Гелеобразующие композиции на основе хитозана и производных нуклеотидов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.17.06, кандидат химических наук Азарова, Анна Игоревна

• Азарова, Анна Игоревна
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Азарова, Анна Игоревна

Содержание

стр.

ВВЕДЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Закономерности получения и свойства полимерных материалов на основе гидрогелей ковалентно-сшитого хитозана

1.1. Изучение взаимодействия хитозана с альдегидами и дженипином в гелеобразующих растворах

1.2. Свойства гидрогелей хитозана, полученных ковалентной сшивкой с использованием альдегидов и дженипина

1.3. Использование бифункциональных реагентов для получения на основе хитозана полимерных материалов различной физической формы

1.4. Медико-биологические, сорбционные и каталитические свойства полимерных материалов на основе хитозана, модифицированного сшивающими реагентами

2. ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. Закономерности получения и свойства гидрогелей на основе растворов хитозана и альдегидных производных нуклеотидов и нуклеозидов

2.1. Влияние рН на вязкостные свойства и стабильность растворов хитозана

2.2. Установление особенностей гелеобразования в растворах хитозана в присутствии окисленных нуклеотидов и нуклеозидов по сравнению с глутаровым альдегидом

2.3. Изучение механизма взаимодействия хитозана с окисленными нуклеотидами

2.3.1. Исследование стабильности диальдегидных производных оИМР и

оАМР в водных растворах

2.3.2 Исследование процесса взаимодействия диальдегидных производных oUMP и оАМР с хитозаном

2.3.3 Изучение стабильности гидрогелей хитозана, сшитого диальдегидными производными Urd и AMP

2.4. Разработка полимерных материалов на основе функционализованных гидрогелей хитозана и исследование их свойств

2.4.1 Изучение иммобилизации ферментов на гидрогелевых пленках на основе хитозана, сшитого диальдегидами

2.4.2. Изучение сорбционных свойств хитозана, модифицированного сшивкой оАМР

3. МЕТОДИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

3.1. Объекты исследования

3.2. Реактивы

3.3. Методы исследования

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гелеобразующие композиции на основе хитозана и производных нуклеотидов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Разработка биологически активных полимерных систем с заданными свойствами имеет большое значение для создания новых материалов, предназначенных для применения в медицине, биотехнологии, экологии и других областях. Одним из наиболее перспективных полимеров для создания таких материалов является биосовместимый и биодеградируемый аминополисахарид хитозан. В отличие от других доступных полисахаридов элементарное звено хитозана содержит аминогруппу, которая обладает большей реакционной способностью по сравнению с гидроксильными группами, поэтому хитозан может быть легко модифицирован с целью придания различных свойств.

В последние десятилетия все возрастающий интерес вызывают полимерные гидрогели, на основе которых разрабатываются материалы различной физической формы и назначения (биосорбенты, матрицы для выращивания клеток, носители для иммобилизации ферментов, системы с контролируемым выделением лекарственных соединений, раневые покрытия). Ковалентное сшивание хитозана бифункциональными реагентами приводит к формированию непрерывной сетки геля, обладающей прочностью и в то же время обеспечивающей свободную диффузию воды. Наиболее эффективным сшивающим реагентом является глутаровый альдегид (ГА). В процессе его взаимодействия с хитозаном происходит не только сшивка полисахаридных цепей, но также и альдольно-кротоновая конденсация ГА, приводящая к образованию токсичных продуктов нерегулярного строения. Это ограничивает использование системы хитозан -ГА в биомедицинских целях. Актуальным является поиск новых сшивающих реагентов, способных, подобно ГА, эффективно реагировать с хитозаном, но не образующих при этом олигомерных продуктов. В качестве таких соединений могут быть использованы окисленные нуклеотиды, являющиеся по химическому строению производными 3-оксаглутарового альдегида. Введение электроотрицательного атома кислорода в 3-положение ГА, а

также наличие заместителей в 2,4-положениях препятствуют кротоновой конденсации, и образованию нерегулярных продуктов. Такие соединения могут быть легко получены периодатным окислением нуклеозидов и нуклеотидов. Выполняя в живых организмах важную роль структурных единиц носителей генетической информации (ДНК и РНК), нуклеотиды и нуклеозиды имеют природное происхождение и содержат несколько функциональных групп, способных связывать различные соединения.

Работа выполнена в соответствии с основными направлениями исследований кафедры аналитической, физической и коллоидной химии МГТУ им. А.Н. Косыгина, в рамках АВЦП «Развитие научного потенциала высшей школы» (2009-2010 гг.) (проект № 2.1.1/2859), ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009 - 2013 годы» (Госконтракт № 16.740.11.0059), гранта РФФИ 08-04-12065-офи.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось научное обоснование использования диальдегидных производных нуклеотидов и нуклеозидов: уридин-5'-фосфата (оЦМР), аденозин-5'-фосфата (оАМР) и уридина (оЦгс1) в процессах получения биосовместимых гидрогелей хитозана.

Для достижения поставленной цели были определены основные задачи:

- установить особенности гелеобразования в растворах хитозана в присутствии диальдегидов оАМР и оЦМР по сравнению с ГА и оЦгё;

- установить закономерности и механизм сшивания хитозана окисленными производными нуклеотидов и нуклеозидов;

- на основе установленных закономерностей оптимизировать условия получения полимерных материалов различной физической формы (гидрогелей, пленок, гранул);

- изучить возможность использования предложенных сшивающих реагентов для получения на основе хитозана биосорбентов и носителей для иммобилизации ферментов.

Научная новизна. Установлены особенности гелеобразования в растворах хитозана в присутствии различных диальдегидов:

- показано, что скорость гелеобразования в растворах хитозана в присутствии окисленных производных нуклеотидов значительно выше, чем при использовании нуклеозидов, что обусловлено наличием в их составе фосфатной группировки, при этом строение гетероциклического основания в молекуле диальдегидного производного основания не влияет на кинетику гелеобразования;

-установлено, что меньшая скорость роста вязкости раствора хитозана в присутствии оГЫ обусловлена существенно более низким по сравнению с ГА содержанием свободных (дегидратированных форм) альдегидных групп, определяющем скорость сшивки хитозана.

-предложен механизм сшивки хитозана диальдегидными производными нуклеотидов, лежащий в основе процесса гелеобразования, включающий ионные взаимодействия фосфатных групп с протонированными аминогруппами хитозана, стерически облегчающие реакцию образования альдиминных связей, с последующим отщеплением фосфатной группы, стабилизирующим альдиминную связь; показано, что хитозан ускоряет рН-зависимый процесс [3-элиминирования фосфатной группы.

