Флуоресцентный зонд 4-диметиламинохалкон: свойства и использование для обнаружения внутриклеточных липопротеинов в лейкоцитах крови тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Гуларян, Самвел Кимович

• Гуларян, Самвел Кимович
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гуларян, Самвел Кимович

ВВЕДЕНИЕ 6 ЧАСТЬ 1. Обзор литературы

1.1. История синтеза и первые исследования ДМХ

1.2. Влияние химической структуры молекулы халконов на электронные спектры поглощения

1.3. Влияние химической структуры молекулы на флуоресцентные свойства халконов

1.4. Структура молекулы ДМХ

1.5. Спектральные характеристики ДМХ

1.6. Квантовый выход флуоресценции ДМХ

1.7. ДМХ как люминесцентный индикатор

1.8. ДМХ как флуоресцентный зонд для исследования биологических объектов 1 б

1.9. Исследования структуры мембран с помощью флуоресцентных зондов

1.9.1. Модель гетерогенных мест связывания зонда в мембране

Кластерная модель" структуры мембран

1.9.2. "Релаксационная модель" структуры липидного бислоя

1.9.3. Модель "TWICT"

1.10. Локализация зондов в липидном бислое.

Физико-химическая структура мембаны

1.11. Флуоресцентный зонд ДМХ в исследованиях липопротеинов и клеток

1.12. Клеточный состав крови 26 1.12. Липидный состав клеток крови

1.14. Способность клеток крови к синтезу липидов

1.15. Внутриклеточные липидные частицы клеток крови

ЧАСТЬ 2. Результаты исследований

Глава 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Реактивы и среды

2.2. Приготовление липосом и лишщных шаров

2.3. Выделение липопротеинов

2.4. Выделение клеток

2.4.1. Лимфоциты из тимуса крыс

2.4.2. Лимфоциты из периферической крови человека

2.4.3. Гранулоциты из периферической крови человека

2.5. Субклеточное фракционирование

2.5.1. Сканирующая электронная микроскопия

2.5.2. Трансмиссионная электронная микроскопия

2.6. Аналитические методы

2.6.1. Определение белка

2.6.2. Определение нуклеиновых кислот

2.6.3. Определение фосфолипида

2.7. Флуоресцентные зонды

2.8. Флуоресцентные измерения

2.8.1. Флуоресцентная микроскопия

2.8.2. Регистрация стационарных спектров флуоресценции

2.8.3. Регистрация безызлучателыюго переноса энергии

2.8.4. Проточная цитофлуорометрия клеток

2.8.5. Регистрация кинетики затухания флуоресценции

2.9. Спектрофотометрические измерения

2.10. Измерение фосфоресценции

2.11. Фемтосекуидная абсорбционная спектрофотометрия

2.12. Измерение кондуктометрического объёма клеток

2.13. Квантовохимические расчеты

Глава 2. Создание экспериментальных установок для исследования клеток крови

2.2.1. Установка для разрушения цитоплазматической мембраны лейкоцитов

2.2.2. Проточный цитофлуориметр для исследования клеток мембранными флуоресцентными зондами

Глава 3. Исследование оптических свойств ЛМХ

3.1. Квантово-химические расчеты свойств молекулы ДМХ

3.1.1.Квантово-химические расчёты и кристаллографическое исследование конформации молекулы ДМХ в основном состоянии

3.1.2. Квантово-химические расчеты электронных переходов в молекуле ДМХ

3.1.3. Дипольный момент молекулы ДМХ в основном состоянии (jjg)

3.2. Оптические свойства зонда ДМХ в органических растворителях

3.2.1. Влияние растворителя на положение максимумов спектров поглощения и флуоресценции зонда ДМХ

3.2.2. Дипольный момент возбужденного состояния молекулы ДМХ (jie)

3.2.3. Квантовый выход флуоресценции ДМХ в органических растворителях

3.2.4. Влияние вязкости и дипольного момента молекулы растворителя на флуоресценцию ДМХ

3.2.5. Влияние полярности среды на динамику процессов релаксации в возбужденном состоянии. Фемтосекуидная спектроскопия

3.2.6. Фосфоресценция ДМХ в неполярной и полярной средах

3.2.7. Барьер перехода ДМХ из флуоресцирующего в нефлуоресцирующее состояние

3.2.8. Влияние температуры и полярности среды на спектр поглощения ДМХ

Глава 4. Использование ДМХ для исследования мицелляримх и ламмелярных липидпмх структур в лимфоцитах крови

4.1. Флуоресценция зонда ДМХ в модельных липидных мембранах (липосомах)

4.1.1. Спектры флуоресценции ДМХ в мебранах различного липидного состава

4.1.2. Определение параметров связывания ДМХ с липосомами

4.1.3. Коэффициенты молярной экстинкции и квантовый выход флуоресценции ДМХ в липосомах

4.2. Флуоресценция зонда ДМХ в субклеточных органеллах лимфоцитов

4.2.1. Субклеточное фракционирование

4.2.2. Разделение и биохимическая характеристика субклеточных фракций

4.2.3. Морфологическая характеристика выделенных фракций

4.2.4. Связь между интенсивностью флуоресценции ДМХ и биохимическим составом субклеточных фракций

4.3. Флуоресценция ДМХ в лейкоцитах периферической крови человека

4.3.1. Спектры флуоресценции ДМХ в лимфоцитах и гранулоцитах

4.3.2. Проточная цитофлуорометрия лейкоцитов, окрашенных зондом ДМХ

4.3.3. Флуоресценция зонда ДМХ в выделенных фракциях лимфоцитов и гранулоцитов

4.3.4. Разложение гистограмм клеток крови на составляющие. Сравнение результатов разложения с данными гематологического анализа мазков крови

4.3.5. Вклад эритроцитов и тромбоцитов в гистограмму распределения клеток крови по флуоресценции зонда ДМХ

4.3.6. Флуоресценция ДМХ в лейкоцитах крови здоровых доноров

4.4. Исследование пространственной структуры липида в лейкоцитах крови человека методом безызлучателыюго переноса энергии

4.4.1. Перенос энергии между молекулами флуоресцентных зондов

К-68 и ДСП-12 в лимфоцитах

4.4.2. Влияние трансмембранных полей лимфоцита на распределение зондов К-68 и ДСП-12 в клетке

4.4.3. Влияние зонда К-68 на катионаккумулирующую способность митохондрий лимфоцитов

4.4.4. Исследование пространственной струтуры липида в лейкоцитах по результатам переноса энергии между молекулами флуоресцентных зондов К-68, ДМХ и ДСП

4.5. Возможные причины различий флуоресценции ДМХ в лимфоцитах и гранулоцитах

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Флуоресцентный зонд 4-диметиламинохалкон: свойства и использование для обнаружения внутриклеточных липопротеинов в лейкоцитах крови»

Актуальность темы. Среди физических методов, применяемых для исследования структуры и свойств биомембран, липопротеинов и белков, важное место занимает метод флуоресцентных зондов. Его достоинством является техническая простота, высокая чувствительность, а также возможность изучения очень маленьких количеств (порядка 10'14 г) и объемов (порядка 10"13 см3) биологического объекта. Небольшие изменения в свойствах объекта могут сдвинуть спектр флуоресценции зонда на десятки нм и изменить интенсивность его флуоресценции в сотни раз. При этом из-за малого размера молекул и невысокой концентрации зонд вызывает минимальные нарушения натнвной структуры исследуемого объекта.

