Фундаментальные аспекты создания на основе минерала бишофит магнийсодержащих лекарственных средств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, доктор биологических наук Иежица, Игорь Николаевич

• Иежица, Игорь Николаевич
• доктор биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации доктор биологических наук Иежица, Игорь Николаевич

ГЛАВА I. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ДЕФИЦИТА МАГНИЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. гомеостаз магния и его регуляция.

1.2. Клинические формы дефицита магния.

1.3. Сравнительные фармакологические свойства солей магния и особенности фармакологической коррекции дефицита магния.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фундаментальные аспекты создания на основе минерала бишофит магнийсодержащих лекарственных средств»

Актуальность темы

Магний является важнейшим макроэлементом, универсальным регулятором биохимических и физиологических процессов, что определяется, прежде всего, его кофакторной ролью в ферментах и модулирующей функцией в ионных каналах. Являясь вторым по распространенности катионом внутри клетки, магний участвует в энергетическом, пластическом и электролитном обмене. Различные аспекты биохимической, физиологической и патогенетической роли магния описаны в многочисленных работах Тутельяна В.А. [46], СпасоваА.А. [66, 67], Скального A.B. [65], Durlach J. [197, 200], Altura В.М. [87, 88, 90], Seelig M [580, 581], Rayssiguier Y [540, 316, 388], MazurA [396], WolfF.I. [674, 143], Weglicki W.B. [518, 667, 173], VinkR. [398, 660], Vormann J [663, 662], Quamme G.A. [526, 528], Schlingmann K.P. [577].

За последние несколько десятилений отмечено снижение поступления магния в организм. Основными причинами этого является как характер питания, так и изменение экологической обстановки, уменьшение содержания магния в экосистеме в целом [89, 66]. В США в общей популяции гипомагнезиемия встречается у 2,5-15% [101], а в Германии - у 14% населения [576]. По данным разных авторов, у новорожденных, находящихся в палатах интенсивной терапии, частота гипомагнезиемии составляет от 11% [247] до 22% случаев [299]. У больных алкоголизмом дефицит магния наблюдается в 30% случаев [495]. Среди патологии элементного статуса у населения России недостаточность магния занимает лидирующую позицию наряду с распространенностью дефицита йода, кальция, цинка, селена [46, 65].

По современным представлениям дефицит магния приводит к 1) дефициту функционально-активных ферментов, 2) развитию генерализованного воспаления с последующей системной дисплазией соединительной ткани, 3) критическому изменению соотношения Ca:Mg и, как следствие, нарушению электролитного обмена, основных биохимических и физиологических процессов. Согласно последним исследованиям обозначенные изменения являются ключевыми в развитии целого ряда патологических состояний. Так, например, разнообразные клинические проявления дисплазии соединительной ткани (пролапс митрального клапана, увеличение диаметра аорты и легочной артерии, гипермобильность суставов, гиперэластичность кожи) могут быть следствием уменьшения содержания, отдельных видов коллагена или нарушения, их соотношения при магний-дефицитном генерализованном воспалении. Дисбаланс соотношения Ca:Mg в сторону избытка кальция и дефицита магния способствует кальцификации сосудов, является ведущим в реализации' избыточного тромбообразования, атерогенеза, аритмогенности миокарда, в развитии уролитиаза и повышенной судорожной готовности. Примерами-функционального дефицита магний-зависимых ферментов является снижение "концентрации" Na-K-АТФазы при лечении диуретиками или активности а-кетоглутарат:глиоксилат карболигазы в условиях магний-дефицитной-гипероксалурии.

В последние годы в клинической оценке дефицита магния и в последующей тактике коррекции выявленного нарушения обмена элемента' появились факты, упрощенной трактовки этого сложного состояния, попытки лечения' различными препаратами, магния, не имеющими доказательной базы исследований. Анализ состояния фармацевтического рынка магнийсодержащих препаратов продемонстрировал, что в России выпускается только 2 препарата для внутреннего введения, не отвечающие необходимым фармакодинамическим и фармакокинетическим свойствам (Mg сульфат и Mg карбонат). Эффективность препаратов магния существенно различается, а литературные источники часто содержат достаточно противоречивые сведения о биодоступности в них магния [252, 350, 468, 687, 114, 619, 103, 104, 429, 482], более того, не однозначны параметры острой токсичности различных органических и неорганических солей магния. Необходимо отметить, что единственный препарат для внутривенного введения, выпускаемый в России, - Mg сульфат - обладает таким побочным эффектом, как способность вызывать гипохлоремический алкалоз и поэтому, например, в GUIA в настоящее время- активно вытесняется Mg хлоридом (препарат для парентерального введения Chloromag). С другой стороны, сложившийся дефицит магний-содержащих препаратов на российском фармацевтическом рынке, вероятно, связан с недооценкой данной проблемы в отечественном здравоохранении и фармации.

В 2000 году в Волгоградском государственном медицинском университете была разработана инициативная комплексная программа "Российский магний", в соответствии с которой было проведено комплексное изучение фармакологических свойств минерала бишофит (1^С12"6Н20) и продуктов его переработки. Учитывая большой положительный опыт применения бишофита и магний-содержащих препаратов при различных заболеваниях, а также достаточно большой перечень препаратов в основном импортного производства (магне магнерот, кормагнезин, магнесол, промагсан), представляется целесообразным создание новых магний-содержащих препаратов на основе минерала бишофит, обладающих, более оптимальными показателями фармакокинетики и фармакодинамики.

Диссертационная работа выполнена в рамках инициативной комплексной программы "Российский магний" Ёолгоградского государственного медицинского университета, регионального гранта администрации Волгоградской области «Разработка лекарственных средств на основе природного сырья Волгоградской области минерала «Бишофит» по договору № 05-2000, а также в соответствии с научным планом НИР ВолГМУ (номер государственной регистрации 01.20.02 15607).

Цели и задачи исследования.

Разработка методологических подходов к оценке фармакологических свойств органических и неорганических солей магния и научное обоснование направленного создания магний-содержащих препаратов, продуктов переработки минерала бишофит, для энтерального и парентерального введения с учетом фундаментальных патофизиологичеких и патобиохимических основ нарушения гомеостаза магния.

Для достижения указанной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Провести сравнительную оценку скорости компенсации дефицита магния различными органическими и неорганическими солями магния в условиях алиментарного дефицита магния и применения диуретиков. Изучить роль энганцеров (кислотообразующих остатков, хелатов и их стереоизомеров, витамина В6) на скорость компенсации магния в условиях дефицита данного макроэлемента.

2. Изучить роль дефицита магния в патогенезе депрессивно-подобного поведения и повышенной тревожности, провести сравнительную оценку влияния органических и неорганических солей магния на поведение у крыс в условиях алиментарного дефицита магния.

3. Изучить роль дефицита магния в формировании судорожной готовности и провести сравнительную оценку влияния солей магния на индуцированную судорожную активность.

4. Оценить влияние дефицита магния на липопротеиновый профиль плазмы крови и обосновать использование солей магния в коррекции дислипидемии.

5. Исследовать дефицит магния как фактора литогенности мочи и обосновать использование солей магния в коррекции различных форм уролитиаза.

6. Изучить характер иммуно-воспалительных процессов' и порог болевой чувствительности в патогенезе дефицита магния, а также провести сравнительную оценку антиноцицептивной активности и противовоспалительного действия некоторых органических и неорганических солей магния у животных на фоне системного алиментарного дефицита магния.

7. Исследовать влияние дефицита магния на гемореологические параметры животных и исследовать эффективность некоторых органических и неорганических солей магния- в терапии гемореологических нарушений при пероральном введении в условиях алиментарной гипомагнезиемии.

8. Оценить влияние дефицита магния на аритмогенный порог миокарда и обосновать использование солей магния в коррекции нарушения- ритма при профилактическом пероральном введении.

9. Изучить роль дефицита магния в регуляции гомеостаза калия и обосновать использование калий-магниевых солей в коррекции осложнений дефицита магния и магнийзависимого дефицита калия.

10. Определить острую токсичность наиболее фармакологически активных органических и неорганических солей магния.

Научная новизна исследования

Впервые проведено сравнительное изучение фармакологической активности 11-ти органических (К^Ь-, О- и БЬ-аспарагинат, М§Ь- и БЬ-глутамат, М^БЬ-пироглутамат, глицинат, лактат, М^ сукцинат, тауринат, цитрат), 8-ми неорганических хлорид, М§ нитрат, тиосульфат, М^ трисиликат, гидрофосфат, М§ карбонат, оксид, сульфат) солей магния и 4-х коммерческих магний-содержащих препаратов Ь-аспарагинат в таблетках, магне Вб, аспаркам, магнерот) при пероральном введении в условиях алиментарного и лекарственного дефицитов магния. Установлено, что Мд хлорид и Mg Ь-аспарагинат устраняют дефицит магния быстрее других солей. Впервые показана более высокая биодоступность комплекса магния с Ь-стереоизомером аспарагиновой кислоты, по сравнению1 с БЬ- и Б-стереоизомерами и другими изучаемыми солями магния. Установлено; что применение витамина В6 с хлоридом и М^ Ь-аспарагинатом приводит к увеличению биодоступности данных солей, а по скорости компенсации дефицита магния данные комбинации превосходят препарат сравнения магне В6 (Г^ лактат с витамином Вб). Впервые проведено изучение фармакологических свойств хлорида и Ь-аспарагината, а также их комбинаций с витамином Вб в условиях патологии. Установлено, что М§ хлорид и Ь-аспарагинат и их комбинации с витамином Вб при пероральном применении устраняют иммуно-воспалительную реакцию и восстанавливают порог болевой чувствительности, оказывают гиполипидемический и антиаритмический эффекты, благоприятно влияют на течение кальцийоксалатного уролитиаза, а также способствуют нормализации гемореологического статуса у животных с дефицитом магния. Показано, что изучаемые комбинации солей магния с пиридоксином обладают наибольшей антидепрессантоподобной, анксиолитической и противосудорожной активностью, по сравнению с некомбинированными солями. Обнаружено, что соли магния способствуют стабилизации/модуляции активности серотонинергических и м-холинергических структур, ослабляют адренергические влияния в ЦНС в условиях алиментарного дефицита магния. Установлено, что хлорид, Ь-аспарагинат и их комбинации с витамином Вб являются малотоксичными и безопасными. Изучено влияние калий магниевых солей Ь-, Б- и БЬ-аспарагиновой кислоты на последствия нарушения гомеостаза калия и магния в условиях дефицита магния и лекарственной (фуросемидной, дигоксиновой) интоксикации. Впервые проведено сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности растворов Ь-, Ои БЬ-аспарагината.

