Геропротекторный потенциал генетических, фармакологических и средовых интервенций в циркадный осциллятор Drosophila melanogaster тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Соловьёв Илья Андреевич

• Соловьёв Илья Андреевич
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Соловьёв Илья Андреевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКСТРА- И ИНТРАОКУЛЯРНЫХ СИСТЕМ ФОТОРЕЦЕПЦИИ И ФОТОТРАНСДУКЦИИ, СТРУКТУРЫ ЦИРКАДНОГО ОСЦИЛЛЯТОРА DROSOPHILA MELANOGASTER

1.1 Взаимосвязь фоторежима и продолжительности жизни

1.2 Разнообразие фоторецепторных систем

1.3 Краткий обзор механизмов фототрансдукции на примере плодовой мухи Drosophila melanogaster

1.4 Молекулярная структура клеточного осциллятора дрозофилы и организация нейрональной сети центрального часового механизма

1.5 СЯУ-опосредованная фототрансдукция у Drosophila melanogaster

1.6 Вклад последовательностей-детерминант циркадных ритмов в процесс старения

1.7 Гипотеза о существовании явления возрастной фоторезистентности

ГЛАВА 2 ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ИНТЕРВЕНЦИИ В МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ СТАРЕНИЯ, НОВЫЕ ПРЕПАРАТЫ, ИНСТРУМЕНТЫ И ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНЫЕ ХРОНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ В БИОГЕРОНТОЛОГИИ

2.1 Геропротекторы: определение и критерии отбора

2.2 Препараты-геропротекторы, нацеленные на эпигенетические факторы

2.3 Препараты-корректоры протеостаза, обладающие геропротекторными свойствами

2.4 Геропротекторные эффекты сенолитических препаратов

2.5 Новый этап развития хроногеронтологии: циркадиомная биогеронтология

2.6 Малые молекулы-модуляторы циркадных ритмов (хронобиотики)

ГЛАВА 3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1 Линии Drosophila melanogaster

3.2 Линии Drosophila для конститутивной экспрессии генов

3.3 Активация экспрессии трансгенных конструкций

3.4 Верификация функциональности трансгенных конструкций методом ПЦР с этапом обратной транскрипции и исследования изменения профиля экспрессии генов циркадных ритмов с возрастом

3.5 Замеры массы тела дрозофил

3.6 Препараты KL001 и KS15, исследование их геропротекторного потенциала

3.7 Обработка препаратами KL001 и KS15

3.8 Условия содержания дрозофил

3.9 Оценка устойчивости плодовых мух, получающих KL001 и KS15 к стресс-факторам (гипертермия, голодание, гипероксия)

3.10 Методы анализа выживаемости

3.11 Оценка пищевого поведения дрозофил

3.12 Компьютерные методы поиска альтернативных мишеней

3.13 Моделирование взаимодействий малых молекул с белком dCRY, криптохромом дрозофилы

3.14 Анализ двигательной активности дрозофил

3.15 Статистические критерии, использованные в работе

ГЛАВА 4 РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ПРОЦЕДУР МОЛЕКУЛЯРНОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ

4.1 Экспрессия генов-регуляторов циркадных ритмов

4.2 Эффекты различных фоторежимов на продолжительность жизни трансгенных линий D. melanogaster

4.3 Построение периодограмм ритмов двигательной активности методом преобразований Фурье, реализованных инструментами python и их анализ

4.4 Результаты исследования корреляционной зависимости инкрементов продолжительности жизни и массы тела в условиях кондиционной RU486-

индуцибельной сверхэкспрессии генов циркадных ритмов и высокобелковой диеты

4.5 Оценка пищевого поведения особей Drosophila melanogaster, сверхэкспрессирующих cry12 и cry24 в периферических тканях

4.6 Влияние активатора CRY (криптохрома) KL001 на продолжительность жизни самцов Drosophila melanogaster линии Canton-S

4.7 Влияние KL001 на продолжительность жизни самок Drosophila melanogaster линии Canton-S

4.8 Эффекты ингибитора криптохрома KS15, выявленные при изучении его влияния на параметры ПЖ плодовых мух

4.9 Результаты подсчетов продолжительности жизни самок, получавших с пищей KS15

4.10 Адаптогенные эффекты KL001 и KS15 при различных воздействиях (гипертермия, гипероксия, голодание) на организм самцов Drosophila melanogaster

4.11 Влияние препаратов KL001 и KS15 на двигательную активность, сон и циркадные ритмы D. melanogaster

4.12 Влияние KL001 и KS15 на способность противостоять биологическим эффектам голодания

4.13 Фотопротекторные эффекты рибофлавина, растворенного в водном растворе ЭДТА на модели дрозофилы, экспрессирующей конститутивно криптохром в нервной системе

4.14 Сравнительный анализ качества лигандов криптохрома, имеющих геропротекторный потенциал

4.15 Компьютерный поиск мишеней препарата KL001 в организме человека и

других существ, реконструкция списка мишеней KS15

ГЛАВА 5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИНТЕРВЕНЦИЙ В ЦИРКАДНЫЕ ЧАСЫ DROSOPHILA MELANOGASTER

5.1 Молекулярные основы наблюдаемых горметических эффектов

5.2 Потребление пищи на фоне сверхэкспрессии cry

5.3 Экспрессия генов-регуляторов циркадных часов и масса тела - факторы

увеличения риска смертности

5.4 Эффекты и потенциал препаратов-хронобиотиков КЬ001 и ^15

5.5 Вероятные механизмы нивелирования геропротекторного действия рибофлавина

5.6 Компьютерный поиск мишеней КЬ001 и ^15 в клетках человека и других

организмов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ А Таблицы выживаемости и данные актиграфии

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Геропротекторный потенциал генетических, фармакологических и средовых интервенций в циркадный осциллятор Drosophila melanogaster»

Актуальность темы исследования

Старение - это сопряженный с повышением риска смерти мультифакториальный гетеротопный и гетерохронный стохастический процесс деконструкции гомеодинамических и гомеостатических механизмов, ассоциированный с накоплением повреждений на различных уровнях организации и утратой способности обнаруживать и репарировать эти повреждения из-за возрастных нарушений в работе сигнальных каскадов, обеспечивающих нормальное функционирование организма [28]. С появлением на планете живых организмов и началом биологической эволюции начался процесс усложнения механизмов старения биосистем [119]. Эволюционные теории возражают против существования генов, которые могли развиться специально для того, чтобы вызывать старение и определять максимальную продолжительность жизни организма, однако, известны гены, которые за счет увеличения адаптационного потенциала организма способны увеличивать продолжительность жизни и период жизни, для которого характерны здоровье и высокое её качество (ЬваиИ8рап, англ.). Современная биогеронтология располагает знаниями о ключевых механизмах старения, а наиболее успешные интервенции в организм в рамках этой дисциплины осуществляются на уровне генетического материала, так, в настоящий момент, уже известно более 2000 генов, связанных с продолжительностью жизни животных [167].

В течение всей истории человечество искало пути замедления и отмены старения и только в XXI веке инструменты персонализированной медицины, генной инженерии и передовой фармакологии позволили исследователям установить молекулярные механизмы, позволяющие повлиять на скорость старения и качество жизни. В связи с изменением в конце XX начале XXI века демографической структуры населения планеты и Российской Федерации, в

частности, массовое постарение населения принято называть образно «серебряное цунами» [138].

C появлением на планете живых организмов и началом биологической эволюции начался процесс усложнения механизмов старения биологических систем [119,183]. Сигнальные каскады, формирующие ответ организма на повреждающие воздействия окружающей среды, переплетались с генетической программой развития, усложнялись и множились. К настоящему времени можно утверждать, что абсолютно все механизмы устойчивости к стресс-факторам связаны с процессом старения [249, 251]. Исключением не является и система, противостоящая воздействию такого абиотического фактора, как оптическое излучение (видимый свет) [92]. Особенно актуальна проблема «светового загрязнения» для жителей Севера, которые вынужденно сталкиваются с «полярным днем» летом и непрерывно подвергаются облучению бытовыми/уличными источниками искусственного освещения во время полярной ночи, не получая при этом необходимых доз естественного солнечного света. В целом, феномен «светового загрязнения» [1,2,5] является одним из ключевых факторов риска развития рака [193] и других возраст-зависимых нозологий.

Прикладная биогеронтологическая актуальность темы исследования диктуется поиском и обоснованием перспективных молекулярных мишеней для профилактики и лечения модельных гериатрических патологий. В этом контексте важно, что изменения на темпоральном (хронобиологическом) уровне организации биосистем предваряют таковые на функциональном и структурном уровнях [198]. Фундаментальные аспекты актуальности темы связаны с пробелами в современном понимании молекулярных субстратов и механизмов

рецепции/передачи/процессинга фотосенсорной информации, например, негативное влияние синего света на процесс нейродегенерации [90], индуцированные светом изменения транскриптома [265, 266], регуляция продолжительности жизни через криптохром-ассоциированный путь [15]. Их места и роли в циркадианном осцилляторе, участвующем в реализации программы онтогенеза (с акцентом на инволюционный этап).

Очевидно, что субстраты и механизмы циркадианной системы, включающей первичным инициирующим звеном триггерно-каскадные сопряженные молекулярные машины фоторецепции и фототрансдукции, - эволюционно и физически переплетены с процессом старения [152, 265, 266]. В частности, как элементы систем стресс-ответа, появившихся на ранних этапах филогенеза, к примеру, фоторецептор криптохром имеет криптический фотолиазный домен [262], а циркадианные часы растений управляют устойчивостью к высоким температурам [18], циркадный осциллятор млекопитающих индуцирует NRF/глутатионовый механизм защиты от окислительных повреждений [24]. Поэтому одним из приоритетных подходов к продлению жизни модельных объектов признается генетическая манипуляция молекулярными часами клетки и организма, синхронизируемыми светом и другими стимулами, а также фармакологические интервенции в молекулярную машинерию циркадных часов, которые также способны повлиять на продолжительность жизни.

Организмы, пройдя естественный отбор, выработали приспособленность, детерминированную несколькими генетическими системами, которые рецептируют и трансдуцируют сигналы, поступающие с фотонами от различных источников [120]. В ответ на ежедневные изменения окружающей среды на планете организмы создали на базе репаративных инструментов специальную молекулярную систему, биологический хронометр, называемый циркадными часами [108, 220, 110]. Эти часы характеризуются стабильной периодичностью осцилляций. Периодичность, в первую очередь, синхронизируется с физическим ритмом вращения Земли, чтобы соответствовать 24-часовому внешнему циклу. Циркадная система наделена чрезвычайно сложными механизмами, обеспечивающими постоянство периода. К ним относятся регуляция генов с обратной связью на всех уровнях (от инициации транскрипции до деградации белка), генетическая избыточность (дупликация гена) и связывание внутриклеточных и сложных осцилляторов [102, 108, 110, 220]. Время организмом устанавливается по клеточным и внешним сигналам в целях приспособления к воздействию окружающей среды и (пато)физиологическим сигналам [102, 234].

Свет видимого спектра является доминирующим цайтгебером (источником времени, в переводе с немецкого) для фотосинтезирующих организмов и светочувствительных органов животных. В качестве цайтгеберов способны выступать прием пищи, физическая активность, температура и различные химические стимулы, однако ни один из них не способен компенсировать недостаточность компонентов молекулярных часов [189, 271]. Со времен выхода в печать основополагающих исследований по обнаружению периферических осцилляторов и новых цайтгеберов был описан широкий спектр внешних факторов и эндогенных метаболитов, способных перезапускать внутренние часы [118]. В естественной среде непрерывная и правильная работа осциллятора необходима для оптимального роста, избегания хищников и защиты от внешнесредовых вызовов, таких как окислительно-восстановительный потенциал и облучение, в том числе во время гибернации [203]. Исследования, проведенные на лабораторных животных и людях, обнаружили неблагоприятное влияния на здоровье и физическую форму, индуцированные эндогенно дезорганизованными физиологически циркадными системами или ослабленной ритмичностью, обусловленной генетическими нарушениями, либо воздействиями извне [27, 120, 197]. Суточное измерение времени в сфере разработки лекарств в основном ограничивается хронотерапевтическими подходами, а именно, оптимизацией расписания для установленных методов лечения для достижения максимального терапевтического эффекта [77,182]. По мере того, как знания об организации, регуляции и функции циркадных систем углубляются, исследователи все больше интересуются разработкой малых молекул, нацеленных непосредственно на циркадную систему [148]. Помимо смены часовых поясов, нарушение циркадных ритмов связано с различными хроническими заболеваниями и их лекарственной терапией, а также с возрастной инволюцией организма [241, 242].

В настоящей работе описаны биологические эффекты кондиционной и конститутивной экспрессии генов, кодирующих элементы циркадных часов, при различных режимах освещения, а также действие молекул-хронобиотиков KL001 и ^15, являющихся активатором и ингибитором флавопротеина криптохрома,

соответственно. Выбор мишени при планировании исследования и препаратов, связывающих криптохром был не случаен, т.к. деградация именно белка CRY у дрозофилы после рецепции кванта света обусловливает перезапуск центрального осциллятора [104]. Исследования разных лет указывают на связь экспрессии криптохрома в нервной системе дрозофил и продолжительности жизни [69, 232, 233]. Ранее была сформулирована и доказана гипотеза возрастной фоторезистентности [232], так с возрастом у дрозофилы снижается тотальная экспрессию гена cry [69, 233], что обуславливает потерю, выработанной эволюционно способности воспринимать электромагнитные волны видимого спектра в синем диапазоне и должным образом своевременно перезапускать циркадный осциллятор, участвующий в перестройке метаболизма сообразно времени суток (освещенности), перефразируя, организму недостает рецепторов света для формирования адаптивного ответа на оптическое излучение, что только ускоряет старение особи. В наших экспериментах удалось нивелировать возрастное снижение экспрессии cry генетическими методами, что позволило продлить жизнь дрозофил. Особенно выраженный эффект продления жизни наблюдался при экспозиции особей, сверхэкспрессирующих cry, оптическому излучению [15, 157].

