Фармакологические пути снижения пересыщения мочи в коррекции экспериментального оксалатного нефролитиаза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат биологических наук Кудинов, Алексей Владимирович

• Кудинов, Алексей Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кудинов, Алексей Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О РОЛИ ПЕРЕСЫЩЕНИЯ МОЧИ В РАЗВИТИИ НЕФРОЛИТАЗА И МЕТОДАХ ЕГО КОРРЕКЦИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Постановка экспериментов на животных.

2.2 Дизайн исследования.

2.3 Определение веществ и вычисление показателей функции почек.

ГЛАВА III. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА РОЛИ КОНЦЕНТРАЦИИ И ЭКСКРЕЦИИ ЛИТОГЕННЫХ ИОНОВ В ПРОГНОЗЕ ПЕРЕСЫЩЕНИЯ МОЧИ ПРИ ОКСАЛАТНОМ НЕФРОЛИТИАЗЕ.

3.1 Пересыщения мочи в условиях свободного потребления жидкости.

3.2 Пересыщение мочи в условиях ограничения потребления жидкости.

3.3 Пересыщение мочи в условиях увеличения потребления жидкости.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакологические пути снижения пересыщения мочи в коррекции экспериментального оксалатного нефролитиаза»

Актуальность темы: Мочекаменная болезнь (МКБ) — одно из наиболее частых урологических заболеваний и встречается у 10 - 15% населения, причем наиболее часто это мужчины в трудоспособном возрасте - 20-50 лет. Больные уролитиазом составляют 30-40 % всего контингента урологических стационаров [17, 25, 45, 49, 71, 109].

В настоящее время в развитых странах мира из 10 млн. человек 400 тыс. страдают мочекаменной болезнью. Ежегодно регистрируется 85 тыс. заболеваний мочекаменной болезнью, при этом 62 тыс. из них — рецидивные камни. При этом абсолютное число зарегистрированных больных мочекаменной болезнью в мире ежегодно увеличивается [2, 25, 49]. Так в РФ в период с 2002 по 2009 гг. количество случаев увеличилось на 17,3%: с 629 453 до 738 130 [2]. Максимальный показатель частоты встречаемости мочекаменной болезни на 100 000 населения в 2009 г. отмечался в Дальневосточном федеральном округе (564,6), а минимальный в СевероКавказском федеральном округе (395,6). По регионам наиболее высокие показатели частоты встречаемости мочекаменной болезни на 100 000 населения были отмечены в Алтайском крае (1261,9) и в Ненецком автономном округе (1001,8), а минимальный уровень в Еврейской автономной области (212,0). Основной клинической формой МКБ является оксалатный нефролитиаз, так как от 50% до 80% почечных камней в качестве главного структурного компонента содержат оксалат кальция [6].

Страдающие нефролитиазом нуждаются в применении высокотехнологичных методов обследования и лечения как малоинвазивных, так и хирургических. Создание метода дистанционной, или экстракорпоральной нефро- и уретеролитотрипсии намного сократило число оперативных вмешательств по поводу камней почек и мочеточников. К сожалению, больше половины регистрируемых сегодня камней являются рецидивирующими. При этом по данным статистики процент рецидивов резко возрастает с течением времени после удаления камня. Так уже через 1 год после удаления камня число случаев рецидивов составляет - 10% от всего числа обращений, через 5 лет - 35%, через - 10 лет - 50% [68, 71, 109, 115]. Таким образом, удаление камня в большинстве случаев не приводит к полному решению проблемы, так как оно не устраняет причин его образования. В то же время, предотвращение процесса литогенеза должно позволить снизить количество клинических случаев камней и их рецидивов. В настоящее время существует несколько , теорий камнеобразования. При этом основополагающим моментом во всех случаях является пересыщение мочи литогенными ионами. В случае оксалатного нефролитиаза основными ионами-камнеобразователями являются оксалат-ионы, фосфат-ионы и ионы кальция. Кроме этого, процессу литогенеза также способствуют условия среды: изменение уровня рН и снижение защитных коллоидов. К сожалению, сегодня возможности фармакологической коррекции оксалатного нефролитиаза весьма ограничены: недостаточная изученность причин и механизмов развития нефролитиаза препятствуют поиску новых медикаментозных подходов в лечении этого заболевания, что пока определяет инструментальные методы решения данной проблемы как основные [9, 15, 23, 24, 25].

Все выше сказанное определяет высокую актуальность поиска эффективных фармакологических средств, снижающих пересыщение. В связи с этим возникает необходимость более детального изучения показателей состояния мочи в условиях оксалатного нефролитиаза и их роли в патогенезе данной нозологии, для последующей оценки эффективности применения средств снижающих пересыщение мочи. Это позволит в дальнейшем расширить возможности подходов к лечению данного заболевания неинвазивными методами.

Цель исследования: Разработать и изучить пути снижения пересыщения мочи оксалат-ионами, фосфат-ионами и ионами кальция при оксалатном нефролитиазе у крыс.

Основные задачи исследования:

1. Провести сравнительную оценку роли концентрации и экскреции литогенных ионов в прогнозе пересыщения мочи при оксалатном нефролитиазе в эксперименте.

2. Изучить влияние фармакологических средств, ослабляющих пересыщение мочи ионами кальция в эксперименте.

3. Изучить влияние фармакологических средств, ослабляющих пересыщение мочи фосфат-ионами в эксперименте.

4. Изучить влияние фармакологических средств, ослабляющих пересыщение мочи оксалат-ионами в эксперименте.

5. Разработать комплексный подход снижения пересыщения мочи литогенными ионами при оксалатном нефролитиазе в эксперименте.

