Физиолого-биохимическая оценка in vivo адаптогенных свойств фитоэкдистероидсодержащего экстракта серпухи венценосной тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Сидорова, Юлия Сергеевна

• Сидорова, Юлия Сергеевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Сидорова, Юлия Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

5

ГЛАВА 1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ_12

1.1.Понятие об адаптогенах_12

1.2.Общая характеристика экдистероидов _15

1.3.Молекулярные механизмы действия_20

1 АЭкдистероидсодержащие препараты и БАД к пище _27

ГЛАВА 2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ_35

2.1.Экспериментальные животные__35

2.2.Характеристика используемых материалов_38

2.3.Получение фитоэкдистероидсодержащего экстракта из листьев серпухи венценосной_39

2.4.Моделирование стресса путем электрокожного раздражения на лапы _39

2.5.Дизайн экспериментов in vivo_40

2.6.Физико-химические методы исследования_45

2.6.1.ВЭЖХ методы количественного анализа содержания

фитоэкдистероидов в экстрактах_45

2.6.2.Определение молекулярно-массового распределения белково-

пептидных фракций_48

2.6.3.Определение содержания щавелевой кислоты в экстрактах_48

2.7.Биохимические методы_49

2.7.1 .Иммуноферментные методы анализа_49

2.7.2.0пределение содержания норадреналина в плазме крови_50

2.7.3.Определение содержания норадреналина в моче_50

2.7.4.Определение содержания кортикостерона в моче_51

2.7.5.Определение содержания окисленной и неокисленной формы 8-

гидрокси-2'дезоксигуанозина в моче_51

2.7.6.Определение активности апоптоза__52

2.7.7.Исследование апоптоза лимфоцитов крыс методом проточной цитометрии_52

2.8.Физиологические методы_54

2.8.1.Обучение крыс инструментальному пищедобывательному навыку

_54

2.8.2.Определение порога острой болевой чувствительности_55

2.9.Статистическая обработка результатов исследований_56

ГЛАВА З.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ_57

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ_57

3.1.Экспериментальное обоснование применимости болевого электрокожного раздражение на лапы крыс линии Вистар в качестве модели стрессорного воздействия_57

3.1.1.Влияние электрокожного раздражения на некоторые биомаркеры ОАС_57

3.1.2.Влияние витаминной обеспеченности растущих крыс-самцов линии Вистар на их устойчивость к воздействию электрическим током на лапы_61

3 ^.Характеристика фитоэкдистероидсодержащего экстракта из листьев серпухи венценосной_62

3.3.Влияние экдистероидсодержащего экстракта Серпухи Венценосной на некоторые биомаркеры ОАС у интактных (не стрессированных) крыс _64

3.4.Влияние экдистероидсодержащего экстракта серпухи венценосной на некоторые биомаркеры ОАС у крыс после стрессорного воздействия _ 71

3.5.Влияние экдистероидсодержащего экстракта серпухи венценосной на изменение порога острой болевой чувствительности и потенциальные анальгезирующие эффекты в ответ на термическое раздражение_77

3.6. Влияние экдистероидсодержащего экстракта серпухи венценосной на способность лабораторных животных (крыс) к обучению инструментальному пищедобывательному навыку_79

3.7.Получение и характеристика фитоэкдистероидсодержащего экстракта из листьев шпината огородного_84

ГЛАВА 4.3АКЛЮЧЕНИЕ_90

ВЫВОДЫ_100

СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРА ТУРЫ_102

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Физиолого-биохимическая оценка in vivo адаптогенных свойств фитоэкдистероидсодержащего экстракта серпухи венценосной»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Повышение эффективности использования специализированных пищевых продуктов в питании для существенного улучшения здоровья населения и снижения потерь от социально значимых заболеваний предполагает проведение физиолого-биохимических исследований, направленных на комплексную оценку биологически-активных компонентов пищи [49]. Одним из инновационных подходов к созданию нового поколения специализированных продуктов может стать использование в их составе в качестве «микроингредиентов» растительных минорных биологически активных веществ адаптогенного действия - фитоадаптогенов, повышающих резистентность организма к стрессам, препятствующих формированию иммунодефицитных состояний, нарушению функции систем антиоксидантной защиты, хронизации болезней, повышению риска развития распространенных заболеваний [10, 21, 31]. Обоснованием перспективности такого подхода является положение о том, что, в отличие от эффектов различных допинговых средств, адаптогены не вызывают отрицательного последействия, характеризуется неспецифичностыо и множественностью проявляемых эффектов, а также отсутствием токсичности при условии правильно подобранных низких дозировок [15, 56].

Фитоадаптогены, получаемые обычно из лекарственных растений (женьшеня, элеутерококка, аралии, левзеи и многих других), формально не являются пищевыми веществами, и их использование в специализированном питании в настоящее время существенно ограничено. Однако скрининговые целенаправленные исследования позволяют выявлять фитоадаптогены, содержащиеся и в составе пищевых растений хотя и в существенно меньших количествах, чем в дикорастущих лекарственных растениях [59, 65, 77, 79].

Особый интерес для использования в специализированном питании могут представлять растительные источники фитоэкдистероидов