Описанные данные легли в основу гипотезы о возможности фармакологической стабилизации криптохрома в целях продления жизни организма, т.е. использовании этого флавопротеина в качестве мишени противовозрастной фармакотерапии модельного объекта [232]. Исследования продолжительности жизни на данном этапе развития хроногеронтологии проводятся в основном на модельных организмах (пекарские дрожжи, нематода, плодовая муха, мышь и др.). Вмешательства в ключевые механизмы старения осуществляются на уровне генетического материала, так как выше уже упоминалось сущестование генов, связанных с продолжительностью жизни животных [167].

Этот подход сложно применить к людям по этическим причинам, поэтому в центре внимания современной гериатрии находятся геропротекторные препараты,

влияющие на различные механизмы старения и долголетия [167]. В эту группу также входят соединения, которые, как правило, представляют собой репозиционированные фармакологические агенты или вещества, разработанные de novo. Внедрение последних в практику - исключительно затратный финансово и трудоемкий процесс, в связи с чем есть особый интерес к снижению стоимости процедуры передачи фундаментальных знаний в клинику с использованием информационных технологий.

Одним из наиболее легко регистрируемых признаков старения является изменение субъективно оцениваемого качества сна, продолжительности периодов сна и бодрствования, амплитуды ритма двигательной активности, фазовых сдвигов, в совокупности эти явления называются возрастным десинхронозом.

В основном возрастной десинхроноз связан с поражением нервной системы, поэтому он является симптомом различных деменций, в том числе болезни Альцгеймера [218, 219].

Нарушения сна и бодрствования сами по себе могут вызывать множественные заболевания, поскольку до 40% генов, транскрибируемых в клетках человека и животных, подчинены циркадному осциллятору [218, 219].

Степень разработанности

В процессе эволюции сформировалось множество вариантов молекулярных хронометров в сочетании с рецепторными структурами, позволяющих синхронизировать биологические процессы разных уровней с фоторежимом [159]. Базовая схема главных циркадных часов клетки эукариот представляет собой совокупность петель обратной связи (транскрипционно-трансляционную машинерию), в которой входом для сигнала является молекула рецептора, включенная в димер или тример репрессора, который, в свою очередь, является блокатором комплексного транскрипционного фактора, индуцирующего экспрессию генов различных путей, ассоциированных с метаболизмом (CCg или clock-controlled genes, англ. - гены, контролируемые часами) [216]. Например,

репрессор циркадных часов млекопитающих, белок CRY1 , ингибирует локализованный в печени глюконеогенез, протеин PER2 контролирует метаболизм липидов, рецепторные молекулы семейства REV-ERB ограничивают скорость метаболизма жирных кислот и холестерина [216]. Нарушение экспрессии факторов CLOCK и BMAL1 ассоциированы с диабетом, состоянием гиперинсулинемии и ожирения [234]. Один из контроллеров циркадного ритма Nocturnin также на посттранскрипционном уровне модифицирует метаболизм липидов [78]. Мутации per0 и tim0 y самцов дрозофилы продлевают жизнь, вызывая связанный с UCP4C механизм рассогласования потенциала мембран и окислительного фосфорилирования, ингибирующий избыточную пролиферацию клеток кишечника [74]. Механизм [74] ранее не был известен и теперь позволяет обнаруживать не рассматривавшиеся прежде молекулярные мишени, полезные в качестве объектов для таргетного дизайна лекарств [74].

Группа используемых в фармакологии молекул-модификаторов циркадных ритмов представляет собой небольшой и не во всех отношениях изученный пул лекарств, что связано с их почти полным отсутствием на рынке [63, 135]. Мелатонин может быть признан наиболее изученным модулятором циркадных ритмов естественного происхождения, когда бензодиазепины, агонисты рецепторов орексина и небензодиазепиновые снотворные используются исключительно как гипнотики, которые лишь недавно стали изучать в других качествах [144]. Все эти препараты следует рассматривать как этиотропные из-за отсутствия в их списках мишеней элементов основных транскрипционно-трансляционных петель циркадного осциллятора.

Исследования разных лет указывают на связь экспрессии криптохрома в нервной системе дрозофил и продолжительности жизни [19, 106, 157, 233]. Ранее на основе работ [169, 202] была сформулирована и доказана гипотеза возрастной фоторезистентности [233]: с возрастом у дрозофилы снижается концентрация РНК гена cry, что ведет к утрате способности рецептировать синий свет и своевременно перезапускать циркадный осциллятор. В экспериментах удалось нивелировать возрастное снижение cry генетически, что позволило продлить жизнь дрозофил.

Особенно выраженный эффект продления жизни наблюдался при экспозиции особей, сверхэкспрессирующих cry [69], оптическому излучению, так появилась гипотеза о фармакологической стабилизации криптохрома хронобиотиками в целях продления жизни организма.

Грядущее поколение модуляторов циркадного ритма в качестве мишени будет иметь именно элементы молекулярных часов клетки; например, агонисты REV-ERB SR9009 и SR9011, которые показали высокую противораковую и сенолитическую активность [255]. Соединение KL001 было обнаружено, как активатор криптохрома в скрининговом исследовании модуляторов циркадного ритма [149], которые могут быть использованы в будущем в качестве лекарств. Активность малой молекулы KL001 была идентифицирована при анализе библиотеки, состоящей из более чем 60000 соединений. Эксперименты проводились на линиях клеток остеосаркомы человека U2OS, трансфицированных люциферазным репортером Bmal1-dLuc для выявления изменений периода колебаний светимости [149].

В более ранних исследованиях [180, 195] изучались именно циркадные и метаболические активности KL001 и KS15, мы решили изучить и альтернативные свойства этих молекул, углубить знания о возможных побочных эффектах и новых фармакологических активностях методами биоинформатики, в дополнение к традиционным демографическим методам оценки выживаемости модельных организмов.

Цель исследования

Изучить геропротекторный потенциал генетических (индукция генов в бинарной системе UAS-GAL4), средовых (различные фоторежимы, питательные среды) и фармакологических интервенций (препараты-хронобиотики) в циркадный осциллятор Drosophila melanogaster.

Задачи исследования

1. Оценить и сравнить параметры продолжительности жизни трансгенных линий Drosophila melanogaster, осуществляющих кондиционную сверхэкспрессию генов cry, per, tim, cyc и Clk в условиях различных режимов освещения.

2. Провести количественную оценку экспрессии генов-детерминант циркадных ритмов в организме дрозофилы.

3. Измерить и проанализировать периоды циркадного ритма двигательной активности дрозофил с индукцией его генетических детерминант в нервной системе.

4. Изучить механизмы влияния рибофлавина (предшественника ФАД, кофактора криптохрома) на геропротекторные эффекты конститутивной избыточной экспрессии криптохрома.

5. Исследовать геропротекторный и адаптогенный потенциал активатора криптохрома KL001 и ингибитора криптохрома KS15, оценив влияние хронобиотиков в эффективных дозах на параметры продолжительности жизни и циркадного ритма D. melanogaster, на способность увеличивать стрессоустойчивость плодовой мухи и способность образовывать комплексы с белками-мишенями дрозофилы и человека.

Научная новизна исследования

Установлено, что сочетание пан-нейрональной кондиционной эктопической экспрессии генов циркадных ритмов (cry, per, cyc, tim) и 12-часового цикла освещенности, способно увеличивать медианную продолжительность жизни Drosophila melanogaster на 4 - 10%. Сверхэкспрессия у самок генов cry и per увеличивает медианную продолжительность жизни дрозофилы как в условиях постоянной освещенности (у самок cry24/elav на 33.3%, per2.4/elav на 25%), так и в условиях световой депривации (нейрональная экспрессия конструкта per10 продлевает жизнь самцов, находящихся в условиях постоянной темноты на 35%, в то время как индукция cry24 увеличивает медианную продолжительность жизни

всего на 5%). В диссертационном исследовании впервые изучены эффекты компенсации недостаточности фотодеградирующего (в условиях непрерывного освещения) рибофлавина у особей, сверхэкспрессирующих ген cry пан-нейронально: рибофлавин выступает как ингибитор криптохрома и нивелирует криптохром-опосредованное продление жизни. Горметические эффекты веществ-хронобиотиков KL001 и KS15, являющихся лигандами флавопротеина криптохрома выражены в способности KL001 увеличивать медианную и максимальную продолжительность жизни самцов. В результате виртуального скрининга выявлены высокоаффинные к препаратам белки-мишени KL001 (GLUD1, NGF, rpoA, GPX3, ZPI, GPX5, RNASE1, CACNA1A, PROZ и repA) и KS15 (GLUD1, rpoA, NGF, ZPI, GPX3, GPX5, rpoC, DDR2, RNASE1, YES1).

Теоретическая и практическая значимость

В диссертации сформулирована и доказана экспериментально гипотеза о возрастной фоторезистентности, которая может быть использована в качестве базисной для множества новых биогеронтологических исследований на разных модельных объектах в силу высокого эволюционного консерватизма элементов циркадного осциллятора. Сформулированная гипотеза возрастной фоторезистентности может использоваться для прогнозирования горметических эффектов генетических и фармакологических вмешательств в систему поддержания циркадных ритмов колебания физиологических показателей у различных модельных организмов. Полученные данные о способности тканеспецифичной сверхэкспрессии отдельных генов-детерминант циркадных ритмов продлевать жизнь лягут в основу новых мультигенных биоинженерных подходов к продлению жизни модельных объектов посредством вмешательства в циркадный осциллятор. Установлена способность индукции генов циркадных ритмов компенсировать возрастные изменения ритмических колебаний локомоторной активности и увеличивать долю ритмичных особей в популяции, что следует рассматривать, как увеличение периода с высоким качеством жизни

(healthspan, англ.). Препарат KL001 (активатор криптохрома) в концентрации 5 мкмоль/мл описан как соединение способное увеличивать максимальную продолжительность жизни и локомоторную активность, а также повышать устойчивость особей к голоданию. Препарат KS15 (ингибитор криптохрома) в концентрации 10 мкмоль/мл увеличивает медианную продолжительность жизни плодовых мух Drosophila melanogaster, в рамках биогеронтологических исследований установленные горметически-эффективные дозы этих веществ могут быть исследованы на более сложных организмах.

Методология и методы исследования

Исследование проводилось в рамках эколого-генетического подхода с использованием классических методов биогеронтологии, которые основаны на подсчете демографических показателей для экспериментальной популяции животных, подвергавшихся воздействию абиотических и биотических факторов (перманентное освещение, фотодепривация, гипероксия, голодание, гипертермия). В экспериментах использовались линии: Canton- S, трансгенные потомки скрещиваний линий, несущих конструкты, активирующие кондиционно экспрессию в присутствии препарата RU486, мифепристона, y,w;UAS-cry12/TM2; y,w;UAS-cry24/CyO; w;UAS-per10; w;UAS-per2.4; w;P{UAS-CYC.HA}; y,w;P{tim-HA}; w;P{UAS-Clk.HA} и драйверная линия P {ELAV-GeneSwitch-GAL4}, активирующая экспрессию в нервной системе при скрещивании с носителями UAS-последовательностей и w[1118]; P{w[+mW.hs]=Switch1}106), драйвер специфичный для жирового тела. Экспрессию генов у трансгенных особей, несущих UAS-конструкты и транскрипционные факторы Gal4, изучали методом полимеразной цепной реакции с этапом обратной транскрипции по методикам, представленным в работе [69]. Затем оценивали выживаемость дрозофил в условиях сверхэкспрессии генов или добавления в питательную среду потенциальных геропротекторов по методикам, представленным в публикациях. Циркадные ритмы, а также паттерны сна и локомоторной активности оценивались

при помощи системы мониторинга двигательной активности дрозофил DAMSystem и программного комплекса Shiny R. Пищевое поведение оценивалось методом подсчета флюоресценции трейсера (флюоресцеина), употребляемого с пищей, в гомогенате абдоминальных частей дрозофил. Компьютерное моделирование взаимодействий молекул-лигандов (хронобиотиков) с мишенями проводили в специализированном программном комплексе AmDock. Статистический анализ полученных данных проводили при помощи программы Statistica 6 (ANOVA, непараметрические критерии: Гехана-Бреслоу-Вилкоксона, Ванг-Эллисона, Колмогорова-Смирнова и др.), Microsoft Excel, высокоуровневого языка программирования python на вычислительных мощностях рабочей станции (Процессор Intel Core i7, 12 CPU, 16GB ОЗУ).

Основные положения, выносимые на защиту

1) Уровень экспрессии генов циркадных ритмов (per, cry, cyc, Clk, tim) определяет способность адаптироваться к различным фоторежимам, что выражается в увеличении или снижении медианной продолжительности жизни особей различных трансгенных линий:

— в условиях непрерывной фотоэкспозиции (24 ч освещение) жизнь дрозофилы продлевает пан-нейрональная индукция генов tim, per и cry;

— в условиях тотальной фотодепривации ген per, индуцированный кондиционно и нейрон-специфично, увеличивает на 35% медианную продолжительность жизни самцов, наряду с cry;

— при культивировании дрозофил в условиях с равными промежутками экспозиции/депривации (12 ч - оптическое излучение /12 ч - темнота) обнаруживаются эффекты продления жизни у особей, дифференциально экспрессирующих гены cry, cyc и per в нейронах, медианная продолжительность жизни сокращается только в случае индукции Clk.

