Физиологический анализ инфракрасных спектров плазмы крови животных в норме и при экспериментальном онкогенезе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.01, кандидат биологических наук Красникова, Ольга Владимировна

• Красникова, Ольга Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Красникова, Ольга Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Инфракрасная спектроскопия

1.1.1. Суть метода ИК-спектроскопии

1.1.2. Аппаратура

1.1.3. Применение ИК-спектроскопии в медицине

1.1.4. ИК-спектроскопия биологических жидкостей и тканей в диагностике различных заболеваний

1.1.5. Математическая обработка результатов, полученных методом ИК-спектроскопии сыворотки крови

1.1.6. Основы и логика медико-диагностического применения метода ИК-спектроскопии

2. Материалы и методы исследования

2.1. Материалы исследования

2.2. Схема эксперимента

2.3. Методы исследования

2.3.1. Метод ИК-спектроскопии

2.3.1.1. Идентификация фосфорсодержащих соединений методом ИК-спектроскопии

2.3.1.2. Метод ИК-спектроскопии плазмы крови

2.3.2. Методы статистической обработки результатов

3. Результаты и их обсуждение

3.1. Идентификация фосфорсодержащих соединений плазмы крови экспериментальных животных методом ИК-спектроскопии

Выводы к разделу 3.1

3.2. Особенности ИК-спектров плазмы крови животных-опухо леносител ей

3.2.1. Особенности ИК-спектров плазмы крови здоровых животных и

животных-опухо леносителей

Выводы к разделу 3.2.1

3.3. Особенности ИК-спектров плазмы крови животных с ЛФС Плисса на фоне введения ЯК и её производных

Выводы к разделу 3.3

3.4. Особенности ИК-спектров плазмы крови экспериментальных животных на фоне комплексного введения ОФР и химиопрепаратов в условиях неоплазии

3.4.1. Особенности ИК-спектров плазмы крови животных с РМК-1 на фоне комплексного введения ОФР и ДР

Выводы к разделу 3.2.3.1

3.4.2. Особенности ИК-спектров биологических тканей животных с РМК-1 на фоне комплексного введения ОФР и ДР

3.4.2.1. Особенности ИК-спектров печени животных с РМК-1 на фоне комплексного введения ОФР и ДР

Выводы к разделу 3.4.2.1

3.4.2.2. Особенности ИК-спектров почек животных с РМК-1 на фоне комплексного введения ОФР и ДР

Выводы к разделу 3.4.2.2

3.4.2.3. Особенности ИК-спектров мозга животных с РМК-1 на фоне комплексного введения ОФР и ДР

Выводы к разделу 3.4.2.3

3.4.2.4. Особенности ИК-спектров легких животных с РМК-1 на фоне комплексного введения ОФР и ДР

Выводы к разделу 3.4.2.4

3.4.2.5. Особенности ИК-спектров опухолей животных с РМК-1 на фоне комплексного введения ОФР и ДР

Выводы к разделу 3.4.2.5

3.4.3. Влияние ОФР и 5-ФУ на характеристики ИК-спектров плазмы крови экспериментальных животных на фоне роста Г-3

Выводы к разделу 3.4.3

3.4.3.1. Влияние ОФР и 5-ФУ на характеристики ИК-спектров опухолей экспериментальных животных на фоне роста Г-3

Выводы к разделу 3.4.3.1

3.5. Изменение характеристик ИК-спектров плазмы крови животных-опухоленосителей под влиянием СКЭНАР-, ДЭНС-терапии

Выводы к разделу 3.5

Заключение

Выводы

Литература

Приложение

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

БАД - биологически активные добавки

б/в - без воздействия

Г-3 - гепатома Зайделя

ДМФА - диметилформамид

ДР - доксорубицин

ДЭНС - динамическая электронейростимуляция

ИК - инфракрасная

ЛФС Плисса - лимфосаркома Плисса

ОФР - озонированный физиологический раствор

ОХС - олигосахарид хитозана сукцинат

ОХСА - олигосахарид хитозана сукцинат-аскорбат

РМК-1 - рак молочной железы крысы

СКЭНАР - самоконтролируемая энергонейроадаптивная регуляция

ФХ - фосфатидилхолин

ФЭ - фосфатидилэтаноламин

ЯК - янтарная кислота

5-ФУ - 5-фторурацил

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Физиологический анализ инфракрасных спектров плазмы крови животных в норме и при экспериментальном онкогенезе»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Современная физиология находится в постоянном поиске новых методов исследования, которые бы раскрывали физиолого-биохимическую сущность протекающих в организме процессов. Одним из таких методов может быть инфракрасная (ИК) спектроскопия. ИК-спектроскопия является одним из фундаментальных методов исследования органических веществ и широко используется в химии, биологии и медицине. Применение данного метода для изучения такого биологического объекта, как кровь, началось с середины прошлого века, и в настоящее время начинает применяться в клинической лабораторной диагностике (Гордецов, 2010), т.к. позволяет определить наличие патологического процесса на стадии, когда он не устанавливается традиционной диагностикой; также ИК-спектроскопия используется при анализе лекарственных средств (Елизарова, 2009). Метод отличается высокой специфичностью, т.к. позволяет по характеристикам спектра поглощения инфракрасного излучения химическими связями определить в крови практически любые вещества качественно и количественно. Аналитически информативными показателями в данном методе являются полосы поглощения ИК-спектра, соответствующие связям фосфор-кислород (Р-О) фосфорсодержащих соединений (Гордецов, 2002). Однако вопрос идентификации фосфорсодержащих соединений плазмы крови методом ИК-спектроскопии остается открытым. С наибольшей вероятностью следует считать, что в ИК-спектре плазмы крови определяются полосы поглощения Р-0 связей: неорганических фосфатов (Верченко, 1991), фосфолипидов (фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин,

фосфатидилинозитол) (Кейтс, 1975), фосфорилированных белков (Верболович и др., 1980), фосфора кислоторастворимого эритроцитарного

(нуклеозидтри- (ди-, moho-) фосфорных кислот и их производных) (Afanasyeva et al., 1998). Увеличение их концентрации в крови отмечается при определенных патологиях, например, почечной недостаточности, передозировке витамина Д, недостаточности паращитовидных желёз, при миеломных болезнях, нарушениях липидного обмена (липидный фосфор) и т.д. Количество кислоторастворимого фосфора увеличивается при всех заболеваниях, сопровождающихся кислородной недостаточностью. Напротив, снижение концентрации происходит при дефиците витамина Д, нарушениях всасывания в кишечнике, рахите, гиперфункции паращитовидных желёз и т.д. (Лифшиц, Сидельникова, 2000). Таким образом, на содержание фосфорсодержащих веществ в крови влияет как физиологическое состояние организма, так и экзогенное введение лекарственных препаратов, что дает возможность исследовать изменения параметров ИК-спектров плазмы крови пациентов, в том числе и онкологических, на фоне лечения современными видами лекарств, биологически активных добавок (БАД). Метод РЖ-спектроскопии плазмы крови также позволяет исследовать влияние озонотерапии, электрорефлексотерапии, т.к. данные виды воздействий влияют на концентрации фосфорсодержащих соединений в плазме крови, что приводит к изменению, а часто и к нарушению энергетического обмена организма, и не всегда вызывает положительный терапевтический эффект. Поэтому исследование особенностей ИК-спектров крови организмов-опухоленосителей при проведении современных терапевтических мероприятий для выявления наиболее эффективных и безопасных методов диагностики и лечения онкологических заболеваний остается актуальным и позволяет сформулировать цель и задачи настоящей работы.

Цель исследования:

Экспериментальное обоснование применения в физиологии метода ИК-спектроскопии для исследования динамики изменений соотношений нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфорных кислот и их производных в плазме крови крыс с перевивными опухолями на фоне озоно-, электрорефлексо- и фармакотерапии.

Задачи исследования:

¡.Идентифицировать фосфорсодержащие соединения плазмы крови экспериментальных животных по ИК-спектрам.

2.Изучить особенности ИК-спектров плазмы крови животных-опухоленосителей и их взаимосвязь с содержанием фосфорсодержащих соединений.

3.Исследовать динамику изменений параметров ИК-спектров плазмы крови животных с экспериментальными опухолями на фоне введения БАД на основе янтарной кислоты (ЯК) и её комплексов с аскорбиновой кислотой (АК) и олигосахаридом хитозана (ОХ), комплексного введения озона и химиопрепаратов (доксорубицина (ДР), 5-фторурацила (5-ФУ)), а также под влиянием самоконтролируемой электронейроадаптивной регуляции (СКЭНАР), динамической электронейростимуляции (ДЭНС).

Научная новизна исследования

Впервые исследованы и проанализированы изменения параметров ИК-спектров плазмы крови животных-опухоленосителей при действии на организм ДЭНС, СКЭНАР, ЯК и её комплексов, комплексного применения озона и некоторых противоопухолевых препаратов (ДР, 5-ФУ). Установлено, что фосфорсодержащими соединениями, определяющимися в инфракрасном спектре плазмы крови, являются нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфаты.

Показано, что применение БАД на основе ЯК и её производных не вызывает нормализации соотношений нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфатов в плазме крови животных-опухоленосителей. Выявлено, что совместное применение ОФР и 5-ФУ; ОФР и ДР приводит к нормализации показателей ИК-спектров плазмы крови животных-опухоленосителей.

Применение СКЭНАР-, ДЭНС-воздействий не вызывает достоверного изменения соотношений нуклеозидтри- (моно-) фосфатов в плазме крови экспериментальных животных.

Практическая значимость работы

Результаты работы являются обоснованием для экспериментальных и клинических исследований возможности комбинированного применения ОФР и цитотоксических препаратов как способа повышения противоопухолевого эффекта химиотерапевтических воздействий.

Применение ЯК и её производных, СКЭНАР-, ДЭНС-терапии при неоплазии не вызывает нормализации соотношений нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфатов в плазме крови экспериментальных животных, в связи с чем, данные виды воздействий не могут быть рекомендованы для использования.

Разработан способ диагностики рецидива онкологических заболеваний головного мозга // Приоритет по заявке на изобретение № 2011139627 от 30.09.2011.

Полученные результаты и выводы могут использоваться в учебном процессе на кафедре физиологии и биохимии человека и животных ННГУ и кафедре общей химии НижГМА для ознакомления с неинвазивным способом диагностики различных заболеваний, в том числе и онкологических.

Положения, выносимые на защиту

1. ИК-спектры плазмы крови экспериментальных животных подтверждают физиологические изменения в организме животного-опухоленосителя по сравнению со здоровым, различаются по своим спектральным характеристикам и соответствуют разному содержанию фосфорсодержащих соединений (нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфорных кислот и их производных).

2. Введение животным с ЛФС Плисса янтарной кислоты и её производных не вызывает нормализации соотношений нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфатов в плазме крови экспериментальных животных.

3. Комбинированное введение озонированного физиологического раствора (ОФР) с ДР животным с раком молочной железы (РМК-1), а также комплексное введение ОФР и 5 - ФУ животным с гепатомой Зайделя (Г-3), нормализует параметры ИК-спектров плазмы крови экспериментальных животных.

4. Применение СКЭНАР-, ДЭНС-воздействий не вызывает изменения соотношений нуклеозидтри- (моно-) фосфатов в плазме крови животных с ЛФС Плисса.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2007), международной конференции «Ломоносов 2007» (Москва, 2007), межвузовской научно-практической конференции студентов и аспирантов с международным участием «Трибуна молодого ученого 2011. Актуальные проблемы науки глазами молодежи» (Мурманск, 2011), на расширенном заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных (ННГУ)

и кафедры общей химии НижГМА Росздрава (2011). По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Благодарности

Автор выражает сердечную, искреннюю благодарность своим научным руководителям, В.Н. Крылову и A.C. Гордецову, за мудрые советы, терпение и понимание. Автор работы признателен д.б.н. К.Н. Конторщиковой, д.м.н. Ю.В.Зимину, д.б.н. Т.Г. Щербатюк, к.б.н. О.М. Московцевой, к.х.н. C.B. Зиминой, к.м.н. И.А. Медянику, асп. А.И. Сазанову (НижГМА), О.Н. Груздевой (региональный ДЭНАС - центр) за оказанную консультационную помощь и сотрудничество при получении материала для настоящего исследования. Автор высказывает особую признательность своей семье за помощь и поддержку.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 133 страницах и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты и их обсуждение, заключение, выводы, библиографический список (233 источника). Диссертационная работа содержит 9 рисунков, 12 таблиц и приложение.

1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Инфракрасная спектроскопия

1.1.1. Суть метода ИК-спектроскопии

ИК-спектроскопия - раздел молекулярной оптической спектроскопии, изучающий спектры поглощения и отражения электромагнитного излучения в ИК-области, т.е. в диапазоне длин волн от 10" до 10" м (Химическая энциклопедия, 1990). ИК-спектр представляет собой сложную кривую с большим числом максимумов и минимумов. Полосы поглощения появляются в результате переходов между колебательными уровнями основного электронного состояния изучаемой системы. Спектральные характеристики (положения максимумов полос, их полуширина, интенсивность) индивидуальной молекулы зависят от масс составляющих ее атомов, строения, особенностей межатомных сил, распределения заряда и др. Поэтому ИК-спектры отличаются высоким уровнем индивидуальности, что и определяет их ценность при идентификации и изучении строения соединений (особенно органических) В целом ИК-спектры характеризуют энергетическое состояние молекул, касающееся, в первую очередь, колебательных и вращательных движений ядер атомов и молекул. Поэтому их часто называют молекулярными спектрами, а метод относят к нанотехнологиям. В области волновых чисел 1400-700 см"1 ИК-спектры многих органических молекул настолько сложны, что отнесение абсорбционных полос к отдельным элементам строения вызывает значительные трудности даже при наличии обширного экспериментального материала (Kr äfft et al, 2004). Эту область используют для идентификации веществ, причем любые два вещества могут быть признаны идентичными, если их ИК-спектры в этой области полностью совпадают во всех деталях. Поэтому данную область спектра органических веществ (в том числе и входящих в состав

биологических жидкостей и тканей) называют дактилоскопической («фингерпринт») (Общий практикум по органической химии, 1965, КтаШ е1 а1, 2004).

В ИК-спектроскопии установлены четкие эмпирические закономерности, связывающие структуру вещества с параметрами спектра, что дает возможность решать с помощью ИК-спектроскопии различные задачи в области идентификации и установления строения соединений, анализа смесей, кинетического контроля за ходом реакции, изучения внутри- и межмолекулярного взаимодействий (Кудрявцева, 1981).

ИК-спектр возникает при поглощении веществом электромагнитного излучения с длиной волны от 2.5 до 25 мкм (4000-400 см"1). Поглощенная энергия преобразуется главным образом в энергию колебания атомов. И молекула переходит из исходного нулевого колебательного состояния в возбужденное.

Молекула, находящаяся на нулевом колебательном уровне, не является жесткой покоящейся структурой, составляющие её атомы постоянно колеблются. Существует два основных типа колебаний: валентные - ритмические движения атомов вдоль оси связи, деформационные - колебания, при которых атомы отклоняются от оси валентной связи (Гранберг, 1984).

Валентные и деформационные колебания называют нормальными, которые происходят с определенными квантовыми частотами. Молекула поглощает инфракрасное излучение с такими частотами, с какими колеблются отдельные связи в молекуле. В результате анализа всех частот прошедшего через вещество излучения появляется информация о частотах валентных и деформационных колебаний связей, имеющихся в молекуле (МаЬаёеуап, 1996).

