Фотодинамическая эффективность авидин-биотиновой системы, включающей биотинилированные антитела и производные фталоцианиновых фотосенсибилизаторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат химических наук Меерович, Ирина Геннадьевна

• Меерович, Ирина Геннадьевна
• кандидат химических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат химических наук Меерович, Ирина Геннадьевна

I. ВВЕДЕНИЕ.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Механизм фотодинамического воздействия.

2.2. Фотосенсибилизаторы.

2.2.1. Требования, предъявляемые к фотосенсибилизаторам для ФДТ опухолей.

2.2.2. Порфирины.

2.2.3. Фотосенсибилизаторы второго поколения.

2.3. Проблема повышения тропности противоопухолевых препаратов и их направленного транспорта. 19 2.3.1 Использование липосом в НФДТ.

2.3.2. Использование конъюгатов ФС с полимерами для НФДТ.

2.3.3. Использование конъюгатов ФС с антителами для НФДТ.

2.3.4. Основные способы получения конъюгатов моноклональных антител с фотосенсибилизаторами. 27 2.3.5 Пути решения некоторых проблем, возникающих при использовании антител в качестве носителя для цитотоксического агента.

2.4. Авидин-биотиновая система и ее использование для направленного транспорта.

2.4.1. Характеристика авидина, стрептавидина, биотина.

2.4.2. Биотинилирование антител.

2.4.3. Исследования и клинические применения системы авидин-биотин для направленного транспорта радиомаркеров при радиоиммунодиагностике и радиоиммунотерапии.

III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 56 3.1. Материалы.

3.2. Приборы и оборудование.

3.3. Методы.

3.3.1. Синтез биотинилированных производных антител.

3.3.1.1. Синтез биотинилированного производного антител ИКО-25 с помощью биотинамидокапроат N-гидроксисукцимидного эфира (синтез по аминогруппам лизина).

3.3.1.2. Синтез биотинилированного производного антител ИКО-25 с помощью ВМСС-производного биотина с предварительным частичным восстановлением дисульфидных мостиков тяжелых цепей антител.

3.3.2. Синтез биотинилированных производных фталоцианинов

3.3.2.1. Синтез и очистка биотинилированных производных сульфофталоцианинов алюминия.

3.3.2.2. Синтез и очистка конъюгата октакарбоксифталоцианин кобальта - биотин-кадаверин.

3.3.3. Характеристика полученных конъюгатов - биотинилированных антител и биотинилированных производных сульфофталоцианинов. 64 3.3.3.1. Определение степени биотинилирования.

3.3.4. Определение иммунологической активности биотинилированных антител ИКО-25.

3.3.4.1. Определение иммунологической активности биотинилированных антител на микропланшетах с адсорбированным лизатом клеток ОАТ-75.

3.3.4.2. Проверка иммунологической активности антител после биотинилирования на монослоях живых клеток ОАТ-75.

3.3.5. Эксперименты на культуре клеток. 67 3.3.5.1. Изучение накопления биотинилированных производных фталоцианинов суспензией клеток ОАТ-25 при использовании авидин-биотиновой системы мультипликации.

3.3.5.2. Изучение накопления дибиотинилированного "Фотосенса" фиксированными монослоями клеток ОАТ-75 при использовании авидин-биотиновой системы мультипликации (при использовании препаратов рекомбинантного стрептавидина и нейтравидина).

3.3.5.3. Разработка приборного обеспечения и методики проведения эксперимента по фотодинамическому воздействию на монослои клеток в лунках культурального планшета.

3.3.5.4. Тест на выживаемость клеток с использованием флуоросцеина диацетата.

3.3.5.5. Накопление биотинилированного октакарбоксифталоцинанина кобальта в монослоях клеток ОАТ-75 при использовании нейтравидина.

3.3.5.6. Изучение фототоксического действия фотосенсибилизаторов на монослоях живых клеток ОАТ-75 в культуральном планшете. 77 3.3.6. Изучение фототоксического действия на клетки линии ОАТ-75 дибиотинилированного "Фотосенса" с использованием системы направленного транспорта биотинилированные антитела ИКО-25 - нейтравидин - биотинилированный "Фотосенс". 79 3.4. Исследования ФДТ с дибиотинилированным сульфофталоцианином алюминия in vivo.

IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Накопление биотинилированных производных фталоцианинов клетками при использовании авидин-биотиновой системы мультипликации.

4.2. Выбор клеточной линии и моноклональных антител.

4.2.1. Взаимодействие моноклональных антител с разрушенными клетками.

4.2.2. Взаимодействие моноклональных антител с живыми клетками.

4.3. Характеристика биотинилированных антител. 90 4.3.1. Оценка степени биотинилирования.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фотодинамическая эффективность авидин-биотиновой системы, включающей биотинилированные антитела и производные фталоцианиновых фотосенсибилизаторов»

Одной из ключевых проблем лекарственной терапии в целом, и терапии новообразований в частности, является селективное воздействие препаратов на патологический очаг и минимизация воздействия на здоровые ткани, вызывающего побочные эффекты. Особенностью фотодинамической терапии является то, что активация лекарственного действия препаратов - фотосенсибилизаторов (ФС) осуществляется световым облучением, что задает определенную адресность воздействия. Тем не менее, поскольку фотосенсибилизаторы будут иметь конечную концентрацию и в здоровых тканях, в частности, в коже, световое воздействие на кожу пациента в течение длительного времени будет оказывать побочное фототоксическое действие. Несмотря на несомненный прогресс в области фотодинамической: терапии рака (ФДТ) [1], это побочное действие препятствует широкому распространению метода ФДТ [2, 3].

Эффективность фотодинамической терапии и ощутимость побочных эффектов в значительной мере определяются степенью избирательности накопления препарата в опухоли. При высокой избирательности уменьшается доза препарата, которую необходимо ввести больному для лечения, минимизируются побочные эффекты. Однако значения избирательности накопления, обусловленные собственными биохимическими процессами в организме, как правило, невысоки. Поэтому для их повышения очень важное значение приобретает направленный транспорт препарата к опухоли.

Целью настоящей работы было изучение возможности использования системы антитело-авидин-биотин для направленного транспорта цитотоксических агентов (в частности, фотосенсибилизаторов) в клетки опухоли. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- выбор путем скрининга клеточной линии и взаимодействующего с ней клона антител, исходя из критерия максимального специфического связывания антител с соответствующим антигеном; 9

- синтез и исследование свойств биотинилированных моноклональных антител;

- синтез биотинилированных производных фталоцианинов, характеристика их фототоксической активности;

- изучение накопления биотинилированных производных фталоцианинов клетками ОАТ-75 при использовании специфических антител ИКО-25 и системы авидин-биотин;

- исследование эффективности метода ФДТ с использованием антитело-авидин-биотиновой системы доставки фотосенсибилизатора в клетку.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Меерович, Ирина Геннадьевна

V. выводы

1. Для использования при фотодинамической терапии новообразований разработана полифазная схема с использованием биотинилированных антител ИКО-25 против муциноподобного антигена, различных авидинов и дибиотинилированного фотосенсибилизатора на основе сульфофталоцианина алюминия ("Фотосенса"). Показано более эффективное фототоксическое действие предлагаемой системы по сравнению как с дибиотинилированным "Фотосенсом", так и, тем более, со стандартной лекарственной формой "Фотосенса". LD50 при использовании системы "биотинилированные антитела ИКО-25 - нейтравидин - дибиотинилированный "Фотосенс"", составляет 2,3 мВт, что в 2,3 раза ниже LD50 для дибиотинилированного "Фотосенса" и в 4,2 ниже, чем для исходного "Фотосенса".

2. Показано, что биотинилирование моноклональных антител ИКО-25 с использованием методики, включающей частичное восстановление дисульфидных мостиков тяжелых цепей антител и реакцию с малеимидным производным биотина, позволяет получить биотинилированные производные этих антител, полностью сохраняющие иммунологическую активность по сравнению с нативными антителами. Методика биотинилирования по s-аминогруппе лизина приводит к получению биотинилированных производных моноклональных антител ИКО-25, с потерей большей части их иммунологической активности.