Научно-практическая значимость работы. Показана значительная роль витамина В6 в увеличении биодоступности магниевых солей. Экспериментально доказана эффективность хлорида и М^ Ь-аспарагината в комбинации с витамином В6 при депрессивных состояниях, судорожных припадках, системном воспалении, дислипидемии, аритмиях, нарушении гемобиологического статуса, формировании уролитиаза в условиях алиментарного дефицита магния. Данные результаты позволяют обосновать перспективность создания на основе комбинаций М^ хлорида и Ь-аспарагината с витамином Вб лекарственной формы для перорального применения в качестве средств коррекции дефицита магния и ассоциированной с ним патологии.

Реализация результатов исследования. Оригинальные экспериментальные модели формирования уролитиаза в условиях алиментарного дефицита магния и интоксикации этиленгликолем, а также экспериментальные модели формирования депрессивно-подобного поведения, снижения аритмогенного и судорожного порога в условиях алиментарного дефицита магния применяются в НИИ Фармакологии ВолГМУ и лабораторией патологии Волгоградского научного центра РАМН при проведении научных экспериментов. Результаты работы включены в лекционный материал для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтического факультетов, слушателей факультета усовершенствования врачей и провизоров на кафедрах фармакологии, общей химии, фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского и Ростовского государственных медицинских университетов. Создан новый лекарственный препарат для инъекций и инфузий (Аспаркам-Ь, "Биосинтез", Россия и РУП "Белмедпрепараты", Белоруссия) на основе калий магниевой соли Ь-аспарагиновой кислоты в качестве средства коррекции дефицита калия и магния.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В зависимости от величины полной компенсации системного алиментарного дефицита магния в эритроцитах исследуемые соли и препараты можно ранжировать в следующем порядке: Ь-аспарагинат = хлорид > М^» ВЬ-аспарагинат > М§ тауринат > Ь-аспарагинат (в таблетках) > аспаркам (К,М£ БЬ-аспарагинат) >

БЬ-глутамат > М§ БЬ-пироглутамат > М§ глицинат > М^ Б-аспарагинат > цитрат > Г^Ь-глутамат > М§ нитрат > магнерот (М§ оротат) > лактат > тиосульфат > . М^ сукцинат > гидрофосфат > Mg оксид > сульфат = карбонат > М§ силикат.

2. Витамин Вб в комбинациях с М^ Ь-аспарагинатом и М§ хлоридом увеличивает биодоступность данных солей и, тем самым, повышает скорость компенсации дефицита магния в организме в условиях гипомагнезиемий. При этом комбинации М§ Ь-аспарагината и хлорида с витамином Вб по величине компенсации дефицита магния не уступают препарату сравнения магне Вб лактат в комбинации с витамином В6).

3. хлорид и М^ Ь-аспарагинат в комбинациях с витамином Вб при пероральном введении устраняют депрессивно-подобное и тревожное поведение, нормализуют процессы адренергической, холинергической и серотониновой нейротрансмиссии в ЦНС, проявляют противосудорожный эффект на фоне компенсации алиментарной гипомагнезиемии.

4. В условиях компенсации дефицита магния хлорид и М§ Ь-аспарагинат и их комбинации с витамином В6 при пероральном применении приводят к устранению иммуно-воспалительной реакции и восстанавливают порог болевой чувствительности магнийдефицитных животных, благоприятно влияют на течение кальцийоксалатного уролитиаза.

5. хлорид и Ь-аспарагинат и их комбинации с витамином В6 оказали гиполипидемический и антиаритмический эффекты, а также способствовали нормализации гемореологического статуса у животных с дефицитом магния.

Апробация работы

Материалы работы доложены на 55-ой и 58-ой конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров, Пятигорская государственная фармацевтическая академия, г. Пятигорск (2000; 2003); на V Международном симпозиуме "Биологически активные добавки к пище и проблемы здоровья семьи", Красноярск (27-29 июня 2001); на Съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения", г. Санкт-Петербург (4-6 июля 2002); на IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», г. Москва (8-12 апреля 2002); на Всероссийской научной конференции "Нейрофармакология в XXI веке", посвященной 110-летию академика АМН СССР С.В.Аничкова, г. Санкт-Петербург (18-20 сентября 2002); на 15-ом Конгрессе Европейского колледжа Нейропсихофармакологии (15th Congress of the European College of Neuropsychopharmacology), Barcelona, Spain (October 5-9, 2002); на Юбилейной научно-практической конференции "Роль курортной науки и практики в охране здоровья населения России", посвященной 200-летию Кавказским минеральным водам, Государственный научно-исследовательский институт курортологии, г. Пятигорск (2003); на 2-ом и 3-м Съездах Российского Научного Общества фармакологов - "Фундаментальные проблемы фармакологии", д/о "Подмосковье", г. Москва (21-25 апреля 2003) и "Фармакология - практическому здравоохранению", г. Санкт-Петербург (23-27 сентября 2007); на Международной научно-практической конференции, посвященной 200-летию Кавказских Минеральных Вод ("биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России"), г. Пятигорск (21-24 октября 2001); на международном конгрессе "кардиостим-2004", г. Санкт-Петербург (5-7 февраля 2004); на 8-ом и 9-ом Международных симпозиумах по биометалам в биологии и медицине (8th International Symposium on Metal Ions in Biology and Medicine, Hungarian th

Academy of Sciences, Budapest, Hungary, May 18-22, 2004; 9 International Symposia on

Metal Ions in Biology and Medicine "Metal ions role in life: an integrated view", Centro de

Congressos da Universidade Católica, Lisboa, Portugal, May 21-24, 2006); на 1-ом Съезде

Российского общества медицинской элементологии (РОСМЭМ), г. Москва (9:10 декабря 2004); на Гордоновской конференции по магнию в биохимических процессах и медицине (Gordon Research Conference on Magnesium in Biochemical Processes &

Medicine), Ventura, California, USA (February 6-11, 2005); на 8-ой региональной th конференции Европейского колледжа Нейропсихофармакологии (8 ECNP Regional Meeting), Moscow, Russia (April 14-16, 2005); на Первом Всероссийском съезде аритмологов, г. Москва (16-18 июня 2005); на 1-ом Европейском конгрессе по магнию (1st Annual European Congress & X Jubilee Polish Magnesium Symposium) "Magnesium and other bioelements in organism and in environment", Krakow, Poland (September 23-24, 2005); 4-ой Международной конференции "Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам", д/о "Подмосковье", г. Москва (13-16 марта 2006); на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», г. jL

Москва (3-7 апреля 2006); на 11-ом Международном симпозиуме по магнию (11 International Magnesium Symposium & Joint Meeting of the Japanese Society for Magnesium Research), Shima Kanko Hotel, Kashikojima, Japan (October 23-26, 2006) и на II-ой Международной научно-практической конференции "Биоэлементы" (Научные основы и опыт применения биоэлементов в медицине, спорте, пищевой промышленности и сельском хозяйстве), г. Оренбург (23-25 января 2007). По теме диссертации опубликовано 55 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 319 страницах машинописного текста, иллюстрирована 26 рисунками, содержит 65 таблиц и 1 приложение. Состоит из "Введения", "Обзора литературы" (глава I) и 10-ти глав собственных исследований (главы II - XI), обсуждения результатов (глава XII), выводов и списка литературы, включающего 78 отечественных и 609 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Иежица, Игорь Николаевич

Выводы

1. В зависимости от величины полной компенсации системного алиментарного дефицита магния в эритроцитах исследуемые соли и препараты можно ранжировать в следующем порядке: Ь-аспарагинат = хлорид > М^; БЬ-аспарагинат > Mg тауринат > Ь-аспарагинат (в таблетках) > аспаркам (К,М£ БЬ-аспарагинат) > БЬ-глутамат > БЬ-пироглутамат > глицинат > М§ Б-аспарагинат > Mg цитрат > Mg Ь-глутамат > Mg нитрат > магнерот оротат) > М^ лактат > Mg тиосульфат > сукцинат > Mg гидрофосфат > оксид > сульфат = Mg карбонат > силикат.

2. Витамин Вб в комбинациях с Mg Ь-аспарагинатом и Mg хлоридом способствует более быстрому устранению дефицита магния при введении данных солей. По скорости компенсации дефицита магния в плазме и эритроцитах М§ Ь-аспарагинат и М^ хлорид в комбинациях с витамином Вб превосходят М§ Ь-аспарагинат и хлорид без пиридоксина, а также препараты сравнения сульфат, магнерот (М^ оротат), аспаркам Ь-аспарагинат) и комбинированный препарат магне Вб.

3. хлорид, Ь-аспарагинат и их комбинации с витамином Вб устраняют депрессивно-подобное поведение и тревожность у магнийдефицитных животных. При этом указанные комбинации по эффективности сопоставимы с магне В6 и превосходят препарат сравнения сульфат. хлорид и Ь-аспарагинат в сочетании с пиридоксином уменьшают длительность фенаминовой стереотипии и ареколинового тремора, усиливают 5-гидрокситриптофановый гиперкинез, по сравнению с магнийдефицитными животными. При этом по большинству показателей прослеживается тенденция к большей эффективности М§ хлорида и Ь-аспарагината в комбинациях с пиридоксином.

