указания по токсико-биологической оценке мяса, мясных продуктов и молока с использованием инфузорий Тетрахимена пириформис (экспресс-метод) [Текст] / В. М. Лемеш, П. И. Пахомов, А. Е. Янченко, Л. Г. Титова, Н. Н. Анисимова, А. А. Богуш, С. Я. Лукьянчик, М. М. Бельмач, Т. Н. Каменская. - Витебск: ВГАВМ, 1997. - 13 с.

5. Ленкова, Т. Н. Микробиота кишечника и продуктивные качества бройлеров при использовании фитазы для повышения усвояемости фосфора и питательных веществ из комбикормов [Текст] / Т. Н. Ленкова, И. А. Егоров, Т. А. Егорова, В. А. Манукян, В. Г. Вертипрахов, А. А. Грозина, И. Н. Никонов, В. А. Филиппова, Е. А. Йылдырым, Л. А. Ильина, А. В. Дубровин, Г. Ю. Лаптев // Сельскохозяйственная биология. - 2020. - Т. 55. - № 2. - С. 406-416.

6. Синицына О. Л. Выделение и свойства внеклеточной фитазы A Penicillium canescens [Текст] / О. Л. Синицына, Е. A. Федорова, А. В. Гусаков, И. В. Упоров, Л. М. Соколова, Т. М. Бубнова, О. Н. Окунев, А. М. Чулкин, Ю. П. Винецкий, А. П. Синицын // Биохимия. - 2006. -Т. 71. - № 9. -С. 1260-1269.

7. Сулейманова, А. Д. Идентификация фитат-гидролизующих ризобактерий рода Pantoea на основе фенотипических признаков и мультилокусного анализа [Текст] / А. Д. Сулейманова, Д. Л. Иткина, Д. С. Пудова, М. Р. Шарипова / Микробиология. - 2018. - Т. 10. - № 2. - С.1-10.

8. Эпова, Е. Ю. Пат. 2664476 C1 РФ. Рекомбинантный штамм Yarrowia lipolytica - продуцент инкапсулированной фитазы Obesumbacterium proteus [Текст] / Е. Ю. Эпова, Ю. И. Дерябина, Е. П. Исакова, Е. В. Трубникова, Д. В. Трубников, М. В. Зылькова, Ю. К. Бирюкова, Я. Я. Тыньо, Ю. П. Клявс - №2017125240; заявл. 14.07.2017; опубл. 17.08.2018, Бюл. № 23. - 18 с.

9. Abbasi, F. Low digestibility of phytate phosphorus, their impacts on the environment, and phytase opportunity in the poultry industry [Text] / F. Abbasi, T. Fakhur-un-Nisa, J. Liu, X. Luo, I. H. R. Abbasi // Environ Sci Pollut Res Int. - 2019. - V. 26 (10). - P. 9469-9479.

10. Abd El-Hack, M. E. The uses of microbial phytase as a feed additive in poultry nutrition - a review [Text] / M. E. Abd El-Hack, M. Alagawany, M. Arif, M. Emam, M. Saeed, M. A. Arain, F. A. Siyal, A. Patra, S. S. Elnesr, R. U. Khan // Ann of Anim Sci. - 2018. - V. 18 (3). - P. 639-658.

11. Abid, N. Transgenic expression of phytase in wheat endosperm increases bioavailability of iron and zinc in grains [Text] / N. Abid, A. Khatoon, A. Maqbool, M. Irfan, A. Bashir, I. Asif, M. Shahid, A. Saeed, H. Brinch-Pedersen, K. A. Malik // Transgenic Res. - 2017. - V. 26 (1). - P. 109-122.

12. Agranoff, B. W. Turtles all the way: reflections on myo-inositol [Text] / B. W. Agranoff // J Biol Chem. - 2009. - V. 284 (32). - P. 21121-21126.

13. Ahmad, M. Protein expression in Pichia pastoris: recent achievements and perspectives for heterologous protein production [Text] / M. Ahmad, M. Hirz, H. Pichler, H. Schwab // Appl Microbiol Biotechnol. - 2014. -V. 98 (12). - P. 5301-5317.

14. Ahn, J. Phosphate-responsive promoter of a Pichia pastoris sodium phosphate symporter [Text] / J. Ahn, J. Hong, M. Park, H. Lee, E. Lee, C. Kim, J. Lee, E.-S. Choi, J.-K. Jung, H. Lee // Appl Environ Microbiol. - 2009. - V. 75 (11). - P. 3528-3534.

15. Ahsan, U. Sodium butyrate in chicken nutrition: the dynamics of performance, gut microbiota, gut morphology, and immunity [Text] / U. Ahsan, O. Cengiz, I. Raza, E. Kuter, M. F. A. Chacher, Z. Iqbal, S. Umar, S. Cakir // Worlds Poult Sci J. - 2016. - V. 72 (2). - P. 265-275.

16. Akcapinar, G. B. Effect of codon optimization on the expression of Trichoderma reesei endoglucanase 1 in Pichia pastoris [Text] / G. B. Akcapinar, O. Gul, U. Sezerman // Biotechnol prog. - 2011. - V. 27 (5). - P. 1257-1263.

17. Akhmetova A. A. Heterologous expression of Bacillus ginsengihumi phytase gene [Text] / A. A. Akhmetova, A. D. Suleimanova, A. A. Toymentseva, N. P. Balaban, D. L. Iljukhina, M. R. Sharipova // Res J Pharm Biol Chem Sci. -2015. - V. 6 (4). - P. 117-122.

18. Akter, M. Increasing zinc levels in phytase-supplemented diets improves the performance and nutrient utilization of broiler chickens [Text] / M. Akter, P. A. Iji, H. Graham // South Afr J Anim Sci. - 2017. - V. 47 (5). - P. 648660.

19. Alarasi, E. M. H. Efficacy of phytase microbial feed additive on growth performance of broilers chicks [Text] / E. M. H. Alarasi, R. K. Pandey // Int J Cur Micr Appl Sci. - 2017. - V. 6 (11). - P. 2542-2546.

20. Alewell, C. Global phosphorus shortage will be aggravated by soil erosion [Text] / C. Alewell, B. Ringeval, C. Ballabio, D. A. Robinson, P. Panagos, P. Borrelli // Nat Commun. - 2020. - V. 11 (1). - P. 4546.

21. Al-Suod, H. A window on cyclitols: characterization and analytics of inositols [Text] / H. Al-Suod, M. Ligor, I.A. Ratiu, K. Rafinska, R. Gorecki, B. Buszewski // Phytochem Lett. - 2017. - V. 20. - P. 507-519.

22. Angov, E. Codon usage: nature's roadmap to expression and folding of proteins [Text] / E. Angov // Biotech. J. - 2011. - V. 6. - P. 650-659.

23. Arguelles-Ramos, M. Effects of phytase inclusion in broiler breeder diets during early lay on their fecal and egg characteristics [Text] / M. Arguelles-Ramos, B. Nusairat, R. Qudsieh, J. Brake // Braz J Poult Sci. - 2020. - V. 22 (1). -P. 1-6.

24. Arruda, А. A constitutive expression system for Pichia pastoris based on the PGK1 promoter [Text] / A. Arruda, V. C. Reis, V. D. Batista, B. S. Daher, L. C. Piva, J. L. De Marco, L. M. P. De Moraes, F. A. G. Torres // Biotechnol Lett. - 2016. - V. 38 (3). - P. 509-517.

25. Babatunde, O. O. Influence of age and duration of feeding low-phosphorus diet on phytase efficacy in broiler chickens during the starter phase [Text] / O. O. Babatunde, A. J. Cowieson, J. W. Wilson, O. Adeola // Poult Sci. -2019. - V. 98 (6). - P.2588-2597.

26. Baffoni, L. Evidence of Campylobacter jejuni reduction in broilers with early synbiotic administration [Text] / L. Baffoni, F. Gaggia, G. Garofolo, G. Di Serafino, E. Buglione, E. Di Giannatale, D. Di Gioia // Int J Food Microbiol. -2017. - V. 251. - P. 41-47.

27. Balaban, N. P. Structural characteristics and catalytic mechanism of bacillus ß-propeller phytases [Text] / N. P. Balaban, A. D. Suleimanova, L. R. Valeeva, E. V. Shakirov, M. R. Sharipova // Biochemistry. - 2016. - V. 81 (8). -P. 785-793.