полигидроксилированных стеринов, являющихся структурными аналогами гормонов линьки и метаморфоз членистоногих [12, 51]. В научной литературе представлены публикации, свидетельствующие о множественности (плейотропности) биологического действия этих соединений [3, 35, 43, 52, 88, 99, 115]. Фитоэкдистероиды, воздействуя на растительноядных беспозвоночных и участвуя, таким образом, в регуляции численности фитофагов, не оказывают гормонального действия на млекопитающих и обладают низкой токсичностью. За последние годы достигнут большой прогресс в изучении фитоэкдистероидов: выявлены виды растений, в которых обнаружены новые экдистероиды, закономерности распространения фитоэкдистероидов в царстве растений, получены высокопродуктивные линии культур клеток экдистероидсодержащих растений, разработаны новые методы химической модификации экдистероидов и научные основы получения фитоэкдистероидов из растительного сырья [13, 53, 60, 75, 90, 91, 92, 98]. Исследования in vivo и с использованием культур клеток свидетельствуют о коррегирующем воздействии фитоэкдистероидов на процессы белкового, углеводного и жирового обмена [78, 91]. Что касается полученных в клинических условиях и с привлечением добровольцев-спортсменов относительно немногочисленных сведений о влиянии фитоэкдистероидов на когнитивные функции, то они указывают на снижение нервной утомляемости, улучшение памяти и внимания [7, 10, 45]. Активно ведутся исследования по идентификации молекулярных мишеней экдистероидов у млекопитающих [58, 84, 90, 103]. Можно предположить определенное сходство адаптации на уровне клетки под действием глюкокортикостероидов и этого же процесса под влиянием структурно - сходного с ними 20-гидроксиэкдизона. Для проверки этого предположения представляется актуальным проведение экспериментальных исследований влияния фитоэкдистероидов на биомаркеры общего адаптационного синдрома (ОАС) Селье, как при отсутствии стрессорного воздействия, так и при его последующем

проявлении. Одним из наиболее широко изучаемых фитоэкдистероидов является - 20-гидроксиэкдизон (20Е), содержащийся в некоторых видах дикорастущих растений, а также шпинате. Множественность фармакологических эффектов в сочетании с низкой токсичностью 20-гидроксиэкдизона позволяет использовать его (преимущественно как индивидуальное соединение) в составе лекарственных препаратов и БАД к пище [1,23,107,108,121].

Перспективным природным источником фитоэкдистероидов являются растения рода Serratilla L (сем. Asteraceae), в частности серпуха венценосная {Serratilla coronata L), в наземной части которой содержание 20-гидроксиэкдизона составляет около 2% в пересчете на сухую массу. В водном экстракте наземных частей серпухи венценосной помимо 20-гидроксиэкдизона присутствует другой мажорный экдистероид: 25S-инокостерон.

В листьях шпината содержание 20Е на порядок ниже. Однако могут быть разработаны современные высокотехнологичные физико-химические и биотехнологические методы препаративного выделения и концентрирования для получения сухих растительных экстрактов пищевых растений с относительно высоким содержанием фитоадаптогенов.

Растительные экстракты, содержащие фитоэкдистероиды и другие биологически активные вещества, могут найти свое применение в качестве компонентов широкого спектра специализированных продуктов, что отвечает задачам рационального природопользования уникальных растительных ресурсов России [117].

Цель и задачи исследования

Цель настоящей работы: в опытах in vivo (крысы линии Вистар) охарактеризовать влияние фитоэкдистероидсодержащего экстракта из серпухи венценосной на некоторые биомаркеры общего адаптационного синдрома и когнитивные функции.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: 1 .Экспериментально обосновать применимость выбранных параметров болевого электрокожного раздражения на лапы крыс линии Вистар (ток 0,4 мА в течение 8 сек) в качестве модели стрессорного воздействия.

2.В опытах in vivo охарактеризовать влияние перорального приема различных доз фитоэдистероидсодержащего экстракта из серпухи венценосной на некоторые биомаркеры общего адаптационного синдрома у интактных крыс.

3.В опытах in vivo изучить изменения некоторых биомаркеров ОАС у стрессированных электрокожным раздражением крыс при потреблении ими экстракта серпухи венценосной.

4. В опытах in vivo охарактеризовать влияние экстракта серпухи венценосной на изменение порога острой болевой чувствительности у крыс линии Вистар и потенциальные анальгезирующие эффекты экстракта в ответ на термическое раздражение животных.

5.В опытах in vivo путем обучения крыс линии Вистар инструментальному пищедобывательному навыку охарактеризовать влияние экстракта серпухи венценосной на некоторые когнитивные и поведенческие показатели этих животных.

6.Разработать метод получения сухого экстракта из листьев шпината пищевого с повышенным содержанием фитоэкдистероидов и предельно низким содержанием щавелевой кислоты.

Научная новизна работы

В экспериментах in vivo установлено, что однократное принудительное электрокожное раздражение силой тока 0,4 мА продолжительностью 8 секунд на лапы крыс линии Вистар вызывает достоверное увеличение уровня медиаторов стресса кортикостерона и бета-эндорфина в плазме крови крыс, которое сопровождается достоверным увеличением активности апоптоза в клетках тимуса животных.

Показано, что потребление различных дозировок фитоэкдистероидсодержащего экстракта из листьев растения серпуха венценосная не влияет на ростовые показатели крыс линии Вистар в экспериментах продолжительностью 15-30 суток.

Впервые отмечено достоверное увеличение массы тимуса, сочетающееся со снижением активности апоптоза в этом органе, у стрессированных животных, получавших экстракт в дозе 2 мг фитоэкдистероидов/кг массы тела в течение 30 суток, по сравнению с контрольными стрессированными крысами.

Показано, что потребление экстракта в дозировке 5 мг фитоэкдистероидов/кг массы тела в течение 15 суток достоверно снижает у крыс после электрокожного раздражения экскрецию с мочой биомаркеров ОАС: кортикостерона и норадреналина.

Установлено, что потребление экстракта серпухи венценосной в дозе 2 мг фитоэкдистероидов/кг массы тела в течение 25 суток способствует адаптации организма к новым условиям и ускоряет процессы обучения и памяти у животных при обучении инструментальному пищедобывательному навыку.

В тесте горячая пластина обнаружено, что потребление экстракта серпухи венценосной в течение 30 суток в дозе 5 мг экдистероидов/кг массы тела крысы достоверно увеличивает время до возникновения болевого оборонительного рефлекса в 1,9 раза, и повышает способность крыс к обучению избегания опасности.

Практическая значимость работы

Результаты исследований in vivo влияния водного экстракта из листьев серпухи венценосной на некоторые показатели ОАС у стрессированных животных могут быть использованы для обоснования дальнейшего клинического исследования экстракта в профилактическом питании.

Предложен и апробирован новый экспериментальный комплексный подход для выявления адаптогенных свойств у минорных биологически

активных веществ растительного происхождения с использованием биохимических и физиологических методов.