4. Изучаемые соли магния при пероральном введении восстанавливали судорожный порог коразола, по сравнению с магнийдефицитными животными. При этом наиболее эффективным оказались комбинации М^* хлорида и Ь-аспарагината с витамином Вб

5. хлорид и Ь-аспарагинат, а также их комбинации с пиридоксином устраняли такие проявления системной иммунно-воспалительной реакции, развившейся вследствие дефицита магния, как лейкоцитоз, увеличение количества нейтрофилов и эозинофилов, гиперемию, открытых участков тела, спленомегалию.

6: Наибольшей антиноцицептивной активностью при дефиците магния обладает М§ хлорид и Ь-аспарагинат в комбинациях с витамином В6, которые максимально повышали порог болевой чувствительности при механическом раздражении, увеличивали напряжение, необходимое для вызывания реакции отдергивания хвоста, вокализации и вокализации после разряда в- тесте электрического раздражения корня хвоста.

7. М§ хлорид и Ь-аспарагинат в комбинациях с витамином-В6 в условиях алиментарной гипомагнезиемии максимально, по сравнению с другими* солями, пролонгировали латентный период и время жизни после возникновения аритмии, а также повышали аритмогенный порог, по сравнению' с магнийдефицитными животными. В условиях нормомагнезиемии на моделях аконитиновой и хлоридкальциевой аритмий Ь-стереоизомер М^ аспарагината при внутривенном введении оказался наиболее эффективным, по сравнению* с ВЬ- и-В-стереоизомерами.

8. В условиях компенсации дефицита магния под действием М^ хлорида; и Ь-аспарагината, а также их комбинаций с витамином Вб восстанавливался до контрольных значений уровень триглицеридов, общего холестерина, ЛПНП, повышалась концентрация ЛПВП, что приводило к снижению индекса атерогенности.

9. хлорид и Ь-аспарагинат, а также их комбинации с витамином Вб устраняют синдром повышенной вязкости и снижают тромбогенный потенциал крови, что проявляется в нормализации вязкости крови, цельной и стандартизированной по гематокриту, а также эритроцитарной взвеси, по сравнению с аналогичными показателями у магний-дефицитными животными. Данные соли и их комбинации с пиридоксином в условиях компенсации дефицита магния уменьшали АДФ и коллаген индуцированную агрегацию тромбоцитов, удлиняли время образования нитий фибрина и превосходили по данным показателям препарат сравнения магне Вб.

10. К,М§ Ь-аспарагинат быстрее устраняет осложнения дефицита магния и магнийзависимого дефицита калия в условиях алиментарного дефицита магния и лекарственной интоксикации фуросемидом и дигоксином. На моделях экспериментальных аритмий. (хлорид кальциевой, строфантиновой и аконитиновой) раствор Ь-аспарагината при внутривенном введении оказался наиболее эффективным, по сравнению с его ВЬ- и Б-стереоизомерами, по времени начала развития нарушений ритма, проценту возникновения фибрилляций, продолжительности жизни животных.

11. По уровню острой токсичности при однократном пероральном введении хлорид и Ь-аспарагинат, а также их комбинации с витамином В6, относятся к классу малотоксичных препаратов.

Х1.4. Заключение

В ходе проведенных токсикологических исследований на мышах была выявлена характерная для магниевых солей клиника отравления и отсутствие явно выраженной негативной реакции со стороны животных на однократное внутрибрюшинное и пероральное их введение. Исходя из данных острого отравления исследуемыми веществами и реабилитации физического состояния, можно сделать вывод, что в условиях внутрибрюшинного и перорального введения исследуемые соли магния показали себя как относительно безопасные соединения. При внутрибрюшинном введении все изучаемые соли магния можно отнести, к разряду умеренно токсичных соединений. По величине ЛД50 соли можно расположить в следующем порядке: Ь-аспарагинат = ВЬ-пироглюгамат > цитрат > М§ ВЬ-аспарагинат > М^лактат > М§сукцинат = М§ тауринат. Величина ЛД50 при однократном пероральном введении М^ Ь-аспарагината, Mg хлорида и их комбинаций с витамином Вб была выше 1,5 г/кг, что позволяет в соответствии с классификацией токсичности веществ отнести их к классу малотоксичных препаратов.

Глава XII. Обсуждение

По современным представлениям клинические последствия дефицита магния могут быть связаны со следующей триадой изменений: 1) дефицитом функционально-активных ферментов; 2) развитием генерализованного воспаления с последующей системной дисплазией соединительной ткани; 3) критическим изменением соотношения Ca:Mg и, как следствие, нарушением электролитного обмена, основных биохимических и физиологических процессов. Согласно последним исследованиям обозначенные изменения являются ключевыми в развитии целого ряда патологических состояний (Рисунок XII-1).

Впервые клинические симптомы воспаления у магний-дефицитных животных были описаны в 30-х годах [360]. Характерным, симптомом была аллергическая реакция в виде эритемы, гиперемии и отека [244]. Гиперемия у животных особенно была выражена на открытых участках кожи (ушных раковинах и конечностях). Многие исследователи связывали эти симптомы с дегрануляцией тучных клеток и высвобождением гистамина [121, 288, 295, 358]. У крыс с генетически-предрасположенным отсутствием шерстного покрова дефицит магния, приводил к воспалительной реакции, сопровождающейся переходящей эритематозной сыпью [160, 472, 511]. В большинстве случаев воспалительный синдром сопровождался гиперальгезией, которая подавлялась неконкурентными антагонистами NMDA-рецепторов [185]. Среди морфологических изменений особо следует выделить увеличение размеров селезенки [206, 313]. У молодых крысят наблюдалась ускоренная акцидентальная инволюция тимуса [83, 642]. Описанные клинические признаки воспаления наблюдались как у молодых, так и у половозрелых крыс, однако у молодых, из-за интенсивного роста и развития, и, как следствие, более высокой потребности в магнии, эти симптомы проявлялись уже в течение первых нескольких дней диеты. Другие лабораторные виды животных (мыши, хомяки, морские свинки) также демонстрировали симптомы воспаления в условиях магний-дефицитной диеты, однако, только у крыс наблюдались гиперемия и отеки открытых участков кожи.

В крови лейкоцитоз является наиболее значимым изменением, который, как правило, связан с увеличением числа полиморфоядерных лейкоцитов, главным образом, нейтрофилов и эозинофилов [146, 159, 313, 439]. Увеличение числа эозинофилов рассматривается как типичный признак аллергического ответа. Описанные изменения могут быть связаны с гиперплазией ростовых клеток в костном мозге [374]. Лейкоцитарная инфильтрация различных тканей (сердце, легкие, скелетная мускулатура, кишечник, тимус) была выявлена как у крыс, так и у мышей [83, 259, 439, 462,]. Вероятно, такая инфильтрация является характерным признаком дефицита магния и, несомненно, связана с различными тканевыми повреждениями. Увеличение числа эозинофилов в некоторых тканях (например, желудочно-кишечный тракт, мочеполовой тракт) также объясняет их высокую чувствительность к аллергическим реакциям. Дефицит магния изменяет функцию нейтрофилов [311]. Анализ генной экспрессии различных стресс-белков- с использованием технологии получения комплементарной ДНК (cDNA) показал, что нейтрофилы у магний-дефицитных животных активированы [617]. Количество постоянных перитонеальных макрофагов у таких животных также выше, чем. у контрольных, более того, эти клетки демонстрируют морфологические характеристики активированных клеток [313]. Таким образом, у магний-дефицитных животных наблюдается увеличение и активация популяции фагоцитарных клеток. Происхождение этого феномена не совсем понятно, но возможно связано с патологическими последствиями дефицита магния, и, прежде всего, с окислительным стрессом.

Еще один важный феномен, наблюдаемый при магний-дефицитном воспалении, - продукция провоспалительных цитокинов. Weglicki с соавт. [173, 427, 667] показали значительное повышение в плазме уровня различных цитокинов у крыс после трех недель дефицита магния, а также раннее повышение концентрации субстанции P. Majer J. в своих исследованиях уже через несколько дней фиксировала увеличение плазменной концентрации интерлейкина-6, но не отмечала сколько-нибудь значимые изменения уровеня ФНО-а и субстанции Р [313]. Однако, как обсуждалось в других работах, продукция ФНО-а у магний-дефицитных животных увеличивается после иммунологического стресса [242]. При этом такая стресс-индуцированная сверх-продукция ФНО-а является очень ранним событием, т.к. наблюдается уже через два дня после получения животными магний-дефицитной диеты [242]. Rude R.K. с соавт. [122, 408], недавно показали, что повышенная, концентрация субстанции Р была обнаружена в костной; ткани магний-дефицитных крыс и мышей. С помощью методов иммунохимического анализа, было показано, что в мегакариоцитах и лимфоцитах мышей содержание субстанции Р увеличивается на 230 и 200% уже на второй день диеты [408].

Увеличение экспрессии и уровня позитивных белков и снижение экспрессии негативных белков острой фазы воспаления является другим очевидным фактом, отражающим воспалительную реакцию на дефицит магния. В, более ранних исследованиях сообщалось,. что экспериментальный' дефицит магния- приводит к: увеличению в плазме у крыс уровня орозомукоида [403]. В аналогичных, условиях дефицита магния было показано увеличение концентрации уровня шРНК\ других позитивных белков острой фазы воспаления,, а именно а2-макроглобулина, ар кислого гликопротеина, комплемента, фетопротеина, гаптоглобулина и фибриногена [309, 310, 313]. Эти изменения связаны с увеличением концентрации; интерлейкина-6, отвечающего за стимуляцию синтеза в печени многих белков; острой фазы воспаления. Снижение негативных белков острой фазы воспаления; таких как альбумин, аполипопротеин Е, ретинол-связывающий белок, завершает классические признаки острой фазы воспаления.

Механизмы, которые запускают воспалительную реакцию при системном дефиците магния, пока еще не ясны [173,384,539]. Среди них вероятно определяющими являются внутриклеточный кальциевый ток с последующей инициацией фагоцитарных клеток, открытие кальциевых каналов и активация: NMDA-рецепторов, высвобождение нейротрансмиттеров (таких как субстанция;Р),, окисление мембранных липидов и активация транскрипционного ядерного фактора-каппа В (NFkB).