ИК-спектр представляет собой график зависимости относительной интенсивности прошедшего через вещество излучения в процентах (%

пропускания) от длины волны в микрометрах или волнового числа в см" которое часто (но не совсем верно) называют частотой (рис.1).

4Ш 2000

Рис.1. ИК - спектр децена-1

Хотя поглощение энергии квантовано, ИК-спектр состоит не из узких тонких линий, а из полос, т. к. каждое изменение колебательной энергии сопровождается изменением вращательной энергии.

Количество возможных колебаний в молекуле и число полос в ИК-спектре поддаются некоторому прогнозированию. В нелинейной молекуле, состоящей из п — атомов, возможны Зп-6 нормальных колебаний, способных поглощать ИК-излучение, а в линейной - Зп-5.

В делом, ИК-сггектры органических соединений содержат большой набор различных полос, многие из которых не поддаются расшифровке (МатисЬ, 1995).

Экспериментальные исследования большого числа молекул, обладающих одними и теми же химическими группами, показали, что независимо от изменений в остальных частях молекулы эти одинаковые группы поглощают энергию в узком интервале частот. Такие частоты получили название характеристических или групповых (Казицина, Куплетская, 1971, Кейтс, 1975). К ним относятся, например, колебания групп С-11, СН2, СН3. О-Н, N-1-1, Ш2:, ОС, С=0, Ы02, Р=0, Р-О-Р и др. (Кейтс, 1975). Наличие характеристических частот обусловлено тем, что в

таком колебании наибольшее участие принимает некоторая группа атомов, а вклад остальной части молекулы мал, хотя в каждом колебании изменяются длины связей и величины углов между ними. Таким образом, любое индивидуальное органическое вещество или смесь веществ имеют свои собственные неповторимые ИК-спектры, которые могут быть интерпретированы как качественно, так и количественно.

Определение структуры соединений по РЖ-спектру без привлечения других данных возможно в случае относительно простых соединений или при наличии эталонных РЖ-спектров. Обычно же с помощью РЖ-спектроскопии устанавливается наличие отдельных элементов структуры (Гранберг, 1984).

1.1.2. Аппаратура

Для регистрации РЖ-спектров используют классические спектрофотометры и фурье-спектрометры. Основными частями классического спектрофотометра являются источник непрерывного теплового излучения, монохроматор и неселективный приемник излучения.

Кювету с веществом (в любом агрегатном состоянии) помещают перед входной (иногда за выходной) щелью. Поток излучения делится на два луча, один из которых может проходить через кювету сравнения. В качестве диспергирующего устройства монохроматора применяют призмы из различных материалов (LiF, NaCI, KCl, CsF и др.) и дифракционные решетки. Последовательное выведение излучения различных длин волн на выходную щель и приемник излучения (сканирование) осуществляется поворотом призмы или решетки. Источники излучения - накаливаемые электрическим током стержни из различных материалов. В качестве приемников используют чувствительные термопары, металлические и

полупроводниковые термосопротивления (болометры) и газовые термопреобразователи.

Выходной сигнал имеет вид обычной спектральной кривой, регистрируемой либо непосредственно компьютерной системой, либо на бумажном носителе различных типов. Достоинствами приборов классической схемы являются простота конструкции, доступность, высокая воспроизводимость результатов и относительная дешевизна. Определенным недостатком является достаточно длительная (в течение минут) регистрация спектров и сравнительно невысокая (хотя и вполне достаточная для абсолютного большинства целей) разрешающая способность (до 0,1 см"1).

В фурье-спектрометрах отсутствуют входная и выходная щели, а в качестве основного элемента применяется интерферометр. Поток излучения также делится на два луча, которые проходят через образец и интерферируют между собой. Разность хода лучей варьируется подвижным зеркалом, отражающим один из пучков. Первоначальный сигнал зависит от энергии источника излучения и от поглощения образца и имеет вид суммы большого числа гармонических составляющих. Для получения спектра в обычной форме производится соответствующее фурье-преобразование с помощью встроенной ЭВМ. Достоинствами фурье-спектрометра являются быстрая (секунды и доли секунд) регистрация спектра и высокая разрешающая способность (до 0,001 см"1), однако имеются и недостатки - сложность изготовления прибора и его весьма высокая стоимость.

Все спектрофотометры снабжаются ЭВМ, которые производят первичную обработку спектров: накопление сигналов, отделение их от шумов, вычитание фона и спектра сравнения (спектра растворителя и материала кюветы), изменение масштаба записи, вычисление экспериментальных спектральных параметров, сравнение спектров с

заданными, дифференцирование спектров и т.д. Кюветы для ИК-спектрофотометров изготовляют из прозрачных в ИК-области материалов. В качестве растворителей используют обычно СС14, СНС13, тетрахлорэтилен, вазелиновое масло (Кейтс, 1975). Твердые образцы часто измельчают, смешивают с порошком КВг и прессуют таблетки. Для работы с агрессивными жидкостями и газами применяют специальные защитные напыления (ве, 81) на окна кювет.

Влияние воздуха устраняют вакуумированием прибора или продувкой его азотом. Образцы для исследования методом ИК-спектроскопии тщательно обезвоживают, так как вода разрушает солевую оптику и другие детали многих спектрофотометров. Техника работы подробно описана в монографии (Кейтс, 1975).

1.1.3. Примеиеиие ИК-спектроскопии в медицине

Метод ИК-спектроскопии широко используется в экспериментальной органической химии с середины прошлого века. Однако в медицинских исследованиях он практически не применялся в связи с необычайной сложностью состава и строения биологических структур. Поэтому известно лишь сравнительно небольшое количество научных работ, посвященных изучению и интерпретации ИК-спектров биологических жидкостей и тканей. Эти работы были начаты, как и во многих других случаях, сразу несколькими обособленными школами русских ученых.

Так, методом ИК-спектроскопии удалось впервые определить структуру пенициллина, в то время как другими методами этого сделать не удалось. В 1949 г. в Раковом институте Нью-Йорка этим методом были систематизированы соединения стероидного ряда, затем появились работы по ИК-спектрам кератина (Рапопорт, Балуева, 1963). Изучить ИК-спектры крови попытались Гейц и П.П. Пепиев (Рапопорт, Балуева, 1963), однако получить воспроизводящиеся результаты им не удалось в связи с низким

уровнем техники того времени. В 1963 г. появилась работа, в которой были

представлены результаты обследования детей по поводу

злокачественных заболеваний системы крови (острый лейкоз,

лимфогранулематоз, гипо- и апластическая анемия). В качестве одного из

методов диагностики была предложена РЖ-спектроскопия (Рапопорт,

Балуева, 1963). Запись спектров производилась на отечественном приборе

РЖС-14 выпуска 1957 г., который, естественно, не обладал необходимой

точностью и воспроизводимостью результатов. Сыворотка крови для

исследования подготавливалась следующим образом. На подкладку из

поваренной соли или хлорида серебра наносилась сыворотка, доведенная

предварительным выпариванием до вязкого состояния. Затем она

сушилась при температуре 47°С и нормальном давлении в течение суток.

Спектры поглощения записывались в области волновых чисел 2000-600 см" 1

, после чего анализировались по признаку наличия-отсутствия полос поглощения с максимумами при 1735, 1650, 1575, 1536, 1521, 1457, 1410, 1318, 1246, 1153, 1110, 1075 см"1. Определенных корреляций с клиническими анализами не найдено, достаточно корректные качественные или количественные выводы не приведены. Основной ошибкой авторов было длительное нагревание сыворотки крови, поскольку спектральные свойства биологических жидкостей в этом случае резко изменяются (особенно под действием горячей воды). Кроме того, большинство выбранных полос поглощения не являются характеристическими.

В 1972 г. Л.Л. Шафранским с сотр. был разработан способ диагностики опухолей костей путём иссечения ткани, приготовления препарата с последующим его исследованием - инфракрасным спектрофотометрированием (Шафранский и др., 1972). Целью изобретения было повышение точности диагностики, которое достигалось исследованием РЖ-спектров образцов кости. Спектры регистрировались на

спектрофотометре UR-20 (Carl Zeiss) в областях 1700-1400, 1200-1000 и 800-500 см"1. Было заявлено, что характер спектров здоровых тканей отличается от спектров злокачественных новообразований, но доказательства не приведены. Для исследования кусочек кости массой 11,5 г 2-3 мин промывали в теплой проточной воде и сушили в течение 6 ч при 50°С Затем образец тщательно растирали в агатовой ступке, брали навеску 1,5 мг, смешивали 300 мг КВг и снова растирали в агатовой ступке. Из полученной смеси в пресс-форме готовили таблетку, которую подвергали ИК-спектрометрии.

Значительно позже (в 1991 г.) данная работа продолжена в кандидатской диссертации (Верченко, 1991). Проба кости нагревалась 1,5 ч при 400°С, она становилась «озоленной». Автор утверждал, что при этом вся вода и органические вещества полностью удалены (что очень сомнительно). Проба растиралась с КВг, прессовалась на приборе UR-20 получались ИК-спектры. В спектрах найдены интенсивные полосы поглощения 1150-900, 650-500 см"1, которые автор относит к колебаниям

3 12

группы Р04 ", а также полосы с максимумами 1460, 1430, 880 см" (С03 "). К «неорганической» части спектра отнесены также полосы: 1460, 1430, 1120, 1080,1050,1030, 980, 880, 610, 540 см"1. Но половина указанных пиков относится к колебаниям связей фосфор-кислород, углерод-кислород органических соединений, что говорит о высокой термодинамической стабильности сложных фосфорсодержащих веществ. На основании изучения ИК-спектров были сделаны следующие воды: 1 - для здоровой кости и саркомы характерны одинаковые частоты, но интенсивность их различается, 2 - опухоли с высокой степенью минерализации менее злокачественны и наоборот, 3-е помощью ИК-спектров саркомы могут быть разделены на 3 группы, 4 - метод ИК-спектроскопии позволяет прогнозировать течение остеогенной саркомы. Таким образом, 1-й вывод опровергает мнение авторов работы (Рапопорт, Б ал у сна, 1963) о

появлении новых и исчезновении старых полос поглощения при норме и различных патологиях.

В 1980 г. были опубликованы данные по ИК-спектрам выделенных дифференциальным центрифугированием с последующим экстрагированием изооктанном высушенных в вакууме клеточных мембран органелл (Верболович и др., 1980), ИК-спектры записывали на спектрофотометре UR-20, образцы готовили в виде таблеток с КВг или в виде пленок. С помощью рассматриваемого метода были убедительно доказаны изменения вторичной структуры фосфолипидных мембран под действием наркотических агентов, применяемых при общей анастезии.

В частности, было показано, что поглощение в области 1130-1110 см"1, характерное для колебаний симметричных С-О- и Р-О-связей, после эфирно-кислородного наркоза было менее выражено по сравнению с передуральной анестезией. Полоса с максимумом при 1080 см"1 была отнесена к Р-О-связи РНК. Следует отметить, что работа (Верболович и др., 1980), так же как и (Верченко, 1991), была выполнена Алма-Ате в Институте клинической и экспериментальной хирургии Минздрава Казахской ССР.

В этом же году были описаны методики определения липидных фракций в сыворотке крови с помощью ИК-спектроскопии в работе, выполненной в Ленинградском институте акушерства и гинекологии АМН СССР (Исаков, 1980). Съемку спектров проводили на UR-20. После сравнения с обычными клиническими методами был сделан вывод, что метод ИК-спектроскопии позволяет с достаточной точностью определить содержание триглицеридов, эфиров холестерина, фосфолипидов и свободных жирных кислот в сыворотке крови. В авторском свидетельстве СССР (Исаков, 1980) разработан способ определения состава желчных камней, основанный на том, что образец камня обрабатывали хлороформом, в котором затем методом ИК-спектроскопии определяли

химический состав экстрагированной липидной фракции. Использовалась область спектра поглощения в интервале 2000-600 см"1, причем показано, что согласно быстро воспроизводимым результатам состав желчных камней незначительно изменяется в зависимости от географического района. Зарегистрирован и другой способ диагностики желчно-каменной болезни, разработанный в Сибирском филиале Всесоюзного научного центра хирургии АМН. Он заключается в исследовании ИК-спектров экстракта липидов, полученного обработкой желчи смесью хлороформа и метанола (Чупин и др., 1992, Грицких, 1990, Чупин, Грицких, 1993). После высушивания экстракт растворяли в СС14, раствор подвергали ИК-спектроскопии, определяли оптическую плотность реперных полос в области 1700, 1450 и 3620 см"1. Затем авторы применили прием, предложенный в работе (Кукош и др., 1995): определение соотношения оптических плотностей реперных полос поглощения. В качестве аналитического параметра авторы предложили соотношение плотностей полос с максимумами при 1700 и 1450 см"1 и при значении этого показателя, равном 1,4 и менее, а также при максимальном значении оптической плотности реперной полосы в области 3620 см"1 диагностировали холестериновую желчно-каменную болезнь.

Позднее диагностика желчно-каменной болезни по ИК-спектрам желчных камней и желчи была усовершенствована в работах (Страхов и др., Зубеев и др., 2006).

Автор небольшой обзорной работы по применению метода ИК-спектроскопии в медицине (Балаховский, 1995) подверг ранее полученные результаты исследователей серьезной критике. Так, он сообщил, что ему не удалось экспериментально подтвердить опубликованные данные. В частности, он усомнился в существовании пика поглощения 3620 см"1, который был приписан гидрату холестерина. Кроме того, отмечено отсутствие деталей выполнения методики, описания оборудования и даже

места выполнения исследований. Однако автор рассмотрел только данные публикации (Чупин, Грицких, 1993), а ссылок на аналогичные работы (Чупин и др., 1992, Грицких, 1990) не указал. В библиографическом списке также нет указаний на какие-либо изобретения. В то же время в обзоре приведены основные приемы и подходы к подготовке образцов для спектрального анализа (применение таблеток с КВг, высушивание сыворотки крови непосредственно на сапфировой пластинке, выполнение анализа растворов органических веществ), обсуждены диапазоны длин волн РЖ-спектра (1000-2500, 3000-4000, 5000 нм), а также дано понятие о других известных методах анализа с применением инфракрасных волн, например о фотометрии многократного полного внутреннего отражения.

Данный метод был позднее применен для разработки способа диагностики онкологических заболеваний (Антипов и др., 1998). Спектральный анализ осуществляли в условиях многократно нарушенного полного внутреннего отражения в ИК-области спектра, а заболевание идентифицировали по появлению в спектре полос поглощения в диапазоне частот 1500-3000 см"1. Так, при появлении полосы поглощения на частоте 1625 см"1 идентифицировали рак крови, полосы 1735 см"1 - рак молочной железы, 1580 см"1 - рак печени, 2864 см"1 - лимфогранулематоз.

В 1991 г. в изобретении (Чуднер, Воздвиженский, 1991) был представлен способ диагностики степени тяжести септического состояния у детей. Авторы проводили классическую ИК-спектроскопию высушенной капиллярной крови и при наличии полосы поглощения с максимумом при 1105-1095 см"1 диагностировали пресепсис, при 1080 см"1 - легкую форму, при 1040 см"1 - среднетяжелую форму и при 1010 см"1 -тяжелую форму сепсиса.