Научная новизна работы: Впервые проведена оценка показателей концентрации и экскреции оксалат-ионов, фосфат-ионов и ионов кальция в прогнозе пересыщения мочи при экспериментальном оксалатном нефролитиазе. Установлен приоритет использования показателя концентрации, а не экскреции ионов при описании характера пересыщения мочи. Предложены методы снижения пересыщения мочи литогенными ионами при оксалатном нефролитиазе при помощи различных фармакологических средств. Установлено, что на пересыщение мочи ионами кальция оказывают влияние натрия цитрат и натрия фитат, фосфат-ионами — натрия пирофосфата, оксалат-ионами - натрия сульфит и цинка аспарагинат. Исследована возможность предложенной комбинации натрия цитрата, натрия пирофосфата и натрия сульфита влиять на течение заболевания.

Научная и практическая значимость Проведена сравнительная оценка роли показателей концентрации и экскреции литогенных ионов в прогнозе пересыщения мочи при оксалатном нефролитиазе. Установлено, что не всегда изменения экскреции ионов-камнеобразователей с мочой определяют характер литогенных процессов в тканях почек. В большей степени это зависит от концентрации рассматриваемых ионов.

Изучено влияние средств, снижающих пересыщение мочи, на пересыщение мочи при оксалатном нефролитиазе. В ходе применения изучаемых средств фиксировалось снижение содержания в моче ионов-камнеобразователей и изменение в некоторых случаях рН среды. При этом было показано, что на пересыщение мочи ионами кальция могут оказывать свое влияние натрия фитат и натрия цитрат; на пересыщение фосфат-ионами — натрия пирофосфат; на пересыщение оксалат-ионами - натрия сульфит и цинка аспарагинат. По результатам морфометрии срезов почек, окрашенных по Коссу, зафиксировано снижение количества и размеров кальциевых депозитов во всех случаях применения средств снижающих пересыщение, за исключением цинка аспарагината, использование которого привело к уменьшению размеров кальциевых депозитов с увеличением их количества в поле зрения.

Комбинация натрия цитрата, натрия пирофосфата и натрия сульфита позволяет обеспечить снижение концентрации всех трех рассматриваемых нами ионов-камнеобразователей и в большей степени добиться уменьшения размеров кальциевых депозитов и их количества в поле зрения.

Результаты проведенных экспериментов открывают новые возможности для дальнейших исследований в данном направлении с целью создания новых подходов в лечении оксалатного нефролитиаза.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. В качестве оценки развития оксалатного нефролитиаза целесообразно использовать показатель концентрации ионов-камнеобразователей, а не их экскрецию.

2. Длительное применение средств, ослабляющих пересыщение мочи ионами кальция облегчает протекание оксалатного нефролитиаза.

3. Длительное применение средств, ослабляющих пересыщение мочи фосфат-ионами облегчает протекание оксалатного нефролитиаза.

4. Длительное применение средств, ослабляющих пересыщение мочи оксалат-ионами облегчает протекание оксалатного нефролитиаза.

5. Использование комбинации ингибиторов, каждый из которых по отдельности оказывал положительный эффект на состояние концентрации определенного иона, привело к снижению пересыщения мочи по всем изучаемым ионам, что одновременно сопровождалось подщелачиванием мочи. Результатом этого стало значительное снижение количества и размеров кальциевых депозитов по сравнению с группой контроля.

Апробация материалов диссертации: Материалы диссертации доложены и обсуждены на Х1-ой городской научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь - Барнаулу» (г. Барнаул, 2009), на научно-практической конференции посвященной 35-летию фармацевтического факультета АГМУ (г. Барнаул, 2010), на ХП-ой городской научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь - Барнаулу» (г. Барнаул, 2010), на 1-ой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Сибирский медико-биологический конгресс» (г. Барнаул, 2011), на И-ой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Современные проблемы фармакологии и фармации» (г. Новосибирск, 2011).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 16 работ, из них 5 - в журналах, включенных в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста, иллюстрирована 27 рисунками, 20 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, обсуждения результатов, общих выводов, списка цитируемой литературы, в котором приведено 136 источников, из них 109 - иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Кудинов, Алексей Владимирович

ВЫВОДЫ

1. Использование показателя мочевой концентрации литогенных ионов, а не их экскреции позволяет повысить точность прогноза развития оксалатного нефролитиаза

2. Длительное применение фармакологических средств, ослабляющих пересыщение мочи ионами кальция облегчают течение оксалатного нефролитиаза, при этом более эффективным в паре натрия цитрат — натрия фитат является натрия цитрат.

3. Применение натрия пирофосфата при оксалатном нефролитиаза приводит к снижению пересыщения мочи оксалат-ионами и ионами кальция, сдвигом рН в щелочную сторону, что сопровождается снижением количества и размеров кальциевых депозитов.

4. Длительное применение фармакологических средств, ослабляющих пересыщение мочи оксалат-ионами приводит к облегчению протекания оксалатного нефролитиаза. Большую эффективность в паре натрия сульфит - цинка аспарагинат показал натрия сульфит. При этом применение цинка аспарагината на фоне оксалатного нефролитиаза сопровождается снижением размеров при увеличении числа кальциевых депозитов.

5. Использование комбинации из натрия цитрата, натрия пирофосфата и натрия сульфита, привело к выраженному торможению пересыщения мочи ионами оксалатов, фосфатов и кальция, сопровождавшееся сдвигом рН мочи в щелочную сторону, снижением активности маркерных ферментов повреждения и уменьшением количества и размеров кальциевых депозитов, что позволяет рекомендовать ее для дальнейших исследований.