Одно из возможных объяснений может быть связано с физиологической! ролью магния в качестве физиологического антагониста кальция. Снижение внеклеточной концентрации магния приводит к увеличению внутриклеточной: концентрации кальция;. Высокая внеклеточная концентрация магния может оказывать благоприятный противовоспалительный эффект, тогда как. снижение: внеклеточной концентрации магния может инициировать фагоцитарные клетки. В ряде исследований было показано, что у магний-дефицитных животных в условиях низкокальциевой диеты снижается провоспалительный ответ [519]. Таким образом, в основе механизма иммунологического стресса у магний-дефицитных животных лежит увеличение внеклеточного соотношения Ca:Mg и снижение антагонистической роли магния. Это предположение также подтверждается исследованиями в которых был показан положительный эффект антагонистов кальция при дефиците магния [110].

Еще один возможный механизм реализации системной воспалительной реакции может быть связан с нейромедиаторной системой. С одной стороны, нейромедиаторы играют важную роль в процессе воспаления, с другой, сам стресс, может инициировать воспалительный ответ [118, 647]. Известно, что дефицит магния инициирует системную стресс-реакцию в результате активации нейроэндокринных путей и, как было показано [173], через модификацию продукции или активацию нейромедиаторов, таких как ацетилхолищ катехоламины, субстанция Р.

Один из главных феноменов вовлеченных в инициацию воспалительного-ответа при дефиците магния может быть активация NFkB. Семейство NFkB состоит из группы индуцируемых транскрипционных факторов участвующих в регуляции ключевых этапов иммунного и воспалительного ответов через изменение генной экспрессии большого количества цитокинов и других генов отвечающих за иммунный ответ [544, 678]. NFkB присутствует в цитоплазме в неактивной форме, где может быть активирован в ответ на многочисленные стресс-реакции, такие как инфекция, воспаление, тепловой шок, а также окислительный стресс [544]. Недавно опубликованные результаты Altura В.М. и соавт. [384] показали, что низкие концентрации ионов магния вызывают перекисное окисление липидов и активацию NFkB в культуре гладкомышечных клеток церебральных сосудов. Это подтверждает потенциальную роль NFkB в развитии магний-дефицитного воспаления.

В данных исследованиях было установлено, что дефицит магния приводит к появлению симптомов системной иммунно-воспалительной реакции, протекающей по аллергическому типу. Так, у магнийдефицитных животных отмечалась гиперемия открытых участков тела, что объясняется вазодилатацией, которая развивается при высвобождении гистамина из тучных клеток [121, 358]. Количество лейкоцитов увеличилось на 47% (с 15,20±0,65 до 24,87±1,95 млн. в 1 мл крови), в основном, за счет сегментоядерных нейтрофилов (с 2,33±0,15 до 4,40±0,98 млн./мл) и эозинофилов (с 0,15±0,11 до 2,86±0,53 млн./мл). Предполагается, что причиной данных изменений является повышение концентрации субстанции Р в крови и костном мозге магнийдефицитных животных [122, 408]. Спленомегалия же является закономерным следствием повышенного разрушения эритроцитов и лейкоцитов в селезенке. Кроме того, у животных с дефицитом магния в 2 раза снизилось соотношение магний/кальций сыворотки крови (р<0,00001). Соли магния при пероральном введении приводили к ликвидации иммунно-воспалительной реакции и возвращению большинства, показателей к уровню нормы. В наших исследованиях применение солей магния, приводит к достоверному снижению общего количества лейкоцитов крови (устраняли эозинофилию и нейтрофилез), уменьшению интенсивности гиперемии' ушных раковин,животных, снижению коэффициента массы селезенки, и тем самым устранению иммуно-воспалительной реакции, развивающейся у магнийдефицитных животных. Кроме того, после введения солей магния-достоверно повысилось соотношение магний/кальций сыворотки крови, что также, доказывает роль кальция в патогенезе системной иммунно-воспалительной реакции.

Ряд эпидемиологических исследований демонстрируют связь между низким потреблением магния, его концентрацией в плазме и риском развития атеросклероза. В многоцентровых исследованиях (ARIC study) было показано, что низкое потребление магния может вносить свой вклад в патогенез коронарного атеросклероза [101], в других исследованиях (the Honolulu study) было продемонстрировано, что магний в диете способствует снижению риска развития коронарной болезни сердца [180].

В настоящее время атеросклероз рассматривается в качестве воспалительного заболевания [377], которое является результатом взаимодействия между модифицированными липопротеинами, макрофагами, Т-лимфоцтами, и нормальными компонентами артериальной стенки. Этот воспалительный процесс приводит к развитию атеросклеротических повреждений. Роль дефицита магния в патогенезе атеросклероза у крыс, собак и приматов, а также регрессия этих повреждений после введения в диету высоких доз магния (в 4-6 раз превосходящие естественную потребность) было показано в исследованиях Vitale J.J. и соавт. [321] в конце 50-х годов. Недавно было обнаружено, что магний модулирует атерогенез и атеросклероз у крыс [411]. Магний подавляет атерогенез у мышей с низкой концентрацией ЛНП-рецепторов и способствует благоприятным антиатерогенныи изменениям у мышей с генетическим дефектом экспрессии аполипопротеина Е (аро Е knock out mice) [413, 535].

В ряде исследований было показано, что острая фаза воспаления сопровождается изменением в липидном метаболизме [221], что проявляется, прежде всего, в увеличении уровня триглицеридов и снижении липопротеинов высокой плотности, изменении концентрации аполипопротеинов и состава липопротеинов (увеличение содержания триглицеридов и снижение этерефицированного холестерина). При воспалении быстро увеличивается концентрация триглицеридов врезультате печеночного синтеза липопротеинов очень низкой плотности и снижения клиренса триглицеридов. Среди механизмов реализующих эти изменения особое значение имеют снижение активности липопротеинлипазы, печеночной липазы и лецитин-холестерол ацетилтрансферазы. Более того, воспаление вовлечено в процессы окисления липопротеинов [312]. В исследовании Rayssiguier Y. и MazurA [539], были продемонстрированы аналогичные изменения в острой фазе воспаления в условиях дефицта магния. Наиболее явное влияние дефицита магния на липиды плазмы -повышение уровня триглицеридов [226, 407, 536,]. Важная характеристика магний-дефицитной гиперлипидемии - повышение липопротеинов с высоким содержанием триглицеридов и снижение концентрации липопротеинов высокой плотности [226]. Увеличение липопротеинов с высоким содержанием триглицеридов связано со значительным увеличением в плазме концентрации аполипопротеина В [407]. Снижение липопротеинов высокой плотности сопровождается соответствующим снижением в плазме аполипопротеина Е и А[. В других исследованиях был продемонстрирован комплекс изменений в печеночном липидном метаболизме и генной экспрессии аполипопротеинов у магний-дефицитных крыс, что предполагает скорее дефект в катаболизме, чем в секреции липопротеинов с высоким содержанием триглицеридов (главного фактора измененного липопротеинового профиля) [407]. Постгепариновая липотитическая активность у магний-дефицитных животных ниже, чем у контрольных [209]. В работе Gueux Е. и еоавт. [639] сообщается о снижении активности липопротеинлипазы, печеночной липазы и лецитин-холестерол ацетилтрансферазы. Липопротеины с высоким содержанием триглицеридов выделенные у магний-дефицитных животных были более восприимчивы к окислению ex vivo, чем выделенные у контрольных животных [210, 493, 649,]. Окислительные изменения липопротеинов могут играть значительную роль в патогенезе сосудистых повреждений при дефиците магния [152]. Резонно предположить, что воспаление в течение дефицита магния является индуктором проатерогенных изменений в липопротеиновом метаболизме.

В ходе исследований показано, что магнийдефицитная диета приводит к снижению ЛПВП на 28,7%'(р<0,0001), аполипопротеина Aj на 48,7% (р<0,0001), повышению уровня, триглицеридов на 35,2% (р<0,0001), общего холестерина на 38,7% (р<0,0001), липопротеина В'на 74,1% (р=0,0005), ЛПНП - в 4 раза (р<0;0001)-и индекса атерогенности - в 3 раза (р<0,0001). Компенсация дефицита, магния^ после введения изучаемых солей сопровождалась устранением проатерогенных изменений липидного состава сыворотки крови. В частности, коррекция? дефицита солями магния приводила к нормализации уровня триглицеридов, общего холестерина, ЛПВП, аполипопротеина Ai и снижению концентрация ЛПНП, аполипопротеина В, индекса атерогенности. При этом комбинированные с пиридоксином соли магния обладали большим гиполипидемическим действием.

Таким образом, дефицит магния может играть ключевую роль в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний. При этом, по мнению Maier J.А., системная воспалительная реакция ведет к проатерогенным изменениям липидного статуса. Данная гипотеза подтверждается такими фактами, как повышенный тромбогенный потенциал сосудистой стенки, усиление экспрессии молекул клеточной адгезии и стимуляция пролиферации гладкомышечных клеток. По литературным данным, низкий уровень внеклеточного магния стимулирует синтез молекул адгезии, маркера воспаления, который взаимодействует с интегрином VLA-4 (very late activation antigen-4), экспрессируемым моноцитами и лимфоцитами. Местная же адгезия лейкоцитов к стенкам- капилляров является одним- из ключевых этапов воспаления и иммунного ответа. После адгезии лейкоциты пенетрируют сосудистую стенку под действием цитокинов, вырабатываемых эндотелием. При дефиците магния отмечается повышение концентраций факторов роста интерлейкина-1а и интерлейкина-6, задействованных в формировании реакции острой фазы и воспаления [392]. Наблюдается также увеличение диаметра и проницаемости сосудистой стенки, что облегчает хемотаксис лейкоцитов. При дефиците магния усиливается активность эндотелиальной синтетазы оксида азота, который через систему гуанилат-циклазы способствует расслаблению гладких мышц сосудистой стенки [302].