Значимым научно - практическим приложением работы является разработка метода получения из листьев шпината экстракта с повышенным содержанием фитоэкдистероидов и практическим отсутствием щавелевой кислоты.

Положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальный метод оценки адаптогенных свойств фитоэкдистероидов, включающий определение экскреции с мочой биомаркеров общего адаптационного синдрома (кортикостерона и норадреналина) и активности апоптоза в тимусе стрессированных электрокожным раздражением крыс линии Вистар.

2. Экстракт из листьев серпухи венценосной как фитоадаптоген, повышающий устойчивость к стрессорному воздействию электрическим током 0,4 мА в течение 8 сек и корригирующий развитие общего адаптационного синдрома у крыс линии Вистар.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены на:

XX международной конференции «Новые информационные технологии в медицине и экологии», Украина, Крым, Гурзуф, 2012;

III Международной междисциплинарной конференции «Современные проблемы системной регуляции физиологических функций», Кипр, Греция, 2013;

V Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины»,Россия, Ростов-на-Дону, 2013;

XXI международной конференции «Новые информационные технологии в медицине и экологии», Украина, Крым, Гурзуф, 2013;

XV Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов с международным участием «Здоровое питание: от фундаментальных исследований к инновационным технологиям»,Россия, Москва, 2014. Апробация работы состоялась 25 сентября 2014 г. на межлабораторной научной конференции ФГБНУ «НИИ питания».

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 6 статей в научных журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.

Личный вклад соискателя

Все изложенные в диссертации результаты получены автором самостоятельно или при его непосредственном участии. Постановка задач, интерпретация полученных результатов осуществлялись совместно с научным руководителем и другими соавторами публикаций.

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, разделов материалов и методов исследования, результатов исследования, заключения и выводов. Список литературы содержит 125 источников, из них 56 российских и 69 зарубежных источников. Объем работы составляет 115 страниц машинописного текста, содержит 27 рисунков, 18 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Сидорова, Юлия Сергеевна

выводы

1. Принудительное электрокожное раздражение интенсивностью тока 0,4 мА в течение 8 секунд на лапы крыс линии Вистар достоверно увеличивало в плазме крови этих животных содержание кортикостерона (более чем в 3 раза), содержание бета-эндорфина (в 1,7 раза) и индекс апоптоза в тимусе (на 8%). В опытах in vivo электрокожное раздражение выбранных параметров может быть использовано в качестве модели стрессорного воздействия для оценки влияния исследуемых субстанций на биомаркеры общего адаптационного синдрома у крыс линии Вистар.

2. У интактных крыс, потреблявших фитоэкдистероидсодержащий экстракт из серпухи венценосной (интервал дозировок 2-15 мг фитоэкдистероидов/кг массы тела животного в сутки; продолжительность 15 суток), не выявлено неблагоприятных изменений ростовых показателей, а также изменений содержания в крови и/или моче кортикостерона, бета-эндорфина и простагландина Е2, степени фрагментации ДНК и индекса апоптоза в тимусе. Установлено дозозависимое снижение содержания норадреналина в плазме крови.

3. У стрессированных крыс, потреблявших в течение 30 дней экстракт из серпухи венценосной в дозе 2мг экдистероидов/кг массы тела в сутки, показано достоверное увеличение массы тимуса (на 18%) и снижение активности апоптоза (на 7% для степени ДНК повреждений и 24% для индекса апоптоза) в этом органе по сравнению со стрессированными крысами контрольной группы. Ежесуточное потребление в течение 15 дней в дозировке 5мг экдистероидов/кг массы тела экстракта из серпухи венценосной достоверно снижало экскрецию с мочой кортикостерона более чем в 2,5 раза и норадреналина в 1,9 раз.

4. В тесте «Горячая пластина» установлено достоверное увеличение времени до возникновения болевого оборонительного рефлекса у крыс, 30 суток потреблявших экстракт серпухи венценосной в дозе 5 мг

фитоэкдистероидов/кг массы тела по сравнению с контрольной группой животных (8,8±0,7 сек и 16,7±2,0 сек соответственно).

5. При потреблении в течение 25 суток экстракта серпухи венценосной в дозе 5 мг экдистероидов/кг массы тела крысы достоверно быстрее обучались инструментальному пищедобывательному навыку по сравнению с животными, не получавшими экстракт: соответственно количество обучившихся животных в первые сутки составило 62,5% и 25%, во вторые сутки 75% и 50% соответственно.

6. Разработан метод получения сухого экстракта из листьев шпината, включающий стадии водной экстракции, ультрафильтрации и адсорбции на гидрофобном носителе. Суммарное содержание фитоэкдистероидов в экстракте составило 10,8 мг/г (степень очистки в 490 раз по сравнению с исходным сырьем), содержание щавелевой кислоты 0,020 мг/г.

7. В модельных экспериментах in vivo установлено адаптогенное и анальгетическое действие фитоэкдистероидсодержащего экстракта из серпухи венценосной и охарактеризовано его влияние на процессы обучения и памяти. В лабораторных условиях разработан метод выделения и очистки экстракта из шпината с повышенным содержанием фитоэкдистероидов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сидорова, Юлия Сергеевна, 2014 год

СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абдукадиров И. Т. Разработка технологии производства препаратов аюстаи, эксумид, гарпахол из растения Ajuga Turkestanica: автореферат диссертации на соискание ученой степени к.т.н.,- Ташкент.- 2007. - 22 с

2. Алексеева Л.И. Экдистероиды Serratilla coronata и Ajuga reptans L.: Дис. кан. хим. наук: Спец.: 02.00.03/Л. И. Алексеева; Томск, 2003.-С. 130.

3. Андреева Л.И. Воздействие нового экдистероидсодержащего препарата Серпистен на поведенческую активность и формирование клеточной адаптации у крыс при тепловом стрессе/ A.A. Бойкова, А.А Быкова, Л.И Андреева//Теоретическая и прикладная экология.- 2012.- №1.-С.36-43.