4.6 Заключение

В ходе проведённых экспериментов было установлено, что длительное применение фармакологических средств, таких как натрия цитрат, натрия фитат, натрия пирофосфат, цинка аспарагинат и натрия сульфит, в той или иной мере ослабляющих пересыщение мочи ионами кальция, фосфат-ионами, оксалат-ионами, облегчают течение оксалатного нефролитиаза, снижая число и количество кальциевых депозитов в почках. При этом применение цинка аспарагината на фоне оксалатного нефролитиаза сопровождается снижением размеров при увеличении числа кальциевых депозитов. Использование комбинации из натрия цитрата, натрия пирофосфата и натрия сульфита, привело к выраженному торможению пересыщения мочи ионами оксалатов, фосфатов и кальция, сопровождавшееся сдвигом рН мочи в щелочную сторону, снижением активности маркерных ферментов повреждения и уменьшением количества и значительным уменьшением размеров кальциевых депозитов.

ГЛАВА V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

В ходе проведенного исследования, необходимо было изучить возможности фармакологической коррекции пересыщения мочи ионами кальция, оксалат- и фосфат-ионами на течение оксалатного нефролитиаза.

На наш взгляд, это позволит расширить уровень знаний о процессах литогенеза и возможностях его снижения, открывая новые пути в подходах к лечению данной нозологии.

Для этого в первой серии экспериментов нами был смоделирован оксалатный нефролитиаз, на фоне которого была изучена экскреторная функция почек в условиях различного потребления жидкости с целью отследить возникающие в моче изменения .

Как известно, пересыщение мочи ионами кальция, оксалата и фосфата создает условия для их химического взаимодействия, в результате которого образуются в большом количестве нерастворимые соединения СаС204 и СаНР04. Последние, в случае превышения соответствующей им верхней границы метастабильности, выпадают в осадок и провоцируют камнеобразование. Одним из важнейших регуляторов верхней границы метастабильности является концентрация литогенных ионов в моче, которая, в свою очередь, зависит от многих факторов, в том числе от объема мочи и скорости ее протекания по нефрону, причем данная зависимость всегда носит обратно пропорциональный характер. Как и ожидалось, изменение объема потребления жидкости существенно повлияло на уровень мочеотделения у крыс за счет уменьшения или увеличения объема и скорости тока образовавшейся мочи по нефрону. Тем не менее само по себе увеличение или уменьшение объема мочи и скорости ее тока совсем не обязательно приводит к изменениям верхней границы метастабильности. В связи с этим был проведен прямой анализ влияния различных питьевых режимов на изменения концентраций литогенных ионов в моче и их суточной экскреции.

При употреблении ЭГ во всех экспериментальных группах было зафиксировано появление оксалат-ионов в моче, чего не наблюдалось у здоровых крыс. Как известно, ЭГ - это низкомолекулярный двухатомный спирт, метаболизирующийся в организме гепатоцитами до щавелевой кислоты, анионы которой элиминируются почками, пересыщая мочу в просвете канальцев [10]. В условиях свободного потребления жидкости концентрация оксалат-ионов в моче возрастала от 0,6 ±0,15 мг/мл в начале опыта до 1,4 ± 0,36 мг/мл к моменту его завершения. На этом фоне при ограничении питья величина описываемого показателя резко увеличивалась: от минимального значения в 1,7 ± 0,18 мг/ мл до своего максимума в 2,9±0,2 мг/мл, т. е. прирост концентрации оксалат-ионов по сравнению с 1-й группой составил от 107 до 183%. В условиях увеличения потребления жидкости, напротив, наблюдалось многократное снижение данного показателя: 0,2—0,4 мг/мл в течение эксперимента. Иными словами, относительно группы сравнения концентрация оксалат-ионов в моче снизилась в 3 - 3,5 раза. Сопоставление этих данных наглядно демонстрирует, что уменьшение питья значительно усиливает, а увеличение ослабляет пересыщение мочи оксалат-ионами. Во многом аналогичная зависимость от питьевых режимов прослеживалась и для динамики концентрации фосфат-ионов в моче, что также позволяет судить об определенном влиянии количества потребляемой жидкости на пересыщение мочи фосфатами.

На этом фоне несколько выделяется картина, характеризующая изменения концентрации ионов кальция в моче: во всех экспериментальных группах она практически не менялась, несмотря на существенные изменения функции почек. По-видимому, это можно объяснить тем, что обмен кальция в организме регулируется мощными, разнообразными механизмами, в результате чего на фоне даже значительных колебаний функционального состояния мочевыделительной системы концентрация указанного электролита в моче остается относительно стабильной.

Стоит отметить еще одну важную деталь: в ходе эксперимента приходилось наблюдать разнонаправленность изменений концентрации определяемых ионов в моче и динамики их экскреции. Поэтому, на наш взгляд, следует несколько по-иному расставлять акценты в отношении терминов "гипероксалурия", "гиперфосфатурия", "гиперкальциурия" при описании характера пересыщения мочи, поскольку, как показали проведенные нами эксперименты, они не отражают реальной картины пересыщения мочи, а иногда вовсе существенно ее искажают.

Для выявления связей между показателями концентрации и экскреции с одной стороны и размером и количеством кальциевых депозитов с другой, нами был проведён корреляционный анализ указанных показателей. Было установлено, что в используемой нами этиленгликолевой модели существует прямая корреляционная связь между показателями концентрации оксалат-ионов, фосфат-ионов и размером кальциевого депозита и средним количеством депозитов в поле зрения. В то же время при корреляционном анализе показателей экскреции литогенных ионов фиксировалась обратная отрицательная связь для пар: «экскреция фосфат-ионов — средний размер кальциевого депозита» и «экскреция ионов кальция - средний размер кальциевого депозита», а при установлении корреляционной связи между показателями экскреции литогенных ионов и количеством кальциевых депозитов в поле зрения она выявлялась только для экскреции ионов кальция. Важно отметить, что во всех случаях сила корреляционной связи для показателей концентрации была больше, что подтверждается более высоким значением коэффициента корреляции (Я).