2) С возрастом в тотальном гомогенате имаго Drosophila melanogaster уменьшается концентрация РНК гена cry, что приводит к проявлению возрастной

фоторезистентности: недостаточность фоторецепторных молекул ведет к утрате с возрастом способности формировать адекватный ответ организма на оптическое излучение.

3) Доля ритмичных старых имаго в популяции с индуцированной кондиционно пан-нейрональной экспрессией гена фоторецептора cry значительно выше, чем в контрольной группе, что свидетельствует о вовлеченности белка CRY в патогенез модельного эндогенного возрастного десинхроноза, а также о его высоком потенциале фармакологической мишени в рамках интервенционального подхода в биогеронтологии.

4) Фармакологические лиганды криптохрома (хронобиотики KL001 и KS15, активатор и ингибитор CRY, соответственно) имеют геропротекторные/хронокорректорные и адаптогенные свойства, и обладают сродством к человеческим белкам, вовлеченным в процесс старения.

Степень достоверности и апробация результатов исследования

Репрезентативность выборок, наличие нескольких биологических повторностей, автоматизированные методы оценки двигательной активности и аффинности лигандов, признанные научным сообществом методики статистической обработки данных обусловливают достоверность полученных результатов.

Результаты исследования прошли апробацию на международных и всероссийских научных форумах:

1. Эффекты продления жизни, вызванные у особей Drosophila melanogaster нейрон-специфичной сверхактивацией генов-регуляторов циркадных ритмов в условиях постоянного освещения // И. А. Соловьев, Е. В. Добровольская, А. А. Москалев // Актуальные проблемы биологии и экологии: материалы докладов XXIV Всероссийской молодежной научной конференции (с элементами научной школы), посвященной 55-летию Института биологии Коми НЦ УрО РАН (Сыктывкар, 3-7 апр. 2017 г.). - Сыктывкар: ФИЦ Коми НЦ УрО РАН, 2017. - С.

152-154; 2. Эффекты продления жизни и восстановления суточных локомоторных ритмов, вызванные у особей Drosophila melanogaster пан-нейрональной сверхэкспрессией генов центрального осциллятора в условиях различных режимов освещения / И. А. Соловьев, Е. В. Добровольская, М. В. Шапошников, М.А. Шептяков, А.А. Москалев // Биологические и географические аспекты экологии человека: материалы докладов всероссийской заочной конференции (Сыктывкар, 1 мар. 2018 г.). - Сыктывкар: Издательский центр ФГБОУ ВО «СГУ им. Питирима Сорокина», 2018. - С. 131-135; 3. Эффекты продления жизни, вызванные у особей Drosophila melanogaster пан-нейрональной сверхэкспрессией генов-регуляторов циркадных ритмов в условиях различных режимов освещения / И. А. Соловьев, Е. В. Добровольская, М. В. Шапошников, А.А. Москалев // "Молодежь и наука на Севере": материалы докладов III Всероссийской моло-дежной научной конференции: (Сыктывкар, 12-16 марта 2018 г.). - Сыктывкар: ФИЦ Коми НЦ УрО РАН, 2018. - Т. 1. - С. 75-76; 4. Pan-neuronal conditional overexpression of circadian genes extends lifespan and improves rhythmicity in Drosophila melanogaster / I. A. Solovev, E. V. Dobrovolskaya, M. V. Shaposhnikov, А. Moskalev // Interventions to extend healthspan and lifespan: abstract book of international conference (Kazan, 23-26 April 2018). - Syktyvkar: IB KSC UrB RAS, 2018. - P. 89-90; 5. Влияние оптического излучения на продолжительность жизни особей Drosophila melanogaster, эктопически экспрессирующих гены циркадных ритмов / И. А. Соловьев, Е. В. Щеголева, М. В. Шапошников, А. А. Москалев // Актуальные проблемы биологии и экологии: материалы докладов XXVI Всероссийской молодежной научной конференции (с элементами научной школы), посвященной 75-летию А.И. Таскаева (Сыктывкар, 18-22 марта 2019 г.). - Сыктывкар: ИБ КНЦ УрО РАН, 2019. - С. 130-132; 6. Эктопическая кондиционная и повсеместная конститутивная экспрессия cry продлевают жизнь особей Drosophila melanogaster в условиях различных режимов освещения / И. А. Соловьев, Е. В. Щеголева, М. В. Шапошников, А. А. Москалев // VII Съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров, посвященный 100-летию кафедры генетики СПбГУ, и ассоциированные симпозиумы: сборник тезисов Международного Конгресса

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Соловьёв Илья Андреевич, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анисимов, В. Н. Эпифиз, биоритмы и старение организма / В. Н. Анисимов // Успехи физиологических наук. - 2008. - Т. 39, № 4. - С. 40-65.

2. Модифицирующее влияние постоянного освещения на организм крыс в зависимости от сроков начала воздействия / Т.А. Лотош, И.А. Виноградова, А. В. Букалев, В. Н. Анисимов // Фундаментальные исследования. - 2013. - № 5(2). - С. 308-313.

3. Москалев, А. А. Роль генов транскрипционного фактора dFOXO, dSIR2 и HSP70 в изменении продолжительности жизни Drosophila melanogaster при различных режимах освещения / А. А. Москалев, О. А. Малышева // Экологическая генетика. - 2010. - Т. 8, № 3.

4. Москалев, А. А. Роль светового режима в регуляции продолжительности жизни Drosophila melanogaster/ А.А. Москалев, О.А. Малышева // Экология. - 2009. - № 3. - С. 221-226.

5. Световой десинхроноз и риск злокачественных новообразований у человека: состояние проблемы / В. Н. Анисимов, И. А. Виноградова, А.В. Букалев и др. // Вопросы онкологии. - 2013. - Т. 59, № 3. - С. 302-313.

6. Световой режим, старение и рак / В.Н. Анисимов, И.А. Виноградова, М.Ф. Борисенков и др. // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. - 2012. - № 7. - С. 29.

7. Скулачев, М. В. Доказательство запрограммированности старения млекопитающих и перспективы биохимического подхода в борьбе со старостью / М. В. Скулачев, В. П. Скулачев //Биохимия. - 2017. - Т. 82. - № 12. - P. 1747-1770.

8. A circadian gene expression atlas in mammals: implications for biology and medicine / R. Zhang, Lahens N.F., Balance H.I. [et al.]//Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2014. - Vol. 111, № 45. - P. 16219-16224.

9. A comparison of the transcriptome of Drosophila melanogaster in response to entomopathogenic fungus, ionizing radiation, starvation and cold shock / A. Moskalev,

S. Zhikrivetskaya, G. Krasnov [et al.] // BMC genomics. - 2015. - Vol. 16, № 13. - P. 1-18.

10. A conditional tissue-specific transgene expression system using inducible GAL4 / T. Osterwalder, K. S. Yoon, B. H. White [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2001. - Vol. 98, № 22. - P. 12596-12601.

11. A database of tissue-specific rhythmically expressed human genes has potential applications in circadian medicine / M. D. Ruben, G. Wu, D. F. Smith, R. E. Schmidt, L. J. Francey, Y. Y. Lee, R. C. Anafi, J. B. Hogenesch //Science translational medicine. - 2018. - Vol. 98, № 458. - URL: https://www.science.org/doi/10.1126/scitranslmed.aat8806 (date of application 23.11.2021).

12. A high-fat diet and NAD+ activate Sirt1 to rescue premature aging in cockayne syndrome/ M. Scheibye-Knudsen, S. J. Mitchell, E. F. Fang [et al.] // Cell metabolism. - 2014. - Vol. 20, № 5. - P. 840-855.

13. A recessive mutant of Drosophila Clock reveals a role in circadian rhythm amplitude/ R. Allada, S. Kadener, N. Nandakumar [et al.] // The EMBO Journal. - 2003. - Vol. 22, № 13. - P. 3367-3375.

14. A role for Drosophila ATX2 in activation of PER translation and circadian behavior Y. Zhang, J. Ling, C. Yuan [et al.] // Science. - 2013. - Vol. 340, № 6134. - P. 879-882.

15. A role of cryptochrome for magnetic field-dependent improvement of sleep quality, lifespan and motor function in Drosophila / H. Kawasaki, H. Okano, H. Ishiwatari [et al.] // bioRxiv. - 2021. - URL: bioRxiv.https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2021.08.02.454845v1.full.pdf (date of application 23.11.2021).

16. A role of histone acetylation in the regulation of circadian rhythm in ants R. Libbrecht, D. Nadrau, L. Chang [et al.] // Iscience. - 2020. - Vol. 23, № 2. - P.100846.

17. A synthetic cryptochrome inhibitor induces anti-proliferative effects and increases chemosensitivity in human breast cancer cells / S. K. Chun, S. Chung, H.-D.

Kim [et al.]// Biochemical and biophysical research communications. - 2015. - Vol. 467, № 2. - P. 441-446.

18. A triple drug combination targeting components of the nutrient-sensing network maximizes longevity / J. I. Castillo-Quan, L. S. Tain, K. J. Kinghorn [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2019. - Vol. 116, №2 42. - P. 2081720819.

19. Abdollahzade, N. Melatonin: A pleiotropic hormone as a novel potent therapeutic candidate in arsenic toxicity / N. Abdollahzade, M. Majidinia, S. Babri // Molecular Biology Reports. - 2021. - P. 1-16. - URL: https://europepmc.org/article/med/34453671 (date of application 23.11.2021)

20. Absence of a serum melatonin rhythm under acutely extended darkness in the horse/ B. A. Murphy, A. M. Martin, P. Furney [et al.] // Journal of Circadian Rhythms. - 2011. - Vol. 9, № 1. - P. 1-8. - URL: https://jcircadianrhythms.biomedcentral.com/articles/10.1186/1740-3391-9-3 (date of application 23.11.2021)

21. ACID: a free tool for drug repurposing using consensus inverse docking strategy / F. Wang, F. X. Wu, C. Z. Li [et al.] // Journal of cheminformatics. - 2019. -Vol. 11, № 1. - P. 1-11.

22. Activation of the Drosophila NF-kB factor relish by rapid endoproteolytic cleavage/ S. Stoven, I. Ando, L. Kadalayil [et al.] // EMBO reports. - 2000. - Vol. 1, №№4. - C. 347-352.

23. Adaptation of circadian neuronal network to photoperiod in high-latitude european drosophilids / P. Menegazzi, E. Dalla Benetta, M. Beauchamp [et al.] // Current Biology. - 2017. - Vol. 27, № 6. - P. 833-839.

24. Adaptive thermogenesis in mice is enhanced by opsin 3-dependent adipocyte light sensing. / G. Nayak, K. X. Zhang, S. Vemaraju [et al.] // Cell reports. - 2020. - Vol. 30, № 3. - P. 672-686.

25. Aged stem cells reprogram their daily rhythmic functions to adapt to stress / G. Solanas, F. O. Peixoto, E. Perdiguero [et al.] // Cell. - 2017. - Vol. 170, № 4. - P. 678-692.

26. Agephagy - adapting autophagy for health during aging / E. R. Stead, J. I. Castillo-Quan, V. E. M. Miguel [et al.] //Frontiers in cell and developmental biology. -2019. - Vol. 7. - P. 308.

27. Aging alters circadian regulation of redox in Drosophila / V.I. Klichko, E.S. Chow, J. Kotwica-Rolinska [et al.] //Frontiers in genetics. - 2015. - Vol. 6. - P. 83.

28. Aging as a complex of typical pathophysiological processes / I. Solovev, M. Shaposhnikov, A. Moskalev // Medical News of North Caucasus. - 2019. - Vol. 14, № 1.2- P. 272-277.

29. Aging disrupts the circadian patterns of protein expression in the murine hippocampus / P. Adler, C.K. Chiang, J. Mayne [et al.]// Frontiers in aging neuroscience.

- 2020. - Vol. 11. - P. 368.

30. Aging reduces the stimulating effect of blue light on cognitive brain functions / V. Daneault, M. Hébert, G. Albouy [et al.] // Sleep. - 2014. - Vol. 37. - № 1.

- P. 85-96.

31. AlzPlatform: an Alzheimer's disease domain-specific chemogenomics knowledgebase for polypharmacology and target identification research / H. Liu, L. Wang, M. Lv [et al.] // Journal of chemical information and modeling. - 2014. - Vol. 54, № 4. - P. 1050-1060.

32. AMDock: a versatile graphical tool for assisting molecular docking with Autodock Vina and Autodock4 / M. S. Valdés-Tresanco, M. E. Valdés-Tresanco, P. A. Valiente [et al.] // Biology direct. - 2020. - Vol. 15, № 1. - P. 1-12.

33. An integrative analysis of the InR/PI3K/Akt network identifies the dynamic response to insulin signaling / A. Vinayagam, M. M. Kulkarni, R. Sopko [et al.] // Cell reports. - 2016. - Vol.16, № 11. - P. 3062-3074.

34. An isoform-selective modulator of cryptochrome 1 regulates circadian rhythms in mammals/ S. Miller, Y. Aikawa, A. Sugiyama [et al.] //Cell Chemical Biology.

- 2020. - Vol. 27, № 9. - P. 1192-1198.

