Физико-химические свойства и стандартизация сополимеров винилпиридина в качестве иммуноадъювантов ветеринарных вакцин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Еремин Дмитрий Викторович

• Еремин Дмитрий Викторович
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Еремин Дмитрий Викторович

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Адъюванты

1.1.1 Минеральные адъюванты

1.1.2 Эмульсии

1.1.3 Иммуноактивные вещества

1.1.3.1 Сапонины

1.1.3.2 Цитокины

1.1.3.3 Микробные адъюванты

1.1.3.4 Полимеры 22 1.2История исследования сополимеров 2-метил-5-винилпиридина

и К-винилпирролидона

1.3 Синтез полимеров К-винилпирролидона

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Оборудование, объекты исследования, исходные и вспомогательные вещества

2.1.1 Оборудование

2.1.2 Вакцины

2.1.3 Животные

2.1.4 Основные и вспомогательные вещества

2.2 Химические методы исследования

2.2.1 Методика синтеза сополимера К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина

2.2.1.1 Перегонка мономеров

2.2.1.2 Перекристаллизация 2,2Л -азобисизобутиронитрила 39 2 2 13 Приготовление компенсирующей мономерной смеси

2.2.1.4 Приготовление реакционной смеси

2.2.1.5 Описание метода синтеза

2.2.2 Метод контроля соотношения концентраций (массовых долей) 2-метил-5-винилпиридина и К-винилпирролидона в реакционной массе

2.2.3 Выделение и очистка сополимера К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина из реакционной массы методом ультрафильтрации

2.2.4 Анализ мономерного состава сополимеров К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина

2.2.4.1 Анализ мономерного состава сополимера методом ЯМР

13С спектроскопии

2.2.4.2 Количественное определение соотношения мономерных звеньев в сополимерах К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина методом потенциометрического неводного титрования

2.2.4.3 Количественное определение соотношения мономерных звеньев в сополимерах К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина методом спектрофотометрии

2.2.5 Определение перекисных соединений

2.2.6 Определение К-винилпирролидона и а-пирролидона методом газожидкостной хроматографии

2.2.7 Определение средневязкостной молекулярной массы сополимера методом вискозиметрии

2.2.8 Методика определения растворимости сополимере N винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина в зависимости от соотношения звеньев фотометрическим методом

2.3 Биологические методы исследования

2.3.1 Определение количества жизнеспособных спор

2.3.2 Определение иммуногенной активности сополимера

2.3.2.1 Определение ЬВ50 для морских свинок референс-заражающей культуры штамма М-71

2.3.2.2 Определение специфической активности по показателю индекса иммунитета (ИИ) на морских свинках

2.3.3 Определение уровня иммунитета на кроликах

2.3.3.1 Определение уровня иммунитета на кроликах, привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов (ВГБК)

2.3.3.2 Постановка реакции гемагглютинации

2.3.3.3 Постановка реакции задержки гемагглютинации

2.3.4 Определение иммуностимулирующего действия вещества сополимера 2-метил-5-винилпиридина и К-винилпирролидона на цыплятах

2.3.5 Определение иммуностимулирующего действия вещества сополимера 2-метил-5-винилпиридина и К-винилпирролидона при комбинированном применении с живой вакциной при сибирской язве и инактивированной вакциной при классической чуме свиней

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Синтез сополимеров различного мономерного состава К винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина

3.2 Растворимость сополимера в водных растворах

3.3 Разработка нормативной документации на субстанцию

3.4 Исследование иммуноадъювантных свойств сополимеров К винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина в составе вакцин на лабораторных и сельскохозяйственных животных

3.4.1 Определение специфической активности по показателю индекса иммунитета на морских свинках

3.4.2 Определение иммуноадъювантных действия сополимера К винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина при вирусной геморрагической болезни кроликов

3.4.3 Определение иммуноадъювантных действия сополимера К винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина при комбинированном применении с живой вакциной при сибирской язве и при комбинированном применении с инактивированной вакциной при классической чуме свиней

3.4.4 Определение иммуностимулирующего действия сополимера

на цыплятах при птичьем гриппе подтип Н5Ш

4. ВЫВОДЫ

5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

6. ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Описание установки для очистки сополимеров на основе К-винилпирролидона

Приложение 2. Описание установки для получения сополимеров на основе К-винилпирролидона

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

2М5ВП 2-метил-5-винилпиридин

Ag Антиген

APC Антигенпрезентирующие клетки

BVDV Вирус диареи крупного рогатого скота 1 типа

DCs Дендритные клетки

DW Дистиллированная вода

FCA Полный адъювант Фрейнда (Freund's соmplеtе аdjuvаnt)

FMDV Вирус ящура (fооt-аnd-mоuth disеаsе virus)

IFN-а Интерферон-альфа

Ig Иммуноглобулин

IL Интерлейкин

LD50 Среднелетальная доза

LPS Липополисахарид

MPLA Монофосфориловый липид

N-ВПД N-винилпирролидон

PI3V Вирус парагриппа 3 типа

PRR Рецепторы распознавания патогенов (райет rесоgnitiоn rесеptоr)

PRRS Репродуктивно-респираторный синдром свиней ^огсте Rеprоduсtivе аnd Respiratory Syndrоmе)

Th2 Клетка Т-хелпера 2 типа

TLR Толл-подобные рецепторы (Tоll-likе rесеptоr)

в/м Эмульсии по типу вода-в-масле

в/м/в Эмульсии типа вода-масло-вода

ВГБК Вирус геморрагической болезни кроликов

ВГП Вирус гриппа птиц

ВЭЖХ Высокоэффективная жидкостная хроматография

ГАЕ Гемадсорбирующие единицы

ГЖХ Газожидкостная хроматография

ГЛФ Готовая лекарственная форма

ДАК 2,2Л - Азобисизобутиронитрил

ДДС Додецилсульфат

ДМСО Диметилсульфоксид

ДМФА Диметилформамид

ИИ Индекс иммунитета

КОЕ Колониеобразующие единицы

м/в Эмульсии по типу масло-в-воде

ММР Молекулярно-массовое распределение

ПАВ Поверхностно-активные вещества

РГА Рекция гемагглютинации

РЗГА Реакция торможения гемагглютинации

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Физико-химические свойства и стандартизация сополимеров винилпиридина в качестве иммуноадъювантов ветеринарных вакцин»

Актуальность темы исследования

Основными методами профилактики и лечения распространённых и особо опасных инфекционных заболеваний животных и птиц в ветеринарии является массовая вакцинация [1, 2]. Успешность иммунопрофилактики во многом определяется эффективностью используемых ветеринарных вакцин [3]. Иммуногенность ветеринарных вакцин зависит не только от количества и качества антигена, способа применения и технологии изготовления препарата, но и от правильного выбора неспецифических стимуляторов иммуногенеза -иммуноадъювантов [4 - 7].

В настоящее время большинство ветеринарных вакцин выпускается в виде сорбированных препаратов, в которых адъювантами служат минеральные производные: гидроокись алюминия, бентонит, фосфат кальция. Однако, применение этих соединений в качестве адъювантов имеет существенные недостатки [8]. Во-первых, эти адъюванты создают недостаточно напряженный и продолжительный иммунитет, во-вторых, они эффективны не для всех видов животных [9].

В настоящее время в ведущих центрах мира активно проводятся исследования по изучению новых классов адъювантов, в том числе синтетических полимеров [10, 11].

Одними из перспективных синтетических полимеров для этих целей являются сополимеры 2-метил-5-винилпиридина (2М5ВП) и К-винилпирролидона (К-ВПД) [12 - 15]. На основе этих сополимеров были получены лекарственные формы в виде глазных капель, препаратов для внутримышечного и ингаляционного введения. Было показано, что для создания лекарственных форм сополимеры должны содержать 35-40 звеньев 2М5ВП и иметь характеристическую вязкость 0,17 - 0,21. Была создана технология синтеза сополимеров 2М5ВП и К-ВПД [16 - 19].

Высокие физиологически активные свойства сополимеров 2М5ВП и К-ВПД, их доступность и разработанная технология синтеза обосновывают их

перспективность для использования в качестве адъювантов в ветеринарии. Однако, широко применяемые в лекарственных формах сополимеры 2М5ВП и N ВПД не соответствуют требованиям, предъявляемым к ветеринарным вакцинам. Необходимы новые сополимеры 2М5ВП и К-ВПД, другого мономерного состава, растворимые в воде в определенном интервале значений рН, температур, при определенных концентрациях полимера и вспомогательных соединений, при этом проявляющие высокие адъювантные свойства. Решение данной актуальной проблемы позволит создать более эффективные и безопасные, по сравнению с используемыми, вакцины для ветеринарии на основе сополимеров 2М5ВП и К-ВПД.

Цель исследования

Получение, исследование физико-химических свойств и стандартизация сополимеров винилпиридина в качестве иммуноадъювантов ветеринарных вакцин

Задачи исследования

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать метод контроля стадии сополимеризации и провести его валидацию.

2. Изучить влияние рН, температуры, неорганических солей и ПАВ на физико-химические свойства водных растворов сополимеров.

3. Выбрать оптимальный состав сополимера для использования в качестве иммуноадъюванта ветеринарных вакцин.

4. Стандартизовать и провести валидацию аналитических методик контроля качества полученных иммуноадъювантов.

5. Подготовить проект нормативной документации для субстанции сополимера ^винилпирролидона.

6. На ряде ветеринарных вакцин выбрать оптимальную концентрацию сополимера ^винилпирролидона в качестве иммуноадъюванта.

Научная новизна

В ходе работы разработана методика контроля стадии сополимеризации и проведена её валидация по выборочным параметрам показавшая приемлимость метода.

Впервые исследовано влияние рН, температуры, неорганических солей и ПАВ на физико-химические свойства сополимеров К-винилпирролидона в водных растворах.

Разработан спектрофотометрический способ определения пиридиновых звеньев в сополимере.

Разработана технология выделения сополимера из реакционной массы с использованием ультрафильтрации, исключающая использование токсичных и пожаровзрывоопасных органических растворителей.

В результате биологических исследований выбрана оптимальная концентрация иммуноадъюванта - сополимера К-винилпирролидона для ветеринарных вакцин.

Теоретическая и практическая значимость работы

1) Создана автоматизированная установка для синтеза сополимера К винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина (Патент на полезную модель №110743 от 08.07.2011).

2) Создана установка ультрафильтрационной очистки продуктов сополимеризации К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина (Патент на полезную модель №110744 от 08.07.2011).

3) Разработаны методы контроля качества сополимера К-винилпирролидона (проект нормативной документации (НД), апробированный в АО «ИФТ» от 11.04.2018), для дальнейшего использования его в качестве иммуноадъюванта ветеринарных вакцин.

4) Основные положения диссертации внедрены в учебный процесс кафедры биотехнологии и промышленной фармации ФГБОУ ВО «МИРЭА - Российский технологический университет» (акт внедрения от 11.04.2018).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических

наук

Диссертационная работа выполнена в рамках НИР кафедры биотехнологии и промышленной фармации ФГБОУ ВО «МИРЭА - Российский технологический университет» (НИР от 09.01.2017 г. КА-29).

Содержание диссертационной работы соответствует паспорту специальности 14.04.02 - «Фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведенных исследований соответствуют пунктам 1, 2 и 3 паспорта специальности «Фармацевтическая химия, фармакогнозия».

Методология и методы исследования

Методологической основой настоящей диссертационной работы выступили изучение и обобщение литературных данных об объекте исследования. Использованы методы ЯМР-спектроскопии, УФ-спектрофотометрии, рефракрометрии, титриметрического анализ, ВЭЖХ, ГЖХ. Математическая и статистическая (Р = 95%) обработка данных проводилась в программах Мюгобой Ехсе1 365.

Основные положения, выносимые на защиту

- Оптимизированный способ получения сополимеров К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина с заданными свойствами.

- Методики контроля качества полученных сополимеров.

- Результаты влияния рН, температуры, неорганических солей и ПАВ на физико-химические свойства водных растворов синтезированных сополимеров.

- Результаты исследования выбора оптимальной концентрации сополимера в качестве иммуноадъюванта ветеринарных вакцин.

Публикации и апробации работы

По материалам диссертации опубликовано 6 статей (в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ), а также 3 патента и 5 тезисов в материалах российских и международных конференций.

Результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на IV международной конференции Российского химического общества имени Д.И. Менделеева «Химическая технология и биотехнология новых материалов и продуктов», международной научно-практическая конференции «Фармацевтические и медицинские биотехнологии» 20-22 марта 2012 г., Москва, I международной Интернет-конференции Казань, 24-25 января 2013 г., 19 Российским национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 23-27 апреля 2012 г., Всероссийской научной Интернет-конференция с международным участием «Спектрометрические методы анализа» Казань, 26 сентября 2013 г.

Личный вклад автора состоял в постановке цели исследования, разработке экспериментальных и теоретических подходов при выполнении эксперимента, непосредственном проведении экспериментов, анализе, обобщении полученных результатов и их оформлении в виде научных публикаций и докладов.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментов, их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 27 таблицей и рисунками. Библиографический указатель включает 80 отечественных и 118 иностранных источников.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Адъюванты

Инфекционные болезни животных оказывают непосредственное существенное финансовое воздействие на глобальном уровне за счет производственных потерь, связанных с заболеваемостью и смертностью. Ряд инфекционных заболеваний млекопитающих и птиц вызывает дополнительную серьезную озабоченность из-за их зоонозного потенциала, способности к межвидовому и географическому переносу, а также способности уклоняться или подрывать иммунную защиту хозяев и отбрасывать больше вирулентных вариантов. Прямые и косвенные социальные и экономические издержки, связанные с такими инфекциями, трудно переоценить [1]. Для профилактики, лечения или устранения заболеваний широко применяются различные вакцины, что становится все более важным в качестве передового средства контроля, особенно потому, что постепенно появляются бактерии с широкой устойчивостью к доступным антибиотикам, а количество паразитов, устойчивых к противопаразитарным средствам, увеличивается [3 - 7, 20, 21].

В начале ХХ века французский ветеринар Гастон Рамон отметил, что добавление различных веществ, таких как хлорид кальция, сапонинов, крахмала, растительного масла и бактерий, к дифтерийному анатоксину, используемому для вакцинации лошадей, вызывает воспаление в месте инъекции, которое отвечает за усиление выработки антител против токсина. С тех пор адъюванты играют очень важную роль в вакцинации как животных, так и людей [22, 23].

Разработка безопасных, высокоочищенных субъединиц и инактивированных вакцин требует применения безопасных и эффективных адъювантов, поскольку антигены в этих типах вакцин обычно менее иммуногенны по сравнению с модифицированными живыми микробами [4, 5, 24 - 26].

На сегодняшний день известны многочисленные соединения органического, неорганического, синтетического и природного происхождения, демонстрирующие способность стимулировать иммунные реакции [7, 8, 27]. Эти

вещества могут быть разделены на две различные группы - иммуностимуляторы (сапонины, агонисты Толл-подобного рецептора (1:о11-Нке гесер1:ог, ТЬЯ), цитокины) и средства доставки (эмульсии, микрочастицы, минеральные соли) (Таблица 1) [28, 29].

Таблица 1 - Классификация адъювантов, доступных для ветеринарных вакцин [32, 33].

Группа адъювантов Примеры

Микрочастицы Гидроксид алюминия, сульфат калия-алюминия (алюм), фосфат алюминия (алгидрогель), фосфат кальция, иммуностимулирующие комплексы сапонинов (КСОМб), поли (лактид-ко-гликолид) (РЬО), альгинат, липосомы, неионные блочные сополимеры, виросомы, , вирусоподобные частицы

Эмульсии (могут быть типа в/м, м/в или в/м/в) Полные и неполные адъюванты Фрейнда (Мо^ашёе®, Тйегшах®, ШЫ®, БАБ®, МБ59®)

Иммуноактивные вещества Сапонин А или QS-21), ББА, монофосфорил липид А (МРЬ А), цитокины (IL-1, 1Ь-2, 1Ь-6, 1Ь-8, 1Ь-12, ЮТ-а, ОМ-СББ, М1Р-2, интерфероны 2 типа), хитозан

Микробные Термально-лабильный энтеротоксин и холерный токсин (LT, СТ) и их производные (ЬТК63, LTR72), (липо) полисахариды, СрО-олигонуклеотиды, липопептиды, флагеллин и другие агонисты типа То11-подобных рецепторов

Синтетические полимеры Полиангидриды, сложные полиэфиры, полиэфирамиды, декстран

Иммуностимуляторы стимулируют антигенпрезентирующие клетки (АРС) и способствуют выделению различных цитокинов, в то время как средства доставки

помогают сохранить конформацию антигенов (Ag) для правильного представления АРС и обеспечить медленное высвобождение для продолжения иммунной стимуляции [30]. Например, агонисты TLR и другие иммуностимулирующие вещества усиливают секрецию иммунных клеток и цитокинов, тогда как эмульсии и минеральные соли вызывают депо-эффект в месте инъекции с пролонгированным высвобождением антигена и продолжением стимуляции иммунных клеток [31].

1.1.1 Минеральные адъюванты

Соединения алюминия считаются одними из первых адъювантов, используемых в вакцинах. Соли алюминия легко формулируются в различных лекарственных формах и достаточно безопасны, что обусловливает их широкое использование во многих коммерчески доступных вакцинах для людей и животных [34]. Алюминиевые адъюванты способствуют секреции интерлейкина (IL) -4 - цитокина, который стимулирует иммунный ответ Т-хелпера 2 (Th2), что вызывает образование иммуноглобулинов IgG1 и IgE и эозинофилов, и делает эти адъюванты хорошими кандидатами для включения в состав антибактериальных и противопаразитарных вакцин [35, 36]. Однако, установлено, что их эффективность в отношении внутриклеточных патогенов, к которым относятся, например, возбудители таких экономически важных вирусных инфекций, как болезнь Ньюкасла и афтозная лихорадка, крайне ограничена [37]. Примерами применения в животноводстве являются поливалентные инактивированные вакцины, содержащие соединения алюминия в качестве адъювантов, применяемые у телят и беременных самок крупного рогатого скота для борьбы с вирусом крупного рогатого скота 1 типа (IBRV), вируса диареи крупного рогатого скота 1 типа (BVDV), вируса парагриппа 3 типа (PI3V) и ряда других (RESPIRA VAX; MSD Ашша1 Иеа1Ш, Великобритания) [38 - 40].

Фосфат кальция является другим коммерчески доступным минеральным адъювантом. Он был изучен и использован в вакцинах против различных токсоидов и вирусных патогенов [41 - 43]. В нескольких исследованиях показано, что фосфат кальция вызывает меньше локального раздражения тканей по

сравнению с адъювантами алюминия, что можно объяснить снижениям образования антител IgE [41, 44]. Однако, фосфат кальция и гидроксид алюминия обладают сравнимой эффективностью в стимулировании антигенспецифических гуморальных иммунных реакций.

Тем не менее, минеральные соли являются относительно безопасными и экономически эффективными адъювантами с длинной историей применения в вакцинации человека и животных. Они демонстрируют хорошую адъювантность в вакцинах против внеклеточных патогенов, однако, как упоминалось выше, их применение в вакцинах, нацеленных на внутриклеточные бактериальные инфекции, ограничено [36, 45, 46].

1.1.2 Эмульсии

Как и в случае с минеральными солями, эмульсии в течение длительного времени использовались в качестве адъювантных систем в ветеринарных вакцинах, поскольку они относительно просты в производстве и демонстрируют хорошую эффективность [4, 25, 28].

Различные типы эмульсий реализуют различные механизмы действия в вакцинных препаратах. В случае эмульсии воды в масле (в/м) антиген задерживается в водной фазе, окруженной непрерывной масляной фазой, и медленно высвобождается при повреждении масляного слоя после инъекции [47]. Эффект депо в месте инъекции защищает антиген от быстрого выведения печенью и разрушения посредством фагоцитоза, следовательно, продлевает время, необходимое для накопления иммунных клеток и процессирования антигена [48, 49]. Наиболее известным примером адъювантов с эмульсией по типу в/м являются адъюванты Фрейнда на основе парафинового масла и убитых, и высушенных микобактерий (полный адъювант Фрейнда, FCA) или без микобактерий (неполный адъювант Фрейнда, FIA). Данные адъюванты используют в составе вакцины против возбудителей болезни Ньюкасла у цыплят [50], субъединичной вакцины против Mycoplasma hyopneumoniae у свиней [51], инактивированной вакцины против ящура у свиней [52] и крупного рогатого скота [53, 54] и вакцин против различных вирусных и бактериальных инфекций

фермерской рыбы [55, 56]. При их высокой эффективности они вызывают сильные побочные реакции, среди которых особенно отмечают локальные болевые воспалительные поражения, что ограничивает их использование в вакцинах животных и человека [57]. Разрешенные к применению эмульсии в/м доступны под торговой маркой МоПашёе Мсошр^е SEPPIC Adjuvents (ISA) (SEPPIC, Франция). Эти адъюванты демонстрируют эффективность на уровне FIA, но имеют меньше побочных эффектов и используются в ветеринарных вакцинах [58, 59].

Другим типом эмульсии, используемой в вакцинах, являются эмульсии масло в воде (м/в), образованные дисперсией капель масла в водной фазе. В отличие от эмульсий в/м, адъювант на основе эмульсии типа м/в не образует антиген-депо в месте инъекции. Вместо этого капли масла облегчают хемокин-опосредованное накопление иммунных клеток и дифференцировку макрофагов и дендритных клеток (DCs) [60, 61]. Данные адъюванты обнаруживали лучшую активность в стимулировании клеточного иммунного ответа против вируса гриппа, чем гидроксид алюминия или фосфат кальция [62].

Исследования MF59 (адъюванта вакцины с скваленами м/в) пролили некоторый свет на то, как эмульсии м/в индуцируют иммунные ответы [63]. В отличие от эмульсий в/м, адъювант на основе эмульсии не образует антиген-депо в месте инъекции. Вместо этого капли масла облегчают хемокиновую активацию иммунных клеток и дифференцировку макрофагов и дендритных клеток (DCs) [60, 61]. MF59 продемонстрировал лучшую адъювантность в стимулировании клеточного иммунного ответа против вируса гриппа, чем гидроксид алюминия или фосфат кальция.

Для ветеринарного применения существует несколько коммерческих адъювантов м/в, которые существуют под брендами МоПашёе ISA, ЕшиЫ§еп (MVP Tесhnо1оgiеs, США) и MеtаStim ^ог! Lаbоrаtоriеs, США). Результаты

многочисленных исследований показывают, что эмульсии м/в являются более подходящими адъювантами для вакцин против вирусных патогенов, чем минеральные соли [64 - 66].

С целью снижения проблем эмульсий типа в/м, связанных с возникновением местнораздражающего действия и высокой вязкостью, были предприняты попытки разработать в качестве вакцинных адъювантов многофазные эмульсии типа вода-масло-вода (в/м/в) [67 - 69]. В таких эмульсиях масляные капельки, содержащие внутри капельки воды, диспергируют в непрерывную водную фазу. Предполагалось, что данный подход позволит обеспечить как быстрое высвобождение антигенов из внешней водной фазы, так и их длительное высвобождение из внутренних капель воды. Таким образом, этот тип вакцины может быстро и непрерывно стимулировать иммунные клетки [67]. Многослойные эмульсии достаточно хрупкие по структуре, и приготовление их лекарственных форм представляет большую проблему, однако, они демонстрируют достаточную эффективность и обеспечивают защиту различных видов сельскохозяйственных животных от нескольких важных патогенов, среди которых вирусы гриппа и ящура (БМОУб) [70, 71].

Характер и количество компонентов эмульсии оказывают значительное влияние не только на физическую и химическую стабильность конечных продуктов, но также на уровень иммунного ответа и побочных реакций после вакцинации [72, 73]. Несколько исследований показывают, что плохо метаболизирующееся минеральное масло обладает более высокой эффективностью в составе вакцины по сравнению с растительными маслами [72]. Кроме того, в ряде работ отмечалось протекание побочных реакций при использовании эмульсий, содержащих высокие концентрации ПАВ [73].

Основным ограничивающим фактором для рационального применения эмульсий в качестве адъювантов является недостаточность сведений о влиянии дисперсности эмульсии на протекание иммунных реакций. Исследователи [74] обнаружили, что эмульсии с размером капель 160 нм дают значительно более высокие титры антител у мышей, чем эмульсии с диаметром капель 20 нм. Однако, в другом исследовании предполагается, что частицы с диапазоном размеров 10-200 нм двигаются быстрее и более эффективно воздействуют на иммунные клетки [51].

В целом, эмульсионные адъюванты перспективны для использования в составове ветеринарных вакцин, поскольку они могут быть приготовлены с использованием недорогих, легко доступных компонентов, таких как минеральное масло и пищевые эмульгаторы. Однако, дальнейшие исследования необходимы для полного понимания взаимосвязи между физическими характеристиками эмульсий и их способностью вызывать иммунные реакции у животных [3, 27].