4. Ахрем A.A. Экдистероиды: Химия и биологическая активность/ А.А Ахрем, Н.В.Ковганко - Минск: Наука и техника, 1989. - 327 с.

5. Ашихмина Т.Я. Второе международное совещание по фитоэкдистероидам (4-7 июля 2010 г., Сыктывкар, Россия)/ Т.Я. Ашихмина, В.В. Володин, С.И. Матаев//Теоретическая и прикладная экология.- 2012.-№1.-с.4-5

6. Балтаев У.А. Фитоэкдистероиды - структура, источники и пути биосинтеза в растениях//Биоорганическая химия.- 2000. - Т. 26.- № 12. -С. 892-925.

7. Бойко Е.Р. Сочетанное влияние витаминно-минерального комплекса Витабаланс-мультивит и БАД «Серпистен» на физическую работоспособность лыжников-гонщиков высокой квалификации. IV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием/В.В.Володин, H.A. Мартынов, Е.Р.Бойко//«Спорт и медицина. Сочи-2013»,Сборник материалов, 19-22 июня 2013.- С. 34-36.

8. Бондаренко Д.А. In vivo модели для изучения анальгетической активности/И.А. Дьяченко, Д.А Бондаренко//Биомедицина.- № 2.- 2011, С. 84-94.

9. Брехман Н.И. Элеутерококк.- Л.: Наука, 1968.- 188 с.

Ю.Ветошева В.И. Влияние Сериистена на продуктивность памяти пациентов с ограниченными изменениями коронарных сосудов мозга/А.Е. Попов, С.О. Володина, В.В. Володин, Ветошева В.И.//Теоретическая и прикладная экология. -2012. №1.- С.62-65.

П.Володин В.В. Стресс-протекторное действие экдистероидсодержащей субстанции Серпистен/Сыров В.Н., Хушбактова З.А., В.В. Володин//Теоретическая и прикладная экология,2012.- №1.- с.18-24.

12.Вол один В.В. Экдистероидсодержащие растения - источники новых адаптогенов/С.И.Матаев, В.В.Володин//Вестник Биотехнологии.-2011.- Т.7.-№2.- С.52-59.

1 З.Володин В.В. Экдистероидсодержащие растения: ресурсы и биотехнологическое использование/С.О.Володина, И.Ф Чадин, В.В. Володин. - Екатеринбург: УрО РАН, 2007.- 127с.

М.Вржесинская O.A., Коденцова В.М., Бекетова H.A. Экспериментальная модель алиментарного полигиповитаминоза разной степени глубины у крыс/В. М. Коденцова, H.A. Бекетова, О.А.Вржесинская//Вопр. питания,- 2012. - Т. 81, № 2. - С. 51-56

15.ГОСТ 12.1.007-76 Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

16.Дурнев А. Д., Жанатаев А. К., Анисина Е. А. и др. Применение метода щелочного гель-электрофореза изолированных клеток для оценки генотоксических свойств природных и синтетических соединений: Методические рекомендации. - М., 2006. - 27 с.

17.Жанатаев А.К. Перспективы определения 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина в качестве биомаркера окислительного стресса в эксперименте и клинике/А.Д. Дурнев, С.Б. Середенин, А.К. Жанатаев //Вестник РАМН. - 2002. - № 2. - С.45-49.

18.Журавлев Б.В. Пищедобывательное и оборонительное поведение: роль иммуномодуляторов в системной организации/Е.П. Муртазина,

Б.В.Журавлев//Успехи физиологических наук.- 1996. -Т. 27.- № 2.- С. 90-101.

19.3ибарева JI.H. Новые экдистероидоносные виды рода Silene L. и динамика содержания в них экдистерона/В.И. Еремина, Н.А.Иванова, JLH. Зибарева//Раст. ресурсы. - 1997. - Т. 33, вып. 3. - С. 73 - 76. 20.Зорин С.Н. Получение и характеристика ферментативного гидролизата изолята соевых белков/М. Баяржаргал, Е.А. Бурдза, В.К. Мазо, С.Н. Зорин //Вопр. питания.-2006. - Т. 76. - №1. - С. 10-12.

21.Исламова Ж.И. Перспективы использования препаратов, созданных на основе фитоэкдистероидов, в лечении лямблиоза / H.A. Давие, В.Н. Сыров, С.О. Осипова, Ж.И. Исламова/ЛГеоретическая и прикладная экология.- 2012.- № 1.- С. 57-61.

22.Кириллов, О.И. К механизму адаптогенного действия элеутерококка / О.И. Кириллов//Матер. научн. совещания по вопр. фармакол. регуляции остаточной резистентности.- Д., 1963.- с. 43-44.

23 .Куракина И.О. Экдистен - тонизирующее средство в таблетках по 0.005 г/В.М. Булаев, И.О.Куракина//Новые лекарственные препараты. М., 1990.-Вып. 6.- С. 16-18.

24.Лазарев, Н.В. Пат. физиол. и эксперим. терапия /Н.В. Лазарев, Е.И. Люблина, М.А. Розин.-Медиздат,1959.-16-21 с.

25.Лишманов Ю.Б. Бета-эндорфин и стресс-гормоны плазмы крови при состояниях напряжения и адаптации/Ю.Б. Лишманов//Бюлл. эксперим. биол. и медицины.-1987.-№4.- с.422-424

26.Лафон Р. Фитоэкдистероиды и мировая флора: разнообразие, распределение и эволюция/Р. Лафон//Физиол. растений.- 1998.-Т.45.-№3.-с.326-346

27.Машковский М.Д. «Лекарственные средства».- М. «Новая волна».- 16 издание.- 2010.- с.135.

28.Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца/Ф.З. Меерсон.-М.: Медицина, 1984. -270 с.

29.Меерсон Ф.З. Адаптивная медицина/ Ф.З. Меереон.-М.,1993.-331с.

