Функционирование протеасом и кальпаинов при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Сиденко Евгения Александровна

• Сиденко Евгения Александровна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Сиденко Евгения Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные представления о патогенезе предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани

1.2 Роль убиквитин-протеасомной системы в развитии предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани

1.2.1 Характеристика убиквитин-протеасомной системы

1.2.2 Роль убиквитин-протеасомной системы в патогенезе предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани

1.3 Характеристика и роль а2-макроглобулина в патогенезе предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани

1.4 Роль кальпаинов в развитии предопухолевых и опухолевых

заболеваний

1.4.1 Характеристика кальпаиновой системы

1.4.2 Роль кальпаинов в патогенезе предопухолевых и опухолевых

заболеваний

Заключение по обзору литературы

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Клиническая характеристика больных

2.2 Материал исследования

2.3 Методы исследования

2.3.1 Определение уровня экспрессии мРНК протеасом и кальпаинов

2.3.2 Определение активности внутриклеточных и циркулирующих протеасом

2.3.3 Определение активности кальпаинов

2.3.4 Определение активности а2-макроглобулина

2.3.5 Определение содержания а2-макроглобулина

2.3.6 Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Протеасомы при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.1.1 Экспрессия в-субъединиц протеасом РБМВ4, РБМВ5, РБМВб, РБМВ7 при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.1.2 Химотрипсинподобная и каспазаподобная активности внутриклеточных протеасом при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.1.3 Химотрипсинподобная и каспазаподобная активности циркулирующих

протеасом при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.2. Кальпаины при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.2.1 Экспрессия САРИ1 и САРИ2 при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.2.2 Активность кальпаинов при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.3 Активность и содержание а2-макроглобулина при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани

3.4 Взаимосвязь показателей протеасомной, кальпаиновой систем и а2-макроглобулина

3.5 Прогнозирование онкологического риска предопухолевых заболеваний

гортани с учетом функционирования протеасом и кальпаинов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Рак гортани является одной из наиболее распространённых патологий среди органов головы и шеи, преимущественно обнаруживается у мужского населения. В 2020 году по данным мировой статистики число впервые выявленных случаев новообразований гортани составило 184615, из которых летальных исходов -99840. Заболеваемость среди мужского населения составила 160265 случаев, среди женского - 24350 [165]. По распространенности среди опухолей головы и шеи рак гортани занимает второе место (от 1 до 5% системных злокачественных новообразований). Рак гортани - одно из немногих онкологических заболеваний, при котором 5-летняя выживаемость снизилась за последние 40 лет с 66% до 63%. Его основным гистологическим типом является плоскоклеточный рак. Наиболее частым местом локализации опухолевого процесса являются голосовые складки и надгортанник [102; 109; 161; 173]. За последнее десятилетие в лечении рака гортани были достигнуты большие успехи, однако, несмотря на относительную доступность и простоту обследования гортани в условиях современного развития эндоскопической техники, диагностические ошибки на догоспитальном этапе продолжают составлять большой процент. Так рак in situ выявляется только в 2,36% случаев, I стадия процесса - в 23,9%, а III-IV стадии заболевания составляют 55-60% от первично выявленных опухолей гортани. Необходимо учитывать, что у 30-35% больных заболевание протекает бессимптомно, и, следовательно, необходимо выявление пациентов, относящихся к группе повышенного онкологического риска [20; 27; 124].

К настоящему времени наиболее мутагенными факторами риска развития рака гортани являются употребление табака и алкоголя, которые, по-видимому, имеют синергетический эффект [102; 118; 197]. Некоторые подтипы плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), особенно ротовой полости, ротоглотки и гортани, вызываются различными типами вируса папилломы человека (ВПЧ) [10; 199]. Во многих странах мира заболеваемость плоскоклеточным раком гортани (ПРГ) снизилась в течение последнего

десятилетия, что можно объяснить уменьшением распространенности более традиционных факторов риска, в первую очередь курения [8; 10; 30]. Прогноз для пациентов с ПРГ во многом определяется стадией обращения, которую характеризует размер опухоли, а также наличие метастазов в лимфатических узлах и отдаленных метастазов [103]. Примерно у 40% пациентов диагностируется рак на I-II стадии, и они обычно получают либо хирургическое лечение, либо химиолучевую терапию, в то время как большинству пациентов с запущенным раком с метастазами в лимфатические узлы (III стадия) требуется комбинированное лечение [110]. Несмотря на достижения терапевтических и хирургических методов, риск рецидивирования или метастазирования остается высоким, что приводит к неблагоприятному прогнозу со средней выживаемостью 10 месяцев [158]. За последние два десятилетия качество жизни пациентов с ПРГ повысилось в результате использования более совершенных хирургических и радиотерапевтических методов, а также выполнения органосохранных протоколов [103; 109; 124].

Рак гортани чаще всего развивается на фоне длительно существующих предраковых заболеваний, сочетающихся с диспластическими процессами, которые могут трансформироваться в рак in situ [60; 87]. Объективных и надежных критериев, позволяющих оценить степень онкологического риска у пациентов с диспластическими изменениями эпителия гортани, существует крайне мало. Необходим поиск молекулярных маркеров для разработки нового высокочувствительного способа, позволяющего отнести пациентов с хроническими заболеваниями, ассоциированными с диспластическими изменениями, к группе онкологического риска.

Установление молекулярных различий между диспластическими процессами и злокачественными опухолями на этапах трансформации эпителия позволит идентифицировать этиотропные механизмы онкогенеза. Опухолевые клетки характеризуются высоким уровнем метаболизма, связанным с неконтролируемой пролиферацией и нарушением регуляции многих клеточных процессов. Ключевую роль в сохранности клеточного протеома играют

протеолитические системы, которые обеспечивают быстрый обмен белков.

Убиквитин-протеасомная система ответственна за деградацию более 80% выполнивших свою функцию, короткоживущих, неправильно свёрнутых и второстепенных внутриклеточных белков [49; 135]. Протеасомы участвуют во многих биологических функциях, включая транскрипцию, трансляцию и репарацию генов, клеточный цикл, пролиферацию клеток и апоптоз [166; 198]. Поскольку убиквитин-протеасомная система участвует в регуляции множества функций, нарушение которых может стать критичным для организма человека, дисфункция системы приводит к различным заболеваниям, в том числе и к развитию опухолевых процессов [57]. Исследования показали, что экспрессия генов убиквитин-протеасомной системы способна влиять на процессы протеолиза, лежащие в основе развития ПРГ [103]. Большое количество исследований посвящено изучению активности и субъединичного состава протеасом в опухолевых тканях. Показано, что в тканях рака молочной железы, эндометрия, плоскоклеточного рака головы и шеи химотрипсинподобная (ХТП) и каспазаподобная (КП) активности протеасом значительно выше, чем в условно-нормальной ткани [2; 14; 23].

Значимой системой специфического внутриклеточного протеолиза является кальпаиновая система, которая вовлечена в развитие и прогрессирование опухолей различных локализаций [40; 181]. Кальпаины - это цитоплазматические цистеиновые протеазы, для активности которых требуются ионы кальция. Протеолиз, осуществляемый кальпаинами, является частичным, не деградирующим белок, а лишь изменяющим его структуру, таким образом, это протеазы-«модуляторы» [165; 180]. Хотя многие функции кальпаинов и механизмов, контролирующих протеолитическую активность, еще предстоит выяснить, экспериментальные исследования продемонстрировали существенное значение кальпаинов в ряде важных клеточных процессов, включая пролиферацию, дифференцировку, репарацию ДНК и апоптоз [171]. Кальпаины принимают участие в прогрессировании опухолей различных локализаций. Были получены данные об экспрессии представителей семейства кальпаинов в тканях

молочной железы, лёгких, желудка, прямой кишки, носоглотки [21; 40; 164]. Таким образом, является актуальным изучение их роли и участия в возникновении и прогрессировании ПРГ.

Альфа2-макроглобулин (a2-MГ) представляет собой гомотетрамерный белок с молекулярной массой 720 кДа и является одним из ключевых ингибиторов протеаз, участвующих в регуляции активности многих протеолитических энзимов человеческого организма. Альфа2-MГ уникален по своей функции, поскольку он инактивирует протеолитическую активность, сохраняя при этом эстеразную. Также a2-MГ способен взаимодействовать с протеазами, выделяемыми гранулоцитами и другими клетками во время воспаления, регулировать внеклеточную протеолитическую активность, возникающую в результате свертывания и фибринолиза, защищать организм от инвазивных патогенов, контактируя с протеазами бактериального происхождения [154]. Осипов В.Д. (2003) в своих исследованиях установил высокую клиническую, диагностическую и прогностическую значимость а2-МГ при раннем раке гортани [16]. Альфа2-МГ принимает активное участие в патогенезе различных опухолевых заболеваний, включая рак гортани, регулируя целые каскады разнообразных молекулярных механизмов и реакций. В их число входят иммунные реакции, липидный обмен, контроль над системами свертывания крови и ремоделирования тканей, управление патологической и физиологической пролиферацией. Короткий период полувыведения макроглобулинов и их комплексов после трансформации протеазами, активно высвобождается именно в зонах деления и роста либо гибели клеток [12; 44]. Механизмы связывания белково-пептидных молекул с а2-МГ изучены недостаточно. В большинстве работ установлен только сам факт взаимодействия и определения характера связывания с биохимической точки зрения.

Несмотря на активное изучение убиквитин-протеасомной и кальпаиновой систем, а также а2-МГ, в настоящее время нет достаточного количества данных, свидетельствующих об изменениях уровня экспрессии и активностей протеасом и кальпаинов у пациентов с хроническими заболеваниями гортани,

ассоциированными с диспластическими изменениями разной степени. Полученные данные будут характеризовать выраженный потенциал предракового процесса эпителия гортани к озлокачествлению, на основе которых будет разработан новый способ оценки степени онкологического риска у пациентов с предопухолевыми заболеваниями гортани.

Степень разработанности темы

Современное развитие молекулярной онкологии позволило разработать большое количество маркеров, прогнозирующих исходы заболевания и результаты лечения больных злокачественными опухолями. Однако маркеров, прогнозирующих переход предрака в рак, значительно меньше. Известно, что карцинома гортани развивается, в основном, из папиллом гортани, лейкоплакии и дисплазии, главным образом, тяжелой степени [107; 134]. В настоящее время наличие очагов дисплазии в эпителии гортани недостаточно для включения пациента в группу онкологического риска, поскольку неоднородность диспластических изменений внутри подгруппы не позволяет адекватно определить сроки динамического наблюдения и методы лечения, необходимы дополнительные более определенные критерии прогноза развития предраковых изменений [203]. Одними из факторов прогноза перехода предрака в рак могут быть компоненты убиквитин-протеасомной и кальпаиновой систем. Показано, что протеасомы и кальпаины способны изменять свою активность при переходе предопухолевых процессов в рак [2; 5]. Также, вероятно, а2-макроглобулин может быть фактором прогноза развития рака гортани у больных предопухолевыми процессами, ассоциированными с дисплазией различной степени [16]. В настоящее время нет информации, в полной мере характеризующей функционирование протеасом и кальпаинов при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани. Необходим поиск молекулярных маркеров малигнизации предраковых состояний для разработки новых способов прогнозирования развития неопластического процесса на фоне текущих хронических заболеваний гортани. Исходя из вышеизложенного,

перспективным является изучение возможности использования компонентов внутриклеточных протеолитических систем и а2-макроглобулина для прогнозирования вероятности развития рака гортани у больных хроническими гиперпластическими заболеваниями гортани (ХГЗГ), ассоциированными с дисплазией различной степени.

Цель: изучить роль компонентов протеолитических систем (протеасом, а2-макроглобулина и кальпаинов) в развитии злокачественных новообразований гортани.