Однако, столь категоричные утверждения авторов изобретений (Антипов и др., 1998, Чуднер, Воздвиженский, 1991) крайне сомнительны, поскольку, во-первых, полосы поглощения авторами не

идентифицированы, во-вторых, появление или исчезновение определенных полос поглощения должно свидетельствовать о принципиальном изменении метаболизма в течение одной и той же болезни, что маловероятно, в-третьих, все названные полосы поглощения присутствуют в ИК-спектрах сыворотки крови любого человека (больного или здорового), в-четвертых, по одной полосе поглощения нельзя делать вывод об исчезновении или появлении какого-либо вещества, так как каждое индивидуальное соединение имеет в ИК-спектре десятки полос поглощения (а не одну), и, в-пятых, до настоящего времени в литературе нет никаких данных о продолжении или применении этих работ, что приводит к мысли об их научной и практической несостоятельности.

И.С. Балаховским (1995) рассмотрены возможности ИК-спектроскопии в создании быстрого .и. прямого, а возможно, и неинвазивного глюкометра, что очень важно для лечения сахарного диабета. Его механизм основан на подавлении\полос поглощения воды глюкозой и другими осмотически активными веществами (1000-2500 нм); совершенствовании метода определения холестерина и других липидов (3300-3700 нм) для создания наиболее точного метода определения этих веществ, который можно будет использовать в качестве референтного, а также для контроля при лечении, направленном на снижение уровня холестерина. То, что ИК-метод может быть точнее любого другого, не вызывает сомнения, так как в этом случае исключаются цветные реакции и концентрации липидов непосредственно связываются с величинами оптических плотностей, которые суть физические константы (Балаховский, 1995).

По данным работы И.С. Балаховского (1995) одним из перспективных направлений ИК-спектроскопии в лабораторной практике является использование ИК-техники для исследования крови новорожденных на присутствие токсичных продуктов — галактозы, фенилпировиноградной

кислоты и др. (2500-12000 нм). Преимущество ИК-спектров здесь заключается в том, что за одно исследование можно исключить сразу целый ряд токсичных продуктов, нет необходимости каждое вещество исследовать отдельно. Это важно потому, что наследственных болезней обмена много, каждая встречается редко, провести анализ на все возможные болезни всем детям чрезвычайно сложно (Балаховский, 1995).

Д. А. Пантелеичев и И.В. Ужеловский (2003) исследовали возможности использования ИК-спектроскопии для диагностики стоматологических заболеваний, разработав универсальную систему диагностики, основанную на анализе не отдельных компонентов биологической жидкости, а всей жидкости в комплексе. Данная методика позволяет улучшить систему массового обследования населения, выявления больных в ранней стадии и групп риска (Пантелеичев, Ужеловский, 2003).

Afanasyeva N.I. с сотр. (1998) используя волоконную оптику, применили метод ИК-спектроскопии для неинвазийной диагностики заболеваний кожи, в том числе и онкологических, изучая параметры ИК-спектров здоровой кожи с патологическими изменениями (2.5-25мкм) (Afanasyeva et al., 1998).

A.B. Каргополовым с сотр. (1996) были изучены возможности использования инфракрасной спектроскопии крови для диагностики и дифференциальной диагностики атипичных форм рассеянного склероза.. Были выявлены достоверные различия в количественных показателях степени поглощения электромагнитных волн инфракрасного диапазона кровью здоровых лиц, больных с рассеянным склерозом, сосудистыми, опухолевыми поражениями ЦНС, а также различия пространственных моделей спектров поглощения инфракрасного излучения, отражающие особенности процессов дестабилизации и деструкции белково-липидных

компонентов клеточных мембран при анализируемых формах патологии.

Установленные различия количественных и графических характеристик полос поглощения инфракрасного излучения используются в клинической практике для сокращения сроков обследования больных и повышения точности диагностики и дифференциальной диагностики атипичных форм рассеянного склероза (Каргаполов и др., 1996).

Внимания заслуживает обширная группа работ, в которых были использованы аппараты, измеряющие коэффициенты пропускания (КПР) электромагнитной энергии ИК-области спектра. Так, в 1993 г. были опубликованы материалы изобретения по экспрессному способу диагностики субклинического мастита (Ценкова, Кирилин, 1993). Поставленная цель достигалась тем, что проходящий через молоко световой поток раскладывали путем его пропускания через оптические светофильтры, например на шесть спектральных потоков с различными длинами волн от 0,6 до 2,0 мкм, и с помощью измерительной системы оценивали уровни КПР соответствующих длин волн. Способ обеспечивал своевременное диагностирование у животных мастита в начальной скрытой стадии.

Через 6 лет появился патент РФ Тверской медицинской академии, защищающий способ исследования биологических жидкостей и устройство для его осуществления (Каргаполов и др., 1999). Устройство, названное аппаратно- программным комплексом «Икар» 9/1, обеспечивает многократное облучение образца крови электромагнитными волнами ИК-диапазона, последующее измерение КПР и построение с помощью специальных компьютерных программ пространственных или горизонтальных графических профилей, отражающих свойства воды и компонентов крови в норме и при патологии. Применяемая методика описана также в изобретениях (Каргаполов и др., 2000). Главными недостатками метода являются: 1) отсутствие в рабочем процессе

общедоступного высокоточного стандартного ИК-спектрофотометра; 2) акцент на водную составляющую, а не на биохимическую часть крови, которая перед анализом разбавляется вдвое внешней водно-спиртовой смесью (при этом теряется оригинальная кластерная структура воды, происходит гемолиз эритроцитов и т.д.); 3) весьма произвольное обращение с масштабированием графических профилей сравнения; 4) бездоказательные заявления о возможности определения абсолютного содержания отдельных компонентов; 5) шестидесятикратное облучение крови ИК-лучами (известно, что уже повторная съемка ИК-спектра крови не дает абсолютного совпадения с первоначальным спектром, так как структура крови изменяется). Следует также отметить, что данные патенты уже не поддерживаются авторами. Тем не менее, на основе этих патентов и определения интервалов КПР до 2003 г. включительно новые изобретения Тверской медакадемии продолжали публиковаться. Так, были предложены способ скрининг-диагностики критических состояний при алкоголизме (Каргаполов и др., 2000), способ диагностики хронического аденоидита у детей и подростков (Калиниченко, 2001), способ дифференциальной диагностики ишемического и геморрагического инсульта в острейшем периоде (Яковлев и др., 2001), способ диагностики сахарного диабета (Каргаполов и др., 2003), способ дифференциальной диагностики сотрясения головного мозга и ушиба головного мозга легкой степени (Яковлев, 2003).

1.1.4. ИК-спектроскопия биологических жидкостей и тканей в диагностике различных заболеваний

Исследования по диагностике и контролю качества лечения различных заболеваний были начаты в Нижегородской государственной медицинской академии конце 80-х годов прошлого столетия. Первые изобретения были посвящены изучению ИК-спектров биоптатов тканей

легкого (Кукош и др., 1994, 1995, Гордецов, 1992) и предстательной железы (Гордецов, 1992, Кукош и др., 1994), причем для обезвоживания тканей применяли гексаметилдисилазан (ГМДС) или диметилформамид (ДМФА). Биоптат ткани в количестве 0,05-0,5 г помещали в пробирку с 2 мл ГМДС или ДМФА, нагревали с обратным холодильником на масляной, глицериновой или водяной бане при 100-140°С в течение 1-2 часов, удаляли растворитель, промывали образец ткани диэтиловым эфиром, высушивали на воздухе при комнатной температуре, оценивали визуально с целью предварительного заключения о злокачественности болезни (черный цвет - не рак, белый - рак (Кукош и др., 1994, Гордецов, 1992), снимали ИК-спектры поглощения в области 1200-1000 см"1 на спектрофотометрах типа 1Ж-20, 8ресогё-75-1К, Бресогс!-М80 или Регкт-Е1тег-577 в виде таблеток с КВг или суспензии с вазелиновым маслом в окошках с КВг или ZnSe. После этого для тканей легкого рассчитывали соотношение высот (Н) или оптических плотностей (О) полос поглощения с максимумами при 1160 и 1065 см"1. При значении этого показателя, равном 0,49 и менее, диагностировали рак легкого. Для тканей предстательной железы рассчитывали соотношение высот или оптических плотностей полос поглощения (Вю4о/Оюб5 и Опбо/ЕЬобб)- В случае, когда В104о/Оюб5 > а В1160/Г>1065 принимало любое значение от 0,2 до 1,2, диагностировали аденому предстательной железы. При Ою4о/Оюб5 > 0,7 и одновременно Вц6о/Оюб5 ^ 0,4 диагностировали рак предстательной железы. Приведенные отношения и выводы были верифицированы послеоперационными гистологическими исследованиями тканей большой группы больных. Впоследствии указанные полосы поглощения в ИК-спектрах тканей легкого (Арзыкулов, 1990), бронхов (Левинский, 1991) и кости (Верченко, 1991) были отнесены исследователями Алма-Атинской школы ученых к полосам поглощения неорганических фосфатов, хотя в той же области лежат и полосы фосфор-

кислородных связей органических соединений типа фосфолипидов, фосфорилированных белков и макроэргов (Общий практикум по органической химии, 1965, Казицина, Куплетская, 1971, Кейтс, 1975, Верболович и др., 1980, Afanasyeva et al., 1998). Следует подчеркнуть, что поскольку в качестве аналитических параметров были взяты относительные величины (D/D или Н/Н), зависимость от концентрации биоматериала в образце была практически исключена, поэтому отпала необходимость производить точное взвешивание биоптата ткани.

Метод ИК-спектроскопии был впервые применен в целях исследования бронхоальвеолярных смывов (БАС) при диагностике туберкулеза и рака легких (Гордецов и др., 1998, Гельфонд и др., 1997, Гельфонд, 1996, 2002). Очередным этапом исследования стала разработка наиболее эффективных способов математической обработки результатов ИК-спектров БАС, причем наиболее результативными оказались расчеты по программе Mat-Cad. Данные спектрограмм рассчитывали по базисной линии максимумов высот пиков в полосах поглощения 1180, 1165, 1155, 1150, 1140, 1080, 1070, 1050, 1040, 1025 см"1. Была установлена особая значимость спектроскопических показателей в полосах поглощения 1180 и 1165 см"1 и определена последовательность аналитических отношений высот пиков: 1180/1165, 1180/1080, 1180/1070, 1165/1070, 1165/1050, 1150/1025, 1140/1080, 1080/1070, 1070/1040. Введено понятие интегрального ИК-спектроскопического коэффициента, при значении которого ниже 0,8 диагностировали туберкулез легкого, а при значении, равном 0.8 или более - рак легкого. Значение интегрального коэффициента было выведено при статистической обработке приведенного ряда отношений в сравнении полученных результатов с окончательно установленными клиническими диагнозами. Установленная точность диагностики составила 90%. Изучение конфигурации ИК-спектрограмм БАС показало зависимость высоты пика поглощения с максимумом при

1105 см"1 от тяжести заболевания пациента вне связи с этиологией заболевания. Была рассчитана средняя гармоническая (xh) волнового числа при этой частоте. Полученный показатель сопоставляли с тяжестью состояния больного, распространенностью патологического процесса и показателями терапевтической динамики. Было найдено, что значение данного параметра менее 0,9 соответствовало удовлетворительному состоянию больного, интервал 1,0-1,3 - состоянию средней тяжести и более 1,4 - тяжелому состоянию.

Убедившись в необычайно высокой информативности области ИК-спектра 1200-1000 см"1, исследователи перешли к ИК-спектроскопическому исследованию сыворотки крови. К этому времени исследователями было установлено, что один образец высушенной крови можно использовать для съемки ИК-спектра только однократно. По-видимому, в процессе ИК-спектроскопии химические и волновые характеристики даже сухой крови или сыворотки крови in vitro могут измениться и цифровые значения аналитических параметров, извлеченные во время математической обработки спектров, полученные после одно-, дву-, троекратной и т.д. съемки, могут значительно отличаться друг от друга. Так, найдено, что даже кратковременное облучение крови во время терапевтических мероприятий in vivo влияет на свойства крови, что позволило найти критерии оценки эффективности низко интенсивного лазерного излучения при лазеротерапии (Смирнова и др., 1997, Смирнова, 1996). С этой целью у больного брали венозную кровь до и после сеанса лазерной терапии, высушивали ее при комнатной температуре, снимали ИК-спектры образцов, полученных в виде суспензии в тонком слое вазелинового масла между крышками из КВг на спектрофотометрах Specord-75 IR и Specord-M80. Больной оценивался как чувствительный к лазерному облучению в том случае, когда значение соотношения высот пиков (Н/Н) с максимумами при 1175 и 1140 см"1 до и после облучения

уменьшалось на 15% и более. Производилась клиническая оценка эффективности терапии, причем было установлено, что для 20% пациентов лечение лазеротерапией было неэффективным. В результате данной работы был сделан вывод, что спектральные исследования сыворотки крови, а особенно нативной крови, требуют особой тщательности и защиты образцов биоматериала от внешних факторов (световое, тепловое излучение, сушка при повышенных температурах, разбавление любыми растворителями, в том числе водой, эфиром и т.п.).

В целях увеличения точности диагностики злокачественных новообразований было использовано сочетание возможностей методов ИК- и УФ-спектроскопии (Гордецов и др., 1998). Образец венозной крови центрифугировали, помещали в кювету для последующего измерения спектра ее поглощения в области 430-715 нм. Затем сыворотку сливали и высушивали при комнатной температуре, сухой остаток размельчали и смешивали с вазелиновым маслом, снимали ИК-спектр поглощения образца, рассчитывали значение отношения высоты пика с максимумом при 1165 см"1 к высоте пика с максимумом при 1070 см'1 (Нп65/Н107о) и при наличии полос поглощения при 680и715нми значении отношения 0,43 и менее диагностировали злокачественное новообразование в организме человека. Следует отметить, что в некоторых случаях авторы наблюдали переизлучение энергии сывороткой крови (отрицательные пики в области 660-670 нм). Это происходило только с кровью пациентов, больных раком. Специальными опытами выявлено, что ИК-спектры сыворотки крови, предварительно использованной для УФ-спектроскопии, несколько отличаются от ИК-спектров образцов сыворотки, не подвергавшихся воздействию УФ-света, однако эти изменения практически не влияют на диагностические заключения. Достоверность выводов, полученных при статистической обработке результатов и ретроспективном сравнении с клиническими диагнозами, составила 97%. При продолжении работы

(Гельфонд и др., 1997) авторами был найден новый способ оценки степени тяжести состояния больных бронхолегочными заболеваниями (Гордецов и др., 2001).

1.1.5. Математическая обработка результатов, полученных методом ИК-спектроскопии сыворотки крови

Информация, которую получают из ИК-спектров высушенной сыворотки крови, настолько достоверна и объемна, что может быть использована исследователями различными способами; они могут быть основаны на разных методах и уровнях математической обработки математических результатов (цифровых рядов). Эти цифровые ряды, как уже было показано, вычисляются по одной и той же схеме — получением отношений высот пиков, причем размеры, сочетания и многообразие этих рядов практически ничем не ограничены. Поэтому точность, чувствительность и специфичность способов диагностики зависят в основном от математического подхода к расчетам. Так, дополнительно к описанным способам диагностики бронхолегочных заболеваний была рассмотрена роль ИК-спектроскопии сыворотки крови в комплексной диагностике рака легкого в плане сравнения спектральных характеристик крови до и после хирургического вмешательства, что позволяло достоверно судить о степени его эффективности и радикальности (Федунь и др., 2002, Федунь, 2002). Кроме того, с помощью специальных математических программ были вычислены «образы болезней» рака, туберкулеза легких и неспецифических заболеваний легких (Игнатьев и др., 2001, Игнатьев, 2001, 2002), а также разработан способ диагностики потенциально активного туберкулеза органов дыхания (Гордецов и др., 2008, Мамаева и др., 2006), подтвержденный рядом биохимических анализов (Смирнов и др., 1999, Смирнов, 1997).