1.1.3 Иммуноактивные вещества 1.1.1.1 Сапонины

Сапонины представляют собой амфипатические соединения природного происхождения, состоящие из одного или нескольких гидрофильных гликозидных фрагментов, присоединенных к липофильному производному тритерпена, и широко используются в фармацевтике. В частности, способность стимулировать иммунные реакции способствовала их использованию в качестве адъювантов в вакцинах для животных [75, 76].

Наиболее известным адъювантом на основе сапонина является Quil-A (Бгепд1а§ БюБес1:ог A/S, Дания). Quil-A представляет собой гетерогенную смесь водорастворимых сапонинов, экстрагированных из Quillаjа 8аропапа, дерева, произрастающего в Южной Америке. Вследствие своей токсичности Quil-A не подходит для вакцин для человека [77], однако, он широко используется в ветеринарии [78 - 80]. Добавление Quil-A к вакцинам против вируса ящура и репродуктивного и респираторного синдрома свиней улучшает их иммуногенность по сравнению с вакцинами без адъювантов. QS-21, представляющая собой очищенную фракцию Q. 8аропапа, в настоящее время проходит несколько клинических испытаний в составе противораковых препаратов у человека и инфекционных вакцин [81]. Кроме того, QS-21 используется в качестве адъюванта в коммерчески доступной вакцине для кошачьей лейкемии [82].

Комбинация холестерина, фосфолипидов и очищенных фракций Quil-A в иммуностимулирующих комплексах (ISCOM) помогает улучшить стабильность и

снизить токсичность сапонинов [83, 84]. 1БСОМ имеет клетчатую структуру, способную сохранять и доставлять антиген АРС. Кроме того, характер и размер частиц комплексов эффективно способствует фагоцитозу антигена посредством АРС [85]. 1БСОМ могут эффективно стимулировать реакции СD4+ и СD8+ Т-клеток. Таким образом КСОМ используются в вакцинах для лошадей против вируса гриппа и вируса герпеса 2 в нескольких европейских странах [86]. В нескольких исследованиях также показано, что он может эффективно индуцировать выработку нейтрализующих антител и повышать защитный иммунитет против BVDV у овец и телят [87, 88].

1.1.1.2 Цитокины

Цитокины являются ключевыми звеньями иммунного ответа, опосредуемого агонистами Толл-подобных рецепторов (TLR). Использование цитокинов в качестве вакцинных адъювантов интенсивно исследуется в вакцинах для животных [89 - 91]. Эти небольшие белки играют решающую роль в передаче сигналов в клетке, инициации и контроле клеточного и гуморального иммунного ответа. Например, ^-2, 1Ь-12 и интерферон-альфа (ШК-а) облегчают стимуляцию клеток ТЫ, ответственных за клеточно-опосредованные иммунные ответы против внутриклеточных патогенов. С другой стороны, цитокины ^-4, 1Ь-5 и ^-10 способствуют развитию клеток ТМ и выработке антител, которые важны для защиты хозяина от внеклеточных патогенов. В дополнение к увеличению активности ТЫ -клеток также усиливает поглощение и выработку антигенов путем индукции экспрессии основных молекул гистосовместимости МНС-11 на антиген-презентирующих клетках [92]. В недавнем исследовании свиньи, иммунизированные аттенуированной СББ-вакциной с в качестве адъюванта, развивали значительно более высокие уровни IgG-антител против СББ-вируса и увеличивали экспрессию молекул МНС-1 и МНС-11 по сравнению с группами, которые получали аттенуированную вакцину [93]. Совместное введение свиного ШК-а с субъединичной вакциной FMD способствовало продуцированию антигенспецифических антител и защиты свиней от заражения FMDV [94].

Цитокины также используются в вакцинах для различных вирусных заболеваний домашней птицы [95], быка [96] и видов рыб [97]. Недавние примеры включение IL-18 в вакцину для болезни Ньюкасла [98] и IL-7 в ДНК-вакцину для инфекционной бурсальной болезни [99]. Бычий IL-18 также использовался в качестве адъюванта в ДНК-вакцине против вируса ящура, которая индуцировала опосредованные клеточные реакции и ответы на антитела у крупного рогатого скота. Однако, не все животные были защищены от заражения вирусом ящура [100]. Атлантический лосось, иммунизированный ДНК-вакциной, состоящей из вирусного белка анемии лосоля и интерферона лосося типа I, индуцировал более высокие уровни антител и приток В-клеток и CD8+ Т-клеток по сравнению с иммунизированным ДНК-вакциной без цитокина [101].

1.1.1.3 Микробные адъюванты Еще Фрейнд и его коллеги заметили, что добавление убитых микобактерий в эмульсию из минерального масла улучшает образование антител у кроликов и морских свинок [102]. TLR представляют собой мембранные рецепторы, экспрессируемые в макрофагах и DC, которые распознают специфические компоненты микробов и инициируют механизмы врожденного иммунитета [103]. Активация TLR может способствовать индукции антигенспецифического иммунитета, индуцируя экспрессию определенных цитокинов, участвующих в дифференцировке Т-клеток. Например, липополисахариды (LPS), структурные компоненты поверхностной мембраны грамотрицательных бактерий, являются агонистами TLR4, которые стимулируют антиген-презентирующие клетки секретировать IL-1b, IL-12, IL-18, IL-23 и IL-27, в свою очередь опосредующие клеточный и гуморальный иммунитет против вирусов и других внутриклеточных патогенов [104]. Монофосфориловый липид А (MPLA), низкотоксичный компонент LPS, используется в человеческой вакцине против гепатита B (Бирегуах, Бупауах Tесhnоlоgiеs, США) [105]. MPLA в сочетании с гидроксидом алюминия (AS04; 01ахо8тШКНпе, Великобритания) усиливает иммунные реакции на антиген гепатита В по сравнению с вакциной только с гидроксидом алюминия [106]. Другие примеры агонистов TLR включают бактериальный

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Еремин Дмитрий Викторович, 2020 год

5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1) Новиков О.Г. Эпизоотология наиболее распространенных инфекционных болезней крупного рогатого скота, разработка средств и методов их профилактики и лечения: дисс. доктора ветеринарных наук, 2002, Воронеж, 202 с.

2) Богоутдинов Н.Ш. Биотехнологические аспекты разработки экспериментальной терапевтической вакцины против актиномикоза крупного рогатого скота: дисс. кандидата биологических наук, 2014, Саратов, 158 с.

3) Ветеринарная иммунология [Текст] : фундаментальные основы : учебник / В. М. Манько, Д. А. Девришов. - Москва: Агровет, 2011. - 751 с.

4) Кисленко В.Н., Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология: учебник / Под редакцией проф. В.Н. Кисленко. - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 752 с.

5) Барышников П.И. Ветеринарная вирусология: учебное пособие / П.И. Барышников. Барнаул: Изд-во АГАУ, 2006. 113 с.

6) Белоусова Р.В., Преображенская Э.А., Третьякова И.В. Ветеринарная вирусология: учебник для вузов / М.: КолосС, 2007. — 424 с.

7) Ярилин А.А., Основы иммунологии: Учебник. — М.: Медицина, 1999. — С. 608

8) XII Государственной фармакопея Российской Федерации : Часть 1 / .Издательство .Научный центр экспертизы средств медицинского применения., 2008. - 704 с. : ил. - ISBN 978-5-9901447-1-2.

9) Беу А.К. РЬув1сосЬеш1са1 апё Шпсйопа1 ^ага^епгайоп оf уассте апй§еп8 апё асУиуаЛз. / Беу А.К., Ма1уа1а P., Singh M. // Ехрей rеviеw оf уасстеБ. - 2014. - Уо1. 13. - № 5. - Р. 671 - 685.

10) СЫаге11а Р. АсУ^аЛ^ in vассinеs апё for immunisаtiоn: сштеп trends. / СЫаге11а Р., Mаssi Е., Бе ЯоЬег^ М., Sigrnri Е., Багю У.М. // Ехре!! Opinfon оп B^fog^ ТЪегару. - 2007. - Уо1. 7. - № 10. - Р. 1551 - 1562.

11) ^^аёа Е. ^е ехрапё^ го1е оf iшшunоphаrшасо1оgy: ЮТИАЯ Rеviеw 16. / ^^аёа Е., Ishii М, Шсса^ С., Spеdding М., Siшоn H.U., Tеixеirа М.М.,

Cuervo M.L., Holgate S.T., Levi-Schaffer F. // British Journal of Pharmacology. -2015. - Vol. 172. - No 17. - P. 4217 - 4227.

12) Cидeлькoвcкaя Ф.П. Химия N-винилпиррoлидoнa и ero пoлимeрoв. M.: HayKa, 1970. - 150 c.

13) Кирш Ю.Э., Пoли-N-винилпиррoлидoн и друг^ пoли-N-винилaмиды: синтез и физикo-химичecкиe cвoйcтвa. M.: HayKa, 1998. - 252 с.

14) Пoлимeры мeдицинcкoгo нaзнaчeния. Пoд рeд. Cэнoo MaHaöy. M.: Мeдицинa, 1981. - 248 с.

15) Птатэ H.A., BacanbeB А.Е. Физиoлoгичecки aKraBHbie пoлимeры. М.: Химия, 1986. - 296 с.

16) Kan^TpaTOB, В.Г. Прoтивoлyчeвыe и дрyгиe биoлoгичecкиe CBo^TBa coпoлимepa 2-мeтил-5-винилпиpидинa и N-винилпиppoлидoнa / В.Г. Kan^TpaTOB, С.А. Keдик, В.И. CBepryH // Мeдицинcкaя paдиoлoгия. - 1993. - Т. 38. - № 10. - с. 21-25

17) naT. 2459838 C1 Po^fc^ Фeдepaция, МПК C08F226/10 (2006.01), A61K31/79 (2006.01) Coпoлимep, coдepжaщий звeнья N- винилпиppoлидoнa, 2-мeтил-5-винилпиpидинa и 4-винилпиридита / С.А. Keдик, A.B. Шшв, Ю.В. Koчкинa и др. ; зaявитeль и пaтeнтooблaдaтeль С.А. ^дик. - № 2011140410/04 ; зaявл. 05.10.2011 ; oпyбл. 27.08.2012, Бюл. № 24. - 13 с. : ил

18) naT. 2430933 C1 Po^fc^ Фeдepaция, MnK C08F226/10 (2006.01), A61K31/79 (2006.01) Coпoлимepы 2-мeтил-5-винилпиpидинa и N117 винилпиppoлидoнa, oблaдaющиe cвoйcтвaми aктивaтopoв фaгoцитoзa / С.А. ^дик, A.B. naHoB, М.А. Зaйцeв и др. ; зaявитeль и пaтeнтooблaдaтeль С.А. Keдик. - № 2010144325/04 ; зaявл. 29.10.2010 ; oпyбл. 10.10.2011, Бюл. № 28. - 9 с. : ил.

19) Шт. 2430932 С1 Po^fc^ Фeдepaция, MnK C08F226/10 (2006.01), А61К31/79 (2006.01) Coпoлимepы 2-мeтил-5-винилпиpидинa и n-винилпиppoлидoнa, aктивиpyющиe пpoдyциpoвaниe интepлeйкинa-1, и их пpимeнeниe в кaчecтвe пpoтивopaкoвых arernoB / С.А. Keдик, А.В. naHoB, М.А.

Зайцев и др. ; заявитель и патентообладатель С.А. Кедик. - № 2010144324/04 ; заявл. 29.10.2010 ; опубл. 10.10.2011, Бюл. № 28. - 11 с. : ил.

20) Мшшеую D. Кев1в1апсе to Ше 1е1хасус1те8 апё тасгоНёе-Нпсоватёе-streptogramin group of entibiotics апё its gеnеtiс 1inkаgе - а геу1е1^ / МагоБеу1с D., КаеУБка М., Jаg1iс Z. // Аппа1Б of Agricultural апё Еnуironmеntа1 Mеdiсinе. - 2017.

- Vol. 24. - No 2. - P. 338 - 344.

21) Li J. AntimicrobiBl Activity а^ Rеsistаncе: Inf^ncing БаСшБ. / Li J., Xiе S., Ahmеd S., Wаng F., Gu Y., Zhаng С., СЬш X., Wu Y., Саi J., ^ng G. // Frontiеs in Phаrmаco1ogy. - 2017. - Vol. 13. - No 8. - P. 364.

