Фотомодификация окрашенных макромолекул в растворах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Никиян, Айк Николаевич

• Никиян, Айк Николаевич
• кандидат физико-математических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Никиян, Айк Николаевич

Введение ф Актуальность проблемы.

Цель работы.

Научная новизна.

Практическая значимость результатов.

Методы исследования.

Публикации.

Апробация работы.

Краткая аннотация глав диссертации.

Глава 1 Лазерная фотомодификация макромолекул.

1.1 Взаимодействие молекул органических красителей с ДНК.

1.2 Фотодинамическое действие органических красителей.

Глава 2 Методика эксперимента.

2.1 Оптические методы.

2.1.1 Измерение спектров поглощения.

2.1.2 Измерение наведенного поглощения.

2.1.3 Установка кинетической флуориметрии

2.1.4 Лазерное разрезание макромолекул и измерение пространственно-временной зависимости оптической плотности.

2.1.5 Методика измерения интенсивности рассеянного света.

2.2 Атомно-силовой микроскоп.

2.3 Объекты исследования. Приготовление образцов.

Глава 3 Взаимодействие органических красителей с макромолекулами нуклеиновых кислот.

3.1 Взаимодействие родаминовых красителей с нуклеиновыми кислотами.

3.1.1 Определение размеров ассоциатов молекул красителей методом углового рассеяния света. олошсиппл ридашгша u/iv v / ixv • • • • •. ймодействие трифенилметановых, акридиновых, флуоресц зиновых красителей с ДНК. ймодействие трифенилметановых красителей с ДНК в воде имодействие акридиновых и тиазиновых красителей с ДНК имодействие флуоресцеиновых красителей с ДНК.]

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фотомодификация окрашенных макромолекул в растворах»

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы

Макромолекулы нуклеиновых кислот (НК) устойчивы к прямому действию ближнего УФ и видимого света. Однако в присутствии органических красителей - природных или синтезированных - в растворах и биосистемах возможны светоиндуцированные процессы, сопровождающиеся модификацией полимерных цепей. Важность исследования фотомодификации нуклеиновых кислот в том, что любое нарушение компонентов ДНК приводит к изменениям в метаболизме клетки и ее генетических свойств.

Совместное действие света и органических красителей на макромолекулы НК получило название фотодинамического действия (ФДД) или фотодинамического эффекта (ФДЭ). Хотя ФДЭ известен давно и опубликовано большое число работ, описывающих его проявление, молекулярные процессы, лежащие в основе явления, еще не полностью объяснены. Все существующие теории физико-химических механизмов ФДД предполагают, что на первой стадии реакции краситель поглощает видимый свет и переходит в возбужденное состояние. Вторая стадия - передача энергии хромофорным группам макромолекул. Вместе с тем, до настоящего времени окончательно не выяснено через какое возбужденное состояние - синглетное или триплетное - идут реакции, не завершена дискуссия о роли кислорода в ФДЭ органических красителей, требуются дополнительные исследования, подтверждающие необходимость для ФДД предварительного связывания красителей с макромолекулами, а также, изучение влияния на этот процесс локального нагрева среды и продуктов фотохимического распада. Поиск ответов на перечисленные вопросы открывает перспективы разработки методов избирательного управления процессами в молекулярных системах для целенаправленного изменения их свойств и характеристик.

Обоснованием актуальности изучения процессов адресной фотомодификации макромолекул НК с помощью органических красителей служат реальные перспективы применения полученных результатов для совершенствования современных биомедицинских технологий, включая технологии, основанные на пространственно локализованной модификации биополимеров in vivo. В этой связи необходимо решить две основные задачи, во-первых, найти оптимальные фотосенсибилизаторы реакций, отвечающих основным требованиям по физико-химическим, биологическим и технологическим критериям, во-вторых, оптимизировать режимы лазерного облучения окрашенных систем, обеспечивающих высокую эффективность оптического воздействия на вещество.