Цифровые данные для получения «математических образов» туберкулеза, рака и хронических неспецифических заболеваний легких (ХНЗЛ) были найдены описанным выше способом путем вычисления соответствующих отношений высот пиков с максимумами при 1170, 1150, 1140, 1070 см"1 (Игнатьев и др., 2001, Игнатьев, 2001, 2002). При этом за оси х, у, z трехмерных «образов» были взяты соответствующие отношения 1170/1070, 1150/1140 и 1125/1025 для пространственного построения и взаимного разделения «образов» рака и туберкулеза легких и отношения 1170/1100, 1150/1140 и 1125/1025 см_1для разделения «образов» рака легких и ХНЗЛ. Каждый конкретный образец сыворотки крови обозначался одной точкой внутри или вне соответствующего «образа болезни» состоящего из сотен точек эталонных образцов сывороток крови, принадлежащих определенным клинически выверенным и подтвержденным формам заболеваний легких. Следует отметить, что «образы болезней» не пересекались в пространстве друг с другом и с «образом здоровья» (рис. 2,3).

Рис. 2. ИК-спекгросконичсскне «образы» сыворотки крови: ХНЗЛ; туберкулеза легких; рака легких

Рис. 3. ИК-сиектроскопические «образы» сыворотки крови: туберкулеза легких; рака легких; нормы

Установлена высокая чувствительность диагностики (90%) при специфичности 97%. Найдено также, что «образы болезней» зависят от возраста пациентов, В работах (Гордецов и др., 2008, Мамаева и др., 2006) вычислены «образы» активного и потенциально активного туберкулеза легких.

Исследование сыворотки крови методом ИК-спектроскопии позволило разработать способ оценки состояния больного очаговой склеродермией с целью оптимизации ее лечения (Смирнов и др., 1999, 2000, Смирнов, 1997, Чиненкова, 2001, Пересторонина, 2002).

К первой КРГ относили больных с распространенной бляшечной склеродермией либо бляшечной склеродермией с единичными очагами, но выраженной активностью процесса и наличием выраженных иммунологических нарушений, а также с системной склеродермией, ко второй КРГ - больных с ограниченной бляшечной склеродермией с умеренно выраженной степенью активности и при отсутствии выраженных иммунологических нарушений, к третьей КРГ - больных с отсутствием активности процесса и с очагами, находящимися в стадии атрофии.

Исследование ИК-спектров сыворотки крови позволило разработать новый способ дифференциальной диагностики дифтерии, ангины и инфекционного мононуклеоза (Гордецов и др., 1999, Краснов и др., 2002, Краснов, 2001, 2002, 2009).

В работах (Гордецов и др., 1999, 2003) найдена взаимосвязь изменений параметров ИК-спектрального анализа сыворотки крови с уровнем нарушения метаболических процессов при инфекционной патологии у детей.

Логическим продолжением исследований было изучение ИК-спектров сыворотки крови детей, перенесших дифтерийную инфекцию с последующими осложнениями, вызванными дифтерийным токсином. Дальнейшее развитие направления привело к появлению новых способов диагностики - оценке степени тяжести заболеваний миокарда (в том числе у детей) (Гордецов и др., 1999, 2000, 2003, Винярская и др., 2001, Винярская, 2000, Лукушкина и др., 2000).

Значительным шагом вперед было построение дифференциально-диагностических профилей комплексов спектральных параметров различных болезней с использованием шести осей (X, 8, Я, С), ММ, М), весьма облегчающих технику определения конкретных заболеваний и уточняющих сам диагноз (рис. 4) (Винярская и др., 2001, Винярская, 2000).

Форма профиля указывает на наличие и тяжесть конкретного заболевания. Проведена статистическая обработка результатов с вычислением их специфичности, точности и чувствительности. Найдено, что увеличение показателя X (1125/с) коррелирует со степенью расширения левой границы сердца, приглушенностью тонов, выраженностью симптомов недостаточности кровообращения, нарастанием уровня ферментных маркеров поражений миокарда - лактатдегидрогеназы (ЛДГ), креатинфосфокиназы (КФК), повышением миоглобина, а также иммуноглобулинов класса в (^в).

X S X 8

м fjmL R - tffflk '

V\ik.. -JB \»к JB

4ШW :

ММ о ММ о

Хронический кардит Обострение диффузных болезней

$

Рис. 4. Дифференциально-диагностические профили комплекса спектральных параметров при хроническом кардите и обострении диффузных болезней соединительной ткани

Повышение показателя S (1100/с) сопряжено с увеличением частоты сердечных сокращений (ЧСС), систолического артериального давления (САД), повышением уровня ферментов - аспартатаминотрансферазы (ACT), ала- нинаминотрансферазы (АЛТ), ЛДГ, КФК, а также IgG. Снижение показателя R (1165/1070) имеет корреляционную связь с жалобами детей на слабость и кардиалгии, повышением ЧСС, САД, а также с нарастанием уровня острофазных показателей воспалительного процесса — а2-глобулинов, гаптаглобина и С-реактивного белка. Увеличение показателя Q (1070/с) также отражает динамику маркеров поражения миокарда — повышение ЛДГ, миоглобина и маркеров воспалительного процесса (гаптоглобина, С-реактивного белка). Повышение показателя ММ (максимальная величина всех показателей, вычисляемых как отношение высот пиков друг к другу) коррелирует со снижением значений САД, степенью недостаточности кровообращения и увеличением уровня у-глобулинов.

В работе (Гордецов и др., 2003) найден способ диагностики острого лейкоза, причем следует отметить, что отношение высот полос

поглощения 1165/1070 ем"1 в ИК-спектрах сыворотки крови принимает самые меньшие значения (менее 0,25) по сравнению с тем же отношением параметров сывороток крови больных со всеми другими изученными патологиями. Вэтой связи способ представляется весьма надежным и простым, поскольку острый лейкоз в ИЬС-спектре сыворотки крови характеризуется резким уменьшением высоты пика при 1165 см"1 и столь же резким увеличением высоты пика при 1070 см"1.

С помощью метода ИК-спектроскопии сыворотки крови удалось успешно диагностировать пиелонефрит у беременных (Гордецов и др., 2003, Кокая, 2005). Для анализа были использованы те же высоты пиков, что и в работах (Гордецов и др., 1999, Краснов и др., 2002, Краснов, 2001, 2002, 2009), только вместо высоты пика 1130 взята высота пика 1125 см"1.

Метод ИК-спектроскопии сыворотки крови весьма успешно применяется в целях установления прогноза течения и оценки эффективности лечения неспецифического язвенного колита у детей (Федулова и др., 2003, 2004, 2009, Федулова, 2002, 2003). Эффективность терапии оценивается по динамике изменения параметра R (1165/1070 см"1). При изменении R в сторону уменьшения проводимая терапия становится неэффективной, а в сторону увеличения - эффективной. Уменьшение R коррелирует с усилением выраженности признаков хронизации болезни (с развитием склеротических изменений стенки толстой кишки, коэффициент корреляции г=-0,9; наличием псевдополипоза, г=-1,0; эндоскопической активностью, г=-0,8).

В патентах (Гордецов и др., 2005, 2006) и публикациях (Насонов, 2002) описаны способы диагностики патологии печени и прогнозирования возможности хронизации гепатитов. Исходя из цифровых данных ИК-спектров сыворотки крови вычисленных по частотам поглощения 1180, 11165. 1160, 1150, 1130, 1070, 1025 см"1, найдены трехмерные «образы» патологий печени и «образ» состояния нормы в виде многогранников с

определенными границами (Гордецов и др., 2005). Получено надежное отличие параметров при вирусных гепатитах, циррозе и раке печени и норме. Риск хронизации устанавливали на основании динамики перемещения аналитических точек в поле графиков вычисленных с помощью авторских компьютерных программ (Гордецов и др., 2006).

В патенте (Гордецов и др., 2005) представлены работы по диагностике заболеваний предстательной железы. РЖ-спектроскопические данные сыворотки крови были переведены в графические «образы» аденомы и рака предстательной железы, которые уверенно разделялись с «образом» нормы. Подобный подход позволил разработать и способ дифференциальной диагностики нарушений сперматогенеза (Гордецов и др., 2009).

Аналогично при построении соответствующих инфракрасных «образов болезней» были дифференцированы фиброзно-кистозная мастопатия и рак молочной железы (Игнатьев и др., 2005).

На базе Городской клинической хирургической больницы №7 успешно апробированы три способа дифференциальной диагностики форм острого панкреатита и прогнозирования исхода деструктивного панкреатита по ИК-спектрам сыворотки крови, причем были вычеслены эталонные диагностические «образы» отечной и деструктивной форм острого панкреатита, стерильного и инфицированного панкреонекроза (Гордецов и др., 2005, Петров, Гордецов, 2006, Петров и др., 2004, 2005, 2007, Петров, 2005). Новым шагом вперед было использование регрессионного анализа - одного из методов статистического моделирования. Моделью в данном случае явилось уравнение регрессии, коэффициенты которого рассчитывались в ходе анализа.

ИК-спектроскопическое исследование крови позволило также разработать способ оценки состояния сердечно-сосудистой системы у детей с инсулинзависимым сахарным диабетом (Гордецов и др., 2005) и

способ диагностики артериальной гипертензии (Гордецов и др., 2005, Лоенко, 2006).

В настоящее время проводятся исследования, связанные с разработкой способов диагностики заболеваний головного мозга, поскольку ИК-спектроскопия сыворотки крови может явиться надежным неинвазивным научно-практическим способом решения этой весьма актуальной задачи. Описание способов диагностики было опубликовано в работах (Гордецов и др., 2005, 2008, Бояринов и др., 2005, Лебедь, 2005). Так, в результате анализа данных ИК-спектроскопии сыворотки крови установлено, что о высокой вероятности новообразования головного мозга свидетельствует наличие в ИК-спектре следующих соотношений высот пиков поглощения: 1170/1160<0,32; 1170/1150<0,29; 1165/1160<0,71; 1165/1150<0,64. Отмечено, что для скрининг-диагностики новообразований головного мозга возможно использование каждого из указанных отношений в отдельности. Впоследствии был найден диагностический профиль комплекса спектральных параметров для выявления опухолей головного мозга (рис. 5) (Гордецов и др., 2008).

В процессе работы исследованы образцы сыворотки крови 198 больных, проходивших лечение в Городской клинической больнице №39 Н. Новгорода. Позднее возможность применения ИК-спектроскопии сыворотки крови в скрининговой диагностике объемных процессов головного мозга была независимо подтверждена в работе (Соколов и др., 2006).

В 2011 году был разработан способ определения рецидива злокачественного новообразования головного мозга в послеоперационном периоде (Гордецов, 2011).

Рис. 5. Диагностический профиль комплекса ИК-спектроскопичсских параметров сыворотки крови в норме и при наличии патологии: норма; новообразования головного мозга; 0-3,2 - отношения высот пиков полос поглощении

Также проведены исследования по ИК-спектроскопии злокачественных опухолей головного мозга с применением в качестве биоматериала тканей опухолей (Кrafft et al, 2004, 2006, Steiner el al, 2003). Предложена новая схема классификации новообразований данного типа, основанная на обработке данных ШС-спектров методом линейного дискриминантного анализа (Кrafft et al, 2006).

В 2004 г. Гордецов A.C. - один из авторов проведенных работ большого коллектива ученых Нижегородской государственной медицинской академии но общему банку данных ИК-спектроскопий сыворотки крови 723 больных объединил все полученные результаты «рамочным» патентом (Игнатьев, 2005).

В публикации (Комаров и др., 2006) приведены данные по применению метода ИК-спектроскопии для диагностики различных заболеваний в условиях Центральной больницы г. Павлово Нижегородской области. Показано, что при диагностике онкологических заболеваний выявлены хорошие результаты: чувствительность 86,6±6,2%, специфичность 97±1,2% и точность 96±11,4%. Был сделан вывод, что исследование спектроскопических характеристик сыворотки крови расширяет диагностические возможности в онкологии и позволяет отбирать больных для дальнейшего детального обследования.

В 2001 г. Министерством здравоохранения РФ были изданы Методические рекомендации по использованию инфракрасной спектроскопии бронхоальвеолярной лаважной жидкости и сыворотки крови для дифференциальной диагностики туберкулеза и рака легких (Гордецов и др., 2001), а в 2006 г. Нижегородским НИИ детской гастроэнтерологии было получено регистрационное удостоверение по применению ИК-спектроскопии сыворотки крови для оценки эффективности терапии неспецифического язвенного колита у детей (Оценка эффективности терапии..., 2006). Имеются также методические рекомендации по восстановительному лечению больных ограниченной склеродермией (Смирнов, Гордецов, 2004).

1.1.6. Основы и логика медико-диагностического применения метода ИК-спектроскопии

В краткой форме они могут быть представлены следующим образом (Гордецов, 2002):

1) Изменениям организма на клеточном, а затем и на органном уровне должны предшествовать изменения химического состава биологических жидкостей и тканейвызванные определенным «пусковым сигналом (физическими, в том числе электромагнитньми, химическими,

биологическими, в том числе бактериологическими, вирусными и другими воздействиями).

2) Кровь проходит через все органы и ткани, получает и идеально отражает динамику изменений химической ситуации тела.

3) Живой организм - гармоничная система органов и тканей, в которых постоянно реализуются блоки параллельных и последовательных химических превращений многих тысяч сложнейших и сравнительно простых соединений - метаболитов.

4) Концентрации химических соединений в здоровых органах и тканях (в том числе и крови) или здоровом организме в целом количественно, а иногда и качественно не равны их концентрациям в патологическом состоянии.

5) Отдельные патологические состояния органа, ткани или организма в целом смещают динамическое равновесие основных метаболитов крови в разной степени и на разную глубину, что влечет за собой соответствующие изменения относительных фоновых значений параметров инфракрасных спектров крови. Суммарные изменения абсолютных и относительных концентраций веществ (а следовательно, и соответствующих фоновых значений параметров инфракрасных спектров крови) и в этих псевдоравновесных химических состояниях зависят от степени, тяжести и вида заболевания, пола и возраста больного.

6) Изменения концентраций химических соединений и фоновых параметров спектров крови имеют место как в случае инфекционных заболеваний, вызванных вирусами или бактериями, так и в случаях органических патологических изменений или механических повреждений органов и тканей.

7) При наличии современных инфракрасных спектрофотометров, вычислительной техники, пакета специальных компьютерных программ и соответствующего ретроспективно стопроцентно верифицированного из-

росс 'л> »п госу£ г->~- ^'--чь

БИЬЛ V, -11 ЕК.А

вестными клиническими методами банка относительных фоновых значений инфракрасных спектров крови в норме и при различных патологиях становится возможным создание соответствующих «образов» здоровья и патологий в двухмерном или трехмерном пространстве.