4-диметиламинохалкон (ДМХ) является одним из самых чувствительных зондов. Однако флуоресценция ДМХ (как и других зондов), указывая на происходящие изменения биологического объекта, тем не менее, очень часто не позволяла понять, что именно изменилось, какова физическая сущность перестроек окружения зонда в мембране или липопротеине. Вместе с тем в последние годы появились методы, позволяющие существенно продвинуться вперед в понимании этого вопроса. К ним относятся квантово-химические расчеты в сочетании с современной мощной компьютерной базой, а также методы наблюдения за возбужденными состояниями молекул в реальном масштабе времени с разрешением Ю"10 - 10"13 сек. Поэтому появилась возможность сделать ДМХ более ясным физическим инструментом исследования мембран и липопротеинов, тем самым, расширив диапазон его потенциальных применений в качестве зонда.

Поскольку в результате проведенной работы понимание оптических свойств ДМХ в липидах значительно возросло, была предпринята попытка использовать ДМХ для обнаружения внутриклеточных мицеллярных липидсодержащих структур непосредственно в живых клетках крови. Как известно, атеросклероз выражается в накоплении липопротеинов (мицеллярных форм липида) клетками стенки сосудов, однако было неясно, происходят ли подобные процессы накопления в белых клетках крови. Предполагалось, что ДМХ может быть использован для решения такой задачи.

Цель и задачи работы. Основная цель работы - изучить оптические свойства флуоресцентного зонда ДМХ и использовать его для выяснения структуры внутриклеточных белок-липидных комплексов в лейкоцитах крови человека. Исходя из этой цели, были сформулированы и решались следующие задачи:

1) исследовать оптические свойства молекулы ДМХ, привлекая для этого квантово-химические расчеты, разрешенную во времени флуоресцентную спектроскопию, фемтосекундные измерения спектров поглощения,

2) исследовать свойства ДМХ как флуоресцентного зонда для изучения липидов и белково-липидных комплексов,

3) изготовить установку для разрыва клеточной мембраны лейкоцитов с целью последующего выделения субклеточных фракций,

4) изготовить проточный цитофлуориметр для измерения флуоресценции единичных клеток,

6) исследовать структуру внутриклеточных белок-липидных комплексов лейкоцитов крови человека. ч

Научная новизна работы.

1. Впервые проведен квантово-химический расчет молекулы ДМХ и оценены возможности тепловых конформационных изменений молекулы. Результаты верифицированы кристаллографическим анализом.

2. Проведено подробное систематическое исследование оптических свойств ДМХ. Впервые получены данные о синглет-триплетных переходах в возбужденной молекуле ДМХ как причине тушения его флуоресценции в неполярных средах. Высказана гипотеза, объясняющая совокупность оптических свойств ДМХ: предполагается, что они определяются конформационной лабильностью молекулы; причём полярные среды стабилизируют плоскую конформацию молекулы (с которой связан высокий выход флуоресценции), тогда как в неполярных средах молекула не является плоской, испытывает вращения вокруг одинарных связей, что облегчает безызлучательные переходы и снижает выход флуоресценции в сотни раз.

3. С помощью проточного цитофлуорнметра, специально изготовленного для решения этой задачи, впервые удалось исследовать флуоресценцию ДМХ в единичных клетках крови: лейкоцитах, эритроцитах и тромбоцитах.

4. Использование специально сконструированного пресса, позволяющего проводить субклеточное фракционирование без химических агентов и нарушения целостности основных внутриклеточных органелл, показало, что флуоресценция ДМХ в лейкоцитах связана, прежде всего, с липидными компонентами клеточных органелл.

5. Данные, полученные с помощью этих двух установок, а также опыты по безызлучательному переносу энергии между зондами указывают на возможность существования в гранулоцитах крови человека липопротеиноподобных частиц. ДМХ использован для оценки их количества, размеров и липидного состава.

Практическое значение работы.

1. Изготовлена уникальная установка для разрушения плазматической мембраны лейкоцитов крови человека.

2. Изготовлен проточный цитофлуориметр, позвляющий исследовать липидные компоненты клеток крови с помощью зонда ДМХ.

3. Проделанная работа позволила:

- показать, что по флуоресцентным параметрам зонда ДМХ можно различить мицеллярные и ламеллярные липидные структуры,

- обнаружить и количественно оценить внутриклеточные липопротеиноподобные частицы в клетках крови,

- на основе безызлучателыюго переноса энергии разработать тест для определения внутриклеточных липопротеинов.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Гуларян, Самвел Кимович

ВЫВОДЫ

1. Проведены квантово-химические расчеты молекулы флуоресцентного зонда ДМХ (4-диметиламннохалкона). Они показали, в частности, что в молекуле ДМХ минимум потенциальной энергии соответствует плоской конформации, однако возможны вращения вокруг связей С-С на десятки градусов с порогом ниже кТ. Результаты квантово-химических расчетов подтверждены рентгеноструктурным анализом. В результате указанной свободы вращений популяция молекул ДМХ при температурах выше 293° К должна представлять собой смесь плоских и неплоских конформеров, существенно различающихся оптическими свойствами. Эти выводы подтверждены спектроскопическими данными.

2. Проведено исследование кинетики процессов в возбужденной молекуле ДМХ с временным разрешенем Ю"11 - 1(Г13 сек. Установлено, что помимо флуоресценции происходит безызлучательная дезактивация возбужденного состояния в результате внутренней конверсии (Si-»So) и перехода в триплетное состояние (Si—>Т). В неполярных средах ДМХ имеет очень низкий выход флуоресценции (менее 0,01) в результате

1 "у быстрого перехода (5'10" сек) в триплетное состояние. В полярных средах перехода в триплет не происходит, выход флуоресценции составляет 0,2-0,3, но не достигает единицы из-за конверсии Si—>So. Вероятно, полярные среды стабилизируют плоскую конформацию ДМХ, наиболее благоприятную для флуоресценции, тогда как в неполярных средах проявляется конформационная лабильность молекулы ДМХ, которая облегчает переходы в триплетное состояние. Показано, что протондонорные группы тушат флуоресценцию динамическим механизмом, скорее всего путем образования водородной связи с кетогруппой возбужденной молекулы ДМХ.

