Формирование и физико-химические свойства привитых рецепторных слоев микромеханических и пьезокварцевых сенсоров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, кандидат химических наук Кудринский, Алексей Александрович

• Кудринский, Алексей Александрович
• кандидат химических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат химических наук Кудринский, Алексей Александрович

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Принцип работы микромеханических устройств.

2.2. Микромеханические сенсоры и измерительные устройства.

2.3. Аптамеры.

2.4. Сенсоры для определения тромбина с рецепторным слоем на основе тромбин-связывающего аптамера.

2.4.1. Электрохимические сенсоры.

2.4.2. Пьезокварцевые сенсоры.

3. Экспериментальная часть.

3.1. Реагенты.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Измерение поверхностного натяжения.

3.2.2. Пьезокварцевое микровзвешивание.

3.2.3. Регистрация спектров поглощения.

3.2.4. Получение и обработка микрофотографий.

3.2.5. Атомно-силовая микроскопия.

3.2.6. Масс-спектрометрия.

3.3. Методики.

3.3.1. Иммобилизация 3-аминопропилтриэтоксисилана на поверхности кантилевера.

3.3.2. Синтез 3-аминопропилсилатрана.

3.3.3. Иммобилизация белков на поверхности кантилевера.

3.3.4. Очистка пьезокварцевого кристалла.

3.3.5. Иммобилизация тромбин-связывающего аптамера на поверхности электродов пьезокварцевого кристалла.

3.3.6. Проведение адсорбционных измерений.

3.3.7. Синтез копъюгатов тромбина с наночастицами серебра, стабилизированными меркаптоянтарной кислотой.

3.3.8. Синтез копъюгатов тромбина с наночастицами серебра и золота, стабилизированными хитозаном.

3.3.9. Спектрофотометрическое определение концентрации тромбина по методу Брэдфорд.

4. Обсуждение результатов.

4.1. Химическое модифицирование кантилевера.

4.1.1. Модифицирование 4-аминотиофенолом.

4.1.2. Модель изменения поверхностного натяжения на межфазной границе твердое тело - жидкость в процессе адсорбции.

4.1.3. Модифицирование 3-аминопропилтриэтоксисиланом.

4.1.4. Модифицирование 3-аминопропилсилатраном.

4.1.5. Модифицирование глутаровым альдегидом.

4.1.6. Иммобилизация белков на поверхности кантилевера.

4.1.7. Влияние природы модификатора на изменение поверхностного натяжения в процессе сорбции.

4.2. Агрегация лизоцима на поверхности кантилевера.

4.3. Иммунохимический микромеханический сенсор для определения морфина.

4.4. Микромеханический сенсор для определения тромбина.

4.5. Пьезокварцевый сенсор для определения тромбина.

4.5.1. Подготовка кристалла к проведению адсорбционных измерений.

4.5.2. Иммобилизация тромбин-связывающего аптамера на поверхности пьезокварцевого резонатора.

4.5.3. Оптимизация состава буферного раствора.

4.5.4. Оптимизация состава регенерирующего раствора.

4.5.5. Адсорбция тромбина на поверхности пьезокварцевого резонатора, покрытой тромбин-связывающим аптамером.

4.5.6. Синтез наночастиц серебра и золота.

4.5.7. Иммобилизация тромбина на поверхности наночастиц серебра и золота.

4.5.8. Адсорбция конъюгатов тромбина е наночастицами серебра и золота на поверхности пьезокварцевого резонатора, покрытой тромбин-связывающим аптамером.

5. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Формирование и физико-химические свойства привитых рецепторных слоев микромеханических и пьезокварцевых сенсоров»

Одним из активно развивающихся приложений метода химического модифицирования поверхности является разработка химических и биосенсоров — аналитических устройств, включающих взаимодействующий с определяемым веществом рецепториый слой, тесно связанный или интегрированный с физическим преобразователем [1].

Каждый из известных сегодня типов сенсоров (электрохимические, полупроводниковые, оптические, масс-чувствительные и т. д.) обладает своими достоинствами и недостатками, поэтому представляет интерес не только совершенствование рецепторов известных типов, но и разработка новых селективных высокочувствительных сенсорных систем, раскрытие их потенциальных возможностей и преимуществ.

Селективность сенсора определяется наличием на поверхности преобразователя прочно зафиксированного слоя функциональных групп или молекул, способных специфично и, желательно, обратимо взаимодействовать с определяемым веществом — анали-том. Создание такого рецепторного слоя - необходимое, но не достаточное условие эффективности сенсора [2].

Начиная с 1950-х годов практически единственными реакциями, используемыми для специфического определения концентрации биологически активных соединений, были взаимодействие антиген-антитело и гибридизация ДНК. Затем, после открытия Элингтоном в 1990 г. "аптамеров" [3] - короткоцепочечных одпотяжевых олиго-нуклеотидов, способных к селективному, а в некоторых случаях и специфичному, связыванию с определенными биологически активными соединениями, - появилась возможность использования альтернативных комплексообразователей в составе рецепторного слоя сенсоров. Опубликованные работы, посвященные применению аптамеров в сенсорах, носят пока преимущественно иллюстративный характер, и подробных сведений о поведении аптамеров на рабочей поверхности сенсоров получено пока немного. Вместе с тем, знание строения и свойств привитых слоев аптамеров на поверхности рецептора позволит разработать более эффективные методики экспрессного определения различных биологически активных соединений в многокомпонентных объектах. Хорошо алгоритмизированный способ получения индивидуальных аптамеров (процедура SELEX, предложенная Элингтоном) в сочетании со сведениями о поведении иммобилизованных аптамеров в перспективе может создать предпосылки для разработки унифицированных методик экспресс-определения большого числа аналитов.

Наряду с открытием аптамеров в последние десятилетия произошел технологический прорыв в области изготовления кремниевых микроконсолей (кантилеверов) для атомно-силовой микроскопии, позволивший создать чувствительные тепловые, магнитные, масс-сенсоры. Успешное использование кантилеверов для детектирования самых разных физических взаимодействий открывает широкие перспективы создания на их основе принципиально нового кла!сса химических сенсоров - так называемых микромеханических сенсоров [4-7], в которых регистрируется изменение поверхностного натяжения на границе рецептор — окружающая среда. Потенциальные возможности микромеханических сенсоров и области, в которых возможно их наиболее эффективное применение, еще только предстоит выяснить.