28. Balamurugan, V. Biotechnology in the production of recombinant vaccine or antigen for animal health [Text] / V. Balamurugan, A. Sen, P. Saravanan, R. Singh // J Anim Vet Adv. - 2006. - V.5(6). - P. 487-495.

29. Ballou, A. L. Development of the chick microbiome: how early exposure influences future microbial diversity [Text] / A. L. Ballou, R. A. Ali, M.

A. Mendoza, J. C. Ellis, H. M. Hassan, W. J. Croom, M. D. Koci // Front Vet Sci. - 2016. - V. 3. - P. 2.

30. Bill, R. M. Recombinant protein subunit vaccine synthesis in microbes: A role for yeast? [Text] / R.M. Bill // J Pharm Pharmacol. - 2015. - V. 67 (3). - P. 319-328.

31. Bohn, L. Phytate: impact on environment and human nutrition. A challenge for molecular breeding [Text] / L. Bohn, A.S. Meyer, S.K. Rasmussen // J Zhejiang Univ Sci B. - 2008. - V. 9 (3). - P.165-191.

32. Bonzom, C Glycosylation influences activity, stability and immobilization of the feruloyl esterase 1a from Myceliophthora thermophila? [Text] / C. Bonzom, S. Hüttner, E. Mirgorodskaya, S. L. Chong, S. Uthoff, A. Steinbüchel, R. M. D. Verhaert, L. Olsson // AMB Express. - 2019. - V. 9 (1). - P. 126.

33. Borda-Molina, D. Current perspectives of the chicken gastrointestinal tract and its microbiome [Text] / D. Borda-Molina, J. Seifert, A. Camarinha-Silva // Comput Struct Biotechnol J. - 2018. - V. 6 (415). - P. 131-139.

34. Bradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding [Text] / M. Bradford // Anal Biochem. - 1976. - V. 7 (72). - P. 248-254.

35. Chang, S. W. Engineering the expression and biochemical characteristics of recombinant Candida rugosa LIP2 lipase by removing the additional N-terminal peptide and regional codon optimization [Text] / S. W. Chang, C. F. Li, G. C. Lee, T. Yeh, J. F. Shaw // J Agric Food Chem. - 2011. - V. 59 (12). - P. 6710-6719.

36. Chang, X. Role of N-linked glycosylation in the enzymatic properties of a thermophilic GH 10 xylanase from Aspergillus fumigatus expressed in Pichia pastoris [Text] / X. Chang, B. Xu, Y. Bai, H. Luo, R. Ma, P. Shi, B. Yao // PLoS One. - 2017. - V. 12 (2). - P. e0171111.

37. Chatree, S. Role of inositols and inositol phosphates in energy metabolism [Text] / S. Chatree, N. Thongmaen, K. Tantivejkul, C. Sitticharoon, I. Vucenik // Molecules. - 2020. - V. 25 (21). - P. 5079.

38. Chen, T. Fiber-utilizing capacity varies in Prevotella-versus Bacteroides-dominated gut microbiota [Text] / T. Chen, W. Long, C. Zhang, S. Liu, L. Zhao, B.R. Hamaker // Sci Rep. - 2017. - V. 7 (1). - P. 2594.

39. Chung, T. K. Effect of two microbial phytases on mineral availability and retention and bone mineral density in low-phosphorus diets for broilers [Text] / T.K. Chung, S. Rutherfurd, D. V. Thomas, P. Moughan // J. British Poultry Science. - 2013. - V. 54 (3). - P. 362-373.

40. Coban H. B. Phytase as a diet ingredient: from microbial production to its applications in food and feed industry [Text] / H. B. Coban, A. Demirci // Microbial production of food ingredients and additives / Edited by A. M. Holban, A. M. Grumezescu - Academic press, 2017. - P. 33-55.

41. Correa, T. L. R. Cloning, recombinant expression and characterization of a new phytase from Penicillium chrysogenum [Text] / T. L. R. Correa, M. V de Queiroz., E. F. de Araujo // Microbiol Res. - 2015. - V. 170. - P. 205-212.

42. Correa, T. L. R. Fungal phytases: from genes to applications [Text] / T. L. R. Correa, E. F. de Araujo // Braz J Microbiol. - 2020. - V. 51 (3). - P. 10091020.

43. Cowieson, A. J. A systematic view on the effect of phytase on ileal amino acid digestibility in broilers [Text] / A. J. Cowieson, J. P. Ruckebusch, J.O. Sorbara, J. W. Wilson, P. Guggenbuhl, F. F Ross // Anim Feed Sci Technol. -2017. - V. 225 (3). - P. 182-194.

44. Dailin, D. J. Fungal phytases: biotechnological applications in food and feed industries [Text] / D.J. Dailin, S.Z. Hanapi, E. Elsayed, D. Sukmawati, N.I. Wan Azelee, J. Eyahmalay, V. Siwapiragam, H. E. Enshasy // Recent advancement in white biotechnology through fungi / Edited by A. N. Yadav, S. Singh, S. Mishra, A. Gupta - Springer, 2019. - P. 65-99.

45. de Muinck, E. J. A novel ultra-high-throughput 16S rRNA gene amplicon sequencing library preparation method for the Illumina HiSeq platform [Text] / E. K. de Muinck, P. Trosvik, G. D. Gilfillan, J. R. Hov, A. Y. M. Sundaram // Microbiome. - 2017. - V. 5 (1). - P. 68.

46. Demain, A. L. Production of recombinant proteins by microbes and higher organisms [Text] / A. L. Demain, P. Vaishnav // Biotechnol Adv. - 2009. -V. 27 (3). - P. 297-306.

47. Dersjant - Li, Y. Phytase in non-ruminant animal nutrition: a critical review on phytase activities in the gastrointestinal tract and influencing factors [Text] / Y. Dersjant-Li, A. Awati, H. Schulze, G. Partridge // J Sci Food Agric. -2015. - V. 95 (5). - P. 878-896.

48. Dersjant-Li, Y. Comparative effects of two phytases versus increasing the inorganic phosphorus content of the diet, on nutrient and amino acid digestibility in broilers [Text] / Y. Dersjant-Li, C. Kwakernaak // Anim. Feed Sci Tech. - 2019. - V. 253. - P. 166-180.

49. Dersjant-Li, Y. Functionality of a next generation biosynthetic bacterial 6-phytase in enhancing phosphorus availability to broilers fed a corn-soybean meal-based diet [Text] / Y. Dersjant-Li, G. Archer, A. M. Stiewert, A. A. Brown, E. B. Sobotik, A. Jasek, L. Marchal, A. Bello, R. A. Sorg, T. Christensen, H.-S. Kim, R. Mejldal, I. Nikolaev, S. Pricelius, S. Haaning, J. F. S0rensen, A. de Kreij, V. Sewalt // Anim Feed Sci Tech. - 2020. - V. 264. - P.114481.

50. Desfougeres, Y. ITPK1 mediates the lipid-independent synthesis of inositol phosphates controlled by metabolism [Text] / Y. Desfougeres, M. S. C. Wilson, D. Laha, G. J. Miller; A. Saiardi // Proc Natl Acad Sci. - 2019. - V. 116 (49). - P. 24551-24561.

51. Dessimoni, G. V. Effect of supplementation with Escherichia coli phytase for broilers on performance, nutrient digestibility, minerals in the tibia and diet cost [Text] / G. V. Dessimoni, N. Sakomura, D. C. Z. Donato, F. Goldflus, N. Ferreira, F. DalOlio // Semina: Ciencias Agrarias. - 2019. - V. 40 (2). - P. 767780.

52. Devaney, R. A metagenomic comparison of endemic viruses from broiler chickens with runting-stunting syndrome and from normal birds [Text] / R. Devaney, J. Trudgett, A. Trudgett, C. Meharg, V. Smyth // Avian Pathol. - 2016. - V. 45 (6). - P. 616-629.

53. Diaz-Sanchez, S. Next generation sequencing: the future of molecular genetics in poultry production and food safety [Text] / S. Diaz-Sanchez, I. Hanning, S. Pendleton, D. D'souza // Poult Sci. - 2013. - V. 92 (2). - P. 562-572.