8) Задача построения «образов болезней» решается путем вычисления математических рядов частных от деления друг на друга оптических плотностей или высот определенных полос поглощения в инфракрасных спектрах сыворотки крови с последующим выбором диагностически значимых параметров. Суммарное математическое выражение относительных фоновых значений инфракрасного спектра сыворотки крови пациента превращается в одну точку в двух-, трех- или п-мерном пространстве, где осями координат служат отношения высот пиков аналитических полос поглощения. Если эта точка укладывается в графически выраженную группу здоровья, с помощью компьютера делается вывод о том, что болезнь отсутствует. Если же индивидуальный показатель пациента входит в плоский или пространственный «образ болезни», то делается вывод о форме и степени тяжести заболевания. В зависимости от поставленой задачи применяются разные формы математического и графического сопровождения результатов анализа. Это могут быть числовые ряды, группы отношений, граммы, плоские фигуры, округлые объемные тела объемные многогранники. Возможны и другие способы математической обработки. Следует отметить, что все множества точек сформированые при исследовании более чем 10 ООО верифицированных больных и здоровых людей (работа ведется более 30 лет и успешно продолжается в настоящее время).

Из анализа литературных данных следует, что ИК-спектроскопия находит широкое применение в медицине в качестве неинвазивного и точного метода диагностики различных заболеваний, а также применяется для оценки эффективности терапевтических воздействий. Однако

открытым остается вопрос идентификации фосфорсодержащих соединений плазмы крови, изменение содержания которых и регистрирует ИК-спектроскопия. Влияние современных видов терапевтических воздействий вызывает изменение соотношений фосфорсодержащих соединений в плазме крови, что приводит к изменению, а часто и к нарушению энергетического обмена организма, и не всегда вызывает положительный терапевтический эффект. Поэтому исследование особенностей ИК-спектров крови опухоленосителей при проведении современных терапевтических мероприятий для выявления наиболее эффективных и безопасных методов диагностики и лечения онкологических больных в настоящее время остается актуальным.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования

Работа выполнена на кафедре физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского и кафедре общей химии Нижегородской государственной медицинской академии. Эксперименты выполнены на 215 белых нелинейных крысах (самцы, самки) массой 250±20 г. Животных содержали в полипропиленовых клетках размером 32x22x9,5 см, покрытых железной проволочной сеткой с расстоянием между прутьями 0,75 см. Животные получали корм и водопроводную воду без ограничений. Эксперимент проводился в соответствии с требованиями нормативных правовых актов, регламентирующих выполнение исследований по безопасности и эффективности фармакологических веществ в РФ (Приказ МЗ РФ «Об утверждении правил лабораторной практики» № 267 от 19.06.2003 г.) и международных правил правовых и этических норм использования животных.

Моделирование онкогенеза проводили посредством трансплантации крысам опухоли. В первой и третьей серии эксперимента использована экспериментальная модель опухолевого роста - лимфосаркома (ЛФС) Плисса (Плисс, 1961), приобретенного в НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (г. Москва), изучение которого продолжается более полувека и не закончено на сегодняшний день (Васильев и др., 2009).

ЛФС Плисса - соединительнотканная опухоль, получена в 1958г. после перевивки опухоли, возникшей у крысы, получавшей 3.3-дихлорбензидин. ЛФС состоит из мягких, округлой формы клеток, большая часть которых занята ядром. Хроматин располагается главным образом в периферической

зоне ядра. Ядрышки крупные, гиперхромные. Цитоплазма опухолевых клеток отличается умеренной базомелией.

Опухоль «агрессивна», обладает ярко выраженным инфильтративным ростом в пограничные соединительную, жировую и мышечную ткани. Метастазы на поздних сроках развития поражают селезенку. В опухоли встречаются очаги некроза, которые отдельных участках сливаются (Экспериментальная оценка..., 1998).

Штамм ЛФС Плисса пассировался на крысах в возрасте 3 месяцев. Опухоль брали для инокуляции крысе - реципиенту на 14 день развития. Взвесь опухолевых клеток в физиологическом растворе (1:3) объемом 0,5 мл вводили подкожно в область правого бедра.

Модель неоплазии во второй серии исследования создавали путем перевивки опухолевого штамма рака молочной железы крысы (РМК-1) и гепатомы Зайделя (Г-3), приобретенных в Онкологическом научном центре им. H.H. Блохина РАМН (г. Москва), обладающих высокой чувствительностью к используемым на данном этапе исследования химиопрепаратам (Ларионов, 1962).

РМК-1 - соединительнотканная опухоль, получена в 1958г, после перевивки опухоли, спонтанно возникшей у беременной самки-крысы, в возрасте 10 месяцев. РМК-1 состоит из мелких, темных, со слегка эозинофильной протоплазмой клеток. Ядра клеток пузырьковидные, бедные хроматином. В эпителиальных тяжах - большое число псевдожелезистых полостей с образованием криброзных структур. Строма опухоли рыхлая (Коноплев, Лагова, 1960).

Кусочки опухолевой ткани РМК-1 (диаметр 1мм) с физиологическим раствором (0.5мл) вводили подкожно в область правой подмышечной впадины крысе реципиенту (крысам-самкам). Животных включали в эксперимент на 45-е сутки после перевивки опухоли, объем которой к этому времени достигал 6—8 см3.

Асцитная форма гепатомы Зайделя была получена внутрибрюшинной перевивкой гепатомы, возникшей после ведения ДМБА (Диметоксибензальдегид). Опухолевые клетки этого штамма располагаются в виде отдельных колоний, состоящих из 7-15 клеток. Такие клеточные комплексы образуют структуры, отдаленно напоминающие строение печеночной балки.

Штамм Г-3 пассировался на крысах в возрасте 3-х месяцев. Г-3 брали на 5 сутки после трансплантации штамма. Внутрибрюшинную асцитную жидкость Г-3 объемом 0,3 мл вводили крысам-самцам подкожно в область правого бедра.

Исследовали влияние следующих видов воздействий:

1 .В первой серии эксперимента:

- янтарной кислоты (ЯК);

Учитывая плохую способность к проникновению через мембраны янтарной кислоты, а также возможность раздражения слизистой желудочно-кишечного тракта, использовали её комплекс с олигосахаридом хитозана (ОХ), способного легко абсорбироваться в кишечнике и быстро попадать в системный кровоток.

- олигосахарида хитозана сукцината (ОХС);

- олигосахарида хитозана сукцинат-аскорбата (ОХСА) (ТУ 9289004-57184729-03), в котором олигосахарид хитозана (70%), сукцината (15%) и аскорбата (15%).

Исследуемые вещества животным, крысам - самцам, вводили с помощью зонда в желудок в виде раствора в дозе 100 мг/кг веса ежедневно (7 дней). Доза, способ и курс введения веществ были установлены согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000) и работами В.Н. Анисимова, М.Н. Кондрашовой (1979), C.B. Цвиренко и др. (1987), Н.И. Федотчева и др. (1997). Влияние янтарной кислоты и её производных на организм

экспериментальных животных в условиях окислительного стресса изучали во время общего периода (с 6-го дня) начальной фазы роста ЛФС Плисса.

2.Во второй серии исследования:

- доксорубицина (1,4-гидрооксидауномицин);

- 5-фторурацила (2,4-диокси-5-фторпиримидин);

- озонированного физиологического раствора (ОФР)

В эксперименте использованы: 5-ФУ производства ООО «ЛЭНС-ФАРМ» ЗАО «Верофарм» (г. Москва) в ампулах по 5 мл 5% раствора в дозе 500 мг/л, внутримышечно, общим курсом 10 дней (5 воздействий через день); ДР производства ООО «ЛЭНС-ФАРМ» ЗАО «Верофарм» (г. Москва) в ампулах по 10 мг лиофилизированного порошка в дозе 0,04 мг на особь, внутрибрюшинно, общим курсом 10 дней (5 воздействий через день).

Доза, способ и курс введения веществ были установлены согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000) и работами Н.И. Переводчиковой (2005).

ОФР получали барботированием 0,9% №С1 озоно-кислородной смесью с помощью серийного отечественного генератора озона фирмы «Квазар» (Н.Новгород). Концентрацию озона в физиологическом растворе определяли с помощью серийного отечественного анализатора концентраций «ИКОЖ-5» (Киров). Воздействия ОФР осуществлялось сразу после барботирования. ОФР вводили внутрибрюшинно, в объеме 0,02 мл с дозой озона 20 мкг, продолжительностью общего курса 11 дней (6 воздействий).

3.В третьей серии работы:

- СКЭНАР-воздействия;

- ДЭНС-воздействия.

Воздействие производилось системно, для чего использовалась специально сконструированная клетка, пол которой состоял из металлических электродов, к которым подключался через внешний выход прибор СКЭНАР (модель «СКЭНАР 97.4+», ОКБ «Ритм», г. Таганрог). Влияние ДЭНС, СКЭНАР организм экспериментальных животных в условиях окислительного стресса изучали во время общего периода (с 8-го дня) начальной фазы роста ЛФС Плисса.

Животные с ЛФС Плисса, подвергались 15-минутному СКЭНАР -воздействию, с частотой 80 Гц, в течение 5-ти дней, с 8-го дня после трансплантации штамма;

Крысам опытной группы ДЭНС-воздействие осуществляли выносным электродом аппарата «ДЭНАС» (ООО «Региональный центр адаптивно - рецепторной терапии», г. Екатеринбург), используя прямую контактную проекцию на место трансплантации штамма опухоли. Животные с ЛФС Плисса, подвергались 15-минутному ДЭНС-воздействию, с частотой 77 Гц, в течение 5-ти дней, с 8-го дня после трансплантации штамма.

Способ и курс проведения СКЭНАР, ДЭНС были установлены согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2004).

2.2. Схема эксперимента

Основные серии исследования и количество экспериментальных животных представлены в табл. 1.

На следующий день после окончания манипуляций животным проводили эвтаназию под эфирным наркозом. Исследованию подвергалась плазма крови, полученная путём центрифугирования цельной гепаринизированной крови в течение 15 минут при 3000 оборотов в минуту.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Красникова, Ольга Владимировна

ВЫВОДЫ

1. ИК-спектры плазмы крови здоровых животных и животных-опухоленосителей имеют разные спектральные характеристики, соответствующие разному содержанию фосфорсодержащих соединений (нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфорных кислот и их производных).

2. Введение животным с ЛФС Плисса янтарной кислоты и её производных в дозе 100 мг/кг общим курсом 7 дней не вызывает нормализации соотношений нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфатов в плазме крови экспериментальных животных.

3. Комбинированное введение озонированного физиологического раствора (с дозой озона 20 мкг на особь, 6 процедур через день) с доксорубицином (в дозе 0,04 мг на особь, 5 процедур через день) животным с РМК-1, а также комплексное введение озонированного физиологического раствора (с концетрацией озона 0,2мг/л, 6 процедур через день) и 5-фторурацила (с концентрацией 500 мг/л, 5 процедур через день) животным с Г-3, нормализует параметры ИК-спектров плазмы крови экспериментальных животных.

4. Применение СКЭНАР-, ДЭНС-воздействий не вызывает изменения соотношений нуклеозидтри- (моно-) фосфатов в плазме крови животных с ЛФС Плисса.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных исследований установили, что в инфракрасных спектрах плазмы крови определяются полосы поглощения фосфор-кислородных связей нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфорных кислот и их производных, соотношение которых в плазме крови экспериментальных животных варьирует при норме и неоплазии. Установлено, что плазма крови животных-опухоленосителей характеризуются различным соотношением нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфорных кислот и их производных на ранних (13-е, 14-е сутки) и более поздних (56-е сутки) сроках роста опухоли: на ранних срока роста отмечено увеличение в плазме крови содержания нуклеозидмонофосфатов и снижение нуклеозидтрифосфатов, предположительно, за счет снижения синтеза нуклеозидтрифосфатов и высокой скоростью их распада, на более поздних сроках наоборот, повышается содержание нуклеозидтрифосфатов и снижается содержание монофосфатов, что объясняется запуском адаптационно-приспособительных реакций в организме-опухоленосителя, в результате чего снижается скорость потребления нуклеозидтрифосфатов. В плазме крови животных с ЛФС Плисса, исследованной на 13-е и 14-е сутки после перевивки, а также Г-3, исследованной на 14-е сутки после перевивки наблюдается одинаковая динамика в изменении соотношений нуклеозидтри- (моно-) фосфорных кислот и их производных - происходит увеличение в плазме крови содержания нуклеозидмонофосфатов и снижение нуклеозидтрифосфатов.

Изменение соотношений нуклеозидтри- (ди-, моно-) фосфорных кислот и их производных в плазме крови опухоленосителей происходит при проведении экспериментально-терапевтических воздействий: озоно-, электрорефлексо- и фармакотерапии. Метод ИК-спектроскопии позволяет регистрировать данные изменения и оценивать эффективность проводимых мероприятий по изменениям параметров РЖ-спектров плазмы крови. Введение ЯК и её производных животным с ЛФС Плиееа способствует снижению содержания нуклеозидтрифосфатов и повышению уровня монофосфатов в плазме крови опухоленосителей. Таким образом, данный вид воздействия является не эффективным и не безопасным. Комбинированное введение химиопрепаратов и озона на ранних и более поздних сроках роста опухоли вызывает нормализацию основных метаболических показателей крови экспериментальных животных. Проведение СКЭНАР-, ДЭНС-терапии животным с ЛФС Плисса не вызывает изменения соотношений нуклеозидтри- (моно-) фосфорных кислот и их производных в плазме крови, что указывает на не эффективность данного способа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Красникова, Ольга Владимировна, 2012 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Аксель Е.М., Двойрин В.В. Статистика злокачественных новообразований: заболеваемость, смертность, тенденции, социально-экономический ущерб, продолжительность жизни. - М, 1992. - 122 с.

2. Алехина С.П., Щербатюк Т.Г. Озонотерапия: клинические и эксперимениальные аспекты. - Н. Новгород: Литера, 2003. - 240 с.

3. Алясова А. В., Конторщикова К. Н. Озонотерапия в онкологической клинике // Нижегородский медицинский журнал. - 2006. - № 4. - С. 69-74.

4. Алясова A.B., Конторщикова К.Н., Терентьев И.Г., Иванова И.П., Кузнецов С.С., Сазанов А.И. // Современные технологии в медицине. -2010. -№ 4. - С. 27-32.

5. Анисимов В.Н. Влияние янтарной кислоты на частоту спонтанных опухолей и продолжительность жизни у мышей СЗН/Sn // Докл. АН СССР. - 1979.- Т. 248, № 5. - С. 1242-1245.

6. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. - СПб.: Наука, 2003. - 468с. - ISBN 5 - 02 - 026199 - 8.

7. Антипов А.Н., Ламекин В.Ф., Пожидаев Е.Д., Пак Д.Д., Орлов А.Л. Способ диагностики онкологического заболевания // Патент РФ №2108577, МПК G01 N33/49 G01 N21/35. - 1998.

8. Арзыкулов Ж.А. Клинико-спектроскопическая характеристика рака легкого. Дис. ... канд. мед. наук. - Алма-Ата, 1990. - 137 с.

9. Астрелина Т.А. Значение кинетических параметров опухолевого роста в чувствительности лейкемической популяции к химиотерапии при острых лейкозах у детей. Автореф. Дисс. канд. мед. наук.- М., 2006. - 55 с.

10. Ашмарин И.П., Антипенко А.Е., Ашапкин, В.В. Нейрохимия. М. Медицина, 2001. - 153 с.

11. Бакеева Л.Е. Ультраструктура митохондрий и дыхание мышц диафрагмы. Влияние повреждения ткани / В кн.: Регуляция энергетического обмена и физиологическое состояние организма. - М.:

Наука, 1978. - С. 103-112.