Подавляющее большинство работ в области микромеханических сенсоров в настоящее время носит иллюстративный характер и посвящено определению отдельно взятого аналита с помощью соответствующего селективного комплексообразующего реагента, иммобилизованного на поверхности кантилевера [4-7]. Влияние способа иммобилизации и структуры образующегося привитого слоя на величину аналитического сигнала и, как следствие, па чувствительность и другие характеристики сенсора зачастую систематически не исследуется. Также редко обсуждаются механизмы процессов, приводящих к изменению поверхностного натяжения в области привитого слоя. Лишь в самое последнее время начали появляться работы [8, 9], свидетельствующие об определяющем влиянии расположения молекул реагентов в привитом слое на экспериментально определяемую величину отклика сенсора -поверхностного натяжения на границе рецепторного слоя с анализируемым раствором. Это позволяет предположить, что микромеханические устройства на основе кантилеверов могут служить не только в качестве средств инструментального экспресс-анализа, но и в качестве инструментов для изучения привитых слоев и физико-химических процессов в приповерхностном слое. Поэтому выявление того, какую информацию о них можно получить с помощью микромеханических устройств на основе кантилеверов, является, несомненно, интересной и актуальной в фундаментальном аспекте задачей.

Для этого необходимо на примере использования различных модификаторов поверхности и адсорбатов выявить основные закономерности возникновения аналитического сигнала в микромеханических сенсорах и установить степень влияния различных процессов, протекающих в привитых слоях, на поверхностное натяжение.

В связи с этим, основной целью работы было изучение физико-химических процессов в привитых рецепторных слоях микромеханических и пьезокварцевых сенсоров.

Для достижения этой цели решались следующие задачи:

1. Изучение динамики изменения поверхностного натяжения привитого слоя в процессах модифицирования кантилевера на примере иммобилизации различных белков с помощью метода химической сборки на поверхности. Выявление вклада латеральных межмолекулярных взаимодействий в привитых слоях в поверхностное натяжение.

2. Изучение динамики изменения поверхностного натяжения в процессе структурной организации привитого слоя молекул лизоцима.

3. Разработка методов создания рецепторных слоев микромеханических сенсоров, способных к эффективному генерированию аналитического сигнала при селективной сорбции определяемого вещества.

4. Изучение аналитических характеристик модельных микромеханических сенсоров для определения тромбина (одного из ключевых ферментов системы свертывания крови), морфина и антител к морфину.

5. Изучение комплексообразующей способности тромбин-связывающего аптамера, иммобилизованного на поверхности золота. Создание модельного пьезокварцевого сенсора для определения тромбина и оптимизация методики определения тромбина в модельных растворах, имитирующих сыворотку крови. Поиск способов увеличения чувствительности разработанного сенсора.

6. Сравнительный анализ эффективности микромеханических и пьезокварцевых t сенсоров.

2. Обзор литературы

Основной целыо настоящей работы является изучение физико-химических процессов на поверхности рецепторов микромеханических и пьезокварцевых сенсоров, происходящих с участием традиционных (ш-замегценных алкилтиолов и алкилсиланов) и новых модификаторов поверхности (аптамеров и 0)-замешенных алкилсилатранов). В связи с этим, основное внимание в обзоре литературы уделено, во-первых, принципам работы и наиболее существенным достижениям в области разработки микромеханических устройств и, во-вторых, аптамерам: их структуре, свойствам и использованию аптамеров в сенсорах различных типов.

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Кудринский, Алексей Александрович

5. Выводы

1. Установлены закономерности изменения поверхностного натяжения на границах раздела золото/метанол, золото/вода, кремний/вода в процессах физической адсорбции и хемосорбции некоторых белков и низкомолекулярных модификаторов поверхности, определены характерные времена протекания этих процессов. Предложена модель, описывающая зависимость поверхностного натяжения от степени заполнения поверхности адсорбатом при различных способах распределения молекул в приповерхностном слое.

2. Показано, что хемосорбция 3-аминопропилсилатрана на окисленной кремниевой поверхности протекает последовательно в две стадии: быстрое взаимодействие 3-аминопропилсилатрана с поверхностными силанольными группами и последующий медленный гидролиз с выделением триэтаноламина. Основываясь на различии скоростей стадий, была предложена методика модифицирования поверхности кремния 3-аминопропилсилатраном, позволяющая избежать образования поли-силоксановых слоев.

3. Обнаружена агрегация лизоцима, иммобилизованного на поверхности золота, кремния и слюды, происходящая в условиях, при которых агрегация белка в растворе не наблюдается — рН 3,0, комнатная температура. Показано, что при высокой плотности прививки ковалентное закрепление молекул лизоцима не препятствует агрегации. Агрегация иммобилизованного лизоцима протекает в две стадии: конформационный переход в молекуле белка и собственно образование агрегатов.

4. Показана возможность создания микромеханичсских иммуносенсоров для обнаружения антител к морфину в сыворотке крови. Разработан сенсор для определения концентрации морфина в водных растворах в диапазоне концентраций 3-50 мкг/мл.

5. Показано, что в точке падения лазерного луча в процессе модифицирования возможно протекание побочных реакций, приводящих к образованию полимолекулярных слоев на поверхности кантилевера.

6. Определена константа связывания тромбина с иммобилизованным аптамером 5'-HS-T(CH2CH20)6T5CCAACGGTTGGTGTGGTTGG-3', Кь = 0,047 нМ-1.

7. Разработан сенсор для проточно-игокекционного определения тромбина в модельных растворах в диапазоне концентраций 10-500 нМ с относительной погрешностью, не превышающей 10%. Установлено, что продолжительность стабильной работы сенсора составляет 60 суток (-200 измерений). Показано, что присутствие 40-кратного избытка бычьего сывороточного альбумина не мешает определению тромбина.

8. Установлено, что тромбин может быть иммобилизован на наночастицах серебра, стабилизированных меркаптоянтарной кислотой, а также на наночастицах серебра и золота, стабилизированных хитозаном. Полученные конъюгаты обладают способностью к связыванию с аптамером и могут быть использованы для увеличения чувствительности сенсора для определения тромбина.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Кудринский, Алексей Александрович, 2009 год

1. Кагтралл Р.В. Химические сенсоры. М.: Научный мир. 2000. 144 с.