3. Использование оригинальной методики и аппарата для исследования фототоксического действия фотосенсибилизаторов на монослои клеток в лунках культурального планшета с использованием оптоволоконной техники, дает возможность исследовать зависимость параметра "количество выживших (либо - погибших) после светового облучения клеток" одновременно при разных дозах светового воздействия. Это позволяет повысить достоверность исследований фотодинамической активности in vitro, упростить и ускорить процедуру исследований.

135 к Показано, что дибиотинилированный "Фотосенс" является эффективным фотосенсибилизатором обеспечивающим in vivo эффективное разрушение опухоли с -отальным некрозом опухоли даже при низких концентрациях по сравнению с "Фотосенсом".

5. Отмечена различная степень выраженности фототоксического действия на клетки ОАТ-75 различных дибиотинилированных производных фталоцианинов алюминия ("Фотосенса" и тетра-4-сульфофталоцианина алюминия): более слабое фототоксическое действие последнего, по видимому связано с менее оптимальной амфифильностью.

6. Методом цифровой флуоресцентной микроскопии показано, что использование системы авидин-биотин позволяет повысить специфическое накопление биотинилированных фотосенсибилизаторов в опухолевых клетках на одну точку аффинного взаимодействия.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Меерович, Ирина Геннадьевна, 2001 год

1. Moan J., Berg К. Photochemotherapy of cancer: experimental research. Photochem. Photobiol. '92, Vol.55, № 6, pp. 931-948.

2. Ali H., van Lier J.E. Metall complexes as photo- and radiosensitizers. Chem. Rev., 1999, Vol. 99, ° 9, pp. 2379-2450.

3. Фут X. Свободные радикалы в биологии. Под редакцией Х.А. Прайер. М.: "Мир", 1979, . 96-150.

4. Красновский А. А., мл. Синглетный молекулярный кислород и первичные механизмы отодинамического действия оптического излучения. Итоги науки и техники. 1990, № 3, . 63-135.

5. Svaasand L.O. Termal and optical dosimetry for photoradiation therapy of malignant tumours, orphyrins in Tumour Phototherapy. Ed. by Andreony A., Cubbedu R. New York, Plenum Press. 1984, p. 261-279.

6. Dougherty T.J., Weishaupt K.R., Boyle D.G. Photodynamic sensitizer. Principles and Practice of neology. Ed. by V.DeVita Jr., Hellman S., Rosenberg S. Philadelphia, J.B.Lippincott. 1981, p. 2272-2279.

7. Moan J., Peng Q., Evensen J.F., Berg K., Western A., Rimington C. Photosensitizing efficiency, mor- and cellular uptake of different photosensitizing drugs relevant for photodynamic therapy ofncer. Photochem. Photobiol. 1987, Vol. 46, № 5, pp. 713-721.

8. Bonnett R., Ridge R.J., Scourides P.A., Berenbaum M.C. On the nature of Haematoporphyrin erivative. JCS Perkin. 1981, Vol. 1, pp.3 1-35.

9. Gomer C.J., Rucker N., Ferrario A., Wong S. Properties and applications of photodynamic therapy, adiat. Res. 1989, Vol.120, № 1, p. 1-18.

10. Dougherty T.J. Photosensitization of malignant tumors. Sem. Surg. Oncol. 1986, Vol.2, № 1, p. 24-37.

11. Jori G. Photosensitized process in vivo: proposed phototherapeutic applications. Photochem. hotobiol. 1990, Vol. 52, № 2, pp. 439-443.

12. Monfrecola G., Martellotta D., Bruno J., Cariello L., Zanetty L., Santoianny P. An approach to the eatment of psoriasis with porphyrin analogue. In: Photodynamic therapy of tumor and other diseases, d. by G.Jory, C.Perria. 1985, pp. 345-348.

13. Darvent J.R., Douglas P., Harriman A., Porter G., Richoux M.-C. Metal phthalocyanines and orphyrins as photosensitizers for reduction of water to hydrogen. Coor. Chem. Rev. 1982, Vol. 44, p. 83-126.

14. Spikes J.D. Phtalocyanines as photosensitizers in biological system and photodynamic therapy of mors. Photochem. Photobiol. 1986, Vol. 43, № 6, pp. 691-699.

15. Ben-Hur E., Rosenthal I. Photosensization of Chinese hamster cells by water-soluble htalocyanines. Photochem. Photobiol. 1986, Vol.43, № 6, pp. 615-619.