22) Еbisаwа I. ^е еncountеr of Gаston R^mon (1886-1963) with formа1in: а biographic^ study of а grеаt sciеntist. / ЕЬisаwа I. // Kitаsаto Archiуеs of Еxpеrimеntа1 Mеdicinе. - 1987. - Vol. 60. - No 3. - P. 55 - 70.

23) Apostolico Jdе S. Adjuvаnts: Qаssifícаtion, Modus Оpеrаndi, аnd Licеnsing. / Apostolico Jdе S., Lunаrdе11i V.A., Сoirаdа F.C., Boscаrdin S.B., Rosа D.S. // Jourml of Immunology Rеsеаrch. - 2016. - Vol. 2016. - Art. ID 1459394.

24) Fogеd С. Subunit Vаccinе Dе1ivеry. / Fogеd С., Rаdеs Th., Pеrriе Y., Hook S. // №w York, NY: Springеr-Vеr1аg, 2015. - 426 p.

25) Брундтланд Г.Х. Вакцины и иммунизация: пoлoжение в мире. / Брундтланд Г.Х., Беллами К., Вульфеншн Д. // Педиатриче^ая фармакoлoгия.

- 2007. - Т. 4. - № 6. - С. 64-68.

26) Мальцева Б.М. Пер^ект^ы иcпoльзoвания в ветеринарии ДНК-вакцин. / Мальцева Б.М. // Ветеринария. Реферативный журнал. - 2001. - № 3. -С. 701.

27) Вш-а^уа Y. Adjuvаnts for Длта! Vаccinеs. / Вша^уа Y., Mаdеrа R., McVеy S., Schlup J.R., Shi J. // Virа1 Immunology. - 2017. - doi: 10.1089/vim.2017.0049. [Epub аhеаd of print]

28) Cox J.C. Adjuvаnts—а c1аssifícаtion аnd еviеw of thеir modеs of а^юа / Cox J.C., Cou1tеr A.R. // Vаccinе. - 1997. - Vol. 15. - P. 248 - 256.

29) O'Hagan D.T. New-generation vaccine adjuvants - from empiricism to rational design. / O'Hagan D.T., Fox C.B. // Vaccines. - 2015. - Vol. 33. - Suppl 2. -P. 14 - 20.

30) Knight-Jones T. Veterinary and human vaccine evaluation methods. / Knight-Jones T., Edmond K., Gubbins S., Paton D.J. // Proceeding of the Royal Society B: Biological Sciences. - 2014. - Vol. 281. - P. 17 - 84.

31) Meeusen E. Current status of veterinary vaccines. / Meeusen E., Walker J., Peters А., Pastoret P.P., Jungersen G. // Clinical Microbiology Review. - 2007. -Vol. 20. - P. 489 - 510.

32) Chambers M.A. Challenges in Veterinary Vaccine Development and Immunization. / Chambers M.A., Graham S.P., La Ragione R.M. // Vaccine Design: Methods and Protocols. Volume 2: Vaccines for Veterinary Diseases, Methods in Molecular Biology. - 2016. - Vol. 1404. - P. 3 - 35.

33) CeMaKoBa А.П. Адъювaнтныe тeхнoлoгии в coздaнии coBpeMeHHbix вaкцин. / CeMaKoBa А.П., Микшдо Н.И. // Прoблeмы ocoöo onacHbix инфeкций. -2016. - № 2. - C. 28 - 35.

34) Kyp6aToBa Е.А.. Дeйcтвиe r^ApoKc^Aa aлюминия Ha ^creMy вpoждeннoгo иммyнитeтa и иммyнoгeннocть бaктepиaльных и №HTera4ecrax affrnreHoB Streptococcus Pneumoniae. / Kyp6aTOBa Е.А., AxMaTOB Э.А., AxMaTOBa Н.К., Bopo6beB Д.С, EropoBa Н.Б., Бaтypo А.П., PoMaHeHKo Э.Е., ^eraoB Ю.Е., CyxoBa Е.В., Яшун^ий Д.В., Нифaнтьeв Н.Э. // Жypнaл микpoбиoлoгии, эпидeмиoлoгии и иммyнoбиoлoгии. - 2014. - № 6. - c. 59 - 67.

35) Golos А. Aluminium-adjuvanted vaccines--a review of the current state of knowledge. / Golos A., Lutynska A. // Przeglad Epidemiologiczny. - 2015. - Vol. 69. - No 4. - P. 731 - 734.

36) Poltera A.A. Aluminium chelation in chronic haemodialysis and aluminium adjuvanted vaccines. / Poltera A.A. // Vaccine. - 1999. - Vol. 18. - No 7-8. - P. 577 -578.

37) Lopez A.M. Formulation with CpG ODN enhances antibody responses to an equine influenza virus vaccine. / Lopez A.M., Hecker R., Mutwiri G., van Drunen

Littel-van den Hurk S, Babiuk LA, Townsend HG. // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2006. - Vol. 114. - No 1-2. - P. 103 - 110.

38) MSD Animal Health Respiravax™ http://www.msd-animal-health.co.za/products/respiravax/020_product_details.aspx

39) HogenEsch H. Mechanisms of stimulation of the immune response by aluminum adjuvants. / HogenEsch H. // Vaccine. - 2002. - Vol. 20. - Suppl. 3. - P. 34 - 39.

40) Lindblad E.B. Aluminium compounds for use in vaccines. / Lindblad E.B. // Immunology & Cell Biology. - 2004. - Vol. 82. - P. 497 - 505.

41) He Q. Calcium phosphate nanoparticle adjuvant. / He Q., Mitchell A.R., Johnson S.L., Wagner-Bartak C., Morcol T., Bell S.J.D. // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. - 2000. - Vol. 7. - P. 899 - 903.

42) He Q. Calcium phosphate nanoparticles induce mucosal immunity and protection against herpes simplex virus type 2. / He Q., Mitchell A.R., Morcol T., Bell S.J.D. // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. - 2002. - Vol. 9. -No 5. - P. 1021 - 1024.

43) Relyveld E.H. Preparation and use of calcium phosphate adsorbed vaccines. / Relyveld E.H. // Development in Biological Standardization. - 1986. - Vol. 65. - P. 131 - 136.

44) Михaлишин В.В. Aдъювaнты и их иcпoльзoвaниe. / Михaлишин В.В., MaMKoB H.C. // Труды Фeдeрaльнoгo ^rnpa oxpaHbi здoрoвья живoтных. - 2008.

- Т. 6. - c. 340 - 371.

45) Petrovsky N. Comparative safety of vaccine adjuvants: a summary of current evidence and future needs. / Petrovsky N. // Drug Safety. - 2015. - Vol. 38. - No 11.

- P. 1059 - 1074.

46) HogenEsch H. Mechanism of Immunopotentiation and Safety of Aluminum Adjuvants. / HogenEsch H. // Fronties in Immunology. - 2012. - Vol. 3. - article 406.

47) Iyer V. Impact of formulation and particle size on stability and immunogenicity of oil-in-water emulsion adjuvants. / Iyer V., Cayatte C., Guzman

B., Schneider-Ohrum K., Matuszak R., Snell A., Manohar G., McCarthy M.P., Muralidhara B. // Human Vaccine Immunotherapy. - 2015. - Vol. 11. - No 7. - P. 1853 - 1864/

48) Fox C.B. Immunomodulatory and Physical Effects of Oil Composition in Vaccine Adjuvant Emulsions. / Fox C.B., Baldwin S.L., Duthie M.S., Reed S.G., Vedvick T.S. // Vaccine. - 2011. - Vol. 29. - No 51. P. 9563 - 9572.

49) Powell B.S. Polyionic vaccine adjuvants: another look at aluminum salts and polyelectrolytes. / Powell B.S., Andrianov A.K., Fusco P.C. // Clinical and Experimental Vaccine Research. - 2015. - Vol. 4. - No 1. P. 23 - 45.

50) Arous J.B. Reduction of Newcastle disease vaccine dose using a novel adjuvant for cellular immune response in poultry / Arous J.B., Deville S., Pal J.K., Baksi S., Bertrand F., Dupuis L. // Procedia in Vaccinology. - 2013. - Vol. 7. - P. 28 - 33.

51) Jorge S. The Mycoplasma hyopneumoniae recombinant heat shock protein P42 induces an immune response in pigs under field conditions. / Jorge S., de Oliveira N.R., Marchioro S.B., Fisch A., Gomes C.K., Harteben C.P., Conceicao F.R., Dellagostin O.A. // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Disease. - 2014. - Vol. 37. - P. 229 - 236.

52) Ibrahim E.E. Comparative study on the immunopotentiator effect of ISA 201, ISA 61, ISA 50, ISA 206 used in trivalent foot and mouth disease vaccine. / Ibrahim E.E., Gamal W.M., Hassan A.I., Mahdy S.D., Hegazy A.Z., Abdel-Atty M.M. // Veterinary World. - 2015. - Vol. 8. - No 10. - P. 1189 - 1198.

53) Iyer A.V. Evaluation of three 'ready to formulate' oil adjuvants for foot-and-mouth disease vaccine production. / Iyer A.V., Ghosh S., Singh S.N., Deshmukh R.A. // Vaccine. - 2000. - Vol. 19. - No 9-10. - P. 1097 - 1105.

54) Khorasani A. Evaluation of the efficacy of a new oil-based adjuvant ISA 61 VG FMD vaccine as a potential vaccine for cattle. / Khorasani A., Madadgar O., Soleimanjahi H., Keyvanfar H., Mahravani H. // Iranian Journal of Veterinary Research. - 2015. - Vol. 17. - No 1. - P. 8 - 12.

55) Tafalla C. Adjuvants and immunostimulants in fish vaccines: current knowledge and future perspectives. / Tafalla C., B0gwald J., Dalmo R.A. // Fish and Shellfish Immunology. - 2013. - Vol. 35. - No 6. - P. 1740 - 1750.

56) Veenstra K.A. Immune responses in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) following the administration of cell-mediated and humoral W/O adjuvanted vaccines post-vaccination and post-challenge. / Veenstra K.A., Tubbs L., Ben Arous J., Secombes C.J. // Fish and Shellfish Immunology. - 2016. - Vol. 53. - P. 6 - 7.

57) Stills H.F. Adjuvants and antibody production: dispelling the Myths associated with Freund's complete and other adjuvants. / Stills H.F. // ILAR Journal. - 2005. - Vol. 46. - No 3. - P. 280 - 293.

58) https: //www. seppic. com/montanide-isa-w-o

59) Halassy B. Effectiveness of novel PGM-containing incomplete Seppic adjuvants in rabbits. / Halassy B., Vdovic V., Habjanec L., Balija M.L., Gebauer B., Sabioncello A., Santek T., Tomasic J. // Vaccine. - 2007. - Vol. 25. - No 17. - P. 3475 - 3481.

60) Dupuis M. Immunization with the adjuvant MF59 induces macrophage trafficking and apoptosis. / Dupuis M., Denis-Mize K., LaBarbara A., Peters W., Charo I.F., McDonald D.M., Ott G. // European Journal of Immunology. - 2001. -Vol. 31. - No 10. - P. 2910 - 2918.

61) Seubert A. The adjuvants aluminum hydroxide and MF59 induce monocyte and granulocyte chemoattractants and enhance monocyte differentiation toward dendritic cells. / Seubert A., Monaci E., Pizza M.,O'Hagan D.T., Wack A. // Journal of Immunology. - 2008. - Vol. 180. - No 8. - P. 5402 - 5412.

62) Wack A. Combinatio adjuvants for the induction of potent, long-lasting antibod and T-cell responses to influenza vaccine in mice. / Wack A., Baudner B.C., Hilbert A.K., Manini I., Nuti S., Tavarini S., Scheffczik H., Ugozzoli M., Singh M., Kazzaz J., Montomoli E., Del Giudice G., Rappuoli R., O'Hagan D.T. // Vaccine. -2008. - Vol. 26. - No 4. - P. 552 - 561.

63) O'Hagan D.T. The mechanism of action of MF59—an innately attractive adjuvant formulation. / O'Hagan D.T., Ott G.S., De Gregorio E., Seubert A. // Vaccine. - 2012. - Vol. 30. - No 29. - P. 4341 - 4348.

64) Oreskovic Z. Oil-based adjuvants delivered intradermally induce high primary IgG2 immune response in swine. / Oreskovic Z., Kudlackova H., Krejci J., Nechvatalova K., Faldyna M. // Research in Veterinary Science. - 2017. - Vol. 114. - P. 41 - 43.