2. Лисичкин Г.В., Фадеев А.Ю., Сердан А.А., Нестеренко П.Н., Мингалев П.Г., Фурман Д.Б. Химия привитых поверхностных соединений. М.: Физматлит. 2003. 592 с.

3. Ellington A.D., Szostak J.W. In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands. //Nature. 1990. V. 346. P. 818-822.

4. Fritz J., Bailer M.K., Lang H.P., Rothuizen H., Vettiger P., Meyer E., Guntherodt H.-J., Gerber Ch., Gimzewski J.K. Translating biomolecular recognition into nanomechanics. // Science. 2000. V. 288. P. 316-318.

5. Raiteri R., Grattarola M., Bcrger R. Micromechanics senses biomolecules. // Mat. Today. 2002. V. 5. Iss. 1. P. 22-29.

6. Lavrik N.V., Sepaniak M.J., Datskos P.G. Cantilever transducers as a platform for chemical and biological sensors. // Rev. Sci. Inst. 2004. V. 75. Iss. 7. P. 2229-2253.

7. Ziegler C. Cantilever-based biosensors. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. V. 379. P. 946-959.

8. Braun Т., Backmann N., Vogtli M., Bietsch A., Engel A., Lang H.-P., Gerber C., Hegner M. Conformational change of bacteriorhodopsin quantitatively monitored by microcantilever sensors. // Biophys. J. 2006. V. 90. Iss. 8. P. 2970-2977.

9. Backmann N., Zahnd C., Huber F., Bietsch A., Pluckthun A., Lang H.-P., Guntherodt H.-J., Hegner M., Gerber C. A label-free immunosensor array using single-chain antibody fragments. //Proc. Natl. Ac. Sci. 2005. V. 102. Iss. 41. P. 14587-14592.

10. Binnig G., Quate C., Gerber C. Atomic force microscope. // Phys. Rev. Lett. 1986. V. 56. P. 930-933.

11. Devoe D.L., Pisano A.P. Modeling and optimal design of piezoelectric cantilever microactuators. // J. Microelectrochem. Sys. 1997. V. 6. Iss. 3. P. 266-270.

12. Piekarski В., Devoe D.L., Dubey M., Kaul R., Conrad J. Surface micromachined piezoelectric resonant beamfilters. // Sens. Act. A: Phys. 2001. V. 91. Iss. 3. P. 313-320.

13. Porter T.L., Eastman M.P., Pace D.L., Bradley M. Sensor based on piezoresistive microcantilever technology. // Sens. Act. A: Phys. 2001. V. 88. Iss. 1. P. 47-51.

14. Hagleitner C., Hierlemann A., Lange D., Kummer A., Kerness N., Brand O., Baltes H. Smart single-chip gas sensor microsystem. // Nature. 2001. V. 414. Iss. 6861. P. 293-296.

15. Zlatanova J., Lindsay S.M., Leuba S.H. Single molecule force spectroscopy in biology using the atomic force microscope. // Prog. Biophys. Mol. Biol. 2000. V. 74. P. 37-61.

16. Ratto T.V., Langry K.C., Rudd R.E., Balhorn R.L., Allen M.J., McElfresh M.W. Force spectroscopy of the double-tethered concanavalin-A mannose bond. // Biophysical Journal. 2004. V. 86. P. 2430-2437.

17. Tycko R. Insights into the amyloid folding problem from solid-state NMR. // Biochemistry. 2003. V. 42. Iss. 11. P. 3151-3159.

18. Strunz Т., Oroszlan K., Schafer R., Guntherodt H.-J. Dynamic force spectroscopy of single DNA molecules. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96. P. 1127711282.

19. Willemsen O.H., Sncl M.E., Cambi A., Greve J., De Grooth B.G., Figdor C.G. Bimolecular interactions measured by atomic force microscopy. // Biophysical Journal. 2000. V. 79. P. 3267-3281.

20. Gupta A., Akin D., Bashir R. Single virus particle mass detection using microresonators with nanoscale thickness. // Appl. Phys. Lett. 2004. V. 84. Iss. 11. P. 19761978.

21. Ilic В., Yang Y., Craighead H.G. Virus detection using nanoelectromechanical devices. // Appl. Phys. Lett. 2004. V. 85. Iss. 13. P. 2604-2606.

22. Yaminsky I.V., Kiselev G.A. Scanning probe microscopy of biomacromolecules: instrumentation and experiments. // Frontiers of multifunctional integrated nanosystems. Kluwer Academic Publishers. 2004. P. 123-130.

23. Ilic В., Czaplewski D., Zalalutdinov M., Craighead H.G. Single cell detection with micromechanical oscillators. // J. Vacuum Sci. Technol. B. 2001. V. 19. Iss 6. P. 2825-2828.

24. Ono Т., Li X., Miyashita H., Esashi M. Mass sensing of adsorbed molecules in sub-picogram sample with ultrathin silicon resonator. // Rev. Sci. Instrum. 2003. V. 74. Iss. 3. P. 1240-1246.

25. Nugaeva N., Gfeller K.Y., Backmann N., Lang H.P., Duggelin M., Hegner M. Micromechanical cantilever array sensors for selective fungal immobilization and fast growth detection. // Biosensors and Bioelectronics. 2005. V. 21. P. 849-856.

26. Gfeller K.Y., Nugaeva N., Hegner M. Rapid biosensor for detection of antibiotic-selective growth of Escherichia coli. // Applied and Environmental microbiology. 2005. V. 71. Iss. 5. P. 2626-2631.

27. Gfeller K.Y., Nugaeva N., Hegner M. Micromechanical oscillators as rapid biosensor for the detection of active growth of Escherichia coli. // Biosensors and Bioelectronics. 2005. V. 21. P. 528-533.

28. Berger R., Fabian J.-H. Thermal analysis of nanogram quantities using a micromechanical cantilever sensor. // Proc. 30th North American Thermal Society Conference. Pittsburgh (USA), 23-25 September 2002. P. 68-73.

29. Wickramasinghe H.K. Progress in scanning probe microscopy. // Acta Mater. 2000. V. 48. Iss. l.P. 347-358.

30. Ilic B. Using a nanomechanical cantilever and atomic force microscopy to measure bacterial cell mass. // Microscopy and Analysis. 2003. P. 9-17.