3. Для определения локализации ДМХ в клетках была изготовлена установка контролируемого разрыва лейкоцитов с целью получения субклеточных органелл. С ее помощью показано, что флуоресценция ДМХ из субклеточных органелл коррелирует (г =0,83) с содержанием фосфолипидов в этих органеллах и не корррелирует с белками или нуклеиновыми кислотами, то есть ДМХ является зондом на липидные структуры лейкоцитов.

4. Прижизненно измерена площадь поверхности раздела мембраны/вода в живом лимфоците периферической крови человека, которая равна 3550±250 мкм2. Для этого использован безызлучательный перенос энергии между флуоресцентными зондами К-68 и ДСП-12, локализующимися на границе раздела мембрана/вода. Доказано, что трансмембранные электрические поля живой клетки не мешают измерению площади поверхности таким методом.

5. Использование этого метода в сочетании с переносом энергии ДМХ-> ДСП-12 позволило обнаружить существование немембранных - мицеллярных - липидсодержащих частиц в гранулоцитах крови человека.

6. Для оценки распределения липидов между клетками крови был изготовлен проточный цитофлуориметр. Цитофлуорометрия клеток крови, окрашенных ДМХ, также указывает на присутствие немембранного липида в гранулоцитах.

7. Измерение безызлучателыюго переноса энергии ДМХ-»ДСП-12 в модельных смесях лейкоцитов и липопротеинов плазмы крови дает основание предполагать, что внутриклеточные мицеллярные липидные частицы по размеру значительно превосходят липопротеины низкой плотности плазмы крови (то есть имеют радиус значительно выше 10 нм). Количество содержащегося в них липида сравнительно мало - около 10 % от всего липида гранулоцита. Состав липидов этих частиц, оцененный по спектрам флуоресценции ДМХ, близок к составу липопротеинов очень низкой плотности плазмы.

Автор выражает благодарность:

- своему коллеге и другу Светличному Вадиму Юрьевичу, который внес решающий вклад в изготовление экспериментальных установок, принимал участие в экспериментах, их обработке и обсуждении результатов и без которого выполнение этой работы было бы невозможным,

- своему научному руководителю Добрсцову Геннадию Евгеньевичу, который является автором многих идей, лежащих в основе этой работы и который стал главной движущей силой в оформлении и публикации всех приведенных в работе результатов,

- а также всему коллективу лаборатории биофизических методов диагностики и сотрудникам НИИ физико-химической медицины, которые принимали непосредственное участие в экспериментах и обсуждении результатов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ДМХ - один из первых не только в нашей стране, но и в мире флуоресцентных зондов, использовавшихся для медико-биологических исследований. С помощью этого зонда за более чем 30-ти летний срок изучали структуру и свойства биологических мембран, белков, влияние лекарств, его использовали в криобиологических исследованиях. Чрезвычайно высокая чувствительность ДМХ к свойствам микроокружения позволила использовать его как индикатор структурных изменений в мембранах и липопротеинах.

Однако флуоресценция ДМХ (как и других зондов), указывая на происходящие изменения окружения, очень часто не позволяла понять, что именно изменилось, какова физическая сущность перестроек окружения зонда в мембране или липопротеине. В последние годы появились методы, позволяющие существенно продвинуться вперед в понимании этого вопроса. К ним относятся квантово-химические расчеты в сочетании с

127 современной мощной компьютерной базой, а также методы изучения возбужденных состояний молекул в реальном масштабе времени с разрешением Ю'10 - 10"13 сек. В нашей диссертационной работе эти современные методы были использованы для того чтобы лучше понять, как флуоресцентные параметры ДМХ связаны с физической структурой и динамикой микроокружения. В результате проведенных исследований зонд ДМХ как физический инструмент теперь является одним из наиболее изученных среди флуоресцентных зондов.

Поскольку в результате проведенной работы понимание поведения ДМХ в липидах значительно возросло, была предпринята попытка использовать ДМХ для исследования физических свойств внутриклеточных липидсодержащих структур непосредственно в живых клетках крови. Так удалось обнаружить в гранулоцитах внутриклеточные мицеллярные липидсодержащие частицы, а также оценить их размеры и липидный состав: судя по полученным данным, они являются некоторой аналогией липопротеинов очень низкой плотности плазмы крови человека. Они содержат лишь малую часть тотального липида клетки и, вероятно, поэтому не были в явной форме обнаружены ранее иными методами.

Для выполнения клеточных исследований были созданы две установки: пресс для разрушения лейкоцитов и проточный цитофлуориметр.

Совокупность полученных результатов значительно расширяет возможности дальнейшего использования ДМХ как биофизического инструмента.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гуларян, Самвел Кимович, 2005 год

1. Авад А.С., Зоров Д.Б., Ягужинский Л.С., 1989, Механизм стимуляции дыхания митохондрии катионами ряда родамина, Биологические мембраны, т. 6,226-230

2. Авад А.С., Зоров Д.Б., Лгужинский Л.С., 1989, Система эндогенного разобщения в митохондриях, индуцирование высокими концентрациями катионов ряда родамина, Биологические мембраны, т. 6,231-234

3. Айдыралиев Р.К., 1988, Флуоресцентное зондирование плазмы крови, Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. биол. наук

4. Ахмадов Я.Ю., 1999, Диэлектрические параметры чистых жидкостей: Справочник, М.: изд-во МАИ, 856 с.

5. Баглаев Т.Н. Атауллаханов Р.И., Добрецов Г.Е., Кочина И.С., 1983, Определение площади поверхности и вязкости мембран Т- и В-лимфоцитов с помощью флуоресцентных зондов, Биофизика, т. 28, 142-143

6. Бакеева Л.Е., Деревянченко И.Г., Коношенко Г.И., Мохова Е.Н., 1983, Взаимодействие dis -Сз-(5) и этилродамина с митохондриями лимфоцитов, Биохимия, т. 48, 1463-1470

7. Бахшиев Н.Г., 1961, Универсальные межмолекулярные взаимодействия и их влияние на положение электронных спектров молекул в двухкомпонентных растворах. Оптика и спектроскопия, т. 10, № 6, 716-726

8. Бахшиев Н.Г., И.В. Питерская И.В., 1965, Универсальные межмолекулярные взаимодействия и их влияние на положение электронных спектров молекул в двухкомпонентных растворах. Часть 10, Оптика и спектроскопия, т. 19, 698-708

9. Бахшиев Н.Г., Питерская И.В., 1965, Универсальные межмолекулярные взаимодействия и их влияние на положение электронных спектров молекул в двухкомпонентных растворах. Часть 12, Оптика и спектроскопия, т. 20, 782-792

10. Бахшиев Н.Г., 1987, в кн. Введение в молекулярную спектроскопию. Л.: Изд-во Ленингр. Ун-та, 216 с.