30.Патент № 2326672, Россия МПК С2, А61К 31/565 А61Р 39/00. Противолучевое средство/А.Г. Кудяшева, В.В. Володин, О.Г. Шевченко, Н.Г. Загорская, С.О. Володина, Л.А. Башлыкова, О.В. Ермакова; Институт биологии Коми НЦ УрО РАИ; № 2006108965/15; заявл. 21.03.06; опубл. 20.06.08. Бюл. № 17.

31.Петрова Н.Б. Антиагрегационное и стресс-лимитирующее действие экдистероидсодержащей субстанции серпистен/Н.Б. Петрова// Теоретическая и прикладная экология. -2012. -№1.- С.48-54.

32.Приказ МЗ СССР № 1179 от 10.10.1983 «Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения»

33.Пчеленко Л. Д. Адаптогенный эффект экдистероидсодержащей фракции Serratula coronata L./Л.Г. Метелкина, С.О. Володина, Л.Д. Пчеленко/ Химия растительного сырья.- 2002. - №Т. - С. 69-80.

34.Распопов Р.В. Токсиколого-гигиеническая характеристика наночастиц диоксида титана, вводимых в виде дисперсии в желудочно-кишечный тракт крыс. Сообщение 1. Интегральные, биохимические и гематологические показатели, степень всасывания макромолекул в тонкой кишке, повреждение ДНК/А.А.Шумакова, Т.Б. Сенцова, Р.В. Распопов и др.//Вопросы питания-2010 -Т.79, № 4.-С.21-30.

35.Репина E.H. Влияние 20-гидроксиэкдизона из растений Serratula coronata L. на свойства белой и красной крови кроликов породы шиншилла/Н.А. Мойсеенко, Ж.Е. Иванкова, E.H. Репина//Фундаментальные исследования.- 2004.- № 2.- С. 151-153.

36.Селье, Г. Очерки об адаптационном синдроме/Г.Селье.- М.:Медицина, 1960.-254с

37.Сергутина A.B. Влияние L-ДОФА на мозг в зависимости от индивидуальных особенностей поведения/JI.М. Герштейн, A.B. Сергутина//Журнал неврологии и психиатрии.- 2014.-№12.-с.56-59

38.Сидорова Ю.С. Влияние внутрижелудочного введения фитоэкдистероидов па некоторые показатели гормонального статуса крыс линии Вистар/C.Ii. Зорин, Л.С.Василевская, В.К. Мазо, Ю.С.Сидорова//Вопросы питания.-2013.- том 82, №4, с. 22-26

39. Сидорова A.A. Хроматографическое и электрофоретическое определение катехоламинов, метанефринов и 3,4-дигидроксифенилаланина в моче и плазме крови/А.А. Сидорова, Л.А Карцова//Сорбционные и хроматографические процессы.- 2009.- Т. 9.-Вып. 6.- с. 774-782

40.Судаков С.К. Влияние периферического введения пептидных лигандов d-опиоидных рецепторов на уровень тревожности и двигательную активность крыс/Г.А.Назарова, К.Н. Колясникова, А. А. Колпаков, С.К.Судаков/УБюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2011.-Т. 151,- № 6.- С. 604-606

41.Сусленникова В.М. Руководство по приготовлению титрованных растворов /Е.К. Киселева, В.М. Сусленникова. - Москва: Химия, 1967. -С. 144.

42.Сыров Н.В. Сравнительное изучение анаболической активности фитоэкдистероидов и стеранаболов в эксперименте/Н.В. Сыров //Химико-фармацевтический журнал.- 2000.-Том 34.-C.193-197.

43. Сыров В.Н. Сравнительное изучение регулирующего влияния экдистерона и ретаболила на белоксинтезирующие процессы в организме высших животных/Г.А. Шахмурова, З.А. Хушбактова, В.Ы.Сыров/ЛГеоретическая и прикладная экология.- 2012,- №1.- с. 13-17

44.Сыров В.Н. Результаты экспериментального изучения фитоэкдистероидов в качестве стимуляторов эритропоэза у

лабораторных животных /С.С.Насыров, З.А. Хушбактова, В.Н.Сыров// Эксперим. клинич. фармакол.- 1997.- № 3.- С. 41-44

45.Сыров Н.В. Фармокологическая оценка фитоэкдистероидов и созданных на их основе препаратов как потенциальных стимуляторов психической и физиологической активности в нормальных и осложненных условиях/ Н.В.Сыров //5-я международная конференция «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам».- 2010.- с.84-85

46.Торосян В.Ф. Аналитическая химия и физико-химические методы анализа. Практическое руководство: учебно-методическое пособие /В.Ф. Торосян. - Томск: Изд-во Томского политехнического университета, 2010. - С. 179

47.Тутельян В.А., Гаппаров М.Г. Стресс и питание человека / В кн.: Руководство по реабилитации лиц, подвергшихся стрессовым нагрузкам / Под ред. В.И. Покровского.- М.: Медицина, 2004.- С. 81-85.

48.Тышко Н.В. Сравнительная характеристика влияния экспериментальных рационов на рост и развитие крыс/В.М. Жминченко, В.А.Пашорина, К.Е. Селяскин, Н.В. Тышко // Вопросы питания. - 2011. - Т. 80.-№ 5. - с. 30 - 38

49.Тутельян В.А. Пищевые ингредиенты в создании современных продуктов питания/А.П. Нечаев, О.В. Багрянцева, В.А.Тутельян.-М: изд. ДеЛи плюс.-2013.-520стр.

50.Флора Северо - Востока европейской части СССР/ Под ред. А.И. Томачева. В 4-х томах. Семейства КушрЬаеасеае - Нуррипс1асеае. -Л: Наука, 1976.-Т.З.-293 с.

51.«Фитоэкдистероиды» под редакцией Володина В.В. //Спб., Наука//, 2003,-293с.

52.Хушбактова З.А. Иммуномодулирующая и стресс-протективная активность фитоэкдистероидов экдистерона и туркестерона при иммобилизационном стрессе у мышей/В .Н.Сыров, Г. А.Шахмурова,

З.А.Хушбактова //Химико-фармацевтический журнал.- 2010.-№ 1.- с.9-11.