35. Anti-tumorigenic activity of chrysin from Oroxylum indicum via non-genotoxic p53 activation through the ATM-Chk2 pathway / M. Nagasaka, R. Hashimoto, Y. Inoue [et al.] //Molecules. - 2018. - Vol. 23, № 6. - P. 1394.

36. Antoch, M. P. Pharmacological modulators of the circadian clock as potential therapeutic drugs: focus on genotoxic/anticancer therapy / M. P. Antoch, R. V. Kondratov // Circadian Clocks. Handbook of Experimental Pharmacology eds. Kramer A., Merrow M. - Berlin, Heidelberg: Springer, 2013. - P. 289-309.

37. Ashapkin, V. V. Epigenetic clock: just a convenient marker or an active driver of aging? / V. V. Ashapkin, L. I. Kutueva, B. F. Vanyushin // Reviews on Biomarker Studies in Aging and Anti-Aging Research. - 2019. - P. 175-206.

38. Ashburner, M. Drosophila: a laboratory handbook / M. Ashburner, K. G. Golic, R. S. Hawley // New York: Cold spring harbor laboratory press, 2004. - P.1409

39. Aspirin recapitulates features of caloric restriction / F. Pietrocola, F. Castoldi, M. Markaki [et al.] // Cell reports. - 2018. - Vol. 22, № 9. - P. 2395-2407.

40. AutoDock4 and AutoDockTools4: Automated docking with selective receptor flexibility / G. M. Morris, R. Huey, W. Lindstrom [et al.] // Journal of computational chemistry. - 2009. - Vol. 30, № 16. - P. 2785-2791.

41. Autophagy in aging and longevity/ S.Q. Wong, A.V. Kumar, J. Mills [et al.] // Human genetics. - 2020. - Vol. 139, № 3. - P. 277-290.

42. Autophagy in the aging and experimental ocular hypertensive mouse model / A. Nettesheim, A. Dixon, M. S. Shim [et al.] // Investigative Ophthalmology & Visual Science. - 2020. - Vol. 61, № 10. - P. 31-31.

43. Azithromycin and Roxithromycin define a new family of "senolytic" drugs that target senescent human fibroblasts / B. Ozsvari, J. R. Nuttall, F. Sotgia [et al.] //Aging (Albany NY). - 2018. - Vol. 10, № 11. - P. 3294.

44. Barcena, C. Mitohormesis, an antiaging paradigm / C. Barcena, P. Mayoral, P. M. Quiros // International review of cell and molecular biology. - 2018. - Vol. 340. -P. 35-77.

45. Basic mechanisms of longevity: A case study of Drosophila pro-longevity genes / E. N. Proshkina, M. V. Shaposhnikov, A. F. Sadritdinova [et al.] // Ageing research reviews. - 2015. - Vol. 24. - P. 218-231.

46. Benayoun, B. Epigenetic regulation of ageing: linking environmental inputs to genomic stability / B. A. Benayoun, E. A. Pollina, A. Brunet // Nature reviews Molecular cell biology. - 2015. - Vol. 16, № 10. - P. 593-610.

47. Bertrand, D. A review of the cholinergic system and therapeutic approaches to treat brain disorders / D. Bertrand, T. L. Wallace // Behavioral Pharmacology of the Cholinergic System. - 2020. - P. 1-28.

48. Biello, S. M. Alterations in glutamatergic signaling contribute to the decline of circadian photoentrainment in aged mice / S. M. Biello, D. R. Bonsall, L. A. Atkinson // Neurobiology of aging. - 2018. - Vol. 66. - P. 75-84.

49. Birch, J. Senescence and the SASP: many therapeutic avenues / J. Birch, J. Gil // Genes & Development. - 2020. - Vol. 34, № 23-24. - P. 1565-1576.

50. Bitencourt-Ferreira G. Docking with SwissDock/ G. Bitencourt-Ferreira, W.F. de Azevedo // Docking Screens for Drug Discovery. - Humana, New York, NY, 2019. - P. 189-202.

51. Björn L. O. Photobiology: The science of light and life / L. O. Björn // New York, Heidelberg, Dordrecht, London: Springer, 2015.

52. Blagosklonny, M. V. An anti-aging drug today: from senescence-promoting genes to anti-aging pill / M. V. Blagosklonny // Drug discovery today. - 2007. - Vol. 12, № 5-6. - P. 218-224.

53. Blagosklonny, M. V. From rapalogs to anti-aging formula / M. V. Blagosklonny // Oncotarget. - 2017. - Vol. 8, № 22. - P. 35492.

54. Blue-light induced accumulation of reactive oxygen species is a consequence of the Drosophila cryptochrome photocycle / L. D. Arthaut, N. Jourdan, A. Mteyrek [et al.] // PloS one. - 2017. - Vol. 12, № 3. - P. e0171836. - URL: https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0171836 (date of application 23.11.2021)

55. Bmal1-deficient mouse fibroblast cells do not provide premature cellular senescence in vitro / Y. Nakahata, S. Yasukawa, F.D. Khaidizar [et al.] // Chronobiology international. - 2018. - Vol. 35, № 5. - P. 730-738.

56. Booth L. N., Brunet A. The aging epigenome / L. N. Booth, A. Brunet // Molecular cell. - 2016. - Vol. 62, № 5. - P. 728-744.

57. Calorie restriction reprograms diurnal rhythms in protein translation to regulate metabolism / K. Makwana, N. Gosai, A. Poe [et al.] // The FASEB Journal. -2019. - Vol. 33, № 3. - P. 4473-4489.

58. Catabolic cytokines disrupt the circadian clock and the expression of clock-controlled genes in cartilage via an NFKB-dependent pathway / B. Guo, N. Yang, E. Borysiewicz [et al.] // Osteoarthritis and cartilage. - 2015. - Vol. 23, № 11. - P. 19811988.

59. Cell-permeable nanobodies for targeted immunolabelling and antigen manipulation in living cells / H. D. Herce, D. Schumacher, A. F. Schneider // Nature chemistry. - 2017. - Vol. 9, № 8. - P. 762-771.

60. Cellular senescence impairs circadian expression of clock genes in vitro and in vivo / T. Kunieda, T. Minamino, T. Katsuno [et al.] // Circulation research. - 2006. -Vol. 98, № 4. - P. 532-539.

61. Cellular senescence triggers altered circadian clocks with a prolonged period and delayed phases / R. Ahmed, Y. Nakahata, K. Shinohara [et al.] // Frontiers in Neuroscience. - 2021. - Vol. 15. - P. 1.

62. Chen, Z. Development and therapeutic potential of small-molecule modulators of circadian systems / Z. Chen, S. H. Yoo, J. S. Takahashi // Annual review of pharmacology and toxicology. - 2018. - Vol. 58. - P. 231-252.

63. Chen, Z. Small molecule modifiers of circadian clocks / Z. Chen, S. H. Yoo, J. S. Takahashi // Cellular and molecular life sciences. - 2013. - Vol. 70, № 16. - P. 2985-2998.

64. Chhunchha, B. Clock protein Bmal1 and Nrf2 cooperatively control aging or oxidative response and redox homeostasis by regulating rhythmic expression of Prdx6/ B. Chhunchha, E. Kubo, D. P. Singh // Cells. - 2020. - Vol. 9, № 8. - P. 1861.

65. Chronic mTOR inhibition by rapamycin induces muscle insulin resistance despite weight loss in rats / N. Deblon, L. Bourgoin, C. Veyrat-Durebex //British journal of pharmacology. - 2012. - Vol. 165, № 7. - P. 2325-2340.

66. Cichewicz K., Hirsh J. ShinyR-DAM: a program analyzing Drosophila activity, sleep and circadian rhythms / K. Cichewicz, J. Hirsh // Communications biology.

- 2018. - Vol. 1, № 1. - P. 1-5.

67. Circadian acetylome reveals regulation of mitochondrial metabolic pathways/ S. Masri, V. R. Patel, K. L. Eckel-Mahan [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2013. - Vol. 110, № 9. - P. 3339-3344.

68. Circadian changes in Drosophila motor terminals / K. I. Mehnert, A. Beramendi, F. Elghazali [et al.] // Developmental neurobiology. - 2007. - Vol. 67, № 4.

- P. 415-421.

69. Circadian clock genes' overexpression in Drosophila alters diet impact on lifespan / I. Solovev, E. Shegoleva, A. Fedintsev [et al.] //Biogerontology. - 2019. - Vol. 20, № 2. - P. 159-170.

70. Circadian clocks govern calorie restriction-mediated life span extension through BMAL1- and IGF-1-dependent mechanisms / S. A. Patel, A. Chaudhari, R. Gupta, FASEB J. //The FASEB Journal. - 2016. - Vol. 30, № 4. - P. 1634-1642.

71. Circadian clocks in antennal neurons are necessary and sufficient for olfaction rhythms in Drosophila / S. Tanoue, P. Krishnan, B. Krishnan [et al.] // Current Biology. - 2004. - Vol. 14, № 8. - P. 638-649.

72. Circadian clocks, diets and aging/ A. Chaudhari, R. Gupta, K. Makwana [et al.] // Nutrition and healthy aging. - 2017. - Vol. 4, № 2. - P. 101-112.

73. Circadian oscillations of cytosine modification in humans contribute to epigenetic variability, aging, and complex disease / G. Oh, K. Koncevicius, S. Ebrahimi [et al.] // Genome biology. - 2019. - Vol. 20, № 1. - P. 1-14.

74. Circadian regulation of mitochondrial uncoupling and lifespan/ M. Ulgherait, A. Chen, S. F. McAllister [et al.] // Nature communications. - 2020. - Vol. 11, № 1. - P. 1-16.

75. Circadian reprogramming in the liver identifies metabolic pathways of aging / S. Sato, G. Solanas, F. O. Peixoto [et al.] // Cell. - 2017. - Vol. 170, № 4. - P. 664-677.

76. Circadian rhythm disruption and mental health / W. H. Walker, J. C. Walton, A. C. DeVries [et al.] // Translational Psychiatry. - 2020. - Vol. 10, № 1. - P. 1-13.

77. Circadian rhythm in pharmacokinetics and its relevance to chronotherapy / D. Dong, D. Yang, L. Lin [et al.] // Biochemical Pharmacology. - 2020. - Vol. 178. - P. 114045.

78. Circadian rhythms and metabolism: from the brain to the gut and back again / M. R. Cribbet, R. W. Logan, M. D. Edwards [et al.] // Annals of the New York Academy of Sciences. - 2016. - V. 1385, № 1. - P. 21.

79. Circadian rhythms and obesity: Timekeeping governs lipid metabolism/ Y. Li, J. Ma, K. Yao [et al.]// Journal of Pineal Research. - 2020. - Vol. 69, № 3. - P.12682.

80. Circadian systems biology: When time matters / L. Fuhr, M. Abreu, P. Pett [et al.] // Computational and structural biotechnology journal. - 2015. - Vol. 13. - P. 417426.

81. CircadiOmics: circadian omic web portal / N. Ceglia, Y. Liu, S. Chen // Nucleic acids research. - 2018. - Vol. 46, № W1. - P. 157-162.

82. Closely related fruit fly species living at different latitudes diverge in their circadian clock anatomy and rhythmic behavior / M. Beauchamp, E. Bertolini, P. Deppisch [et al.] // Journal of biological rhythms. - 2018. - Vol. 33, № 6. - P. 602-613.

83. Codon usage affects the structure and function of the Drosophila circadian clock protein PERIOD/ J. Fu, K.A. Murphy, M. Zhou [et al] // Genes & development. -2016. - Vol. 30, № 15. - P. 1761-1775.

84. Core circadian protein CLOCK is a positive regulator of NF-KB-mediated transcription / M. L. Spengler, K. K. Kuropatwinski, M. Comas [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2012. - Vol. 109, № 37. - C. E2457-E2465.

85. Coupled oscillators control morning and evening locomotor behaviour of Drosophila / D. Stoleru, Y. Peng, J. Agosto [et al.] // Nature. - 2004. - Vol. 431, №№ 7010. - C. 862-868.

86. Coupling between the circadian clock and cell cycle oscillators: implication for healthy cells and malignant growth / C. Feillet, G.T. van der Horst, F. Levi [et al.] // Frontiers in neurology. - 2015. - Vol. 6. - P. 96.

87. CR reprograms acetyl-CoA metabolism and induces long-chain acyl-CoA dehydrogenase and CrAT expression / V. Mezhnina, R. Pearce, A. Poe [et al.] // Aging cell. - 2020. - Vol. 19, № 11. - P. 13266.

88. CRYPTOCHROME-mediated phototransduction by modulation of the potassium ion channel P-subunit redox sensor / K. J. Fogle, L. S. Baik, J. H. Houl [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2015. - Vol. 112, №2 7. - P. 22452250.

89. Cytosine modifications exhibit circadian oscillations that are involved in epigenetic diversity and aging / G. Oh, S. Ebrahimi, M. Carlucci [et al.] // Nature communications. - 2018. - Vol. 9, № 1. - P. 1-11.

90. Daily blue-light exposure shortens lifespan and causes brain neurodegeneration in Drosophila / T. R. Nash, E. S. Chow, A. D. Law [et al.] // npj Aging and Mechanisms of Disease. - 2019. - Vol. 5, № 1. - P. 1-8.

91. Daily variation in global and local DNA methylation in mouse livers / L. Xia, S. Ma, Y. Zhang [et al.] // PloS one. - 2015. - T. 10, № 2. - P. e0118101.