Установлено, что в результате реализации многоточечных межмолекулярных контактов в процессе испарения растворителя не растворимые в воде хитозановые пленки могут быть получены при соотношении оигёМН2 в 4-8 раз меньшем, чем при получении гидрогелей.

Практическая значимость. Предложены сшивающие реагенты для химического сшивания хитозана - диальдегидные производные нуклеотидов, использование которых позволило совместить процесс гелеобразования с функционализацией гидрогеля, что расширяет возможности создания новых материалов на основе хитозана. Показана эффективность использования функционализованных гидрогелей хитозана в качестве носителей для иммобилизации или систем с контролируемым выделением биологически

активных белков, а также биосорбентов для удаления ионов меди из водных сред.

Установлено, что увеличение pH раствора хитозана позволяет не только увеличить число депротонированных аминогрупп, но и снизить скорость кислотного гидролиза хитозана.

Публикации. Основные результаты диссертации изложены в 9 печатных работах: 8 статьях и тезисах докладов, в том числе, 2 статьях в научных журналах, включенных в перечень ВАК. Получен патент РФ.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации обсуждались и докладывались на: XV и XVII Всероссийских Конференциях «Структура и динамика молекулярных систем» (Яльчик, 2008, 2010); 9th International Conference of The European Chitin Society (Venice, Italy, May, 2009); XIX International Round Table «Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids» (Lyon, France, 2010), Пятой Всероссийской Каргинской конференции «Полимеры - 2010» (Москва, 2010); Десятой Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Нижний Новгород, 2010).

Личный вклад соискателя заключается в проведении анализа литературных данных по теме диссертации, определении совместно с руководителем задач и путей их решения, выполнении основной части эксперимента по изучению процессов сшивки хитозана и гелеобразования в его растворах, получению сорбентов и носителей для иммобилизации ферментов, в обобщении полученных результатов и подготовке публикаций по работе. Подготовлены образцы для анализа и обсуждены результаты ЯМР-спектроскопии с к.х.н. Новиковым В.В. (ИНЭОС им. В.А.Несмеянова РАН) и проф. д.х.н. Михайловым С.Н. (ИМБ им.В.А.Энгельгарда РАН), ИК-спектроскопии с к.х.н. Владимировым Л.В. (ИХФ им. Н.Н.Семенова РАН).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, методической части, выводов, списка

цитируемой литературы из 121 ссылки. Работа содержит 10 таблиц и 53 рисунка.

Содержание работы. Во введении дано обоснование актуальности диссертационной работы и указаны ее цели и задачи. В литературном обзоре проанализированы основные методы получения полимерных материалов на основе хитозана и сшивающих реагентов и механизмы гелеобразования в растворах хитозана. В методическом разделе дана характеристика используемых реагентов, описаны методы исследования, включая фотометрические методы: УФ-, ИК-спектроскопию, ЯМР-спектроскопию, электронную микроскопию, титриметрический и реологический методы и методы математической обработки результатов.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГА - глутаровый альдегид ДА - диальдегид

оАМР - окисленный аденозин монофосфат

оИгё - окисленный уридин

оЦМР - окисленный уридин монофосфат

ОФГ - органофосфатгидролаза

ТФУ - трифторуксусная кислота

УК - уксусная кислота

СД - степень дезацетилирования

ММ - молекулярная масса

РСОЕ - равновесная обменная сорбционная емкость

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Закономерности получения и свойства полимерных материалов на основе гидрогелей ковалентно-сшитого хитозана.

В настоящее время гидрогели на основе биосовместимых полимеров находят широкое применение в различных областях: медицине, фармацевтике, тканевой инженерии, хроматографии, защите окружающей среды и т.д. [1-5]. Это побуждает ученых и технологов, уделять все большее внимание развитию методов получения гидрогелей из биологически активных и биодеградируемых полимеров. Гидрогели, представляют собой трехмерные полимерные сетки, которые поглощают и удерживают от 10-20% до десятков тысяч % воды или биологических жидкостей по отношению к их сухому весу. Гидрогели могут быть химически стабильными или они могут разрушаться со временем вплоть до полного растворения полимера. Для получения стабильных гидрогелей в раствор полимера вводят сшивающие реагенты. Гидрофильные группы в составе таких систем гидратируются в водной среде, а межмолекулярные сшивки предотвращают растворение полимера.

Водорастворимые полимеры, содержащие гидроксильные группы (например, поливиниловый спирт, декстран или другие водорастворимые полисахариды) могут быть сшиты с использованием глутарового альдегида (ГА) или других диальдегидов, однако для того, чтобы произошла такого рода сшивка, должны соблюдаться жесткие условия: низкий рН, высокая температура, присутствие метанола [6]. Полимеры, содержащие аминогруппы, также могут быть сшиты теми же реагентами, но в значительно более мягких условиях [7], что расширяет возможности использования материалов на их основе, например, для иммобилизации белков или получения ряда материалов медицинского назначения.

Хитин и хитозан являются природными полисахаридами, хитин получают из органических возобновляемых ресурсов - панцирей ракообразных, скелетов насекомых и некоторых грибов. Хитозан

и

представляет собой дезацетилированное производное хитина, построенное преимущественно из глюкозаминных остатков (схема 1). Степень превращения хитина в хитозан характеризуется степенью дезацетилирования (СД), которая составляет 70 - 98%. Хитин и хитозан могут рассматриваться по химическому строению как аналоги целлюлозы, в которых гидроксильная группа у С-2 заменена ацетамидными и аминогруппами соответственно. Важно отметить, что хитин и хитозан могут различаться по составу в зависимости от происхождения и процесса производства.

Коммерческий хитин и хитозан получают при относительно низких затратах из панцирей моллюсков (в основном, крабов, креветок, омаров и криля), из отходов переработки морепродуктов. Для получения хитозана, хитин подвергается №дезацетилированию обработкой 40-45% раствором КаОН, с последующей очисткой. Таким образом, производство и применение хитозана является экономически привлекательным средством использования отходов оболочек ракообразных.

Хитозан содержит в макромолекулярной цепи реакционноспособные аминогруппы, которые не только определяют возможность его модификации, но в протонированной форме придают полимеру растворимость в воде. Кроме того, аминогруппы хитозана делают его катионным полиэлектролитом (рКа ~ 6,2 - 6,5), одним из немногих в природе. Благодаря этому хитозан растворим в водной кислой среде при рН <6,5 и при растворении приобретает положительный заряд благодаря 1ЧН3+ " группам (схема 2), и способен взаимодействовать с отрицательно заряженными соединениями. Хитозан обладает уникальными биологическими свойствами, которые включают биосовместимость, способность к биологическому разложению до безвредных продуктов, нетоксичность, физиологическую инертность

сродство к белкам, кровоостанавливающие, фунгистатические, противоопухолевые свойства, хитин и хитозан имеют широкий спектр применения. По прогнозам, происходит рост использования стандартизированных хитиновых материалов, и они становятся доступными. Важно то, что материалы биоразлагаемых полимеров хитина / хитозана экологически чистые, безопасные для людей и окружающей среды.