Согласно данным БиЬгау С. с соавт. [404] дефицит магния, наряду с воспалением, приводит к снижению порога болевой чувствительности, поэтому было проведено изучение обезболивающих свойств солей магния в сравнительном аспекте на модели экспериментальной фибромиалгии. В ходе наших исследований установлено, что при пероральном введении солей магния происходит нормализация повысившейся во время магнийдефицитной диеты центральной и периферической болевой чувствительности. В тесте механического раздражения показано, что у животных, получавших соли магния в комбинации с витамином В6, отмечалось максимальное, по сравнению с другими группами, восстановление порога болевой чувствительности. В тесте электрического раздражения корня хвоста соли магния также способствовали замедлению проведения болевых импульсов на уровне спинного мозга, ствола и таламуса. Антиноцицептивный эффект солей магния связан со способностью ионов магния вызывать потенциал-зависимый блок ИМБА-рецспторов, снижать образование субстанции Р, простагландинов и других медиаторов воспаления, снижающих болевой порог.

Дисбаланс соотношения Са:1У^ в сторону избытка кальция и дефицита магния сопровождается выраженными изменениями в гемобиологическом статусе животных. В наших исследованиях у магний-дефицитных животных повышалась вязкость крови и эритроцитарной взвеси на всех скоростях сдвига, на 36% по сравнению с интактными животными увеличился индекс агрегации эритроцитов. Данные изменения могут свидетельствовать о выраженных нарушениях структуры и функции эритроцитарных мембран, а также активации процессов агрегатообразования. Полученные результаты согласуются с ранее проведенными исследованиями, в которых показано увеличение вязкости крови морских свинок в условиях дефицита магния, при этом последующее введение магния животным приводило к снижению данных показателей.

Степень коллаген-индуцированной агрегации выросла на 63,21% (р=0,026), АДФ (5,0 мкМ) - на 66,19%, АДФ (0,5 мкМ) - на 55,45% по сравнению с группой интактного контроля. Кроме того, повысилась вязкость бедной тромбоцитами плазмы, возможно, связано с гиперфибриногенемией у магнийдефицитных животных, т.к. у них отмечалось ускорение перехода фибриногена в фибрин.

По мере восстановления уровня магния в плазме и эритроцитах при введении солей магния происходило снижение вязкости крови. Максимально вязкость крови, стандартизированной по гематокриту, при скорости сдвига 200 с"1 снизилась в группе животных, получавших Mg хлорид и Mg L-аспарагинат в комбинациях с витамином В6. В этих же группах вязкость крови сильнее всего снижалась и на скоростях сдвига 50 с"1 и 10с"1. Индексы агрегации эритроцитов также снизились во всех группах животных, получавших соли магния, и достоверно друг от друга не отличались. В исследованиях Scheibe F. и соавт. [575] показано, что магний в высоких дозах снижает вязкость и вязкоэластические свойства крови у морских свинок.

Вязкость взвеси эритроцитов также снизилась, при этом наибольшую эффективность исследуемые соли магния проявили при низкой скорости сдвига (10 с"1), что свидетельствует о восстановлении структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов. В исследованиях Dupuy-Fons С. и соавт. [308] показано, что магний повышает резистентность мембраны эритроцитов к химическому и термическому воздействию, способствует повышению их деформабельности.

В условиях компенсации дефицита магния происходило ингибирование процессов агрегации тромбоцитов в ответ на добавление коллагена, АДФ в концентрациях 0,5 и 5,0 мкмоль, при этом лидером по снижению индекса агрегации был Mg хлорид. Полученные результаты согласуются с литературными данными. Магний ингибирует тромбоцитарную функцию in vitro [296] и in vivo [228, 633, 416], при внутривенном введении удлиняет кровотечение у беременных [633] и здоровых добровольцев [416]. В исследованиях Corsonello А. и соавт. [229], ex vivo было показано, что Mg сульфат подавляет агрегацию тромбоцитов,-индуцированную лептином (гормоном, синтезируемый адипоцитами висцеральной жировой ткани). Serebruany V.L. [149] показал, что in vitro магний угнетает агрегацию, дегрануляцию, экспрессию поверхностных антигенов тромбоцитов.

В исследовании Sheu J.R. и соавт. [451] Mg сульфат дозозависимо (0,6-3,0 мМ/л) подавлял агрегацию тромбоцитов, индуцированную различными агонистами. Более того, Mg сульфат (3,0 мМ/л) влиял на связывание флюоресцеин-5-изотиоцианат-трифлавина с гликопротеиновым Ilb/IIIa комплексом в коллаген-индуцированных тромбоцитах. Магния сульфат в концентрациях 1,5 и 3,0 мМ/л л I ингибировал разрушение фосфоинозитида и мобилизацию внутриклеточного Ga , а в концентрации 3,0 мМ/л значительно подавлял коллаген-индуцированный синтез тромбоксана А2. Более того, Mg сульфат (1,5 и 3,0 мМ/л) увеличивал флюоресценцию тромбоцитарной мембраны, меченной дифенилгексатриеном и увеличивал формирование цАМФ в тромбоцитах. Авторы полагают [451], что в антиагрегантное действие Mg сульфата могут быть вовлечены следующие механизмы: (1) магний может вначале инициировать изменения жидкостных свойств мембраны тромбоцитов, что в последующим влияет на связывание фибриногена с гликопротеиновым Ilb/IIIa комплексом, подавляет разрушение фосфоинозитида и синтез тромбоксана А2; (2) магний может запускать, синтез цАМФ, что приводит к фосфорилированию белка Р47 (Mr 47000) и мобилизации внутриклеточного кальция [451].

Gries А. с соавт. [631] показали, что у пациентов, перенесших аорто-коронарное шунтирование, магний in vitro дозозависимо ингибировал коллаген- и АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов (на 13% и 17% соответственно), экспрессию Р-селектина (на 18%), связывание фибриногена с гликопротеиновыми Ilb/IIIa рецепторами на поверхности тромбоцитов (на 10%). Одним из вероятных механизмов может быть ингибирование связывания фибриногена с гликопротеиновыми Ilb/IIIa рецепторами на поверхности тромбоцитов [228], которое необходимо для их адгезии и агрегации. С другой стороны, ингибирование АДФ-индуцированной экспрессии Р-селектина в исследованиях Gries А. с соавт. [631] и Gawaz М. с соавт. [228] указывает на подавление тромбоцитарной функции, так как в активированных тромбоцитах Р-селектин переносится из а-гранул на поверхность тромбоцитов и является важным звеном в процессе адгезии тромбоцитов. Другие авторы считают, что магний снижает агрегацию тромбоцитов в результате снижения внутриклеточной цАМФ и кальциевого тока [296, 418] и подавления активности циклооксигеназы и липооксигеназы [296].

Время фибринобразования в группе животных получавших соли магния, достоверно увеличилось по сравнению с магнийдефицитными животными.

Дисбаланс соотношения Ca:Mg, а также функциональный дефицит магний-зависимых ферментов может играть ключевую роль в патогенезе нервно-психических заболеваний. Singewald N. и Sinner С. (2004) установили, что дефицит магния вызывает депрессивно-подобное поведение, что, по их мнению, можно использовать для оценки антидепрессантной и анксиолитической активности-новых соединений. В условиях магнийдефицитной диеты, по данным этих же авторов, эффективными оказались дезипрамин и экстракт зверобоя. В экспериментах, проведенных Fromm L. с соавт. (2004), внутривенное введение Mg сульфата крысам с травматическим повреждением головного мозга предупреждало в последующем развитие депрессии. Согласно литературным данным Eby G.A., Eby K.L. (2006), пероральный прием магния в виде таурината й глицината уже в течение 7 дней приводит к регрессии симптомов большой депрессии.

В ходе экспериментов было показано, что дефицит магния проводит к формированию депрессивно-подобного и тревожного поведения. Так, в тесте «открытое поле» у магнийдефицитных крыс горизонтальная двигательная активность достоверно снизилась на 62,5% (р=0,0005), вертикальная двигательная - на 67,5% (р=0,002), поисковая - на 73,8% (р=0,0006). Частота актов груминга в диетной группе сократилась на 59,1% (р=0,01), а число болюсов выросло (р=0,008) в 9 раз. Магнийдефицитные животные совершали на 68% меньше посещений центральной зоны открытого поля (р=0,01).

В «крестообразном лабиринте» латентный период до выглядывания из темного отсека у магнийдефицитных животных был в 3 раза дольше (р=0,063), а время до выхода в светлый' отсек превышало в 2 раза аналогичный период (р=0,0005) у контрольной группы. Время пребывания в светлых отсеках у животных диетной группы оказалось на 78,5% меньше (р=0,003), чем у контрольных.

В тесте принудительного плавания (тесте Порсольта), по сравнению с интактным контролем, у магнийдефицитных крыс латентный период первого активного плавания сократился на 48,9% (р=0,0005), а суммарная длительность иммобилизации увеличилась на 70,2% (р=0,0005).

Таким образом, данные, полученные нами, согласуются с результатами исследований других авторов. В частности, в^ешаИ N. с соавт. на модели дефицита магния у мышей выявили увеличение периода иммобилизации- в тесте вынужденного плавания, что отражает степень депрессивности магнийдефицитных животных. Кроме того, данные авторы сообщают, что в тесте «открытое поле» мыши с дефицитом магния продемонстрировали повышенную тревожность (совершали меньше посещений центральной зоны, чем контрольные животные).

После перорального введения изучаемых солей произошла компенсация дефицита магния в плазме крови и эритроцитах, которая сопровождалась снижением тревожности и регрессии проявлений депрессии. При этом наиболее эффективными оказались соли магния комбинированные с пиридоксином.

В тесте «крестообразный лабиринт» латентный период пребывания в центре1 у животных, получавших соли, сократился. Латентный период до выглядывания из темного отсека после введения солей магния также восстанавливался. Лидерами по влиянию на данный параметр были магния хлорид и магния Ь-аспарагинат в комбинации с витамином Вб. Увеличилось число посещений темных и светлых отсеков. Удлинилось время пребывания в светлых рукавах лабиринта, особенно в группах, получавших соли магния в комбинации с пиридоксином.