92. Dannerfjord, A. A. Light Input to the Mammalian Circadian Clock / A. A. Dannerfjord, L. A. Brown, R. G. Foster // Circadian Clocks. - New York: Humana, 2021. - P. 233-247

93. Deep networks with stochastic depth / G. Huang, Y. Sun, Z. Liu [et al.] // European conference on computer vision. - Cham: Springer, 2016. - P. 646-661.

94. DeLano, W. L. Pymol: An open-source molecular graphics tool/ W. L. DeLano // CCP4 Newsletter on protein crystallography. - 2002. - Vol. 40, № 1. - C. 8292.

95. Deletion of glutamate dehydrogenase 1 (Glud1) in the central nervous system affects glutamate handling without altering synaptic transmission / F. Frigerio, M. Karaca, M. De Roo [et al.] // Journal of neurochemistry. - 2012. - Vol. 123, № 3. - P. 342-348.

96. Determination of highly sensitive biological cell model systems to screen BPA-related health hazards using Pathway Studio / D.Y. Ryu, M.S. Rahman, M.G. and

Pang [et al.] // International journal of molecular sciences. - 2017. - Vol. 18, № 9. - P. 1909.

97. Development of microRNA-145 for therapeutic application in breast cancer / S. J. Kim, J.S. Oh, J.Y. Shin [et al.] // Journal of controlled release. - 2011. - Vol. 155, № 3. - P. 427-434.

98. Development of Non-Ethoxypropanoic Acid Type Cryptochrome Inhibitors with Circadian Molecular Clock-Enhancing Activity by Bioisosteric Replacement / Y.U. Jeong, H.E. Jin, H.Y. Lim [et al.] // Pharmaceuticals. - 2021. - Vol. 14, № 6. - P. 496.

99. Dibner, C. Circadian timing of metabolism in animal models and humans / C. Dibner, U. Schibler // Journal of internal medicine. - 2015. - Vol. 277, № 5. - P. 513527.

100. Dietary grape seed proanthocyanidins inactivate regulatory T cells by promoting NER-dependent DNA repair in dendritic cells in UVB-exposed skin / M. Vaid, R. Prasad, T. // Oncotarget. - 2017. - Vol. 8, №30. - P. 49625.

101. Dim artificial light at night affects mating, reproductive output, and reactive oxygen species in Drosophila melanogaster/ L.K. McLay, V. Nagarajan-Radha, M.P. Green [et al.] // Journal of Experimental Zoology Part A: Ecological and Integrative Physiology. - 2018. - Vol. 329, № 8-9. - P. 419-428.

102. Disruption of light-induced c-Fos immunoreactivity in the suprachiasmatic nuclei of chronic epileptic rats / E. R. Sanabria, F. A. Scorza, Z. A. Bortolotto [et al.] // Neuroscience letters. - 1996. - Vol. 216, № 2. - P. 105-108.

103. DNA damage shifts circadian clock time via Hausp-dependent Cry1 stabilization / S. J. Papp, A. L. Huber, S. D. Jordan // Elife. - 2015. - Vol. 4. - P. e04883.

104. Drosophila clock and light-regulated cryptochrome, is a major contributor to circadian rhythm resetting and photosensitivity / P. Emery, W.V. So, M. Kaneko [et al.] // Cell. - 1998. - Vol. 95, № 5. - P. 669-679.

105. Drosophila clock cells use multiple mechanisms to transmit time-of-day signals in the brain / A. F. Barber, S. Y. Fong, A. Kolesnik [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2021. - Vol. 118, № 10. https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2019826118

106. Drosophila melanogaster as a model for studying the epigenetic basis of aging / I. Solovev, M. Shaposhnikov, A. Kudryavtseva [et al.] // Epigenetics of Aging and Longevity. - Academic Press, 2018. - P. 293-307.

107. Drug repositioning: a brief overview/ J.P. Jourdan, R. Bureau, C. Rochais // Journal of Pharmacy and Pharmacology. - 2020. - Vol. 72, № 9. - P. 1145-1151.

108. Dvornyk, V. Origin and evolution of circadian clock genes in prokaryotes / V. Dvornyk, O. Vinogradova, E. Nevo // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2003. - Vol. 100, № 5. - P. 2495-2500.

109. Dyar, K. A. Circadian metabolomics in time and space / K. A. Dyar, K. L. Eckel-Mahan // Frontiers in neuroscience. - 2017. - Vol. 11. - P. 369.

110. Early evolution of the land plant circadian clock / A. M. Linde, D. M. Eklund, A. Kubota [et al.] // New Phytologist. - 2017. - Vol. 216, № 2. - C. 576-590.

111. Effects of physical exercise on human circadian rhythms / Y. Yamanaka, K.I. Honma, S. Hashimoto [et al.] // Sleep and Biological Rhythms. - 2006. - Vol. 4, № 3. - P. 199-206.

112. Enoxacin extends lifespan of C. elegans by inhibiting miR-34-5p and promoting mitohormesis / S. Pinto, V. N. Sato, E. A. De-Souza [et al.] // Redox biology. - 2018. - Vol. 18. - P. 84-92.

113. Epigenetic effects of metformin: from molecular mechanisms to clinical implications/ S. C. Bridgeman, G. C. Ellison, P. E. Melton [et al.] // Diabetes, Obesity and Metabolism. - 2018. - Vol. 20, № 7. - P. 1553-1562.

114. Epigenetic Regulation of Circadian Clocks and Its Involvement in Drug Addiction / L. Saad, J. Zwiller, A. Kalsbeek [et al.] // Genes. - 2021. - Vol. 12. - № 8. -P. 1263.

115. esyN: network building, sharing and publishing / D.M. Bean, J. L. Ficorella, G. Micklem [et al.] // PloS one. - 2014. - Vol. 9, № 9. - P. e106035.

116. Evans L. W., Stratton M. S., Ferguson B. S. Dietary natural products as epigenetic modifiers in aging-associated inflammation and disease // Natural product reports. - 2020. - Vol. 37, № 5. - P. 653-676.

117. Fedintsev, A. Stochastic non-enzymatic modification of long-lived macromolecules-A missing hallmark of aging / A. Fedintsev, A. Moskalev // Ageing Research Reviews. - 2020. - Vol. 62. - P. 101097.

118. Feeding cycle-dependent circulating insulin fluctuation is not a dominant Zeitgeber for mouse peripheral clocks except in the liver: Differences between endogenous and exogenous insulin effects / K. Oishi, Y. Yasumoto, S. Higo-Yamamoto [et al.] // Biochemical and biophysical research communications. - 2017. - T. 483, № 1. - C. 165-170.

119. Flatt, T. Horizons in the evolution of aging / T. Flatt, L. Partridge // BMC biology. - 2018. - Vol. 16, № 1. - P. 1-13.

120. Fritz, G. Heterogeneous Timing of Gene Induction as a Regulation Strategy / G. Fritz, N. Walker, U. Gerland // Journal of molecular biology. - 2019. - Vol. 431, № 23. - P. 4760-4774.

121. Gadecka, A. Slowing down ageing: the role of nutrients and microbiota in modulation of the epigenome / A. Gadecka, A. Bielak-Zmijewska // Nutrients. - 2019. -Vol. 11, № 6. - P. 1251.

122. Genetics and epigenetics of aging and longevity / A. A. Moskalev, A. M. Aliper, Z. Smit-McBride [et al.] // Cell Cycle. - 2014. - Vol. 13, № 7. - P. 1063-1077.

123. Geroneuroprotectors: effective geroprotectors for the brain / D. Schubert, A. Currais, J. Goldberg // Trends in pharmacological sciences. - 2018. - Vol. 39, №2 12. - P. 1004-1007.

124. Geroprotectors. org: a new, structured and curated database of current therapeutic interventions in aging and age-related disease/ A. Moskalev, E. Chernyagina, J. P. de Magalhaes [et al.] //Aging (Albany NY). - 2015. - Vol. 7, № 9. - P. 616.

125. Geroprotectors: a unified concept and screening approaches / A. Moskalev, E. Chernyagina, A. Kudryavtseva [et al.] // Aging and disease. - 2017. - Vol. 8, № 3. -P. 354.

126. Giebultowicz, J. M. Functions of biological clocks in insect physiology and reproduction: Practical aspects / J. M. Giebultowicz, P. Bebas // Pestycydy. - 2005. - № 4. - P. 77-90.

127. Giebultowicz, J. M. The circadian system and aging of Drosophila / J. M. Giebultowicz // Circadian Rhythms and Their Impact on Aging. - Cham: Springer, 2017.

- P. 129-145.

128. Giebultowicz, J. M. Aging and circadian rhythms / J. M. Giebultowicz, D. M. Long // Current opinion in insect science. - 2015. - Vol. 7, - P. 82-86.

129. Grosdidier, A. SwissDock, a protein-small molecule docking web service based on EADock DSS / A. Grosdidier, V. Zoete, O. Michielin // Nucleic acids research.

- 2011. - Vol. 39, № suppl_2. - P. W270-W277.

130. Hardeland, R. Melatonin and inflammation - Story of a double-edged blade / R. Hardeland // Journal of pineal research. - 2018. - Vol. 65, № 4. - P. e12525.

131. Hardie, R. C. Phototransduction in Drosophila / R. C. Hardie, M. Juusola // Current opinion in neurobiology. - 2015. - Vol. 34. - P. 37-45.

132. Hardin, P. E. Circadian timekeeping and output mechanisms in animals / P. E. Hardin, S. Panda // Current opinion in neurobiology. - 2013. - Vol. 23, № 5. - P. 724731.

133. Hardin, P. E. Circadian transcription: passing the HAT to CLOCK/ P. E. Hardin, W. Yu // Cell. - 2006. - Vol. 125, № 3. - P. 424-426.

134. Harmonics of circadian gene transcription in mammals/ M. E. Hughes, L. DiTacchio, K. R. Hayes [et al.] // PLoS genetics. - 2009. - Vol. 5, № 4. - P. e1000442.

135. He, B. Molecular targets for small-molecule modulators of circadian clocks/ B. He, Z. Chen // Current drug metabolism. - 2016. - Vol. 17, № 5. - P. 503-512.

136. Helfrich-Forster, C. Light input pathways to the circadian clock of insects with an emphasis on the fruit fly Drosophila melanogaster/ C. Helfrich-Forster // Journal of Comparative Physiology A. - 2020. - Vol. 206, № 2. - P. 259-272.

137. Helfrich-Forster C. Flies as models for circadian clock adaptation to environmental challenges / C. Helfrich-Forster, E. Bertolini, P. Menegazzi // European Journal of Neuroscience. - 2020. - Vol. 51, № 1. - P. 166-181.

138. Henderson, L. The silver tsunami: evaluating the impact of population aging in the US / L. Henderson, B. Maniam, H. Leavell //Journal of Business and Behavioral Sciences. - 2017. - Vol. 29, № 2. - P. 153-169.

139. High carbohydrate-low protein consumption maximizes Drosophila lifespan / K. D. Bruce, S. Hoxha, G. B. Carvalho [et al.] //Experimental gerontology. -2013. - Vol. 48, № 10. - P. 1129-1135.

140. Hofbauer, A. Does Drosophila have seven eyes? / A. Hofbauer, E. Buchner // Naturwissenschaftten. - 1989. - Vol. 76, № 7. - P. 335-336.

141. Hofman, M. A. The human circadian clock and aging / M. A. Hofman // Chronobiology international. - 2000. - Vol. 17, № 3. - P. 245-259.

142. Horvath, S. DNA methylation age of human tissues and cell types / S. Horvath // Genome biology. - 2013. - Vol. 14, № 10. - P. 1-20.

143. Houston, D. K. Effect of dietary protein intake on bone mineral density and fracture incidence in older adults in the Health, Aging, and Body Composition study / D. K. Houston, A. A. Weaver, J. A. Tooze // The Journals of Gerontology: Series A. - 2021.

- Vol. 76, № 12. - P. 2213-2222.

144. Hoyer, D. Hypnotics with novel modes of action/ D. Hoyer, A. Allen, L. H. Jacobson // British journal of clinical pharmacology. - 2020. - Vol. 86, № 2. - P. 244249.

145. Huang, X. Drug synergy drives conserved pathways to increase fission yeast lifespan / X. Huang, M. Leggas, R. C. Dickson // PloS one. - 2015. - Vol. 10, № 3. - P. E0121877.

146. Hut, R. A. Nonphotic entrainment in a diurnal mammal, the European ground squirrel (Spermophilus citellus) / R. A. Hut, N. Mrosovsky, S. Daan //Journal of Biological Rhythms. - 1999. - Vol. 14, № 5. - P. 409-420.

147. Hyperinsulinemia: the missing link among oxidative stress and age-related diseases? / F. S. Facchini, N. W. Hua, G. M. Reaven [et al.] // Free Radical Biology and Medicine. - 2000. - Vol. 29, № 12. - P. 1302-1306.

148. Identification of circadian clock modulators from existing drugs / T.K. Tamai, Y. Nakane, W. Ota [et al.] // EMBO molecular medicine. - 2018. - Vol. 10, № 5.

- P. e8724.

149. Identification of small molecule activators of cryptochrome/ T. Hirota, J. W. Lee, P. C. S. John [et al] // Science. - 2012. - Vol. 337, № 6098. - P. 1094-1097.

150. Identification of the molecular dysfunction caused by glutamate dehydrogenase S445L mutation responsible for hyperinsulinism/hyperammonemia. M. Grimaldi, M. Karaca, L. Latini [et al.] // Human molecular genetics. - 2017. - Vol. 26, № 18. - P. 3453-3465.

151. Impact of circadian disruption on glucose metabolism: implications for type 2 diabetes / I. C. Mason, J. Qian, G. K Adler [et al.] // Diabetologia. - 2020. - Vol. 63, № 3. - P. 462-472.