В течение последнего десятилетия были разработаны материалы на основе хитина и хитозана для таких областей, как очистка сточных вод (удаление ионов тяжелых металлов, красителей, флокуляция/коагуляция белков, мембранные процессы очистки), пищевой промышленности (антихолестериновые биодобавки, консерванты, упаковочный материал, добавки в корма для животных), сельское хозяйство (покрытия семян и удобрений, контролируемое высвобождение агрохимических соединений), целлюлозно-бумажная промышленность, производство косметических средств [8-13]. Но благодаря уникальным биологическим свойствам наиболее перспективным является использование материалов на основе хитозана в области медицины и биотехнологии [14-22]. В медицине они могут быть использованы как бактериостатические и фунгистатические агенты, средства доставки лекарств, системы для выращивания искусственных клеток, мази/повязки для заживления ран, гемодиализ мембран, контактные линзы, искусственная кожа, хирургические перевязочные и шовные материалы, матрицы для тканевой инженерии, носители для иммобилизации ферментов.

Гидрогели хитозана могут быть изготовлены в виде насадок, гранул, шариков, мембран, покрытий, капсул, волокон и губок. Метод ковалентной сшивки является одним из наиболее эффективных и легко осуществимых методов получения гидрогелей хитозана, так как реакционно-способные

аминогруппы содержатся практически в каждом элементарном звене хитозана.

На сегодняшний день известно и используется значительное количество сшивающих реагентов, это диальдегиды, диангидриды фталевый и янтарный, диэпоксид, краун-эфиры, дивинилсульфон, дженипин и др. Наиболее распространенными сшивающими реагентами, легко реагирующими с аминогруппами полимеров, являются диальдегиды, в особенности глутаровый альдегид. Сшивка белков ГА успешно применяется для различных целей: дубления кож, проведения дезинфекции изделий медицинского назначения, получения антитоксичных и антибактериальных вакцин, а также различных гетерогенных биокатализаторов медицинского и биотехнологического назначения. Для создания материалов на основе хитозана с заранее заданными свойствами с использованием бифункциональных сшивающих реагентов необходимо знать закономерности их реакции с аминогруппами полимера, определяющие взаимосвязь условий, степени сшивки с физико-химическими и функциональными свойствами разрабатываемого материала.

1.1. Изучение взаимодействия хитозана с альдегидами и дженипином в гелеобразующих растворах.

Как показывает анализ литературных источников последнего десятилетия в области получения материалов на основе хитозана с использованием альдегидов [23-27], наиболее часто для химического сшивания хитозана в растворе или модификации предварительно сформированных полимерных материалов из хитозана используют глутаровый альдегид, и формальдегид, а также дженипин. Причины, по которым используются эти соединения различны, как и различны механизмы взаимодействия их с аминами вообще и с аминогруппами хитозана в частности. Формальдегид - это многотоннажный продукт, поэтому его применение целесообразно в технологических процессах получения изделий

технического назначения, вследствие его токсичности. ГА наиболее легко (с высокой скоростью при комнатной температуре в широком диапазоне рН) реагирует с аминогруппами хитозана и реакция сшивки хитозана белков, коллагена, хитозана и некоторых других полимеров природного происхождения изучена наиболее хорошо. Дженипин - относительно новый сшивающий реагент, который не содержит карбонильных групп, но благодаря высокой реакционной способности в реакциях с аминогруппами полимеров и низкой токсичности его рассматривают как возможную альтернативу ГА [28], поэтому дженипин также будет рассмотрен в настоящем обзоре.

Наиболее распространенным реагентом для сшивки хитозана и белков является глутаровый альдегид, который может существовать в растворе в виде различных равновесных форм (схема 3):

VI

Влияние рН на соотношение равновесных форм в водных растворах ГА в литературе практически не рассматривалось, и это несмотря на то, что коммерческие растворы ГА изучались достаточно подробно. В щелочной среде (рН 8-13) ГА полимеризуется, причем скорость полимеризации увеличивается при повышении концентрации гидроксильных ионов [29]. Механизм альдольной реакции и альдольной конденсации представлен на

схеме 4. На первой стадии образуется альдоль (VII) (альдольная реакция), который далее дегидратируется до непредельного производного (VIII) (альдольная конденсации). Дальнейшая конденсация приводит к полимерным продуктам (IX) с молекулярными массами 12000-20000.

н-ч-н

Н-7—Н

+ В:

н

(VIII)

Н,0 О.

ОН (VII) + В:

(4)

Схема 4 - Механизм альдольной реакции и альдольной конденсации ГА в щелочной среде.

Несмотря на то, что ГА широко используется в различных областях, не сформировалось единого мнения о механизме реакции ГА с белками, хитозаном и другими аминосодержащими полимерами, это связано, в основном с тем, что продуктов альдольной конденсации в коммерческих растворах хитозана не было обнаружено. Обычно в работах, посвященных получению материалов на основе хитозана с использованием ГА, приводится

два возможных механизма реакции с образованием оснований Шиффа, а также, так называемых аддуктов Михаэля (схема 5).

т

к В

¿К лй

I I ж

м я 8

Ж

КН.

ь

♦

" V"

у

1 I I

и 1

и I

^ I ш |

/ ]

♦

н й II

; « I и | ^Ч, I ^"Ы. 1 ..-"''Н^

о™ 2с [ с « I )

Н и

К,..,

+

н

а

\ ,

айг /

Л

Шъ

/

-о

%

§

/*' /

н

н

Схема 5 - Сшивка хитозана ГА с образованием оснований Шиффа, содержащих только иминные связи (слева) [30] или иминные связи и альдегидные группы (аддукгы Михаэля) [31].

В работе [32] с использованием методов ЯМР-спектроскопии детально изучены равновесные формы ГА в воде и установлен обмен протонов 0~СНСН?-групп на дейтерий при рН 5.6, свидетельствующий о наличии аниона - продукта первой стадии альдольной реакции, а при рН > 7.2 показано образование продуктов альдольной реакции и альдольной конденсации.