В тесте вынужденного плавания увеличился латентный период до первого эпизода пассивной иммобилизации. Лидером по этому показателю являлись магния хлорид и магния Ь-аспарагинат в комбинациях с витамином Вб, Уменьшилась по сравнению с диетной группой общая продолжительность периодов иммобилизации, которая характеризует степень депрессивности животных.

После изучения воздействия солей магния на поведение была предпринята попытка фармакологического анализа причин депрессивно-подобного поведения и повышенной тревожности у магнийдефицитных животных.

При оценке фенаминовой стереотипии у магнийдефицитных животных по сравнению с интактными выявлено уменьшение длительности латентного периода на 14,89% и достоверное увеличение длительности фенаминовой стереотипии на 19,44%. При изучении гиперкинеза, вызванного 5-окситриптофаном, в группе магниевого дефицита наблюдалось снижение выраженности его проявления на 49,31% (р=0,048). При введении ареколина у магнийдефицитных животных происходило статистически значимое увеличение латентного периода на 164,33%, а также уменьшение длительности тремора в среднем на 40,13% по сравнению с интактными крысами.

После введения солей магния уменьшалась длительность фенаминовой стереотипии в группе животных и увеличивалась выраженность гиперкинеза, вызванного введением 5-гидрокситриптофана. При введении ареколина в группах, получавших соли магния, отмечено достоверное уменьшение длительности латентного периода, по сравнению с магнийдефицитными животными. По влиянию на ареколиновый тремор наибольшую эффективность проявили группы животных, полкчавших комбинированные с пиридоксином соли магния.

В настоящее время обсуждается вопрос о том, какие именно биологические системы/биохимические механизмы вовлечены в патогенез аффективных расстройств и на какие из них действует магний. Существуют различные точки зрения относительно механизма влияния дефицита магния на поведенческие реакции. Так, снижение уровня внеклеточного магния и увеличение кальция облегчает активацию NMDA-рецепторов [448], что ведет к повышению возбудимости нейронов в области гиппокампа и голубого пятна [272]. NMDA-опосредованная гиперактивность, как полагают Shiekhattar R. и Aston-Jones G [596], является одной из составляющих патогенеза депрессий. Поэтому антагонисты NMDA-рецепторов или высокие дозы солей магния могут проявлять антидепрессантную активность [96, 480, 510] и анксиолитический эффект [96]. Дефицит магния влияет также на баланс моноаминов в головном мозге, таких, как катехоламины и серотонин [341]. Магний, по мнению некоторых авторов [341], повышает активность триптофангидроксилазы, а также необходим для связывания медиаторов с серотониновыми рецепторами. Согласно литературным данным, магний приводит к уменьшению ночной секреции кортиколиберина и, соответственно, кортизола, а значит, и к снижению активности гипоталамо-гипофизарной системы как при внутривенном [466], так и пероральном введении [491]. Вероятно, это также может являться дополнительной составляющей в антидепрессантопобном механизме действия солей магния, т.к. при депрессиях часто фиксируется повышение активности гипоталамо-гипофизарной системы [290]. McCoy М.А. с соавт. [545] сообщают, что при дефиците магния наблюдается статистически значимое изменение содержания 3,4-дигидроксифенилаланина и дигидроксифенилалниновой кислоты в полосатом теле и дофамина в. коре и мозжечке.

Таким образом, возможными точками приложения эффектов магния* являются активность гипоталамо-гипофизарной системы (ГГС), кортиколиберин, ГАМК- и глутаматергические механизмы нейротрансмиссии, передача сигнала, реализуемая за счет протеинкиназы С [464].

Возможный механизм влияния магния на нейротрансмиссию в ЦНС описан в работе PoleszakE. и NowakG. [510]. Согласно описанной ими схеме, усиление норадренергической передачи приводит к стимуляции p-адренорецепторов и повышению синтеза цАМФ, как следствие - протеинкиназы А и, в конечном итоге, фосфорилированию белка, связывающегося с цАМФ-зависимым элементом (сАМР response element-binding protein, CREB). По мнению Holl J.E. с соавт. [107], магний, напротив, подавляет норадренергичесике влияния. С другой стороны, под действием ионов магния происходит увеличение концентрации серотонина (5-НТ), усиливается серотонинергическая нервная передача, что через повышение активности кальций-кальмодулин зависимой киназы (Ca-calmodulin dependent kinase II, CaM-KII) также ведет к активации CREB. Фосфорилированный CREB повышает концентрацию мозгового нейротрофического фактора (brain-derived neurotrophic factor, BDNF), который за счет угнетения NMDA-рецепторов и собственной активности оказывает нейропротекторное и антидепрессантное действие. Кроме того, магний сам по себе оказывает блокирующее действие на NMDA-рецепторы [510].

В ходе экспериментов было показано, что дефицит магния приводит к снижению порога коразоловых судорог на 30%, что согласуется с данными других авторов. В литературе давно дискутируется роль дефицита магния в патогенезе судорог различной этиологии. Так, Derchansky М. с соавт. [460] разработал модель, воспроизводящую судорожную активность в клетках гиппокампа in vitro, основанную на низком уровне магния в искусственной спинномозговой жидкости. При этом противосудорожую активность в рамках этой модели проявили вальпроаты и бензодиазепины. Swartzwelder H.S. с соавт. [624] показали, что решающую роль в снижении судорожного порога при низком содержании магния in vitro играет угнетение ГАМК-эргического контроля.

По мнению других авторов [587, 618], низкий порог судорожной активности может быть связан с изменением соотношения Ca:Mg и снижением антагонистической роли магния в отношении входящего кальциевого тока через каналы, ассоциированные с NMDA-рецепторами. Sinert R. с соавт. [587] в своих исследования показали, что у всех сорока девяти обследованных пациентов с судорогами отмечался достоверно низкий уровень ионизированного магния и высокое соотношение Ca:Mg по сравнению с контрольной группой.

В наших исследованиях активность солей магния изучалась на. модели судорог, вызванных введением коразола, механизм действия которого обусловлен1 блокадой хлорного канала ГАМКл-рецепторного комплекса, что подтверждает выявленную другими авторами взаимосвязь ГАМК-ергической системы и магниевого баланса в организме. В ходе исследований нами показано, что все изучаемые соли магния повышали судорожный порог. При этом наиболее активным оказался Mg хлорид в комбинации с витамином Вб [ТЮ50 = 81,15 мг коразола/кг] и Mg L-аспарагинат в комбинации с витамином В6 [ТШ50 = 83,19 мг коразола/кг]. Очевидно, это связано не только с повышением биодоступности магния в присутствии пиридоксина [211], т.к. существуют литературные данные, свидетельствующие о том, что дефицит пиридоксина сам по себе может приводить к судорожному синдрому у детей [266]. Пиридоксин также необходим для реакций синтеза ГАМК [276].

В ходе экспериментов было показано, что в условиях алиментарного дефицита магния соли магния повышают снизившийся во время магнийдефицитной диеты аритмогенный порог. При этом максимальный эффект развивался у животных, получавших Mg хлорид и Mg L-аспарагинат в комбинациях с пиридоксином, ATD50 для которых была равна 160,41 [146,52-175,61] и 161,5 [144,63+180,38] мг/кг соответственно. Наименее эффективным был Mg сульфат (ATD50 =152,82 [138,35-468,81] мг/кг). Кроме того, указанные комбинации достоверно увеличивали продолжительность жизни животных по сравнению с группой, получавшей магнийдефицитную диету.

Снижение аритмогенного порога в наших исследованиях согласуется с литературными данными [580]. Дефицит магния угнетает натрий-калиевую АТФазу кардиомиоцитов (функциональный дефицит магний-зависимых ферментов), что ведет к нарушению генерации мемранного потенциала покоя и фазы реполяризации потенциала действия. Кроме того, ионы магния блокируют кальциевые каналы, поэтому недостаток магния может привести к постепенному повышению внутриклеточной концентрации ионов кальция (дисбаланс соотношения Ca:Mg). Увеличение содержания кальция в клетках повышает их чувствительность к токсическим эффектам сердечных гликозидов и увеличивает вероятность развития аритмий. Дефицит магния ведет к сопряженному с ним снижению содержания калия в кардиомиоците, повышает вероятность развития желудочковых аритмий, в частности, экстрасистолии и тахикардии типа «пируэт».

Магний обладает способностью блокировать медленный входящий ток кальция в клетку, что снижает частоту импульсов, генерируемых синусовым узлом, удлиняет время проведения через атриовентрикулярный узел и период его рефрактерности. Помимо антагонизма с ионами кальция, магний оказывает мембраностабилизирующее действие, способен удерживать калий в клетке и препятствовать симпатическим влияниям.

Дефицит магния является одним из факторов, провоцирующих уролитиаз [278, 515, 653]. Предполагается, что низкая экскреция магния с мочой является фактором риска при формировании кальциевых камней [653], так как магний служит одним из ингибиторов кристаллизации оксалата и фосфата кальция in vitro [355, 376, 529]. Рядом авторов [483] было продемонстрировано, что при введении магния отмечается эффективное снижение темпа развития кальцийоксалатного уролитиаза как на фоне дефицита, так и при нормомагнезиемии. Вместе с тем, результаты различных исследований в этой области остаются неоднозначными. Так Khan S.R. с соавт. [346], изучая влияние терапии магния оксидом на формирование кальцийоксалатного нефролитиаза в условиях интоксикации этиленгликолем, не обнаружили статистически достоверного ингибирования нефролитиаза [346]. Показано, что при введении магния оксида в диету происходит лишь, торможение, а не полное предотвращение уролитиаза. С другой стороны, Essen Т. с соавт. (1990) отметили, что магний, вводимый гипероксалурическим крысам, приводит к статистически значимому снижению оксалата в моче [635]. Те же авторы сообщают, что введение магния гидроксида в дозе 0,5-1,0 г в день пациентам с гипомагнезиемией ведет к статистически достоверному падению уровня оксалата в моче на 30% [558]. В клинических исследованиях Albuqueqaue P.F. и TumaM. (1962) показано статистически значимое снижение оксалата в моче при введении магния оксида [85]. Дефицит пиридоксина^ также может инициировать уролитиаз, а назначение его при гипероксалурии тормозит образование кристаллов оксалата [263]. Prien E.L. и GershoffS.N. (1974) использовали этот факт для объяснения положительного эффекта терапии оксидом-магния в комбинации с витамином В6 в дозе 100 мг магния оксида 3 раза и 10 мг, пиридоксина 1 раз в день [515]. Благоприятное влияние диеты, обогащенной магнием оксидом в сочетании с витамином Вб, на экскрецию* оксалатов и функциональное состояние почек было также описано ГурвичД.Б. и др. [16] . Поэтому на следующем этапе было изучено влияние некоторых органических солей магния и их комбинации с пиридоксином на течение экспериментального уролитиаза в условиях интоксикации этиленгликолем, а также влияние солей магния на формирование уролитиаза в условиях алиментарной гипомагнезиемии.