12. Балаж, А. Биология опухолей: Сомнения и надежды. - М.: Мир, 1987.-310 с.

13. Балаховский И. С. Инфракрасная спектроскопия в клинической лабораторной диагностике // Клиническая лабораторная диагностика. - 1995. - № 4. - С. 24-29.

14. Балдуева И. А. Оценка некоторых параметров клеточного иммунитета у больных раком, молочной железы и лимфогранулематозом в динамике лечения // Вопр. онк. - 1992. - Т. 38. - № 7. - С.787-792.

15. Барабой В.А. Стресс: природа, биологическая роль, механизмы, исходы. - Киев: Фитосоциоцентр, 2006,- 424 с. - ISBN 966-306-121-7.

16. Белоусова М.Н. Биохимические особенности опухолевых // Биология злокачественного роста. - М.: Медицина, 1965. - С. 78-89.

17. Береговская H.H. Энерготранспортное фосфорилирование. Биофизические аспекты // Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления. - М., 1993. - С. 11-20.

18. Большая российская энциклопедия. - М.: Советская энциклопедия, 1992.-Т. 3.-659 с.

19. Бояринов Г.А., Гордецов A.C., Фраерман А.Л., Лебедь С. Л. Диагностика новообразований головного мозга методом инфракрасной спектроскопии / Нижегородский мед. журнал. - 2005. - №3. - С. 168—170.

20. Бурлакова Е.Б. О некоторых физико-химических критериях химиотерапии злокачественных новообразований. Физико-химические механизмы злокачественного роста. -М.: Наука, 1970,- 146 с.

21. Васильев А.Г., Хайнцев Н.В., Трашков М.А. Влияние пола животного и количества трансплантируемых опухолевых клеток на развитие лимфосаркомы Плисса // Вестник Санкт-Петербургского университета. - 2009. - №3. - С. 136-140.

22. Верболович В.П., Полетаев Э.В., Рюдигер Э.Д. Свободно-радикальное окисление липидов биомембран в условиях общей анестезии по данным инфракрасной спектроскопии // Анестезиология и реаниматология. - 1980. - №7. - С. 29—32.

23. Верченко В.В. Клинико-спектроскопические критерии диагноза и прогноза остогенной саркомы кости. Дис. ... канд. мед. наук. -Алма-Ата, 1991,- 150 с.

24. Винярская И.В., Гордецов A.C., Лукушкина Е.Ф., Кузьмичев Ю.Г., Кулагина Н.В. Применение метода инфракрасной спектроскопии в диагностике болезней миокарда у детей // Нижегородский мед. журнал. -2001.-№2.-С. 47-52.

25. Винярская И.В. Клиническая оценка показателей инфракрасной спектроскопии при болезнях миокарда у детей. Дис. ... канд. мед. наук. - Н. Новгород, 2000. - 112 с.

26. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М.: Наука, 1972. - 252 с.

27. Гельфонд М.Л. Возможности применения ИК-спектро-скопии бронхоальвеолярных смывов бронхов в диагностике туберкулеза и рака легких // Нижегородский мед. журнал. - 2002.- № 4. - С. 98—99.

28. Гельфонд М.Л., Гордецов A.C., Жаднов В.З., Постригай П.И. Возможности применения инфракрасной спектроскопии бронхоальвеолярных смывов у больных туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. - 1997. - № 5. - С. 34—36.

29. Гельфонд М.Л. Диагностика туберкулеза легких с применением инфракрасной спектроскопии лаважной жидкости бронхов. Дис. ... канд. мед. наук. - М, 1996. - 127 с.

30. Голотюк И.А. Функционально-морфологические изменения печени при раке молочной железы // Вопросы онкологии. - 1978. - Т.24, №8. - С. 79-83.

31. Гордецов A.C., Березкина Г. А., Светозарский Н.Л., Гамаюнов C.B., Артифексова A.A.. Крупин В.Л., Артифексов С.Б. Способ дифференциальной диагностики нарушений сперматогенеза // Патент РФ №2367957, МПК G01 N33/52. - 2009.

32. Гордецов A.C., Винярская И.В., Игнатьев A.A. Способ диагностики заболеваний миокарда // Патент РФ №2213968, МПК G01 N33/49.-2003.

33. Гордецов A.C., Гельфонд М.Л., Жадное В.З.,Игнатьев A.A., Мамаева Л.А., Постригай П.И., Кулагина Н.В. Способ оценки степени тяжести состояния больных бронхолегочными заболеваниями // Патент РФ №2161803, МПК G01 N33/52. - 2001.

34. Гордецов A.C., Гельфонд М.Л., Жаднов В.З., Кулагина Н.В., Постригай П.И. и др. Инфракрасная спектроскопия БАЛЖ и сыворотки крови при дифференциальной диагностике туберкулеза и рака легких / Методические рекомендации Минздрава. - №2000/213 от 20.04.2001.

35. Гордецов А.С, Гельфонд М.Л., Постригай П.И., Жаднов В.З., Пляскина Е.К. Способ диагностики рака легкого // Патент РФ №2121679, МПК G01 N33/483. - 1998.

36. Гордецов A.C. Диагностическая ИК-спектроскопия. Настоящее и будущее // Нижегородский мед. журнал. - 2002. - № 4. - С. 95—98.

37. Гордецов A.C., Добротина А.Ф., Егорова H.A., Кокая A.A. Способ диагностки пиелонефрита у беременных // Патент РФ №2219550, МПК G01N33/52. -2003.

38. Гордецов A.C., Зимина C.B., Лебедь С.П., Лебедев A.B., Медяник И.А., Шахов Б.Е. Инфракрасная спектроскопия в диагностике опухолей головного мозга / Нижегородский мед. журнал. - 2008. - №4. - С. 24—27.

39. Гордецов A.C., Игнатьев A.A., Волкова С.А. Способ диагностики острого лейкоза // Патент РФ №2210772, МПК G01 N33/483, G01 N33/52. -2003.

40. Гордецов A.C., Ильичева К.В., Цыбусов С.Н., Кулагина Н.В., Шамилашвили И.Н., Лебедев A.B. Способ диагностики злокачественных новообразований // Патент РФ №2117289, МПК G01N33/49, G01N33/483. - 1998.

41. Гордецов А. С. Инфракрасная спектроскопия биологических жидкостей и тканей // Современные технологии в медицине. - 2010. - № 1. -С. 84-98.

42. Гордецов A.C., Корочкина О.В., Насонов C.B., Гамаюнов C.B. Способ диагностики патологии печени // Патент РФ №2246897, МПК А61В5/145, G01 N33/52. - 2005.

43. Гордецов A.C., Корочкина О.В., Насонов C.B., Гамаюнов C.B. Способ прогнозирования хронических гепатитов // Патент РФ №2281508, МПК G01 N33/49.-2006.

44. Гордецов A.C., Краснов В.В., Лукушкина Е.Ф., Кулагина Н.В., Гордецова С.А. Способ дифференциальной диагностики дифтерии, ангины и инфекционного мононуклеоза // Патент РФ-№2133034, МПК G01 N33/483 G01 N33/48.- 1999.

45. Гордецов A.C., Лебедь С.Л., Бояринов Г.А., Фраерман А.Л. Способ диагностики новообразований головного мозга // Патент РФ №2253869, МПК G01 N33/49. - 2005.

46. Гордецов A.C., Лукушкина Е.Ф., Винярская И.В., Краснов В.В., Медведев А.Л. и др. Способ диагностики заболеваний миокарда // Патент РФ №2140639, МПК G01 N33/48, G01 N33/49. - 1999.

47. Гордецов A.C., Лукушкина Е.Ф., Винярская И.В., Краснов В.В. Перспектива использования метода ИК-спектроскопии в диагностике болезней миокарда у детей // Вестник аритмологии. - 2000. - №18. - С. 77.

48. Гордецов A.C., Лукушкина Е.Ф., Казакова Л.В., Карпович Е.И. Способ оценки состояния сердечно-сосудистой системы у детей с инсулинзависимым сахарным диабетом // Патент РФ №2250463, МПК G01 N33/483. - 2005.

49. Гордецов A.C., Мамаева Л.А., Крылов В.Н., Лебедев A.B. Способ диагностики потенциально активного туберкулеза органов дыхания // Патент РФ №2327990, МПК G01 N33/49. - 2008.

50. Гордецов A.C., Медяник И.А., Козачук П.Н., Красникова О.В., Лебедь С.Л., Лебедев A.B. Способ диагностики рецидива онкологических заболеваний головного мозга // Приоритет по заявке на изобретение № 2011139627 от 30.09.2011.

51. Гордецов A.C., Петров М.С., Кукош М.В., Учугина А.Ф., Емельянов Н.В. Способ дифференциальной диагностики деструктивного панкреатита // Патент РФ №2253868, МПК G01 N33/49. - 2005.

52. Гордецов A.C., Петров М.С. Способ дифференциальной диагностики форм острого панкреатита // Патент РФ №2277244, МПК G01 N33/49. - 2006.

53. Гордецов A.C., Светозарский Н.Л., Насонов C.B., Березкина Г. А., Артифексова A.A. и др. Способ диагностики заболеваний предстательной железы // Патент РФ №2246898, МПК А61В5/145, GOl N33/52.- 2005.

54. Гордецов A.C. Синтез и исследование свойств некоторых азотных гетероциклических и гетерокумуленовых производных, содержащих элементы IV и V групп. Дис.... д-ра хим. наук. - Н. Новгород, 1992.- 140 с.

55. Гордецов A.C., Шкарин В.В., Сидорова Н.В., Лоенко H.A. Способ диагностики артериальной гипертензии // Патент РФ №2261442, МПК GO 1 N33/49.-2005.

56. Гранберг H. Н. Органическая химия. - М.: Наука, 1984. - 358 с.

57. Гринберг Я. 3. СКЭНАР - терапия. Эффективность с позиции методов электролечения. В кн.: СКЭНАР - терапия и СКЭНАР -экспертиза. - Таганрог, 1996. - С. 18-33.

58. Грицких Г.Л. Диагностика ранних проявлений холелитиаза с использованием спектроскопических методов исследования. Дис. ... канд. мед. наук. - Иркутск, 1990. - 140 с.

59. Гудков C.B. Защита пуриновыми рибонуклеозидами ДНК от окислительного стресса, вызванного теплом и гамма излучением // Труды международной конференции «Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, экологии». - Саров, 2004. - С. 138-143.

60. Девис М., Остин Дж., Патридж Д. Витамин С. Химия и биология. -М. : Мир, 1999,- 176 с.

61. Длительные субфебрилитеты у детей / Под ред. Баранова A.A. -М.: Союз педиатров России, 2005.

62. ДЭНС - терапия. Новые рубежи и итоги эмпирического этапа развития. Тез. докл. симпозиума, посвященного 5-летию Корпорации «ДЭНАС MC» с международным участием. -Екатеринбург, 2003.

63. ДЭНС. Биоэлектромагнитный гомеостаз и традиционные методы диагностики и реабилитации. Симпозиум, посвященный 8-летию Корпорации «ДЭНАС MC» с международным участием. 2006 Юфевраля. -Екатеринбург, 2006.

64. Елизарова Т.Е. Спектрофотометрия в ближней инфракрасной области как метод контроля качества лекарственных средств. Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Москва, 2009. - 25 с.

65. Зубеев П.С., Гордецов A.C., Страхов A.B., Жуков М.А., Лебедев A.B. Химический состав желчи и желчных камней у больных холецистолитиазом при инфракрасной спектроскопии / В кн.: Сборник научно-практических работ. - Челябинск, 2006. - Т. 6. - С. 202—204.

66. Игнатьев A.A. Возможности метода инфракрасной спектрометрии сыворотки крови в диагностике и дифференциальной диагностике рака, туберкулеза и неспецифических заболеваний легких. Дис. ... канд. мед. наук. - Н. Новгород, 2001. - 149 с.

67. Игнатьев A.A., Гордецов A.C., Буланов Г.А., Жаднов В.З., Белоусов Ю.В., Гельфонд M.JI. и др. Применение инфракрасного спектроскопического анализа сыворотки крови в дифференциальной диагностике рака, туберкулеза легких и неспецифических заболеваний легких // Деп. ВИНИТИ РАН. №1387-В 2001 от 31.05.2001.

68. Игнатьев A.A., Гордецов A.C., Буланов Г.А., Жаднов В.З., Белоусов Ю.В., Гельфонд М.Л. и др. Применение инфракрасного спектроскопического анализа сыворотки крови в дифференциальной диагностике туберкулеза легких и неспецифических заболеваний легких / Деп. ВИНИТИ РАН. № 13 86-В 2001 от 31.05.2001.

69. Игнатьев A.A., Лаврова О.Л., Насонов C.B., Веселова О.Н., Веселова Ю.В., Терентьев И.Г., Буланов Г.А., Гордецов A.C., Петров А.Б., Фатыхов P.P. Способ диагностики рака молочной железы // Патент № 2249216 РФ, МПК А61В10/00. - 2005.

70. Игнатьев A.A., Лаврова О.Л., Насонов C.B., Веселова О.Н., Веселова И.В., Терентьев И.Г. и др. Способ диагностики опухолей молочной железы // Патент РФ №2249216, МПК А61В10/00, G01 N33/52. -2005.

71. Игнатьев A.A. Метод ИК-спектрометрии сыворотки крови в дифференциальной диагностике туберкулеза, рака и хронических неспецифических заболеваний легких // Нижегородский мед. журнал. -2002. -№ 4. -С. 100—102.

72. Игнатьев A.A. Способ дифференциальной диагностики злокачественных новообразований и соматических незлокачественных заболеваний // Патент PC №2232391, МПК G01 N33/48, G01 N33/49. -2005.

73. Исаков A.B. Определение липидных фракций в сыворотке крови с помощью спектроскопии в инфракрасной области // Лабораторное дело. -1980.-№5.-С. 290—293.

74. Казицына Л.А., Куплетская Н.Б. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии. - М: Вывшая школа, 1971. - 309 с.

75. Калиниченко О.В., Портенко Г.М., Каргаполов A.B. Способ диагностики хронического аденоидита у детей и подростков // Патент РФ №2164351, МПК G01 N33/52, G01 N33/483.-2001.

76. Карасева В.В. Противоопухолевые препараты // Практич. онкология. - 1996. - №5. - С. 45-47.

77. Каргополов A.B. Диагностика и дифференциальная диагностика атипичных форм рассеянного склероза // Российский биомедицинский журнал. - Тверь, 1996. - С. 53-54.

78. Каргаполов A.B., Зубарева Г.М., Бородина Г.Е. Способ исследования крови // Патент РФ №2148257, МПК G01 N33/49. - 2000.

79. Каргаполов A.B., Зубарева Г.М., Бородина Г.Е. Способ скрининг-диагностики критических состояний при алкоголизме // Патент РФ №2162226, МПК G01 N33/49. - 2000.

80. Каргаполов A.B., Лунина Е.Ю., Петрухин И.С. Способ диагностики сахарного диабета // Патент РФ №2198402, МПК G01 N33/487. -2003.

81. Каргополов A.B. Особенности инфракрасного спектра крови в норме и патологии // Применение ИК-спектроскопии при диагностике и прогнозировании различных заболеваний. - Тверь, 2003. - С. 15-19.

82. Каргаполов A.B., Плигин A.M., Зубарева Г.М., Шматов ГЛ.

Способ исследования биологических жидкостей и устройство для его осуществления // Патент РФ №137126, МПК G01 N33/487. - 1999.