Традиционные представления объясняют рН-зависимость реакции сшивки аминосодержащих полимеров снижением реакционной способности

протонированных аминогрупп в реакции с карбонильными группами. Для хитозана степень протонирования аминогрупп определяет еще и растворимость этого полисахарида в воде. рН растворов хитозана в уксусной кислоте в зависимости от его молекулярной массы, степени дезацетилирования и концентрации раствора колеблется от 3.5 до 4.5, тем не менее, реакция сшивки протекает с высокой скоростью [33]. рН 2%-ного раствора хитозана с молекулярной массой (ММ) 180 кДа в 2% уксусной кислоте составляет 4.1. Степень протонирования аминогрупп (а) при этом рН превышает 90%, т.е. менее 10% аминогрупп реакционноспособны в реакциях нуклеофильного присоединения. Увеличить число депротонированных аминогрупп в растворе хитозана можно добавлением NaOH в количестве, не приводящем к осаждению полимера. Добавление 0.5 М раствора NaOH в раствор хитозана до рН 5.6 позволило, сохранив гомогенность раствора, увеличить до 50% число депротонированных аминогрупп [33, 34].

На основании результатов УФ-спектроскопии растворов ГА и растворов ГА в присутствии низкомолекулярного хитозана в областях спектра, вызывающих поглощение а,(3-ненасыщенных производных ГА (при X 285 нм и при А, 233 нм) в работе [32] было показано увеличение во времени в реакционной смеси как концентрации альдиминных связей, так и концентрации продуктов альдольной конденсации ГА, протекающей параллельно с образованием оснований Шиффа. Учитывая, что при исследованном значении рН в отсутствии хитозана в растворе ГА не наблюдалось увеличения оптической плотности авторы работы [32] делают вывод о каталитическом действии на альдольную конденсацию ГА аминогрупп хитозана.

Если сшивка цепей хитозана происходит в растворах, содержащих полимер с ММ выше 20000, то происходит увеличение вязкости раствора вплоть до полной потери способности к течению - точки гелеобразования. Наблюдаемый в работе [32] переход от псевдопластической жидкости к пространственно-сшитой структуре геля, происходящий в растворе хитозана

в присутствии ГА, соответствует завершению гелеобразования, но не реакции сшивки хитозана ГА. Об этом свидетельствовала кинетика изменения модуля сдвига гелей, полученных в разных условиях. Рост модуля сдвига во времени указывает на образование дополнительных сшивок, фиксирующих структуру геля.

Если допустить, что в реакции сшивки глутаровым альдегидом принимают участие две его карбонильные группы, то теоретически возможная модификация аминогрупп бифункциональным сшивающим реагентом должна быть достигнута при эквимольном соотношении альдегидных групп ГА и аминогрупп хитозана, что с учетом степени дезацетилирования соответствует соотношению ГАМН2 0.45 моль/моль. Однако при увеличении содержания ГА в системе свыше 0.4 моль/моль обнаруживался рост показателей, характеризующих прочность геля. Эти результаты также свидетельствуют о более сложном механизме взаимодействия аминогрупп хитозана с ГА, включающем образование производных хитозана, содержащих непредельные олигомерные продукты альдольной конденсации ГА (IX), способные к дальнейшим взаимодействиям, как между собой, так и с аминогруппами хитозана после завершения процесса гелеобразования.

Полученные данные, а также результаты ИК-спектроскопии образцов хитозана, сшитых при разном рН показали, что сшивка хитозана ГА является сложным процессом: хитозан катализирует полимеризацию ГА с образованием неоднородных продуктов (схема 6), при этом длина олигомерных цепей в модифицированном или сшитом хитозане и концентрация сопряженных связей Ы=СНСН=С< и 0=СНСН=С< зависят от условий проведения процесса (концентрации ГА и рН реакционной среды). Этот факт необходимо учитывать при использовании реакции хитозана с ГА для создания материалов медицинского или медико-биологического назначения, так как с ростом числа сопряженных двойных связей увеличивается токсичность сшитого хитозана.

ОН

.он

ОН

он

мн N /МНАс N

он

он

он он

Схема 6 - Строение продуктов взаимодействия хитозана и ГА.

Как уже отмечалось, возможность альдольной реакции на первой стадии альдольной конденсации определяется наличием СН2-группы в соположении в карбонильной группе, поэтому сшивка хитозана другими распространенными диальдегидами, такими как формальдегид или глиоксаль, не приводит к формированию длинных олигомерных межмолекулярных мостиков. На схеме 7 приведен механизм сшивки хитозана формальдегидом, который сводится к образованию простейшего основания Шиффа, которое неустойчиво и в кислой среде после протонирования аминогруппы способно переходить в реакционноспособную форму и взаимодействовать с другой аминогруппой хитозана. Состав продуктов взаимодействия хитозана с формальдегидом доказан с помощью ИК-спектроскопии [26].

ок

О

к он

' ч

N. ,

О,

-о— || 3

с

Заключение диссертации по теме «Технология и переработка полимеров и композитов», Азарова, Анна Игоревна

ВЫВОДЫ

1. С целью создания на основе хитозана гидрогелей медико-биологического назначения предложены новые сшивающие реагенты - диальдегидные производные структурных единиц нуклеиновых кислот нуклеотиды oUMP и оАМР. Использование этих соединений позволяет наряду со сшиванием вводить в гель функциональные группы. Установлено строение продуктов взаимодействия хитозана с oUMP.

2. Установлено, что причиной низкой скорости гелеобразования в растворах хитозана в присутствии диальдегидного производного уридина по сравнению с ГА является отсутствие в составе его равновесных форм свободных альдегидных групп. В растворе ГА присутствует до 25% гидратированных форм альдегида.

3.Установлены закономерности гелеобразования в растворах хитозана в присутствии oUMP и оАМР. Показано, диальдегидные производные нуклеотидов представляют собой сшивающие реагенты ковалентно-ионного типа. Предложен механизм сшивания хитозана окисленными нуклеотидами.

4. Установлено, что для потери подвижности макромолекул при получении не растворимых в воде пленок путем испарения растворителя из тонкого слоя гелеобразующего раствора достаточно меньшего числа сшивок, чем при получении гидрогелей, поэтому содержание сшивающих реагентов может быть существенно снижено.

5. Показана возможность использования полимерных композиций на основе растворов хитозана, содержащих предложенные сшивающие реагенты, для иммобилизации белков; обнаружен эффект стабилизации трипсина в хитозановых пленках, сшитых о AMP.

6. Получены гранулированные сорбенты на основе хитозана, сшитого оАМР. Обнаружено отклонение экспериментальной зависимости равновесной сорбции от концентрации ионов Си от уравнения Ленгмюра, связанное с наличием разного типа функциональных групп.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Азарова, Анна Игоревна, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Rosiak J.M., Yoshii F. Hydrogels and their medical applications // Nucl. instrum. methods phys. res. sec. - 1999. - Vol. 151. - P. 56-64.

2. Peppas N.A., Bures P., Leobandung W., Ichikawa H. Hydrogels in pharmaceutical formulations // Eur. J. pharm. biopharm. - 2000. - Vol. 50. - P. 2746.