54. Dozier, W. Apparent ileal amino acid digestibility of reduced-oil distillers dried grains with soluble fed to broilers from 23 to 31 days of age [Text] / W. Dozier, K. Perryman, J. Hess // J Poult Sci. - 2015. - V. 94 (3). - P. 379-383.

55. Duan, X. Advances in engineering methylotrophic yeast for biosynthesis of valuable chemicals from methanol [Text] / X. Duan, G. Jiaoqi, J. Z. Yongjin // Chin Chem Lett. - 2018. - V. 29 (5). - P. 681-686.

56. Duong, Q. H. Inositol phosphates: health implications, methods of analysis, and occurrence in plant foods [Text] / Q. H. Duong, K. G. Lapsley, R. B. Pegg // J Food Bioact. - 2018. - V. 1 (1). - P. 41-55.

57. Elkhalil, E. A. In vitro and in vivo characteristics of bacterial phytases and their efficacy in broiler chickens [Text] / E. A. Elkhalil, K. Manner, R. Borriss, O. Simon // Br Poult Sci. - 2007. - V. 48 (1). - P. 64-70.

58. Ergun, B. G. Recombinant protein production in Pichia pastoris: from transcriptionally redesigned strains to bioprocess optimization and metabolic modelling [Text] / B. G. Ergun, J. Berrios, B. Binay, P. Fickers // FEMS Yeast Res. - 2021. - V. 21 (7). - P. foab057.

59. Gao, P. Feed-additive probiotics accelerate yet antibiotics delay intestinal microbiota maturation in broiler chicken [Text] / P. Gao, C. Ma, Z. Sun, L. Wang, S. Huang, X. Su, J. Xu, H. Zang // Microbiome. - 2017. - V. 5 (1). - P. 91.

60. Garcia-Mantrana, I. Expression of bifidobacteria! phytases in Lactobacillus casei and their application in a food model of whole-grain

sourdough bread [Text] / I. García-Mantrana, M. J. Yebra, M. Haros, V. Monedero // Int J Food Microbiol. - 2016. - V. 216. - P. 18-24.

61. Gautier, A.E. Effects of a high level of phytase on broiler performance, bone ash, phosphorus utilization, and phytate dephosphorylation to inositol [Text] / A. E. Gautier, C. L. Walk, R. N. Dilger // Poult Sci. - 2018. - V. 97 (1). - P. 211-218.

62. Giles, C. D. Phosphorus acquisition by citrate-and phytase-exuding Nicotiana tabacum plant mixtures depends on soil phosphorus availability and root intermingling [Text] / C. D. Giles, A. E. Richardson, B. J. Cade-Menun, M. M. Mezeli, L. K Brown, D. Menezes-Blackburn, T. Darch, M. S. A. Blackwell, C. A. Shand, M. I. Stutter, R. Wendler, P. Cooper, D. G. Lumsdon, C. Wearing, H. Zhang, P. M. Haygarth, T. S. George // Physiol Plant. - 2018. - V. 163 (3). - P. 356-371.

63. Giuraniuc, C. V. Gateway vectors for efficient artificial gene assembly in vitro and expression in yeast Saccharomyces cerevisiae [Text] / C. V. Giuraniuc, M. MacPherson, Y. Saka // PLoS One. - 2013. - V. 8 (5). - P. e64419.

64. Gomes, A. R. An overview of heterologous expression host systems for the production of recombinant proteins [Text] / A. R. Gomes, S. M. Byregowda, B. M. Veeregowda, V. Balamurugan // Adv Anim Vet Sci. - 2016. -V. 4 (7). - P. 346-356.

65. Gómez-Gutiérrez, J. Expression and Ni-NTA-Agarose purification of recombinant Hepatitis C virus E2 ectodomain produced in a baculovirus expression system [Text] / J. Gómez-Gutiérrez, M. Rodríguez-Rodríguez, F. Gavilanes, B. Yélamos // Bio Protoc. - 2018. - V. 8 (19). - P. e3030.

66. Greiner, R. Purification and characterization of two phytases from Escherichia coli [Text] / R. Greiner, U. Konietzny, K. D. Jany // Arch Biochem Biophys. - 1993. - V. 15 (303). - P. 107-113.

67. Greiner, R. Degradation of myo-inositol hexakisphosphate by a phytate-degrading enzyme from Pantoea agglomerans [Text] / R.Greiner // Protein J. - 2004. - V. 23 (8). - P. 577-585.

68. Greiner, R. Phytate-degrading enzymes: regulation of synthesis in microorganisms and plants [Text] / R. Greiner // Inositol phosphates. Linking agriculture and the environment / Edited by B.L. Turner, A.E. Richardson, E.J. Mullaney - CABI, 2007. - P. 78-97.

69. Gruninger, R. J. Structural and biochemical analysis of a unique phosphatase from Bdellovibrio bacteriovorus reveals its structural and functional relationship with the protein tyrosine phosphatase class of phytase [Text] / R. J. Gruninger, J. Thibault, M. J. Capeness, R. Till, S. C. Mosimann, R. E. Sockett, B. L. Selinger, A. L. Lovering // PLoS One. - 2014. - V. 9 (4). - P. 1-10.

70. Handa, V. Biotechnological applications of microbial phytase and phytic acid in food and feed industries [Text] / V. Handa, D. Sharma, A. Kaur, S. Arya // Biocat Agric Biotechnol. - 2020. - V. 25 (1). - P. 101600.

71. Hao, X. Z. Effect of phytase supplementation on growth performance, nutrient digestibility, and meat quality in broilers [Text] /X. Z. Hao, J. S. Yoo, I. H. Kim // Kor J Agricult Sci. - 2018. - V. 45 (3). - P. 401-409.

72. Hazra, A. Myo-inositol 1-phosphate synthase - the chosen path of evolution [Text] / A. Hazra, P. Nandy Datta. Biotechnologia. - 2016. - V. 97 (2). -P. 95-108.

73. He, D. Combined use of GAP and AOX1 promoters and optimization of culture conditions to enhance expression of Rhizomucor miehei lipase [Text] / D. He, W. Luo, Z. Wang, P. Lv, Z. Yuan // J Ind Microbiol Biotechnol. - 2015. -V. 42 (8). - P. 1175-1182.

74. Hmida-Sayari, A. Overexpression and biochemical characterization of a thermostable phytase from Bacillus subtilis US417 in Pichia pastoris [Text] / A. Hmida-Sayari, F. Elgharbi, A. Farhat, H. Rekik, K. Blondeau, S. Bejar // Mol Biotechnol. - 2014. - V. 56 (9). - P. 839-848.

75. Irani, Z. A. Genome-scale metabolic model of Pichia pastoris with native and humanized glycosylation of recombinant proteins [Text] / Z. A. Irani, E. J. Kerkhoven, S. A. Shojaosadati, J. Nielsen // Biotechnol Bioeng. - 2016. - V. 113 (5). - P. 961-969.

76. Irshad, M. Anticancer and nutraceutical potentialities of phytase/phytate [Text] / M. Irshad, M. Asgher, K. H. Bhatti, M. Zafar, Z. Anwar // Int. J. Pharmacol. - 2017. - V. 13. - P. 808-817.

77. Jatuwong, K. Bioprocess for production, characteristics, and biotechnological applications of fungal phytases [Text] / K. Jatuwong, N. Suwannarach, J. Kumla, W. Penkhrue, P. Kakumyan, S. Lumyong // Front Microbiol. - 2020. - V. 11. - P.188.

78. Jez, J. M. The next green movement: plant biology for the environment and sustainability [Text] / J. M. Jez, S. G. Lee, A. M. Sherp // Science. - 2016. - V. 353 (6305). - P. 1241-1244.

79. Jog, S.P. Alkaline phytase from lily pollen: investigation of biochemical properties [Text] / S. P. Jog, B. G. Garchow, B. D. Mehta, P. P. N. Murthy // Arch Biochem Biophys. - 2005. - V. 440 (2). - P.13340.

80. Joshi, J. Phytase - a key to unlock phytate complex [Text] / J. Joshi // Int J Pure Appl Biosci. - 2014. - V. 2. - P. 304-313.

81. Jurburg, S. D. Patterns of community assembly in the developing chicken microbiome reveal rapid primary succession [Text] / S. D. Jurburg, M. Brouwer, D. Ceccarelli, J. van der Goot, A. Jansman, A. Bossers // Microbiologyopen. - 2019. - V. 8 (9). - P. e821.