Задачи исследования:

1. Определить уровень экспрессии генов кальпаинов (СЛРИ1, СЛРИ2) и в-субъединиц протеасом (РБМБ4, РБМБ5, РБМБб, РБМБ7) в слизистой оболочке гортани при гиперпластических, диспластических и опухолевых процессах.

2. Изучить химотрипсинподобную и каспазаподобную активности протеасом и активность кальпаинов в слизистой оболочке гортани при гиперпластических, диспластических процессах и злокачественных опухолях гортани.

3. Изучить химотрипсинподобную и каспазаподобную активности циркулирующих протеасом, а также содержание и активность а2 -макроглобулина в сыворотке крови пациентов с предопухолевыми и опухолевыми заболеваниями гортани.

4. Оценить связь между уровнем экспрессии генов кальпаинов и в-субъединиц протеасом и активностью этих протеаз в изучаемых тканях.

5. Оценить связь между активностью циркулирующих протеасом, содержанием и активностью а2-макроглобулина у пациентов с предопухолевыми и опухолевыми заболеваниями гортани.

6. Выявить дополнительные критерии и разработать математическую модель для оценки степени онкологического риска у пациентов с предопухолевыми заболеваниями гортани.

Научная новизна

Впервые исследованы экспрессия мРНК в-субъединиц протеасом и активность протеасом в гиперплазированном, диспластически и злокачественно изменённом эпителии гортани, а также в сыворотке крови. Анализ экспрессии генов в-субъединиц протеасом показал значимое увеличение этих показателей в тканях ПРГ в сравнении с больными хроническими гиперпластическими заболеваниями гортани (ХГЗГ), ассоциированными с дисплазией различной степени.

Показано, что наибольшие значения химотрипсинподобной (ХТП) и каспазаподобной (КП) активностей протеасом характерны для рака гортани по сравнению с условно-нормальной, гиперпластически и диспластически измененной слизистой оболочкой, а КП активность значимо повышается в зависимости от стадии опухолевого процесса. Впервые показано повышение активности протеасом в сыворотке крови больных ПРГ по сравнению с группой контроля и больными предопухолевыми заболеваниями гортани.

Впервые получены данные о значительном повышении экспрессии генов кальпаинов (САРЫ1, САРЫ2) и общей активности кальпаинов в опухолевой ткани гортани по сравнению с ХГЗГ, ассоциированными с дисплазией различной степени.

Впервые показана прогностическая значимость экспрессии гена в-субъединицы протеасом РБМВ5, химотрипсинподобной (ХТП) активности внутриклеточных протеасом и активности кальпаинов для оценки степени онкологического риска у пациентов с предопухолевыми заболеваниями гортани.

Теоретическая и практическая значимость

Полученные результаты позволяют расширить представления о роли протеолитических систем в развитии рака гортани из предопухолевых изменений слизистой оболочки.

Практическую значимость работы определяет возможность использования исследованных показателей для прогноза риска возникновения ПРГ у пациентов с ХГЗГ, ассоциированными с дисплазией эпителия гортани различной степени.

Создана математическая модель для оценки степени онкологического риска у пациентов с предопухолевыми заболеваниями гортани, включающая такие показатели как PSMB5 (ген ß-субъединицы протеасом), химотрипсинподобная активность внутриклеточных протеасом и активность кальпаинов. Чувствительность разработанной модели составила 93,1%, специфичность - 90%.

Методология и методы исследования

В основе методологии диссертационной работы лежат современные представления о развитии рака гортани из предопухолевых изменений слизистой оболочки. Работа выполнялась с использованием диагностических, морфологических, молекулярно-биологических, биохимических и статистических методов на проспективном материале в соответствии с разработанным дизайном исследования.

На первом этапе исследования определяли уровень экспрессии мРНК кальпаинов (CAPN1, CAPN2), ß-субъединиц протеасом (PSMB4, PSMB5, PSMB6, PSMB7), ХТП и КП активности внутриклеточных и циркулирующих протеасом, активность кальпаинов, содержание и активность а2-МГ в группах больных ХГЗГфО), ХГЗГ(Б1, II-III), ПРГ.

Второй этап заключался в оценке взаимосвязи исследуемых компонентов протеолитических систем (протеасомы, кальпаины и а2-МГ) при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани.

Целью заключительного этапа исследования явилось создание прогностической модели для оценки степени онкологического риска у пациентов с предопухолевыми заболеваниями гортани.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Уровень экспрессии генов в-субъединиц протеасом и кальпаинов возрастает в тканях при раке гортани и в эпителии гортани у больных с ХГЗГ, ассоциированными с диспластическими изменения лёгкой и тяжёлой степени по сравнению с ХГЗГфО).

2. Активность внутриклеточных протеасом увеличивается в диспластически измененном эпителии и опухолевой ткани по сравнению с условно-нормальной слизистой оболочкой гортани, а также в ткани рака гортани по сравнению с гиперплазией и дисплазией. Химотрипсинподобная активность циркулирующих протеасом возрастает в сыворотке крови пациентов с ПРГ по сравнению с ХГЗГ, сочетающимися с диспластическими изменениями, а также по сравнению с группой контроля.

3. Определение уровня экспрессии мРНК РБМБ5, ХТП активности внутриклеточных протеасом и активности кальпаинов в слизистой оболочке гортани с предопухолевыми изменениями позволяет прогнозировать риск развития рака гортани.

Степень достоверности результатов

Достоверность результатов проведенного исследования основана на достаточном объеме клинического материала, использовании современных методов молекулярно-биологического и биохимического анализа, а также адекватной и корректной статистической обработкой полученных данных.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Функционирование протеасом и кальпаинов при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани»

Апробация работы

Результаты исследований докладывались и обсуждались на Втором объединенном научном форуме «VI съезд физиологов СНГ. VI съезд биохимиков России. IX Российский симпозиум «Белки и пептиды» (Сочи-Дагомыс, 2019), XXII международной медико-биологической научной конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина. Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2019), Российской научно-практической

конференции, посвященной 40-летию НИИ онкологии Томского НИМЦ «Фундаментальная и клиническая онкология: достижения и перспективы развития» (Томск, 2019), конгрессе молодых учённых «Актуальные вопросы фундаментальной и клинической медицины» (Томск, 2020).

Публикации

По теме опубликовано 9 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.

Личный вклад автора

Личный вклад автора состоит в планировании и разработке дизайна исследования, формулировке цели и задач исследования, изучении и анализе литературы по теме диссертации, в самостоятельном определении экспрессии генов кальпаинов и протеасом в тканях, полученных от пациентов с предопухолевыми и опухолевыми заболеваниями гортани. В определении активности циркулирующих протеасом, активности внутриклеточных протеасом и кальпаинов в изучаемых тканях, исследовании активности и содержания а2-макроглобулина в сыворотке крови, оценке результатов исследования, их статистической обработке, интерпретации, а также подготовке научных публикаций и оформлении диссертации.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка сокращений и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 12 рисунками. Библиографический указатель содержит 205 источников, из них 27 отечественных и 178 зарубежных.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные представления о патогенезе предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани

Опухоли головы и шеи представляют собой совокупность злокачественных новообразований со сложной локальной автономией [82], что объясняет высокую заболеваемость и смертность от групп этих заболеваний. Одной из наиболее распространённых патологий среди заболеваний органов верхних дыхательных путей является рак гортани, который чаще всего возникает среди мужчин пожилого возраста. На момент постановки диагноза средний возраст пациента составляет 65 лет, а средний возраст на момент смерти - 68 лет [11; 112]. Согласно цифрам мировой онкологической статистики число впервые выявленных новообразований гортани в 2020 году составило 184 615 случаев, число летальных исходов - 99 840 [83]. В Российской Федерации число впервые выявленных новообразований гортани в 2019 году среди мужского населения составило 6347 случаев, среди женского - 567. Средний возраст пациентов мужского пола с впервые установленным диагнозом рак гортани составил 63,1 года, самые высокие показатели заболеваемости диагностировались у пациентов в возрасте от 55 до 74 лет. В Томской области заболеваемость раком гортани в 2019 году составила 53 случая (48 - мужчины, 5 - женщины). В структуре общей онкологической заболеваемости среди мужского населения рак гортани занимает 17-ое место (2021 г.), в Российской Федерации - 12-ое (2019 г.), в Томской области - 14-ое (2019 г.) [11; 83].

Наиболее частые симптомы злокачественных новообразований гортани являются осиплость голоса и боль в горле. Осиплость является самым первым признаком раннего рака гортани и хронических гиперпластических заболеваний [33]. К сожалению, у большинства пациентов диагноз ставится на поздних стадиях (т.е. более 75% на III стадии), когда консервативное лечение имеет

значительно меньшее благоприятное влияние на прогноз. 5-летняя выживаемость у пациентов, для которых возможно проведение лечения, составляет примерно 80% и 50% для рака голосовых складок и надгортанной области соответственно [33; 197].

Самое большое количество случаев рака гортани локализуется в голосовой области (примерно 60%), за которой следует надгортанная область (около 30%), в то время как трансгортанные и подсвязочные опухоли, как правило, встречаются реже [99]. Большинство злокачественных новообразований гортани (т.е. более 98%) представляют собой плоскоклеточные карциномы, а хондросаркомы, лейомиосаркомы и меланомы составляют только 2-5% всех злокачественных новообразований гортани. Среди плоскоклеточных карцином высоко - и умереннодифференцированные формы незначительно преобладают над низкодифференцированными опухолями, составляя 43,5% и 41,5% всех случаев соответственно [55; 197].

Гистологические и цитологические изменения плоскоклеточного эпителия, возникающие при различных генетических перестройках в процессе кацерогенеза головы и шеи, обозначаются как плоскоклеточные интраэпителиальные поражения. Этот термин включает в себя спектр всех эпителиальных изменений от реактивных поражений до карцином in situ [62]. Оценка степени тяжести дисплазии является наиболее широко используемой классификацией предопухолевых изменений, эпидемиологические исследования показали, что практически в 60% случаев рак гортани ассоциирован с различными воспалительными процессами, которые можно объединить в одну группу облигатного предрака [63]. Предопухолевые (предраковые) заболевания определяются как эпителиальные диспластические поражения, которые могут трансформироваться в рак in situ [100]. Группу облигатного предрака составляют различные хронические заболевания, такие как папилломатоз, хронический гиперпластический ларингит (ХГЛ) и дискератоз (лейкоплакия, эритроплакия, эритролейкоплакия), ассоциированные с диспластическими изменениями гортани [87; 100]. Хронический ларингит, лейкоплакия или, иногда, эритроплакия,

появляются в основном вдоль голосовых связок и, реже, в других частях гортани, таких как надгортанник, тогда как папиллома может быть диагностирована практически на всех структурах и отделах гортани [38; 191]. В эпителиальных клетках повреждение ДНК вызывает диспластические изменения, которые прогрессируют постепенно (легкая, умеренная, тяжелая степени) и в конечном итоге приводят к формированию рака in situ, с последующим развитием инвазивной формы [117; 132]. Единичные исследования свидетельствуют о том, что озлокачествление диспластических процессов гортани варьирует в зависимости от её степени: при лёгкой степени дисплазии эпителий трансформируется в 0-11% случаев, при умеренной — в 4-33% и при тяжёлой — в 10-57% [119]. Наличие дисплазии в слизистой оболочке гортани позволяет отнести пациента в группу онкологического риска. Однако необходимы дополнительные критерии прогноза развития предраковых изменений.