Эффективность фотопревращений в макромолекулах, характеризующихся специфической организацией, зависит от состава, строения и упаковки полимерных цепей. Применительно к нуклеиновым кислотам, эффективность модификации зависит от их структуры (вторичной или третичной) и служит источником информации о свойствах полимеров.

Цель работы

Цель настоящей работы — разработка методов модификации окрашенных макромолекул нуклеиновых кислот лазерным излучением видимого диапазона и установление механизмов процессов.

Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи:

• исследовать взаимодействие органических красителей различных классов с макромолекулами нуклеиновых кислот в водных и буферных растворах;

• изучить спектрально-люминесцентные свойства связанных макромолекулами мономеров, димеров и ассоциатов органических красителей, исследовать кинетику дезактивации их возбужденных состояний и определить соотношение эффективности конкурирующих каналов внутримолекулярной релаксации в связанных молекулах;

• исследовать действие лазерного излучения видимого диапазона на нуклеиновые кислоты в окрашенных растворах, содержащих свободные и связанные макромолекулами органические красители и установить, какое возбужденное состояние - синглетное или триплетное - ответственно за фотодинамическое действие красителей;

• определить роль кислорода в фотодинамическом эффекте и установить, на какой стадии в облучаемых растворах образуются химически активные формы молекулярного кислорода;

• разработать методы идентифицикации типов повреждений полимерных цепей и установить механизмы фотодеструкции окрашенных макромолекул.

Научная новизна

1. Исследовано взаимодействие органических красителей различных классов с макромолекулами нуклеиновых кислот в водных и буферных растворах. Показано, что в результате самоорганизации лигандов при кооперативном связывании с макромолекулами, за счет слабых межмолекулярных взаимодействий на внешней стороне двойной спирали формируются устойчивые наноструктуры определенной формы и размеров. Изучены особенности формирования органических наноструктур в растворах, оценено количество молекул красителей в них, исследовано распределение образующихся субмикронных структур вдоль двойной спирали ДНК и их слияние в более крупные агрегаты.

2. Оптимизированы условия синтеза наноструктур, определены критические концентрации самоагрегации молекул, исследована зависимость степени связывания от ионной силы растворов и его состояния, изучена зависимость константы диссоциации от типа иона и ингибирование связывания ионами различных металлов. Показано, что связанные красители могут инактивиро-вать нуклеиновые кислоты за счет стерического экранирования формирующимися структурами.

3. Исследованы фотопревращения биополимеров под воздействием интенсивного лазерного излучения в растворах, сенсибилизированных органическими красителями. Осуществлено селективное лазерное разрезание макромолекул нуклеиновых кислот с помощью слабо связанных хромофоров и установлены молекулярные механизмы явления. Установлено, что первичным процессом фрагментации полимерных цепей с помощью красителей с малым выходом интеркомбинационной конверсии в триплетное состояние является безрадиационный синглет-синглетный перенос энергии с высоких электронно-возбужденных уровней молекул красителей на хромофорные группы макромолекул.

4. Изучена кинетика термостимулированной замедленной флуоресценции молекул красителей в условиях кратковременного импульсного нагрева среды и экспериментально доказано возникновение областей локального разогрева среды. За счет гипертермии макромолекул в результате тепловыделения при безызлучательной дезактивации высоковозбужденных электронных состояний связанных хромофоров осуществлена денатурация ДНК и изучены конформационные изменения двойной спирали под влиянием локальных температурных полей.

5. Экспериментально показано, что фотосенсибилизированная генерация химически активных форм молекулярного кислорода связанными и несвязанными люминофорами приводит к деструкции полимерных цепей. Установлено, что предварительное связывание красителя с субстратом, в общем, не является необходимым условием фотодинамического действия.

Практическая значимость результатов

1. Использование синтезированных органических наноструктур в качестве функциональных элементов фотомодификации полимерных цепей может быть положено в основу разработки нового метода локального фотовоздействия на биополимеры. Разработка таких методов, в свою очередь, приблизит к решению важнейшей проблемы биофизики, связанной с комплексными исследованиями молекулярных механизмов селективной лазерной (фотохимической и тепловой) модификации нуклеиновых кислот.