Кроме того, в ходе первой серии экспериментов были получены экспериментальные данные об уровне литогенных ионов и активности маркерных ферментов в ходе развития патологии.

Дальнейшая работа была посвящена снижению пересыщения мочи с помощью фармакологических средств, с целью уменьшения конечного количества кальциевых депозитов в почках подопытных животных.

Для этого мы вначале провели контрольный эксперимент, который отличался от стандартной 3-х недельной модели лишь продолжительностью: животные получали 1%-й раствор ЭГ в свободном доступе в течение 6 недель. Это было сделано для того, чтобы установить изменения основных показателей мочи в ходе 6-и недельного потребления 1%-го раствора ЭГ, используемых для описания оксалатного нефролитиаза в ходе 3-х недельной модели, для последующего сравнения изменений происходящих в опытных группах начиная с 4-ой недели на фоне применения средств, снижающих пересыщение мочи.

В ходе контрольного эксперимента было зафиксировано некоторое увеличение диуреза, что на наш взгляд могло являться ответной компенсаторной реакцией на развивающуюся патологию, и связанное с этим снижение концентрации фосфат-ионов. При этом было выявлено, что концентрация оксалат-ионов в ходе всего эксперимента была на достаточно высоком уровне, имея свои пиковые значения на 4-ой и 6-ой неделях. Также не было зафиксировано статистически значимых изменений концентрации ионов кальция, хотя, как известно, его физиологического уровня вполне хватает для начала кристаллизации. Таким образом, в ходе 6-и недель опыта было зафиксировано пересыщение мочи оксалат ионами, незначительное снижение фосфат-ионов и постоянный уровень концентрации ионов кальция. Это все создавало условия для начала литогенеза, чему, кроме того, могло способствовать pH мочи, значения которого на протяжении всего опыта находились в диапазоне 5,8-6,4 единицы, что является вполне благоприятным для формирования оксалатных камней [7].

Как известно, помимо способности реагировать с ионами кальция и образовывать нерастворимые биоминералы вевеллита, оксалат-ионы вызывают деструкцию и дисфункцию уротелия, что сопровождается ростом активности в моче ферментов повреждения и является важным звеном в каскаде литогенных процессов, приводящих к образованию почечных камней [5, 14, 126]. В пользу развития патологии нам говорили результаты проведенного изучения активности в моче маркерных ферментов, экскреция которых в ходе опыта имела тенденцию к росту, при этом пиковые значения приходились на период с 3-й по 6-ю недели и отличались от исходного уровня в 1,6 - 3,8 раз. Результаты проведенной морфометрии стали неоспоримым доказательством процесса литогенеза, согласно которым величина и количество кальциевых депозитов возрастала в сравнении с тремя неделями моделирования.

Проведенный контрольный эксперимент позволил в ходе дальнейших опытов оценить эффекты фармакологических средств, снижающих пересыщение мочи, и их эффективность.

Известно, что катионы кальция - основной химический «инструмент» синтеза нерастворимых биоминералов. Кроме того, кальций выполняет функцию мишени в кристаллической решетке для взаимодействия с модуляторами камнеобразования, что обсуждалось ранее [13]. Учитывая это,

2+ понятно, что, связав ионы Са , можно повлиять одновременно на несколько звеньев литогенеза, добившись тем самым благоприятного эффекта.

Так же известно, что натрия цитрат является естественным ингибитором нефролитиаза, о чем свидетельствует проведенный анализ мочи пациентов с почечными камнями, который в большом числе случаев фиксировал гипоцитратурию [50, 105, 108, 123, 125]. В литературе описаны проведенные эксперименты, в которых действие натрия цитрата изучали на искусственной моче и моче пациентов с зафиксированными случаями камней, согласно полученным результатам цитрат препятствовал росту кристаллов оксалата кальция [35, 44, 61, 72, 74, 83, 93, 120]. Напомним, что по существующим данным механизм антилитогенного действия цитрата связывают со снижением пересыщения мочи ионами кальция, что обусловлено способностью образовывать с ионами Са более растворимое соединение - цитрат кальция, который в силу своих физико-химических свойств не вступает в процесс кристаллизации.

Применение натрия цитрата в течение 3-х недель способствовало в первую очередь снижению пересыщения мочи ионами кальция, выражавшееся в более, чем двукратном снижении показателя, что отличало его от других используемых веществ. Кроме того, как и ожидалось, еще одним положительным эффектом изучаемого средства стало подщелачивание мочи, составлявшим в отдельные дни эксперимента разницу с средним уровнем в ходе первых 3-х недель до 1,0. При этом натрия цитрат не оказывал влияния на динамику фосфат- и оксалат-ионов, что вполне укладывается в его описываемый механизм действия. Результатом уменьшения пересыщения, на наш взгляд, стало снижение, до этого возрастающих в течение первых 3-х недель, активности ферментов НАГ, ГТТ, ЛДГ - величина которых возвращалась к своему исходному уровню. Морфометрический контроль на 42-й день опыта показал правоту наших предположений - количество кальциевых депозитов снижалось в 3,4 раза, а средний размер в 1,9 раза.

В следующем эксперименте нами была поставлена задача изучить еще один способ снижения пересыщения мочи ионами кальция. Для этого нами был использован натрия фитат - вещество, обладающее по данным литературы способностью хелатировать кальций [90].