3. Peppas N.A., Huang Y., Torres-Lugo M., Ward J.H., Zhang J. Physicochemical foundations and structural design of hydrohydrogels in medicine and biology // Annu. Rev. Biomed. Eng. - 2000. - Vol. 2. - P. 9-29.

4. Gehrke S.H. Synthesis and properties of hydrogels used for drug delivery // Drugs pharm. Sci. - 2000. - Vol. 102. - P. 473-546.

5. Yamamoto M., Tabata Y., Hong L., Miyamoto S., Hashimoto N., Ikada Y. Bone regeneration by transforming growth factor bl released from a biodegradable hydrogel // J. Controlled release. - 2000. - Vol. 64. - P. 133-142.

6. Draye P., Delaey В., Voorde A., Bulcke A., Reu В., Schacht E. In vitro and in vivo biocompatibility of dextran dialdehyde crosslinked gelatin hydrogel films // Biomaterials. - 1998. - Vol. 19. - P. 1677-1687.

7. Luo Y., Kirker R.K., Prestwich G.D. Crosslinked hyaluronic acid hydrogels films: new biomaterials for drug delivery // J. Controlled release. - 2000. - Vol. 69. -P. 169-184.

8. Rinaudo M. Chitin and chitosan: Properties and applications // Prog, polym. sci. - 2006. - № 32. - P. 603-632.

9. Gupta V.K., Suha A. Application of low-cost adsorbents for dye removal - A review // J. Environ, manag. - 2009. - Vol .90. - P. 2313-2342.

10. Zhang Z., Chen L., Ji J., Huang Y., Chen D. Antibacterial properties of cotton fabrics treated with chitosan // Textile res. J. - 2003. - Vol. 73. - P. 1103-1106.

11. Sudha S., Giri Dev V. R., Neelakandan R., Senthil Kumar M. Chitosan - a versatile polymer for textile application // J. Textile assoc. - 2005. - Vol. 66. - P. 161- 168.

12. Guibal E. Heterogeneous catalysis on chitosan-based materials: a review // Prog, polym. sci. - 2005. - Vol. 30. - P. 71-109.

13. Schulz P., Rodríguez M., Del Blanco L., Pistonesi M., Agulló E. Emulsification properties of chitosan // Colloid polym. Sci. - 1998. - Vol. 276. - P. 1159-1165.

14. Ong S.Y., Wu J., Moochhala S.M., Tan M.H., Lu J. Development of achitosan-based wound dressing with improved hemostatic and antimicrobial properties // Biomaterials. - 2008. - Vol. 29. - P. 4323-4332.

15. Panos I., Acosta N., Heras A. New drug delivery systems based on chitosan // Cur. drug discov. technol. - 2008. Vol. 5. P. 333-341.

16. Paolicelli P., De La Fuente M., Sánchez A., Seijo B., Alonso M.J. Chitosannanoparticles for drug delivery to the eye // Expert opin. drug deliv. -2009. - Vol. 6. - P. 239-253.

17. Varshosaz J. The promise of chitosan microspheres in drug delivery systems // Expert opin. drug deliv. - 2007. - Vol. 4. - P. 263-273.

18. Smith J.M., Wood E.J. Chitosan as a potential aid to trans-dermal drug delivery // Agro food industry hi-tech. - 2003. - Vol. 14. - P. 46-49.

19. Kim I.Y., Seo S.J., Moon H.S., Yoo M.K., Park I.Y., Kim B.C., Cho C.S. Chitosan and its derivatives for tissue engineering applications // Biotechnol. adv. -2008.-Vol. 26.-P. 1-21.

20. Boynueri D., Ozcan G., Senel S., U9 D., Uraz A., Ous E., £akilci B., Karaduman B. Clinical and radiographic evaluations of chitosan gel in periodontal intraosseous defects: a pilot study // J. Biomed. mater, res. B. - 2009. - Vol. 90. -P. 461-466.

21. Chinta D.D., Graves R.A., Pamujula S., Praetorius N., Bostanian L.A., Mandal T.K. Spray-dried chitosan as a direct compression tableting excipient // Drug dev. ind. pharm. - 2009. -Vol. 35. - P. 43-48.

22. Wei D., Qian W. Facile synthesis of Ag and Au nanoparticles utilizing chitosan as a mediator agent // J. Colloid, surf. b. - 2008. - Vol. 62. - P. 136-42.

23. Hennink W.E., Nostrum C.F. Novel crosslinking methods to design hydrogels // Advanced drug delivery reviews. - 2002. - Vol. 54. - P. 13-36.

24. Beppu M.M., Vieira R.S., Aimoli C.G., Santana C.C. Crosslinking of chitosan membranes using glutaraldehyde: effect on ion permeability and water absorption // Journal of Membrane science. - 2007. - Vol.301. P. 126-130.

25. Jiao Ti F., Zhou J., Zhou J. Xin, Gao Li H., Xing Y., Li Xu H. Synthesis and characterization of chitosan-based schiff base compounds with aromatic substituent groups // Iranian polymer journal. - 2011. - P. 123-136.

26. Singh A., Narvi S.S., Dutta P.K., Pandey N.D. External stimuli response on a novel chitosan hydrogel crosslinked with formaldehyde Bull // Mater. Sci. - 2006. - Vol. 29. P. 233-238.

27. Meade S., Miller A., Gerrard J. The role of dicarbonyl compounds in non-enzymatic crosslinking: a structure // Activity study bioorganic & medicinal chemistry. - 2003. - Vol. 11. P. 853-862.

28. Muzzarelli R.A.A. Genipin-crosslinked chitosan hydrogels as biomedical and pharmaceutical aids carbohydrate polymers. - 2009. - Vol.77. P. 1-9.

29. Margel S., Rembaum A. Synthesis and characterization of poly(glutaraldehyde). A potential reagent for protein immobilization and cell separation // Macromolecules. - 1980. - Vol. 13. P. 19-24.

30. Koyama Y., Taniguchi A. Studies on chitin x. homogeneous cross-linking of chitosan for enhanced cupric ion adsorption // J. Appl. polym. Sci. - 1986. - №31. -P. 1951-1954.

31. Tual С., Espuche E., Escoubes M., Domard A. Transport properties of chitosan membranes: influence of crosslinking // J. Polym. Sci., Part B: Polym. Phys. -2000. - № 38. - P. 1521-1529.

32. Кильдеева H.P., Перминов П.А., Владимиров JI.B., Новиков В.В., Михайлов С.Н. О механизме реакции глутарового альдегида с хитозаном // Биоорганическая химия. - 2009. - Т. 35. - № 3. - С. 397-407.

33. Перминов П.А., Кильдеева Н.Р., Тимофеева Л.М., Абронин И.А., Бабак В.Г., Никоноров В.В. Структурообразование в растворах хитозана в присутствии сшивающего реагента при получении биологически активных полимерных материалов // Изв. вузов. Химия и химическая технология. -2007. - Т. 50. - № 3. - С. 53-56.