16. Allen C.M., Sarman W.M., van Lier J.E. Current status of phthalocyanines in the photodynamic erapy of cancer. J. Porphyrins Phthalocyanines. 2001, Vol 5, pp. 161-169.

17. McCubbin I., Phillips D. The photophysics and photostability of zinc (II) and aluminiumlphonated naphtalocyanines. J. Photochem. 1986, Vol. 34, pp. 187-195.

18. Spikes J. D. Chlorins as photosensitizers in biology and medicine. J. Photochem. Photobiol. B: ol. 1990, Vol. 6, № 3, pp. 259-274.

19. Morgan A.R., Kreimer-Birnbaum M., Garbo G.M., Keck R.W., Selman S.H. Purpurins: improved otosensitizers for photodynamic therapy. Proc. Soc. Photo-Ort. Instrum. Eng. 1988, Vol. 847, . 29-35. ■

20. Aramendia P.F., Redmond R.W., Nonell S., Schuster W., Braslavsky S.E., Schaffner K., Vogel E. e photophysical properties of porphycenes: potential photodynamic therapy agents. Photochem. otobiol. 1986, Vol. 44, № 5, pp. 555-559.

21. Jory G., Tomio L., Reddi E. Preferential delivery of liposome incorporated porphyrins to neoplastic s in tumor bearing rats. Br. J. Cancer. 1983, Vol. 48, № 2, pp. 307-309.

22. Shopova M., Wohrle D., Stoichkova N., Miler A., Mantareva V., Muller S., Kassabov K., eorgiev K. Hydrophobic Zn (Il)-naphthalocyanines as photodynamic therapy agents for Lewis lung rcinoma. Photochem. Photobiol. B: Biol. 1994, Vol. 23, № 1, pp. 35-42.

23. Rensen P.C.N., Love W.G., Taylor P.W. In vitro interaction of zinc(Il)-phtalocyanine-containing posomes and plasma-lipoproteins. Photochem. Photobiol. B: Biol. 1994, Vol. 26, №1. pp. 29-35.

24. Versluis A.J., Rensen P.C.N., Kuipers M.E., Love W.G., Tailor P.W. Interaction between zinc(II)-htalocyanine-containing liposomes and human low density lipoproteins Photochem. Photobiol. B: Biol.994, Vol. 23, №.2-3, pp. 141-148.

25. Wohrle D., Ardeshirpur A., Heuermann A., Muller S. Polimeric porphyrins as new photocatalysts photodynamic therapy of cancer. Macromol. Chem., Macromol. Symp. 1992, Vol. 59, pp. 17-33.

26. Митина B.X., Нечаева И.С., Пономарев Г.В., Решетников А.В., Клящицкий Б.А. одорастворимые конъюгаты порфиринов с агарозным носителем. Биоорганическая химия.995, т. 21, №4, сс. 301-307.

27. Liu D. Compositions for photodynamic therapy. US Patent № 5238940, Aug 24, 1993.

28. Goers J.W., Lee C„ Siegel R.G., McKearn J.D., King H.D., Coudhlin D.J., Rodwee J.D.,1.arez V.L. Antibody therapeutic agent conjugate. European Patent Application № 175617, 26. 03. Ш.

29. Тоневицкий А.Г. Иммунотоксины. ЖВХО. 1987, т.32, сс. 502-514.

30. Thorpe P.Е., Ross W.C.J. The preparation and cytotoxic properties of antibody-toxin conjugates, lmunological Rev. 1982, Vol. 62, pp. 119-157.

31. Ranadive G., Howard S.Rosenzweig. Radioselective chemical modification of monoclonal ntibodies. US Patent № 5208008, May 4, 1993.

32. Smyth M.J., Pietersz G.A., McKenzie I.F.C. Increased antitumor effect of immunoconjugates and mor necrosis factor in vivo. Cancer Res. 1988, Vol. 48, № 13, pp.3607-3612.

33. DeLand F.H., Goldenberg D.M. Labeled antibodies: radio-chemistry and clinical application. In: reeman and Johnson's Clinical Radionuclide Imaging Ed. by L.M.Freeman. Philadelphia: Grune & tratton. 1986, pp. 1915-1992.