В условиях эксперимента натрия фитат продемонстрировал весьма ощутимые антилитогенные свойства, причем некоторые его эффекты оказались весьма неожиданными. Так, например, было зафиксировано уменьшение концентрации в моче оксалат-ионов, что, без сомнения, является положительным результатом проведенной терапии. Кроме того, на фоне введения исследуемого препарата наблюдалось некоторое увеличение концентрации в моче фосфат-ионов, что, по-видимому, можно объяснить неспецифической реакцией используемых в методике реагентов с фосфатными группировками самого фитата. Наконец, в процессе лечения не было зафиксировано существенного уменьшения мочевой концентрации ионов кальция, что, на первый взгляд, противоречит хелатирующим способностям фитатов. Однако, как известно, в основе любого хелатного комплекса находится ион металла, который связан с органической молекулой двумя типами связей - ковалентными и водородными. Вместе с тем, кальций по своим основным свойствам слабее натрия, и видимо, его способность вытеснять последний из комплекса с фитат-ионом ограничена. Как следствие - низкая вероятность образования столь необходимых для хелатного комплекса ковалентных связей. Не исключено, что гораздо более важную роль может играть процесс образования водородных связей между ионами кальция, встроенными в грани кристаллической решетки апатита и вевеллита, и поляризованным атомом кислорода в фосфатных группировках фитата. В результате такого взаимодействия кристаллы теряют способность контактировать с отрицательно заряженными центрами молекул стимуляторов кристаллизации и проникать интерстициальное пространство тонкого отдела петли Генле, где происходит первичное камнеобразование, а также не осаждаются на бляшках Рэндалла в просвете собирательных трубок.

К положительным сторонам антилитогенного действия натрия фитата можно отнести нормализацию среды мочи. Учитывая, что образование оксалатов кальция различной гидратированности и их осаждение из пересыщенного раствора максимально активно происходит при значениях рН=4,5-7,0 сдвиг pH мочи в слабощелочную сторону мог в определенной мере ослабить указанный процесс.

Кроме того, важным показателем уменьшения проявлений нефролитиаза под влиянием натрия фитата следует считать выраженное уменьшение активности маркерных ферментов, что указывает на восстановление нормальной структуры и функции уротелия, а также подавление оксидативного стресса. Эти процессы традиционно принято считать взаимосвязанными, поэтому такой синергетический эффект вполне логичен. Вероятно, препарат оказывает протективное действие в отношении почечного эпителия вследствие связывания ионов металлов, подавляя тем самым цепную реакцию образования активных форм кислорода.

В конечном счете, описанные стороны действия натрия фитата привели к главному результату: количество кальциевых депозитов в почках по сравнению с контролем заболевания снизилось в 1,5 раза, а их размер - в 2,8 раза.

Длительное применение натрия пирофосфата, в отличие от натрия цитрата, обусловило уменьшение концентрации оксалат-ионов в моче относительно контроля, несмотря на то что в процессе терапии крысы продолжали потреблять ЭГ, а значит, зафиксированный эффект можно объяснить именно действием пирофосфата, но не изменением экспериментальных условий. Параллельно нормализовалась концентрация фосфат-ионов в моче, что хорошо согласуется с уже известными свойствами пирофосфата как средства, обладающего способностью воздействовать на аппатитное звено камнеобразования [47, 59,79, 89].

Наконец, вследствие проведенного лечения существенно снижалась мочевая концентрация ионов кальция как по сравнению с 21-ми сутками, характеризующими пик экспериментальной патологии, так и относительно интактных значений. Данные наблюдения указывают на то, что под действием натрия пирофосфата ослаблялось пересыщение мочи литогенными ионами, что с высокой долей вероятности могло благоприятно сказаться на течении заболевания.

Кроме того, в результате длительного введения натрия пирофосфата нормализовалась диуретическая функция почек, ослабленная в условиях патологии. Учитывая, что интенсивность пересыщения мочи обратно пропорциональна объему и скорости мочеотделения, зафиксированное действие пирофосфата также могло внести определенный вклад в общую картину антилитогенных эффектов.

Известно, что важным физико-химическим параметром, регулирующим синтез кристаллического материала оксалатной природы и его дальнейшее осаждение из пересыщенного раствора, является рН мочи, причем наиболее активно указанный процесс происходит в диапазоне значений рН 4,5 - 7,0, ослабляясь при изменении среды в щелочную сторону [7]. В данном контексте обращает на себя внимание некоторое защелачивание мочи в первые 10 суток введения натрия пирофосфата. Опираясь на описанные выше физико

I ' 1 ' , «, \ •

120 химические особенности, можно предположить, что в этот период времени образование нерастворимых солей оксалата кальция было уменьшено.

Происходящие изменения экскреторной функции почек сопровождались значительным ослаблением активности в моче маркерных ферментов повреждения почечного эпителия. В ходе проводимой терапии натрия пирофосфатом динамика ферментурии уже после 1-й недели применения изучаемого средства приобрела четкую тенденцию к снижению, в результате чего к моменту окончания эксперимента активность ЛДГ, ГГТ и НАГ возвращалась к нормальному уровню, зафиксированному у здоровых животных, и была существенно ниже показателей контрольной группы. Это означает, что проведенная терапия привела к восстановлению структурной целостности и функциональной активности нефроцитов, устраняя так называемый повреждающий фактор, столь необходимый для формирования почечных конкрементов [11]. Описанные стороны действия натрия пирофосфата при экспериментальном нефролитиазе воплотились в главном -количество кальциевых депозитов в почках уменьшалось в 1,4 раза, а их размер -в 1,9 раза.

Следующие 2 эксперимента были посвящены изучению возможности снижения пересыщения мочи оксалат ионами.

Первым способом стало снижение концентрации оксалат-ионов в просвете почечного канальца. Как уже было сказано выше, для этого нами был использован катион цинка. В литературе хорошо описано благотворное влияние магния на течение оксалатного нефролитиаза [22, 78, 113, 127]. При этом ряд авторов указывает в качестве ингибитора литогенеза и катион цинка [5]. В то время как есть информация и об отрицательной стороне использования

33, 42, 132]. Нами было изучено влияние данного катиона на пересыщение мочи при оксалатном нефролитиазе.