11. Бахшиев Н.Г., 2001, Полуэмпирический расчет абсолютного сольватационного смещения электронных и колебательных спектров молекул при фазовом переходе газ-раствор, Оптика и Спектроскопия, т. 91, 721-727

12. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., 19S0, в кн. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран, М., Наука, 320 с.

13. Воробьев А.И., 1985, в кн: Руководи со по гематологии, М., Медицина, 448 с.

14. Гуларян С.К., Светличный В.Ю., Доирецов Г.Е., 1991, Проточный цитофлуориметр для исследования клеток флуоресцентными зондами, Биофизика, т. , с.377. Статья полностью депонирована в ВИНИТИ за № 6464-В90.Г

15. Гуларян С.К., Добрецов Г.Е., Светличный В.Ю., Курек Н.К., Косииков B.Q., Лихачёва Л.М., 1991, Измерение площади поверхности мембран лимфоцитов методом безызлучательного переноса энергии, Биологические мембраны, т. 8, 1304-1313

16. Гуларян С.К., Светличный В.Ю., Добрецов Г.Е., Григорьев В.Б., Гусев С.А., 1993, Установка для разрушения цитоплазматической мембраны лимфоцитов и характер образующихся субклеточных фракций, Биологические мембраны, т. 10, 420-430

17. Гуларян С.К., Добрецов Г.Е., Курек Н.К., Светличный В.Ю., 1996, Исследование пространственной структуры липида в лейкоцитах крови человека методом безызлучательного переноса энергии, Биологические мембраны, т. 13,588-597

18. Гуларян С.К., Светличный В.Ю., Танцев С.Н., Казаринов К.Д., 1996, Изучение клеток крови по флуоресценции зонда ДМХ. Исследование в проточном цтофлуориметре, Препринт № 3(614), Института радиотехники и электроники РАН, 30 с.

19. Гуларян С.К., Светличный В.Ю., Добрецов Г.Е., 1997, Различие между клетками крови по флуоресценции липофильного зонда 4-диметиламинохалкона. Исследование в проточном цитофлуориметре, Биологические мембраны, т. 14, 324-331

20. Гуларян С.К., Добрецов Г.Е., Светличный В.Ю., 2003, Флуоресцентный зонд 4-диметиламинохалкон: механизм тушения флуоресценции в неполярных средах, Биофизика, т. 48, 873-879

21. Добрецов Г.Е., 1975, Исследование структуры белков методом флуоресцентных зондов, в кн.: Итоги науки и техники. Биофизика. М.: ВИНИТИ, т.6, 34-104

22. Добрецов Г.Е., Петров В.А., Деев А.И., Владимиров Ю.А., 1975, Распределение малых гидрофобных молекул в мембране. I. Искусственные липидные мембраны, Биофизика, т. 20, в. 6, 1014-1018

23. Добрецов Г.Е, Петров В.А., Владимиров Ю.А., 1978, Подвижность молекул воды в поверхностном слое мембраны, регистрируемая флуоресцентным зондом 4-диметиламинохалконом, Биофизика, т.23, в. 4, 629-632

24. Добрецов Г.Е., 1979, Флуоресцентные зонды: оптические свойства и взаимодействие с мембранами, в кн.: Итоги науки и техники. Биофизика. М.: ВИНИТИ, т.11, 101-189

25. Добрецов Г.Е., Спирин М.М, Чекрыгин О.В., Владимиров Ю.А., 1981, Флуоресцентные зонды производные жирных кислот. Глубина погружения хромофора в лнпидный бислой. Биоорганическая химия, т. 7, 606-612

26. Добрецов Г.Е., Спирин М.М., Кузнецов А.С., Попов А.В., 1983, Пространственная организация липопротеидов низкой плошости аорты человека (Изучение с помощью флуоресцентных зондов), Бюллетень Экспериментальной биологии и медицины, т. 10, 4547

27. Добрецов Г.Е., Баглаев Т.Н., Пефоь В.А., Киликовский В.В., Владимиров Ю.А., Косенкова С.Т., 1983, Флуоресценция лейкоцитов, окрашенных мембранным зондом, при злокачественных заболеваниях крови, Иммунология, № 2, 50-53

28. Добрецов Г.Е., 1984, Исследование пространственной структуры мембран и липопротеинов флуоресцентными ооидами. Украинский биохимический журнал, т. 56, 211-222

29. Добрецов Г.Е., Морозова Г.И., Баренбойм Г.М., 1985, Свободная энергия аккумуляции флуоресцентного зонда-катиона внутри митохондрий в лимфоците, Биофизика, т. 30, вып. 5,833-836

30. Добрецов Г.Е., 1989, Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов, М.: Наука, 277 с.

31. Добрецов Г.Е., 1996, Метод определения концентрации флуоресцентного зонда, связанного с биологическими объектами, Биофизика, т.41, вып.5, 1062-1067

32. Ельяшевич М.А., 2001, в кн. Атомная и молекулярная спектроскопия, М.: Эдиториал УРСС, 896 с.

33. Ивков В.Г., Берестовский Г.Н., 1981, в кн. Динамическая структура липидного бислоя, М., Наука, 293 с.

34. Красовицкий Б.М., Болотин Б.М., в кн. Органические люминофоры, М.: Химия, 1984, 334 с.

35. Курек Н.К., Лапшин Е.Н., Иоффе Д.В., Миссюль Б.В., 1988, Исследование локализации флуоресцентных аналогов холестерина и его эфиров в липидных моделях мембран и липопротеинов, Украинский биохимический журнал, т. 60, 67-74

36. Курек Н.К., Лапшин Е.Н., Добрецов Г.Е., Тур И.Н., Афанасиади Л.Ш., 1989,4-5-(фенилоксазолил-2)-1-пентадецил. пиридиний флуоресцентный зонд для определения площади поверхности мембран и липопротеинов, Биологические мембраны, т. 6, № 7, 725732

37. Курек Н.К., 1991, Определение локализации флуоресцентных зондов в липидных объектах, Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. биол. наук

38. Лапшин Е.Н., 1984, Измерение геометрических параметров липидной фазы мембран и липопротеинов флуоресцентными зондами, Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. биол. наук

39. Лапшин Е.Н, Добрецов Г.Е., Красовицкий Б.М., Рухтин А.Н., Скрипкина В.Т., Курек Н.К., 1992, Флуоресцентный способ определения атерогенных липопротеинов, Клиническая лабораторная диагносшка, т. 56,40-43

40. Лебедева Н.Б., Зубрихина Г.П., Френкель М.А., Соловьева Е.А., 1985, Возможности применения автоматического анализа юра крови "Гематолог D" для дифференциальной диагностики гемобластозов, Гематология и трансфузиология, т. 30, 50-54

41. Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А., Коган Э.М., 1983, в кн.: Холестериноз, М.: Медицина, 352 с.