31. Tamayo J., Humphris A.D.L., Malloy A.M., Miles M.J. Chemical sensors and biosensors in liquid environment based on microcantilevers with amplifed quality factor. // Ultramicroscopy. 2001. V. 86. Iss. 1-2. P. 167-173.

32. Su M., Li S., Dravid V.P. Microcantilever resonance-based DNA detection with nanoparticle probes. // Appl. Phys. Lett. 2003. V. 82. Iss. 20. P. 3562-3564.

33. Ekinci K.L., Yang Y.T., Roukes M.L. Ultimate limits to inertial mass sensing based upon nanoelectromechanical systems. // J. Appl. Phys. 2004. V. 95. Iss. 5. P. 26822689.

34. Naik Т., Longmire E.K., Mantell S.C. Dynamic response of a cantilever in liquid a solid wall. // Sens. Act. A. Phys. 2003. V. 102. Iss. 3. P. 240-254.

35. Dring A.L., Jones B.E. Integrated on-line multisensing of fluid flow using a mechanical resonator. // Sensors and Actuators. 2000. V. 85. Iss. 1. P. 275-279.

36. Sugawara Y., Ishizaka Т., Morita S., Imai S., Mikoshiba N. Simultaneous observation of atomically resolved AFM/STM images of a graphite surface. // Jpn. J. Appl. Phys. 1990. V. 29. Iss. 1. P. L157-L159.

37. Hochwitz Т., Henning A.K., Levery C. Imaging integrated circuit dopant profiles with force-based scanning Kelvin probe microscope. // J.Vac.Sci.Technol. B. 1996. V. 14. Iss. l.P. 440-446.

38. Saens J.J., Garcia N., Grutter P., Meyer E., Heinzelmann H., Wiezendanger R., Rosenthaler L., Hidber H.R., Guntherodt H.J. Observation of magnetic forces by the atomic force microscope. // J. Appl. Phys. 1987. V. 63. P. 4293-4295.

39. Martin Y., Wickramasinghe H.K. Magnetic imaging by "force microscopy" with 1000-A resolution. // Appl. Phys. Lett. 1987. V. 50. Iss. 20. P. 1455-1457.

40. Majumdar A., Lai J., Chandrachood M., Nakabeppu O., Wu Y., Shi Z. Thermal imaging by atomic force microscopy using thermocouple cantilever probes. // Rev. Sci. Instrum. 1995. V. 66. Iss. 6. P. 3584-3591.

41. Berger R., Gerber C., Lang H.-P., Gimzewski J.K. Micromechanics: A Toolbox for Femtoscale Science: «Towards a Laboratory on a Tip». // Microelectronic Engineering. 1997. V. 35. Iss. 1. P. 373-379.

42. Subramanian A., Oden P.I., Kennel S.J., Jacobson K.B., Warmack R.J., Thundat Т., Doktycz M.J. Glucose biosensing using an enzyme-coated microcantilever. // Appl. Phys. Lett. 2002. V. 81. Iss. 2. P. 385-387.

43. Gimzewski J.K., Gerber C., Meyer E., Schlittler R.R., Observation of a chemical reaction using a micromechanical sensor. // Chem. Phys. Lett. 1994. V. 217. P. 589594.

44. Stoney G.G. The tension of metallic films deposited by electrolysis. // Proc. R. Soc. London A. 1909. V. 82. P. 172-175.

45. Preissig F.J. Applicability of the classical curvature-stress relation for thin films on plate substrates. // J. Appl. Phys. 1989. V. 66. P. 4262-4268.

46. Godin M., Tabard-Cossa V., Grutter P. Quantitative surface stress measurements using a microcantilever. // Appl. Phys. Lett. 2001. Vol. 79, Iss. 4. P.551-553.

47. Berger R., Delamarche E., Lang H.P., Gerber C., Gimzewski J.K., Meyer E., Guntherodt H.-J. Surface stress in the self-assembly of alkanethiols on gold probed by a force microscopy technique. // Appl. Phys. A. 1998. V. 66. P. 55-59.

48. Raiteri R., Butt H.-J., Grattarola M. Changes in surface stress at the liquid/solid interface measured with a microcantilever. // Electrochim. Acta. 2000. V. 46. P. 157-163.

49. Godin M., Williams P.J., Tabard-Cossa V., Laroche O., Beaulieu L.Y., Lennox R.B., Grutter P. Surface stress, kinetics, and structure of alkanethiol self-assembled monolayers. // Langmuir. 2004. V. 20. Iss. 17. P. 7090-7096.

50. Hansen A.G. In situ scanning tunneling microscopy and microcantilever investigations of yeast cytochrome с on gold. // Ph.D. theses. Department of Chemistry Technical University, Denmark. 2002. 141 p.

51. Lavrik N.V., Tipple C.A., Sepaniak M.J., Datskos P.G. Gold nano-structured for transduction of biomolecular interactions into micrometer scale movements. // Biomedical Microdevices. 2001. V. 3. Iss. 1. P. 35-44.

52. Quist F., Tabard-Cossa V., Badia A. Nanomechanical cantilever motion generated by a surface-confined redox reaction. // J. Phys. Chem. B. 2003. V. 107. Iss. 39. P. 10691-10695.

53. Pinnaduwage L.A., Boiadjiev V., Hawk J.E., Thundat T. Sensitive detection of plastic explosives with self-assembled monolayer-coated microcantilevers. // Appl. Phys. Lett. 2003. V. 83. Iss. 7. P. 1471-1473.

54. Datskos P.G., Sauers I. Detection of 2-mercaptoethanol using gold-coated micromachined cantilevers. // Sensors and Actuators B. 1999. V. 61. Iss. 1. P. 75-82.

55. Ji H.-F., Hansen K.M., Hu Z., Thundat T. Detection of pH variation using modified microcantilever sensors. // Sensors and Actuators B. 2001. V. 72. Iss. 3. P. 233-238.

56. Ji H.-F., Finot E., Dabestani R., Thundat Т., Brown G.M., Britt P.F. A novel selfassembled monolayer (SAM) coated microcantilever for low level cesium detection. // Chem. Commun. 2000. P. 457-458.