83. Карева Н.П. Нарушения антиоксидантного статуса у больных лимфомами и возможности его коррекции // Бюллетень СО РАМН. - 2005. - №3 (117). -С.30-36.

84. Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ идентификация липидов. - М: Мир, 1975. - 112 с.

85. Клинцова Е.С. Исследование эффективности озона, 5-фторурацила и доксорубицина в терапии экспериментальных опухолей. Дисс. ... канд. биол. наук. - Старая Купавна, 2007. - 147 с.

86. Коваленко A.JL, Романцов М.Г. Ремберин 1,5% для инфузий: От эксперимента в клинику. - С-Пб, 1999. - 112 с.

87. Козырева Е. В. Использование янтарной кислоты и других компонентов энергетического обмена в лечении онкологических больных // В сб. науч. статей: Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве / Научн. Редактор М.Н. Кондрашова. - Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1997. - С. 128-133.

88. Кокая A.A. Клинико - диагностическое значение спектрофотометрических показателей сыворотки крови беременных с пиелонефритом. Дис. ... канд. мед. наук. - Иваново, 2005. - 130 с.

89. Комаров Р.Н., Гордецов A.C., Комаров Н.В., Канаикин О.В. Инфракрасная спектроскопия сыворотки крови в диагностике онкозаболеваний // Нижегородский мед. журнал. - 2006. - №1. - С. 98—100.

90. Кондакова, И.В. Влияние доноров оксида азота на противоопухолевый эффект доксорубицина // Бюллетень СО РАМН. -2005. - №2 (116). - С.92-95

91. Кондратьева А.Г1. Основные направления современной лучевой терапии злокачественных опухолей // Современная онкология. - 2003. -№2. - С. 23-26.

92. Кондрашова М.Н. Выясненные и наметившиеся вопросы на пути исследования регуляции физиологического состояния янтарной кислотой // Терапевтическое действие янтарной кислоты. - Пущино, 1976. - № 4. - С. 12.

93. Корман Д.Б. Основы противоопухолевой терапии. - М.: Практическая медицина, 2006 - 512 с.

94. Косенко Е. А., Каминский Ю.Г. Янтарнокислый натрий -радиопротектор // В сб. науч. статей: Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве / Научн. Редактор М.Н. Кондрашова. - Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1997. - Р. 128-133.

95. Красникова О.В., Гордецов A.C., Конторщикова К.Н., Крылов В.Н., Сазанов А.И. Изменение параметров РЖ-спектров биологических тканей животных - опухоленосителей на фоне совместного введения доксорубицина и озона // Современные технологии в медицине. - 2011. - № З.-С. 83-87.

96. Красникова О.В., Гордецов A.C., Конторщикова К.Н., Крылов В.Н., Сазанов А.И. Изменение параметров РЖ-спектров плазмы крови животных - опухоленосителей на фоне совместного введения доксорубицина и озона // Вестник Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского. - 2011. - № 5 (1). - С. 105-109.

97. Красникова О.В., Гордецов A.C., Крылов В.Н. Изменение параметров РЖ-спектров плазмы крови животных - опухоленосителей на фоне введения биологически активных добавок // Современные технологии в медицине. - 2011. - № 4. - С. 18-21.

98. Красникова О.В. Особенности инфракрасных спектров плазмы крови животных-опухоленосителей на фоне введения сукцинатсодержащих препаратов / О.В. Гордиевская (Красникова), О.М. Московцева, Т.Г. Щербатюк // Материалы VI всероссийской научно-

практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2007). - Москва, 2007.- С. 85-86.

99. Красникова О.В. Особенности инфракрасных спектров плазмы крови животных-опухоленосителей на фоне введения сукцинатсодержащих препаратов / О.В. Гордиевская (Красникова), О.М. Московцева, Т.Г. Щербатюк // Российский биотерапевтический журнал. 2007. - Л» 1.-С. 85-86.

100. Красникова О.В. Особенности инфракрасных спектров плазмы крови животных-опухоленосителей на фоне введения янтарной кислоты и её производных / О.В. Гордиевская (Красникова) // Электронный сборник научной конференции «Ломоносов 2007» (Москва, 2007) - Москва, 2007. - Режим доступа: http://lomonosov-msu.ru/archive/Lomonosov_2007/02/[e-mail].

101. Красникова О.В, Щербатюк Т.Г., Гордецов A.C. Особенности инфракрасных спектров плазмы крови крыс-опухоленосителей // Современные решения актуальных научных проблем в медицине НижГМА / под ред. Б.Е. Шахова. - Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 2007.-С. 180-184.

102. Краснов В.В. Взаимосвязь изменений параметров ИК-спектрального анализа сыворотки крови нарушения метаболических процессов при инфекционной патологии у детей // Нижегородский мед. журнал. - 2002. - №4. - С. 105—107.

103. Краснов В.В., Гордецов A.C., Кузмичев Ю.Г., Игнатьев A.A., Лукушкина Е.Ф. Возможности использования ИК-спектроскопического анализа сыворотки крови для прогноза течения токсической дифтерии // Нижегородский мед. журнал. - 2002. - №4. - С. 107—109.

104. Краснов В.В., Гордецов A.C., Кузмичев Ю.Г., Игнатьев A.A., Лукушкина Е.Ф., Кулагина Н.В. Применение инфракрасного спектроскопического анализа в дифференциальной диагностике

инфекционных заболеваний, протекающих с синдромом ангины // Нижегородский мед. журнал. - 2000.- №3. - С. 26—30.

105. Краснов В.В., Гордецов A.C., Кузмичев Ю.Г., Игнатьев A.A., Лукушкина Е.Ф., Кулагина Н.В. Способ прогнозирования тяжести течения дифтерийной инфекции у детей // Патент РФ №2189594. МПК G01 N33/49.-2002.

106. Краснов В.В., Гордецов A.C., Кузмичев Ю.Г., Лукушкина Е.Ф. Применение инфракрасного спектроскопического анализа сыворотки крови для прогноза течения токсической формы дифтерии у детей // Вестник аритмологии. - 2000. - №18. - С. 94.

107. Краснов В.В. Инфракрасный спектральный анализ сыворотки крови как отражение уровня нарушения метаболических процессов при инфекционной патологии у детей // Соврем технол. в мед. - 2009. - № 1. -С. 39—43.

108. Краснов В.В. Современное течение дифтерии и её осложнения у детей. Дис. ... д-ра мед. наук. - Н.Новгород, 2001. - 134 с.

109. Кудрявцева Е. В. Общая химия. - М.: Наука, 1981. - 247 с.

110. Кукош В.И., Гордецов А.С, Мушкин Ю.И., Скобелева СЕ., Павлова Е.К., Учугина А.Ф., Мамаев ЮЛ., Латяева В.Н., Дергунов Ю.И. Способ диагностики рака легкого // Патент РФ №1489373. - 1995.

111. Кукош В.И., Гордецов A.C., Скобелева С.Е., Учугина А.Ф., Мамаев Ю.Л., Дергунов Ю.И. Способ подготовки биоптата для регистрации инфракрасных спектров при диагностике рака летного // Патент № 1803990. - 1994.

112. Кукош В.И., Гордецов А.С, Скобелева С.Е., Учугина А.Ф., Павлова Е.К., Мамаев Ю.Л., Дергунов Ю.И. Способ диагностики заболеваний предстательной железы // Патент РФ №2018829. МПК GO 1 N33/48.- 1994.

113. Кукош В.И., Гордецов А.С, Учугина А.Ф., Мамаев Ю.Л.,

Дергунов Ю.И. Способ интраоперационной диагноста ки рака легкого // Патент РФ №1363996. - 1995.

114. Кукушкин M.JL, Мейзеров Е. Е., Графова В. Н. Динамическая электронейростимуляция при соматогенной и неврогенной боли // Боль. -2004.-№ 1.-С. 30-33.

115. Кукушкин М.Л., Мейзеров Е. Е., Графова В.Н. и др. Особенности развития анальгетического эффекта при чрескожной динамической электростимуляции // Бюл. экспер. биол. и мед. - 2003. - №3. - С. 265-268.

116. Куценюк В.В. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей // Онкология. - 2003. - Т.5, № 1. - С.69 - 72.

117. Ларионов Л.Ф. Химиотерапия злокачественных опухолей. - М.: Медгиз, 1962.

118. Ларионова В.Б. Перспективы применения антиоксидантов в лечении онкологических больных // Биоантиоксидант: Тез. докл. - М.: Наука, 1989. - Т.2. - С. 35-42.

119. Лебедь С.Л. Патофизиологическое обоснование применения озонированного физиологического раствора в послеоперационном периоде у больных с новобразованиями головного мозга. Дис. ... канд. мед. наук. - Н. Новгород, 2005. - 134 с.

120. Левинский Я. А. Сравнительная морфология и ИК-спектроскопия долевых и сегментарных бронхов человека в возрастном аспекте / В кн.: Современные проблемы оценки движущих факторов здоровья населения. -Алма-Ата, 1991. С. 144—148.

121. Лифшиц В. М., Сидельникова В. И. Медицинские лабораторные анализы. Справочник. - М: Триада - X, 2000. - 312 с.

122. Лоенко H.A. Фенотипические предикторы формирования гипертрофии миокарда левого желудочка у пациентов с эссенциальной артериальной гипертензией. Дис. ... канд. мед. наук. - Н. Новгород, 2006. -149 с.

123. Лукушкина Е.Ф., Гордецов A.C., Винярская И.В. Клиническая оценка показателей инфракрасной спектроскопии при болезнях миокарда у детей // Вестник аритмологии. - 2000. - №18. - С. 106.

124. Лукьянова Л.Д. Новые подходы к созданию антигипоксантов метаболического действия // Вестник РАМН. - 1999. - №3. - С. 18-25.

125. Мамаева Л. А. PiK-спектроскопия сыворотки крови в диагностике туберкулеза легких // Нижегородский мед. журнал. -2002. - № 4.-С. 105.

126. Мамаева Л.А., Постригай П.И., Гордецов A.C., Крылов В.Н. Метод ИК-спектроскопии сыворотки крови в лабораторной диагностике потенциально активного туберкулеза легких / В кн.: Электромагнитные поля и излучения в биологии и медицине. - Н. Новгород. Изд-во ННГУ, 2006.- С. 49—53.

127. Мейзеров Е.Е., Черныш И.М., Дубова М.Н. Динамическая электронейростимуляция при обезболивании и лечении функциональных расстройств // Анестезиология и реаниматология. - 2002. - № 4. - С. 31-34.

128. Миненко И. А., Воронков A.A. Клиническая эффективность СКЭНАР - терапии. - Рефлексология. - 2005. - № 3. - С. 7-11.

129. Митохондриальные болезни: современные концепции / Э.К. Рууге и др. // Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека / сб. тр. 4-ой нац. научн.-практ. конф. с межд. уч. -Смоленск, 26-30 сентября 2005. - С. 150-151.

130. Монойлов С.Е. Тканевое дыхание в митохондриях печени при опухоленосительстве у крыс // Вопросы онкологии. - 1972. - №8. - С. 5054.

131. Морозкина Т.С. Энергетический обмен и питание при злокачественных новообразованиях / Научный редактор В. С. Шапота. - Мн: Беларусь, 1989. - 191 с.

132. Московцева О. M. Влияние янтарной кислоты и ее производных на состояние свободнорадикальных процессов экспериментальных животных. Дис. ... канд. биол. наук. - Н. Новгород, 2006. - 160 с.

133. Мохова E.H. Дыхание митохондрий в тканевых препаратах / В кн.: Регуляция энергетического обмена и физиологическое состояние организма. - М. : Наука, 1978. - С. 67-72.

134. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Корочкина О.В., Гордецов A.C., Пахмутов В.В. Диагностика циррозов печени методом инфракрасной спектроскопии сыворотки крови / Деп. ВИНИТИ РАН №1001-В2002 от 04.06.2002.

135. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Корочкина О.В., Гордецов A.C., Пахмутов В.В. Инфракрасная спектроскопия сыворотки крови у больных / Деп. ВИНИТИ РАН № 1002-82002 от 04.06.2002.

136. Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии Росздрава. Оценка эффективности терапии неспецифического язвенного колита у детей. / Регистрационное удостовер. №ФС-2006/194 Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития от 10.08.2006.

137. Общий практикум по органической химии. Учебное пособие / Под ред. А.Н.Коста. - М: Мир, 1965. - 153 с.

138. Основы биохимии: В 3-х томах / А. Уайт и др. - М.: Мир, 1981. -Т. 1.- 534 с.

139. Островская J1.A. Сверхмалые дозы доксорубицина: ингибирование опухолевого роста в эксперименте // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - № 4. С. - 52-54.

140. Панин JI.E. Энергетические аспекты адаптации. - JL: «Медицина», 1978.- 192 с.

141. Пантелеичев Д. А., Ужеловский И. В. Использование показателей инфракрасного спектра слюны при диагностике различных

стоматологических заболеваний // Сборник статей Тверской государственной медицинской академии. - 2003. - С. 68-72.

142. Переводчикова Н.И. Место химеотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактикиа // Современная онкология. - 2001. - Т.З, №2. - С.21-23.

143. Переводчикова Н.И. Противоопухолевая химиотерапия современные возможности и проблемы // Медицинский вестник. - 2006. -№36 (379). -С.12-13.

144. Пересторонина B.C. Патогенетическая терапия боль ных ограниченной склеродермией женщин в пре- и постменопаузальном периоде с учетом особенностей нейроэндокринного статуса. Дис. ... канд. мед. наук. - М, 2002. - 122 с.

145. Перетягин С. П. Патофизиологическое обоснование озонотерапии постгеморрагического периода. Автореф. дисс ... д-ра мед. наук. - Казань, 1991.- 30 с.

146. Петров М.С., Гордецов A.C. Способ прогнозирования исхода деструктивного панкреатита // Патент РФ №2277243, МПК G01 N33/49. -2006.

147. Петров М.С. Диагностика и оценка тяжести острого панкреатита методом инфракрасной спектрометрии. Дис. ... канд. мед наук. - Н. Новгород, 2005. - 160 с.

148. Петров М.С., Кукош М.В., Гордецов A.C., Емельянов Н.В. Спектральный анализ сыворотки крови в комплексной оценке тяжести состояния больных острым панкреатитом // Нижегородский мед. журнал. - 2004. - №4. - С. 26—30.

149. Петросян А.Г., Ордуханян К.А. Способ определения состава желчных камней // A.c. 976379 СССР, МПК G01 N33/48. - 1982.

150. Плисс Г.Б. Онкологическая характеристика нового штамма лимфосаркомы крысы // Бюлл. Эксп. Биол. и Мед. - 1961. - №2.-С. 95-99.

151. Поддубная, И.В. Достижения современной химиотерапии // Современная онкология.- 2003 Т.05, № 2 .- С.23-25.

152. Разина Т.Г. Фитопрепараты и биологически активные вещества лекарственных растений в комплексной терапии злокачественных новообразований (экспериментальное исследование). Автореф. Дисс. канд. мед. наук. - Томск, 2006. - 47с.

153. Рапопорт Ж.Ж., Балуева Г.Р. Метод инфракрасной спектроскопии при изучении злокачественных болезней крови / В кн.: Сборник научных трудов Красноярского медицинского института. Красноярск: КГМИ, 1963. - С. 324—328.

154. Ревенко А. Н. Адаптационно-адаптивная регуляция (СКЭНАР). Теоретическое и практическое обоснование. В кН.: СКЭНАР - терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 1996. - С. 30-38.