34. Calafat J., Molthoff C., Janssen H., Hilkens J. Endocytosis and intracellular routing of antibody-icin A chain conjugate. Cancer Res. 1988, Vol. 48, № 13, pp.3822-3827.

35. Mew D., Wat C.-K., Towers G. H. N., Levy J. G. Photoimmunotherapy: treatment of animal mors with tumor-specific monoclonal antibodies. J. Immunol. 1983, Vol. 130, № 3, pp. 1473-1477.

36. Lu X.M., Fishman A.G., Steven E., Lee T.T., Strong L., Tompkins R.J., Yarmush M.L. Sn-chlorin antibacterial immunoconjugates: an in vitro and in vivo analysis. J. Immunol. Meth., 1992, Vol. 156,p. 85-99.

37. Oseroff A.R., Wimberly J., Lee C., Alvarez V., Parrish J. A. Photosensitized destruction of normal nd leukemic T-cells using monoclonal antibody (MAB)-directed hematoporphyrin. J. Invest. Dermatol. 985, Vol. 84, №4, p. 335.

38. Jiang F., Jiang S., Liu D., Richter A., Levy J.G. Development of technology for linking hotosensitizers to a model monoclonal antibody. J. Immunol. Methods. 1990, Vol. 134, № 1, p. 139-149.

39. Thorpe W.P., Toner M., Ezzell R.M., Tompkins R.G., Yarmush M.L. Dynamics of photoinduced ell plasma membrane injury. Biophys J. 1995, Vol. 68, № 5, pp. 2198-2206.

40. Hasan Т., Lin A., Yarmush D., Oseroff A., Yarmush M. Monoclonal antibody-chromophore onjugates as selective phototoxins. J. Controlled Release. 1989, Vol. 10, pp. 107-117.

41. Levy J. G., Dolphin D., Chow J. J., Sternberg E. Wavelength-specific agents. Pat. № 5,171,749. ec. 15, 1992.

42. Jiang F.N., Lin D.S., Neyndorff H., Chester M., Jiang S. and Levy J.G. Photodynamic killing of uman squamos cell carcinoma cells using a monoclonal antibody photosensitizer conjugate. J. Natl, ancer Inst. 1991, Vol. 83, № 17, pp. 1218-1225.

43. GoffB. A., Bamberg M., Hasan T. Experimental photodynamic treatment of ovarian-carcinoma ells with immunoconjugates. Antibody Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals. 1992, Vol 5, 2 2, pp. 191-199.

44. GoffB.A., Bamberg M., Hasan T. Photoimmunotherapy of human ovarian carcinoma cells ex vivo. ancer Res. 1991, Vol. 51, № 18, pp. 4762-4767.

45. Davis N., Liu D., Jain A. K., Jiang S.Y., Jiang F., Richter A., Levy J. G. Modified polyvinyl lcohol-benzoporphyrin derivative conjugates as phototoxic agents. J. Photochem. Photobiol. 1993,01. 57, №4, pp. 641-647.

46. Epenetos AA, Snook D, Durbin H, Johnson PM, Taylor-Papadimitriou J. Limitations of diolabeled monoclonal antibodies for localization of human neoplasms. Cancer Res. 1986, Vol. 46, °6, pp. 3183-3191.

47. Goodwin DA. Pharmacokinetics and antibodies. J. Nucl. Med. 1987, Vol. 28, № 8, pp. 1358-1368.

48. Fujimori K., Covell D.C., Fletcher J.E., Weinstein J.N. Modeling analysis of the global and icroscopic distribution of IgG, F(ab')2, and Fab in tumors. Cancer Res. 1989, Vol. 49, № 20, p. 5656-5663.

49. Jeong J.M., Saga Т., Lee J., Hoh C.S. Avidin-biotin system for targeting metastases: basic aspects, n: Handbook of targeted delivery of imaging agents. Eds: Torchilin V P., CRC Press, Boca Ratonew-York-London-Tokyo. 1995, pp. 306-319.

50. Bosslet K., Czech J., Lorenz P., Sedlacek H.H., Schuermann M., Seemann G. Molecular and nctional characterization of a fusion protein suited for tumour specific prodrug activation.r. J. Cancer. 1992, Vol. 65, №2, pp. 234-238.