53.Чадин И.Ф. Распределение 20-гидроксиэкдизона в генеративных растениях Serratula coronata L./H.A. Колегова, И.Ф. Чадин //Сиб. экол. журн.- 2003.- № 1.-С. 49-53

54.Черных Н.С. Влияние метандрастена и экдистерона на физическую выносливость животных и белковый обмен в скелетных мышцах/ Н.Л.Шимановский, Г.В Шутко, Н.С. Черных//Фармакология и токсикологии.- 1988. - № 6. - с. 57-62

55.Якушина Л.М., Бекетова Н.А., Бендер Е.Д., Харитончик Л.А. Использование методов ВЭЖХ для определения витаминов в биологических жидкостях и пищевых продуктах/ Н.А.Бекетова, Е.Д. Бендер, Л.А. Харитончик, Л.М .Якушина // Вопр. питания.- 1993.- № 1.-С.43-48.

56.Яременко К.В. Оптимальное состояние организма и адаптогены / К.В. Яременко.- СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2008.- с. 129.

57.Alessi D.R. The role of PI 3-kinase in insulin action//Biochimica et Biophysica Acta (BBA)/C.P. Downes, D.R. Alessi //Molecular and Cell Biology of Lipids, Volume 1436, Issues 1-2, 8 December 1998, Pages 151164.

58.Arthur ST Ajuga turkestanica increases Notch and Wnt signaling in aged skeletal muscle/ KA Zwetsloot, MM Lawrence, ST Arthur // Eur Rev Med Pharmacol Science.- 2014/-18(17).- p. 2584-92.

59.Bakrim A. Ecdysteroids in spinach (Spinacia oleracea L.): biosynthesis, transport and regulation of levels/A. Maria, F. Sayah, A. Bakrim//Plant Physiol Biochem.- 2008.-46(10).-p.844-54.

60.Bakrim A. Ecdysteroid profiles of two Ajuga species, A. iva and A. remota/J. Ngunjir,S. Crouzet, A. Bakrim//Nat Prod Commun.- 2014.-9(8).-p. 1069-74.

61.Bathori M. HPLC Screening of plant extracts for ecdysteroids/K. Szendrei, M. Bathori et al //J. High Resol. Chromatogr. Commun., 1988.-No. 9.-P.539-541

62.Benevenca N. Nutrient Requirements of Laboratory Animals, Fourth Revised Edition/C.Calvert, C.Eckhert N.Benevenca et al. - Washington: National Academy Press, 1995. - 192 p.

63.Bonhomme D., Minni A. M., Alfos S., Roux P., E. R. P. Higueret, Moisan M.-P., Pallet V., Touyarot K. //Front Behav Neurosci.-2014.- V8.- P.

64.Brazil D.P. Ten years of protein kinase B signalling: a hard Akt to follow/B.A. Hemmings, D.P. Brazil//Trends Biochem. Sci. - 2001 - Vol. 26.-P. 657

65.Brittany L. Graf Quinoa seeds leach phytoecdysteroids and other compounds with anti-diabetic properties/Alexander Poulev, Peter Kuhn, L. Graf Brittany //Food Chemistry.- 2014,- Volume 163.-p. 178-185

66.Burgering B.M. Protein kinase B (c-Akt) in phosphatidylinositol-3-OH kinase signal transduction/P.J. Coffer, B.M. Burgering//Nature.- 1995 Aug 17.-376(6541):599-602.

67.Carpenter C.L. A tightly associated serine/threonine protein kinase regulates phosphoinositide 3-kinase activity/K. R. Auger, B.C. Duckworth, W.M. I-Iou, B. Schaffhausen, C.L. Carpenter//Mol Cell Biol.- Mar 1993.- 13(3).-p. 1657-1665.

68.Chandna S. Single-cell gel electrophoresis assay monitors precise kinetics of DNA fragmentation induced during programmed cell death/S. Chandna //Cytometry A. - 2004. Vol. 61 - № 2. - P. 127-133.

69.Cross D. Inhibition of glycogen synthase kinase-3 by insulin mediated by protein kinase B /D. Aless, P.Cohen, M. Andjelkovich, D. Cross //Nature.-1995.-№ 378, 785-789.

70.Da Costa L.A Nutrigenetics and modulation of oxidative stress/A. Badawi, A. El-Sohemy, L.A Da Costa // Ann Nutr Metab.-2012.-60 Suppl 3.-p.27-36.

71.De Martinis B.S. Methodology for urinary 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine analysis by HPLC with electrochemical detection/M.L.P Bianchi., B.S. De Martinis//Pharmacol.Res.-2002.-V.46, N 2.-P. 129-131

72.Delcommenne M. Phosphoinositide-3-OH kinase-dependent regulation of glycogen synthase kinase 3 and protein kinase B/AKT by the integrin-linked kinase/C. Tan ,V. Gray ,L. Rue, M. Delcommenne//Proc. Natl. Acad. Sci.,U S A.- 1998.- Sep 15.- 95(19):11211-6.

73.Dinan L. Taxonomic distribution of phytoecdysteroids in seeds of members of the Chenopodiaceae/P.Whiting, A. Scott, L. Dinan// Biochem. systematics and ecology.- 1998.- Vol.6.- P.553-576

74.Escobedo J. Distinct phosphotyrosines on a growth factor receptor bind to specific molecules that mediate different signaling pathways/S. Navakasattusas, W. Kavanaugh, J. Escobedo //Cell.- 1992.-Volume 69.-Tssue 3, p.413-423

75.Foucault Anne-Sophie Quinoa extract enriched in 20-hydroxyecdysone affects energy homeostasis and intestinal fat absorption in mice fed a high-fat diet/Patrick Even, René Lafont,Anne-Sophie Foucault//Physiology & Behavior.- 2014,-Volume 128.-p. 226-231

76.Galbraith M.N. An Insect-moulting hormone from a plant/Horn D.H.S., M.N.Galbraith//J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1966. Vol. 24. P. 905-906

77.Gorelick-Feldman J. «Phytoecdysteroids. Understanding their anabolic activity» Dissertation/ 2009 New Brunswick, New Jersey, 143p

78.Gorelick-Feldman J., Cohick W., Raskin I. Ecdysteroids elicit a rapid Ca(2+) flux leading to Akt activation and increased protein synthesis in skeletal muscle cells /W.Cohick, I.Raskin, J.Gorelick-Feldman//Steroids.-2010. -Vol. 75.-№ 10.- P. 632-637

79.Graf B.L. Quinoa seeds leach phytoecdysteroids and other compounds with anti-diabetic properties/A. Poulev , P. Kuhn, B.L. Graf//Food Chem.- 2014.-163.-178-85.