57. Ji H.-F., Thundat Т., Dabestani R„ Brown G.M., Britt P.F., Bonnesen P.V. Ultrasensitive detection of CrO/" using microcantilever sensor. // Anal. Chem. 2001. V. 73. Iss. 7. P. 1572-1576.

58. Ji H.-F., Yan X., McShane M.J. Experimental and theoretical aspects of glucose measurement using a microcantilever modified by enzyme-containing polyacrylamide. // Diabetes Technol. Ther. 2005. V. 7. Iss. 6. P. 986-995.

59. Wu G., Ji H., Hansen K., Thundat Т., Datar R., Cote R., Hagan M.F., Chakraborty A.K., Majumdar A. Origin of nanomechanical cantilever motion generated from biomolecular interactions. // PNAS. 2001. V. 98. Iss. 4. P. 1560-1564.

60. Moy V.T., Florin E.L., Gaub H.G. Intermolecular forces and energies between ligands and receptors. // Sciencc. 1994. V. 266. P. 257-259.

61. Ji H.-F., Thundat T. In situ detection of calcium ions with chemically modified microcantilevers. // Biosens. Bioelectron. 2002. V. 17. P. 337-343.

62. Guanghua W., Datar 11.R., Hansen K.M., Thundat Т., Cote R.J., Majumdar A. Bioassay of prostate-specific antigen (PSA) using microcantilevers. // Nature Biotechnology. 2001. V. 19. P. 856-860.

63. Raiteri R., Grattarola ML, Butt H.-J., Skladal P. Micromechanical cantilever-based biosensors. // Sensors and Actuators B. 2001. V. 79. Iss. 2. P. 115-126.

64. Grogan C., Raiteri R., O'Connor G.M., Glynn T.J., Cunningham V., Kane M., Charlton M., Leech D. Characterisation of an antibody coated microcantilever as a potential immunobased biosensor. // Biosens. Bioelectron. 2002. V. 17. P. 201-207.

65. Arntz Y., Seelig J.D., Lang H.P., Zhang J., Hunziker P., Ramseyer J.P., Meyer E., Hegner M., Gerber Ch. Label-free protein assay based on a nanomechanical cantilever array. //Nanotechnology. 2003. V. 14. P. 86-90.

66. Dutta P., Tipple С.Л., Lavrik N.V., Datskos P.G., Hofstetter H., Hofstetter O., Sepaniak M.J. Enantioselective sensors based on antibody-mediated nanomechanics. // Analytical Chemistry. 2003. V. 75. Iss. 10. P. 2342-2348.

67. Yan X., Xu X.K., Ji H.-F. Glucose oxidase multilayer modified microcantilevers for glucose measurement. // Anal. Chem. 2005. V. 77. Iss. 19. P. 6197-6204.

68. Pei J., Tian F., Thundat T. Glucose biosensor based on the microcantilever. // Anal. Chem. 2004. V. 76. Iss. 2. P. 292-297.

69. Marie R., Jensenius H., Thaysen J., Christensen C.B., Boisen A. Adsorption kinetics and mechanical properties of thiol-modified DNA-oligos on gold investigated by microcantilever sensors. // Ultramicroscopy. 2002. V. 91. P. 29-36.

70. Yang M., Yau H.C.M., Chan H.L. Adsorption kinetics and ligand-binding poperties of thiol-modifed double stranded DNA on a gold surface. // Langmuir. 1998. V. 14. P. 6121-6129.

71. Hagan M.F., Majumdar A., Chakraborty A.K. Nanomechanical forces generated by surface grafted DNA. //J. Phys. Chem. B. 2002. V. 106. P. 10163-10173.

72. Liu F., Zhang Y., Ou-Yang Z.-C. Flexoelectric origin of nanomechanic deflection in DNA microcantilever system. // Biosens. Bioelectron. 2003. V. 18. P. 655-660.

73. Savran C.A., Knudsen S.M., Ellington A.D., Manalis S.R. Micromechanical detection of proteins using aptamer-based receptor molecules. // Anal Chem. 2004. V. 76. Iss. 11. P. 3194-3198.

74. Moulin A.M., O'Shea S.J., Badley R.A., Doyle P., Welland M.E. Measuring surface-induced conformational changes in proteins. //Langmuir. 1999. V. 15. P. 8776-8779.

75. Betts T.A., Tipple C.A., Sepaniak M.J., Datskos P.G. Selectivity of chemical sensors based on micro-cantilevers coated with thin polymer films. // Anal. Chim. Act. 2000. V. 422. Iss. l.P. 89-99.

76. Toda M., Itakura A.N., Beuscher K., Graf K., Berger R. Surface stress of polyelectrolyte adsorption measured by micromechanical cantilever sensors. // J. Surf. Sci. Nanotech. 2006. V. 4. P. 96-99.

77. Hilt J.Z., Gupta A.K., Bashir R., Peppas N.A. Ultrasensitive biomems sensors based on patterned with environmentally responsive hydrogels. // Biomedical Microdevices. 2003. V. 5. Iss. 3. P. 177-184.

78. Bietsch A., Zhang J., Hegner M., Lang H.-P., Gerber C. Rapid functionalization of cantilever array sensors by inkjet printing. // Nanotechnology. 2004. V. 15. Iss. 8. P. 873-880.

79. Datskos P.G., Lavrik N.V., Sepaniak M.J. Detection of explosive compounds with the use of microcantilevers with nanoporous coatings. // Sensor Lett. 2003. V. 1. Iss. 1. P. 25-32.

80. Xu X., Thundat Т., Brown G.M., Ji H.-F. Detection of Hg2+ using microcantilever sensors. // Anal. Chem. 2002. V. 74. Iss. 15. P. 3611-3615.

81. Ji H.-F., Zhang Y., Purushotham V.V., Kondu S., Ramachandran В., Thundat Т., Haynie D.T. 1,6-Hexanedithiol monolayer as a receptor for specific recognition of alkylmercury. //Analyst. 2005. V. 130. P. 1577-1579.

82. Liu K., Ji H.-F. Detection of Pb2+ using a hydrogel swelling microcantilever sensor.//Anal. Sci. 2004. V. 20. Iss. 1. P. 9-11.

83. Zhang Y., Ji H.-F., Brown G.M., Thundat T. Detection of Cr042" using a hydrogel swelling microcantilever sensor. // Anal Chem. 2003. V. 75. Iss. 18. P. 4773-4777.