152. Importance of circadian timing for aging and longevity / V. A. Acosta-Rodriguez, F. Rijo-Ferreira, C. B. Green [et al.] // Nature communications. - 2021. - Vol. 12, № 1. - P. 1-12.

153. Ito, C. Heterogeneity of the peripheral circadian systems in Drosophila melanogaster: a review / C. Ito, K. Tomioka // Frontiers in physiology. - 2016. - Vol. 7. - P. 8.

154. Kang, C. Senolytics and senostatics: a two-pronged approach to target cellular senescence for delaying aging and age-related diseases/ C. Kang // Molecules and cells. - 2019. - Vol. 42, № 12. - P. 821.

155. Karpac, J. Misregulation of an adaptive metabolic response contributes to the age-related disruption of lipid homeostasis in Drosophila / J. Karpac, B. Biteau, H. Jasper // Cell reports. - 2013. - Vol. 4, № 6. - P. 1250-1261.

156. Katz, B. The Drosophila light-activated TRP and TRPL channels-Targets of the phosphoinositide signaling cascade / B. Katz, B. Minke // Progress in retinal and eye research. - 2018. - Vol. 66. - P. 200-219.

157. Key Molecular Mechanisms of Aging, Biomarkers, and Potential Interventions / E. N. Proshkina, I. A. Solovev, M. V. Shaposhnikov A.A. [et al.] // Molecular Biology. - 2020. - Vol. 54, № 6. - P. 777-811.

158. Kumar, S. Dopamine acts through Cryptochrome to promote acute arousal in Drosophila / S. Kumar, D. Chen, A. Sehgal // Genes & development. - 2012. - Vol. 26, № 11. - P. 1224-1234.

159. Kumar, V. Common features of circadian timekeeping in diverse organisms / V. Kumar, A. Sharma // Current Opinion in Physiology. - 2018. - T. 5. - P. 58-67.

160. Lakshmi, P. Review about bioinformatics, databases, sequence alignment, docking, and drug discovery / P. Lakshmi, D. Ramyachitra // Statistical Modelling and Machine Learning Principles for Bioinformatics Techniques, Tools, and Applications. -Singapore: Springer, 2020. - P. 11-23.

161. Lehrer, S. Blindness increases life span of male rats: pineal effect on longevity/ S. Lehrer // Journal of chronic diseases. - 1981. - Vol. 34, №2 8. - P. 427-429.

162. Lethal effects of short-wavelength visible light on insects / M. Hori, K. Shibuya, M. Sato [et al.] // Scientific reports. - 2014. - Vol. 4, № 1. - P. 1-6.

163. Li, S. Circadian control of global transcription / S. Li, L. Zhang // BioMed research international. - 2015. - Vol. 2015. - URL: https://doi.org/10.1155/2015/187809 (access 25.11.2021).

164. Lim, C. ATAXIN-2 activates PERIOD translation to sustain circadian rhythms in Drosophila / C. Lim, R. Allada //Science. - 2013. - Vol. 340, № 6134. - P. 875-879.

165. Long, D. Age-related changes in the expression of the circadian clock protein PERIOD in Drosophila glial cells / D. M. Long, J. M. Giebultowicz // Frontiers in physiology. - 2018. - Vol. 8. - P. 1131.

166. Longdaysin inhibits Wnt/p-catenin signaling and exhibits antitumor activity against breast cancer / Y. Xiong, L. Zhou, Z. Su, [et al.] // OncoTargets and therapy. -2019. - Vol. 12. - P. 993.

167. Longevity: lesson from model organisms / G. Taormina, F. Ferrante, S. Vieni [et al.] // Genes. - 2019. - Vol. 10, № 7. - P. 518.

168. Loss of circadian clock function decreases reproductive fitness in males of Drosophila melanogaster / L. M. Beaver, B. O. Gvakharia, T. S. Vollintine [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2002. - Vol. 99, № 4. - P. 21342139.

169. Loss of circadian clock accelerates aging in neurodegeneration-prone mutants / N. Krishnan, K. Rakshit, E.S. Chow [et al.] // Neurobiology of disease. - 2012. - Vol. 45, № 3. - P. 1129-1135.

170. Loss of circadian protein TIMELESS accelerates the progression of cellular senescence / X. Shen, M. Li, Z. Mao, W. Yu //Biochemical and biophysical research communications. - 2018. - T. 503, № 4. - P. 2784-2791.

171. Machine learning for predicting lifespan-extending chemical compounds / D.G. Medina-Franco, D. Newby, D. Thornton //Aging (Albany NY). - 2017. - Vol. 9, № 7. - P. 1721.

172. Majidinia, M. Polyphenols: Major regulators of key components of DNA damage response in cancer / M. Majidinia, A. Bishayee, B. Yousefi //DNA repair. - 2019. - Vol. 82. - P. 102679.

173. Martínez Hernández, E. Age-related differences in songbird migration performance in autumn / E. Martínez Hernández // Degree Projects in Biology (Lund University). - 2020. - URL: https://lup.lub.lu.se/student-papers/search/publication/9022096 (date of application 26.11.2021)

174. Martínez, P. Telomere-driven diseases and telomere-targeting therapies/ P. Martínez, M. A. Blasco // Journal of Cell Biology. - 2017. - Vol. 216, № 4. - C. 875887.

175. McLay, L. K. Chronic exposure to dim artificial light at night decreases fecundity and adult survival in Drosophila melanogaster / L. K. McLay, M. P. Green, T. M. Jones // Journal of Insect Physiology. - 2017. - Vol. 100. - P. 15-20.

176. Melatonin as antioxidant, geroprotector and anticarcinogen / V. N. Anisimov, I. G. Popovich, M. A. Zabezhinski [et al.] // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics. - 2006. - Vol.1757, № 5-6. - P. 573-589.

177. Membrane ion channels and receptors in animal lifespan modulation / Y. Sheng, L. Tang, L. Kang [et al.] // Journal of cellular physiology. - 2017. - Vol. 232, № 11. - P. 2946-2956.

178. Metformin-mediated increase in DICER1 regulates microRNA expression and cellular senescence / N. Noren Hooten, A. Martin-Montalvo, D.F. Dluzen [et al.] //Aging cell. - 2016. - Vol. 15, № 3. - P. 572-581.

179. MicroRNA-188 regulates aging-associated metabolic phenotype / Y. Huang, Y. Xiao, Y. Liu [et al.] // Aging cell. - 2020. - Vol. 19, № 1. - P. e13077.

180. Miller, S. Pharmacological interventions to circadian clocks and their molecular bases / S. Miller, T. Hirota // Journal of molecular biology. - 2020. - Vol. 432, № 12. - P. 3498-3514.

181. Mitophagy and oxidative stress in cancer and aging: focus on sirtuins and nanomaterials / E. Vernucci, C. Tomino, F. Tomino [et al.] //Oxidative medicine and cellular longevity. - 2019. - Vol. 2019. - URL: https://doi.org/10.1155/2019/6387357 (date of application 26.11.2021)

182. Mody, T. Interaction between the circadian clock and regulators of heat stress responses in plants / T. Mody, T. Bonnot, D. H. Nagel // Genes. - 2020. - Vol. 11, № 2. - P. 156.

183. Molecular aspects of circadian pharmacology and relevance for cancer chronotherapy / N. Ozturk, D. Ozturk, I.H. Kavakli [et al.] // International journal of molecular sciences. - 2017. - Vol. 18, № 10. - P. 2168. - URL: https://www.mdpi.com/1422-0067/18/10/2168 (date of application 26.11.2021)

184. Moskalev, A. A. Evolutionary ideas on the nature of aging / A. A. Moskalev // Advances in Gerontology. - 2011. - Vol. 1, № 2. - P. 112-121.

185. Moskalev, A. A., Shaposhnikov M. V., Solovev I. A. Studying the geroprotective effects of inhibitors suppressing aging-associated signaling cascades in model organisms/ A. A. Moskalev, M. V. Shaposhnikov, I. A. Solovev // Medical news of north Caucasus. - 2017. - Vol. 12, № 3. - P. 342-347.

186. Musiek, E. S. Circadian clock disruption in neurodegenerative diseases: cause and effect? / E. S. Musiek //Frontiers in pharmacology. - 2015. - Vol. 6. - P. 29.

187. Nangle, S. Crystal structure of mammalian cryptochrome in complex with a small molecule competitor of its ubiquitin ligase / S. Nangle, W. Xing, N. Zheng // Cell research. - 2013. - Vol. 23, № 12. - P. 1417-1419.

188. Nanobody: outstanding features for diagnostic and therapeutic applications / J. P. Salvador, L. Vilaplana, M. P. Marco //Analytical and bioanalytical chemistry. -2019. - Vol. 411, № 9. - P. 1703-1713.

189. Natural Zeitgebers Under Temperate Conditions Cannot Compensate for the Loss of a Functional Circadian Clock in Timing of a Vital Behavior in Drosophila / F.

Ruf, O. Mitesser, S.T. Mungwa [et al.] // Journal of biological rhythms. - 2021. - Vol. 36, № 3. - P. 271-285.

190. Nerve growth factor pathobiology during the progression of Alzheimer's disease / E. J. Mufson, S. E. Counts, S. D. Ginsberg // Frontiers in neuroscience. - 2019. - Vol. 13. - P. 533.

191. Neuronal Glud1 (glutamate dehydrogenase 1) over-expressing mice: increased glutamate formation and synaptic release, loss of synaptic activity, and adaptive changes in genomic expression/ E. K. Michaelis, X. Wang, R. Pal [et al.] //Neurochemistry international. - 2011. - Vol. 59, № 4. - P. 473-481.

192. Neuropsin (OPN5) mediates local light-dependent induction of circadian clock genes and circadian photoentrainment in exposed murine skin / E. D. Buhr, S. Vemaraju, N. Diaz [et al.] // Current Biology. - 2019. - Vol. 29, № 20. - P. 3478-3487

193. Night-shift work and risk of breast cancer: a systematic review and metaanalysis / B.B. Kamdar, A.I. Tergas, F.J. Mateen [et al.] //Breast cancer research and treatment. - 2013. - Vol. 138, № 1. - P. 291-301.

194. OASIS 2: online application for survival analysis 2 with features for the analysis of maximal lifespan and healthspan in aging research / S. K. Han, D. Lee, H. Lee [et al.] // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7, № 35. - P. 56147.

195. Oncogenic and circadian effects of small molecules directly and indirectly targeting the core circadian clock / H. H. Lin, K. L. Robertson, H. A. Bisbee [et al.] // Integrative cancer therapies. - 2020. - Vol. 19. - P. 1534735420924094.

196. Open Babel: An open chemical toolbox / N. M. O'Boyle, M. Banck, C.A. James [et al.] //Journal of cheminformatics. - 2011. - Vol. 3, № 1. - P. 1-14.

197. Ostrovsky, M. A. Rhodopsin: Evolution and comparative physiology / M. A. Ostrovsky // Paleontological Journal. - 2017. - Vol. 51, № 5. - P. 562-572.

198. Osum, M. Impact of circadian disruption on health; SIRT1 and Telomeres / M. Osum, N. Serakinci // DNA repair. - 2020. - P. 102993.

199. P {Switch}, a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster / G. Roman, K. Endo, L. Zong [et al.] // Proceedings of the national academy of sciences. - 2001. - Vol. 98, № 22. - P. 12602-12607.

200. Pagano, M. Principles of biostatistics / M. Pagano, K. Gauvreau // Boca Raton: CRC Press, 2018.

201. Pasyukova, E. G. HDAC inhibitors: A new promising drug class in anti-aging research/ E. G. Pasyukova, A. M. Vaiserman // Mechanisms of ageing and development. - 2017. - Vol. 166. - P. 6-15.

202. Peripheral circadian clocks mediate dietary restriction-dependent changes in lifespan and fat metabolism in Drosophila / S. D. Katewa, K. Akagi, N. Bose [et al.] // Cell metabolism. - 2016. - Vol. 23, № 1. - P. 143-154.

203. Persistence of circadian rhythmicity in hibernating ground squirrels / D. A. Grahn, J. D. Miller, V. S. Houng [et al.] // American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. - 1994. - Vol. 266, № 4. - P. R1251-R1258.

204. Phototransduction in Drosophila is compromised by Gal4 expression but not by InsP3 Receptor knockdown or mutation / M. K. Bollepalli, M. E. Kuipers, C. H. Liu [et al.] // Eneuro. - 2017. - Vol. 4, № 3. - URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5483600/ (date of application 26.11.2021)

205. Plachetzki, D. C. The evolution of phototransduction from an ancestral cyclic nucleotide gated pathway / D. C. Plachetzki, C. R. Fong, T. H. Oakley // Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. - 2010. - Vol. 277. - № 1690. - P. 1963-1969.

206. Plasma protein patterns as comprehensive indicators of health / Williams S. A., Kivimaki M., Langenberg C. [et al.] // Nature medicine. - 2019. - Vol. 25, № 12. -P. 1851-1857.

207. PlayMolecule BindScope: large scale CNN-based virtual screening on the web / M. Skalic, G. Martinez-Rosell, J. Jiménez [et al.] // Bioinformatics. - 2019. - Vol. 35, № 7. - P. 1237-1238.

208. Predictive in silico off-target profiling in drug discovery / F. Schmidt, H. Matter, G. Hessler [et al.] // Future medicinal chemistry. - 2014. - Vol. 6, № 3. - P. 295317.