82. Kahindi, R. K. Performance and P utilization of broiler chickens fed low phytate barley and pea-based diets with graded levels of inorganic P [Text] / R. K. Kahindi, A. Philip, S. Thacker, I. Lee, I. H. Kim, C. M. Nyachoti // Ann Anim Sci. - 2017. - V. 17. - P. 205-215.

83. Kalsi, H. K. Phytases from Enterobacter and Serratia species with desirable characteristics for food and feed application [Text] / H. K. Kalsi, R. Singh, H. S. Dhaliwal, V. Kumar // Biotech. - 2016. - V. 6 (1). - P. 64.

84. Karbalaei, M. Pichia pastoris: a highly successful expression system for optimal synthesis of heterologous proteins [Text] / M. Karbalaei, S. A. Rezaee, H. Farsiani // J Cell Physiol. - 2020. - V. 235 (9). - P. 5867-5881.

85. Kelley, L. A. The Phyre2 web portal for protein modelling, prediction and analysis [Text] / L. A. Kelley, S. Mezulis, C. M. Yates, M. N. Wass, M. J. E. Sternberg // Nat Protoc. - 2015. - V. 10 (6). - P. 845-858.

86. Khan, K. H. Gene expression in mammalian cells and its applications [Text] / K. H. Khan // Advanced Pharmaceutical Bulletin. - 2013. - V. 3 (2). - P. 257-263.

87. Kies, A. K. Interaction between protein, phytate, and microbial phytase. In vitro studies [Text] / A. K. Kies, P. A. Kemme, A.W. Jongbloed // J Agric Food Chem. - 2006. - V. 54 (5). - P. 1753-1758.

88. Kim, J. H. Effect of superdosing phytase on productive performance and egg quality in laying hens [Text] / J. H. Kim, F. M. Pitargue, H. Jung, G. P. Han, H. S. Choi, D. Y. Kil // Asian-Australas J Anim Sci. - 2017. - V. 30 (7). - P. 994-998.

89. Kim, S. W. Effects of limestone particle size and dietary Ca concentration on apparent P and Ca digestibility in the presence or absence of phytase [Text] / S. W. Kim, W. Li, R. Angel, M. Proszkowiec-Weglarz // Poult Sci. - 2018. - V. 97 (12). - P. 4306-4314.

90. Kolodiazhnyi, O. I. Phosphorus compounds of natural origin: prebiotic, stereochemistry, application [Text] / O. I. Kolodiazhnyi // Symmetry. -2021. - V. 13 (5). - P. 889.

91. Konietzny, U. Molecular and catalytic properties of phytate-degrading enzymes (phytases) [Text] / U. Konietzny, R. Greiner // Int J Food Sci Technol. - 2002. - V. 37. - P. 791-812.

92. Konietzny, U. Bacterial phytase: potential application, in vivo function and regulation of its synthesis [Text] / U. Konietzny, R. Greiner // Braz J Microbiol. - 2004. - V. 35. - P. 11-18.

93. Kumar, S. Effect of antibiotic withdrawal in feed on chicken gut microbial dynamics, immunity, growth performance and prevalence of foodborne pathogens [Text] / S. Kumar, C. Chen, N. Indugu, G. O. Werlang, M. Singh, W. K. Kim, H. Thippareddi // PloS ONE. - 2018. - V. 13 (2). - P. e0192450.

94. Kumar, V. Cloning, sequencing, and in silico analysis of P-propeller phytase Bacillus licheniformis strain PB-13 [Text] / V. Kumar, G. Singh, P. Sangwan, A. K. Verma, S. Agrawal // Biotechnol Res Int. - 2014. - V. 2014. - P. 1-11.

95. Kumar, V. P-Propeller phytases: diversity, catalytic attributes, current developments and potential biotechnological applications [Text] / V. Kumar, A. N. Yadav, P. Verma, P. Sangwan, A. Saxena, K. Kumar, B. Singh // Int J Biol Macromol. - 2017. - V. 98. - P. 595-609.

96. Kumar, V. Phytic acid and phytase enzyme [Text] / V. Kumar, A. K. Sinha, K. Kajbaf // Whole grains and their bioactives: composition and health / Edited by J. Johnson, T. Wallace - JohnWiley & Sons Ltd, 2019. - P. 467-483.

97. Kumari, A. Mixed substrate fermentation for enhanced phytase production by thermophilic mould Sporotrichum thermophile and its application in beneficiation of poultry feed [Text] / A. Kumari, T. Satyanarayana, B. Singh // Appl Biochem Biotechnol. - 2016. - V. 178 (1). - P. 197-210.

98. Kunhikrishnan, A. Rare earth elements (REE) for the removal and recovery of phosphorus: a review [Text] / A. Kunhikrishnan, M.A. Rahman, D. Lamb, N.S. Bolan, S. Saggar, A Surapaneni, C. Chen // Chemosphere. - 2022. - V. 286. - P. 131661.

99. Künzel, S. Relative phytase efficacy values as affected by response traits, including ileal microbiota composition [Text] / S. Künzel, D. Borda-Molina, T. Zuber, J. Hartung, W. Siegert, D. Feuerstein, A. Camarinha-Silva, M. Rodehutscord // Poult Sci. - 2021. - V. 100 (6). - P. 101-133.

100. Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 [Text] / U.K. Laemmli // Nature. - 1970. - V. 227. - P. 680-685.

101. Lapidus, A. L. Metagenomic data assembly - the way of decoding unknown microorganisms [Text] / A. L. Lapidus, A. I. Korobeynikov // Front Microbiol. - 2021. - V. 12. - P. 613791.

102. Lee, H. S. Effects of N-glycosylation on protein conformation and dynamics: protein data bank analysis and molecular dynamics simulation study [Text] / H. S. Lee, Y. Qi, W. Im // Sci Rep. - 2015. - V. 5. - P. 8926.

103. Lei, X. G. Phytase enzymology, applications, and biotechnology [Text] / X. G. Lei, J. M. Porres // Biotechnol Lett. - 2003. - V. 25 (21). - P. 178794.

104. Lei, X. G. Phytase and inositol phosphates in animal nutrition: dietary manipulation and phosphorus excretion by animals [Text] / X. G. Lei, J. M. Porres // Inositol phosphates. Linking agriculture and the environment / Edited by B.L. Turner, A.E. Richardson, E.J. Mullaney - CABI, 2007. - P. 133-150.

105. Lei, X. G. Phytase, a new life for an "old" enzyme [Text] / X. G. Lei, J. D. Weaver, E. Mullaney, A. H. Ullah, M. J. Azain // Annu Rev Anim Biosci. -2013. - V. 1. - P. 283-309.

106. Letcher, A. J. Do mammals make all their own inositol hexakisphosphate? [Text] / A. J. Letcher, M. J. Schell, R. F. Irvine // Biochem J. -2008. - P. 416 (2). - P. 263-270.

107. Leyva-Jimenez, H. Evaluation of high dietary phytase supplementation on performance, bone mineralization, and apparent ileal digestible energy of growing broilers [Text] / H. Leyva-Jimenez, A. M. Alsadwi, K. Gardner, E. Voltura, C. A. Bailey // Poult Sci. - 2019. - V. 98 (2). - P. 811-819.

108. Li, B. A novel protein expression system-PichiaPink™ and a protocol for fast and efficient recombinant protein expression [Text] / B. Li, Y. Cao, L. Zhou, C. Liang, F. Sun // Afr J Biotechnol. - 2011. - V. 10 (83). - P. 1946419472.

109. Li, X. Growth promoting effect of a transgenic Bacillus mucilaginosus on tobacco planting [Text] / X. Li, Z. Q. Wu, W. D. Li, R. X. Yan, L. Li, J. Li, Y. Li, M. Li // Appl Microbiol Biotechnol. - 2007. - V. 74 (5). - P. 1120-1125.

110. Li, X. Control of XPR1-dependent cellular phosphate efflux by InsP(8) is an exemplar for functionally-exclusive inositol pyrophosphate signaling

[Text] / X. Li, C. Gu, S. Hostachy, S. Sahu, C. Wittwer, H. J. Jessen, D. Fiedler, H. Wang, S. B. Shears // Proc Natl Acad Sci. - 2020. - V. 117. - P. 3568-3574.