42. Минкин В.И., Симкин Б.Я., Минаев P.M., 1997, в кн. Теория строения молекул. Изд. «Феникс», Р.-н-Д, 558 с.

43. Новгородов С.А., Гудзб Т.И., Мор Ю.Е., 1989, Трансмембранный потенциал регулирует неспецифическую проницаемость внутренней митохондриальной мембраны, Биологические мембраны, т. 6., 1053-1062

44. Непорент Б.С., Бахшиев Н.Г., 1960, О роли универсальных и специфических межмолекулярных взаимодействий во влиянии растворителя на электронные спектры молекул, Оптика и спектроскопия, г. ;■;. u.in. 6, 775-786

45. Никитина А.Н.,Федюнина Г.М. Умирзаков Б., Яновская Л.А., Кучеров В.Ф., 1973, Исследование некоторых свойств замещенных халконов и их винилогов в электронно-возбужденном состоянии, Оптика и спектроскопия, т. 34, вып. 2,289-293

46. Панов В.А., Андреев Л.Н., 1976, в кн. Оптика микроскопов. Ремонт и проектирование, Л.: Машиностроение, 430 с.

47. Петрухии А.Н., Антипин С.А., Гостев Ф.Е., Маревцев B.C., Титов А.А., Товбин Д.Г., Барачевский В.А., Строкач Ю.П., Саркисов О.М., 2000, Химическая физика, т. 19, 90

48. Питерская И.В., Бахшиев Н.Г., 1963, Количественное исследование зависимости спектров поглощения и флуоресценции сложных молекул в растворах от температуры, Известия Академии Наук СССР, Серия физическая, т.27, 623-627

49. Сороковой В.И., Добрецов Г.Е, Петров В.А., Никитина А.Н., Владимиров Ю.А., 1972, Диметиламинохалкон как люминесцентный краситель, чувствительный к конформационным изменениям в белке, Доклады Академии наук СССР, т. 206, N 2, 500502

50. Спирин М.М., 1982, Флуоресцентные тесты для исследования пространственной структуры, проницаемости и поверхностного заряда биологических мембран, Автореферат дисс. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук, Москва

51. Сухоруков А.А., Задорожный Б.А., Лаврушин В.Ф., 1970, К вопросу о природе полос электронного спектра поглощения транс-халкона, Теоретическая и экспериментальная химия, т.6, вып. 5, 602-607

52. Фихман Б.А., 1967, в кн: Микробиологическая рефрактометрия, М., Медицина, 280 с.

53. Фримель X., 1979, в кн. Иммунологические методы, М.: Мир, 518 с. < 58. Фрейнфилд Е.Н., 1947, в кн. Гематология, Москва, 377 с.

54. Цукерман С.В., Масленникова В.П., Лаврушин В.Ф., 1967, Строение и люминесценция а,р-ненасыщенных кетонов, производных диметиланилина, Оптика и спектроскопия, т.23, в.3,396-402

55. Чучалин А.Г., Новиков Ю.К., Татарский А.Р., Шуркалин Б.К., Евсеев Н.Г., Добрецов Г.Е., 1983, Состояние клеточных мембран лимфоцитов у больных бронхиальной астмой, Иммунология, т. 4, 84-87

56. Alen J.D., Gudaitis A.V., 1960, Diluting fluid for electronic counting of leukocytes and hemoglobin determinations, J. Clin. Path., v. 33, 553-556

57. Allan D., Crumpton M.J., 1970, Preparation and characterization of plasma membrane of pig lymphocytes, The Biochemical Journal, v. 120,133-143

58. Ashcroft R.G., Coster H.G.L., Laver D.R., Smith J.R., 1983, The effects of cholesterol inclusion on the molecular organization of bimolecular lipid membranes, Biochimica et Biophysica Acta, v. 730,231-238

59. Badea M.G., DeToma R.P., Brand L., 1978, Nanosecond relaxation processes in liposomes, Biophys. J., v.1001, 197-212

60. Baiter A., Nowak W., Pavvelkiewicz W., Kowalczyk A., 1988, Some remarks on the interpretation of the spectral properties of PRODAN, Chemical Physics Letters, v. 143, 565-570

61. Barltrop J.A., Coyle J.D., 1975, in: "Exited States in Organic Chemistry", J.Wiley and sons, N-Y. 446 pp.

62. Bartes P.H., 1979, Numerical Evaluation of Cytologic Data. I. Description of profiles, Analytical and Quantitative Cytology, v. 1,20-28

63. Bartes P.H., 1979, Numerical Evaluation of Cytologic Data. II. Comparison of profiles, I Analytical and Quantitative Cytology, v. 1, 77-83

64. Bartes P.H., 1979, Numerical Evaluation of Cytologic Data. III. Selection of Features for Discrimination, Analytical and Quantitative Cytology, v. 1, 153-159

65. Bessis J., 1961, "The cell and their formation", in: The Cell Biochemistiy, Physiology, Morfology,N-Y- London, 1961, v. 5, 163-217

66. Bilot L., Kawski A., 1962, Z. Naturforsch., Teil A, v. 17, 621

67. Black W.B., Lutz R.E., 1954, Ultraviolet absorption spectra of chalcones. Identification of chromophores, J. Am. Chem. Soc., v. 77, p. 5134-5140

68. Blatt E., Sawyer W.H., 1985, Deth-dependent fluorescent quenching in micelles and membranes, Biochemica et Biophysica Acta, v. 822,43-62

69. Blatt E., Ghiggino K.P., Sawyer W.H., 1981, J. Chem. Soc. Faraday Trans. 1, v. 77, 25512558

70. Bligh E.G., Dyer W.J., 1959, A rapid method of total lipid extraction and purification, Canadian Journal of Biochemistry and Physiology, v. 37, 911-917

71. Blomstrand R., 1966, Fatty acid synthesis in human lymphocytes, Acta Chemica Scandinavica, v. 20, 1122-1128

72. Bloom B.R., Glade P.R., 1971, In vitro methods in cell-mediated immunity, N-Y., 242-243

73. Borenstain V., Barenholz Y., 1993, Characterization of liposomes and other lipid assemblies by multiprobe fluorescence polarization, Chemistry and physics of lipids, v. 64, 117-127

74. Burns C.P., Welshman I.R., Spector A.A., 1976, Differences in free fatty acid and glucose metabolism of human blood neutrophils and lymphocytes, Blood, v. 47,431-437