65) https://www.seppic.com/montanide-isa-o-w

66) http://pfizerusa.naccvp.com/view_label.php?print=1 &prodnum=1003

67) Bozkir A. Preparation and evaluation of multiple emulsions water-in-oil-in-water (W/O/W) as delivery system for influenza virus antigens. / Bozkir A., Hayta G. // Journal of Drug Targeting. - 2004. - Vol. 12. - No. 3. - P. 157 - 164.

68) Fukanoki S. Safety and efficacy of water-in-oil-in-water emulsion vaccines containing Newcastle disease virus haemagglutinin-neuraminidase glycoprotein. / Fukanoki S., Iwakura T., Iwaki S., Matsumoto K., Takeda R., Ikeda K., Shi Z., Mori H. // Avian Pathology: the journal of the W.V.P.A. - 2001. - Vol. 30. - No 5. - P. 509 - 516.

69) Leclercq S.Y. Evaluation of water-in-oil-in-water multiple emulsion and microemulsion as potential adjuvants for immunization with rabies antigen. / Leclercq S.Y., dos Santos R.M.M., Macedo L.B., Campos P.C., Ferreira T.C., de Almeida J.G., Seniuk J.G., Serakides R., Silva-Cunha A., Fialho S.L. // Europeian Journal of Pharmacuetical Science. - 2011. - Vol. 43. - No 5. - P. 378 - 385.

70) Bouguyon E. A new adjuvant combined with inactivated influenza enhances specific CD8 T cell response in mice and decreases symptoms in swine upon challenge. / Bouguyon E., Goncalves E., Shevtsov A., Maisonnasse P., Remyga S., Goryushev O., Deville S., Bertho N., Ben Arous J. // Viral Immunology. - 2015. -Vol. 28. - No 9. - P. 524 - 531.

71) Maree F.F. Intra-serotype SAT2 chimeric foot-and-mouth disease vaccine protects cattle against FMDV challenge. / Maree F.F., Nsamba P., Mutowembwa P.,

Rotherham L.S., Esterhuysen J., Scott K. // Vaccine. - 2015. - Vol. 33. - No 25. - P. 2909 - 2916.

72) Jansen T. Structure and oil type-based efficacy of emulsion adjuvants. / Jansen T., Hofmans M.P.M., Theelen M.J.G., Manders F. // Vaccine. - 2006. - Vol. 24. - No 26. - P. 5400 - 5405.

73) Oda K. Emulsifier content and side effects of oil-based adjuvant vaccine in swine. / Oda K., Tsukahara F., Kubota S., Kida K., Kitajama T., Hashimoto S. // Researsh in Veterinary Science. - 2006. - Vol. 81. - No 1. - P. 51 - 57.

74) Shah R.R. The development of self-emulsifying oil-in-water emulsion adjuvant and an evaluation of the impact of droplet size on performance. / Shah R.R., Dodd S., Schaefer M., Ugozzoli M., Singh M., Otten G.R., Amiji M.M., O'Hagan D.T., Brito L.A. // Journal of Pharmaceutical Science. - 2015. - Vol. 104. - No 4. -P. 1352 - 1361.

75) Kensil C.R. Saponins as vaccine adjuvants. / Kensil C.R. // Critical Reveiws in Therapeutic Drug Carrier System. - 1996. - Vol. 13. No 1-2. - P. 1 - 55.

76) Eрeмeц В.И. Иcпoльзoвaниe caпoнинoв при кoнcтруирoвaнии nporaBoB^ycHbix вaкцин. / Eрeмeц В.И., CaMyaneHKo A^., Eрeмeц Н.К., Фoминa r.A., C^4ko Н.Д. // Pa3pa6oTKa и ocBoeH^ прoизвoдcтвa hoboto пoкoлeния лeкaрcтвeнных cрeдcтв для живoтных и их примeнeния в вeтeринaрнoй ^aKraKe Вceрoccийcкaя нayчнo-прaктичecкaя кoнфeрeнция: тeзиcы дoклaдoв. - 2000. - C. 52 - 54.

77) Sun H. Advances in saponin- based adjuvants. / Sun H., Xie Y., Ye Y. // Vaccine. - 2009. Vol. 27. - No 12. - P. 1787 - 1796.

78) Dar A. Administration of poly[di(sodium carboxylatoethylphenoxy)]phosphazene (PCEP) as adjuvant activated mixed Th1/Th2 immune responses in pigs. / Dar A., Lai K., Dent D, Potter A., Gerdts V., Babiuk L.A., Mutwiri G.K. // Veterinary Immunology and Immunopathology. -2012. - Vol. 146. - No 3-4. - P. 289 - 295.

79) Ren J. Enhanced immune responses in pigs by DNA vaccine coexpressing GP3 and GP5 of European type porcine reproductive and respiratory syndrome virus.

/ Ren J., Lu H., Wen S., Sun W., Yan F., Chen X., Jing J., Liu H., Liu C., Xue F., Xiao P., Xin S., Jin N. // Journal of Virological Methods. - 2014. - Vol. 206. - P. 27 - 37.

80) Xiao C. Improvement of a commercial foot-and-mouth disease vaccine by supplement of Quil A. / Xiao C., Rajput Z.I., Hu S. // Vaccine. - 2007. - Vol. 25. -No 25. - P. 4795 - 4800.

81) Zhu D. QS-21: a potent vaccine adjuvant. / Zhu D., Tuo W. // National Products Chemistry & Research. - 2015. - Vol. 3. - No 4. -Pii: e113.

82) Marciani D.J. Genetically engineered subunit vaccine against feline leukaemia virus: protective immune response in cats. / Marciani D.J., Kensil C.R., Beltz G.A., Hung C.H., Cronuer J., Aubert A. // Vaccine. - 1991. - Vol. 9. - No 2. -P. 89 - 96.

83) Nielsen H.M. ISCOMs as a vaccine delivery system. / Nielsen H.M., Hubschmann H.B., Rades T. // In: Foged C., Rades T., Perrie Y., Hook S., eds. Subunit Vaccine Delivery. - New York, NY: Springer. - 2015. P. 141 - 158.

84) Sun H. ISCOMs and ISCOMATRIX. / Sun H., Xie Y., Ye Y. //. Vaccine. -2009. - Vol. 27. - No 33. - P. 4388 - 4401.

85) Reed S.G. New horizons in adjuvants for vaccine development. / Reed S.G., Bertholet S., Coler R.N., Friede M. // Trends in Immunology. - 2009. - Vol. 30. - No 1. - P. 23 - 32.

86) Paillot R. A systematic review of recent advances in equine influenza vaccination. / Paillot R. // Vaccines. - 2014. - Vol. 2. - No 14. - P. 797 - 831.

87) Nordengrahn A. Equine herpesvirus type 2 (EHV-2) as a predisposing factor for Rhodococcus equi pneumonia in foals: prevention of the bifactorial disease with EHV-2 immunostimulating complexes. / Nordengrahn A., Rusvai M., Merza M., Ekstrom J., Morein B., Belak S. // Veterinary Microbiology. - 1996. - Vol. 51. - No 1-2. - P. 55 - 68.

88) Kamstrup S. A novel subunit ISCOM vaccine against bovine virus diarrhoea virus. / Kamstrup S., Rensholt L., Jensen M.H., Dalsgaard K. // Revue Scientifique Et Technique. - 1992. - Vol. 11. - No 3. - P. 873 - 877.

89) Жyкoвa Н.В. Ochobbi иммyнoпрoфилaктики и розвития пocтвaкцинaльных иммунных рeaкций. / жу^во Н.В., Кocтюкoвa E.A., Kraecca В.В., Шкaдoвa М.Г. // Крым^ий тeрaпeвтичecкий журнвл. - 2017. - Т. 31. - № 2. - C. 36-40.

90) Моркушин C.r. noBbrneH^ эффeктивнocти вирycных ДНК-вокцин c пoмoщью aдъювaнтoв. / Моркушин C.r. // Эпидeмиoлoгия и вaкцинoпрoфилaктикa. - 2009. - № 6 (49). - C. 51-56.

91) Bolhassani A. Endogenous and exogenous natural adjuvants for vaccine development. / Bolhassani A., Talebi S., Anvar A. // Mini Reviews in Medicinal Chemistry. - 2017. - doi: 10.2174/1389557517666170228115801 [Epub ahead of print]

92) Kamphorst A.O. Beyond ADJUVANTS: immunomodulation strategies to enhance t cell immunity. / Kamphorst A.O., Araki K., Ahmed R. // VACCINE. -2015. - Vol. 33. - Suppl. 2. - B 21 - 28.

93) Fan Y. T-cell factor-4 and MHC upregulation in pigs receiving a live attenuated classical swine fever virus (CSFV) vaccine strain with interferon-gamma adjuvant. / Fan Y., Lin Y., Hwang Y., Yang H.C., Chiu H.C., Chiou S.H., Jong M.H., Chow K.C., Lin C.C. // Veterinary Journal. - 2016. - Vol. 216. - P. 148 - 156.

94) Cheng G. Alpha interferon is a powerful adjuvant for a recombinant protein vaccine against foot-and-mouth disease virus in swine, and an effective stimulus of in vivo immune response. / Cheng G., Zhao X., Yan W., Wang W., Zuo X., Huang K., Liu Y., Chen J., Wang J., Cong W., Liu M., Gao H., Chen J., Lu Y., Zheng Z. // Vaccine. - 2007. - Vol. 25. - No 28. - P. 5199 - 5208

95) Asif M. Cytokines as adjuvants for avian vaccines. / Asif M., Jenkins K.A., Hilton L.S., Kimpton W.G., Bean A.G., Lowenthal J.W. // Immunology and Cell Biology. - 2004. - Vol. 82. - No 6. - P. 638-643.

96) Babiuk L.A. Application of interferons in the control of infectious diseases of cattle. / Babiuk L.A., Sordillo L.M., Campos M., Hughes H.P., Rossi-Campos A., Harland R. // Journal of Dairy Science. - 1991. - Vol. 74. No 12. - P. 4385 - 4398.

97) Tafalla C. Adjuvants and immunostimulants in fish vaccines: current knowledge and future perspectives. / Tafalla C., B0gwald J., Dalmo R.A. // Fish and Shellfish Immunology. - 2013. - Vol. 35. No 6. - P. 1740 - 1750.

98) Hung L. Adjuvant effects of chicken interleukin-18 in avian Newcastle disease vaccine. / Hung L., Li H., Lien Y., Wu M.L., Chaung H.C. // Vaccine. -2010. - Vol. 28. - No 5. - P. 1148 - 1155.

99) Huo S. Chicken IL-7 as a potent adjuvant enhances IBDV VP2 DNA vaccine immunogenicity and protective efficacy. / Huo S., Zuo Y., Li N., Li X., Zhang Y., Wang L., Liu H., Zhang J., Cui D., He P., Xu J., Li Y., Zhu X., Zhong F. // Veterinary Microbiology. - 2016. - Vol. 193. - P. 145 - 155.

100) Kotla S. DNA vaccine (P1-2A-3C-pCDNA) co-administered with Bovine IL-18 gives protective immune response against Foot and Mouth Disease in cattle. / Kotla S., Sanghratna Vishanath B., Reddy G.R. // Veterinary Microbiology. - 2016. -Vol. 193. - P. 106 - 115.

101) Chang C. Adjuvant activity of fish type I interferon shown in a virus DNA vaccination model. / Chang C., Sun B., Robertsen B. // Vaccine. - 2015. - Vol. 33. -No 21. - P. 2442 - 2448.

102) Freund J. Sensitization and antibody formation after injection of tubercle Bacilli and paraffin oil. / Freund J., Casals J., Hosmer E.P. // Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. - 1937. - Vol. 37. - P. 509 - 513.

103) Takeda K. Toll-like receptors. / Takeda K., Kaisho T., Akira S. // Annual Reviwe of Immunology. - 2003. - Vol. 21/ - P. 335 - 376.

104) Lavelle E.C. Modified bacterial toxins. / Lavelle E.C., Leavy O., Mills K.H.G. // In: Hackett C.J., and Harn D.A., eds. Vaccine Adjuvants: Immunological and Clinical Principles. Totowa, NJ: Humana Press. - 2006. - P. 111 - 153.

105) Steinhagen F. TLR-based immune adjuvants. / Steinhagen F., Kinjo T., Bode C., Klinman D.M. // Vaccine. - 2011. - Vol. 29. No 17. - P. 3341 - 3355.

106) Tong N.K. Immunogenicity and safety of an adjuvanted hepatitis B vaccine in pre-hemodialysis and hemodialysis patients. / Tong N.K., Beran J., Kee S.A., Miguel J.L., Sanchez C., Bayas J.M., Vilella A., de Juanes J.R., Arrazola P., Calbo-

Torrecillas F., de Novales EL., Hamtiaux V., Lievens M., Stoffel M. // Kidney International. - 2005. - Vol. 68. - No 5. - P. 2298 - 2303.