2. Результаты исследования взаимодействия молекул органических красителей с нуклеиновыми кислотами могут быть использованы для разработки методов контрастирования биообъектов, в диагностических и терапевтических целях. Установленные закономерности существенно облегчат поиск оптимальных фотосенсибилизаторов физико-химических процессов в биосистемах.

3. Сведения о теплофизических свойствах связанных макромолекулами наноструктур окажутся полезными при использовании их в качестве микротеплогенераторов и сенсоров в современных биомедицинских технологиях.

4. Лазерная модификация окрашенных макромолекул, характеризующихся специфической организацией, дает важную информацию о структуре макромолекул для фотофизики и фотохимии полимеров, биофизики и молекулярной биологии.

5. Представленные методы селективного поражения лазерным излучением макромолекул в присутствии специфических красителей будут способствовать дальнейшему развитию метода фотодинамической терапии. Полученные нами сведения о лазерном локализованном воздействии на макромолекулы посредством синтезированных наноструктур также будут полезными при совершенствовании данного метода терапии.

Методы исследования

Основные экспериментальные результаты, представленные в работе, получены при изучении спектрально-люминесцентных свойств окрашенных растворов нуклеиновых кислот методами стационарной и кинетической спектро-фотометрии и флуориметрии, упругого рассеяния света, а также зондовой сканирующей атомно-силовой и туннельной микроскопии.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Кооперативное связывание молекул органических красителей-катионов с дезоксирибонуклеиновыми кислотами сопровождается формированием на внешней стороне двойной спирали плоских субмикронных стэкинг-структур со стопочной укладкой слоев молекул. Устойчивость таких структур сохраняется за счет слабых межмолекулярных взаимодействий.

2. При воздействии интенсивным лазерным излучением видимого диапазона на связанные комплексы органический краситель - нуклеиновая кислота происходит фотомодификация макромолекул. Фрагментация полимерных цепей с помощью слабо связанных лигандов инициируется безрадиационным переносом энергии с высоких электронно-возбужденных синглетных уровней молекул красителей на хромофорные группы макромолекул.

3. Для органических молекул, являющихся эффективными фотосенсибилизаторами химически активных форм молекулярного кислорода, в водных растворах предварительное связывание с нуклеиновыми кислотами не является необходимым условием их фотодинамического действия. Фотомодификация биополимеров в растворах с несвязанными красителями происходит в результате их химического взаимодействия с электронно-возбужденными молекулами кислорода.

4. Тепловыделение при безызлучательной дезактивации высоких электронно-возбужденных состояний связанных хромофоров приводит к гипертермии макромолекул и сопровождается локальной денатурацией двойной спирали с конформационными изменениями полимерных цепей.

Публикации

Основные результаты проведенных исследований опубликованы в 15 печатных работах. В перечне опубликованных работ 4 статьи в центральных отечественных и международных журналах, рецензируемых научных сборниках и материалах конференций, 11 тезисов докладов на международных и всероссийских конференциях.

Апробация работы

Основные результаты работы обсуждались на:

Региональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов (Оренбург, 2000 г.); Third International Conference "Electronic Processes in Organic Materials" (ICEPOM-3), (Kharkiv, Ukraine, 2000 г.); Международной конференции "JIomohocob-2001" (Москва, 2001); II международной конференции молодых ученых и специалистов «0птика-2001» (Санкт-Петербург, 2001 г.); Международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию ОГУ (Оренбург, 2001 г.); VII Международной конференция "Лазерные и лазерно-информационные технологии: фундаментальные проблемы и приложения" (Суздаль, 2001 г.); XVII International Conference on Coherent and Nonlinear Optics (ICONO-2001), (Minsk, Belarus, 2001 г.); Междул народной конференции "Оптика, оптоэлектроника и технологии О Т-2001", (Ульяновск, 2001 г.); V Международной конференции "Импульсные лазеры на переходах атомов и молекул", (Томск, 2001 г.); Международном форуме "Инновации - 2002", (Оренбург, 2002 г.); IX Всероссийской научной конференции молодых исследователей с международным участием (Москва, 2002 г.); International Quantum Electronic Conference IQEC - 2002, (Moscow, Russia, 2002 г.).