84. Lang H.P., Hegner M., Gerber C. Cantilever array sensors. // Mat. Today. 2005. V. 8. Iss. 4. P. 30-36.

85. Goeders K.M., Colton J.S., Bottomley L.A. Microcantilevers: sensing chemical interactions via mechanical motion. // Chem. Rev. 2008. V. 108. P. 522-542.

86. Carrascosa L.G., Moreno M., Alvarez M., Lechuga L.M. Nanomechanical biosensors: a new sensing tool. // Trends in Analytical Chemistry. 2006. V. 25. Iss. 3. P. 196206.

87. Киселев Г.А. Изучение сенсорных свойств органических и полимерных пленок на твердой подложке. // Диссертация на соискание ученой степени канд. физ.-мат. наук, Физический ф-т МГУ. 2007. 138 с.

88. Yan X., Xu X.K., Ji H.-F. Glucose oxidase multilayer modified microcantilevers for glucose measurement. // Anal. Chem. 2005. V. 77. Iss. 19. P. 6197-6204.

89. Pei J., Tian F., Thundat T. Glucose biosensor based on the microcantilever. // Anal. Chem. 2004. V. 76. Iss. 2. P. 292-297.

90. Subramanian A., Odcn P.I., Kennel S.J., Jacobson K.B., Warmack R.J., Thundat Т., Doktycz M.J. Glucosc bioscnsing using an enzyme-coated microcantilever. // Appl. Phys. Lett. 2002. V. 81. Iss. 2. P. 385-387.

91. Thaysen J., Boisen A., Hansen O., Bouwstra S. Atomic force microscopy probe with piezoresistive read-out and a highly symmetrical Wheatstone bridge arrangement. // Sens. Act. A. Phys. 2000. V. 83. Iss. 1. P. 47-53.

92. Song S., Wang L., Li J., Zhao J. Aptamer-based biosensors. // Trends in Analytical Chemistry. 2008. V. 27. P. 108-117.

93. Спиридонова B.A., Копылов A.M. Аптамерные ДНК принципиально новые узнающие элементы для биосенсоров. // Биохимия. 2002. Т. 67. №6. С. 850-854.

94. Копылов A.M., Спиридонова В.А. Комбинаторная химия нуклеиновых кислот: SELEX. // Молекулярная биология. 2000. Т. 34. №6. С. 1097-1113.

95. Jayasena S.D. Aptamers: An emerging glass of molecules that rival antibodies in diagnostics. //Clinical Chemistry. 1999. V. 45. P. 1628-1650.

96. Beinaraviciute-Kellner R., Lipps G., Krauss G. In vitro selection of DNA binding sites for ABF1 protein from Saccharomyces cerevisiae. // FEBS letters. 2005. V. 579. Iss. 20. P. 4535-4540.

97. Misono T.S., Kumar P.K. Selection of RNA aptamers against human influenza virus hemagglutinin using surace plasmon resonance. // Anal. Biochem. 2005. V. 342. Iss. 2. P. 312-317.

98. Surugiu-Warnmark I., Warnmark A., Toresson G., Gustafsson J.-A., Bulow L. Selection of DNA aptamers against rat liver X receptors. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005. V. 332. Iss. 2. P. 512-517.

99. Lee S.K., Park M.W., Yang E.G., Yu J., Jeong S. An RNA aptamer that binds to the B-catenin interaction domain of TCF-1 protein. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005. V. 327. Iss. 1. P. 294-299.

100. Williams K„ Liu X.H, Lin H.Y., Ausiello D.A., Kim P.S., Bartel D.P. Bioactive and nuclease-resistant L-DNA ligand of vasopressin. // PNAS. 1997. V. 94. Iss. 21. P. 11285-11290.

101. Mendonsa S.D., Bowser M.T. In vitro selection of aptamers with affinity for neuropeptide Y using capillary electrophoresis. // J. Am. Chem. Soc. 2005. V. 127. Iss. 26. P. 9382-9383.

102. Gilbert B.A., Sha M., Wathen S.T., Rando R.R. RNA Aptamers that Specifically Bind to а К Ras-Derived Farncsylated Peptide. // Bioorg. Med. Chem. 1997. V. 5. Iss. 6. P. 1115-1122.

103. Yang Q., Goldstein I.J., Mei H.-Y., Engelke D.R. DNA ligands that bind tightly and selectively to cellobiose. // PNAS. 1998. V. 95. Iss. 10. P. 5462-5467.

104. Srisawat Ch., Goldstein I.J., Engelke D.R. Sephadex-binding RNA ligands: rapid affinity purification of RNA from complex RNA mixtures. // Nucleic Acids Research. 2001. V. 29. Iss. 2. E4. 5 p.

105. Masud M.M., Kuwahara M., Ozaki H., Sawai H. Sialyllactose-binding modified DNA aptamer bearing additional functionality by SELEX. // Bioorg. Med. Chem. 2004. V. 12. Iss. 5. P. 1111-1120.

106. Wallace S.T., Schroeder R. In vitro selection and characterization of streptomycin-binding RNAs: recognition discrimination between antibiotics. // RNA. 1998. V. 4. Iss. l.P. 112-123.

107. Berens Ch., Thain A., Schroeder R. A tetracycline-binding RNA aptamer. // Bioorg. Med. Chem. 2001. V. 9. Iss. 10. P. 2549-2556.

108. Cowan J.A., Ohyama Т., Wang D., Natarajan K. Recognition of a cognate RNA aptamer by neomycin B: quantitative evaluation of hydrogen bonding and electrostatic interactions. //Nucleic Acids Research. 2000. V. 28. Iss. 15. P. 2935-2942.

109. Wang Y., Killian J., Hamasaki K., Rando R.R. RNA molecules that specifically and stoichiometrically bind aminoglycoside antibiotics with high affinities. // Biochemistry. 1996. V. 35. Iss. 38. P. 12338-12346.

110. Boiziau С., Dausse E., Mishra R.K., Duconge F., Toulme J.-J. Identification of aptamers against the DNA template for In Vitro transcription of the HIV-1 Tar element. // Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1997. V. 7. Iss. 4. P. 369-380.