Основными мутагенными факторами риска, как уже было указанно выше, являются табак, алкоголь и ВПЧ роль которых за последнее десятилетие активно продемонстрирована на примере патологий органов головы и шеи [8; 103; 118; 121; 124]. Однако значимую роль в патогенезе предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани играют молекулярные механизмы и генетические нарушения, вовлечённые в процессы канцерогенеза. Ещё в 1986 году было заявлено, что во многих случаях ПРГ сверхэкспрессируется EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) [131]. Позже это было подтверждено множеством исследований в результате которых показано, что EGFR играет решающую роль при патологиях плоскоклеточного эпителия посредством передачи сигналов через пути Ras-MAPK (Ras-Mitogen-Activated Protein Kinase), PI3K-PTEN-AKT (Phosphatidylinositol3kinase-Phosphatase and tensin homolog-protein kinase B) и фосфолипазу C [88; 140]. EGF (Epidermal Growth Factor) связанный с EGFR также способен перемещаться в ядро и функционировать как фактор транскрипции или коактиватор других факторов [122; 123]. Молекулярная схема вокруг EGFR становится еще более сложной, поскольку было показано, что для ПРГ важен MET (tyrosine-protein kinase Met или hepatocyte growth factor receptor) [97]. MET

активирует пути AKT и Ras, взаимодействуя с EGFR-опосредованной передачей сигналов, тем самым влияя на рост, подвижность и ангиогенез опухолевых клеток [S5; 1S5]. Вместе эти данные подтверждают важную роль EGFR в канцерогенезе ПРГШ, в частности ПРГ.

Schmitt K. et al., (2019) в своих исследованиях установили, что нарушение функции RYR2 (Ryanodine Receptor 2) посредством соматических мутаций является типичным в патогенезе ПРГ [16З]. Кроме того, было обнаружено, что нонсенс-мутации FAT1 (FAT Atypical Cadherin 1) приводят к потере супрессии опухоли [76], в то время как Sun S. et al., (201S) сообщили, что образцы тканей плоскоклеточного рака демонстрируют устойчивую экспрессию/активацию STAT3 (Signal Transducer and Activator of Transcription 3), PI3K и AKT по сравнению с нормальным плоским эпителием [169].

В последнее время многочисленные исследования показали, что FGFR1 (Fibroblast Growth Factor Receptor 1) может способствовать прогрессированию и развитию опухоли, регулируя сигнальные пути и индуцируя выживание раковых клеток, пролиферацию и ангиогенез опухоли [192]. Связь между FGFR1 и плохим прогнозом показана при различных типах ПРГШ [77; 7S; S0]. Goke F. et al., (2013) продемонстрировали, что амплификация FGFR1 была частым событием при первичных и метастатических опухолях и что это может использоваться как индикатор плохого прогноза [79]. В свою очередь Dubot C. et al., (201S) показали, что амплификация FGFR1 связана с более низкой выживаемостью, и что она может использоваться в качестве прогностического биомаркера для пациентов с ПРГ [5S; 13S]. Следовательно, сверхэкспрессия FGFR1 может использоваться как маркер онкогенеза и как индикатор плохого прогноза [S6].

Белок p53 является ключевым супрессором во многих типах опухолей с множеством функций, включая индукцию p21 (ингибитора CDK (Cyclin-Dependent Kinases), который останавливает клеточный цикл). Белок р53 также является сильным индуктором апоптоза [104]. Ген TP53 часто находится в инактивируемом состоянии, соматические мутации обнаруживаются в 60-S0% ПРГ [41; S1; 102]. На основании анализа GEPIA (Gene Expression Profiling

Interactive Analysis) было подтверждено, что гены CDK1, DLGAP5, AURKA, TPX2, TTK, MELK, CDC45, CEP55, CDC6 и DIRC5 имеют выраженную экспрессию в опухолевых тканях, а избыточная экспрессия CDK1 и CDC45 является неблагоприятным прогностическим фактором у пациентов с ПРГ [89]. Высокая экспрессия CDK1 как на уровне мРНК, так и на уровне белка может происходить на ранних стадиях канцерогенеза, а сверхэкспрессия CDK1 связана со злокачественной трансформацией [73; 115; 152].

Убиквитин-протеасомная система может регулировать судьбу раковых клеток, модулируя проапоптотические факторы суперсемейства Bcl-2 (B-cell lymphoma 2). Mcl-1 (myeloid cell leukemia 1), антиапоптотический белок, необходим для выживания раковых клеток и, как сообщается, регулируется TRIM17, MULE и FBW7 E3-лигазами. Bim, другой проапоптотический белок, который регулирует индуцированные стрессом сигналы для основного апоптотического аппарата, как было доказано, регулируется убиквитин-протеасомной системой, опосредованной MAPK/ERK (Mitogen-Activated Protein Kinase/Extracellular signal-Regulated Kinase). Также токсическая передача сигналов TNF-a (Tumor Necrosis Factor) и других рецепторов смерти имеет множество сайтов, участвующих в протеасомной деградации [204].

Митотический клеточный цикл, клеточная адгезия и взаимодействия с экстраклеточным матриксом также играют важную роль в возникновении и прогрессировании ПРГ. Так, ингибитор LBH589 подавляет экспрессию митотических генов, вызывая остановку G2/M и гибель в клеточных линиях плоскоклеточного рака [184]. Хемокиновый рецептор 7 (CCR7) может регулировать адгезию и миграцию метастатических клеток ПРГ и служить потенциальной терапевтической мишенью [182]. Избыточная экспрессия и активация FAK (Focal Adhesion Kinase) была обнаружена во многих типах опухолей, включая ПРГ. Было показано, что ингибирование FAK вызывает остановку клеточного цикла и апоптоз и значительно снижает рост, инвазию и миграцию клеток в клеточных линиях плоскоклеточного рака [205].

Матриксные металлопротеиназы (ММП) являются членами суперсемейства цинк-эндопептидаз. Считается, что ММП играют важную роль в прогрессировании рака, ангиогенезе, инвазии, метастазировании и избегании иммунного надзора [18; 42; 157]. Показано, что в плоскоклеточных карциномах головы и шеи экспрессия ММП-1, -2, -9 и ТИМП-1 (тканевый ингибитор) значительно выше в строме по сравнению с опухолевыми клетками [15; 17]. Также Wieqand S. et al., (2005) была показана связь экспрессии ММП-2, ММП-3 и ММП-14 в плоскоклеточных карциномах головы и шеи с метастазированием [113]. Zhang L. et al., (2020) в своих работах говорит о постоянной сверхэкспрессии ММП-14 и её роли в процессах канцерогенеза [141].

Процесс онкогенеза ПРГШ, в частности ПРГ, включает как активацию продуктов протоонкогенов, которые стимулируют рост, так и инактивацию генов-супрессоров опухолей, продукты которых обычно подавляют пролиферацию клеток. Хотя механизм опухолевой трансформации от диспластических изменений до рака остаётся полностью не изученным, считается, что он представляет собой ступенчатый процесс, в котором за генетическими повреждениями следуют морфологические изменения в плоском эпителии [102; 103]. Трансформация в инвазивный рак зависит от множества факторов, таких как потребление табака и алкоголя, клинического типа, локализации процесса, степени дисплазии [31]. Специфические генетические изменения генов-супрессоров опухолей или протоонкогенов приводят к трансформации предракового поражения в рак. Нарушения путей TP53 и RB (Retinoblastoma Protein), которые контролируют рост клеток, играют важную роль в канцерогенезе органов головы и шеи [108]. В процессе злокачественной трансформации эпителия инактивируются гены RB и p53. Эти события приводят к нарушению регуляции клеточного цикла и ингибированию апоптоза, что в свою очередь приводит к иммортализации и накоплению генетических и эпигенетических мутаций, необходимых для дальнейших злокачественных изменений в онкогенезе ПРГ [100].

В исследованиях Manterola L. et al., (2018) продемонстрировано сравнение генетических изменений при непрогрессирующей и прогрессирующей дисплазии эпителиягортани. Показано,что мутации в генах FGFR3 и PIK3CA присутствовали при прогрессирующих поражениях и раке гортани, но отсутствовали при непрогрессирующей дисплазии эпителия гортани. С другой стороны, мутации в JAK3, MET и FBXW7 генах были обнаружены в непрогрессирующих поражениях. Р53 был наиболее часто мутирующим геном как в прогрессирующих, так и в непрогрессирующих случаях дисплазии [119].

Заслуживает внимания ряд работ, в которых показана информативность таких маркеров как p53, Ki67 и CD138 в качестве критериев риска развития злокачественного процесса при различной хронической воспалительной патологии гортани. Так, группой авторов было продемонстрировано значимое увеличение экспрессии р53 при диспластических изменениях I-III степени по сравнению с группой больных ХГЗГ (хроническими гиперпластическими заболеваниями гортани). Низкий уровень экспрессии Ki67 отмечался при наличии хронических заболеваний гортани без дисплазии. CD138 маркёр, отражает степень выраженности дифференцировки опухолевого процесса. При анализе его экспрессии была выявлена обратная закономерность по сравнению с изменениями уровней маркеров Ki67 и p53. Во всех группах пациентов с хронической воспалительной патологией гортани как при наличии диспластических изменений I и II степени слизистой оболочки, так и без таковых были зарегистрированы высокие показатели экспрессии маркера CD138 [22; 74].

Несмотря на актуальность проблемы, в доступной литературе имеются немногочисленные публикации об экспрессии и активности различных маркеров на этапах злокачественной трансформации в слизистой оболочке у пациентов с хроническими заболеваниями гортани, ассоциированными с предопухолевыми изменениями. Наличие дисплазии тяжелой степени в слизистой оболочке гортани позволяет отнести пациента в группу онкологического риска. Однако необходимы дополнительные критерии прогноза развития предраковых изменений. Механизмы патогенеза предопухолевых и опухолевых заболеваний представляют

собой большую гетерогенную группу рецепторов, факторов транскрипции, компонентов сигнальных путей. Протеолиз, опосредуемый убиквитин-протеасомной и кальпаиновой системами, является одним из важнейших процессов регуляции этих молекулярных механизмов, лежащих в основе канцерогенеза гортани.

1.2 Роль убиквитин-протеасомной системы в развитии предопухолевых и

опухолевых заболеваний гортани

1.2.1 Характеристика убиквитин-протеасомной системы

Убиквитин-протеасомная система специфического внутриклеточного протеолиза вовлечена в развитие и прогрессирование опухолей различных локализаций, тем самым является одной из наиболее значимых протеолитических систем организма. Раковые клетки находятся в сильной зависимости от деградации, опосредованной протеасомами [61; 198].

Убиквитин-протеасомная система представляет собой сложную схему, охватывающую огромное количество генов, в том числе те, которые кодируют 10 убиквитин-активирующих ферментов (E1), примерно 40 убиквитин-конъюгированных ферментов (E2), более 600 убиквитин-протеиновых лигаз (E3), около 100 деубиквитинирующих ферментов (DUB) и 50 протеасомных субъединиц [166]. Компоненты протеасомной системы в первую очередь отвечают за процессинг и деградацию белка в организме. Изначально белки-мишени подвергаются полиубиквитинированию, а затем разрушаются каталитическими субъединицами. Этот процесс опосредуется последовательной активацией нескольких ферментов, которые вызывают полиубиквитинирование белка, обеспечивая дальнейшее распознавание протеасомой и, в конечном итоге, сам протеолиз [57; 96; 168].

Убиквитин представляет собой небольшой белок с последовательностью из 76 остатков аминокислот. Он присутствует во всех клетках организма, при этом его структура отличается поразительной консервативностью, что свидетельствует в пользу широкого распространения убиквитин-зависимого протеолиза. Присоединение молекул убиквитина к субстрату осуществляется несколькими белками. На первом этапе происходит активация убиквитина убиквитин-активирующим ферментом Е1, затем убиквитин передается на убиквитин -коньюгирующий фермент Е2, на конечном этапе убиквитин-лигазы Е3 связывают убиквитин с белками, подлежащими протеолизу. «Мишенями» убиквитина служат многочисленные белки, моноубиквитинирование которых меняет активность, а полиубиквитинирование является сигналом для разрушения в протеасомах [159; 198].