В условиях алиментарного дефицита магния у животных отмечено достоверное, по сравнению с интакгной группой, увеличение фосфатов (фосфаты кальция, триппельфосфаты) и оксалатов кальция в моче. В 80 % случаев наблюдаемые кристаллы располагались в виде конгломератов, что не отмечено для интактной группы крыс. При анализе показателей pH мочи достоверных изменений не выявлено. У магнийдефицитных крыс наблюдалось статистически значимое увеличение концентрация кальция в плазме крови, снижение суточной экскреции магния с мочой (р<0,0001), повышение экскреции кальция (р<0,0001), фосфатов (р<0,0001) и оксалатов (р<0,0001), увеличение соотношения Ca:Mg в 5 раз, статистически значимое увеличение концентрации кальция и фосфора в моче, по сравнению с интактным контролем.

В> результате терапии солями магния достоверно возросла экскреция1магния с мочой;,, а также. снизилась концентрация-; кальция и фосфора в моче, снизились > соотношение Са:М& мочи и концентрация оксалатов в моче, практически полностью исчезла кристаллурия по сравнению с магнийдефицитными крысами. При этом существенных различий по данным показателям в группах, получавших соли магния, обнаружено не было.

Таким образом; коррекция алиментарной гипомагнезиемии солями? магния* препятствовала развитию уролитиаза: и, тем самым, приводила! к восстановлению нормального уровня фосфатов, кальция, магния и оксалатов мочи: Хотя достоверных отличий4 между солями выявлено не было, при коррекции состава* мочи прослеживается тенденция большей эффективности (нормализация;-концентрации оксалатов в. моче, суточной экскреции, и концентрации* фосфора, в моче, соотношения Са:М§) М§ Ь-аспарагината и хлорида в комбинации с витамином В6.

В' условиях интоксикации этиленгликолем у животных на-, 14 день-эксперимента отмечалось статистически значимое повышение уровня? оксалатов-: (р<0,0001) и кристаллов оксалата кальция в моче (с 0 до 16±3; р<0,0005),, снижение рН мочи (р<0,0001) и клиренса креатинина на 18%, увеличение фракционной экскреции магния на 39,9%. Уровень магния и фосфора в плазме крови, эритроцитах и моче, а также концентрации кальция в плазме крови и моче статистически значимо не изменились. Фракционная экскреция кальция повысилась на 40,77% (р=0,003). Соотношение Са:М§ мочи статистически значимо не изменилось, а соотношение оксалат/креатинин в группе, получавшей этиленгликоль, выросло более чем в 2,5 раза (р=0,00012). Перечисленные: выше изменения лабораторных показателей свидетельствуют о развитии у животных экспериментального уролитиаза.

В группах животных, получавших соли магния, отмечалось благоприятное протекание: экспериментального уролитиаза - статистически значимое снижение уровня оксалата. в моче, уменьшение количества кристаллов оксалата кальция, повышение рН мочи. Также возрос клиренс креатинина, снизившийся в процессе интоксикации: этиленгликолем; оптимизировались соотношения Са:М^, оксалат/креатинин, снизилась экскреция фосфатов с мочой.

Одним из механизмов снижения- экскреции; оксалата при введении солей магния: является; уменьшение его всасывания* в кишечнике [184]. Магний уменьшает количество и размер сформировавшихся- кристаллов, что снижает вероятность образования больших агрегатов* способных задерживаться в почечных канальцах [515]. Следует также отметить, что дефицит магния приводит к. повышению экскреции фосфатов с мочой [322] и может являться причиной кальцийфосфатного уролитиаза. Фосфат кальция, может служить основой для образования ядра кристаллов кальция; оксалата in vitro и in vivo и; усиливает агрегацию кристаллов кальция оксалата [455]. В нашем исследовании; в результате: терапии; солями магния> снизилась экскреция; фосфата с мочой, вместе с уменьшением выраженности кристаллурии, что* свидетельствует о снижении-способности мочи к кристаллизации. Благотворное действие терапии« солямш магния связано со способностью повышать pH' мочи и экскрецию цитрата, а также образовывать магния оксалат, обладающий большей, растворимостью, нежели; оксалат кальция [346]. Снижение фракционной экскреции магния, кальция, и фосфора свидетельствует о более полной обратной реабсорбции этих веществ в результате частичного восстановления функции тубулярного эпителия, которая.' нарушается вследствие цитотоксичности этиленгликоля [380]. Тот факт, что нам удалось достичь статистически значимого уровня коррекции уролитиаза; хотя во многих исследованиях зарубежных авторов изменения оказались недостоверными, можно объяснить тем, что они использовали для коррекции патологии магния оксид и магния гидроксид. Согласно же исследованиям FirozM., Graber M;. (2001) [252] эти соли имеют намного меньшую биодоступность, по сравнению с Mg аспарагинатом и Mg хлоридом. Кроме того, сам пиридоксин обладает доказанной эффективностью при лечении и профилактике уролитиаза [320].

XII.1. Заключение

В условиях дефицита магния Mg хлорид и Mg L-аспарагинат эффективно устраняли депрессивно-подобное поведение и: повышенную тревожность у магнийдефицитных животных, способствовали нормализации М-холинергической, норадренергической, серотонинергической нейротрансмиссии в ЦНС, повышали порог коразоловых судорог. Mg хлорид и Mg L-аспарагинат устраняли эозинофильный и нейтрофильный лейкоцитоз, гиперемию ушных раковин, спленомегалию, повышал болевой порог при механическом давлении и электрическом раздражении корня хвоста магнийдефицитных животных. При алиментарной гипомагнезиемии хлорид и Ь-аспарагинат и увеличивали усточивость миокарда к аритмогенному действию кальция хлорида, повышали концентрацию ЛПВП и аполипопротеина А1, снижали уровень триглицеридов, ЛПНП, общего холестерина, аполипопротеина В в сыворотке крови, а также индекс атерогенности. ^^ хлорид и Ь-аспарагинат снижали вязкость крови и эритроцитарной взвеси, уменьшали агрегацию тромбоцитов, индуцированную АДФ и коллагеном. По многим показателям комбинации М§ хлорида и М§ Ь-аспарагината с пиридоксином превосходила препарат сравнения магния сульфат и была сопоставима с магне В6.

Пролапс митрального' клапана, гипермобильность суставов, гипе

4-Содержание отдельных видов коллагена (Дисплазия соединительной ткани)

К! Эндотелиальная дисфункция ' и-

Генерализованная иммунно-воспалительная реакция ипопротеинлипаз печеночная липаза, лецитин :холестерол

Функциональный дефицит Мд-зависимых ферментов Лейкоцитоз, эози-нофилия, нейтрофи-лез ■* интерлейкин 6, ФНО-а, аг макроглобулин, ог шикопротеин активность ГАМК-ергической системы

•»•Судорожная готовность (икроножные судо т Ионная проницаемость мембраны дефицит магния г

4- Ыа*-К*-АТФаза Соотношение Са2*:Мд2*

4- Са -АТФаза

-Г". ЛОНП+ лнп та ский синдром ж»

4- [К*] 4-[Мд2*] Ма*-Са2* обмен + [Са2*]

-■■■■ - I

Тонус сосудов, в т.ч, коронарных

Кумуляция ионов Са2* в митохондриях

4-Активность серотонинерги-ческой системы

4- Активность а-кетоглутарат: глиок-силат карболигазы

Са фосфат в моче ,—

Агрегация тромбоцитов, +вязкость крови

Гиперок-салурия

-Г-Са окса-лат в моче

МННМЙШШМ Дислипиде мия —.—

I—,--

Гипертензия +Постнагрузка

ШЛ

4-Коронар-ный кровоток

I миокарда -»•Аритмия

Атеросклероз киша

4-Миокардиальная гемодинамика Ш

I Синдром повышенной вязкости крови и о

Рисунок XII-1 Клинические последствия дефицит магния

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Иежица, Игорь Николаевич, 2008 год

1. Анализатор вязкости крови / H.A. Добровольский и др. // Реологические исследования в медицине: сб. науч. тр. М.: НЦХ РАМН, 1998. - С. 45-51.

2. Антигипертензивная терапия корадолом: Можно ли влиять на периферический метаболизм серотонина? / К. Шебекова и др. // Словакофарма Ревю. 1991. - Т. 1, № 1. - С. 20-22.

3. Баркаган, З.С. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / З.С. Баркаган, В.П. Балуда. Томск, 1980. -71 с.

4. Баркаган, З.С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот. М.: Ньюдиамед, 2001.-285 с.

5. Бачев С. Полиминерол / С. Бачев, Ю. Писарев. София, 1970. - 25 с.

6. Беспалов, А.Ю. Нейропсихофармакология антагонистов NMDA-рецепторов / А.Ю. Беспалов, Э.Э Звартау. СПб.: Невский Диалект, 2000. - 297 с.