111. Le R., Mishra R.K., Toulme J.-J. Selective inhibition of cell-free translation by oligonucleotides targeted to a mRNA hairpin structure. // Nucleic Acids Research. 1998. V. 26. Iss. 10. P. 2273-2278.

112. Ток J.B., Cho J., Rando R.R. RNA aptamers that specifically bind to a 16S ribosomal RNA decoding region construct. // Nucleic Acids Research. 2000. V. 28. Iss. 15. P. 2902-2910.

113. Mannironi C., DiNardo A. Fruscoloni P. Tocchini-Valentini G.P. In vitro selection of dopamine RNA ligands. // Biochemistry. 1997. V. 36. Iss. 32. P. 9726-9734.

114. Vianini E., Gatto B. Palumbo M. In vitro selection of DNA aptamers that bind L-tyrosinamide. // Bioorg. Med. Chem. 2001. V. 9. Iss. 10. P. 2543-2548.

115. Stojanovic M.N., de Prada P., Landry D.W. Aptamer-based folding fluorescent sensor for cocaine. // J. Am. Chem. Soc. 2001. V. 123. Iss. 21. P. 4928-4931.

116. Hianik Т., Ostatna V., Sonlajtnerova M., Grman I. Influence of ionic strength, pH and aptamer configuration for binding affinity to thrombin. // Bioelectrochemistry. 2007. V. 70. P.127-133.

117. Hianik Т., Ostatna V., Zajacova Z., Stoikova E., Evtugyn G. Detection of aptamer-protein interactions using QCM and electrochemical indicator methods. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005. V. 15. P. 291-291.

118. Bang G.S., Cho S., Kim B-G. A novel electrochemical detection method for aptamer biosensors. //Biosens. Bioelectron. 2005. V. 21. P. 863-870.

119. Radi A-E., Sanchez J.L., Baldrich E., O'SuIlivan C.K. Reagentless, reusable, ultrasensitive electrochemical molecular beacon aptasensor. // J. Am. Chem. Soc. 2006. V. 128. P. 117-124.

120. Hianik Т., Ostatna V., Zajacova Z. The study of the binding of globular proteins to DNA using mass detection and electrochemical indicator methods. // J. Electroanal. Chem. 2004. V. 564. P. 19-24.

121. Centi S., Tombelli S., Minunni M., Mascini M. Aptamer-based detection of plasma proteins by an electrochemical assay coupled to magnetic beads. // Anal. Chem. 2007. V. 79. P. 1466-1473.

122. Cai H., Lee T.M-H., Hsing I-M. Label-free protein recognition using an aptamer-based impedance measurement assay. // Sens. Act. B. 2006. V. 114. P. 433-437.

123. Liss M., Petersen В., Wolf H., Prohaska E. Aptamer-based Assays. // Anal. Chem. 2008. V. 79. P. 1082-1088.

124. Balamurugan S., Obubuafo A., Soper S.A., McCarlery R.L., Spivak D.A. Designing highly specific biosensing surfaces using aptamer monolayers on gold. // Langmuir. 2006. V. 22. P. 6446-6453.

125. Liss M., Petersen В., Wolf H., Prohaska E. An aptamer-based quartz crystal protein biosensor. //Anal. Chem. 2002. V. 74. P. 4488-4495.

126. Ермолаева Т.Н., Калмыкова E.H. Пьезокварцевые иммуносенсоры. Аналитические возможности и перспективы. // Успехи химии. 2006. Т. 75. С. 445-459.

127. Фадеев А.Ю., Ельцов А.А., Алешин Ю.К., Малышенко С.И., Лисичкин Г.В. Жидкостной химически модифицированный кварцевый резонатор как иммупосенсор. //Ж. физ. хим. 1994. Т. 68. № 2. С. 2071-2075.

128. Калмыкова Е.Н., Ермолаева Т.Н., Еремин С.А. Разработка пьезокварцевых иммуносенсоров для проточно-инжекционного анализа высоко- и низкомолекулярных соединений. // Вестник Моск. ун-та, сер. хим. 2002. Т. 43. № 6. С. 399-403.

129. Kanazawa К.К., Gordon J.G. Frequency of a quartz microbalance in contact with liquid. //Anal. Chem. 1985. V. 57. P. 1770-1771.

130. Медянцева Э.П., Халдеева Б.В., Будников Г.К. Иммуносенсоры в биологии и медицине: аналитические возможности, проблемы и перспективы. // Журн. анал. химии. 2001. Т. 56. № 10. С. 1015-1031.

131. Schlecht U., Malave A., Gronewold Т., Tewes М., Lohndorf М. Comparison of antibody and aptamer receptors for the specific detection of thrombin with a nanometer gap-sized impedance biosensor. //Anal. Chim. Acta. 2006. V. 573-574. P. 65-68.

132. Hamaguchi N., Ellington A., Stanton M. Aptamer beacons for the direct detection of proteins. //Anal. Biochem. 2001. V. 294, Iss. 2, P. 126-131.

133. С .A. Kretz, A.R. Stafford, J.C. Fredenburgh, J.I. Weitz. HD1, a thrombin-directed aptamer, binds exosite 1 on prothrombin with high affinity and inhibits its activation by prothrombinase. Hi. Biol. Chem. 2006. V. 281, Iss. 49, P. 37477-37485.

134. Shlyakthenko L.S., Potaman V.N., Sinden R.R., Gall A.A., Lyubchenko Y.L. Structure and dynamics of three-way DNA junctions: atomic force microscopy studies. // Nucleic Acids Res. 2000. V. 28. P. 3472-3477.

135. Shlyakhtenko L.S., Gall A.A., Filonov A., Cerovac Z., Lushnikov A., Lyubchenko Y.L. Silatrane-based surface chemistry for immobilization of DNA, protein-DNA complexes and other biological materials. // Ultramicroscopy. 2003. V. 97. P. 279-287.

136. Riener C.K., Stroh C.M., Ebner A., Klampfl C., Gall A.A., Romanin C., Lyubchenko Y.L., Hinterdorfer P., Gruber H.J. Simple test system for single molecule recognition force microscopy. // Anal. Chim. Acta. 2003. V. 479. P. 59-75.

137. Досон P., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М.: Мир. 1991. 543 с.

138. Beaucage S.L. Strategies in the preparation of DNA oligonucleotide arrays for diagnostic applications. // Current Medicinal Chemistry. 2001. V. 8. P. 1213-1244.