34. Азарова А.И., Перминов П.А., Кильдеева Н.Р., Михайлов С.Н., Владимиров Л.В. Гелеобразование композиций для модификации волокнистых материалов // Химические волокна. - 2011. - №2. - С.7-11.

35. Takigawa Т., Endo Y. Effects of glutaraldehyde exposure on human health // J. Occup health. - 2006. - Vol. 48. - P. 75-87.

36. Lai Jui-Yang, Li Ya-Ting, Wang Tsu-Pin. In Vitro response of retinal pigment epithelial cells exposed to chitosan materials prepared with different cross-linkers //Int. J. Mol. Sci. - 2010. Vol. 11. - P. 5256-5272.

37. Butler M.F., Ng Y.F., Pudney P.D. Mechanism and kinetics of the crosslinking reaction between biopolymers containing primary amine groups and genipin // J. Polym. Sci. Pol. Chem. - 2003. - Vol. 41. - P. 3941-3953.

38. Bergera J., Reista M., Mayera J.M., Feltb O., Peppasc N.A., Gurny R. Structure and interactions in covalently and ionically crosslinked chitosan hydrogels for biomedical applications // European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics. - 2004. - Vol. 57. - P.19-34.

39. Sinha V.R., Singl A.K., Wadhawan S., Kaushik R., Kumria R., Bansal K., Dhawan S. Chitosan microspheres as a potential carrier for drugs // International journal of pharmaceutics. -2004. - Vol. 274. - P. 1-33.

40. Smith D. K.. Molecular gels-underpinning nanoscale materials // With organic chemistry tetrahedron. - 2007. - Vol .63. - P. 7283-7284.

41. Mourya V.K., Inamdar N.N. Chitosan-application and modification // Reactive & functional polymers. - 2008. - Vol .68. - P.1013-1051.

42. Majeti N.V., Kumar R. A. Review of chitin and chitosan application reactive & functional polymers. - 2000. - Vol .46. - P. 1-27.

43. Rinaudo M. Chitin and chitosan: properties and applications // Prog, polym. Sci. - 2006. - Vol. 31. - P. 603-632.

44. Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C. Chitosan chemistry: relevance to the biomedical sciences // Advances in polymer science polysaccharides I. P. - 2005. -Vol. 186.-P. 151-209.

45. Mi F.L., Kuan C.Y., Shyu S.S., Lee S.T., Chang S.F. The study of gelation kinetics and chain-relaxation properties of glutaraldehydecross-linked chitosan gel and their effects on microspheres preparation and drug release // Carbohydr. Polym. - 2000. - Vol. 41. - P. 389-396.

46. Shanmugasundaram N., Ravichandran P., Reddy P.N., Ramamurty N., Pal S., Rao K.P. Collagen-chitosan polymeric scaffolds for the in vitro culture of human epidermoid carcinoma cells // Biomaterials. - 2001. - Vol. 22. - P. 1943-1951.

47. Park H., Kim D.. Swelling and mechanical properties of glycol chitosan/poly(vinyl alcohol) ipn-type superporous hydrogels // J. Biomed mater res A. - 2006. - Vol. 78. - P. 662-667.

48. Перминов П.А. Закономерности взаимодействия хитозана с глутаровым альдегидом и их использование при получении ферментсодержащих полимерных материалов: дис. ... канд. хим. наук.- М.: МГТУ, 2007. - 152с.

49. Никоноров В.В. Получение гидрогелей хитозана, модифицированного диальдегидами, с использованием технологии криотропного гелеобразования: дис. ... канд. хим. наук.- М.: МГТУ, 2010. - 171с.

50. Aranaz I., Harris R., Heras A. Chitosan amphiphilic derivatives. Chemistry and applications // Current organic chemistry. - 2010. - Vol. 14. - P. 308-330.

51. Никоноров B.B., Перминов П.А., Кильдеева H.P.. Закономерности структурообразования в растворах хитозана в присутствии сшивающего реагента для получения волокнистых биокатализаторов // Химические волокна. - 2006. - №2. - С.9-11.

52. Донецкая А.И., Симаненкова J1.M., Перминов П.А., Новиков А.В., Кильдеева Н.Р., Михайлов С.Н. Влияние степени протонирования аминогрупп на свойства растворов хитозана и кинетику гелеобразования в присутствии диальдегидов // Структура и динамика молекулярных систем. Сб. статей. Москва-Йошкар-Ола-Уфа-Казань, 2010.- Т.17. ч.2. - С. 58-61.

53. Перминов П.А., Кильдеева Н.Р., Вихорева Г.А., Владимиров Л.В., Акопова Т.А., Бабак В.Г. Изучение взаимодействия хитозана с глутаровым альдегидом // Матер. Восьмой Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» - Казань, 2006. С. 119 - 122.

54. Кильдеева Н.Р., Вихорева Г.А, Ефременко Е.Н., Владимиров Л.В., Перминов П.А. Биологически активные системы на основе сшитого хитозана // Структура и динамика молекулярных систем. Сб. тез. докл. - Яльчик, 2006. -С. 111.

55. Lee S.J., Kim S.S., Lee Y.M. Interpenetrating polymer network hydrogels based on poly(ethylene glycol) macromer and chitosan // Carbohydr. Polym. -2000.-Vol. 41.-P. 197-205.

56. Wang M.Z., Qiang J.C., Fang Y., Hu D.D., Cui Y.L., Fu X.G. Preparation and properties of chitosan-poly(N-isopropylacrylamide) semi-IPN hydrogels // J. Polym. Sci. Part a polym. Chem. - 2000. - Vol. 38. - P. 474-481.

57. Никоноров В.В., Иванов Р.В., Кильдеева Н.Р., Булатникова JI.H., Лозинский В.И. Синтез криогелей хитозана, сшитого глутаровым альдегидом, и изучение их свойств. // Высокомолекулярные соединения. -2009. - Т. 52. - № 8. - С. 1436-1443.

58. Не P., Davis S.S., Ilium L. Chitosan microspheres prepared by spray drying // International journal of pharmaceutics. - 1999. - Vol. 187. - P. 53-65.

59. Kim B.K., Hwang S.J., Park J.B., Park H.J.. Preparation and characterization of drug-loaded microspheres by an emulsion solvent evaporation method // J. of microencapsulation. -2002. - Vol. 19. - P. 811-822.

60. Benita S. Microencapsulation: Methods and industrial application // Marcel Dekker, inc. - 2004. - Vol. 73. - P. 1-20.

61. Huang Y.C., Chiang C.H., Yeh M.K. Optimizing formulation factors in preparing chitosan microparticles by spray drying method // J. of microencapsulation. - 2003. - Vol. 20. - P. 247-260.