111. Lin-Cereghino, G. P. The effect of alpha-mating factor secretion signal mutations on recombinant protein expression in Pichia pastoris [Text] / G. P. Lin-Cereghino, C. M. Stark, D. Kim, J. Chang, N. Shaheen, H. Poerwanto, K. Agari, P. Moua, L. K. Low, N. Tran, A. D. Huang, M. Nattestad, K. T. Oshiro, J. W. Chang, A. Chavan, J. W. Tsai, J. Lin-Cereghino // Gene. - 2013. - V. 519 (2). - P. 311-317.

112. Lopez-Sanchez, U. Interplay between primary familial brain calcification-associated SLC20A2 and XPR1 phosphate transporters requires inositol polyphosphates for control of cellular phosphate homeostasis [Text] / U. Lopez-Sanchez, S. Tury, G. Nicolas, M. S. Wilson, S. Jurici, X. Ayrignac // J Biol Chem. - 2020. - V. 295 (28). - P. 9366-9378.

113. Macchione, I. G. Akkermansia muciniphila: key player in metabolic and gastrointestinal disorders [Text] / I. G. Macchione, L. R. Lopetuso, G. Ianiro, M. Napoli, G. Gibiino, G. Rizzatti, V. Petito, A. Gasbarrini, F. Scaldaferri // Eur Rev Med Pharmacol Sci. - 2019. - V. 23 (18). - P.8075-8083.

114. Madden, K. Electroporation of Pichia pastoris [Text] / K. Madden, I. Tolstokurov, J. Cregg // Genetic transformation systems in fungi / Edited by M. A. van den Berg, K. Maruthachalam - Springer, 2015. - P. 87-91.

115. Majumder, S. Rice biofortification: high iron, zinc, and vitamin-a to fight against "hidden hunger" [Text] / S. Majumder, K. Datta, S. Datta // Agronomy. - 2019. - V. 9 (12). - P. 803.

116. Marolt, G. Complex formation of phytic acid with selected monovalent and divalent metals [Text] / G. Marolt, E. Gricar, B. Pihlar, M. Kolar // Front Chem. - 2020. - V. 8. - P. 582746.

117. Matijasic, M. Gut microbiota beyond bacteria - mycobiome, virome, archaeome, and eukaryotic parasites in IBD [Text] / M. Matijasic, T. Mestrovic, H. Cipcic Paljetak, M. Peric, A. Baresic, D. Verbanac // Int J Mol Sci. - 2020. - V. 21 (8). - P. 2668.

118. Medvecky, M. Whole genome sequencing and function prediction of 133 gut anaerobes isolated from chicken caecum in pure cultures [Text] / M. Medvecky, D. Cejkova, O. Polansky, D. Karasova, T. Kubasova, A. Cizek, I. Rychlik // BMC genomics. - 2018. - V. 19 (1). - P. 561.

119. Mehak, W. Production, purification, characterization and kinetic studies of phytase from Enterococcus and Streptococcus spp. using submerged fermentation [Text] / W. Mehak, S. M. R. Zahra, Z. Hussain, M. Shahid, B. Shahid // Biosci Res. - 2021. - V. 18 (2). - P. 1826-1837.

120. Mellitzer, A. Synergistic modular promoter and gene optimization to push cellulase secretion by Pichia pastoris beyond existing benchmarks [Text] / A. Mellitzer, C. Ruth, C. Gustafsson, M. Welch, R. Birner-Grunberger, R. Weis, T. Purkarthofer, A. Glieder // J Biotechnol. - 2014. - V. 191. - P. 187-195.

121. Muji, S. The effects of phytase in nitrogen and phosphorus excretion of laying hens fed reduced protein levels [Text] / S. Muji, M. A. Kamberi, A. R. Kryeziu, R. Kastrati, N. Mestani // Bulg J Agric Sci. - 2018. - V. 24 (2). - P. 310316.

122. Muji, S. The excretion of Ca, Mg, Zn and Cu through excreta of laying hens fed two different levels of protein with and without phytase [Text] / S. Muji, A. R. Kryeziu, M. Kamberi, R. Kastrati, N. Mestani // Tur J Agric Food Sci Technol. - 2019. - V. 7 (1). - P. 68-72.

123. Mullaney, E. J. Phytases: attributes, catalytic mechanisms and applications [Text] / E. J. Mullaney, A. H. J. Ullah. Eds. B. L. Turner, A. E. Richardson, E. J. Mullaney // Inositol phosphates. Linking agriculture and the environment / Edited by B.L. Turner, A.E. Richardson, E.J. Mullaney - CABI, 2007. - P. 97-110.

124. Naumov, G. I. Description of Komagataella mondaviorum sp. nov., a new sibling species of Komagataella (Pichia) pastoris [Text] / G. I. Naumov, E. S. Naumova, K. L. Boundy-Mills // Antonie Van Leeuwenhoek. - 2018. - V. 111 (7). - P. 1197-1207.

125. Oh, B. C. Biochemical properties and substrate specificities of alkaline and histidine acid phytases [Text] / B. C. Oh, W. C. Choi, S. Park, Y. O. Kim, T. K. Oh // Appl Microbiol Biotechnol. - 2004. - V. 63 (4). - P. 362-372.

126. Okamura, M. Depletion of mRNA export regulator DBP5/DDX19, GLE1 or IPPK that is a key enzyme for the production of IP6, resulting in differentially altered cytoplasmic mRNA expression and specific cell defect [Text] / M. Okamura, Y. Yamanaka, M. Shigemoto, Y. Kitadani, Y. Kobayashi, T. Kambe, M. Nagao, I. Kobayashi, K. Okumura, S. Masuda // PLoS ONE. - 2019. -V. 14. - P. e0220511.

127. Padkina, M. Genetically modified microorganisms as producers of biologically active compounds [Text] / M. Padkina, E. Sambuk // Ecological Genetics. - 2015. - V. 13 (2). - P. 36.

128. Pal Roy, M. Cloning and expression of phytase appa gene from Shigella sp. CD2 in Pichia pastoris and comparison of properties with recombinant enzyme expressed in E. coli [Text] / M. Pal Roy, D. Mazumdar, S. Dutta, S. P. Saha, S. Ghosh // PLoS One. - 2016. - V. 11 (1). - P. e0145745.

129. Pan, D. Intestinal microbiome of poultry and its interaction with host and diet [Text] / D. Pan, Z. Yu // Gut Microbes. - 2014. - V. 5 (1). - P. 108-119.

130. Parashar, D. Enhancing the production of recombinant acidic a-amylase and phytase in Pichia pastoris under dual promoters [constitutive (GAP) and inducible (AOX)] in mixed fed batch high cell density cultivation [Text] / D. Parashar, T. Satyanarayana // Process Biochem. - 2016. - V. 51. - P. 1315-1322.

131. Parua, P. K. Pichia pastoris 14-3-3 regulates transcriptional activity of the methanol inducible transcription factor Mxr1 by direct interaction [Text] / P. K. Parua, P. M. Ryan, K. Trang, E. T. Young // Molecular microbiology. - 2012. -V. 85 (2). - P. 282-298.

132. Periyasamy, S. Isolation, characterization and evaluation of the Pichia pastoris sorbitol dehydrogenase promoter for expression of heterologous proteins [Text] / S. Periyasamy, N. Govindappa, S. Sreenivas, K. Sastry // Protein Expr Purif. - 2013. - V. 92 (1). - P. 128-133.

133. Phillippy, B. Q. Certain Malvaceae plants have a unique accumulation of myo-inositol 1,2,4,5,6-pentakisphosphate [Text] / B. Q. Phillippy, I. Y. Perera, J. L. Donahue, G. E. Gillaspy // Plants (Basel). - 2015. - V. 4 (2). - P. 267-283.

134. Pool, M. R. Targeting of proteins for translocation at the endoplasmic reticulum [Text] / M. R. Pool // Int J Mol Sci. - 2022. - V. 23. - P. 3773.

135. Poole, L. B. Introduction: what we do and do not know regarding redox processes of thiols in signaling pathways [Text] / L. B. Poole, C. Schoneich // Free Radic Biol Med. - 2015. - V. 80. - P. 145-147.

136. Potvin, G. Bioprocess engineering aspects of heterologous protein production in Pichia pastoris: a review [Text] / G. Potvin, A. Ahmad, Z. Zhang // Biochem Eng J. - 2012. - V. 64. - P. 91-105.