139. Schessler H.M., Karpovich D.S., Blanchard G.J. Quantitating the balance between enthalpic and entropic forces in alkanethiol/gold monolayer self assembly. // Am. Chem. Soc. 1996. V. 118. Iss. 40. P. 9645-9651.

140. Peterlinz K.A., Georgiadis R. In situ kinetics of self-assembly by surface plasmon resonance spectroscopy. // Langmuir. 1996. V. 12. Iss. 20. P. 4731-4740.

141. Щукин Е.Д., Перцов А.В., Амелина E.A. Коллоидная химия. М.: Высшая школа. 2004. 446 с.

142. Yang G., Liu G. New insights for self-assembled monolayers of organothiols on Au(l 11) revealed by scanning tunneling microscopy. // J. Phys. Chem. B. 2003. V. 107. Iss. 34. P. 8746-8759.

143. Stein P.E., Leslie A.G.W., Finch J.T., Turnell W.G., Mclaughlin P.J., Carrell R.W. Crystal structure of ovalbumin as a model for the reactive centre of serpins. // Nature. 1990. V. 347. P. 99-102, (PDB lova).

144. Konno T. Amyloid-induced aggregation and precipitation amyloid fibril of soluble proteins: an electrostatic contribution of the Alzheimer's 13(25-35) amyloid fibril. // Biochemistry. 2001. V. 40. P. 2148-2154.

145. Stefani M. Protein misfolding and aggregation: new examples in medicine and biology of the dark side of the protein world. // Biochimica et Biophysica Acta. 2004. V. 1739. P. 5-25.

146. Lyubchenko Y.L., Kransnoslobodtsev A., Shlyakhtenko L.S., Ukraintsev E., Zaikova Т.О., Keana J.F. W. Nanomedicine and protein misfolding diseases. // Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. 2005. V. 1. P. 300-305.

147. Uversky V.N., Protein folding revisited. A polypeptide chain at the folding misfolding - nonfolding cross-roads: which way to go? // Cell. Mol. Life Sci. 2003. V. 60. P. 1852-1871.

148. Ohnishia S., Takanob K. Amyloid fibrils from the viewpoint of protein folding. // Cell. Mol. Life Sci. 2004. V. 61. P. 51 1-524.

149. Prusiner S.B. Prions. // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1998. V. 95. P. 1336313383.

150. Hamada D., Dobson C.M. A kinetic study of 13-lactoglobulin amyloid fibril formation promoted by urea. // Protein Science. 2002. V.l 1. P. 2417-2426.

151. Kuwajima K., Yamaya H., Sugai S. The burst-phase intermediate in the refolding of B-lactoglobulin studied by stopped-flow circular dichroism and absorption spectroscopy. //J. Mol. Biol. 1996. V. 264. P. 806-822.

152. Kato A., Takagi T. Formation of intermolecular beta-sheet structure during heat denaturation of ovalbumin. // J. Agric. Food Chem. 1988. V. 36. P. 1156-1159.

153. Tani F., Murata M., Higasa Т., Goto M., Kitabatake N., Doi E. Molten globule state of protein molecules in heat-induccd transparent food gels. // J. Agric. Food Chem. 1995. V. 43. P. 2325-2331.

154. McAllister C., Karymov M., Kawano Y., Lushnikov A.Y., Mikheikin A., Uversky V.N., Lyubchenko Y.L. Protein interactions and misfolding analyzed by AFM force spectroscopy. // J. Mol. Biol. 2005. V. 354. Iss. 5. P. 1028-1043.

155. Arnaudov L.N., de Vries R. Thermally induced fibrillar aggregation of hen egg white lysozyme. // Biophys J. 2005. V. 88. P. 515-526.

156. Czeslik C., Winter R. Effect of temperature on the conformation of lysozyme adsorbed to silica particles. // Phys. Chem. Chem. Phys. 2001. V. 3. P. 235-239.

157. Shiraki K., Kudou M., Nishikori S., Kitagawa H., Imanaka Т., Takagi M. Arginine ethylester prevents thermal inactivation and aggregation of lysozyme. // Eur. J. Biochem. 2004. V. 271. P. 3242-3247.

158. Lyubchenko Y.L., Shlyakhtenko L.S. Visualization of supercoiled DNA with atomic force microscopy in situ. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 496-501.

159. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинстика. Практический курс. М.: Гранд. 1999. С. 351-353.

160. Эггинс Б. Химические и биологические сенсоры. М.: Техносфера. 2005.355 с.

161. Evanoff D.D. Jr., Chumanov G. Synthesis and optical properties of silver nanoparticlcs and arrays. // ChemPhysChem. 2005. V. 6. P. 1221-1231.

162. Крутиков Ю.А., Кудринский A.A., Оленин АЛО., Лисичкин Г.В. Синтез и свойства наночастиц серебра: достижения и перспективы. // Успехи химии. 2008. Т. 77. № 3. С. 242-269.

163. Murugadoss A., Chattopadhyay A. A "green" chitosan-silver nanoparticle composite as a heterogeneous as well as micro-heterogeneous catalyst. // Nanotechnology. 2008. V. 19. P. 237-243.

164. Wu L., Shi C., Tian L., Zhu J. A one-pot method to prepare gold nanoparticle chains with chitosan. // J. Phys. Chem. Lett. 2008. V. 112. P. 319-323.

165. Wang В., Chen K., Jiang S., Reincke F., Tong W., Wang D., Gao C. Chitosan-mediated synthesis of gold nanoparticles on patterned poly(dimethylsiloxane) surfaces. // Biomacromolecules. 2006. V. 7. P. 1203-1209.

166. Huang H., Yang X. Synthesis of chitosan-stabilized gold nanoparticles in the absence/presence oftripolyphospate. //Biomacromolecules. 2004. V. 5. P. 2340-2346.

167. Guo R., Zhang L., Zhu Z., Jiang X. Direct facile approach to the fabrication of chitosan-gold hybrid nanospheres. // Langmuir. 2008. V. 24. P. 3459-3464.

168. Xing R., Liu S., Yu H., Guo Z., Wang S., Li C., Li Z., Li P. Salt-assisted acid hydrolysis of chitosan to oligomers under microwave irradiation. // Carbohydrate Research. 2005. V. 340. P. 2150-2153.