Протеасомы представлены двумя типами: 20S -протеасомой, так называемой коровой (core) частицей, и 26S-протеасомой, содержащей в своём составе две регуляторные частицы 19S. Полный протеолиз происходит в 26S протеасоме, она представляет собой большой (более 2000 кДа) мультисубъединичный комплекс, присутствующий в ядре и цитоплазме всех эукариотических клеток. Именно 26S протеасома быстро разрушает белки, которые помечены для деградации убиквитином, так как 19S частицы способны распознавать убиквитинированные белки, а также расплетать их и проталкивать в протеолитическую камеру (20S), где в дальнейшем и происходит их разрушение. И раскрывание отверстия, и разворачивание субстрата требуют затрат метаболической энергии, для этого в «основании» 19S частицы присутствуют 9 субъединиц (Rpt1-6, Rpn1, 2, 13), 6 из которых обладают АТФазной активностью, и ещё 10 белков, связанных с а-субъединицами (Rpn3,5-12,15) [32]. Среди этих субъединиц Rpn2 является отличной мишенью для ингибирования протеасомы, поскольку мутации в этом белке могут полностью блокировать действие протеасомы [196]. Механизмы, лежащие в основе процессов открывания «крышки» протеасомы представлены в несколько этапов; С-конец АТФазы связывается с боксом в самой верхней части 20S, и, следовательно, развернутый белок попадает в каталитическую камеру для

разрушения. Связывание С-концевого домена АТФазы с этим боксом стимулирует открытие ворот протеасомы [69]. Фактически, крышка 19S частицы стимулирует ядро 20S к расщеплению белков. Основная функция частицы 19S -открытие ворот и пропускание белков в каталитическую камеру протеасомы [179]. Связывание а-колец с активаторами (РА700, РА28, РА200) способствует многократному увеличению протеасомной активности. Малые олигопептиды могут подвергаться деградации вне зависимости от состояния входа в протеасому, в то время как для расщепления более крупных полипептидов и полноразмерных белков функционирование и состояние а-колец является ключевым регуляторным фактором. Более 20% клеточных белков, в основном, белков с поврежденной третичной структурой, расщепляются непосредственно в 20S протеасомах, не связанных с активаторами [49]. При этом гидрофобный барьер протеасом преодолевается, вероятно, самими белками-субстратами, экспонирующими наружу гидрофобные фрагменты. В результате разрушения субстрата высвобождаются не только короткие пептиды, но и убиквитин, который может быть использован повторно [96; 159]. Комплекс 26S протеасомы состоит из 20S субъединицы, включающий 4 гептамерных кольца (а1-7; Р1 -7; Р1 -7; а1-7). Два внешних кольца, также называемые а-кольцами, образованы семью различными а-субъединицами и служат «якорными станциями» для регуляторных частиц 19S. ^концевые домены а-субъединиц формируют своеобразные ворота (пору), открывающие или закрывающие доступ для поступления в каталитическую полость субстрата, также а-субъединицы отвечают за узнавание субстрата. Каждое из двух внутренних в-колец образовано семью различными в-субъединицами и отвечает за протеолиз. Три из этих в-субъединиц (в1, в2 и в5, кодируемые генами PSMB6, PSMB7 и PSMB5, соответственно) проявляют специфическую субстратную каталитическую активность: каспазаподобную, трипсинподобную и химотрипсинподобную, соответственно [46; 128; 170; 201]. Альтернативными формами этих субъединиц являются иммунные субъединицы вН, в2i и в5i (LMP2, LMP10, LMP7), которые продуцируются в ответ на инвазивные сигналы, такие как цитокины, особенно у-интерферон (^N-7).

Протеасомы, содержащие эти субъединицы, называются иммунопротеасомами [90]. Замена конститутивных субъединиц на иммунные сопровождается изменением их специфичности, вследствие чего они продуцируют иммуногенные пептиды, презентируемые главным комплексом гистосовместимости класса I [170; 172].

Бета-субъединицы протеасомы участвуют в регуляции биологического развития иммунной системы. Например, матричный белок препятствует сборке иммунопротеасомы PSMB6 и позволяет инфицированным клеткам избежать обнаружения и активации иммунной системы [47]. Кроме субъединиц, обеспечивающих функциональную активность протеасом, в поддержании их структуры принимает участие субъединица ß7, кодируемая геном PSMB4. Установлено, что ß7 регулирует сборку протеасомы, и изменение в работе PSMB4 может нарушить каталитическую активность всех трех протеолитических субъединиц. Таким образом, ß7 может быть первой протеасомной субъединицей, функционирующей как онкобелок, и служить новой потенциальной терапевтической мишенью [56; 68].

20S протеасомы могут связываться с регуляторным комплексом, называемым 11S. Он представляет собой гептамерную структуру, которая не содержит АТФазы и имеет три субъединицы а и три субъединицы ß. Этот комплекс действует как крышка 19S [168; 178]. Важно то, что он может расщеплять только небольшие пептиды и не может расщеплять полный белок из -за своей неспособности разворачивать длинные белки. 11S также известен как REG, PA28 (активатор протеасомы 28) и PA26 (активатор протеасомы 26). Как правило, экспрессия комплекса 11S связана с продукцией иммунопротеинов в ответ на экспрессию IFN-y с образованием пептидов, связанных с главным комплексом гистосовместимости I (MHC I) при вирусных инфекциях [196]. 20S-протеасома обладает каталитической активностью. Если в роли регуляторной частицы выступает белковый комплекс РА28, то такая ассоциация представляет собой активированную 20S-протеасому, которая расщепляет до 20% внутриклеточных белков и пептидов [35]. Более того, в последнее время

считается, что неактивированная 20S-протеасома также может принимать участие в деградации белков [183]. 20S-протеасома расщепляет белки, которые содержат частично развернутые области и способны проникать в ее каталитическую камеру. К ним относятся белки с поврежденной структурой из-за старения, мутаций или окисления и белки, в которых развернутые области являются их неотъемлемой чертой [36; 151]. Показано влияние 20S-протеасом на сохранение равновесия белкового состава клеток, влияние на процессы трансляции и участие в посттрансляционной модификации белков, которая существенно меняет их активность [126].

Циркулирующие формы протеасом (преимущественно 20S) присутствуют во внеклеточных жидкостях и крови здоровых и больных людей [54]. Они представляют собой потенциальные диагностические биомаркеры для различных злокачественных новообразований таких как меланома, множественная миелома, эпителиальный рак яичников и гепатоцеллюлярная карцинома [175]. Данные масс-спектрометрического анализа показали, что в составе внеклеточной популяции протеасом присутствуют все субъединицы 20S протеасом и субъединицы 19S регуляторного комплекса. Кроме того, циркулирующие протеасомы, выделенные из плазмы здоровых доноров, по форме и размеру сходны с 20S протеасомами, выделенными из эритроцитов, обладают протеолитической активностью, содержат стандартные и иммунные субъединицы. Принимая во внимание тот факт, что кровь содержит малое количество молекул АТФ, которые нужны для ассоциации между 20S и 19S субъединицами, можно предположить, что внеклеточные протеасомы циркулируют в свободной 20 S форме в плазме крови человека. Эта возможность предполагает защитную функцию 20 S протеасом в удалении потенциально вредных неправильно свернутых белков во внеклеточном пространстве [52; 54; 70]. Choi W. et al., (2021) предполагают, что циркулирующие протеасомы в плазме могут проявлять ферментативную активность, отличную от активности внутриклеточных протеасом. Например, 20 S протеасомы с ограниченной протеолитической активностью могут катализировать частичное расщепление неупорядоченных (или окисленных) белков плазмы, некоторые

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сиденко Евгения Александровна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Активность протеасом в опухолях женской репродуктивной системы / И. В. Кондакова, Л. В. Спирина, Е. Е. Шашова [и др.] // Биоорганическая Химия. -2012. - Т. 38. - № 1. - С. 106.

2. Активность протеасом в тканях злокачественных опухолей различных локализаций / Л. В. Спирина, И. В. Кондакова, Е. А. Усынин [и др.] // Сибирский онкологический журнал. - 2009. - № 5. - С. 49-52.

3. Активность протеасом и их субъединичный состав при гиперпластических процессах и раке эндометрия / Л. В. Спирина, И. В. Кондакова, Л. А. Коломиец [и др.] // Опухоли женской репродуктивной системы. - 2011. - № 4. - С. 64-68.

4. Активность протеасом и их субъединичный состав при раке почки и мочевого пузыря / Л. В. Спирина, И. В. Кондакова, Е. А. Усынин, Н. П. Шарова // Онкоурология. - 2010. - № 3. - С. 12-15.

5. Активность протеасом и кальпаинов при новообразованиях эндометрия / В. Д. Коваль, Л. В. Спирина, И. В. Кондакова [и др.] // Молекулярная медицина. -2012. - № 4. - С. 45-48.

6. Бондарева Л. А. Молекулярная эволюция внутриклеточных Са2+ -зависимых протеиназ / Л. А. Бондарева, Н. Н. Немова // Биоорганическая Химия. - 2008. - Т. 34. - № 3. - С. 295-302.

7. Бочкарева Н. В. Роль актинсвязывающих белков в клеточном движении в норме и при опухолевом росте / Н. В. Бочкарева, И. В. Кондакова, Л. А. Коломиец // Молекулярная Медицина. - 2011. - № 6. - С. 14-16.

8. Вирус папилломы человека и злокачественные новообразования головы и шеи (обзор литературы) / А. М. Певзнер, М. М. Цыганов, М. К. Ибрагимова, Н. В. Литвяков // Опухоли головы и шеи. - 2019. - Т. 9. - № 2. - С. 43-52.

9. Внутриклеточный и циркулирующий пулы протеасом: значение при злокачественных новообразованиях различных локализаций / Е. Е. Шашова, Е. С. Колегова, И. В. Кондакова, А. А. Завьялов // Сибирский онкологический журнал.

- 2015. - Внутриклеточный и циркулирующий пулы протеасом. - № 6. - С. 76-82.

10. Дворянинова О. Ю. Клинические аспекты ВПЧ-позитивного рака ротовой полости и ротоглотки / О. Ю. Дворянинова, Е. Л. Чойнзонов, Н. В. Литвяков // Вестник Оториноларингологии. - 2016. - Т. 81. - № 1. - С. 72-77.

11. Злокачественные новообразования в России в 2019 году (заболеваемость и смертность) / А. Д. Каприн, В. В. Старинский, А. О. Шахзадова ред. . - МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии», 2020. - 252 с.

12. Зорин Н. А. Роль белков семейства макроглобулинов в регуляции опухолевого роста / Н. А. Зорин, В. Н. Зорина, Р. М. Зорина // Онтогенез. - 2006. -Т. 37. - № 1. - С. 12-19.

13. Изменение активности протеасом и кальпаинов при метастазировании рака легкого и рака молочной железы человека / Е. Е. Шашова, Е. С. Колегова, А. А. Завьялов [и др.] // Бюллетень Экспериментальной Биологии И Медицины. - 2017.

- Т. 163. - № 4. - С. 486-489.

14. Изменение химотрипсинподобной и каспазоподобной активностей протеасом в зависимости от степени распространенности рака молочной железы / Е. Е. Шашова, И. В. Кондакова, Е. М. Слонимская [и др.] // Сибирский онкологический журнал. - 2013. - № 5 (59). - С. 45-49.

15. Какурина Г. В. Компоненты системы деградома в прогрессии плоскоклеточных карцином головы и шеи / Г. В. Какурина, И. В. Кондакова, Е. Л. Чойнзонов // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2015. - Т. 70. -№ 6. - С. 684-693.

16. Осипов В. Д. Значение клинических и параклинических показателей при оценке эффективности лечения предрака и ранних стадий рака гортани / В. Д. Осипов // Сибирский онкологический журнал. - 2003. - № 2. - С. 47-49.

17. Патогенетическая значимость системы матриксных металлопротеиназ при плоскоклеточном раке головы и шеи / И. В. Кондакова, Е. В. Клишо, О. В. Савенкова [и др.] // Сибирский онкологический журнал. - 2011. - № 1. - С. 29-33.