В наших экспериментах применение цинка аспарагината более чем в 2 раза снижало пересыщение мочи оксалат-ионами, при этом, не оказывая влияния на динамику концентрации других литогенных ионов и уровень рН мочи. Стоит отметить, что это сопровождалось возвращением экскреции ЛДГ на исходный уровень, в то время как активность ГТТ и НАГ в ходе проведенной терапии подвергались изменениям в меньшей степени. Полученные результаты морфометрии показали, что в то время как применение цинка аспарагината позволило снизить размер кальциевых депозитов в 1,5 раза, оно не снижало их количеств, а напротив привело к 2-х кратному росту. Это, на наш взгляд, можно связать с описываемой в литературе возможностью цинка включаться в состав конкремента [42].

В следующем эксперименте в качестве средства, снижающего пересыщение, был использован натрия сульфит. Возможность снижения им пересыщения мочи оксалат-ионами строилась нами на основании имеющихся в литературе экспериментальных данных, о способности его in vitro в культуре клеток печени снижать образование оксалат-ионов, ингибируя лактатдегидрогеназу [122]. К тому же, как известно, ЭГ также метаболизируется в печени под действием указанной ферментной системы. Таким образом, это на наш взгляд должно позволить уменьшить пересыщение мочи оксалат-ионами и облегчить протекание оксалатного нефролитиаза.

Применение натрия сульфита снижало пересыщение мочи оксалат-ионами. Стоит отметить, что на 3 день лечения был отмечен рост показателя концентрации, что, по-видимому, связано с медленным развитием эффекта и укладывается в описанное в литературе ингибирование натрия сульфитом лактатдегидрогеназы [122], что было подтверждено последующими измерениями. Начиная с 7-го дня, пересыщение оксалат-ионами постепенно снижалось, в 5 раз по отношению к пику концентрации на 3 день лечения. При этом, как и ожидалось, он не вносил изменений в динамику концентрации фосфат-ионов и ионов кальция. В то же время было зафиксировано увеличение рН, что может говорить о возможном влиянии натрия сульфита на ионный баланс мочи.

Снижение пересыщения мочи оксалат-ионами и некоторое ее ощелачивание благоприятно влияли на течение оксалатного нефролитиаза, что выражалось в значительном снижении активности маркерных ферментов, до уровней в некоторых случаях в разы ниже исходного. А проведенная морфометрия подтвердила результаты биохимии. Количество кальциевых депозитов снижалось в 3 раза, их размер - в 2,1 раза.

В ходе исследования фармакологической коррекции пересыщения мочи были получены результаты, которые натолкнули нас на мысль, о возможности комплексного снижения пересыщения мочи литогенными ионами.

В настоящее время применение комплексных препаратов в консервативном лечении МКБ связано в первую очередь с профилактикой уратных камней комбинациями на основе цитратных смесей, а также растительных препаратов [25]. При этом арсенал лекарственных препаратов для лечения оксалатных камней ограничен. Для реализации своей идеи мы из числа изученных средств отобрали те, что в индивидуальном применении показали хороший эффект и объединили их в комбинацию. При этом их действие должно было быть направленно на снижение разных литогенных ионов. И в ходе следующего эксперимента выяснили, как полученная комбинация будет влиять на пересыщение мочи при оксалатном нефролитиазе. Таким образом, нами были выбраны натрия цитрат - уменьшающий пересыщение ионами кальция, натрия сульфит - снижающий концентрацию в моче оксалат-ионов и натрия пирофосфат оказывавший в наших экспериментах действие на фосфат-ионы и ионы кальция. При этом доза каждого из них составила 1/3 от дозы, используемой в экспериментах по изучению индивидуального влияния указанных веществ на пересыщение мочи. Вещества вводились в виде суспензии в 2% крахмальной слизи, чтобы минимизировать их взаимодействие.

Результаты применения разработанной комбинации были весьма перспективными. Во-первых, это снижение пересыщения мочи оксалат-ионами и ионами кальция, во-вторых, некоторое увеличение содержания в моче фосфат-ионов, в-третьих — это увеличение диуреза, что в среднем было выше исходного уровня на 25%, и рост рН мочи в среднем почти на 1,0. При этом стоит отметить, что развитие снижения концентрации мочевого оксалата происходило уже на 3-й день лечения, что выгодно отличало комбинацию от натрия сульфита, где эффект наступал только на 7-й день. Это все сопровождалось снижением в моче активности маркерных ферментов до своего исходного уровня. И как результат - снижение размеров и количества кальциевых депозитов. При этом результат по количеству кальциевых депозитов находился между натрия сульфитом и натрия пирофосфатом, в то время как размер депозита был самым наименьшим в числе используемых средств вне комбинации. Таким образом, применение комбинации натрия цитрата, натрия сульфита и натрия пирофосфата позволило комплексно снизить пересыщение мочи литогенными ионами, в следствие чего удалось достичь наименьшего размера кальциевых депозитов и низкого значения их количества в поле зрения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кудинов, Алексей Владимирович, 2013 год

1. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1990. - 384 с.

2. Аполихин, О.И. Анализ урологической заболеваемости в Российской Федерации в 2002-2009 годах по данным официальной статистики / О.И. Аполихин, A.B. Сивков, Д.А. Бешлиев и др. // Экспериментальная и клиническая урология. 2011. № 1. - С. 4-10.

3. Бабаева, Н.И. Диагностическое значение исследования активности N-ацетил-Р-О-глюкозаминидазы в моче / Н.И. Бабаева, И.Я. Липецкая, М.Г. Творогова и др. // Лаб. дело. 1991. - Т. 1. - С. 9-16.