107) Takeda K. Mechanism for recognition of CpG DNA. / Takeda K., Hemmi H., Akira S. // In: Hackett CJ, and Harn DA, eds. Vaccine Adjuvants: Immunological and Clinical Principles. Totowa, NJ: Humana Press,. - 2006. - P. 69 - 86.

108) Rau H. Efficacy and functionality of lipoprotein OprI from Pseudomonas aeruginosa as adjuvant for a subunit vaccine against classical swine fever. / Rau H., Revets H., Cornelis P., Titzmann A., Ruggli N., McCullough K.C., Summerfield A. // Vaccine. - 2006. - Vol. 24. - No 22. - P. 4757 - 4768.

109) Hajam I.A. Coadministration of flagellin augments immune responses to inactivated foot-and-mouth disease virus (FMDV) antigen. / Hajam I.A., Dar P.A., Chandrasekar S., Nanda R.K., Kishore S., Bhanuprakash V., Ganesh K. // Research in Veterinary Science. - 2013. - Vol. 95. - No 3. - P. 936 - 941.

110) Qi Y. Incorporation of membraneanchored flagellin or Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit enhances the immunogenicity of rabies virus-like particles in mice and dogs. / Qi Y., Kang H., Zheng X., Wang H., Gao Y., Yang S., Xia X. // Frontiers in Microbiology. - 2015. - Vol. 6. - art. 169.

111) Sun Z. Construction and immunogenicity evaluation of an epitope-based antigen against swine influenza A virus using Escherichia coli heat-labile toxin B subunit as a carrier-adjuvant. / Sun Z., Lawson S., Langenhorst R., McCormick K.L., Brunick C., Opriessnig T., Baker R., Yoon K.J., Zhang W., Huber V.C., Fang Y. // Veterinary Microbiology. - 2013. - Vol. 164. - No 304. - P. 229 - 238.

112) Mayr U.B. Bacterial ghosts as antigen delivery vehicles. / Mayr U.B., Walcher P., Azimpour C., Riedmann E., Haller C., Lubitz W. // Advanced Drug Delivery Review. - 2005. - Vol. 57. - No 9. - P. 1381 - 1391.

113) Jalava K. Bacterial ghosts as vaccine candidates for veterinary applications. / Jalava K., Hensel A., Szostak M., Resch S., Lubitz W. // Journal of Controlled Release. - 2002. - Vol. 85. - No 1-3. - P. 17 - 25.

114) Xia S. Enhanced protective immunity of the chimeric vector-based vaccine rAdV-SFV-E2 against classical swine fever in pigs by a Salmonella bacterial ghost

adjuvant. / Xia S., Lei J., Du M., Wang Y., Cong X., Xiang G.T., Li L.F., Yu S., Du Е., Liu S., Sun Y., Qiu H.J.. // Veterinary Research. - 2016. - Vol. 47. - No 1. - P. 64 - 78.

115) Kanzler H. Therapeutic targeting of innate immunity with Toll-like receptor agonists and antagonists. / Kanzler H., Barrat F.J., Hessel E.M., Coffman R.L. // Nature Medicine. - 2007. - Vol. 13. - No 5. - P. 552 - 559.

116) Stills H.F. Adjuvants and antibody production: dispelling the Myths associated with Freund's complete and other adjuvants. / Stills H.F. // ILAR Journal. - 2005. - Vol. 46. - No 3. - P. 280 - 293.

117) Raffel S. The components of the tubercle Bacillus responsible for the delayed type of ''infectious'' allergy. / Raffel S. // Journal of Infectious Diseases. -1948. - Vol. 82. - P. 267 - 293.

118) Lankester F. The efficacy of alcelaphine herpesvirus-1 (AlHV-1) immunization with the adjuvants Emulsigen and the monomeric TLR5 ligand FliC in zebu cattle against AlHV-1 malignant catarrhal fever induced by experimental virus challenge. / Lankester F., Lugelo A., Werling D., Mnyambwa N., Keyyu J., Kazwala R., Grant D., Smith S., Parameswaran N., Cleaveland S., Russell G., Haig D. // Veterinary Microbiology. - 2016. - Vol. 195. - P. 144 - 153.

119) ^TOranbMaH М.И. Пoлимeры мeдикo-биoлoгичecкoгo Ha3Ha4eH^. / ^TOranbMaH М.И. // Выcoкoмoлeкулярныe coeдинeния. Cep^ A.- 2010. - Т. 52. -№ 9. - C. 1551-1569.

120) Ferreira S.A. Polymeric nanogels as vaccine delivery systems. / Ferreira S.A., Gama F.M., Vilanova M. // Nanomedicine. - 2013. - Vol. 9. - No 2. - P. 159 -173.

121) Rice-Ficht A.C. Polymeric particles in vaccine delivery. / Rice-Ficht A.C., Arenas-Gamboa A.M., Kahl-McDonagh M.M., Ficht T.A. // Current Opinion in Microbiology. - 2010. - Vol. 13. - No 1. - P. 106 - 112.

122) Muzzarelli R. Chitins and chitosans as immunoadjuvants and non-allergenic drug carriers. / Muzzarelli R. // Marine Drugs. - 2010. - Vol. 8. - No 2. - P. 292 -312.

123) Shibata Y. Chitin particle-induced cell-mediated immunity is inhibited by soluble mannan: mannose receptor-mediated phagocytosis initiates IL-12 production. / Shibata Y., James Metzger Q.N., Myrvik Q.N. // Journal of Immunology. - 1997. -Vol. 159. - No 1. - P. 2462 - 2467.

124) Bueter C.L. Chitosan but not chitin activates the inflammasome by a mechanism dependent upon phagocytosis. / Bueter C.L., Lee C.K., Rathinam V.A.K., Healy G.J., Taron C.H., Specht C.A., Levitz S.M. // Journal of Biological Chemistry.

- 2011. - Vol. 286. - No 41. - P. 35447 - 35455.

125) Rauw F. The positive adjuvant effect of chitosan on antigen-specific cellmediated immunity after chickens vaccination with live Newcastle disease vaccine. / Rauw F., Gardin Y., Palya V, Anbari S., Gonze M., Lemaire S., van den Berg T., Lambrecht B. // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2010. - Vol. 134.

- No 3-4. - P. 249 - 258.

126) Pan L. Induction of mucosal immune responses and protection of cattle against direct-contact challenge by intranasal delivery with foot-and-mouth disease virus antigen mediated by nanoparticles. / Pan L., Zhang Z., Lu J., Zhou P., Hu W., Fang Y., Chen H., Liu X., Shao J., Zhao F., Ding Y., Lin T., Chang H., Zhang J., Zhang Y., Wang Y. // International Journal of Nanomedicine. - 2014. - Vol. 9. - P. 5603 - 5618.

127) Mumford J.A. Antigenicity and immunogenicity of equine influenza vaccines containing a Carbomer adjuvant. / Mumford J. A., Wilson H., Hannant D., Jessett D.M. // Epidemiology and Infection. - 1994. - Vol. 112. - No 2. - P. 421 -437.

128) Fachinger V. The effect of vaccination against porcine circo virus type 2 in pigs suffering from porcine respiratory disease complex. / Fachinger V., Bischoff R., Jedidia S.B., Saalmuller A., Elbers K. // Vaccine. - 2008. - Vol. 26. - No 11. - P. 1488 - 1499.

129) Ohnesorge W.C. One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs. / Ohnesorge W.C., Von Richthofen I.F., Genzow M.,Von Freyburg M., Park K. // United States Patent US8444989 B1, 2013.

130) Mаir K.H. Саrbоpоl imprоvеs Ше еаrly сеllulаr imшunе rеspоnsеs induœd by thе mоdifiеd-lifе vассinе ^еГуас PRRS MLV. / Mаir K.H., ^inig H., Gеrnеr W., Höh^ A., Brеtthаuеr J., Krоll J.J., Rооf M.B., Sааlmüllеr A., Stаdlеr K., Libаnоvа R. // Vеtеrinаry Miсrоbiоlоgy. - 2015. - Ш. 176. - Nо 3-4. - P. 352 -357.

131) Mink^ J.M. Usе оf DNA а^ rесоmbinаnt саnаrypоx virаl (ALVAС) vесtоrs fоr еquinе hеrpеs virus vассinаtiоn. / Minkе J.M., Fisсhеr L., Bаudu P., Guigаl P.M., Sindte T., Mumfоrd J.A., Audоnnеt J.Q // Vеtеrinаry Iшшunоlоgy аnd Immunоpаthоlоgy. - 2006. - Vоl. 111. - № 1-2. - P. 47 - 57.

132) Lаi R.P.J. Mixеd аdjuvаnt fоrmulаtiоns rеvеаl а nеw соmbinаtiоn thаt еНсй аntibоdy rеspоnsе соmpаrаblе tо Freund's аdjuvаnts (а nеw pоtеnt аdjuvаnt соmbinаtiоn). / Lаi R.P.J., Sеаmаn M.S., Tоnks P., Wеgmаnn F., Sеilly D.J., Frоst S.D., LаBrаnсhе С.С., Mоntеfiоri D.С., Dеy A.K., Srivаstаvа I.K., Sаttеntаu Q., Bаrnеtt S.W., Hееnеy J.L. // PLоS Onе. - 2012. - Ш. 7. - Nо 4. - е350S3.

133) Gаrtlаn K.H. Stеrilе inflашшаtiоn induсеd by Саrbоpоl еНс^ rоbust аdаptivе iшшunе rеspоnsеs in Ше аbsеnсе оf pаthоgеnаssосiаtеd шо^сШат pаttеrns. / Gаrtlаn K.H., Krаshiаs G., Wеgmаnn F., Hillsоn W.R., S^rer E.M., Grееnbеrg P.D., Eisеnbаrth S.С., Mоghаddаm A.E., Sаttеntаu Q.J. // Vассinе. - 2016. - Ш. 34. - Nо 19. - P. 21SS - 2196.

134) Pаynе L. PСPP аs а pаrеntеrаl аdjuvаnt fоr d^ra аntigеns. / Pаynе L., Vаn Nеst G., Bаrсhfеld G., S^r G.R., Guptа R.K., Jеnkins S.A. // Dеvеlоpmеnts in Biоlоgiсаl Stаndаrtizаtiоn. - 199S. - Vоl. 92. - P. 79 - S7.

135) Andriаnоv A.K. Pоlyphоsphаzеnе pоlyеlесtrоlytеs: а link bеtwееn thе fоrmаtiоn оf nоnсоvаlеnt соmplеxеs with аntigеniс prоtеins аМ iшшunоstimulаting асtivity. / Andriаnоv A.K., Mаrin A., Rоbеrts B.E. // Biоmасrоmоlесulеs. - 2005. -Ш. 6. - Nо 3. - P. 1375 - 1379.

136) Awаtе S. Ad^t^n оf аdjuvаnt соrе rеspоnsе gеnеs by thе nоvеl аdjuvаnt PŒP. / Awаtе S., Wilsоn H.L., Lаi K., Bаbiuk L.A., Mutwiri G. // Mоlесulаr Iшшunоlоgy. - 2012. - Ш. 51. - Nо 3-4. - P. 292 - 303.

137) Shim D. Efficacy of poly[di(sodium carboxylatophenoxy)phosphazene] (PCPP) as mucosal adjuvant to induce protective immunity against respiratory pathogens. / Shim D., Ko H., Volker G., Potter А.А., Mutwiri G., Babiuk L.A., Kweon M.N. // Vaccine - 2010. - Vol. 28. - No 11. - P. 2311 - 2317.

138) Dar А. Administration of poly[di(sodium carboxylatoethylphenoxy)]phosphazene (PCEP) as adjuvant activated mixed Th1/Th2 immune responses in pigs. / Dar A., Lai K., Dent D., Potter A., Gerdts V., Babiuk L.A., Mutwiri G.K. // Veterinary Immunology and Immunopathology. -2012. - Vol. 146. - No 3-4. - P. 289 - 295.

139) MBaHoBa А.С. MexaHroMbi aдъювaнтных эфeктoв пoлиoкcидoния. / MBaHoBa А.С., ny4KoBa Н.Г., HeKpacoB А.В., Гуркoвcкaя Я.М., Aпрятинa В.А., Пaщeнкoв М.В., Дaгиль Ю.А., MacrepHaK Т.Б., Пинeгин Б.В., A6paMoBa M.A. // Иммyнoлoгия гeмoпoэзa. - 2015. - Т. 13. - № 2. - С. 30-92.