80.Hu J. 20-Hydroxyecdysone Protects against Oxidative Stress-Induced Neuronal Injury by Scavenging Free Radicals and Modulating NF-kB and JNK Pathways/ C.X. Luo, W.I-I. Chu, Y.A. Shan, Z-M Qian, J. Hu//PLoS ONE.-20012.- 7(12): e50764.

81.Ibrahim A. A.I. The effects of palm vitamin E on stress hormone levels and gastric lesions in stress-induced rats/Y. Kamisah, M. I. Nafeeza, M. F.Nur Azlina, Ibrahim A. A.I.//Arch Med Sci.- 2012.- V.8, № 1.- P. 22-29.

82.1mai S. Screening results of plants for phytoecdysones/T. Toyosato, M. Sakai, S. Imai //Chem.Pharm.Bull.- 1969.-Vol.l7.-P.335-339

83.1nukai K.A. Novel 55-kDa regulatory subunit for phosphatidylinositol 3-kinase structurally similar to p55PIK Is generated by alternative splicing of the p85alpha gene/ M. Anai, E .Van Breda, T. Hosaka, H. Katagiri, M. Funaki, Y. Fukushima, T. Ogihara, Y. Yazaki, Kikuchi, K .Inukai et al. //J Biol Chem.- 1996.-27l(10).-p.5317-5320.

84.Jing Ren G-protein aq participates in the steroid hormone 20-hydroxyecdysone nongenomic signal transduction/Xiang-Ru Li, Peng-Cheng Liu, Ren Jing//The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology.- 2014,-Volume 144, Part B.-p.313-323

85.Kennedy S.G. The PI 3-kinase/Akt signaling pathway delivers an anti-apoptotic signal/A.J. Wagner, S. D. Conzen, S. G. Kennedy//Genes & Dev.-1997.- 11.-p. 701-713.

86.Kizelsztein P., 20-Hydroxyecdysone decreases weight and hyperglycemia in a diet-induced obesity mice model/D.Govorko, S.Komarnytsky, P. Kizelsztein//Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. - 2009 - Vol. 296. - P. E433-E439.

87.Kobayashi N. Elevation by Oxidative Stress and Aging of Hypothalamic-Pituitary-Adrenal Activity in Rats and Its Prevention by Vitamin E/ T.Machida, T. Takahashi, N.Kobayashi et al.//J Clin Biochem Nutr.- 2009.-V.45.-№2.- P. 207-213

88.Koudela К. Stimulation of growth and development in Japanese quails after oral administration of ecdysteroid-containing diet /К. Koudela et. al./-Eur.J. Entomol.- 1995.-Vol.92.-p.349.-354;

89.Kratky F. Effect of 20-hydroxyecdysone on the protein synthesis of / L. Opletal, J. Hejhalek, S. Kucharova, F. Kratky//Zivocisna Vyroba - 1997 -Vol. 42.-P. 445-451

90.Lafont R. Practical uses for ecdysteroids in mammals including humans: an update/L. Dinan, R. Lafont//Journal of Insect Science.- 2003.- 3: 7.- p30.

91.Lafont R. Recent progress in ecdysteroid pharmacology/R.Lafont //Теоретическая и прикладная экология.- 2012.- №1.- с.6-12

92.Lafont Rene 4-Ecdysteroid Chemistry and Biochemistry/C. Dauphin-Villemant, Rene Lafont//Insect Endocrinology.- 2012.-p. 106-176

93.Lim T.S. Effect of vitamin E on cell-mediated immune responses and serum corticosterone in young and maturing mice/N. Putt, D. Safranski, C.Chung, R. R. Watson, T.S. Lim//Immunology.- 1981.- V. 44, № 2.- P. 289-295.

94.Matsuda H. Effect of ecdysterone on experimental atherosclerosis in rabbit/T.Kawaba, Y.Yamamoto, H. Matsuda et al.//Folia Pharmacol. Jap.-1974.- Vol. 70,- P. 325-339.

95.Morishita S. Cold-stress induces thymocyte apoptosis in the rat /S. Morishita //Pathophysiology. - 1997. - Vol. 4. - P. 213-219

96.Nakamura M. Class IA phosphatidylinositol 3-kinases are indispensable for osteoclast function by regulating cytoskeletal organization and cell death /Н. Masuda, M. Iwasawa, M. Nakamura // Bone.-Volume 44.- Supplement 1.-May.- 2009,- P. S49-S50

97.Nakanishi K. Insect hormones. I. The structure of ponasteron A an insect-moulting hormone from the leaves of Podocarpus nakaii Hay/K. Nakanishi, M. Koreeda, S. Sasaki et al.//J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1966. Vol. 24. P. 915-917.

98.0chieng C.O. Phytoecdysteroids from the stem bark of Vitex doniana and their anti-inflammatory effects/I.O. Ishola , S.A. Opiyo, C.O. Ochieng //Planta Med.- 2013.-79(l).-52-59.

99,Ogawa S., Pharmacology of ecdysones in vertebrates/N. Nishimoto, H. Matsuda, S.Ogawa//Invertebrate endocrinology and hormonal heterophylly / Ed. W.J. Burdette. Berlin: Springier, 1974. P. 341-344.