137. Priyodip, P. Phytases of probiotic bacteria: characteristics and beneficial aspects [Text] / P. Priyodip, P. Y. Prakash, S. Balaji // Indian J Microbiol. - 2017. - V. 57 (2). - P. 148-154.

138. Ptak, A. Phytase modulates ileal microbiota and enhances growth performance of the broiler chickens [Text] / A. Ptak, M. R. Bedford, S. Swi^tkiewicz, K. Zyla, D. Jozefiak // PLoS One. - 2015. - V. 10 (3). - P. 1-15.

139. Puhl, A. A. Kinetic and structural analysis of a bacterial protein tyrosine phosphatase-like myo-inositol polyphosphatase [Text] / A. A. Puhl, R. J. Gruninger, R. Greiner, T. W. Janzen, S. C. Mosimann, L. B. Selinger // Protein Sci. - 2007. - V. 16 (7). - P. 1368-1378.

140. Qamar, A. The role of intestinal microbiota in chicken health, intestinal physiology and immunity [Text] / A. Qamar, J. Waheed, A. Hamza, S. G. Mohyuddin, Z. Lu, Z. Namula, Z. Chen, J. J. Chen // Journal Anim Plant Sci. -2021. - V. 31 (2). - P. 342-351.

141. Raboy, V. Low phytic acid crops: observations based on four decades of research [Text] / V. Raboy // Plants (Basel). - 2020. - V. 9 (2). - P.140.

142. Ragon, M. Structure of Debaromyces castelii CBS 2923 phytase [Text] / M. Ragon, F. Hoh, A. Aumelas, L. Chiche, G. Moulin, H. Boze // Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun. - 2009. - V. 65. - P. 321-326.

143. Ramazi, S. Posttranslational modifications in proteins: resources, tools and prediction methods [Text] / S. Ramazi, J. Zahiri // Database (Oxford). -2021. - V. 2021. - P. 1-20.

144. Ranjan, B. Characteristics of recombinant phytase (rSt-Phy) of the thermophilic mold Sporotrichum thermophile and its applicability in dephytinizing foods [Text] / B. Ranjan, B. Singh, T. Satyanarayana // Appl Biochem Biotechnol.

- 2015. - V. 177 (8). - P. 1753-1766.

145. Ranjitkar, S. Bacterial succession in the broiler gastrointestinal tract [Text] / S. Ranjitkar, B. Lawley, G. Tannock, R. M. Engberg // Appl Environ Microbiol. - 2016. - V. 82 (8). - P. 2399-2410.

146. Rao, D. E. C. S. Molecular characterization, physicochemical properties, known and potential applications of phytases: an overview [Text] / D. E. C. S. Rao, K. V. Rao, T. P. Reddy, V. D. Reddy // Crit Rev Biotechnol. - 2009.

- V. 29 (2). - V. 182-198.

147. Rasala, B. A. Photosynthetic biomanufacturing in green algae; production of recombinant proteins for industrial, nutritional, and medical uses [Text] / B. A. Rasala, S. P. Mayfield // Photosynth Res. - 2015. - V. 123 (3). - P. 227-239.

148. Reddy, C. S. Genetically modified phytase crop's role in sustainable plant and animal nutrition and ecological development: a review [Text] / C. S. Reddy, S. C. Kim, T. Kaul // 3 Biotech. - 2017. - V. 7 (3). - P. 195.

149. Reynolds, T. B. Strategies for acquiring the phospholipid metabolite inositol in pathogenic bacteria, fungi and protozoa: making it and taking it [Text] / T. B. Reynolds // Microbiology (Reading). - 2009. - V. 155. - P.1386-1396.

150. Rosano, G. L. Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges [Text] / G. L. Rosano, E.A. Ceccarelli // Front Microbiol.

- 2014. - V. 5. - P. 172.

151. Rubio, M.V. Redesigning N-glycosylation sites in a GH3 ß-xylosidase improves the enzymatic efficiency [Text] / M.V. Rubio, C. R. F. Terrasan, F. J. Contesini, M. P. Zubieta, J. A. Gerhardt, L. C. Oliveira // Biotechnology for Biofuels. - 2019. - V. 12. - P. 269.

152. Ruth, C. Pichia pastoris Aft1-a novel transcription factor, enhancing recombinant protein secretion [Text] / C. Ruth, M. Buchetics, V. Vidimce, D. Kotz, S. Naschberger, D. Mattanovich, H. Pichler, B. Gasser // Microb Cell Factories - 2014. - V. 13. - P. 120.

153. Rutherfurd, S. M. Effect of a novel phytase on growth performance, apparent metabolizable energy, and the availability of minerals and amino acids in a low-phosphorus corn-soybean meal diet for broilers [Text] / S. M. Rutherfurd, T. K. Chung, D. V. Thomas, M. L. Zou, P. J. Moughan // Poult Sci. Champaign. -2012. - V. 91 (5). - P. 1118-1127.

154. Sambrook, J. Molecular cloning: a laboratory manual / J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis // Cold Spring Harbor Laboratory press, 1989.

155. Sanchez, S. Useful microbial enzymes - an introduction [Text] / S. Sanchez, A. L. Demain // Biotechnology of microbial enzymes. Production, biocatalysis and industrial applications / Edited by G. Brahmachari, A. Demain, J. Adrio - Elsevier Inc., 2017. - P. 1-11.

156. Santos, F. R. Effect of phytase supplementation in diets on nutrient digestibility and performance in broiler chicks [Text] / F. R. Santos, M. Hruby, E. E. M. Pierson, J. C. Remus, N. K. Sakomura // J Appl Poult Res (Oxford). - 2008. -V. 17 (2). - P. 191-201.

157. Sato, V.S. The active role of spray-dried phytase produced by Rhizopus microspores var microsporus biofilm in feeding broiler chickens [Text] / V. S. Sato, G. V. Pinto, C. M. Amaral, A. R. Crisci, W. P. Oliveira, L. H. Guimaraes // Insights Enz Res. - 2018. - V. 1 (1). - P. 1-6.

158. Savita, P. D. Phytate solubilizing microorganisms and enzyme phytase to combat nutritional problems in cereal-based foods [Text] / P. D. Savita,

M. Yallappa, N. Nivetha, V. C. Suvarna // J Bacteriol Mycol Open Access. - 2017.

- V. 4 (3). - P. 86-89.

159. Selle, P. H. Effects of pre-pelleted wheat and phytase supplementation on broiler growth performance and nutrient utilization [Text] / P. H. Selle, R. J. Gill, T. A. Scott // Proc Aust Poult Sci Symp. - 2007. - V. 19. - P. 182-185.

160. Serna, J. Importance of dietary phosphorus for bone metabolism and healthy aging [Text] / J. Serna, C. Bergwitz // Nutrients. - 2020. - V. 12 (10). - P. 3001.

161. Sha, C. Enhancement of lipase r27RCL production in Pichia pastoris by regulating gene dosage and co-expression with chaperone protein disulfide isomerase [Text] / C. Sha, X. W. Yu, N. X. Lin, M. Zhang, Y. Xu // Enzym Microb Technol. - 2013. - V. 53. - P. 438-443.

162. Shah, A. Inositol pyrophosphates: energetic, omnipresent and versatile signalling molecules [Text] / A. Shah, S. Ganguli, J. Sen, R. Bhandari // J Indian Inst Sci. - 2017. - V. 97 (1). - P. 23-40.

163. Shah, P. C. Phytase production by Aspergillus niger NCIM 563 for a novel application to degrade organophosphorous pesticides [Text] / P. C. Shah, V. R. Kumar, S. G. Dastager, J. M. Khire // BMC Express. - 2017. - V. 7 (1). - P. 66.

164. Shang, Y. Chicken gut microbiota: importance and detection technology [Text] / Y. Shang, S. Kumar, B. Oakley, W.K. Kim // Front Vet Sci. -2018. - V. 5. - P. 254.

165. Sharma, N. Phytase producing lactic acid bacteria: cell factories for enhancing micronutrient bioavailability of phytate rich foods [Text] / N. Sharma, S. Angural, M. Rana, N. Puri, K. Kondepudi, N. Gupta // Trends Food Sci Technol. - 2020. - V. 96. - P. 1-12.