18. Прогностическая значимость протеаз у больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи / Е. В. Клишо, И. В. Кондакова, Е. Л. Чойнзонов, О. С. Васильева // Сибирский научный медицинский журнал. - 2005. - № 2. - С. 82-91.

19. Продукция провоспалительных цитокинов и альфа-2-макроглобулина клетками периферической крови больных колоректальным раком / В. Н. Зорина, Н. В. Промзелева, Н. А. Зорин [и др.] // Медицинская иммунология. - 2016. -

Т. 18. - № 5. - С. 483-488.

20. Современный взгляд на комплексный подход к диагностике, лечению и реабилитации больных раком гортани / М. Р. Мухамедов, О. В. Черемисина, Е. Л. Чойнзонов [и др.] // Российская оториноларингология. - 2012. - № 3. - С. 78-84.

21. Спирина Л. В. Роль внутриклеточного специфического протеолиза в онкогенезе / Л. В. Спирина, И. В. Кондакова // Вопросы Онкологии. - 2008. -Т. 54. - № 6. - С. 690-694.

22. Характер экспрессии маркеров пролиферативной активности, апоптоза и клеточной дифференцировки при предраке и раке гортани / О. В. Черемисина, О. В. Панкова, К. Ю. Меньшиков, Е. Л. Чойнзонов // Сибирский онкологический журнал. - 2015. - № 5. - С. 74-79.

23. Химотрипсинподобная активность и субъединичный состав протеасом в злокачественных опухолях человека / И. В. Кондакова, Л. В. Спирина, В. Д. Коваль [и др.] // Молекулярная биология. - 2014. - Т. 48. - № 3. - С. 444-451.

24. Химотрипсинподобная активность протеасом и общая активность кальпаинов при раке желудка и толстой кишки / Э. В. Иванова, И. В. Кондакова, Л. В. Спирина [и др.] // Бюллетень Экспериментальной Биологии И Медицины. -2014. - Т. 157. - № 6. - С. 753-756.

25. Циркулирующие актин-связывающие белки при прогрессировании рака гортани и гортаноглотки / Г. В. Какурина, Е. Е. Шашова, О. В. Черемисина [и др.] // Сибирский онкологический журнал. - 2020. - Т. 19. - № 4. - С. 88-93.

26. Циркулирующие протеасомы в патогенезе плоскоклеточного рака головы и шеи / Г. В. Какурина, О. В. Черемисина, Е. Л. Чойнзонов, И. В. Кондакова // Бюллетень Экспериментальной Биологии И Медицины. - 2017. - Т. 163. - № 1. -С. 108-111.

27. Черемисина О. В. Возможности эндоскопической диагностики предопухолевых заболеваний и рака гортани в современной онкологии / О. В. Черемисина, Е. Л. Чойнзонов // Сибирский онкологический журнал. - 2007. - № 3.

- С. 5-9.

28. 26 S proteasome-mediated production of an authentic major histocompatibility class I-restricted epitope from an intact protein substrate / S. Ben-Shahar, A. Komlosh, E. Nadav [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 1999. - Vol. 274. - № 31. -P. 21963-21972.

29. A mutant-p53/Smad complex opposes p63 to empower TGF^-induced metastasis / M. Adorno, M. Cordenonsi, M. Montagner [et al.] // Cell. - 2009. - Vol. 137. - № 1. -P. 87-98.

30. Advances in the management of HPV-related oropharyngeal cancer / F. De Felice, V. Tombolini, V. Valentini [et al.] // Journal of Oncology. - 2019. - Vol. 2019.

- P. 9173729.

31. Alfouzan A. F. Head and neck cancer pathology: Old world versus new world disease / A. F. Alfouzan // Nigerian Journal of Clinical Practice. - 2019. - Vol. 22. -Head and neck cancer pathology. - № 1. - P. 1-8.

32. An archaebacterial ATPase, homologous to ATPases in the eukaryotic 26 S proteasome, activates protein breakdown by 20 S proteasomes * / P. Zwickl, D. Ng, K. M. Woo [et al.] // Journal of Biological Chemistry. - 1999. - Vol. 274. - № 37. -

P. 26008-26014.

33. An update on larynx cancer / C. E. Steuer, M. El-Deiry, J. R. Parks [et al.] // CA: a cancer journal for clinicians. - 2017. - Vol. 67. - № 1. - P. 31-50.

34. Assessment of proteasome concentration and chymotrypsin-like activity in plasma of patients with newly diagnosed multiple myeloma / A. Oldziej, L. Bolkun, M. Galar [et al.] // Leukemia Research. - 2014. - Vol. 38. - № 8. - P. 925-930.

35. Baugh J. M. Proteasomes can degrade a significant proportion of cellular proteins independent of ubiquitination / J. M. Baugh, E. G. Viktorova, E. V. Pilipenko // Journal of Molecular Biology. - 2009. - Vol. 386. - № 3. - P. 814-827.

36. Ben-Nissan G. Regulating the 20S proteasome ubiquitin-independent degradation pathway / G. Ben-Nissan, M. Sharon // Biomolecules. - 2014. - Vol. 4. - № 3. - P. 862884.

37. Borth W. Alpha 2-macroglobulin, a multifunctional binding protein with targeting characteristics / W. Borth // FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. - 1992. - Vol. 6. - № 15. -P. 3345-3353.

38. Boy S. C. Leukoplakia and erythroplakia of the oral mucosa - a brief overview : clinical review / S. C. Boy // South African Dental Journal. - 2012. - Vol. 67. - № 10. -P. 558-560.

39. Calpain-2 expression is associated with response to platinum based chemotherapy, progression-free and overall survival in ovarian cancer / S. J. Storr, S. Safuan, C. M. Woolston [et al.] // Journal of Cellular and Molecular Medicine. - 2012. - Vol. 16. - № 10. - P. 2422-2428.

40. Calpains and cancer: Friends or enemies? / D. Moretti, B. Del Bello, G. Allavena, E. Maellaro // Archives of Biochemistry and Biophysics. - 2014. - Vol. 564. - Calpains and cancer. - P. 26-36.

41. Cancer genome landscapes / B. Vogelstein, N. Papadopoulos, V. E. Velculescu [et al.] // Science (New York, N.Y.). - 2013. - Vol. 339. - № 6127. - P. 1546-1558.

42. Cancer-derived matrix metalloproteinase-9 contributes to tumor tolerance / B.-Q. Wang, C.-M. Zhang, W. Gao [et al.] // Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. - 2011. - Vol. 137. - № 10. - P. 1525-1533.

43. Carragher N. O. Calpain activity is generally elevated during transformation but has oncogene-specific biological functions / N. O. Carragher, B. D. Fonseca, M. C. Frame // Neoplasia. - 2004. - Vol. 6. - № 1. - P. 53-73.

44. Cater J. H. Alpha-2-macroglobulin, a hypochlorite-regulated chaperone and immune system modulator / J. H. Cater, M. R. Wilson, A. R. Wyatt // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. - 2019. - Vol. 2019. - P. 5410657.

45. CD31 and VEGF are prognostic biomarkers in early-stage, but not in late-stage, laryngeal squamous cell carcinoma / A. Schlüter, P. Weller, O. Kanaan [et al.] // BMC cancer. - 2018. - Vol. 18. - № 1.

46. Changes in proteasome pool in human papillary thyroid carcinoma development / N. Sharova, T. Astakhova, Y. Karpova [et al.] // Open Life Sciences. - 2011. - Vol. 6. -№ 4. - P. 486-496.

47. Characterization of the interaction between the matrix protein of vesicular stomatitis virus and the immunoproteasome subunit LMP2 / F. Beilstein, L. Obiang, H. Raux, Y. Gaudin // Journal of Virology. - 2015. - Vol. 89. - № 21. - P. 11019-11029.

48. Chen H. Targeting oncogenic Myc as a strategy for cancer treatment / H. Chen, H. Liu, G. Qing // Signal Transduction and Targeted Therapy. - 2018. - Vol. 3. - P. 5.

49. Chowdhury M. Intracellular dynamics of the ubiquitin-proteasome-system / M. Chowdhury, C. Enenkel // F1000Research. - 2015. - Vol. 4. - P. 367.

50. Chumakov P. M. Versatile functions of p53 protein in multicellular organisms / P. M. Chumakov // Biochemistry (Moscow). - 2007. - Vol. 72. - № 13. - P. 13991421.

51. Chymotrypsin-like activity and subunit composition of proteasomes in human cancers / I. V. Kondakova, L. V. Spirina, V. D. Koval [et al.] // Molecular Biology. -2014. - Vol. 48. - № 3. - P. 384-389.

52. Circulating 20S proteasome in patients with non-metastasized breast cancer / O. Hoffmann, M. Heubner, T. Anlasik [et al.] // Anticancer Research. - 2011. - Vol. 31. -№ 6. - P. 2197-2201.

53. Circulating proteasomes are functional and have a subtype pattern distinct from 20S proteasomes in major blood cells / A. Zoeger, M. Blau, K. Egerer [et al.] // Clinical Chemistry. - 2006. - Vol. 52. - № 11. - P. 2079-2086.

54. Circulating proteasomes in the pathogenesis of head and neck squamous cell carcinoma / G. V. Kakurina, O. V. Cheremisina, E. L. Choinzonov, I. V. Kondakova // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. - 2017. - Vol. 163. - № 1. - P. 92-94.

55. Clinical, histological and immunohistochemical evaluation of larynx cancer / M. S. Ciolofan, A. N. Vlaescu, C.-A. Mogoanta [et al.] // Current Health Sciences Journal. - 2017. - Vol. 43. - № 4. - P. 367-375.

56. Comparative oncogenomics identifies PSMB4 and SHMT2 as potential cancer driver genes / G. Y. Lee, P. M. Haverty, L. Li [et al.] // Cancer Research. - 2014. -Vol. 74. - № 11. - P. 3114-3126.

57. Comprehensive analysis of ubiquitin-proteasome system genes related to prognosis and immunosuppression in head and neck squamous cell carcinoma / J. Wang, J. Li, L. Zhang [et al.] // Aging (Albany NY). - 2021. - Vol. 13. - № 16. -P. 20277-20301.

58. Comprehensive genomic profiling of head and neck squamous cell carcinoma reveals FGFR1 amplifications and tumour genomic alterations burden as prognostic biomarkers of survival / C. Dubot, V. Bernard, M. P. Sablin [et al.] // European Journal of Cancer (Oxford, England: 1990). - 2018. - Vol. 91. - P. 47-55.

59. Concept and application of circulating proteasomes / W. H. Choi, S. Kim, S. Park, M. J. Lee // Experimental & Molecular Medicine. - 2021. - Vol. 53. - № 10. -P. 1539-1546.

60. Cosway B. Laryngeal dysplasia: an evidence-based flowchart to guide management and follow up / B. Cosway, V. Paleri // The Journal of Laryngology and Otology. - 2015. - Vol. 129. - № 6. - P. 598-599.

61. Current approach and novel perspectives in nasopharyngeal carcinoma: the role of targeting proteasome dysregulation as a molecular landmark in nasopharyngeal cancer / R. Yarza, M. Bover, M. T. Agulló-Ortuño, L. C. Iglesias-Docampo // Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. - 2021. - Vol. 40. - № 1. - P. 202.

62. Current review on squamous intraepithelial lesions of the larynx / N. Gale, L. Michaels, B. Luzar [et al.] // Histopathology. - 2009. - Vol. 54. - № 6. - P. 639-656.

63. Current views and perspectives on classification of squamous intraepithelial lesions of the head and neck / N. Gale, N. Zidar, M. Poljak, A. Cardesa // Head and Neck Pathology. - 2014. - Vol. 8. - № 1. - P. 16-23.

64. Cyclin E in breast tumors is cleaved into its low molecular weight forms by calpain / X. D. Wang, J. L. Rosales, A. Magliocco [et al.] // Oncogene. - 2003. -Vol. 22. - № 5. - P. 769-774.