Структура работы

Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, заключения, списка использованных источников из 211 наименований, содержит 167 страниц машинописного текста, 53 рисунка и 3 таблицы.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Никиян, Айк Николаевич

Основные результаты и выводы

1. Исследовано взаимодействие органических красителей различных классов с макромолекулами нуклеиновых кислот и установлено, что в результате кооперативного связывания лигандов с полианионами на наружной стороне макромолекул образуются плоские органические наноструктуры. Устойчивые субмикронные молекулярные структуры имеют размеры 150*50*5 нм3 с числом молекул красителей в них до 1.5-104.

2. Определены критические концентрации самоагрегации молекул красителей в растворах полианионов, исследованы зависимости степени связывания от ионной силы растворов и его состояния, изучено ингибирование связывания ионами различных металлов, исследована динамика образования молекулярных агрегатов и их распределение вдоль макромолекул нуклеиновых кислот. Показано, что из отдельных наноструктур, при высоких концентрациях красителей, могут формироваться микрокристаллы, стерически экранирующие полимерную цепь ДНК.

3. Разработаны способы лазерной фотомодификации макромолекул нуклеиновых кислот и методы идентификации повреждений полимерных цепей с помощью связанных и свободных органических красителей.

4. Показано, что возможно двунитевое разрезание макромолекул ДНК с помощью слабо связанных органических красителей. Механизм разрезания основан на безызлучательном переносе энергии фотовозбуждения с высоких синглетных уровней молекул красителей на хромофорные группы макромолекул. Квантовый выход такого процесса не превышает значения 10"4.

5. Экспериментально доказана возможность локальной гипертермии макромолекул в результате тепловыделения при безызлучательной дезактивации высоких электронно-возбужденных состояний молекул слабо связанных хромофоров. Осуществлена адресная денатурация биополимеров и исследованы конформационные изменения полимерных цепей под влиянием локальных температурных полей. Установлено, что локальная тепловая денатурация является доминирующим процессом фотодеструкции макромолекул с помощью слабо связанных красителей.

6. Для органических молекул, являющихся эффективными фотосенсибилизаторами синглетного кислорода, предварительное связывание с нуклеиновыми кислотами не является необходимым условием их фотодинамического действия в растворах. Фотомодификация биополимеров в растворах с несвязанными красителями происходит в результате их химического взаимодействия с электронно-возбужденными молекулами кислорода.

7. Экспериментально показано, что в окрашенных водных растворах ДНК синглетный кислород возникает только в результате тушения триплетных состояний несвязанных или слабо связанных молекул красителей. Интер-калированные красители не являются генераторами синглетного кислорода.

Заключение

На протяжении двух последних десятилетий интенсивно исследуются процессы совместного действия света и органических молекул различных классов на нуклеиновые кислоты. Результаты этих исследований нашли применение при разработке современных методов диагностики и терапии, основанных на возможности селективного окрашивания и фотовоздействия на биологически важные макромолекулы. Повышение эффективности адресного воздействия на макромолекулы требует установления молекулярных механизмов фотосенсибилизированных реакций взаимодействия излучения с веществом.

Представленный в настоящей работе материал, по мнению автора, существенно дополняет имеющиеся сведения о природе фотореакций в окрашенных растворах биополимеров. Разумеется, мы не утверждаем, что полностью изучены все особенности связывания органичесюгх красителей с ДНК в растворах и дальнейшие исследования не дадут новых сведений о взаимодействии органических соединений с нуклеиновыми кислотами и специфике фотопроцессов с их участием. Скорее наоборот, полученные нами результаты дают возможность планирования дальнейших фундаментальных и прикладных исследований, и в первую очередь, в области фотобиологии. Так, локальная гипертермия макромолекул, осуществленная нами in vitro, может быть положена в основу принципиально нового метода поражения полимерных цепей. А выявленные закономерности связывания органических красителей с биологическими макромолекулами позволяют уже в настоящее время приступить к разработке методов флуоресцентной диагностики ранней патологии клеток и тканей.