75. Coulter W.H., 1956, High speed automatic blood cell counter and cell size analyzer, Proc. Nat. Electron. Conf., v. 12, p.1034-1038

76. D'Angelo G., LaCombe M., 1961, A practical diluent for electronic white cell counts, Am. J. Clin. Path., v.34,220-223

77. DeToma R.P., Easter J.H., Brand L., 1976, Dynamic interactions of fluorescence probes with the solvent enviroment, Journal of the American Chemical Society, v. 98, 5001-5007

78. DeVoe R.J., Sahyun M.R.V., Schmidt E., Sadrai M., Serpone N., Sharma D.K.,1989, Canad.J.Chem., v.67,1565-1575

79. DiCesare N., Lakovvicz J.R., 2002, Chalcone-analogue fluorescent probes for saccharides signaling using the boronic acid group, Tetrahedron Letters, v. 43, 2615-2618

80. Dobretsov G.E., Petrov V.A., Mishijev V.E., Klebanov G.I., Vladimirov Yu.A., 1977,4-dimethylaminochalcone and 3-methoxybenzantrone as fluorescent probes to study biomembranes. I. Spectral characteristics, Studia Biophysica, B. 65, H.2, S. 91-98

81. Dobretsov G.E., Kurek N.K., Machov V.N., Syrejshchikova T.I., Yakimenko M.N., 1989, Determination of fluorescent probes localization in membranes by nonradiative energy transfer, Journal of Biochemica. and Biophysical Methods, v. 19,259-274

82. Dobretsov G.E., 1995, A method for determination of fluorescent probe-binding site interaction parameters, Physical Chemical Biology and Medicine, v.2, No. 3,143-149

83. Dobrowski J., Kirkor-kaminska E., Koput J., Siemiarczuk A., 1982, Excited and ground state conformations of p-dimcthylamino-benzaldehyde and p-dimethylaminoacetophenone, Journal of Luminescence, v. 27,339-335

84. Dubur G.Y., Dobrctsov G.E., Deme A.K., Dubure R.R., Lapshin E.N., Spirin M.M., 1984, Fluorescent probes based on styrylpyridinium derivatives: optical properties and membrane binding, J. Biochem. Biophys. Methods., v. 10, 123-134

85. Easter J.H., Brand L., 1973, Nanosecond time-resolved emission spectroscopy of a fluorescence probe bound to L-a-egg lecithin vesicles, Biochemical and Biophysical Research Communications, v. 52,1086-1092

86. Easter J.H., DeTomaR.P., Brand L., 1976, Biophysical Journal, v. 16, 571-583

87. Easter J.H., DeToma R.P., Brand L., 1978, Fluorescence measurements of enviromental relaxation at the lipid-water interface region of bilayer membranes, Biochimica et Biophysica acta, v. 508, 27-38

88. Eisert W.G., Ostertag R., Niemann E.G., 1975, Simple flow microphotometer for rapid cell population analisis, Rev. Sci. Instrum., v. 46, 1021-1024

89. Elsbach P., 1959, Composition and synthesis of lipids in resting and phagocytizing leukocytes, J. Exp. Med., v. 110, 969-980

90. Evans W.H., 1978, Preparation and characterization of mammalian plasma membranes, Elsevier, North-Holland publishing Сотр.; Amstrd., N-Y., Oxford, 287 pp.

91. Fallon H.J., 1962, Leukocyte preparations from human blood: evalution of their morphologic and metabolic state, J. Lab. Clin. Med., v. 59, 779-791

92. Ferber E., Resch K., Wallach D.F.H., Imm W., 1972, Isolation and characterization of lymphocytes plasma, Biochimia et Biophysica Acta, v. 266,494-504

93. Fernandes M.S., Fromherz P., 1977, J. Phys. Chem, v. 81, 1755-1761

94. Fogelman A.M., Seager J., Edwards P.A., Hokom M., Popjak G., 1977, Cholesterol biosynthesis in human liphocytes, monocytes, and granulocytes, Biochemical and Biophysical Research Communication, v.76,167-173

95. Giardini J.R., 1972, Compozizione lipidica delle piastrini nel bambini e nell'adulto normale, Haematologica, v. 57,97-106

96. Gibson E.M., Jones A.C., Phillips D., 1987, 4-N,N-dimethylaminobenzonitrile: the absence of a fluorescence under jet-cooled conditions, Chemical Physics Letters, v. 136,454-459

97. Gostev F.E., Kachanov A.A., and Kovalenko S.A., 1996, Instrum. Experim. Techn., 39, 567

98. Gottfried E.L., 1967, Lipids of human leukocytes: relation to cell type, J. Lipid Research,v. 8,321-327

99. Gottfried E.L., 1968, Hereditary nonspherocytic hemolytic disease associated with altered phospholipids composition of the erythrocytes, J. Clin Invest., v. 47,1375-1378

100. Gottfried E.L., 1971, Lipid patterns in human leukocytes maintained in long-term culture, J. Lipid Research, v.12, 531-537

101. Gottfried E.L., 1972, Lipid patterns of leukocyres in health and disease, Seminars Hematol., v.9, 241-250

102. Grabowski Z.R., Rotkiewicz K., Siemiarczuk A., 1979, Dual fluorescence of donor-acceptor molecules and the twisted intramolecular charge transfer (TICT) states, Journal of Luminescence, v.18,420-424

103. Gratzel M.K., Kalyanasundaram K., Thomas J.K., 1974, J. Am. Chem. Soc. v. 95, 78697874

104. Grosland-Taylor P.J., 1953, A device for counting small particles suspended in water, Nature, v. 171,37-38

105. Harris J.R., 1985, The isolation of nuclear envelope from peripheral lymphocytes: an ultrastructural study, Micron and Microscopica acta, v. 16, 89-108

106. Hayhoe F.G.J., Quaglino D., 1980, in: Haematological Cytochemistry, Churchill Ling., Edinbrgh, London, N-Y, 66-90

107. Heytler P.G., Prichard WAV., 1962, A new class of uncoupling agents-carbonyl cyanide phenyl hydrazones, Biochemical and Biophysicai Research Communication, v. 7,272-275

108. Hui W., Minghua M., Hongzhi X., Yu F., Xiaohong Z., Shikang W., 2003, A study on the fluorescence quenching of modified p-cyclodextrin by transition metal ions in different solvents, ARKIVOC, ii, 173-181

109. Igal R.A., Coleman R.A., 1998, Neutral lipid storage disease: a genetic disorder with abnormalities in the regulatuion of phospholipids metabolism, Journal of Lipid Research, v. 39, 31-43

110. Ilich P., Prendergast F.G., 1989, Singlet adiabatic states of solvated PRODAN: A semiempirical molecular orbital study, J. Phys. Chem., v. 93,4441-4447