65. Deciphering the coagulation profile through the dynamics of thrombin activity / R. M. W. de Laat-Kremers, Q. Yan, M. Ninivaggi [et al.] // Scientific Reports. - 2020. -Vol. 10. - № 1. - P. 12544.

66. Differential ubiquitination defines the functional status of the tumor suppressor Smad4 * / A. Moren, U. Hellman, Y. Inada [et al.] // Journal of Biological Chemistry. -2003. - Vol. 278. - № 35. - P. 33571-33582.

67. Disruption of transforming growth factor ß-Smad signaling pathway in head and neck squamous cell carcinoma as evidenced by mutations of SMAD2 and SMAD4 / W. Qiu, F. Schönleben, X. Li, G. H. Su // Cancer Letters. - 2007. - Vol. 245. - № 1. -

P. 163-170.

68. Dissecting ß-ring assembly pathway of the mammalian 20S proteasome / Y. Hirano, T. Kaneko, K. Okamoto [et al.] // The EMBO Journal. - 2008. - Vol. 27. -№ 16. - P. 2204-2213.

69. Docking of the proteasomal ATPases' carboxyl termini in the 20S proteasome's a ring opens the gate for substrate entry / D. M. Smith, S.-C. Chang, S. Park [et al.] // Molecular Cell. - 2007. - Vol. 27. - № 5. - P. 731-744.

70. Dwivedi V. Beyond cells: The extracellular circulating 20S proteasomes / V. Dwivedi, K. Yaniv, M. Sharon // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Basis of Disease. - 2021. - Vol. 1867. - № 3. - P. 166041.

71. Endothelial cell calpain as a critical modulator of angiogenesis / Y. Zhang, N. M. Liu, Y. Wang [et al.] // Biochimica Et Biophysica Acta. Molecular Basis of Disease. -2017. - Vol. 1863. - № 6. - P. 1326-1335.

72. Enriched housing promotes post-stroke neurogenesis through calpain 1-STAT3/HIF-1 a/VEGF signaling / X. Wu, S. Liu, Z. Hu [et al.] // Brain Research Bulletin. - 2018. - Vol. 139. - P. 133-143.

73. Evaluation of correlation of cell cycle proteins and Ki-67 interaction in paranasal sinus inverted papilloma prognosis and squamous cell carcinoma transformation / Y. -A. Tsou, H.-J. Huang, T.-C. Wang [et al.] // BioMed Research International. - 2014. -Vol. 2014. - P. 634945.

74. Expression of Ki67 and P53 in primary squamous cell carcinoma of the larynx / M. J. Ashraf, M. Maghbul, N. Azarpira, B. Khademi // Indian Journal of Pathology and Microbiology. - 2010. - Vol. 53. - № 4. - P. 661.

75. Expression of vascular endothelial growth factor and transcription factors HIF-1, NF-kB expression in squamous cell carcinoma of head and neck; association with proteasome and calpain activities / L. V. Spirina, I. V. Kondakova, E. L. Choynzonov [et al.] // Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. - 2013. - Vol. 139. - № 4. - P. 625-633.

76. FAT1 somatic mutations in head and neck carcinoma are associated with tumor progression and survival / S.-C. Lin, L.-H. Lin, S.-Y. Yu [et al.] // Carcinogenesis. -2018. - Vol. 39. - № 11. - P. 1320-1330.

77. FGF-2 and FGFR-1 might be independent prognostic factors in oral tongue squamous cell carcinoma / B. A. L. A. Mariz, C. D. Soares, M. G. F. de Carvalho, J. Jorge-Júnior // Histopathology. - 2019. - Vol. 74. - № 2. - P. 311-320.

78. Fibroblast growth factor receptor 1 amplification in laryngeal squamous cell carcinoma / J. Monico, B. Miller, L. Rezeanu [et al.] // PloS One. - 2018. - Vol. 13. -№ 1. - P. e0186185.

79. Fibroblast growth factor receptor 1 amplification is a common event in squamous cell carcinoma of the head and neck / F. Göke, M. Bode, A. Franzen [et al.] // Modern

Pathology: An Official Journal of the United States and Canadian Academy of Pathology, Inc. - 2013. - Vol. 26. - № 10. - P. 1298-1306.

80. Fibroblast growth factor receptor 1 and 3 expression is associated with regulatory PI3K/AKT kinase activity, as well as invasion and prognosis, in human laryngeal cancer / K. Starska, E. Forma, I. Lewy-Trenda [et al.] // Cellular Oncology (Dordrecht).

- 2018. - Vol. 41. - № 3. - P. 253-268.

81. Gain-of-function mutant p53 but not p53 deletion promotes head and neck cancer progression in response to oncogenic K-ras / S. Acin, Z. Li, O. Mejia [et al.] // The Journal of Pathology. - 2011. - Vol. 225. - № 4. - P. 479-489.

82. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries / F. Bray, J. Ferlay, I. Soerjomataram [et al.] // CA: A Cancer Journal for Clinicians. - 2018. - Vol. 68. - № 6. - P. 394-424.

83. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries / H. Sung, J. Ferlay, R. L. Siegel [et al.] // CA: A Cancer Journal for Clinicians. - 2021. - Vol. 71. - № 3. - P. 209-249.

84. Gopal U. Activated a2-macroglobulin regulates transcriptional activation of c-MYC target genes through cell surface GRP78 protein * / U. Gopal, M. Gonzalez-Gronow, S. V. Pizzo // Journal of Biological Chemistry. - 2016. - Vol. 291. - № 20. -P. 10904-10915.

85. HGF and c-Met participate in paracrine tumorigenic pathways in head and neck squamous cell cancer / L. M. Knowles, L. P. Stabile, A. M. Egloff [et al.] // Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research.

- 2009. - Vol. 15. - № 11. - P. 3740-3750.

86. Hu Y. Prognostic value of FGFR1 expression and amplification in patients with HNSCC: A systematic review and meta-analysis / Y. Hu, L.-S. Ai, L.-Q. Zhou // PloS One. - 2021. - Vol. 16. - № 5. - P. e0251202.

87. Hu Y. [Histopathological variability and the prognosis of laryngeal premalignant lesions] / Y. Hu, H. Liu // Chinese Journal of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery. - 2014. - Vol. 49. - № 12. - P. 979-985.

88. Hynes N. E. ERBB receptors and cancer: the complexity of targeted inhibitors / N. E. Hynes, H. A. Lane // Nature Reviews. Cancer. - 2005. - Vol. 5. - № 5. - P. 341354.

89. Identification of potential core genes and pathways predicting pathogenesis in head and neck squamous cell carcinoma / M. Wang, B. Zhong, M. Li [et al.] // Bioscience Reports. - 2021. - Vol. 41. - № 5.

90. Immunoproteasome induction is suppressed in hepatitis C virus-infected cells in a protein kinase R-dependent manner / I. S. Oh, K. Textoris-Taube, P. S. Sung [et al.] // Experimental & Molecular Medicine. - 2016. - Vol. 48. - № 11. - P. e270.

91. Increased expression of calpain 6 in uterine sarcomas and carcinosarcomas: an immunohistochemical analysis / S.-J. Lee, Y.-L. Choi, E.-J. Lee [et al.]. - Text: electronic // International Journal of Gynecologic Cancer. - 2007. - Vol. 17. - Increased expression of calpain 6 in uterine sarcomas and carcinosarcomas. - № 1. - URL: https://ijgc.bmj.com/content/17/1/248 (date accessed: 08.12.2021).

92. Interference with PSMB4 expression exerts an anti-tumor effect by decreasing the invasion and proliferation of human glioblastoma cells / Y.-C. Cheng, W.-C. Tsai, Y.-C. Sung [et al.] // Cellular Physiology and Biochemistry. - 2018. - Vol. 45. - № 2. -

P. 819-831.

93. Isolation of Two Novel Genes, Down-regulated in Gastric Cancer / Y. Yoshikawa, H. Mukai, F. Hino [et al.] // Japanese Journal of Cancer Research. - 2000. -Vol. 91. - № 5. - P. 459-463.

94. Khan S. A. Oxidized caprine alpha-2-macroglobulin: damaged but not completely dysfunctional / S. A. Khan, F. H. Khan // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) -General Subjects. - 2004. - Vol. 1674. - № 2. - P. 139-148.

95. Kimura Y. Calpain-dependent proteolysis of NF2 protein: Involvement in schwannomas and meningiomas / Y. Kimura, H. Saya, M. Nakao // Neuropathology. -2000. - Vol. 20. - № 3. - P. 153-160.

96. Kish-Trier E. Structural biology of the proteasome / E. Kish-Trier, C. P. Hill // Annual Review of Biophysics. - 2013. - Vol. 42. - P. 29-49.

97. Knudsen B. S. Showering c-MET-dependent cancers with drugs / B. S. Knudsen, G. Vande Woude // Current Opinion in Genetics & Development. - 2008. - Vol. 18. -№ 1. - P. 87-96.

98. Kunjappu M. J. Assembly of the 20S proteasome / M. J. Kunjappu, M. Hochstrasser // Biochimica Et Biophysica Acta. - 2014. - Vol. 1843. - № 1. - P. 2-12.

99. Laryngeal cancer: epidemiological data from Northern Greece and review of the literature / K. Markou, A. Christoforidou, I. Karasmanis [et al.] // Hippokratia. - 2013. -Vol. 17. - № 4. - P. 313-318.

100. Laryngeal squamous intraepithelial lesions: an updated review on etiology, classification, molecular changes, and treatment / N. Gale, D. R. Gnepp, M. Poljak [et al.] // Advances in Anatomic Pathology. - 2016. - Vol. 23. - № 2. - P. 84-91.

101. Latent TGF-в structure and activation / M. Shi, J. Zhu, R. Wang [et al.] // Nature. - 2011. - Vol. 474. - № 7351. - P. 343-349.

102. Leemans C. R. The molecular biology of head and neck cancer / C. R. Leemans, B. J. M. Braakhuis, R. H. Brakenhoff // Nature Reviews Cancer. - 2011. - Vol. 11. -№ 1. - P. 9-22.

103. Leemans C. R. The molecular landscape of head and neck cancer / C. R. Leemans, P. J. F. Snijders, R. H. Brakenhoff // Nature Reviews. Cancer. - 2018. -Vol. 18. - № 5. - P. 269-282.

104. Levine A. J. The first 30 years of p53: growing ever more complex / A. J. Levine, M. Oren // Nature Reviews. Cancer. - 2009. - Vol. 9. - № 10. - P. 749-758.

105. Liu K. Antisense RNA-mediated deficiency of the Calpain protease, nCL-4, in NIH3T3 cells is associated with neoplastic transformation and tumorigenesis * / K. Liu, L. Li, S. N. Cohen // Journal of Biological Chemistry. - 2000. - Vol. 275. - № 40. -

P. 31093-31098.

106. Livak K. J. Analysis of relative gene expression data using Real-Time Quantitative PCR and the 2-AACT method / K. J. Livak, T. D. Schmittgen // Methods. - 2001. - Vol. 25. - № 4. - P. 402-408.

107. Long term follow-up study of laryngeal precancer / J. Plch, I. Par, I. Navratilova [et al.] // Auris Nasus Larynx. - 1998. - Vol. 25. - № 4. - P. 407-412.

108. Loss of heterozygosity (LOH) profiles—validated risk predictors for progression to oral cancer / L. Zhang, C. F. Poh, M. Williams [et al.] // Cancer Prevention Research (Philadelphia, Pa.). - 2012. - Vol. 5. - № 9. - P. 1081-1089.

109. Mandal S. Survival prediction of head and neck squamous cell carcinoma using machine learning models / S. Mandal, A. Gupta, W. P. Chanu. - Text: electronic // arXiv:2105.07390 [q-bio]. - 2021. - URL: http://arxiv.org/abs/2105.07390 (date accessed: 21.06.2021).

110. Marur S. Head and neck squamous cell carcinoma: update on epidemiology, diagnosis, and treatment / S. Marur, A. A. Forastiere // Mayo Clinic Proceedings. -2016. - Vol. 91. - № 3. - P. 386-396.