51. Moser J.G., Demcheva M.V., Savitzki A.P., Ponomarev G.V., Luk'yanets E.A. Cyclic cumulation strategies for polyphasic photoimmunothrapy using the biotin-avidin system. SPIE iomed. Optics, 1996, Vol. 2924, pp. 145-152.

52. Dubois J., Le Goff M.T., Gueritte Voegelein F., Guenard D., Tollon Y., Wright M. Fluorescent d biotinylated analogues of docetaxel: synthesis and biological evaluation. Bioorg. Med. Chem. 1995, ol. 3, № 10, pp. 1357-1368.

53. Meyer B.F., Stoner M.L., Raphael C.L., Davis RE, Herrmann R.P. Streptavidin-biotin munotoxins: a new approach to purging bone marrow. Exp. Hematol. 1991, Vol. 19, № 7, . 710-713.

54. Schechter В., Arnon R., Wilchek M. Cytotoxicity of streptavidin-blocked biotinyl-ricin is retrieved in vitro immunotargeting via biotinyl monoclonal antibody. Cancer Res. 1992, Vol. 52, № 16, . 4448-4452.

55. Shenai B.R., Komalam B.L., Arvind A.S., Krishnaswamy P.R., Rao P.V. Recombinant antigen-ased avidin-biotin microtiter enzyme-linked immunosorbent assay for serodiagnosis of invasive riebiasis. J. Clin. Microbiol. 1996, Vol. 34, № 4, pp. 828-833.

56. Burnett R., Guichard Y., Barale E. Immunohistochemistry for light microscopy in safety evaluation f therapeutic agents: an overview. Toxicology. 1997, Vol. 119, № 1, pp. 83-93.

57. Tao P L., Han K.F., Wang S.D., Lue W.M., Elde R., Law P.Y., Loh H.H. Immunohistochemical vidence of down-regulation of mu-opioid receptor after chronic PL-017 in rats. Eur. J. Pharmacol. 998, Vol. 344, № 2-3, pp. 137-142.

58. Gitlin G., Bayer E.A., Wilchek M. Studies on the biotin-binding site of avidin. Lysine residues volved in the active site. Biochem. J. 1987, Vol. 242, № 3, pp. 923-926.

59. Gitlin G., Bayer-E.A., Wilchek M. Studies on the biotin-binding site of streptavidin. Tryptophan sidues involved in the active site. Biochem. J. 1988, Vol. 256, № 1, pp. 279-282.

60. Gitlin G., Bayer E.A., Wilchek M. Studies on the biotin-binding sites of avidin and streptavidin. yrosine residues are involved in the binding site. Biochem. J. 1990, Vol. 269, № 2, pp. 527-530.

61. Bayer E.A., Wilchek M. The avidin-biotin system. Immunoassay. 1996, pp. 237-266.

62. Bruch R.C., White H. III. Compositional and structural heterogeneity of avidin glycopeptides. iochemistry. 1982, Vol. 21, pp. 5334-5341.

63. Wilchek M., Bayer E.A. The avidin-biotin complex in bioanalytical applications. Anal. Biochem. 988, Vol. 171, № 1, pp. 1-32.

64. Alon R, Bayer E.A., Wilchek M. Cell adhesion to streptavidin via RGD dependent integrins. Eur. . Cell Biol. 1993, Vol. 60, № 1, pp. 1-11.

65. Harlow E., Lane D. Antibodies, a laboratory manual. Cold Spring Harbor laboratory, Cold Spring arbor, NY, 1988, p. 660-668.

66. Haugland R.P., You W.W. Coupling of antibodies with biotin. In: Methods in molecular biology. 998, Vol. 80, pp. 173-83. Ed. J.D.Pound.Humana press, Totowa.

67. Becker J.M., Wilchek M., Katchalski E. Irreversible inhibition of biotin transport in yeast by iotinyl-p-nitrophenyl ester. Proc. Natl.Acad. Sci. USA. 1971, Vol. 68, № 10, pp. 2604-2609.

68. Bayer E.A., Wilchek M. The use of the avidin-biotin complex as a tool in molecular biology, ethods of Biochemical Analysis. 1980, Vol. 26, pp. 1-45.