62. Masters K. The spray drying handbook // New york: longman scientific and technical. - 1991.

63. Desai K.G., Park H.J. Preparation of cross-linked chitosan microspheres by spray drying: effect of cross-linking agent on the properties of spray dried microspheres // Journal of microencapsulation. - 2005. - №22. - P. 377-395.

64. Yao K.D., Peng Т., Yu J.J., Xu M.X., Goosen M... Microcapsules /microspheres related to chitosan // J. M. S. Rev. Macromol. chem. phys. - 1995. -Vol. 35.-P. 155-180.

65. Barck K., Butler M.F. Comparison of morphology and properties of polyelectrolyte complex particles formed from chitosan and polyanionic biopolymers // J. of applied polymer science. - 2005. - Vol. 98. - P. 1591-1583.

66. Agnihotri S.A., Aminabhavi T.M. Controlled release of clozapine through chitosan microparticles prepared by a novel method // J. Control release. - 2004. -Vol. 96. - P. 245-259.

67. Beppu M.M., Vieira R.S., Aimoli C.G., Santana C.C. Crosslinking of chitosan membranes using glutaraldehyde: effect on ion permeability and water absorption // Journal of membrane science. - 2007. - Vol. 301. - P. 126-130.

68. Вихорева Г.А., Шаблыкова E.A., Кильдеева H.P. Модификация хитозановых пленок глутаровым альдегидом с целью регулирования их растворимости и набухания // Химические волокна. - 2001. - № 3. - С.38-42.

69. Knaul J. Z., Hudson S. M., Creber K.A. Cross-linking of chitosan fibers with dialdehydes: proposal of a new reaction mechanism // Journal of polymer science. Part B, polymer physics. - Vol. 37. - P. 1079-1094.

70. Yanga Q., Doub F., Lianga В., Shena Q. Studies of cross-linking reaction on chitosan fiber with glyoxal carbohydrate polymers. - 2005. - Vol. 59. - P. 205-210.

71. Schiffman J.D., Schauer C.L. Cross-linking chitosan nanofibers // Biomacromolecules. - 2007. - Vol. 8. - P. 594-601.

72. Schiffman J.D., Schauer C.L. One-step electrospinning of cross-linked chitosan fibers // Biomacromolecules. - 2007. - Vol. 8. - P. 2665-2667.

73. Hoffmann В., Seitz D., Mencke A., Kokott A., Ziegler G. Glutaraldehyde and oxidised dextran as crosslinker reagents for chitosan-based scaffolds for cartilage tissue engineering // J. Mater sci: Mater Med. - 2009. - Vol. 20. - P. 1495-1503.

74. Heidelberg I.S. Chitosan for biomaterials // Advances in polymer science. -2011.-Vol. 243.

75. Jayakumar R., Prabaharan M., Muzzarelli R.A.A. Chitosan for biomaterials II. Springer heidelberg dordrecht London New York. - 2011. - Vol. 244.

76. Chen Mei-Chin, Mi Fwu-Long, Liao Zi-Xian, Sung Hsing-Wen. Chitosan: its applications in drug-eluting devices // Adv. polym. sci. - 2011. - Vol. 243. - P. 185-230.

77. Dini E., Alexandridou S., Kiparissides C. Synthesis and characterization of cross-linked chitosan microspheres for drug delivery applications // J. Microencapsul. - 2003. - Vol. 20. - P. 375-385.

78. Jameela S.R., Kumary T.V., Lai et al A.V. Progesterone-loaded chitosan microspheres: a long acting biodegradable controlled delivery system // J. Control release 52. - 1998. - P. 17-24.

79. Gupta K.C., Jabrail F.H. Glutaraldehyde and glyoxal cross-linked chitosan microspheres for controlled delivery of centchroman // Carbohydr res 341. - 2006. . p.744-756.

80. Mi F.L., Sung H.W., Shyu S.S. Synthesis and characterization of biodegradable TPP/genipin co-crosslinked chitosan gel beads // Polymer. - 2003. - Vol. 44- P. 6521-6530.

81. Chen S.C., Wu Y.C., Mi F.L. A novel pH-sensitive hydrogel composed of n, o-carboxymethyl chitosan and alginate cross-linked by genipin for protein drug delivery // J. control release. - 2004. - Vol. 96. - P. 285-300.

82. Mi F.L., Tan Y.C., Liang H.F., Sung H.W.. In vivo biocompatibility and degradability of a novel injectable-chitosan-based implant // Biomaterials. - 2002. -Vol. 23.-P. 181-191.

83. Liu B.S., Yai C.H., Fang S.S. Evaluation of a non-woven fabric coated with a chitosan bi-layer composite for wound dressing // Macromolecular bioscience. -2008. - Vol. 8. - P. 432-440.

84. Liu X., Ma L., Mao Z., Gao C. Chitosan-based biomaterials for tissue repair and regeneration // Advances in polymer science. Chitosan for biomaterials II. -2011.-Vol. 244.-P.81-127.

85. Kawase M., Michibayashi N., Nakashima Y., Kurikawa N., Yagi Y., Mizoguchi T. Application of glutaraldehyde-crosslinked chitosan as a scaffold for hepatocyte attachment // Biol, pharm. bull. - 1997. - Vol. 20. - P. 708-710.

86. Shi Y.C., Ma L., Zhou J., Mao Z.W., Gao C.Y.. Collagen/chitosan-silicone membrane bilayer scaffold as a dermal equivalent // Polym adv technol. - 2005. -Vol. 16. - P. 789-794.

87. Chiono V., Pulieri E., Vozzi G., Ciardelli G., Ahluwalia A., Giusti P. Genipin-crosslinked chitosan/gelatin blends for biomedical applications // Journal of materials Science. Materials in medicine. - 2008. - Vol. 19. - P. 889-898.

88. Lu M. C., Hsiang S. W., Lai T. Y., Yao C. H, Lin L. Y., Chen Y. S. Influence of crosslinking degree of a biodegradable genipin-crosslinked gelatin guide on peripheral nerve regeneration // Journal of biomaterials science. Polymer edition. -2007. - Vol. 18.-P. 843-863.

89. Yamazaki M., Chiba K. Genipin exhibits neurotrophic effects through a common signaling pathway in nitric oxide synthase-expressing cells // European journal of pharmacology. 2008. - Vol. 581. - P. 255-261.

90. Guibal E., Sweeney N.V., Zikan M.C., Vincent T., Tobin J.M. Competitive sorption of platinum and palladium on chitosan derivatives // J. Biol, macromol. -

2001.-Vol. 28.-P. 401-408.