111. Massague J. TGFß signalling in context / J. Massague // Nature Reviews Molecular Cell Biology. - 2012. - Vol. 13. - № 10. - P. 616-630.

112. Megwalu U. C. Survival outcomes in advanced laryngeal cancer / U. C. Megwalu, A. G. Sikora // JAMA otolaryngology-- head & neck surgery. - 2014. -Vol. 140. - № 9. - P. 855-860.

113. Metaanalysis of the significance of matrix metalloproteinases for lymph node disease in patients with head and neck squamous cell carcinoma / S. Wiegand, A. A. Dünne, H. H. Müller [et al.] // Cancer. - 2005. - Vol. 104. - № 1. - P. 94-100.

114. Meyer C. Human a2-macroglobulin—another variation on the Venus Flytrap / C. Meyer, W. Hinrichs, U. Hahn // Angewandte Chemie International Edition. - 2012. -Vol. 51. - № 21. - P. 5045-5047.

115. Microarray gene expression analysis of tumorigenesis and regional lymph node metastasis in laryngeal squamous cell carcinoma / M. Lian, J. Fang, D. Han [et al.] // PloS One. - 2013. - Vol. 8. - № 12. - P. e84854.

116. Modulation of the activity of calcium-activated neutral proteases (calpains) in chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells / J. M. Witkowski, E. Zmuda-Trzebiatowska, J. M. Swiercz [et al.] // Blood. - 2002. - Vol. 100. - № 5. - P. 18021809.

117. Mutational heterogeneity in cancer and the search for new cancer-associated genes / M. S. Lawrence, P. Stojanov, P. Polak [et al.] // Nature. - 2013. - Vol. 499. -№ 7457. - P. 214-218.

118. Mutational load and mutational patterns in relation to age in head and neck cancer / S. Meucci, U. Keilholz, I. Tinhofer, O. A. Ebner // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7. -

№ 43. - P. 69188-69199.

119. Mutational profiling can identify laryngeal dysplasia at risk of progression to invasive carcinoma / L. Manterola, P. Aguirre, E. Larrea [et al.] // Scientific Reports. -2018. - Vol. 8. - № 1. - P. 6613.

120. Nakayama K.-I. Regulation of the cell cycle at the G1-S transition by proteolysis of cyclin E and p27Kip1 / K.-I. Nakayama, S. Hatakeyama, K. Nakayama // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2001. - Vol. 282. - № 4. -P. 853-860.

121. Nonkeratinizing squamous cell carcinoma in situ of the upper aerodigestive tract: an HPV-related entity / L. Zhang, J. S. Lewis, S. K. El-Mofty [et al.] // Head and Neck Pathology. - 2017. - Vol. 11. - № 2. - P. 152-161.

122. Nuclear interaction of EGFR and STAT3 in the activation of the iNOS/NO pathway / H.-W. Lo, S.-C. Hsu, M. Ali-Seyed [et al.] // Cancer Cell. - 2005. - Vol. 7. -№ 6. - P. 575-589.

123. Nuclear localization of EGF receptor and its potential new role as a transcription factor / S. Y. Lin, K. Makino, W. Xia [et al.] // Nature Cell Biology. - 2001. - Vol. 3. -№ 9. - P. 802-808.

124. Obid R. The treatment of laryngeal cancer / R. Obid, M. Redlich, C. Tomeh // Oral and Maxillofacial Surgery Clinics of North America. - 2019. - Vol. 31. - № 1. -P.1-11.

125. Ohguchi K. Involvement of calpain in melanogenesis of mouse B16 melanoma cells / K. Ohguchi, Y. Akao, Y. Nozawa // Molecular and Cellular Biochemistry. -2005. - Vol. 275. - № 1. - P. 103-107.

126. Olshina M. A. Functional regulation of proteins by 20S proteasome proteolytic processing / M. A. Olshina, G. Ben-Nissan, M. Sharon // Cell Cycle (Georgetown, Tex.). - 2018. - Vol. 17. - № 4. - P. 393-394.

127. Ono Y. Calpains — An elaborate proteolytic system : Proteolysis 50 years after the discovery of lysosome / Y. Ono, H. Sorimachi // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. - 2012. - Vol. 1824. - № 1. - P. 224-236.

128. Open-gate mutants of the mammalian proteasome show enhanced ubiquitin-conjugate degradation / W. H. Choi, S. A. H. de Poot, J. H. Lee [et al.] // Nature Communications. - 2016. - Vol. 7. - P. 10963.

129. Overexpression of calpain-1 predicts poor outcome in patients with colorectal cancer and promotes tumor cell progression associated with downregulation of FLNA / C. Xu, X. Yu, Y. Zhu [et al.] // Oncology Reports. - 2019. - Vol. 41. - № 6. - P. 34243434.

130. Overexpression of m-Calpain in human colorectal adenocarcinomas / A. Lakshmikuttyamma, P. Selvakumar, R. Kanthan [et al.] // Cancer Epidemiology and Prevention Biomarkers. - 2004. - Vol. 13. - № 10. - P. 1604-1609.

131. Over-expression of the EGF receptor is a hallmark of squamous cell carcinomas / B. Ozanne, C. S. Richards, F. Hendler [et al.] // The Journal of Pathology. - 1986. -Vol. 149. - № 1. - P. 9-14.

132. Pai S. I. Molecular pathology of head and neck cancer: implications for diagnosis, prognosis, and treatment / S. I. Pai, W. H. Westra // Annual Review of Pathology. -2009. - Vol. 4. - P. 49-70.

133. Persistent activation of NF-kB in BRCA1-deficient mammary progenitors drives aberrant proliferation and accumulation of DNA damage / A. Sau, R. Lau, M. A. Cabrita [et al.] // Cell Stem Cell. - 2016. - Vol. 19. - № 1. - P. 52-65.

134. Phonosurgical resection using submucosal infusion technique for precancerous laryngeal leukoplakia / T. Kono, K. Saito, H. Yabe, K. Ogawa // The Laryngoscope. -2017. - Vol. 127. - № 1. - P. 153-158.

135. Pohl C. Cellular quality control by the ubiquitin-proteasome system and autophagy / C. Pohl, I. Dikic // Science. - 2019. - Vol. 366. - № 6467. - P. 818-822.

136. Post-translational modifications of CDK5 and their biological roles in cancer / G.B. Gao, Y. Sun, R.-D. Fang [et al.] // Molecular Biomedicine. - 2021. - Vol. 2. - № 1. -P. 22.

137. Posttranslational regulation of the retinoblastoma gene family member p107 by calpain protease / J. S. Jang, S. J. Lee, Y. H. Choi [et al.] // Oncogene. - 1999. -Vol. 18. - № 10. - P. 1789-1796.

138. Prognostic implications of Fibroblast growth factor receptor 1 (FGFR1) gene amplification and protein overexpression in hypopharyngeal and laryngeal squamous cell carcinoma / E. K. Kim, Y. A. Cho, Y. W. Koh [et al.] // BMC cancer. - 2020. -Vol. 20. - № 1. - P. 348.

139. Prognostic potential of a PSA complex in sera of prostate cancer patients with a2-macroglobulin deficiency / Y. Kanoh, T. Ohara, S. Egawa [et al.] // Journal of Clinical Laboratory Analysis. - 2008. - Vol. 22. - № 4. - P. 302-306.

140. Prognostic significance of epidermal growth factor receptor phosphorylation and mutation in head and neck squamous cell carcinoma / T. Hama, Y. Yuza, Y. Saito [et al.] // The Oncologist. - 2009. - Vol. 14. - № 9. - P. 900-908.

141. Prognostic significance of matrix metalloproteinase 14 in patients with cancer: a systematic review and meta-analysis / L. Zhang, S. Jin, Y. Wei [et al.] // Clinical Laboratory. - 2020. - Vol. 66. - № 5.

142. Prostate cancer cell proliferation in vitro is modulated by antibodies against glucose-regulated protein 78 isolated from patient serum / M. Gonzalez-Gronow, M. Cuchacovich, C. Llanos [et al.] // Cancer Research. - 2006. - Vol. 66. - № 23. -

P. 11424-11431.

143. Proteasome based molecular strategies against improper cellular proliferation / A. R. Dubey, S. Kinger, Y. A. Jagtap [et al.] // Cellular Physiology & Biochemistry. -2021. - Vol. 55. - № S2. - P. 120-143.

144. Proteasome dependent actin remodeling facilitates antigen extraction at the immune synapse of B cells / J. Ibanez-Vega, F. Del Valle Batalla, J. J. Saez [et al.] // Frontiers in Immunology. - 2019. - Vol. 10. - P. 225.

145. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr, R. J. Randall // The Journal of Biological Chemistry. - 1951. -Vol. 193. - № 1. - P. 265-275.

146. PSMB4 expression associates with epithelial ovarian cancer growth and poor prognosis / R. Liu, S. Lu, Y. Deng [et al.] // Archives of Gynecology and Obstetrics. -2016. - Vol. 293. - № 6. - P. 1297-1307.

147. PSMB4 overexpression enhances the cell growth and viability of breast cancer cells leading to a poor prognosis / H. Wang, Z. He, L. Xia [et al.] // Oncology Reports. -2018. - Vol. 40. - № 4. - P. 2343-2352.

148. PSMB5 plays a dual role in cancer development and immunosuppression / C.-Y. Wang, C.-Y. Li, H.-P. Hsu [et al.] // American Journal of Cancer Research. - 2017. -Vol. 7. - № 11. - P. 2103-2120.

149. PSMB7 is associated with anthracycline resistance and is a prognostic biomarker in breast cancer / G. Munkacsy, R. Abdul-Ghani, Z. Mihaly [et al.] // British Journal of Cancer. - 2010. - Vol. 102. - № 2. - P. 361-368.

150. Quantitative live-cell imaging reveals spatio-temporal dynamics and cytoplasmic assembly of the 26S proteasome / C.-G. Pack, H. Yukii, A. Toh-e [et al.] // Nature Communications. - 2014. - Vol. 5. - № 1. - P. 3396.

151. Raynes R. Degradation of oxidized proteins by the proteasome: Distinguishing between the 20S, 26S, and immunoproteasome proteolytic pathways / R. Raynes, L. C. D. Pomatto, K. J. A. Davies // Molecular Aspects of Medicine. - 2016. - Vol. 50. -

P. 41-55.

152. Recurrent CDK1 overexpression in laryngeal squamous cell carcinoma / K. Bednarek, K. Kiwerska, M. Szaumkessel [et al.] // Tumour Biology: The Journal of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine. - 2016. - Vol. 37. - № 8. - P. 11115-11126.

153. Regulation of transformed state by calpastatin via PKCe in NIH3T3 mouse fibroblasts / T. Hiwasa, M. Nakata, M. Nakata [et al.] // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2002. - Vol. 290. - № 1. - P. 510-517.

154. Rehman A. A. Alpha-2-macroglobulin: A physiological guardian / A. A. Rehman, H. Ahsan, F. H. Khan // Journal of Cellular Physiology. - 2013. - Vol. 228. -№ 8. - P. 1665-1675.

155. Rock K. L. Degradation of cell proteins and the generation of mhc class I-presented peptides / K. L. Rock, A. L. Goldberg // Annual Review of Immunology. -1999. - Vol. 17. - № 1. - P. 739-779.

156. Role of calpain-1 in neurogenesis / M. Baudry, W. Su, J. Seinfeld [et al.] // Frontiers in Molecular Biosciences. - 2021. - Vol. 8. - P. 685938.

157. Role of matrix metalloproteinases in angiogenesis and cancer / S. Quintero-Fabián, R. Arreola, E. Becerril-Villanueva [et al.] // Frontiers in Oncology. - 2019. -Vol. 9. - P. 1370.