69. O'Shannessy D.J., Doberson M.J., Quarles R.H. A novel procedure for labeling immunoglobulins ' conjugation to oligosaccharide moieties. Immunol. Lett. 1984, Vol. 8, pp. 273-276

70. Bayer E.A., Ben-Hur H., Wilchek M. Biocytin hydrazide a selective label for sialic acids, .lactose, and other sugars in glycoconjugates using avidin-biotin technology. Anal. Biochem. 1988, ol. 170, №2, pp. 271-281.

71. Hoffman W.L., O'Shannessy D.J. Site-specific immobilization of antibodies by their ligosaccharide moieties to new hydrazide derivatized solid supports. J. Immunol. Meth. 1988, V. 112, 2 1, pp. 113-120.

72. Rowlinsonbusza G., Hnatowich D.J., Rusckowski M., Snook D., Epenetos A.A. Xenograft calization using pretargeted streptavidin-conjugated monoclonal antibody and In( 111 )-labeled biotin. itibody Immunoconj. Radiophar. 1993, Vol. 6, № 2, pp. 97-109.

73. Hnatowich D.J., Virzi F., Ruskowski M. Investigations of avidin and biotin for imaging pplications. J. Nucl.Med. 1987, Vol. 28, № 8, pp. 1294-1302.

74. Epenetos AA, Mather S, Shepherd J, Granowska, Taylor-Papadimitriou J. Targeting of iodine-:3-labeled tumor associated monoclonal antibodies to ovarian, breast, and gastroinstitinal tumors, ancet. 1982, Vol. 2, p. 999-1005.

75. Casalini P., Luison E., Menard S., Colnaghi M.I., Paganelli G., Canevari S. Tumor pretargeting: le of avidin/streptavidin on monoclonal antibody internalization. J. Nucl. Med. 1997, Vol. 38, № 9,p. 1378-1381.

76. Jain R.K. Determinants of tumor blood flow: a review. Cancer Res. 1988, Vol. 48, J\T° 10, p. 2641-2658.

77. Rodwell J.D. Engineering monoclonal antibodies. Nature. 1989, Vol. 342, pp. 99-100.

78. Paganelli G., Magnani P., Siccardi A.G. Clinical application of the avidin-biotin system for tumor rgeting, In: Cancer therapy with radiolabeled antibodies. Ed. by Goldenberg D.M. CRC Press, Boca aton. 1995, pp. 239-254.

79. Chinol M., Paganelli G., Sudati F., Meares C., Fazio F. Biodistribution in tumour-bearing mice of 'o Y-90-labelled biotins using three-step tumour targeting. Nucl. Med. Communications. 1997, ol. 18, № 2, pp. 176-182.

80. Bomanji J., Hungerford J.L., Granowska M., Britton K.E. Uptake of 99m-Tc labeled (Fab')2 ragments of monoclonal antibody 225.28S by a benign ocular naevus. Eur. J. Nucl. Med, 1988,ol. 14, № 3, pp. 165-166.

81. М. Modorati G., Brancato R., Paganelli G., Magnani P., Pavoni R, Fazio F. Immunoscintigraphy with ree step monoclonal pretargeting technique in diagnosis of uveal melanoma: preliminary results. Br. J. phthalmol. 1994, Vol. 78, № l, pp. 19-23.

82. Samuel A., Paganelli G., Chiesa R., Sudati F., Calvitto M., Melissano G, Grossi A, Fazio F. etection of prosthetic vascular graft infection using avidin/indium-111-biotin scintigraphy. . Nucl. Med. 1996, Vol. 37, № 1, pp. 55-61.

83. Rusckowski M., Paganelli G., Hnatowich D.J., Virzi F., Fogarasi M., Fazio F. Imaging fection/inflammation in patients with streptavidin and radiolabeled biotin: preliminary observations. J. ucl. Med. 1992, Vol 33, p. 926.

84. Rusckowski М., Fritz В., Hnatowich D.J. Localization of infection using streptavidin and biotin diolabeled biotin: an alternative to nonspecific polyclonal immunoglobulin. J. Nucl. Med. 1992, ol. 33, № 10, pp. 1810-1815.