Таким образом, решенные в настоящей работе задачи позволили с одной стороны достичь определенного уровня понимания особенностей фотопроцессов с участием биологически важных макромолекул, а с другой, определить перспективные направления использования уже полученных результатов и дальнейших исследований.

В завершение благодарю сотрудников института микро- и нанотехноло-гий Оренбургского государственного университета - доцентов С.Н. Пашкевича, Ю.Д. Лантуха, Э.К. Алиджанова, аспирантов O.K. Давыдову и Д.А. Раздоб-реева за помощь в работе и понимание. Я глубоко признателен доктору физико-математических наук, профессору Гарри Альбертовичу Кецле за заботу и внимание к моей работе.

Особую благодарность выражаю моему научному руководителю доктору физико-математических наук Сергею Николаевичу Летуте за моральную и интеллектуальную поддержку и оказавшему мне значительную помощь в работе над диссертацией.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Никиян, Айк Николаевич, 2004 год

1. Waring M.J. DNA modification and cancer // Ann. Rev. Biochem. 1981. -Vol. 50.-P. 159-92.

2. Морошкина Е.Б., Сафьянникова М.Г. Взаимодействие ДНК с соединениями феназинового ряда // Биофизика. 1999. - Т. 44. - №3. - С. 425-429.

3. Лохман Э.-Р., Михелер А. Связывание органических красителей с • нуклеиновыми кислотами и фотодинамический эффект.- В кн.: Физикохимические свойства нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1976, - С.233-273.

4. Coury J.E., Anderson J.R., McFail-Isom L., Williams L.D. and Bottomley L.A. Scanning Force Microscopy of Small Ligand-Nucleic Acid Complexes: Tris(o-phenanthroline)ruthenium(II) as a Test for a New Assay // J. Am. Chem. Soc. 1997. - 119. - P. 3792-3796.

5. Reinert K.E. //J.Mol.Biol. 1972. - Vol. 72. - P.393.

6. Благой Ю.П. Взаимодействие ДНК с биологически активными веществами (ионами металлов, красителями, лекарствами) // Соросовский образовательный журнал. 1998. - №10. - С. 18-24.

7. Южаков В.И. Агрегация молекул красителей и ее влияние на спектрально-люминесцентные свойства растворов // Успехи химии. -1992. Т.61, -№6. - С.1114-1141.

8. Теренин А.Н. Фотоника молекул красителей и родственных органических соединений. Ленинград: Наука, 1967, - 616 с.

9. Park С.Н., Park H.A., Kim Y.I., Sock S. Thermodynamic study on molecular associations of some organic dyestaffs in aqueous solutions // Thermochim. Acta. 1984. - Vol. 80. -№1. - P. 131-136.

10. Imae T. Formation of molecular aggregates of surface-active azodyes // Hyomen. 1984. - Vol. 22. - №8. - P. 444-458.

11. Schiebe G. Reversible Polymerisation aus Urache neuartiger Absorptionsbanden von Farbstaffen Kolloid // Kolloid Z. 1938. - Bd. 82. -№1. - S. 1-14.

12. Schiebe G. Uber die Veranderlichkeit der Absorptiospektren in Losungen und die Nebelvalenzen ais ihre Urache // Z. Angen. Chem. 1937. - Bd. 50. -S.212-219.

13. Schiebe G. Die Stereoisomerie Organischer Frbstoffe und ihr Zusamenhang mit konstitution und Eigenschaften reversibel polymerer Farbstaffe // Zs. Agnew. Chem. 1937. - Bd.52. - S.631-642.