166. Sharp, P. M. An evolutionary perspective on synonymnus codon usage in unicellular organisms [Text] / P. M. Sharp, W.H. Li // J Mol Evd. - 1987.

- V. 24. - P. 28-38.

167. Shedova, E. Phytase activity and its regulation in a rhizospheric strain of Serratia polymuthica [Text] / E. Shedova, V. Lipasova, G. Velikodvorskaya, M.

Ovadis, L. Chernin, I. Khmel // Folia Microbiol (Praha). - 2008. - V. 53 (2). - P. 110-114.

168. Shen, Q. Identification of a novel promoter for driving antibiotic-resistant genes to reduce the metabolic burden during protein expression and effectively select multiple integrations in Pichia pastoris [Text] / Q. Shen, Z. Yu, X.T. Zhou // Microbiol Biotechnol. - 2021. - V. 105 (8). - P. 3211-3223.

169. Sobolewska, A. The impact of synbiotic administration through in ovo technology on the microstructure of a broiler chicken small intestine tissue on the 1st and 42nd day of rearing [Text] / A. Sobolewska, J. Bogucka, A. Dankowiakowska, G. Elminowska-Wenda, K Stadnicka, M. Bednarczyk // J Anim Sci Biotechnol. - 2017. - V. 8. - P. 61.

170. Spivakov, B. Membrane techniques. Ultrafiltration [Text] / B. Spivakov, V. Shkinev // Encyclopedia of analytical science / P. Worsfold, A. Townshend, C. Poole C - Elsevier Inc., 2005. - P. 524-530.

171. Stanley, D. Microbiota of the chicken gastrointestinal tract: influence on health, productivity and disease [Text] / D. Stanley, R. J. Hughes, R.J. Moore // Appl Microbiol Biotechnol. - 2014. - V. 98 (10). - P. 4301-4310.

172. Suleimanova, A. D. High-quality draft genome sequence of a new phytaseproducing microorganism Pantoea sp. 3.5.1 [Text] / A. D. Suleimanova, A. A. Toymentseva, E. A. Boulygina, S. V. Kazakov, A. M. Mardanova, N. P. Balaban, M. R. Sharipova // Standards in Genomic Sci. - 2015 a. - V. 10 (95). - P. 1-9.

173. Suleimanova, A. D. Novel glucose-1-phosphatase with high phytase activity and unusual metal ion activation from soil bacterium Pantoea sp. strain 3.5.1 [Text] / A. D. Suleimanova, A. Beinhauer, L. R. Valeeva, I. B. Chastukhina, N. P. Balaban, E. 150 V. Shakirov, R. Greiner, M. R. Sharipova // Appl. Environ. Microbiol. - 2015 b. - V. 81. - P. 6790-6799.

174. Suleimanova, A. D. Physiological roles of histidine acid phytase from Pantoea sp. 3.5.1 [Text] / A. D. Suleimanova, D. S. Troshagina, M. R. Sharipova // Res J Pharm Biol Chem Sci. - 2016. - V. 7 (5). - P. 1570-1577.

175. Tanaka, K. A new-generation of Bacillus subtilis cell factory for further elevated scyllo-inositol production [Text] / K. Tanaka, A. Natsum, S. Ishikawa, S. Takenaka, K.I. Yoshida // Microb Cell Fact. - 2017. - V. 16. - P. 1-8.

176. Tanghe, M. Recombinant expression of Trichoderma reesei Cel61A in Pichia pastoris: optimizing yield and N-terminal processing [Text] / M. Tanghe, B. Danneels, A. Camattari, A. Glieder, I. Vandenberghe, B. Devreese et al. // Mol Biotechnol. - V. 57 (11-12). - P. 1010-1017.

177. Thai, H. D. Heterologous phytase expression in the food filamentous fungus Aspergillus oryzae using the added rice husk cultivation model [Text] / H. D. Thai, V. T. Tran // Academ J Biolog. - 2020. - V. 42 (2). - P. 75-84.

178. Thomas, F. Environmental and gut Bacteroidetes: the food connection [Text] / F. Thomas, J.-H. Hehemann, E. Rebuffet, M. Czjzek, G. Michel // Front Microbiol. - 2011. - V. 2. - P. 93.

179. Thomas, M. P. The «other» inositols and their phosphates: synthesis, biology, and medicine (with recent advances in myo-inositol chemistry) [Text] / M. P. Thomas, S. J. Mills, B. V. L. Potter // Angew Chem Int Ed. - 2016. - V. 55 (5). - P. 1614-1650.

180. Truong, H. H. Pre- and post-pellet whole grain inclusions enhance feed conversion efficiency, energy utilization and gut integrity in broiler chickens offered wheat-based diets [Text] / H. H. Truong, A. F. Moss, S. Y. Liu, P. H. Selle // Anim Feed Sci Technol. - 2017. - V. 224. - P. 115-123.

181. Turner, B. L. Inositol phosphates in soil: amounts, forms and significance of the phosphorylated inositol stereoisomers [Text] / B. L. Turner // Inositol phosphates. Linking agriculture and the environment / Edited by B.L. Turner, A.E. Richardson, E.J. Mullaney - CABI, 2007. - P. 186-207.

182. Ushasree, M. V. Microbial phytase: impact of advances in genetic engineering in revolutionizing its properties and applications [Text] / M. V. Ushasree, K. Shyam, J. Vidya, A. Pandey // Bioresour Technol. - 2017. - V. 245. - P. 1790-1799.

183. Vadhana, A. K. Improved secretion of Candida antarctica lipase B with its native signal peptide in Pichia pastoris [Text] / A. K. Vadhana, P. Samuel, R. M. Berin, J. Krishna, K. Kamatchi, S. Meenakshisundaram // Enzym Microb Technol. - 2013. - V. 52 (3). - P. 177-183.

184. Valeeva, L. R. Heterologous expression of secreted bacterial BPP and HAP phytases in plants stimulates Arabidopsis thaliana growth on phytate [Text] / L. R. Valeeva, C. Nyamsuren, M. R. Sharipova, E. V. Shakirov // Front Plant Sci. - 2018. - V. 9. - P. 86.

185. Vanz, A. Physiological response of Pichia pastoris GS115 to methanol-induced high level production of the Hepatitis B surface antigen: catabolic adaptation, stress responses, and autophagic processes [Text] / A. L. Vanz, H. Lünsdorf, A. Adnan, M. Nimtz, C. Gurramkonda, N. Khanna, U. Rinas // Microb Cell Fact. - 2012. - V.11 (1). - P. 103.

186. Vijayaraghavan, P. Thermostable alkaline phytase from Alcaligenes sp. in improving bioavailability of phosphorus in animal feed. In vitro analysis [Text] / P. Vijayaraghavan, R. R. Primiya, S. G. P. Vincent // ISRN Biotechnol. -2013. - V. 2013. - P. 394305.

187. Villamizar, G. A. C. Characteristics of the first protein tyrosine phosphatase with phytase activity from a soil metagenome [Text] / G. A. C. Villamizar, H. Nacke, L. Griese, L. Tabernero, K. Funkner, R. Daniel // Genes (Basel). - 2019. - V. 10 (2). - P. 101.

188. Vogel, A. Purple acid phosphatases [Text] / A. Vogel, F. Spener, B. Krebs // Handbook of metalloproteins / Edited by A. Messerschmidt, R. Huber, T. Poulas, K. Wieghardt, M. Cygel, M. Bode - John Wiley & Sons, 2006. - P. 752757.

189. Vogl, T. A toolbox of diverse promoters related to methanol utilization: functionally verified parts for heterologous pathway expression in Pichia pastoris [Text] / T. Vogl, L. Sturmberger, T. Kickenweiz, R. Wasmayer, C. Schmid, A. M. Hatzl, M. A. Gerstmann, J. Pitzer, M. Wagner, G. G. Thallinger, M. Geier, A. Glieder // ACS Synth. Biol. - 2016. - V. 5 (2). - P. 172-186.

190. Vogl, T. Regulation of Pichia pastoris promoters and its consequences for protein production [Text] / T. Vogl, A. Glieder // N Biotechnol. -2013. - V. 30. - P. 385-404.

191. Vucenik, I. Anticancer properties of inositol hexaphosphate and inositol: an overview [Text] / I. Vucenik // J Nutr Sci Vitam (Tokyo). - 2019. - V. 65. - P. S18-S22.