100. Otaka T. Stimulation of protein synthesis in mouse lever by ecdysterone/T.Otaka, S. Okui, M. Uchiyama// Chem. Pharm. Bull.- 1969. Vol. 17.-№ l.-P. 75-81

101. Otsu M. Characterization of two 85 kDa proteins that associate with receptor tyrosine kinases, middle-T/pp60-src complexes, and PI3-kinase /M.Otsu et al.//Cell.-1991.-№65.- P. 91-104.

102. Panossian A. Effekt of adaptogens on the central nervous system/G. Wikman, A. Panossian //Arquivos Brasileiros de Fitomedicina Cientifica.-2005.- Vol.3.- numerol.- p.29-51

103. Panossian A. Plant adaptogens III. Earlier and more recent aspects and concepts on their mode of action /G.Wikman, H.Wagner, A.Panossian // Phytomedicine.- 1999.- Vol. 6 (4),- p. 287-300

104. Panossian AG Adaptogens: A historical overview and perspective/ AG Panossian A.//Natural pharmacy.-2003.- 7(4): 1.- p. 19-20

105. Pons S. The structure and function of p55PIK reveal a new regulatory subunit for phosphatidyl inositol 3-kinase/ T. Asano, E. Glasheen, M. Miralpeix, S. Pons et al//Mol Cell Biol.- 1995.-15(8).-p.4453-4465.

106. Quillfeld P. Measuring corticosterone in seabird egg yolk and the presence of high yolk gestagen concentrations/Poisbleau M., P.Quillfeld// General and comparative endocrinology.- 2011.- V.173.- p. 11-14

107. Ramalingam Sundaram Ameliorative effect of 20-OH ecdysone on streptozotocin induced oxidative stress and p-cell damage in experimental hyperglycemic rats/Rajendran Naresh, Palanivelu Shanthi Sundaram

Ramalingam//Process Biochemistry.-2012.- Volume 47, Issue 12.-p. 20722080

108. Rajendran Naresh Kumar Protective role of 20-OH ecdysone on lipid profile and tissue fatty acid changes in streptozotocin induced diabetic rats/Ramalingam Sundaram,Palanivelu Shanthi, Naresh Kumar Rajendran // European Journal of Pharmacology.-2013.- Volume 698, Issues 1-3.-p. 489498

109. Russell G.B. Insect moulting activity of some New Zealand Gymnosperms/P.G. Fenemore, G.B.Russell //New Zealand J.Sci., I970.-No 13.- p.61-68

110. Russell G.B Insect moulting hormone activity in some New Zealand Ferns/P.G. Fenemore, G.B.Russell // New Zealand J.Sci., 1971.-No 13.-p.61-68

111. Selye H. The stress of life.- N.Y., 1956. 325 p

112. Selye FI.A. syndrome produced by diverse nocious agents/H.A. Selye/ZNature,-1936.- №3479.- 32 p

113. Skolnik E.Y. Cloning of PI3 kinase-associated p85 utilizing a novel method for expression/cloning of target proteins for receptor tyrosine kinases/B.Margolis, M.Mohammadi, E.Y.Skolnik // Cell.- 1991.- Volume 65.- Issue l.-p. 83-90

114. Smith C.C. Recommendations for design of the rat comet assay/ D.J.Adkins, E.A. Martin, M.R O'Donovan, C.C. Smith//Mutagenesis.- 2008. -Vol. 23-№3.-P. 233-240

115. Syrov V.N. Estimation of the hypoglycemic effect of phytoecdysteroids/ N.Kh. Iuldasheva ,F.R. Egamova ,V.N. Syrov //Eksp Klin Farmakol.- 2012.-75(5).-p.28-31

116. Tarcic N. Restraint stress-induced thymic involution and cell apoptosis are dependent on endogenous glucocorticoids /H. Ovadia, D.W. Weiss, N. Tarcic et. al. // J Neuroimmunol. - 1998. - Vol.82(l). - P. 40-6.

Sy

117. Tsanko S. Natural products from resurrection plants: Potential for medical applications/ Jacques Gechev, HilleHerman J. Woerdenbag, S.Tsanko//Biotechnology Advances.- 2014.-Volume 32, Issue 6.- p. 10911101

118. Uchiyama M. Effect of ecdysterone on carbohydrate and lipid metabolism/T. Yoshida, M. Uchiyama//Invertebrate endocrinology and hormonal heterophylly/Ed. W.J. Burdette. Berlin: Springer, 1974.-P. 401-16.

119. Uchiyama M. (Burdette W.J., Ed.) Invertebrate Endocrinology and Hormonal Heterophylly/T. Yoshida, M.Uchiyama// Springer-Verlag, Berlin - 1974.-P. 401-416.

120. Whiteman Eileen L Role of Akt/protein kinase B in metabolism/Han Cho, Morris J Birnbaum, Eileen L Whiteman//Trends in Endocrinology & Metabolism.-Volume 13.-Issue 10.- 1 December 2002.-P.444-451.

121. Xichao Xia Effects of 20-hydroxyecdysone on improving memory deficits in streptozotocin-induced type 1 diabetes mellitus in rat/Qingyuan Zhang, Rongzhi Liu, Xia Xichao //European Journal of Pharmacology.-2014,-Volume 740.-p. 45-52

122. Yoshida T. Effect of ecdysterone on hyperglycemia in experimental animals /T. Yoshida, T. Otaka, M. Ushiyama et al.//Biochem. Pharmacol.-1971.-Vol. 20.- P. 3263-3268

123. Zha J. Serine phosphorylation of death agonist BAD in response to survival factor results in binding to 14-3-3 not BCL-XL./H.Harada, E.Yang, J.Jockel, S Kosmeyer, J.Zha//Cell.-1996, 87, 619-628.

124. Zimmer Aline R. Bruxel Fernanda HPLC method for the determination of ecdysterone in extractive solution from Pfaffia glomerata/Fernanda Bruxel, Aline R Zimmer//Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.-2006. - №40.-p.450-453

125. Zundel W. Inhibition of the anti-apoptotic PI(3)K/Akt/Bad pathway by stress/ A.Giaccia, W. Zundel//Genes Development.- 1998.- 12, p.1941-1946.