111. Jett M., Seed T.M., Jamieson G.A., 1977, J. Biol. Chem., v. 252, 2134-2142

112. Johns S.R., Willing R.I., Thulborn K.R., Sawyer W.H., 1979, Chem. Phys. Lipids, v. 24, 11-16

113. Johnson S.M., Robinson R., 1979, The composition and fluidity of normal and leukaemic or V lymphomatous lymphocyte plasma membranes in mouse and man, Biochimica et Biophysica1. Acta, v. 558,282-295

114. Kaever V., Szamel M., Goppel M., Resch K., 1984, Characterization and subcellular localization of nucleotide cyclases in calf thymus lymphocytes, Biochimia et Biophysica Acta, v. 776, 133-143

115. Katzenellenbogen E.R., Branch G.K., 1947, The spectra of the p-dimethylaminochalcones and of their ions, J. Am., Chem., Soc. V. 69, p.1615-1619

116. Kawski A., 1977, Thermochromic shifts of electronic spectra and excited state dipole moments, Asian J. Spectrosc. v.l, 27-38

117. Korkina L.G., Dobretsov G.E., Zimin Yu.I., Walzer G., Kogan E.M., Vladimirov Yu.A., 1982, Journal of Immunological Methods, v. 49, 179-183

118. Kosower E.M., Dodiuk H., 1976, Intramolecular donor-acceptor systems, J. Am. Chem. Soc., v. 98, p.924

119. Kuroki M., Kamo N., Kobatake Y., Okimasu E., Utsumi K., 1982, Measurement of membrane potential in polymorphonuclear leucocytes and its changes during surface stimulation, Biochimia et Biophysica Acta, v. 693(2), 326- 334

120. LaFemina J.P., Duke C.B., Paton A., 1987, Electronic structure and twisted intramolecularcharge transfer in dimethylanilines, J. Chem. Phys., v. 87, 2151-2157

121. Lapicola J.D., Edmondson S.M. Jr., 1988, Method for the volumetric differentiation of blood cells types, United States Patent, 4,745,071

122. Lakowicz J., Hogen D., 1981, Dynamic properties of the lipid-vvater interface of model membranes as revealed by lifetime-resolved fluorescence emission spectra, Biochemistry, v. 20, 1366-1373

123. Lakowicz J.R., Cherek H., Laczo G., Gratton E., 1984, Time-resolved fluorescence emission spectra of labeled phospholipid vesicles, as observed using multi-frequency phase-modulation fluorometry, Biochimica et Biophysica acta, v. 777, 183-193

124. Lakowicz J.R., 1999, in: Principles of fluorescence spectroscopy, N.-Y., Kluwer Publ., 698 pp.

125. Leb L., Crusberg Т., Fortier N., Snyder L.M., 1983, Evaluation of methods using adherence to substrate and density gradient for the isolation of human monocytes, Journal of Immunological Methods, v. 58, 309-321

126. Lee W.M.F., Klock J.C., Macher B.A., 1981, Isolation and structural characterization of human lymphocyte neutral glycosphingolipids, Biochemistry, v. 20, 3810-3814

127. Lentz В., Barenholz Y., Thompson Т.Е., 1976, Biochemistry, v. 15,4521-4528

128. Lelkes P.L., Miller I.R., 1980, Perturbation of membrane Structure by optical probes: I. Location and structural sensitivity of merocyanine 540 bound to phospholipids membranes, The Journal ofMembrane Biology, v. 52, 1-15

129. Lesslauer W., Cain J.E., Blaise J.K., 1972, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 69, 1499-1503

130. Lillie R.D., BurtnerH.J., 1953, Stable sudanophilia of human neutrophil leucocytes in relation to peroxidase and oxidase, J. Histochem. Cytochem., v. 1,8-12

131. Lison L., 1934, Sur de nouveaux colorants histologiques specifiques des lipids, C.R. Soc. Biol., v. 115,202-204

132. Von Lippert E., 1957, Spektroskopische bistimmung des dipolmoments aromatischer verbindungen im ersten angeregten singulet-tzustand, Z. Electrochem., v. 61, 962-975

133. Livesey A.K., Brochon J.C., 1987, Analyzing the distribution of decay constants in puls-fluorimetry using maximum entropy method, Biophys.J., v. 52, 693-706

134. Loos J.A., Roos D., 1974, Ficoll-isopaque gradients for the determination of density distributions of human blood lymphocytes and other reticulo-endothelian cells, Experimental Cell Research, v. 86,333-341

135. Lovett E.J., Schnitzer В., Keren D.F., Flint A., Hudson J.L., McClatchey K.D., 1984, Application of flow cytometry to diagnostic pathology, Laboratory Investigation, v. 50,115-140

136. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J., 1951, Protein measurement with the Folin phenol reagent, v. 193,265-275

137. Luisetti J., Mohwald H., Galla H., 1979, Biochemica et Biophysica Acta, v. 522, 519-530

138. Lutz R.E., Jordan R.H., 1950, J. Am. Chem. Soc., v. 72, p. 4090, p.5058

139. Macgregor R.B., Weber G., 1981, Fluorophores in polar media. Spectral effects of Langevin distribution of electrostatic interaction, Proc. N.Y. Acad. Sci., v. 366, 140-154

140. Macher B.A., Klock J.C., 1980, Isolation and Chemical Characterization of Neutral Glycosphingolipids of Human Neutrophils, The Journal of Biological Chemistry, v. 255,20922096

141. Marks P.A., Gellhorn A., Kidson C., 1960, Lipid synthesis in human leukocytes, platelets and erythrocytes, The Journal of Biological Chemistry, v. 9,2579-2583

142. Mataga N., Kaifu Y., Kouizumi M., 1956, Solvent effects upon fluorescence spectra and the dipole moments of excited molecules, Bull. Chem. Sjc. Jpn., v/ 29,465-470

143. Matayoshi E.D., Kleinfeld A.M., 1981, J. Biophysics, v. 35, 215-235

144. Miras C.J., Legakis N.J., Levis G.M., 1967, Conversion of glucose to lipids by normal and leukemic leukocytes, Cancer Research, v. 27, part 1,2153-2158

145. Mokhova E.N., Rozovskay I.A., 1986, The effects of mitochondrial energetics inhibitor on the fluorescence of potential-sensitive dyes rhodamine 123 and DiS-C3-(5) in lymphocyte suspensions, Journal of Bioenergetics and Biomembranes, v. 18,265-276

146. Murafuji Т., Sugihara Y., Moriya Т., Mikata Y., Yano S., 1999, Structure and spectroscopic characteristics of 2'-diethylboryl-4"-dimethylaminochalcone bearing an intramolecular boron-oxygen coordinate bond, New J. Chem., v.23, 683-685