7. Буров, Ю.В. Формирование экспериментального алкоголизма в популяции беспородных крыс / Ю.В. Буров, А.Б. Кампов-Полевой, О.П. Кашевская // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1983. - Т. 96, № 8. - С. 67-68.

8. Верткин, А.Л. Применение магния в кардиологии / А.Л. Верткин, В.В. Городецкий // Кардиология. 1997. - № 11. - С. 96-99.

9. Воронина, Т.А. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Т.А. Воронина, Л.Н Неробкова Под ред. Р.У. Хабриева. М.: Медицина, 2005. - 832 с.

10. Вредные химические вещества. Неорганические соединения элементов I-IV групп: Справ, изд./ A.JI. Бандман и др. // Под ред. В. А. Филова и др. Л.: Химия, 1988. -512 с.

11. Галенок, В.А. Гемореология при нарушениях углеводного обмена / В.А. Галенок, Е.В. Гостинская, В.Е. Диккер. Новосибирск: Наука, 1987. - 232 с.

12. Гемореологические профили у пациентов с артериальной гипертензией в сочетании с синдромом гипервязкости / A.B. Муравьев и др. // Физиология человека. 1998. — № 2. - С. 113-117.

13. Гурвич, Д.Б. Влияние диеты, обогащенной магнием на экскрецию оксалатов и функциональное состояние почек у больных с гипероксалурией / Д.Б. Гуревич, H.A. Коровина, Л.И. Мырсова // Педиатрия. 1979. - №2. - С. 14-16.

14. Дефицит магния в контексте концепции элементного гомсостаза у детей с минимальной мозговой дисфункцией и его коррекция препаратом Магне В6 / O.A. Громова и др. // Клиническая фармакология и терапия. 1998. - Т. 7, № 3. -С. 52-58.

15. Дисплазия соединительной ткани при идиопатическом пролапсе митрального клапана / А.И. Мартынов и др. // Клиническая медицина. 1998. - № 12. - С. 2024.

16. Доклиническая оценка фармакологической активности смешанного глутамата калия и магния / A.C. Берлянд и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. — 1997. -Т. 60,№2.-С. 16-19.

17. Затула, Е.И. Описании изобретения к авторскому свидетельству (АС СССР №1635328) / Е.И. Затула и др., 1998.

18. Земцовский, Э.В. Спорные вопросы диагностики и лечения дисплазии соединительной ткани / Э.В. Земцовский, С.Ф. Гнусаев // Медицинский вестник. -2007. -№21 (406).-С. 11.

19. Ивашкина, Е.П. Методы оценки функциональной активности тромбоцитов у больных гемофилией / Е.П. Ивашкина, С.А. Садков, Л.Н. Тарасова // Вестн. службы крови России. -1999. -№ 1. С. 31-34.

20. Иконникова Е.И. Способ исследования внутрисосудистой агрегации тромбоцитов in vitro / Е.И Иконникова, Л.А. Черноусова, И.Р. Мошкина // Клинич. лаб. диагностика. -1999. №6. -С. 20-21.

21. К механизму антиаритмического действия никотинатов калия и магния / Я.Б. Максимович и др. // Фармакол. и токсикол. 1979. - Т. 42, № 5. - С. 501-504.

22. Калуев, A.B. Стресс. Тревожность. Поведение / A.B. Калуев. Киев, 1998. - 98 с.

23. Камшилова, Е.А. О лечении нарушений сердечного ритма панангином / Е.А. Камшилова // Кардиология. — 1973. — Т. 13, № 10.-С 104-109.

24. Карпенко, В.Н. Некоторые показатели морфологического состава крови и естественного иммунитета у здоровых белых крыс / В.Н. Карпенко, А.И. Олефир,

25. A.П. Мороз // Лабор. дело. 1970. -№ 3. - С. 165-167.

26. Клинические рекомендации: Фармакологический справочник. Под. ред. Денисова И.Н., Шевченко Ю.Л. ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 1184 с.

27. Клыков Н.В. Применение панангина в лечении сердечной недостаточности / Н.В. Клыков, Л.А. Полякова // Изд. Кубанск. гос. мед. ин-та, 1974. С. 106-110:

28. Корадол в терапии эссенциапьной гипертензии. Результаты координированного исследования / Й Драгошева и др. // Словакофарма Ревю. 1991. - Т.1, № 1. -С. 14-19.

29. Кошелева, Н.Г. Обмен магния при применении его препаратов для лечения легких форм гестоза и других осложнений беременности / Н.Г. Кошелева // Акушерство и гинекология. 1998. - № 5. - С. 48-51.

30. Кукушкин, М.Л. Патофизиологические механизмы болевых синдромов» / М.Л. Кукушкин // Боль. 2003. - № 1. - Электронный ресурс. - Режим доступа: http://vvww.painstudy.ru/schmerz/03-01/kukushkin.htm. - Загл. с экрана.

31. Куценко, С.А. Нейротоксичность Глава 7.5. / С.А. Куценко // Основы токсикологии. Санкт-Петербург, 2002. - Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.medline.ru/monograf/toxicology/p7-selectivetoxicity/p5.shtml - Загл. с экрана.

32. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник // Под ред.

33. B.В. Меньшикова, М.: Медицина, 1987. - 368 е.

34. Лабори, А. Регуляция обменных процессов. Теоретические, экспериментальные, фармакологические и терапевтические аспекты / А. Лабори. — М.: Медицина, 1970. -384 с.

35. Лазебник, Л.Б. Коррекция магниевого дефицита при сердечно-сосудистой патологии / Л.Б. Лазебник, С.Л. Дроздова // Кардиология. 1997. - № 5. - С. 103104.

36. Лаучевичус, Л.З.Применение панангина при сердечной недостаточности и нарушениях ритма сердца / Л.З. Лаучевичус, Х.Х. Кибарскис, Е.С. Мотеюнайте // Врачеб. дело. -1972. № 4. -С. 30-33.

37. Лещинский, Л.А. Эффективность и сравнительная оценка различных средств первичной профилактики аритмии в остром периоде инфаркта миокарда /

38. Л.А. Лещинский, В.Г. Лазаренко // Тер. архив. 1979. - Т. 51, № 1. - С. 35-40.

39. Люсов, В.А. Современные проблемы терапии нарушений реологических свойств крови у больных ишемической болезни сердца / В.А. Люсов, М.П. Савенков // Кардиология. 1998. - №5. - С. 5-8.

40. Магния карбонат основной магнезия белая / М.И. Голубева и др. // Токсикологический вестник. - 1997. - № 2. - С. 29-30.

41. МакДермотт, М.Т. Секреты эндокринологии. Пер. с англ. / М.Т. МакДермотт. М.: Бином, 2001.-464 с.

42. Мельников, A.A. Понижение деформируемости эритроцитов у спортсменов, вызванное нарушением магниевого баланса / A.A. Мельников, А.Д. Викулов // Физиология человека.-2005.-Т. 31,№3.-С. 133-136.

43. Меньшиков, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник /

44. B.В. Меньшиков, Л.Н. Делекторская, P.M. Золотнинская. М.: Медицина, 1987.1. C. 266-267.

45. Микронутриенты в питании здорового и больного человека / В.А. Тутельян и др.. М.: «Колос», 2002. - 442 с.

46. Москалев, Ю.И. Минеральный обмен / Ю.И. Москалев. М.: Медицина, 1985. -288 с.

47. Новые подходы к лечению больных идиопатическим пролабированием митрального клапана / А.И. Мартынов и др. // Тер. архив. 2000. - № 72. - С. 6770.

48. Ноговицина, O.P. Диагностическая значимость исследования магниевого гомеостаза у детей с синдромом дефицита внимания с гиперактивностью / O.P. Ноговицина, Е.В. Левитина // Клиническая лабораторная диагностика. 2005. -№5. - С. 17-19.

49. Оценка гомеостаза магния у больных фибромиалгией / В.А. Рыбак и др. // Микроэлементы в медицине: Съезд Российского общества медицинской элементологии (РОСМЭМ) (1; 2004; Москва): тез. докл. М., 2004. - Т. 5, вып. 4. -С. 116.

50. Оценка эффективности лечения желудочковых нарушений сердечного ритма в зависимости от механизма их развития / А.И. Олесин и др. // Кардиология. — 2000. -№ 1.-С. 64-68.

51. Применение препарата Магне-Вб для лечения тревожно-депрессивных состояний у больных эпилепсией / В.В. Калинин и др. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2004. - Т. 104, № 8. - С. 51-55.

52. Результаты применения магниевой соли оротовой кислоты "Магнерот" при лечении больных с идиопатическим пролапсом митрального клапана / О.Б. Степура и др. // Российские медицинские вести. 1999. - №2. - С. 12-16.

53. Розен, М.Р. Антиаритмические вещества: обучение врачей и фармакологов / М.Р. Розен // Кардиология. 1996. - Т. 36, № 6. - С. 19-27.

54. Роль магния в патогенезе и развитии клинической симптоматики у лиц с идиопатическим пролапсом митрального клапана / О.Б. Степура и др. // Российский кардиологический журнал. 1998. - № 3. - С. 45-47.

55. Рыбина, И.Л. Оценка роли метаболизма оксалата в этиопатогенезе мочекаменной болезни / И.Л. Рыбина, В.И. Вощула // Медицинский журнал. 2006. - № 1. - С. 15 - Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.bsmu.by/bmm/01.2006/29.html - Загл. с экрана.

56. Санджорджи, М. Применение сульфата магния при тахикардии типа пируэт {torsades de pointes) и других гиперкинетических желудочковых тахикардиях / М. Санджорджи // Кардиология. 1992. -№ 6. - С. 109-113.

57. Саноцкий, И.В Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений / И.В. Саноцкий, И.П. Уланова. — М.: Медицина, 1975. С. 54-60.

58. Сбитнева, М.Ф. Показатели крови, отпечатков костного мозга и селезёнки белых крыс в норме / М.Ф. Сбитнева, Т.В. Каляева, И.А. Рудаков // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1964. - №. 5. - С. 112-116.61