140) Лу^ Л.В. Рoль пoлиoкcидoния KaK иммyнoмoдyлятopa и иммyнoaдъювaнтa при пpoфилaктикe гpиппa. / Лycc Л.В. // Meдицинcкий coBeT.

- 2013. - № 8. - С. 50-55.

141) Dyakonova V.A. Study of interaction between the polyoxidonium immunomodulator and the human immune system cells. / Dyakonova V.A., Dambaeva S.V., Pinegin B.V., Khaitov R.M. // International Immunopharmacology.

- 2004. - Vol. 4. - No 13. - P. 1615 - 1623.

142) Denisov A. A. Immunopotentiation of live brucellosis vaccine by adjuvants. / Denisov A.A., Korobovtseva Y.S., Karpova O.M., Tretyakova A.V., Mikhina L.V., Ivanov A.V., Salmakov K.M., Borovick R.V. // Vaccine. - 2010. - Vol. 28. - Suppl. 5. - F17 - F22.

143) Aтayллaxaнoв, P.M. Aдъювaнты b cocraBe вaкцин. Coo6rn,eH^ 1. Mrnpo- и HaHo4aCTrn,bi / P.M. Aтayллaxaнoв, P.M. XarnoB // Иммyнoлoгия. -2011. - №1. - С. 37 -45.

144) Пeтpoв, Р.В. Кoнъюгиpoвaнныe пoлимep-cyбъeдиничныe имму^^ны и вaкцины / Р.В. Пeтpoв, P.M. Хaитoв // Becrarn PAMH. - 2003. - № 1. - С. 1014.

145) Хаитов, P.M. Основные принципы иммуномодулирующей терапии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Аллергия, астма и клиническая иммунология. -2000. - № 1. С. 9-16.

146) Хаитов, Р.М. Вакцины нового поколения и проблемы биобезопасности / Р.М. Хаитов // Цитокины и воспаление. - Т. 4. - № 3. - 2005. - С. 70-75.

147) Калистратов, В.Г. Противолучевые и другие биологические свойства сополимера 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона / В.Г. Калистратов, С.А. Кедик, В.И. Свергун // Медицинская радиология. - 1993. - Т. 38. - № 10. - с. 21-25.

148) Калистратова, В.С. К проблеме профилактики при помощи иммуномодуляторов отдаленных последствий, вызванных внутренним облучением / В.С. Калистратова, А.А. Иванов, П.Г. Нисимов / Радиационная биология. Радиоэкология. - 2001. - Т. 41. - № 1. - с. 104-112.

149) Пат. 93027497 А Российская Федерация, МПК6 С08Б226/06, С08Б226/06, ^8F226:10 Сополимер 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона, обладающий противолучевой активностью / С.А. Кедик, Г.В. Калистратов, В.И. Свергун и др. ; заявитель и патентообладатель фармацевтическая фирма .Ковидон. - № 93027497/04 ; заявл. 12.05.1993 ; опубл. 10.10.1996.

150) Пат. 2015993 С1 Российская Федерация, МПК5 С08Б226/10, А61К31/79, С08Б226/10, ^8F226:06 Сополимер 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона, обладающий противоопухолевой активностью / С.А. Кедик, В.И. Свергун, Е.И. Ярцев и др. ; заявитель и патентообладатель фармацевтическая фирма .Ковидон. - № 5054916/05 ; заявл. 16.07.1992 ; опубл. 15.07.1994, Бюл. № 27-2000. - 10 с. : ил.

151) Пат. 2415876 С1 Российская Федерация, МПК С08Б226/10 (2006.01), А61К31/79 (2006.01) Сополимеры на основе N-винилпирролидона / С.А. Кедик, В.И. Свергун, Ю.В. Черта и др. ; заявитель и патентообладатель С.А. Кедик. -№ 2010105912/04 ; заявл. 19.02.2010 ; опубл. 10.04.2011, Бюл. № 10. - 10 с. : ил.

152) Кирш Ю.Э. Поливинилпирролидон и лекарственные композиции на его основе, способы их получения. / Кирш Ю.Э., Соколова Л.В. // Хим. - фарм. журн. - 1983. - Т. 17. - № 6. - С. 711 - 721.

153) Золотова Ю.И. Сополимеры N-метил-Ы-винилацетамида с N,N-диметил и ^^диэтиламиноэтилметакрилатами. / Золотова Ю.И., Некрасова Т.Н., Назарова О.В., Добродумов А.В., Диденко Е.В., Панарин Е.Ф. // Известия высших учебных заведений. Серия: Химия и химическая технология. - 2014. -Т. 57. - № 8. - С. 31-35.

154) Пат. 2459838 С1 Российская Федерация, МПК С08Е226/10 (2006.01), А61К31/79 (2006.01) Сополимер, содержащий звенья N- винилпирролидона, 2-метил-5-винилпиридина и 4-винилпиридина / С.А. Кедик, А.В. Панов, Ю.В. Кочкина и др. ; заявитель и патентообладатель С.А. Кедик. - № 2011140410/04 ; заявл. 05.10.2011 ; опубл. 27.08.2012, Бюл. № 24. - 13 с. : ил.

155) Кудышкин В.О. Радикальная полимеризация N-винилпирролидона в условиях вторичного ингибирования. / Кудышкин В.О., Рашидова С.Ш., Сурдина А.В., Заремский М.Ю., Голубев В.Б. // Высокомолекулярные соединения. Серия А. - 2007. - Т. 49. - № 12. - С. 2206 - 2210.

156) Гришин Д.Ф. Радикальная сополимеризация N-винилпирролидона с метилметакрилатом и стиролом в присутствии С-фенил-Ы-трет-бутилнитрона. / Гришин Д.Ф., Колякина Е.В., Полянскова В.В., Гришин И.Д. // Журнал прикладной химии. - 2007. - Т. 80. - № 1. - С. 123-132.

157) Гулис И.М. Побочные реакции при синтезе поли- //-винилпирролидона и термической обработке его водных растворов. / Гулис И.М., Евдокименко В.М., Кирш Ю.Э., Лапковский М.А. // Химико-фармацевтический журнал. -1991. - №. - С.82 - 85.

158) Горбунова М.Н. N-винилпирролидон в реакциях радикальной сополимеризации. / Горбунова М.Н., Воробьева А.И., Толстяков А.Г., Монаков Ю.Б. // Известия высших учебных заведений. Серия: Химия и химическая технология. - 2006. - Т. 49. - № 2. - С. 1-22.

159) Михалева А.И. Полимеризация N-винилпирролов: итоги последних лет. / Михалева А.И., Маркова М.В., Татаринова И.В., Морозова Л.В., Трофимов Б.А. // Высокомолекулярные соединения. Серия Б. - 2014. - Т. 56. -№ 4. - С. 401.

160) Барачевский В.А. Фотополимеризующиеся регистрирующие среды для трехмерной оптической памяти сверхбольшой информационной ёмкости. / Барачевский В.А., Передереева С.И., Нестеренко Д.В., Любимов А.В., Салахутдинов В.К., Краюшкин М.М., Соколюк Н.Т., Микаэлян А.Л. // Патент на изобретение RUS 2325680 22.04.2004.

161) УовЫпага G. Visibte Light тёисеё ро1утеп7айоп оf vinyl шопошегБ Беш^её by а ШюругуНит sа1t with pегоxyеstег. / Yоshihага G., Епсй Y., Mаsаhагu N., Kаtsumi T. // 1оигпа1 оf Ро1утег Sсiеnсе. - 1988. - V.A26, N6. - P. 1671 - 1675.

162) Кабанов В.А. Комплексно - радикальная полимеризация./ Кабанов В.А., Зубов В.П., Семчиков Ю.Д. - М.: Химия, 1987. - 256 с.

163) Кирш Ю.Э. N-Виниламиды: синтез, физико - химические свойства и особенности радикальной полимеризации. / Кирш Ю.Э. // Высокомолекулярные соединения. - 1993. - Т.35. - № 2, - С.98 - 114.

164) Курмаз С.В. Влияние фуллерена на закономерности радикальной гомо-и сополимеризации N-винилпирролидона с (ди)метакрилатами. / Курмаз С.В., Пыряев А.Н., Образцова Н.А. // Высокомолекулярные соединения. Серия А. -2011. - Т. 53. - № 9. - С. 1633-1641.

165) Григорьева М.В. Полимерные системы с контролируемым высвобождением биологически активных соединений. / Григорьева М.В. // Б^е^о^а А^а. - 2011.- Т. 4. - № 2. - С. 9 - 23.

166) Widаnаpаthiгаnа L. Dissо1utiоn апё Sо1ubi1ity Еnhаnсеmеnt оf Ше Highly Lipоphi1iс Dmg Phеnytоin viа Intегасtiоn with Pо1y(N-isоpгоpy1асгy1аmidе-со-viny1pyгго1idоnе) Еxсipiеnts. / Widаnаpаthiгаnа L., Та1е S., Rеinеkе T.M. // Мо1еш1аг Phагmасеutiса1s. - 2015. - Ш. 12. - Nо 7. - P. 2537 - 2543.

167) Груз Р.И. Сополимеризация винилпирролидона с АА-винилфталимидом. / Груз Р.И., Шибалович В.Г., Панарин Е.Ф., Ушаков С.Н. // Высокомолекулярные соединения. А. - 1968. - Т. 10. - № 9. - С. 2096 - 2101.

168) Панарин Е.Ф. Синтез и свойства сополимеров винилпирролидона с диэтилацеталем акролеина. / Панарин Е.Ф., Гаврилова И.И., Нестеров В.В. // Высокомолекулярные соединения. Б. - 1978. - Т. 20. - № 1. - С. 66 - 69.

169) Копейкин В.В. Таутомерное равновесие и полимеризационная активность метакрилоилацетона. / Копейкин В.В., Панарин Е.Ф., Милевская И.С., Реди Н.С. // Высокомолекулярные соединения. А. - 1977. - Т. 19. - № 4.-С. 861 - 866.

170) Панарин Е.Ф. Сополимеры винилпирролидона с диметил- и диэтиламиноэтилметакрилатом и полиэлектролиты на их основе. / Панарин Е.Ф., Гаврилова И.И. // Высокомолекулярные соединения. Б. - 1977. - Т. 19. - № 4. - С. 251 -254.

171) Федоров Е.К. Радикальная сополимеризация N-винилпирролидона с винилпиридинами при их постоянном соотношении в реакционной массе. / Федоров Е.К., Лобанов О.Е., Мосалова Л.Ф., Свергун В.И., Кедик С.А., Кирш Ю.Э. // Высокомолекулярные соединения. А. - 1994. - Т. 36. - № 9.- С. 1446 -1451.

172) Семчиков Ю.Д. Сополимеризация N-винилпирролидона в среде карбоновых кислот. / Семчиков Ю.Д., Рябов A.B., Катаева B.H. // Высокомолекулярные соединения. Б. - 1970. - Т.12. - № 5. - С. 381 - 384.

173) Качахмадзе З.Н. Сополимеризация винилпирролидона и метакриловой кислоты в воде при различных концентрациях. / Качахмадзе З.Н., Овсепян A.M., Карапутадзе Т.М., Папунидзе Г.Р., Лазишвили Л.А., Панов В.П., Кирш Ю.Э. // Высокомолекулярные соединения. Б. - 1989. - Т. 31. - № 9. - С. 684 -686.

174) Саттарова Л.Т. Синтез N-винилпирролидона. / Саттарова Л.Т., Юсупов Д. // Химическая промышленность. - 2005. - Т. 82. - № 4. - С. 181-184.

175) Михайлова Н.А. Ориентационный порядок в пленках поли-N-винилпирролидона. / Михайлова Н.А., Кононов А.И. // Оптический журнал. -2014. - Т. 81. - № 11. - С. 108-111.

176) Николаева О.И. Свойства разбавленных растворов сополимеров N-винилпирролидона и метилметакрилата в диметилформамиде. / Николаева О.И., Усачева Т.С., Агеева Т.А., Койфман О.И. // Пластические массы. - 2016. -№ 11-12. - С. 10-13.

177) Большаков А.И. Сополимеризация N-винилпирролидона с акриловыми мономерами в стеклующихся растворах. / Большаков А.И., Кирюхин Д.П. // Высокомолекулярные соединения. Серия А. - 2006. - Т. 48. - № 9. - С. 15661572.