14. Schiebe G. Fluoreszenzumtersuchungen an Monomethin Farbstoffen, insbesondere an reversibel polymeren Monomethin Zyaninen // Kolloid Z. -1940. Bd. 93. - №3. - S.28-50.

15. Кецле Г.А., Левшин Л.В., Славнова Т.Д., Чибисов А.К. Внутримолекулярные процессы деградации энергии электронного возбуждения в мономерах и ассоциатах родамина 6Ж // Известия АН СССР, Серия физическая. 1972. - Т.36. - №5. - С. 1078-1081.

16. Лёвшин Л.В., Салецкий A.M. Лазеры на основе сложных органических соединений. М.: Изд-во МГУ, 1992. - 330 с.

17. Красовицкий Б.М., Болотин Б.М. Органические люминофоры. Л.: Химия, 1976.

18. Клочков В.П., Верховский Е.Б. Спектр испускания высококонцентрированных растворов красителей при возбуждении лазерным излучением большой мощности // Оптика и спектроскопия. 2000.-Т. 89. -№1. С.114-118.

19. Клочков В.П., Верховский Е.Б.Коллективное испускание молекул родамина 6Ж в жидком растворе // Оптика и спектроскопия 1998. - Т. 85. - №3. - С.427-433.

20. Левшин JI.B., Рыжиков Б.Д., Савельев В.П. Спектральные свойства ассоциатов разнородных молекул красителей // Вест. Мое. Ун-та, сер. физ., астр. 1974. - Т.15. - №2. - С. 156-162.

21. Рыжиков Б.Д., Салецкий A.M. Исследование процессов ассоциации разнородных молекул красителей в водных растворах // Вест. Мое. Унта, сер. физ.,астр. 1991. - Т.32. - №4. - С. 71-76.

22. Зуауи А., Левшин Л.В., Салецкий A.M. Структура разнородных ассоциатов красителей в полимерных матрицах // Оптика и спектроскопия. 1989.- Т. 66.- Выпуск 2.- С. 301-304.

23. Левшин Л.В., Салецкий А.М. Исследование разнородных люминесцируюгцих ассоциатов красителей родамина 6Ж и метиленового голубого в бинарных растворителях // Оптика и спектроскопия. 1990. -Т. 68. - № 2. - С.354-358.

24. Шурдов М.А., Кгаценко Г.П. Взаимодействие красителей акридинового оранжевого и этидиума бромида с ДНК в фаге X II Биофизика. 1982. -Т.27. - №2. - С. 148.

25. Nygren J., Svanvik N., Kubista M. The Interactions Between the Fluorescent Dye Thiazole Orange and DNA // Biopolymers. 1998. - Vol. 46. - P. 39-51.

26. Malicka J., Gryczynski I., Maliwal B.P., Fang J., Lakowicz J.R. Fluorescence spectral properties of cyanine dye labelled DNA near metallic silver particles//Biopolymers. 2003. -Vol. 72. - №2. - P. 96-104.

27. Norden В., Tjerneld F. Binding of methyl green to deoxyribonucleic acid analyzed by linear dichroizm // Chemical physics letters. 1977. - Vol. 50. -№3. - P. 508-512.

28. Norden В., Tjerneld F. Structure of methylene blue-DNA complexes studied by linear and circular dichroizm spectroscopy // Biopolymers. 1982. - Vol. 21.-P. 1713-1734.

29. Морошкина Е.Б., Кривцова M.A., Глибин E.H. Влияние природы заместителей амидов актиноцина на способ их связывания с ДНК // Биофизика. 2002. - Т. 47. - №.3. - С.444-448.

30. Морошкина Е. Б., Загоруйко Н. В., Глибин Е. Н. Взаимодействие ДНК с бензокраун-производными актиноцина // Физика и физическая химия биополимеров. 2001. - Т. 35. - №1. - С. 109-116.