4. Брюханов, В.М. Функция почек в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов и др. // Нефрология. -2008. Т. 12, № 1. - С. 69-74.

5. Брюханов, В.М. Методические подходы к изучению функции почек в эксперименте на животных/ В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов и др. // Нефрология. 2009. - Т. 13, № 3. - С. 52-62.

6. Вощула, В.И. Мочекаменная болезнь: этиотропное и патогенетическое лечение, профилактика / В.И. Вощула. Минск: ВЭВЭР, 2006. - 268 с.

7. Голованова, O.A. Почечные камни. / O.A. Голованова, В.Ф. Борбат. М.: Мед. книга, 2005. - 172 с.

8. Гублер, Е.В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. / Е.В. Гублер, A.A. Генкин. Л.: Медицина, 1973.-141 с.

9. Демин, Н.В. Мочекаменная болезнь: основные принципы лечения / Н.В. Демин // Русский медицинский журнал. 2008. - Т. 16, № 5. - С. 353-356.

10. Жариков, А.Ю. Современные представления о модуляторах оксалатного нефролитиаза. I. Стимуляторы кристаллизации / А.Ю. Жариков, В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев и др. // Нефрология. 2009. - Т. 13, № 1. - С. 56-72.

11. Жариков, А.Ю. Механизм формирования кристаллов при оксалатном нефролитиазе / А.Ю. Жариков, Я.Ф. Зверев, В.М. Брюханов и др. // Нефрология. 2009. - Т. 13, № 4. - С. 37-50.

12. Жариков, А.Ю. Новый способ определения оксалат-ионов в моче / А.Ю. Жариков, В.В. Лампатов, Я.Ф. Зверев и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2010. - № 12. - С. 3-5.

13. Жариков, А.Ю., Зверев Я.Ф., Брюханов В.М., Лампатов В.В. Механизм формирования кристаллов при оксалатном нефролитиазе / А.Ю. Жариков, Я.Ф. Зверев, В.М. Брюханов и др. // Нефрология. 2009. - Т. 13, № 4. - С. 37-50.

14. Зверев, Я.Ф. О роли процессов свободнорадикального окисления в развитии экспериментального нефролитиаза / Я.Ф. Зверев, В.М. Брюханов, О.С. Талалаева и др. // Нефрология. 2008. - Т. 12, № 1. - С. 58-63.

15. Кадыров, З.А. Некоторые вопросы этиологии и патогенеза мочекаменной болезни / З.А. Кадыров, В.Г. Истратов, С.И. Сулейманов // Урология. -2006.-№5.-С. 98-101.

16. Каминский, Л.С. Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. Применение статистики в научной и практической работе врача / Л.С. Каминский. Л., 1964. - 156 с.

17. Лопаткин, Н. А. Руководство по урологии / H.A. Лопаткин. М.: Медицина, 1998.-Т. 1.-304 с.

18. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных: Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. М.: Медиа Сфера, 2003.-312 с.

19. Рыбина, И.Л. Оценка роли метаболизма оксалата в этиопатогенезе мочекаменной болезни / И.Л. Рыбина, В.И. Вощула // БМЖ. 2006. -№ 1. -С. 15-19.

20. Спасов, А.А. Магний в медицинской практике / А.А. Спасов. Волгоград.: ОТРОК, 2006.-272 с.

21. Спасов, А.А. Экспериментальное обоснование эффективности солей магния в коррекции экспериментального кальций-фосфатного нефролитиаза / А.А. Спасов, И.Н. Иежица, М.В. Харитонова и др. // Нефрология. 2008. - Т. 12, № 3. - С. 72-78.

22. Татевосян, А.С. Этиологические и патогенетические основы нефролитиаза / А.С. Татевосян. Краснодар. - 1997. - 150 с.

23. Татевосян, А.С Диагностика и лечение местных факторов риска почечнокаменной болезни: автореф. дис. . д-ра мед. наук : 14.01.23 / Татевосян Артур Сергеевич. М., 2000. - 23 с.

24. Тиктинский, О.Л. Мочекаменная болезнь / О.Л. Тиктинский, В.П. Александров. СПб.: Питер, 2000. - 384 с.

25. Хабриев, Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р.У. Хабриев. М.: Медицина, 2005. - 832 с.

26. Харченко, М.А. Корреляционный анализ / М.А. Харченко. Воронеж: ВГУ, 2008.-31 с.

27. Arrabal, M.M. The treatment of renal lithiasis with biphosphonates / M.M. Arrabal, F.V. Diaz de la Guardia, P.A. Jimenez et al. // Arch. Esp. Urol. 2007. -V. 60, №7.-P. 745-754.

28. Asplin, J.R. Relationship between supersaturation and crystal inhibition in hypercalciuric rats / J.R. Asplin, D.A Bushinsky, W. Singharetnam et al. // Kidney Int. 1997. - V. 51, № 3. - P. 640-645.

29. Baker, P.R. Glycolate and glyoxylate metabolism in HepG2 cells / P.R. Baker, S.D. Cramer, M. Kennedy, D.G. Assimos, R.P. Holmes // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2004. - V. 287, № 5. - P. 1359-1365.

30. Baumann, J.M. The role of inhibitors and other factors in the pathogenesis of recurrent calcium-containing renal stones / J.M. Baumann, S. Bisaz, R. Felix et al. // Clin. Sci. Mol. Med. 1977. - V.53.-P. 141-148.

31. Bellizzi, V. Effects of water hardness on urinary risk factors for kidney stones in patients with idiopathic nephrolithiasis / V. Bellizzi, De L. Nicola, R. Minutolo et al. //Nephron. 1999. - V. 81, № 1. - P. 66-70.