209. Premature aging of the hippocampal neurogenic niche in adult Bmall-deficient mice / A. A. Ali, B. Schwarz-Herzke, A. Stahr [et al.] // Aging (Albany NY). -2015. - Vol. 7, № 6. - P. 435.

210. Proshkina, E. Genome-protecting compounds as potential geroprotectors / E. Proshkina, M. Shaposhnikov, A. Moskalev // International Journal of Molecular Sciences.

- 2020. - Vol. 21, № 12. - P. 4484.

211. Proteins Plus: interactive analysis of protein-ligand binding interfaces / K. Schöning-Stierand, K. Diedrich, R. Fährrolfes [et al.] // Nucleic acids research. - 2020. -Vol. 48, № 1. - P. W48-W53.

212. RCSB Protein Data Bank: Enabling biomedical research and drug discovery / D. S. Goodsell, C. Zardecki, L. Di Costanzo // Protein Science. - 2020. - Vol. 29, № 1.

- P. 52-65.

213. Reconfiguration of a multi-oscillator network by light in the Drosophila circadian clock / A. Chatterjee, A. Lamaze, J. De [et al.] // Current Biology. - 2018. -Vol. 28, № 13. - P. 2007-2017.

214. Reconfiguration of DNA methylation in aging / M. Zampieri, F. Ciccarone, R. Calabrese [et al.] // Mechanisms of ageing and development. - 2015. - Vol. 151. - P. 60-70.

215. Reducing signs of aging and increasing lifespan by drug synergy / X. Huang, J. Liu, B. R. Withers [et al.] // Aging Cell. - 2013. - T. 12, № 4. - P. 652-660.

216. Reinke, H. Crosstalk between metabolism and circadian clocks / H. Reinke, G. Asher // Nature Reviews Molecular Cell Biology. - 2019. - Vol. 20, № 4. - P. 227241.

217. Ren, D. Circadian gene period1b regulates proinflammatory cytokine expression through NF-kB signalling in zebrafish / D. Ren, X. Wang, B. Hu // Fish & shellfish immunology. - 2018. - Vol. 80. - P. 528-533.

218. Ribeiro, R. F. N. Small-molecule modulators of the circadian clock: pharmacological potentials in circadian-related diseases / R. F. N. Ribeiro, C. Cavadas, M. M. C. Silva // Drug Discovery Today. - 2021. - Vol. 26, № 7 - P.1620-1641.

219. Rijo-Ferreira, F. Genomics of circadian rhythms in health and disease / F. Rijo-Ferreira, J. S. Takahashi // Genome medicine. - 2019. - Vol. 11, № 1. - P. 1-16.

220. Role of rhodopsins as circadian photoreceptors in the Drosophila melanogaster / P.R. Senthilan, R. Grebler, N. Reinhard [et al.] // Biology. - 2019. - Vol. 8, № 1. - P. 6.

221. Salichos, L. The diversity and evolution of circadian clock proteins in fungi / L. Salichos, A. Rokas // Mycologia. - 2010. - Vol. 102, № 2. - P. 269-278.

222. Schellhammer, I. TrixX: structure-based molecule indexing for large-scale virtual screening in sublinear time / I. Schellhammer, M. Rarey // Journal of computer-aided molecular design. - 2007. - Vol. 21, № 5. - P. 223-238.

223. Selective anticancer agents suppress aging in Drosophila / A. Danilov, M. Shaposhnikov, E. Plyusnina [et al.] // Oncotarget. - 2013. - Vol. 4, № 9. - P. 1507.

224. Shifting from the single to the multitarget paradigm in drug discovery / J. L. Medina-Franco, M. A. Giulianotti, G. S. Welmaker [et al.] // Drug discovery today. -2013. - Vol. 18, № 9-10. - P. 495-501.

225. Short-term exposure to dim light at night disrupts rhythmic behaviors and causes neurodegeneration in fly models of tauopathy and Alzheimer's disease / M. Kim, M. Subramanian, Y. H. Cho [et al.] // Biochemical and biophysical research communications. - 2018. - Vol. 495, № 2. - P. 1722-1729.

226. Shostal, O. The genetic mechanisms of the influence of the light regime on the lifespan of Drosophila melanogaster / O. Shostal, A. Moskalev // Frontiers in genetics. - 2013. - Vol. 3. - P. 325.

227. Silvestre, D. Healthy aging impairs photon absorption efficiency of cones / D. Silvestre, A. Arleo, R. Allard // Investigative ophthalmology & visual science. - 2019. - Vol. 60, № 2. - P. 544-551.

228. Sirtuin activators and inhibitors: promises, achievements, and challenges / H. Dai, D.A. Sinclair, J.L. Ellis [et al.] // Pharmacology & therapeutics. - 2018. - Vol. 188. - P. 140-154.

229. Sleep loss can cause death through accumulation of reactive oxygen species in the gut / A. Vaccaro, Y.K. Dor, K. Nambara [et al.] // Cell. - 2020. - Vol. 181, № 6. -P. 1307-1328.

230. Slowing ageing using drug synergy in C. elegans / T. Dessale, K. C. Batchu, D. Barardo [et al.] // bioRxiv. - 2017. - URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/153205v1.full.pdf (date of application 26.11.2021)

231. Small molecule activation of apurinic/apyrimidinic endonuclease 1 reduces DNA damage induced by cisplatin in cultured sensory neurons / M. M. Georgiadis, Q. Chen, J. Meng [et al.] // DNA repair. - 2016. - Vol. 41. - P. 32-41.

232. Solovev, I. A. Chronobiotics KL001 and KS15 extend lifespan and modify circadian rhythms of Drosophila melanogaster / I. A. Solovev, M. V. Shaposhnikov, A.

A. Moskalev // Clocks & sleep. - 2021. - Vol. 3, № 3. - P. 429-441.

233. Solovev, I. A. Genetic mechanisms of the influence of light and phototransduction on Drosophila melanogaster lifespan / I. A. Solovev, M. V. Shaposhnikov, A. A. Moskalev // VAVILOVSKII ZHURNAL GENETIKI I SELEKTSII. - 2018. - Vol. 22, № 7. - P. 878-886.

234. Solovyov, I. A. Genetic control of circadian rhythms and aging / I. A. Solovyov, E. V. Dobrovol'skaya, A. A. Moskalev // Russian journal of genetics. - 2016. - Vol. 52, № 4. - P. 343-361.

235. Song, B. M. Toward a mechanistic understanding of color vision in insects/

B. M. Song, C. H. Lee // Frontiers in neural circuits. - 2018. - Vol. 12. - P. 16.

236. Speed and sensitivity of phototransduction in Drosophila depend on degree of saturation of membrane phospholipids. Randall, A.S., Liu, C.H., Chu, B., Zhang, Q., Dongre, S.A., Juusola, M., Franze, K., Wakelam, M.J. and Hardie, R.C., 2015. Speed and sensitivity of phototransduction in Drosophila depend on degree of saturation of membrane phospholipids. // Journal of Neuroscience. - 2015. - Vol. 35, № 6. - P. 27312746.

237. STRING v11: protein-protein association networks with increased coverage, supporting functional discovery in genome-wide experimental datasets. D.

Szklarczyk, A.L. Gable, D. Lyon, //Nucleic acids research. - 2019. - Vol. 47, №№ D1. - P. D607-D613.

238. Swafford, A. J. M. Origins, Evolution, and Integration of GPCR Photosensitivity / A. J. M. Swafford // Santa Barbara: University of California, 2019.

239. Systems biology-based approaches to summarize and identify novel genes and pathways associated with acute and chronic postsurgical pain / V. Chidambaran, M. Ashton, L.J. Martin [et al.] // Journal of clinical anesthesia. - 2020. - Vol. 62. - P. 109738.

240. Tabibzadeh, S. CircadiOmic medicine and aging / S. Tabibzadeh // Ageing Research Reviews. - 2021. - P. 101424.

241. Taylor, R. C. Aging and the UPR (ER)/ R. C. Taylor //Brain research. -2016. - Vol. 1648. - P. 588-593.

242. The aging clock: circadian rhythms and later life / S. Hood, S. Amir, A. He [et al.] // The Journal of clinical investigation. - 2017. - Vol. 127, № 2. - P. 437-446.

243. The characterization of the circadian clock in the olive fly Bactrocera oleae (Diptera: Tephritidae) reveals a Drosophila-like organization / E. Bertolini, C. Kistenpfennig, P. Menegazzi [et al.] // Scientific reports. - 2018. - Vol. 8, № 1. - P. 112.

244. The circadian clock regulates rhythmic activation of the NRF2/glutathione-mediated antioxidant defense pathway to modulate pulmonary fibrosis / V. Pekovic-Vaughan, J. Gibbs, H. Yoshitane [et al.] // Genes & development. - 2014. - Vol. 28, № 6. - P. 548-560.

245. The daily rhythms of mitochondrial gene expression and oxidative stress regulation are altered by aging in the mouse liver / C. Gong, C. Li, X. Qi [et al.] // Chronobiology international. - 2015. - Vol. 32, № 9. - P. 1254-1263.

246. The DrugAge database of aging-related drugs / D. Barardo, D. Thornton, H. Thoppil [et al.] // Aging cell. - 2017. - Vol. 16, № 3. - P. 594-597.

247. The effects of high-protein diets on kidney health and longevity / G. J. Ko, C. M. Rhee, K. Kalantar-Zadeh [et al.] // Journal of the American Society of Nephrology. - 2020. - Vol. 31, № 8. - P.1667-1679.

248. The hallmarks of aging / C. Lopez-Otin, M. A. Blasco, L. Partridge // Cell.

- 2013. - Vol. 153, № 6. - P. 1194-1217.

249. The novel gene twenty-four defines a critical translational step in the Drosophila clock / C. Lim, J. Lee, C. Choi [et al.] // Nature. - 2011. - Vol. 470, № 7334.

- P. 399-403.

250. The photolyase/cryptochrome family of proteins as DNA repair enzymes and transcriptional repressors / I.H. Kavakli, I. Baris, M. Tardu [et al.] // Photochemistry and photobiology. - 2017. - Vol. 93, № 1. - P. 93-103.

251. The Resistance of Drosophila melanogaster to Oxidative, Genotoxic, Proteotoxic, Osmotic Stress, Infection, and Starvation Depends on Age According to the Stress Factor / A.A. Belyi, A.A. Alekseev, A.Y. Fedintsev [et al.] // Antioxidants. - 2020.

- Vol. 9, № 12. - P. 1239.

252. The road ahead for health and lifespan interventions / M. Gonzalez-Freire, A. Diaz-Ruiz, D. Hauser [et al.] // Ageing research reviews. - 2020. - Vol. 59. - P. 101037.

253. Tissue-based map of the human proteome / M. Uhlen, L. Fagerberg, B. M. Hallstrom [et al.] // Science. - 2015. - Vol. 347, № 6220. - URL: https://www.science.org/doi/10.! 126/science.1260419 (date of application 26.11.2021).

254. Top, D. Coordination between differentially regulated circadian clocks generates rhythmic behavior / D. Top, M. W. Young // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2018. - Vol. 10, № 7. - P. 033589.

255. Training the circadian clock, clocking the drugs, and drugging the clock to prevent, manage, and treat chronic diseases / G. Sulli, E. N. Manoogian, P. R. Taub [et al.] // Trends in pharmacological sciences. - 2018. - Vol. 39, № 9. - P. 812-827.

256. Transient delivery of modified mRNA encoding TERT rapidly extends telomeres in human cells / J. Ramunas, E. Yakubov, J. J. Brady [et al.] // Trends in pharmacological sciences. - 2018. - Vol. 39, № 9. - P. 812-827.

257. Trott, O. AutoDock Vina: improving the speed and accuracy of docking with a new scoring function, efficient optimization, and multithreading / O. Trott, A. J. Olson // Journal of computational chemistry. - 2010. - Vol. 31, № 2. - P. 455-461.

258. TRP channels: a missing bond in the entrainment mechanism of peripheral clocks throughout evolution / M. O. Poletini, M. N. Moraes, B. C. Ramos [et al.] // Temperature. - 2015. - Vol. 2. - № 4. - P. 522-534.

259. TRPV1 pain receptors regulate longevity and metabolism by neuropeptide signaling / C. E. Riera, M. O. Huising, P. Follett // Cell. - 2014. - Vol. 157, № 5. - P. 1023-1036.

260. Urolithin A induces mitophagy and prolongs lifespan in C. elegans and increases muscle function in rodents / D. Ryu, L. Mouchiroud, P. A. Andreux [et al.] // Nature medicine. - 2016. - Vol. 22. - № 8. - P. 879-888.

261. Vaiserman, A. M. Anti-aging pharmacology: promises and pitfalls / A. M. Vaiserman, V. Lushchak //Ageing research reviews. - 2016. - Vol. 31. - P. 9-35.

262. Vechtomova, Y. L. Evolution of proteins of the DNA photolyase/cryptochrome family / Vechtomova Y. L., Telegina T. A., Kritsky M. S. // Biochemistry (Moscow). - 2020. - Vol. 85, № 1. - P. 131-153.

263. Vitamin D/vitamin D receptor axis regulates DNA repair during oncogene-induced senescence / S. Graziano, R. Johnston, O. Deng [et al.] // Oncogene. - 2016. -Vol. 35, № 41. - P. 5362-5376.

264. Watson, J. J. Targeting nerve growth factor in pain / J. J. Watson, S. J. Allen, D. D. Dawbarn // BioDrugs. - 2008. - Vol. 22, № 6. - P. 349-359.

265. Weake, V. Age-related transcription changes in photoreceptor neurons are light-dependent / V. Weake // Investigative Ophthalmology & Visual Science. - 2017. -Vol. 58, № 8. - P. 3560-3560.