31. Todor G. Deligeorgiev, Daphinka A. Zaneva, Haralambos E. Katerinopoulos and Vihren N. Kolev A novel method for the preparation of monomethine cyanine dyes // Dyes and Pigments. 1999. - Vol. 41. - № 1-2. - P. 49-54.

32. Todor G. Deligeorgiev, Daphinka A. Zaneva, Seok Hong Kim and Ram W Sabnis Preparation of monomethine cyanine dyes for nucleic acid detection // Dyes and Pigments. 1998. - Vol. 37. - №3. - P. 205-211.

33. Megnin F., Faustino P.J., Lyon R.C., Lelkes P.I., Cohen J.S. Studies on the mechanism of selective retention of porphyrins and metalloporphyrins by cancer cells // Biochim. Biophys. Acta C. 1987. - Vol. 929. - P.173-181.

34. Marzilli L.G. Medical aspects of DNA-Porphyrin interactions // New. J. Chem. 1990. - Vol.14. - №7. - P.409-420.

35. Benett M, Krah A., Wien F., Garman E., McKenna R., Sanderson M. A DNA-porphyrin minor-groove complex at atomic resolution: The structural consequences of porphyrin ruffling // Proc. Natl.Acad.Sci. USA. 2000. -Vol. 97.-P. 9476-9481.

36. Далян Е.Б. Взаимодействие мезо-тетра(Т-оксиэтилпиридил)порфиринов с ДНК. Эффект положения боковых групп // Биофизика. 2002. - Т. 47. -Вып.2. - С.253-258.

37. Благой Ю.П., Галкин B.JL, Гладченко Г.О. и др. Металлокомплексы нуклеиновых кислот в растворах. Киев: Наук, думка, 1991.

38. Благой Ю.П., Сорокин В.А., Валеев В.А. Спектральное исследованиесвязывания оснований ДНК с ионами магния и кальция // Молекулярная биология. 1980. - Том 14. - Вып.З. - С.595-605.

39. Тимченко М.А., Первушина Е.В., Ташлицкий В.Н., Кубарева Е.А., Крынецкая Н.Ф.- Взаимодействие фталоцианинового комплекса кобальта с ДНК-дуплексами // Молекулярная биология,- 2000. -Том 34. №1. -С.101-109.

40. Sigman D.S. Chemical nucleases // Biochemistry. 1990.- Vol. 29. - №39. -P.9097-9105.

41. Вольпин M.E., Кнорре Д.Г., Новодарова Г.Н., Тувин М.Ю., Федорова О.С., Фролова Е.И. // Доклады АН СССР. 1998,- Т.298. -С.363-366.

42. Пескин А.В. Воздействие активных форм кислорода с ДНК // Биохимия. f 1997.- Т.62. - №12. - С.1571-1578.

43. Белков В.М., Крынецкая Н.Ф., Шабарова З.А., Новодарова Г.Н., Вольпин М.Е. Кобальт-корриновые производные олигонуклеотидов как реагенты для избирательного расщепления нуклеиновых кислот // Биоорганическая химия. 1995. - Том 21. - № 6. - С. 446-454.

44. Бурилков В.Н., Крочик Г.М. Биологическое действие лазерного излучения. Институт хим. генетики. Кишенев: Штиинца, 1989. 101 с.

45. Шиниашвли Д.М., Лисцов В.Н., Мошковский Ю.Ш. Об изменениях вторичной структуры ДНК под действием ионов палладия. М.:Наука, 1973.-С. 48-51.

46. Raab О., Uber die Wirkung fluoreszierenden Stoffe auf Infusoria // Z. Biol. -1900.- V.39.-P. 524-546.

47. H. von Tappeiner, Uber die Wirkung Fluorescierenden Stoffe auf Infusiorien nach Versuchen von O. Raab // Munch. Med. Wochenschr. 1900. - V.47. -P. 5-8.

48. H. von Tappeiner and A. Jodlbauer, Die sensibiliserende Wirkung fluorescierender Substanzer. Gasammette Untersuchungen tiber die photodynamische Erscheinung. FCW Vogel, Leipzig, 1907.