158. Sacco A. G. Current treatment options for recurrent or metastatic head and neck squamous cell carcinoma / A. G. Sacco, E. E. Cohen // Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. - 2015. - Vol. 33. -№ 29. - P. 3305-3313.

159. Schmidt M. Regulation of proteasome activity in health and disease / M. Schmidt, D. Finley // Biochimica Et Biophysica Acta. - 2014. - Vol. 1843. - № 1. - P. 13-25.

160. Serum concentration and localization in tumor cells of proteasomes in patients with hematologic malignancy and their pathophysiologic significance / M. Wada, M.

Kosaka, S. Saito [et al.] // The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. - 1993. -Vol. 121. - № 2. - P. 215-223.

161. Siegel R. L. Cancer statistics, 2020 / R. L. Siegel, K. D. Miller, A. Jemal // CA: A Cancer Journal for Clinicians. - 2020. - Vol. 70. - № 1. - P. 7-30.

162. S-nitrosylation-dependent proteasomal degradation restrains Cdk5 activity to regulate hippocampal synaptic strength / P. Zhang, W.-Y. Fu, A. K. Y. Fu, N. Y. Ip // Nature Communications. - 2015. - Vol. 6. - P. 8665.

163. Somatic mutations and promotor methylation of the ryanodine receptor 2 is a common event in the pathogenesis of head and neck cancer / K. Schmitt, B. Molfenter, N. K. Laureano [et al.] // International Journal of Cancer. - 2019. - Vol. 145. - № 12. -P. 3299-3310.

164. Sorimachi H. Calpain chronicle—an enzyme family under multidisciplinary characterization / H. Sorimachi, S. Hata, Y. Ono // Proceedings of the Japan Academy, Series B. - 2011. - Vol. 87. - № 6. - P. 287-327.

165. Sorimachi H. Impact of genetic insights into calpain biology / H. Sorimachi, S. Hata, Y. Ono // The Journal of Biochemistry. - 2011. - Vol. 150. - № 1. - P. 23-37.

166. Sorokin A. V. Proteasome system of protein degradation and processing / A. V. Sorokin, E. R. Kim, L. P. Ovchinnikov // Biochemistry (Moscow). - 2009. - Vol. 74. -№ 13. - P. 1411-1442.

167. Specific haplotypes of the CALPAIN-5 gene are associated with polycystic ovary syndrome / A. González, M. E. Sáez, M. J. Aragón [et al.] // Human Reproduction. -2006. - Vol. 21. - № 4. - P. 943-951.

168. Stadtmueller B. M. Proteasome activators / B. M. Stadtmueller, C. P. Hill // Molecular Cell. - 2011. - Vol. 41. - № 1. - P. 8-19.

169. STAT3/HOTAIR signaling axis regulates HNSCC growth in an EZH2-dependent manner / S. Sun, Y. Wu, W. Guo [et al.] // Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research. - 2018. - Vol. 24. - № 11. -P. 2665-2677.

170. Structural basis for dynamic regulation of the human 26S proteasome / S. Chen, J. Wu, Y. Lu [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2016. - Vol. 113. - № 46. - P. 12991-12996.

171. Structure, activation, and biology of calpain / K. Suzuki, S. Hata, Y. Kawabata, H. Sorimachi // Diabetes. - 2004. - Vol. 53. - № suppl 1. - P. S12-S18.

172. Structure of the human 26S proteasome at a resolution of 3.9 Â / A. Schweitzer, A. Aufderheide, T. Rudack [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2016. - Vol. 113. - № 28. - P. 7816-7821.

173. Systematic review and meta-analysis of prognostic microRNA biomarkers for survival outcome in laryngeal squamous cell cancer / Y. Huang, M. Gu, Y. Tang [et al.] // Cancer Cell International. - 2021. - Vol. 21. - № 1. - P. 316.

174. Systems microscopy approaches to understand cancer cell migration and metastasis / S. E. Le Dévédec, K. Yan, H. de Bont [et al.] // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2010. - Vol. 67. - № 19. - P. 3219-3240.

175. T lymphocytes export proteasomes by way of microparticles: a possible mechanism for generation of extracellular proteasomes / I. Bochmann, F. Ebstein, A. Lehmann [et al.] // Journal of Cellular and Molecular Medicine. - 2014. - Vol. 18. -№ 1. - P. 59-68.

176. TGF-ß activates Erk MAP kinase signalling through direct phosphorylation of ShcA / M. Lee, C. Pardoux, M. C. Hall [et al.] // The EMBO Journal. - 2007. - Vol. 26. - № 17. - P. 3957-3967.

177. TGFß induces SIK to negatively regulate type I receptor kinase signaling / M. Kowanetz, P. Lönn, M. Vanlandewijck [et al.] // Journal of Cell Biology. - 2008. -Vol. 182. - № 4. - P. 655-662.

178. The 1.9 Ä structure of a proteasome-11 S activator complex and implications for proteasome-PAN/PA700 interactions / A. Förster, E. I. Masters, F. G. Whitby [et al.] // Molecular Cell. - 2005. - Vol. 18. - № 5. - P. 589-599.

179. The axial channel of the proteasome core particle is gated by the Rpt2 ATPase and controls both substrate entry and product release / A. Köhler, P. Cascio, D. S. Leggett [et al.] // Molecular Cell. - 2001. - Vol. 7. - № 6. - P. 1143-1152.

180. The calpain system / D. E. Goll, V. F. Thompson, H. Li [et al.] // Physiological Reviews. - 2003. - Vol. 83. - № 3. - P. 731-801.

181. The Calpain/Calpastatin system has opposing roles in growth and metastatic dissemination of melanoma / Q. Raimbourg, J. Perez, S. Vandermeersch [et al.] // PLOS ONE. - 2013. - Vol. 8. - № 4. - P. e60469.

182. The chemokine receptor 7 regulates cell adhesion and migration via beta1 integrin in metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck / P. Li, Z.-J. Zhao, F.-Y. Liu [et al.] // Oncology Reports. - 2010. - Vol. 24. - № 4. - P. 989-995.

183. The contribution of the 20S proteasome to proteostasis / F. Kumar Deshmukh, D. Yaffe, M. A. Olshina [et al.] // Biomolecules. - 2019. - Vol. 9. - № 5. - P. 190.

184. The histone deacetylase inhibitor LBH589 inhibits expression of mitotic genes causing G2/M arrest and cell death in head and neck squamous cell carcinoma cell lines / M. B. Prystowsky, A. Adomako, R. V. Smith [et al.] // The Journal of Pathology. -2009. - Vol. 218. - № 4. - P. 467-477.

185. The MET receptor tyrosine kinase is a potential novel therapeutic target for head and neck squamous cell carcinoma / T. Y. Seiwert, R. Jagadeeswaran, L. Faoro [et al.] // Cancer Research. - 2009. - Vol. 69. - № 7. - P. 3021-3031.

186. The prognostic impact of circulating proteasome concentrations in patients with epithelial ovarian cancer / M. Heubner, P. Wimberger, B. Dahlmann [et al.] // Gynecologic Oncology. - 2011. - Vol. 120. - № 2. - P. 233-238.

187. The role of Grp 78 in alpha 2-macroglobulin-induced signal transduction. Evidence from RNA interference that the low density lipoprotein receptor-related protein is associated with, but not necessary for, GRP 78-mediated signal transduction / U. K. Misra, M. Gonzalez-Gronow, G. Gawdi [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 2002. - Vol. 277. - № 44. - P. 42082-42087.

188. The therapeutic potential of the calpain family: new aspects / M. E. Saez, R. Ramirez-Lorca, F. J. Moron, A. Ruiz // Drug Discovery Today. - 2006. - Vol. 11. -№ 19. - P. 917-923.

189. The ubiquitin+proteasome protein degradation pathway as a therapeutic strategy in the treatment of solid tumor malignancies / J. J. Driscoll, A. Minter, D. A. Driscoll, J. K. Burris // Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. - 2011. - Vol. 11. - № 2. -

P. 242-246.

190. Transcription alterations of members of the ubiquitin-proteasome network in prostate carcinoma / O. J. C. Hellwinkel, L. E. Asong, J.-P. Rogmann [et al.] // Prostate Cancer and Prostatic Diseases. - 2011. - Vol. 14. - № 1. - P. 38-45.

191. Trivedi S. Current understanding of the tumor microenvironment of laryngeal dysplasia and progression to invasive cancer / S. Trivedi, C. A. Rosen, R. L. Ferris // Current opinion in otolaryngology & head and neck surgery. - 2016. - Vol. 24. - № 2. - P. 121-127.

192. Turner N. Fibroblast growth factor signalling: from development to cancer / N. Turner, R. Grose // Nature Reviews. Cancer. - 2010. - Vol. 10. - № 2. - P. 116-129.

193. Two degradation pathways of the p35 Cdk5 (Cyclin-dependent Kinase) activation subunit, dependent and independent of ubiquitination * / T. Takasugi, S. Minegishi, A.

Asada [et al.] // Journal of Biological Chemistry. - 2016. - Vol. 291. - № 9. - P. 46494657.

194. Ubiquitin conjugation is not required for the degradation of oxidized proteins by proteasome / R. Shringarpure, T. Grune, J. Mehlhase, K. J. A. Davies // The Journal of Biological Chemistry. - 2003. - Vol. 278. - № 1. - P. 311-318.

195. Ubiquitin-proteasome dependent regulation of Profilin2 (Pfn2) by a cellular inhibitor of apoptotic protein 1 (cIAP1) / D. H. Jeong, Y. N. Choi, T. W. Seo [et al.] // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2018. - Vol. 506. - № 3. -P. 423-428.

196. Ubiquitin-proteasome system and the role of its inhibitors in cancer therapy / F. Aliabadi, B. Sohrabi, E. Mostafavi [et al.] // Open Biology. - 2021. - Vol. 11. - № 4. -P. 200390.

197. Updates on larynx cancer epidemiology / R. Nocini, G. Molteni, C. Mattiuzzi, G. Lippi // Chinese Journal of Cancer Research. - 2020. - Vol. 32. - № 1. - P. 18-25.

198. Varshavsky A. The ubiquitin system, autophagy, and regulated protein degradation / A. Varshavsky // Annual Review of Biochemistry. - 2017. - Vol. 86. -P. 123-128.

199. Vidal L. Human papillomavirus in HNSCC: Recognition of a distinct disease type : Head and Neck Cancer / L. Vidal, M. L. Gillison // Hematology/Oncology Clinics of North America. - 2008. - Vol. 22. - № 6. - P. 1125-1142.

200. Voutsadakis I. A. Ubiquitination and the ubiquitin - proteasome system in the pathogenesis and treatment of squamous head and neck carcinoma / I. A. Voutsadakis // Anticancer Research. - 2013. - Vol. 33. - № 9. - P. 3527-3541.

201. Wolf D. H. The proteasome: a proteolytic nanomachine of cell regulation and waste disposal : The Ubiquitin-Proteasome System / D. H. Wolf, W. Hilt // Biochimica

et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Cell Research. - 2004. - Vol. 1695. - № 1. -P. 19-31.

202. Xie Y. Structure, assembly and homeostatic regulation of the 26S proteasome / Y. Xie // Journal of Molecular Cell Biology. - 2010. - Vol. 2. - № 6. - P. 308-317.

203. Zhang H. K. Is severe dysplasia the same lesion as carcinoma in situ? 10-Year follow-up of laryngeal precancerous lesions / H. K. Zhang, H. G. Liu // Acta Oto-Laryngologica. - 2012. - Vol. 132. - № 3. - P. 325-328.

204. Zhang X. Drug development targeting the ubiquitin-proteasome system (UPS) for the treatment of human cancers / X. Zhang, S. Linder, M. Bazzaro // Cancers. -2020. - Vol. 12. - № 4. - P. 902.

205. Zhang Y. Role of focal adhesion kinase in head and neck squamous cell carcinoma and its therapeutic prospect / Y. Zhang, X. Sun // OncoTargets and Therapy. - 2020. - Vol. 13. - P. 10207-10220.