178) Круглова В.А. Синтез и свойства азотсодержащих сополимеров винилпирролидона. / Круглова В.А., Анненков В.В., Болыпедворская P.JL, Добрынина JI.M., Калабина А.В. // Высокомолекулярные соединения. Б. 1986. -Т. 28. - №7. -С. 528-531.

179) Чурилина Е.В. Свойства водных растворов термочувствительных сополимеров n-винилкапролактама с n-винилпирролидоном. / Чурилина Е.В., Шаталов Г.В., Суханов П.Т., Коренман Я.И. // Конденсированные среды и межфазные границы. - 2010. - Т. 12. - № 4. - С. 411 - 414.

180) Топчиев Д.А. Сополимеризация N-винилпирролидона с NN-диметил -NN- диаллиламмонийхлоридом. / Топчиев Д.А., Мартыненко А.И., Кабанова Е.Ю., Оппенгейм В.Д., Кирш Ю.Э., Карапутадзе Т.М. // Изв. АН СССР. ОХН. -1990. - № 9. - С. 1969 - 1973.

181) Топчиев Д.А. Кинетические аномалии при радикальной полимеризации N-винилпирролидона. / Топчиев Д.А., Мартыненко А.М., Кабанова Е.Ю., Тимофеева Л.М. // Высокомолекулярные соединения. А. - 1997. - Т. 39. - № 7. -С. 1129 - 1139.

182) Кабанов В.Я. Радиационная химия полимеров. / Кабанов В.Я., Фельдман В.И., Ершов Б.Г., Поликарпов А.И., Кирюхин Д.П., Апель П.Ю. // Химия высоких энергий. - 2009. - Т. 43. - № 1. - С. 5 - 21.

183) 8о1оУ8ку M. V., 8уп1ев1в оf wаtеr - во1иЬе Ыо^юа11 асйуе рИепо1 (ог са1есИо1) сопtаiпiпg соро1ушегБ оf N-viny1 - 2 - руггоНёоп. / 8о1оувкг) M. V., ЭешБоу V.M., Pапаriп E.F., Pеtukhоvа N.A., Purkiпа A.V. // Масгошо1еси1аг Сhешistry апё Physiсs. - 1996. - V. 197. - № 6. - P. 2035 - 2046.

184) Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

185) Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., Издательство «Медицина», 2005 г.

186) Приказ Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении Правил лабораторной практики».

187) ГОСТ Р 53434 - 2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики».

188) Ошёе for Ше саге апё ше оf 1аbоrаtоry ашшаЬ. - Nt^m! Асаёешу press, ^^sh^gte^ D.C, 2011.

189) Кедик С. А. Синтез и молекулярно-массовые характеристики сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина. / Кедик С. А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Еремин Д.В., Суслов В.В. // Химико-фармацевтический журнал. - 2012. - Т. 46. - № 8. - С. 110-113.

190) Основы аналитической химии / под ред. акад. Ю.А. Золотова. Кн. 2. Методы химического анализа. - М.: Высшая школа. - 2004. - 503 с.

191) Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В. В. «Синтез и молекулярно-массовые характеристики сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина // Химико-фармацевтический журнал. - 2012. - Т 46. - № 8.- С. 19 - 22.

192) Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В. Установка для получения сополимеров на основе N-винилпирролидона. Патент на полезную модель №110743 от 27.11.2011

193) Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Котова Ю.А. Установка для очистки сополимеров на основе N-винилпирролидона № 110744 от 27.11.2011.

194) Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В.В., Иванова Т.Е., Малиновская Г.О. Влияние различных факторов на растворимость сополимеров №винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина в воде. // Химико-фармацевтический журнал. -2013.-Т 47.- № 6.-С. 33-34.

195) Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В.В., Зайцев М.А. Количественное определение в водных растворах физиологически активных сополимеров ^винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина. // Химико-фармацевтический журнал. - 2013. - Т 47. -№ 10. -С. 54 - 56.

196) Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В.В., Жаворонок Е.С. Количественное определение соотношения мономерных звеньев в сополимерах ^винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина методом спектрофотометрии// Вестник МИТХТ. -2014. - Т.9.-№1.- С.64-67.

197) Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Ярцев Е.И., Яковлева Т.А. Модификация противоопухолевого действия цитостатических препаратов сополимером ^винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина// Химико-фармацевтический журнал. -2017.-Т 51.- № 7.- С. 3-7

198) Еремин Д.В., Панов А.В., Кочкина Ю.В., Селянинов Ю.О., Зубаиров М.М., Кедик С.А. Иммуностимулирующее действия сополимера № винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина при вирусной геморрагической болезни кроликов // Российский аллергологический журнал.-2017- №1.- С. 3941.

6. ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Описание установки для очистки сополимеров на основе М-винилпирролидона.

Установка для очистки сополимеров К-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина со средневязкостной молекулярной массой от 15 до 250 кДа представляет собой систему, оптимизированную за счет организации рецикла, что позволяет проводить стадии первичной очистки и доочистки, применяя единственную установку ультрафильтрации.

На чертеже показана

принципиальная конструкция системы для ультрафильтрационной очистки сополимеров на основе К-ВПД с 2М5ВП. Основным технологическим узлом предлагаемой установки является установка ультрафильтрации 4, включенная совместно с аппаратом 2 для очистки реакционной массы и насосом 3 в жидкостной контур с возможностью циркуляции жидкости, в котором предусмотрена линия для слива фильтрата со стадии концентрирования, линия для содержащего сополимер, в сушилку 5 с накопителем и линия для промывки всего жидкостного контура. Подача апирогенной воды осуществляется из резервуара 1.

Очистка осуществляется следующим образом. В аппарат 2 для очистки реакционной массы из резервуара 1 загружают объем апирогенной воды, требуемый для запуска установки ультрафильтрации 4, включают насос 3 и осуществляют циркуляцию воды в жидкостном контуре до полного вытеснения из него воздуха. В режиме циркуляции в аппарат 2 вводят первую порцию реакционной массы, подвергаемой очистке, после чего повышают давление,

передачи продукта, т.е. концентрата,

производимое насосом 3, до рабочего значения (около 0,1 МПа), измеряют расход жидкости через мембраны установки ультрафильтрации 4, который должен составлять 26 л/(чм2) и устанавливают исходный суммарный объем жидкости, который превышает объем реакционной массы примерно в 20 раз, разбавляя апирогенной водой. После этого систему переводят в режим «концентрированно», направляя фильтрат в слив до тех пор, пока объем реакционной массы, разбавленной водой, не уменьшится в 912 раз. После этого из резервуара 1 добавляют такой же объем апирогенной воды и вводят следующую порцию реакционной массы, тем самым переводят систему в режим «разбавление». Стадии первичной очистки («концентрирование - разбавление») повторяют несколько раз в зависимости от соотношения объема реакционной массы и объема её порции, которая может быть подвергнута первичной очистке с учетом производительности ультрафильтрационной установки за одну стадию «концентрирование - разбавление» и заданного уровня содержания низкомолекулярных и иных примесей в конечном продукте. Обычно требуется от 3 до 5 повторений стадий «концентрирование - разбавление».

Как только вся реакционная масса будет введена в аппарат 2 для очистки, полученный раствор концентрируют таким образом, чтобы его объем в 56 раз превышал объем одной порции добавляемой реакционной массы. После этого установку ультрафильтрации переводят в режим «проточная ультрафильтрация», для чего из резервуара 1 постоянно подают апирогенную воду с таким расходом, чтобы объем очищаемого раствора в 512 раз превышал объем одной порции добавляемой реакционной массы. При необходимости корректируют значение рН раствора, подвергаемого ультрафильтрации, которое не должно быть менее 6. Ультрафильтрацию ведут до тех пор, пока содержание низкомолекулярных примесей не составит 0,01 % (их исходное содержание обычно не превышает 0,5 %), что определяют по данным иодометрического титрования.

По достижении указанного уровня содержания низкомолекулярных примесей спектрофотометрически определяют содержание сополимеров на основе К-винилпирролидона с 2М5ВП (Ссп). Если оно составляет более 2 % масс.,

то ультрафильтрацию прекращают. В противном случае очистку продолжают до достижения уровня содержания низкомелекулярных примесей 0,005 Ссп, после чего подачу воды из резервуара 1 в аппарат 2 прекращают и концентрируют очищаемый раствор до минимально возможного объема.

После этого полученный раствор еще раз направляют через установку ультрафильтрации 4 в накопитель сушилки 5, в которой реализуется распылительная или лиофильная сушка продукта. Затем в аппарат 2 для очистки реакционной массы из резервуара 1 загружают такой же объем апирогенной воды, что и требуемый для запуска установки ультрафильтрации 4, включают насос 3 и осуществляют циркуляцию воды в жидкостном контуре до полного вытеснения из него воздуха. При этом остатки сополимера, находящиеся в аппаратах и жидкостном контуре, переходят в раствор, который подвергают очистке во время следующей операции. Это дополнительное количество учитывается спектрофотометрическим анализом, описанным выше.

Таким образом, описанная установка позволяет концентрировать реакционные массы, содержащие сополимеры К-винилпирролидона с 2М5ВП, снижая при этом содержание в них примесей в 50 - 100 раз.

Приложение 2. Описание установки для получения сополимеров на основе М-винилпирролидона

Установка для синтеза сополимеров на основе К-винилпирролидона с 2-метил-5-винилпиридином представляет собой полностью автоматизированную установку, позволяющую управлять сополимеризацией мономеров со значительно различающейся реакционной способностью по заранее заданной математической модели процесса, а также автоматически компенсировать

отклонения характеристик

готового продукта за счет наличия обратной связи.

Основным технологическим узлом предлагаемой установки является реактор 1, снабженный перемешивающим устройством, который может быть

дополнительно оборудован

средствами для поддержания постоянной температуры или создания градиента температуры во времени, а также средствами для создания инертной атмосферы. Поток, содержащий мономер с наибольшей реакционной способностью, из резервуара 2 по линии подачи жидкости направляется в реактор 1 через управляемый дозатор 3. Отбор проб реакционной массы, их разбавление и промывка подающего тракта растворителем из резервуара 5 осуществляется управляемым пробоотборником 4, выход которого соединен с узлом ввода пробы 6 хроматографа 7. В результате хроматографического разделения в режиме реального времени хроматограф 7 подает на управляющее устройство 8 аналитический сигнал (АС), содержащий информацию о качественном и количественном составе пробы. Управляющее устройство 8 анализирует АС в соответствии с заранее заданной математической моделью процесса, генерирует и подает на дозатор 3 первый управляющий сигнал (УС1), подает на пробоотборник

4 второй управляющий сигнал (УС2) и подает на хроматограф 7 третий управляющий сигнал (УС3), что обеспечивает обратную связь.

Перед проведением синтеза в управляющее устройство 8 вводят исполняемую последовательность команд, реализующую математическую модель процесса сополимеризации, а также начальные входные параметры, в частности загрузку реагентов, температуру, количество инициатора и др. В резервуар 2 загружают композицию, содержащую второй сомономер, а в резервуар 5 загружают растворитель в количествах, несколько превосходящих рассчитанные из материального баланса процесса сополимеризации. В реактор 1 загружают требуемое количество композиции, содержащей К-винилпирролидон, включают перемешивающее устройство и обеспечивают заданную температуру.

Исполняемая последовательность команд управляющего устройства 8 открывает управляемый дозатор 3, обеспечивая поступление заданного количества композиции, содержащей второй сомономер, из резервуара 2 в реактор 1. По истечении времени, определенного математической моделью процесса сополимеризации, управляющее устройство 8 задействует пробоотборник 4, который отбирает из реактора 1 установленный объем реакционной массы, разбавляет его в потоке установленным вместимостью растворителя из резервуара 5, подает разбавленную пробу в узел ввода пробы 6 и обеспечивает промывку подающего тракта 4 - 6. В хроматографе 7 происходит разделение компонентов реакционной массы и определение их относительных содержаний. Указанная информация в виде АС поступает на управляющее устройство 8. Управляющее устройство 8 анализирует АС на предмет соответствия заданной математической модели и генерирует управляющие сигналы: останавливает работу пробоотборника 4 (УС1), запускает программу регенерации на хроматографе (УС2) и дозирует подачу второго сомономера (УС3). Приведенный цикл реализуется до достижения заданной степени сополимеризации, после чего управляющее устройство 8 прекращает подачу второго сомономера, останавливает работу пробоотборника 4 и запускает программу регенерации на хроматографе. Таким образом, предлагаемая установка

позволяет получать сополимеры К-винилпирролидона с 2М5ВП, обладающие заранее заданными свойствами, в частности, средневязкостной молекулярной массой и соотношением мономерных звеньев.