155. Ревенко А. Н. Способ определения локализации зон, оптимальных для электроимпульсной СКЭНАР - терапии // А. с. № 2266760. Приоритет от 07.08.2003 г.

156. Ревенко А. Н., Тараканов А. В. И др. Инструкция по применению чрескожного электронейростимулятора с биообратной связью, индивидуально-дозированного воздействия на рефлекторные зоны ЧЭНС-«СКЭНАР». - Таганрог, 2004. - 70 с.

157. Регистрационное удостоверение. Динамическая электронейростимуляция. Медицинская технология. № ФС — 2005/004 от 04.03.2005 г. Организация - производитель: ООО «Региональный центр адаптивно - рецепторной терапии», г. Екатеринбург.

158. Регистрационное удостоверение. Электростимулятор нейроадаптивный «СКЭНАР-97» . - № 29/03020397/0329-00 от 19.05.2000 г. Медицинское изделие. Организация-разработчик: ЗАО ОКБ "РИТМ" г. Таганрог, ОКПО 05010925.

159. Регистрационное удостоверение. Электростимулятор чрескожный противоболевой портативный для воздействия на БАЗ и БАТ со встроенным и выносным электродами «ДЭНАС» № ФС 022а2005/2135-05 от 09.08.2005 г. Изделие медицинской техники. Организация -производитель: ООО «Региональный центр адаптивно — рецепторной терапии», г. Екатеринбург, ОКПО 44148620.

160. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: ЗАО"ИИА"Ремедиум", 2004. -398с.

161. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Ред. В.П.Фисенко и др. - М.: ЗАО «ИИА «Ремедиум», 2000. - 112 с.

162. Рябов К.П. К вопросу о функциональном состоянии митохондрий гепатоцитов крыс с саркомой-45 // Здравоохранение Белоруссии. - 1972. -№ 9. - С. 47-50.

163. Северин Е.С., Алейников T.JL, Осипов Е.В. Биохимия. - М.: Медицина, 2000. - 168 с.

164. Сидорик Е.П. Биохемилюминесценция клеток при опухолевом процессе / Отв. ред. В.Г. Пинчук. - Киев: Наук, думка, 1989. — 220 с. - ISBN 5-12-000772-4.

165. Скулачев В.П. Трансформация энергии в биомембранах. - М.: Мир, 1972. - 239 с.

166. Смирнова М.С., Гордецов A.C., Кузнецов А.Н. Способ определения индивидуальной чувствительности к низкоинтенсивному лазерному излучению // Патент РФ №2098820, МПК G01 N33/49. - 1997.

167. Смирнов A.B., Гордецов A.C., Пересторонина B.C. Дифференцированные программы восстановительного лечения больных ограниченной склеродермией на основе комплексной оценки их состояния /

Метод, реком. - H. Новгород: НГМА, ННИКВИ, 2004. - 30 с.

168. Смирнов A.B., Гордецов A.C., Пересторонина B.C. Новый метод комплексной оценки состояния больных ограниченной склеродермией / В кн.: Актуальные вопросы дерматовенерологии. -Курск, 2000. - Т. 3. - С. 132—135.

169. Смирнов A.B., Гордецов A.C., Чиненкова B.C., Гордецова С.А. Способ оценки состояния больного склеродермией // Патент РФ №2126966, МПК G01 N33/48, G01 N33/49. - 1999.

170. Смирнова М.С. Лазерная и тренирующая терапия в оптимизации комплексного лечения острой пневмонии и хронического бронхита. Дис. ... канд. мед. наук. - Н. Новгород, 1996. - 145 с.

171. Смирнов A.B. Оптимизация системы медицинской реабилитации больных ограниченной склеродермией. Дис. ... д-ра мед. наук. - Н. Новгород, 1997.- 134 с.

172. Соколов М.А., Игнатьев A.A., Артифексова A.A., Насонов C.B., Буланов Г.А. Применение инфракрасного спектрометрического анализа сыворотки крови в скрининговой диагностике объемных образований головного мозга // В кн.: Тез. докл. научн.-практ. конф. «Актуальные проблемы нейрохирургии». - 2006, 27— 28 сентября. - Чебоксары, 2006. - С. 106—107.

173. Страхов A.B., Потехина Ю.Л., Зубеев П.С, Гордецов A.C. Способ прижизненного определения вида органических камней желчного пузыря // Патент РФ №2299436, МПК G01 N33/48. - 2006.

174. Тихонов А.Н. Молекулярные преобразователи энергии в живой клетке // Соросовский образовательный журнал. - 1997. - № 7. - С. 10-17.

175. Трапезников H.H. Онкология: учебник. - М.: Медицина, 1992. -397 с. - ISBN 5-225-00852-6.

176. Федулова Э.Н., Гордецов A.C., Копейкин В.Н., Богомолов А.Р. Инфракрасная спектроскопия сыворотки крови при язвенном колите у детей // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2003. - № 1. — С. 168.

177. Федулова Э.Н., Гордецов A.C., Копейкин В.Н., Богомолов А.Р., Цирдава Г.Ю. Способ определения эффективности терапии неспецифического язвенного колита у детей // Патент РФ №2224253, МПК G01 N33/49, G01 N33/52. - 2004.

178. Федулова Э.Н., Гордецов A.C., Тутина O.A., Лебедев A.B. Способ дифференциальной диагностики неспецифического язвенного колита и болезни Крона у детей // Патент РФ №2366956, МПК G01 N33/52. - 2009.

179. Федулова Э.Н. ИК-спектроскопия сыворотки крови при неспецифическом язвенном колите у детей // Нижегородский мед. журнал. -2002. - №4.-С. 109—111.

180. Федулова Э.Н. Прогноз течения и оценка эффективности лечения неспецифического язвенного колита у детей. Дис. ... канд. мед. наук. - Н. Новгород, 2003. - 144 с.

181. Федунь A.M., Кукош М.В., Гордецов A.C. Роль инфракрасной спектроскопии сыворотки крови в комплексной диагностике рака легкого // Нижегородский мед. журнал.- 2002. - №1. - С. 60—65.

182. Федунь A.M. Результаты РЖ-спектроскопического исследования сыворотки крови больных раком легкого после хирургического вмешательства // Нижегородский мед. журнал. -2002. -№4.-С. 102—104.

183. Федунь A.M. Хирургическое лечение рака легкого и оценка его эффективности методом инфракрасной спектроскопии. Дис. ... канд. мед. наук. - Н. Новгород, 2002. - 138 с.

184. Фисенко В.П. Руководство по экспериментальному

(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2004. - 398 с.

185. Фукузава К. Увеличение образования оксида азота и супероксида под действием сукцината а-токоферола, его способность вызывать апоптоз и противораковые свойства // Биохимия. -2004. - Т.69, №1. - С.64-73.

186. Химическая энциклопедия. - М: Советская энциклопедия, 1990. -Т. 2. - 890 с.

187. Хитозан per os. / Под ред. Риккардо A.A., Муццарелли. Н.Новгород: Вектор-ТиС, 2001.- 372 с.

188. Ходосова H.A. Ферменты опухолевых клеток / Отв. ред. В.Я. Фель. - Л.: Наука, 1988. - 176 с.

189. Цвиренко C.B. Некоторые механизмы регуляции регенерации тканей при экстремальных состояниях // Механизмы аварийного регулирования и адаптации при действии на организм экстремальных факторов. - Свердловск, 1984. - С. 12-20.

190. Ценкова Р.Н., Кирилин Н.И. Экспрессный способ диагностики субклинического мастита // A.c. 1832008 СССР, МКИ А61В10/00. - 1993.

191. Цыган В.Н., Жоголев К.Д., Никитин В.Ю. Хитозан как парафармацевтик // Рынок БАД. - 2000. - № 2. - С. 23-25.

192. Чернышев В. В., Рявкин А. Ю., Малахов В. В., Мейзеров Е. Е., Королева М.В., Черныш И.М., Гурнов A.A. Динамическая электронейростимуляция. Методические рекомендации. - Москва, 2005. -32 с.

193. Чиненкова B.C., Смирнов A.B., Гордецов A.C. Применение инфракрасной спектроскопии для оптимизации лечения очаговой склеродермии // Нижегородский мед. журнал. - 2001. - № 4. - С. 57—62.

194. Чисова В. И. Онкология. - М: ГЭОТАР- Медиа, 2006. - 701 с.

195. Чуднер В.З., Воздвиженский В.Ф. Способ диагностики степени тяжести септического состояния у детей // A.c. 1698775 СССР, МПК G01 N33/49.- 1991.

196. Чупин С.П., Грицких Г.Л. Спектроскопические критерии литогенности желчи в ранней диагностике холели-тиаза. М, 1993.

197. Чупин С.П., Сарапулова Г.И., Грицких Г.Л., Фролов Ю.Л., Семенов A.A., Тюрюмин Я.Л., Никифоров С.Б. Способ диагностики холестеринов желчекаменной болезни // A.c. 1714505 СССР, МКИ А61В10/00. - 1992.

198. Шапот В. С. Энергетический обмен и его регуляция при злокачественных новообразованиях.- М.: Высшая школа, 1970. - 256 с.

199. Шафранский Л.Л., Кушников Ю.А., Левченко Л.В. Способ диагностики опухолей костей // A.c. 306664 СССР, МКИА61В10/00. (СССР). - 1972.

200. Шелепов В.П. Некоторые эндокринные нарушения, вызываемые опухолью в организме // Вопросы медицинской химии. - 1980. - № 1. - С. 105-110.

201. Шор Н.Ф. Использование окислительного стресса и механизма передачи сигналов при лечении новообразований, устойчивых к химиотерапии // Биохимия. - 2004. - Т.69, №1. - С.48-56.

202. Щербатюк Т. Г. Современное состояние озонотерапии в медицине. Перспективы примения в онкологии // Современные технологии в медецине. - 2010. -№ 1. - С. 99-106.

203. Экспериментальная онкология на рубеже веков / Под редакцией Давыдова М.И., Барышникова А.Ю.- М.: издательская группа РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2003.- 552 с.

204. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США / Г.Аттаси и др. Под ред. З.П.Софьиной (СССР), А.Голдина (США) и др. -М .: Медицина, 1980. - 295 с.

205. Элементы патологической физиологии и биохимии: Учеб. Пособие // Под ред. И.П.Ашмарина. - М.: Изд-во МГУ, 1992. - 192 с. -ISBN 5-21102339-0.

206. Яковлев Н.А., Каргаполов А.В., Слюсарь Т.А. Способ дифференциальной диагностики ишемического и геморрагического инсульта в острейшем периоде // Патент РФ №2175446, МПК G01 N33/52. -2001.

207. Яковлев Н.А., Каргаполов А.В., Фомичев В.В., Слюсарь Т.А. Способ дифференциальной диагностики сотрясения головного мозга легкой степени // Патент РФ G01 N33/52, G01 N33/49. -2003.

208. Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве // Сб. науч. статей / Под ред. М.Н. Кондрашовой. -Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1997. - 300с.

209. Afanasyeva N.I., Kolyakov S.F., Butvina L.N. Remote skin tissue diagnostics in vivo by fiber optic evanescent wave Fourier transform infrared (FEW-FTIR) spectroscopy. - SPIE 1998.- 3257. - C. 260—266.

210. Aisenberg A.C. The glycolysis and respiration of tumors // Acad. Press. - 1961. -V. 5. - P. 1036-1074.

211. Altman N. Oxygen healing therapies: for optimum health and vitality. - Vermont: Healing Arts Press Rochester, 1994. - 200 p.

212. Bocci V. Determinants of erythrocyte ageing: A reappraisal // Brit J Haematol - 1981.-V. 48. - P. 515-522.

213. Bocci V. Roles of interferon produced in physiological conditions. A speculative // Immunology. - 1988.- V. 64. - P. 1-9. 1

214. Bocci V. Tumor therapy with biological response modifiers. Why is progress slow // EOS-J Immunol Immunophannacol. - 1990. V.10. - P.79-82.

215. Bocci V. Ozone as a bioregulutor. Pharmacology and toxicology of ozonetherapy today // J.Biolog.regulators and homeostatic agents. -1997. - V. 10, №2/3. - P.31-53.

216. Chance B.C., Hollunger G. The interaction of energy and electron transfer reactions in mitochondria // J. Biol. Chem. - 1961. - № 236(5). - P. 1534-1584.

217. Duwuri M. A new approach for enhancing differential selectivity of drugs to cancer cells. M. Duwuri, K Samidha, H.H. Kwon, Brian S.J. Blass, J.P. Krise // Acs chemical biology. - 2006. - P.309-315.

218. Know. W.E, The enzymic pattern of neoplastic tissue // Adv. Cancel Res.- 1967.-Vol. 10.-P. 117-161.

219. Krafft C, Sobottka S.B., Schackert G., Salzer R. Analisis of human brain tissue, brain tumors and tumor cells by infrared spectroscopic mapping // Analyst. - 2004. - №129(10). - P. 921—925.

220. Krafft C, Thummler K., Sobottka S.B., Schackert G., Salzer R. Classification of malignant gliomas by infrared spectroscopy and linear discriminant analysis // Biopolymers. - 2006. - №82 (4). - P. 301—305.

221. KrebsH. A. Persp//Biol. Med. - 1970. -№ 14. - P. 154-170.

222. Lenaz G. Mitochondria, oxidative stress and aging / G. Lenaz, M.L. Genorva, M. Merio Pich, M. Cavazzoni // The first regional meeting on medical sciences: The role of free radicals in health and disease.- Jerusalem, 1998. -P.188.

223. Levrat C. Tumour necrosis factor induces activation of mitochondrial succinate dehydrogenase / C. Levrat, J.W. Larrick, S.C. Wright // Life Sci. -1991.-Vol. 49.-P. 1731-1737.

224. Mahadevan J. J. Biomedical Optics. - 1996. - 70 p.

225. Mantsch M.J. of Molecular Structure. - 1995. - P. 347.

226. Norman A. Working atlas of infrared spectroscopi. - Boston, 1978. - P.

227. PetrovM.S., Gordetsov A.S., Kukosh M.V. Early prediction of severity in acute pancreatitis using infrared spectroscopy of serum // Pancreatology. - 2007. - № 7. - P. 451—458.

228. Petrov M., Gordetsov A., Kukosh M. Usefulness of spectral analysis in the stratification cation severity of acute pan creatitis // European Journal of Clinical Investigation. - 2005. - №35 (12). - P. 20.

229. Shapot V.S. On the multiform relationships between the tumor and host // Adv. Cancer Res. - 1979. - Vol. 30. - P. 89-150.

230. Rokitansky O. Klinik und biochemie der ozontherapie // Ozontherapie. - 1982. № 52. - P.643-711.

231. Steiner G., Shaw A., Choo-Smith Lin-Fing., Abuid M.H., Schackert G., Sobottka S., Steller W., Salzer R., Mantsch H.H. Distinguishing and grading human gliomas by IR spectroscopy // Biopolymers. - 2003. - №72 (6). P. 464—471.

232. Trenfield K. Masters C. Patterns of synthesis and degradation of lactate dehydrogenase during the cell cycle of Burlcitt's lymphoma cells // J. Biochem. 1980. - Vol. 11, №1. - P. 55-67.

233. Weber G. Enryme-pattern directed chemotherapy and cell proliferation rate // Meeting of the Europ. Study group for cell proliferation. - Budapest. -1983.-P.46.