91. Guibal E., Milot C., Eterradossi O., Gauffier C., Domard A. Study of molybdate ion sorption on chitosan gel beads by different spectrometric analyses // Int. J. Biol. Macromol. - 1999. - Vol. 24. - P. 49-59.

92. Ngah W.S., Endud C.S., Mayanar R. Removal of copper(II) ions from aqueous solution onto chitosan and cross-linked chitosan beads // React, funct. polym. -

2002. - Vol. 50.-P. 181-190.

93. Masri M.S., Renter F.W., Friedman M. Binding of metal cations by natural substances // J. Appl. polym. sci. - 1974. - Vol. 18. - № 3. - P. 675-681.

94. Varma A. J., Deshpande S.V., Kennedy J.F. Metal complexation by chitosan and its derivatives: a review // Carbohydrate polymer. -2004. - Vol. 55. - №1. - P. 77-93.

95. Румянцева Е.В., Вихорева Г.А., Кильдеева Н.Р., Неборако А.А., Сараева Е.Ю., Гальбрайх JI.C. Сорбция ионов меди гранулированным хитозаном // Химические волокна. - 2006. - №2. - С. 11-14.

96. Велешко И.Е., Никоноров В.В., Велешко А.Н., Румянцева Е.В., Михайлов С.Н., Лозинский В.И., Иванов Р.В., Гальбрайх Л.С., Кильдеева Н.Р. Сорбция Eu(III) из растворов ковалентно-сшитыми криогелями хитозана// Химические волокна. - 2010. - №6. - С. 22-26.

97. Bhatnagar, Sillanpaa М. Applications of chitin- and chitosan-derivatives for the detoxification of water and wastewater - a short review // Advances in colloid and interface science 152. - 2009. - P. 26-38.

98. Crini G., Badot P.M. Application of chitosan, a natural aminopolysaccharide, for dye removal from aqueous solutions by adsorption processes using batch studies: a review of recent literature // Prog, polym. sci. 33. - 2008. - P. 399-447.

99. Guibal E. Heterogeneous catalysis on chitosan-based materials // Prog, polym. sci. 30,.-2005.-P. 71-109.

100. Hsien T. Y., Rorrer G.L. Heterogeneous cross-linking of chitosan gel beads: kinetics, modeling, and influence on cadmium ion adsorption capacity // Ind eng chemres.- 1997. -P. 31-36.

101. Kramareva N.V., Stakheev A.Y., Tkachenko O., Klementiev K.V., Grunert W., Finashina E.D. Heterogenized palladium chitosan complexes as potential catalysts in oxidation reactions: study of the structure // J. Mol catal a: chem. -2004.-Vol. 209.-P. 97-106.

102. Yonezawa Y., Sato Т., Kawabata I. Photo-induced formation of gold metal film from metal salt of chitosan //Chem let. - 1994. - P. 355.

103. Guibal E., Roussy J., Cloirec P. Le. Photochemical reaction of uranium with glucosamine, acetylglucosamine and related polymers: chitin and chitosan // Water SA. - 1996. - Vol. 22. - P. 19-26.

104. Ruiz M., Sastre A.M., Guibal E. Palladium sorption on glutaraldehyde-crosslinked chitosan I I React funct polym. - 2000. - Vol. 45. - P. 155-73.

105. Vincent Т., Guibal E. Chitosan-supported palladium catalyst // L Synthesis procedure. Ind eng cem res. - 2002. - P. 64.

106. Ермолинский B.C., Михайлов C.H. Реакция периодатного окисления в химии нуклеиновых кислот. Диальдегидные производные нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов // Биоорган, химия. - 2000. - Т.26. - С.483-504.

107. Hinrichs M.V. Affinity labeling of rabbit muscle pyruvate kinase with dialdehyde-ADP // Biochim. Biophys. Acta. - 1982. - Vol. 704. - P. 177-185.

108. Mignaco J., Scofano H.M., Barrabin H. Inhibition and labeling of the Ca2(+)-ATPase from sarcoplasmic reticulum by periodate oxidized ATP // Biochim. Biophys. Acta. - 1990. - Vol. 1039. - P. 305-312.

109. El-hefian E.A., Yahaya A.H. Rheological study of chitosan and its blends: An overview // Maejo int. J. Sci. Technol. - 2010. - P. 210-220.

110. Wipple E.B., Ruta M. Structure of aqueous glutaraldehyde // J. Org. chem. -1974. - Vol. 39. - P. 1666-1668.

111. Hansske F., Sprinzl M., Cramer F. Reaction of the ribose moiety of adenosine and AMP wih periodate and carboxylic acid hydrazides // Bioorg. Chem. - 1974. -Vol. 3.-P. 367-376.

112. Greenberg H.R., Perlin A.S. 1,4 Dioxane-2,6-diolfromanhydroalditols: solvent effects on its formation and conformation // Carbohydr. res. - 1974. - Vol. 35. - P. 195-202.

113. Lowe P.N., Beechey R.B. Preparation, structure, and properties of periodate-oxidised ATP, a potential affinity-labelling reagent // Bioorg. Chem. - 1982. -Vol.ll.-P. 55-71.

114. Lowe P.N.,. Beechey R.B. Interactions between the mitochondrial ATPase and periodate-oxidized adenosine-51-triphosphate, an affinity label for ATP b.s. // Biochemistry. - 1982. - Vol. 21. - № 7. - P. 4073-4081.

115. Hansske F., Cramer F. Modification of the 3' terminus of tRNA by periodate oxidation and subsequent reaction with hydrazides // Methods in enzymology. -1979.-Vol. 59.-P. 172-181.

116. Шрайнер P., Фьюзон Д., Кертин Д., Моррилл Т. Идентификация органических соединений. - М: Мир. 1983. 479 с.

117. Davies D. В. Progress in NMR spectroscopy //Pergamon press, see J R march. - 1978.-Vol. 12.-P. 135.

118. Hoffman A.S., Ann N.Y. Hydrogels for biomedical applications // Acad. Sei. -2001.-Vol. 62.-P. 944.

119. Кильдеева H.P., Велешко И.Е., Владимиров Jl.B., Никоноров В.В., Лозинский В.И., Иванов Р.В., Перминов П.А., Михайлов С.Н. Модификация хитозана пиридоксальфосфатом для улучшения сорбционной способности // Химические волокна. - 2011. - №2. - С. 7-11.

120. Ефременко E.H., Перегудов A.A., Кильдеева Н.Р., Перминов П.А., Варфоломеев С.Д. Способ получения биокатализатора и биокатализатор для гидролиза фосфорорганических соединений // Патент РФ № 2261911, приоритет от 18.03.2004.

121. Kaminski W., Modrzejewska Z. Application of chitosan membranes in separation of heavy metal ions // Sep. Sei. Technol. - 1997. - Vol.32. - №16. - P, 2659-2668.