266. Weake, V. M. Aging photoreceptors: light, stress and transcription / V. M. Weake // The FASEB Journal. - 2018. - Vol. 32. - P. 256.1-256.1.

267. When rhythms meet the blues: circadian interactions with the microbiota-gut-brain axis / E. M. Teichman, K. J. O'Riordan, C. G. Gahan // Cell metabolism. -2020. - Vol.31, № 3. - P. 448-471.

268. Wiltschko, R. Magnetoreception in birds / R. Wiltschko, W. Wiltschko // Journal of the Royal Society Interface. - 2019. - Vol. 16, № 158. - P. 20190295.

269. Wolff, T. Pattern formation in the Drosophila retina / T. Wolff //The development of Drosophila melanogaster. - 1993. - P.1277-1325.

270. Xiao, R. Thermosensation and longevity / R. Xiao, J. Liu, X. Z. S. Xu // Journal of Comparative Physiology A. - 2015. - Vol. 201, № 9. - P. 857-867.

271. Zeitgebers and their association with rest-activity patterns / M. Quante, S. Mariani, J. Weng [et al.] // Chronobiology international. - 2019. - Vol. 36, № 2. - P. 203-213.

272. Zheng, Q. Mitochondria, telomeres and telomerase subunits / Q. Zheng, J. Huang, G. Wang // Frontiers in cell and developmental biology. - 2019. - Vol. 7. - P. 274.

273. Zhou, Y. Blockade of alcohol excessive and "relapse" drinking in male mice by pharmacological cryptochrome (CRY) activation / Y. Zhou, M. J. Kreek // Psychopharmacology. - 2021. - Vol. 238, № 4. - P. 1099-1109.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

ацил-КоА - ацил-коэнзим А БПФ - быстрые преобразования Фурье ДМСО - Диметилсульфоксид (DMSO) ПЖ - продолжительность жизни ФАД - флавинадениндинуклеотид ANOVA - дисперсионный анализ

CR - calorie restriction, англ., ограничение рациона по калорийности CCg - гены, контролируемые часами dCRY - криптохром дрозофилы (белок)

DD - суточный цикл освещенности c 24 ч фазой без освещения

EDTA - Этилендиаминтетрауксусная кислота (растворитель)

FDR - уровень ложного обнаружения (False Discovery Rate, англ.)

KL001 - N - [3-(9H-Carbazol-9-yl)-2-hydroxypropyl] - N - (2-furanylmethyl)-methanesulfonamide

KS15 - (R,E)-3-(3-(1-(((4-Bromobenzyl)oxy)imino)ethyl)phenyl)-2-ethoxypropanoic acid

LD - суточный цикл освещенности (12 часов световой фазы и 12 часов темновой) LL - суточный цикл перманентного освещения (24 ч фотоэкспозиции) NRF - nuclear respiratory factor, англ., ядерный респираторный фактор

ПРИЛОЖЕНИЕ А

Таблицы выживаемости и данные актиграфии

Таблица А. 1 - Параметры продолжительности жизни самцов, кондиционно эктопически

экспрессрующих гены циркадных ритмов в нервной системе при фоторежиме 12/12 LD

Линии Мт Mean±SEM Median 90% Мах п

иЛ8 - огу 12/БЬЛУ(-) 1 41,4±0,9 46 61 73 407

иЛ8 - огу12/БЬЛУ (+) 3 43,5±0,7 46 60 74 479

иЛ8 - С1к/ЕЬАУ (-) 1 46,8±0,9 49 70 81 439

иЛ8 - ак/ЕЬАУ (+) 1 46,3±0,7 46 69* 78 531

ЬЛ8 - огу24/БЬЛУ (-) 1 52,1±0,8 56 71 92 507

ЬЛ8-огу24/БЬЛУ (+) 3 53,1±0,7 57 70 87 557

ЬЛ8 - рег10/БЬЛУ (-) 3 56,7±0,7 58 72 85 569

ЬЛ8 - рег10/БЬЛУ (+)* 2 57±0,7 60 74 85 568

ЬЛ8 - рег2.4/БЬЛУ (-) 2 45±0,7 51 61 76 601

ЬЛ8-рег2.4/БЬЛУ (+) **** 2 44,7±0,8 53* 61 74 553

ЬЛ8 - оуо/БЬЛУ (-) 1 50,3±0,7 55 67 75 552

ЬЛ8 - оуо/БЬЛУ (+) **** 2 52,2±0,7 57*** 70*** 90 577

ЬЛ8 - йш/БЬЛУ (-) 1 45±0,8 50 65 75 495

ЬЛ8 - йш/БЬЛУ (+) **** 1 46,2±0,8 50** 64** 73 512

Примечание - МЯЛТ - время удвоения смертности; а и Я - параметры уравнения Гомперца; N -общее количество протестированных мух. *р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001, ****р<0,0001 (первый столбец - критерий Колмогорова-Смирнова, четвертый - критерий Гехана-Бреслоу-Вилкоксона, пятый - критерий Ванг- Эллисона, (-) - контроль без сверхэкспрессии, (+) - сверхэкспрессия.

Таблица А. 2 - Параметры продолжительности жизни самок, кондиционно эктопически экспрессирующих гены циркадных ритмов в нервной системе при фоторежиме 12/12 LD

Линии Min Mean±SEM Median 90% Max n

UAS - cry 12/ELAV(-) 6 47,7±0,7 50 64 80 453

UAS - cry12/ELAV(+)**** 1 49,8±0,7 55** 66 82 524

UAS - clk/ELAV(-) 1 60,4±0,9 68 81 90 517

UAS - clk/ELAV(+)**** 1 58,4±0,8 61** 80 96 564

UAS - cry24/ELAV(-) 2 59,2±0,6 59 75 87 536

UAS-cry24/ELAV(+) 1 58,6±0,6 60 75 92 564

UAS -per10/ELAV(-) 4 68,3±0,8 73 85 94 551

UAS-per10/ELAV(+)**** 5 71,3±0,8 77**** 89*** 98 599

UAS -per2.4/ELAV(-) 2 56,4±0,8 61 74 89 530

UAS-per2.4/ELAV(+) 3 58±0,7 62 77 94 644

UAS - cyc/ELAV(-) 3 65,5±0,8 70,5 83 91 562

UAS - cyc/ELAV(+) 3 66,8±0,7 70 83 90 562

UAS - tim/ELAV(-) 1 53,7±0,7 55 70 81 410

UAS - tim/ELAV(+)**** 1 57,3±0,8 60,5**** 73*** 83 408

Примечание - Median - медианная продолжительность жизни (сут); mean - среднее ± SEM средняя продолжительность жизни и ошибка среднего (сут); 90% - время, когда 90% популяции мертво или максимальная продолжительность жизни (дни); min и max- минимальная и максимальная зарегистрированная продолжительность жизни (сут); N - общее количество протестированных мух. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001, ****p<0,0001 (первый столбец - критерий Колмогорова-Смирнова, четвертый - критерий Гехана-Бреслоу-Вилкоксона, пятый - критерий Ванг. -Тест Эллисона, (-) - контроль без сверхэкспрессии, (+) - сверхэкспрессия.

Таблица А. 3 - Параметры продолжительности жизни самцов, сверхэкспрессирующих гены циркадных ритмов в нервной системе при перманентном освещении

Самцы LL Min Mean±SE M 90% Max MRDT n

UAS-cry12/ELAV(-) 14 56,3±0,9 59 69 78 5,99 160

UAS-cry12/ELAV(+) 12 54,2±0,8 57* 67* 71 6,07 212

UAS-clk/ELAV(-) 5 55,9±1,1 60 67 75 6,17 131

UAS-clk/ELAV(+)* 5 54,2±1,2 57 69* 87 8,16 152

UAS-cry24/ELAV(-) 9 55±1,5 52 78 83 10,95 119

UAS-cry24/ELAV(+)*** 5 58,7±1,5 57 77 83 9,53 120

UAS-per10/ELAV(-) 7 59±0,9 62 71 74 5,84 204

UAS-per10/ELAV(+) 8 57±1,2 62 71 81 7,7 173

UAS -per2.4/ELAV(-) 3 47,9±0,9 50 58 70 5,97 181

UASper2.4/ELAV(+)**** 9 52,7±1,1 50 70*** 76 7,92 134

UAS - cyc/ELAV(-) 7 48,2±1 49 63 75 7,92 169

UAS-cyc/ELAV(+)* 1 50,9±1,1 54,5** 64 77 7,17 188

UAS-tim/ELAV(-) 14 56,3±1,1 62 71 78 8,06 173

UAS-tim/ELAV(+)** 5 58,8±1,3 64 75 87 7,83 158

Примечание - Median - медианная продолжительность жизни (сут); mean - Среднее ± SEM - средняя продолжительность жизни и ошибка среднего (сут); 90% - время, когда 90% популяции мертво или максимальная продолжительность жизни (сут); min и max- минимальная и максимальная зарегистрированная продолжительность жизни (сут); MRDT - время удвоения смертности; N - общее количество протестированных мух. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001, ****p<0,0001 (первый столбец - критерий Колмогорова-Смирнова, четвертый - критерий Гехана-Бреслоу-Вилкоксона, пятый - тест Ванг-Эллисона, (-) - контроль без сверхэкспрессии, (+) -сверхэкспрессия.

Таблица А. 4 - Параметры продолжительности жизни самок, сверхэкспрессирующих гены циркадных ритмов в нервной системе при перманентном освещении

Самки ЬЬ Мт Mean±SEM М 90% Мах п

иЛ8-сгу12/ЕЬЛУ(-) 14 64±1,1 69 76 92 165

иЛ8-сту12/ЕЬЛУ(+)** 9 66,9±1,1 69 85*** 97 209

иЛ8-с1к/ЕЬЛУ(-) 16 64,7±1,5 70 85 92 142

иЛ8 -с1к/ЕЬЛУ(+) 4 64,1±1,5 69 81 90 141

иЛ8-сгу24/ЕЬЛУ(-) 5 48,7±1,5 51 73 82 145

иЛ8-сту24/ЕЬЛУ(+)*** 6 64,9±1,2 68*** 81*** 83 144

иЛ8-рет10/ЕЬЛУ(-) 16 76,3±0,9 78 90 92 204

иЛ8-рег10/ЕЬЛУ(+)*** 8 79,2±1,2 83** 90 97 160

иЛ8-рег2.4/ЕЬЛУ(-) 3 50,5±1,5 52 76 83 168

Ш8-рег2.4/ЕЫУ(+)*** 1 58,5±1,5 65* 75 82 153

иЛ8-сус/ЕЬЛУ(-) 23 64,7±1,1 67 81 95 159

иЛ8-сус/ЕЬЛУ(+) 23 65,9±1,2 69 85* 91 163

иЛ8-Иш/ЕЬЛУ(-) 17 59,8±1 64 73 85 143

иЛ8-Иш/ЕЬЛУ(+) *** 8 64,3±1,1 68** 85*** 97 233

Примечание - *р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001, ****р<0,0001 (первый столбец - критерий Колмогорова-Смирнова, четвертый - критерий Гехана-Бреслоу-Вилкоксона, пятый - тест Ванг-Эллисона, (-) - контроль без сверхэкспрессии, (+) - сверхэкспрессия.

Таблица А. 5 - Параметры продолжительности жизни самцов, сверхэкспрессирующих гены циркадных ритмов в нервной системе

Самцы М 90% МЯБТ п

иА8-сту12/ЕЬАУ(-) 50 62 5,7 159

иА8-сту12/ЕЬАУ(+) 55 65 6,6 175

иА8-с1к/ЕЬАУ(-) 53 65 7,1 141

иА8 -с1к/ЕЬАУ(+) 52 66 6,3 132

иА8-сгу24/ЕЬАУ(-) 41 47 6,2 157

иА8-сгу24/ЕЬАУ(+)** 43* 53 6,1 151

иА8-рет10/ЕЬАУ(-) 48 66 9,4 145

иА8-рег10/ЕЬАУ(+)** 64** 67* 5,3 149

иА8-рег2.4/ЕЬАУ(-) 44 52 4,2 145

иА8-рет2.4/ЕЬАУ(+) 46 55 5,1 146

иА8-сус/ЕЬАУ(-) 44 55 6,4 177

иА8-сус/ЕЬАУ(+) 48 55 5,5 156

иА8-Иш/ЕЬАУ(-) 42 52 6,7 124

иА8-Иш/ЕЬАУ(+) 45 52 4,9 149

Примечание - М - медианная продолжительность жизни (сут); 90% - время, когда 90% популяции мертво или максимальная продолжительность жизни (сут); N - общее количество протестированных мух. * - р<0,001, ** - р< 0,0001 первый столбец согласно критерию Колмогорова-Смирнова, второй столбец согласно критерию Гехана-Бреслоу-Вилкоксона, третий столбец согласно критерию Ванг-Эллисона.

Таблица А. 6 - Параметры продолжительности жизни самок, сверхэкспрессирующих гены циркадных ритмов в нервной системе

Самки DD М 90% МЯБТ п

иА8-сту12/Е1АУ(-) 55 67 6.5 190

иА8-сту12/Е1АУ(+) 55 62 5.7 195

иА8-с1к/ЕЬАУ(-) 57 72 7.5 157

иА8 -с1к/ЕЬАУ(+)** 55** 69** 10 153

иА8-сту24/ЕЬАУ(-) 58 68 6.5 192

иА8-сту24/ЕЬАУ(+) * 54* 68 7.2 170