85. Seabold J.E., Forstrom L.A., Schauwecker D.S., Brown M L., Datz F.L., McAfee J.G., Palestro .J., Royal H.D. Procedure guideline to indium-111-leucocyte scintigraphy for suspected fection/inflammation. J. Nucl. Med. 1997, Vol. 38, № 6, pp. 997-1001.

86. Peters A.M., Danpure N.J., Osman S. Preliminary clinical experience with Tc-99m-HMPAO for belling leucocytes and imaging infection. Lancet. 1986, Vol. II, pp. 945-949.

87. Fishman A.J., Rubin R.H., White A.A. Localization of Fc and Fab fragments of nonspecific olyclonal IgG at focal sites of inflammation. J. Nucl. Med. 1990, Vol. 31, №7, pp. 1199-1205.

88. Rosebrough S.F., Hartley D.F. Biochemical modification of streptavidin and avidin: in vitro and in ivo analysis. J. Nucl. Med. 1996, Vol. 37, № 8, pp. 1380-1384.

89. Ohara H, Okamoto T. A new in vitro cell line established from human oat cell carcinoma of the ng. Cancer Res. 1977, Vol. 37, № 9, pp. 3088-3095.

90. Савицкий А.П., Меерович И.Г., ЖердеваВ.В. Авидин-биотиновая система как средство ресной доставки противоопухолевых препаратов. Российский химический журнал, т. XLII,2 5, 1998, сс. 77-83.

91. Савицкий А.П., Меерович И.Г., Меерович Г А. Устройство для исследования отодинамической активности фотосенсибилизаторов in vitro. Патент РФ № 2160897 с риоритетом от 02.03. 2000 г., опубл. 20.12.2000 г.

92. Gantchev T.G., Urumov I.J., Hunting D.J., van Lier J.E. Phototoxicity and intracellular eneration of free radicals by tetrasulphonated Al- and Zn-phthalocyanines. Int. J. Radiat. Biol., 1994, ol. 65, №3, pp. 289-298.

93. Ben-Hur E., Carmichael A., Riesz P., Rosental L Photochemical generation of superoxide radical nd the cytotoxicity of phthalocyanines. Int. J. Radiat. Biol., 1985, Vol. 48, № 5, pp. 837-846.

94. Woodburn K.W., Fan Q., Miles D.R., Kessel D, Luo Y., Young S.W. Localization and efficacy nalysis of the phototherapeutic lutetium texaphyrin (PCI-0123) in the murine EMT6 sarcoma model, hotochem Photobiol. 1997, Vol. 65,№ 3, pp. 397-402.

95. Moll R., Franke W.W., Schiller D.L., Geiger В., Krepler R. The catalog of human cytokeratins: atterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell. 1982, Vol. 31, pp. 11-24.

96. Miralles F., Takeda Y., Escribano M.J. Comparison of carbohydrate and peptide biotinylation on e immunological activity of IgG murine monoclonal antibody. J. Immunol. Methods. 1991, Vol 40, 2 2, pp. 191-196.

97. Кармакова Т. Моноклональные антитела к антигенам мембран жировых глобул женского олока и их использование при морфологическом исследовании опухолей человека, втореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. 1996.

98. Agrawal В., Gendler S.J., Longenecker М. The biological role of mucins in cellular interactions nd immune regulation: prospects for cancer immunotherapy. Mol. Medicine. 1998, pp. 397-403.

99. Miles D.W., Taylor-Papadimitriou J. Therapeutics of polymorphic epithelial mucin in denocarcinoma. Pharmacol Ther. 1999, Vol. 82, № 1, pp. 97-106.

100. Ansari M.Z., Shope R.E., Malik S. Evaluation of vero cell lysate antigen for the ELISA of aviviruses. J. Clin. Lab. Analysis. 1993, Vol. 7, № 4, pp. 230-237.

101. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е М. Теория и практика ммуноферментного анализа. М: Высшая школа. 1991, с.262.

102. Jokiranta T.S., Meri S. Biotinylation of monoclonal antibodies prevents their ability to activate the lassical pathway of complement. J. Immunol. 1993, Vol. 151, № 4, pp. 2124-2131.

103. Panyatich A.V., Baturevich E.A., Kolesnikova T.S., Ganz T. The effect of biotinylation on the