147. Novak W., Adamczak P., Baiter A., 1986, On the possibility of fluorescence from twisted intramolecular charge transfer states of 2-dimethylamino-6-acylnaphthalenes. A quantum-chemical study, Journal of Molecular Structure (Theochem), v. 139,13-23

148. O'Donnell R.T., Andersen B.R., 1985, Canine neutrophil plasma membrane markers, Biochimia et Biophysica Acta, v. 814,307-312

149. Parasassi Т., Conti F., Gratton E., 1986, Time-resolved fluorescence emission spectra of laurdan in phospholipid vesicles by multifrequency phase and modulation fluorometry, Cellular

150. V and Molecular Biology, v. 32,103-108

151. Parusel A.B.J., Schneider F.W., Kohler G., 1997, An ab initio study on excited and ground state properties of the organic fluorescence probe PROD AN, Journal of Molecular Structure (Theochem), v. 398, 341-346

152. Perugini S., 1954, Sul significato delPaffinita dei granuli neutrofili dei leucociti per I coloranti tipo Sudan, Experientia, v. 10, 381-385

153. Peters D.L., Dahmus M.E., 1979, A method of DNA quantitation for localization of DNA in metrizamide gradients, Analytical Biochemistry, v. 93, 306-311

154. Podo F., Blasie J.K., 1977, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 74, 1032-1036

155. Pratt H.P.M., Saxon A., Graham M., 1978, Membrane lipid changes associated with malignant transformation and normal maturation of human lymphocytes, Leukemia Research, v. 2,1-10

156. Rettig \V., Maus M., 2000, Conformational analysis of molecules in excited states. Ed. J.Waluk. Wiley-VCH: New York, 1-55

157. Roos D., Loos J.A., 1970, Changes in carbohydrate metabolism of mitogenically stimulated human peripheral lymphocytes, Biochimica et Biophysica acta, v. 222, 565-582

158. Rosenzweig A., Ways P., 1966, The oxidation of long-chain fatty acids by the formed elements of human blood, Blood, v. 27, 57-64

159. Rowan J.R.M., 1983, Blood cell volume analysis a new screening technology for \ haemotologist, Albert Clark and Company ltd., London. P.97

160. Shechan H.L., 1939, The staining ofleucocyte granules with Sudan black, B.J. Path. Bact., v. 49, 580-586

161. Shiuan D., Tu S.I., 1978, Fluorescent labeling of mitoplast membrane. Effect of oxidative phosphorylation uncouplers, Biochemistry, v. 17, 2249-2252.

162. Simmons A., Leaverton P., Elbert G., 1974, Normal laboratory values for differential white cell counts established by manual and automated cytochemical methods (HEMATOLOG D™), Journal of Clinical Pathology, v. 27, 55-58

163. Sklar L.A., Hudson B.S., Petersen M., Diamond J., 1977, Conjugated polyene fatty acids on fluorescent probes: Spectroscopic characterization, Biochemistry, v. 16, 813-828

164. Sklar L.A., Craig G.F., Pownall H.J., 1981,Induced circular dichroism of incorporated fluorescent cholesteryl esters and polar lipids as a probe of human serum LDL structure and melting, J. Biol. Chem., v. 256, 4286-4292

165. Slama-Schwok A., Blanchard-Dence M., Lehn J.-M.,1990, J.Phys.Chem., v. 94, 3894-3902

166. Steck T.L., 1972, in: Membrane molecular biology, cd. by Fox C.F., Keith A.D.: Sinaver Ass. inc. pub., Stamford, 76-113

167. Steen H.B., Lindmo Т., 1979, Flow cytometry: a high-resolution instrument for everyone, Science, v. 204,403

168. Steen H.B., 1980, Further developments of a microscope-based flow cytometer: light scatter detection and excitation intensity compensation, Cytometry, v. 1, 26-31

169. Steen H.B. Lindmo Т., Sarensen O., 1981, A simple, high resolution flow cytometer based on a standard fluorescent microscope, Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica, sec.A, supp. 274, Flow Cytometry IV, 31-33

170. Steen H.B., 1983, A microscope-based flow cytophotometer, The Histochemical Journal, v. 15, 147-160

171. Stein K.E., Marcus D.M., 1977, Glycosphingolipids of purified human lymphocytes, Biochemistry, v. 16, 5285-5291

172. Strickler S.J., Berg R.A., 1962, Relationship between absorption intensity and fluorescence lifetime of molecules, J. Chem. Phys., v.37 (2), p.814-822

173. Szmant H.H., Basso A.J., 1952, The absorption of substituted chalcones, J. Am. Chem. Soc.,v.74, p. 4397-4399

174. Tilley L., Thulborn K.R., Sawyer W.H., 1979, J. Biol. Chem., v. 254,2592-2594

175. Thomas J.F., Brannch G., 1953, The principal electronic absorption bands of the vinylogous series derived from benzylaldehyde and benzophenone, J. Am. Chem. Soc., v. 75, p. 4793- 4802

176. Van Der Meer M.J., Zhang H., Rettig W., Glasbeek M., 2000, Femtosecond fluorescence upconversion studies of barrierless bond twisting of auramine in solution, J. of Chemical Physics., v. 112, 2878-2887

177. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin I.M., 1975, A universal reagent for phospholipids analysis, J. Chromatogr., v. 114,129-141

178. Waggoner A.S., Stryer L., 1970, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 67, 579-589

179. Wang P., Du W., Wu S., 1992, A study on the spectra and photophysical behaviors of bis p-N,N-dimethylaminobenzylidene. ketone compounds, Acta Chemica Sinica, v. 50,1140-1144

180. Wang P., Wu S., 1995, Spectroscopy and photophysics of bridged enone derivatives: effect ^ of molecular structure and solvent, Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry, v.86, 109-113

181. Wang Y., Eisenthal K.B., 1982, Picosecond dynamics of twisted internal charge transfer phenomena. The role of the solvent, J. Chem. Phys. v.71, 6076-6082

182. Weber G., Farris F.J., 1979, Biochemistry, v. 18, 3075-3078197. "Organic Solvents"1955, ed., by A. Weissberger, Interscience Pub. N-Y

183. Weizmann A., 1940, Zwitteron-structures in unsaturated carbonyl compounds, Trans. Farad., Soc., v. 36, 329-333

184. Westring D.W., Ladinsky J.L., Feick P., 1969, The volume distribution of human lymphocytes, Proceeding of the society for experimental biology and medicine, v. 131, 10771083

185. Williams N., Shortman K., 1972, The separation of different cell classes from lymphoid organs, The Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science, v. 50, 133-151

186. Wright B.M., Ednards A.J., Jones V.E., 1974, Use of a cell rupturing pump for the preparation of thymocyte subcellular fractions., Journal of immunological methods, v. 4,281296