192. Wali, S. Comparative effects of manganese and iron stress on seed germination and various growth parameters of Phaseolus lunatus L. [Text] / S. Wali, L. Syed, F. Rahim, F. Tariq, K. U. Rahman // Pak. J Bot. - 2021. - V. 53 (4). - P. 1193-1197.

193. Walk, C. L. Increasing dietary phytate has a significant anti-nutrient effect on apparent ileal amino acid digestibility and digestible amino acid intake requiring increasing doses of phytase as evidenced by prediction equations in broilers / C. L. Walk, S.V. Rama Rao // Poult Sci. - 2020. - V. 99 (1). - P. 290300.

194. Walters, H. G. Effects of increasing phytase inclusion levels on broiler performance, nutrient digestibility, and bone mineralization in low-phosphorus diet [Text] / H. G. Walters, M. Coelho, C. D. Coufal, J. T. Lee // J Appl Poult Res. - 2019. - V. 28. - P. 1210-1225.

195. Wang, P. Improving the secretion of a methyl parathion hydrolase in Pichia pastoris by modifying its N-terminal sequence [Text] / P. Wang, L. Huang, H. Jiang, J. Tian, X. Chu, N. Wu // PLoS One. - 2014. - V. 9 (5). - P. e96974.

196. Wang, P. Enhanced secretion of a methyl parathion hydrolase in Pichia pastoris using a combinational strategy [Text] / P. Wang, L. Huang, H. Jiang, J. Tian, X. Chu, N. Wu // Microb Cell Factories. - 2015. - V. 14 (1). - P. 123.

197. Wang, R. Phytic acid and its interactions: Contributions to protein functionality, food processing, and safety [Text] / R. Wang, S. Guo // Compr Rev Food Sci Food Saf. - 2021. - V. 20 (2). - P. 2081-2105.

198. Wang, X. Mit1 transcription factor mediates methanol signaling and regulates the alcohol oxidase 1 (AOX1) promoter in Pichia pastoris [Text] / X. Wang, Q. Wang, J. Wang, P. Bai, L. Shi, W. Shen, M. Zhou, X. Zhou, Y. Zhang, M. Cai // J Biol Chem. - 2016. - V. 291 (12). - P. 6245-6261.

199. Wang, X. F. Production of Yarrowia lipolytica lipase LIP2 in Pichia pastoris using the nitrogen source-regulated FLD1 promoter [Text] / X. F. Wang, X. G. Shen, Y. C. Sun, H. Y. Zhao, L. Xu, L. Yin, Y. Yunjun // J Chem Technol Biotechnol. - 2012. - V. 87. - P. 553-558.

200. Wilson, M.S. The inositol hexakisphosphate kinases IP6K1 and -2 regulate human cellular phosphate homeostasis, including XPR1-mediated phosphate export [Text] / M.S. Wilson, H.J. Jessen, A. Saiardi // J Biol Chem. -2019. - V. 294 (3). - P. 11597-11608.

201. Witzig, M. Correction: spatial variation of the gut microbiota in broiler chickens as affected by dietary available phosphorus and assessed by T-RFLP analysis and 454 pyrosequencing [Text] / M. Witzig, A. Camarinha-Silva, R. Green-Engert, K. Hoelzle, E. Zeller, J. Seifert, L. E. Hoelzle, M. Rodehutscord // PLoS ONE. - 2015. - V. 10 (12). - P. e0145588.

202. Xiong, Y. Effects of N-glycosylation on the structure, function, and stability of a plant-made fc-fusion anthrax decoy protein [Text] / Y. Xiong, K. Karuppanan, A. Bernardi, Q. Li, V. Kommineni, A. M. Dandekar, C. B. Lebrilla, R. Faller, K. A. McDonald, S. Nandi // Front Plant Sci. - 2019. - V. 10. - P. 768.

203. Yan, W. Gut metagenomic analysis reveals prominent roles of Lactobacillus and cecal microbiota in chicken feed efficiency [Text] / W. Yan, C. Sun, J. Yuan, N. Yang // Sci Rep. - 2017. - V. 7. - P. 45308.

204. Yang, J. Effects of different proportions of two Bacillus sp. on the growth performance, small intestinal morphology, caecal microbiota and plasma biochemical profile of Chinese Huainan Partridge Shank chickens [Text] / J. Yang, K. Qian, W. U. Dong, W. Zhang, W. U. Yi-Jing, X. U. Ya-Yuan // J Integr Agric. - 2017. - V. 6 (6). - P.1383-1392.

205. Yang, M. Extracellular expression of alkaline phytase in Pichia pastoris: Influence of signal peptides, promoters and growth medium [Text] / M. Yang, S.Teymorian, P. Olivares, P. P. N. Murthy // Biotechnol Rep (Amst). -2015. - V.6. - P. 112-118.

206. Yang, S. Enhanced production of recombinant secretory proteins in Pichia pastoris by optimizing Kex2 P1'site [Text] / S. Yang, Y. Kuang, H. Li, Y. Liu, X. Hui, P. Li, Z. Jiang, Y. Zhou, Y. Wang, A. Xu, S. Li, P. Liu, D. Wu // PLoS One. - 2013. - V. 8 (9). - P. e75347.

207. Yang, Z. Engineering strategies for enhanced production of protein and bio-products in Pichia pastoris: a review [Text] / Z. Yang, Z. Zhang // Biotechnol Adv. - 2017. - V. 36 (1). - P. 182-185.

208. Yao, M. Z. Phytases: crystal structures, protein engineering and potential biotechnological applications [Text] / M. Z. Yao, Y. H. Zhang, W. L. Lu, M. Q. Hu, W. Wang, A. H. Liang // J Appl Microbiol. - 2012. - V. 112 (1). - P. 114.

209. Yao, M. Z. Effect of metals ions on thermostable alkaline phytase from Bacillus subtilis YCJS isolated from soybean rhizosphere soil [Text] / M. Z. Yao, W. L. Lu, T. G. Chen, W. Wang, Y. J. Fu, B. S. Yang, A. Liang // Ann Microbiol. - 2014. - V. 64. - P. 1123-1131.

210. Yin, J. Select what you need: a comparative evaluation of the advantages and limitations of frequently used expression systems for foreign genes [Text] / J. Yin, G. Li, X. Ren, G. Herrler // J Biotechnol. - 2007. - V. 127 (3). - P. 335-347.

211. Yin, Q. Q. Biochemical characteristics of phytases from fungi and the transformed microorganism [Text] / Q. Q. Yin, Q. H. Zheng, X. T. Kang // Anim Feed Sci Technol. - 2007. - V. 132. - P. 341-350.

212. Yoshida, K. I. Production of scyllo-inositol: conversion of rice bran into a promising disease-modifying therapeutic agent for Alzheimer's disease [Text] / K. I. Yoshida, S. Ishikawa // J Nutr Sci Vitam. - 2019. - V. 65 (Supplement). - P. S139-S142.

213. Yurimoto, H. Yeast methylotrophy: metabolism, gene regulation and peroxisome homeostasis [Text] / H. Yurimoto // Int J Microbioly. - 2011. V. 2011. - P. 101298.

214. Zhang, W. What is for dinner? Viral metagenomics of US store bought beef, pork, and chicken [Text] / W. Zhang, L. Li, X. Deng, B. Kapusinszky, E. Delwart // Virology. - 2014. - V. 468-470. - P. 303-310.

215. Zhu, D. Industrial enzymes / D. Zhu, Q. Wu, L. Hua [Text] // Comprehensive Biotechnology / Edited by D. Zhu, Q. Wu, L. Hua - Elsevier Inc., 2019. - P. 1-13.

216. Zhu, T. Constitutive expression of alkaline ß-mannanase in recombinant Pichia pastoris [Text] / T. Zhu, H. Sun, P. Li, Y. Xue, Y. Li, Y. Ma // Process Biochem. - 2014. - V. 49 (12). - P. 2025-2029.

217. Zonneveld, B. J. The red ade mutants of Kluyveromyces lactis and their classification by complementation with cloned ADE1 or ADE2 genes from Saccharomyces cerevisiae [Text] / B.J. Zonneveld, A.L. van der Zanden // Yeast. -1995. - V. 11. - P. 823-827.