32. Berg, C. Alkaline citrate in prevention of recurrent calcium oxalate stones / C. Berg // Scand. J. Urol. Nephrol. Suppl. 1990. - V. 130. - P. 1-83.

33. Borghi, L. Relationship between supersaturation and calcium oxalate crystallization in normals and idiopathic calcium oxalate stone formers / L. Borghi, A. Guerra, T. Meschi et al. // Kidney Int. 1999. - V. 55. - P. 10411050.

34. Borghi, L. Urinary volume, water and recurrences in idiopathic calcium nephrolithiasis: a 5-year randomized prospective study / L. Borghi, T. Meschi, F. Amato et al. // J. Urol. 1996. - V. 155, № 3. p. 839-843.

35. Borghi, L. Urine volume: stone risk factor and preventive measure / L. Borghi, T. Meschi, T. Schianchi et al. //Nephron. 1999. -V. 81, № 1. - P. 31-37.

36. Brown, C.M. Physical-chemical processes in kidney stone formation / C.M. Brown, D.L. Purich // Coe FL, Favus MJ, (eds). Disorders of bone and mineral metabolism. New York: Raven Press, 1992. - P. 613-624.

37. Bushinsky, D.A. Alendronate decreases urine calcium and supersaturation in genetic hypercalciuric rats / D.A. Bushinsky, K.J. Neumann, J. Asplin, N.S Krieger. // Kidney Int. 1999. - V. 55, № 1. - P. 234-243.

38. Bushinsky, D.A. Calcium phosphate supersaturation regulates stone formation in genetic hypercalciuric stone-forming rats / D.A. Bushinsky, W.R. Parker, J.R. Asplin // Kidney Int. 2000. - V. 57. - P. 550-560.

39. Carpentier, X. High Zn content of Randall's plaque: a n-X-ray fluorescence investigation / X. Carpentier, D. Bazin, C. Combes, A. Mazouyes, S. Rouziere, P.A. Albouy, E. Foy, M. Daudon // J. Trace Elem. Med. Biol. 2011. - V. 25, № 3.-P. 160-165.

40. Carr, G. Expression and localization of the pyrophosphate transporter, ANK, in murine kidney cells / G. Carr, J.A. Sayer, N.L. Simmons // Cell Physiol. Biochem. 2007. - V. 20. - P. 507-516.

41. Chow, K. Citrate inhibits growth of residual fragments in an in vitro model of calcium oxalate renal stones / K. Chow, J. Dixon, S. Gilpinet al. // Kidney Int. -2004. V. 65, №5-P. 1724-1730.

42. Coe, F.L. Kidney stone disease / F.L. Coe, A. Evan, E. Worcester // J. Clin. Invest. 2005. - V. 115, № 10. - P. 2598-2608.

43. Cohanim, M. The effects of thiazides on serum and urinary zinc in patients with renal calculi / M. Cohanim, E.R. Yendt // Johns Hopikins Med. J. 1975. -V. 136, №3.-P. 137-141.

44. Costa-Bauza, A. Synergism between the brushite and hydroxyapatite urinary crystallization inhibitors / A. Costa-Bauza, C. Barcelo, J. Perello, F. Grases // Int. Urol. Nephrol. 2002. - V. 34. - P. 447-451.

45. Cupisti, A. Low urine citrate excretion as main risk factor for recurrent calcium oxalate nephrolithiasis in males / A. Cupisti, E. Morelli, S. Lupetti et al. // Nephron. -1992. -V. 61.-P. 73-76.

46. Daudon, M. Epidemiology of nephrolithiasis in France / M. Daudon // Ann. Urol. (Paris). 2005. - V. 115. № 10. - P. 2598-2608.

47. Domrongkitchaiporn, S. Causes of hypocitraturia in recurrent calcium stone formers: focusing on urinary potassium excretion / S. Domrongkitchaiporn, W. Stitchantrakul, W. Kochakarn // Am. J. Kidney Dis. 2006. - V. 48, № 4. - P. 546-554.

48. Fegan, J. Gastrointestinal citrate absorption in nephrolithiasis / J. Fegan, S.R. Khan, J. Poindexter, C.Y. Pak // J. Urol. 1992. - V. 147. - P. 1212-1214.

49. Fetner, C.D. Effects of magnesium oxide on the crystallization of calcium salts in urine in patients with recurrent nephrolithiasis / C.D. Fetner, D.E. Barilla, J. Townsend, C.Y. Pak // J. Urol. 1978. - V. 120, № 4. - P. 399^01.

50. Fleisch, H. Isolation from urine of pyrophosphate, a calcification inhibitor / H. Fleisch, S. Bisaz // Am. J. Physiol. 1962. - V. 203. - P. 671-675.

51. Goding, J.W. Physiological and pathophysiological functions of the ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family / J.W. Goding, B. Grobben, H. Siegers // Biochim. Biophys. Acta. 2003. - V. 1638. - P. 1-19 .

52. Grases, F. Phytate (IP6) is a powerful agent for preventing calcifications in biological fluids: usefulness in renal lithiasis treatment / F. Grases, A. Costa-Bauza // Anticancer Res. 1999. - V. 19, № 5-A. - P. 3717-3722.

53. Grases, F. Effects of phytic acid on renal stone formation in rats / F. Grases, R. Garcia-Gonzalez, J.J. Torres, A. Llobera // Scand. J. Urol. Nephrol. 1998. - V. 32, №4.-P. 261-265.

54. Grases, F. Phytate acts as an inhibitor in formation of renal calculi / F. Grases, B. Isern, P. Sanchis et al. // Front Biosci. 2007. - V. 12. - P. 2580-2587.

55. Grases, F. Urinary phytate in calcium oxalate stone formers and healthy people-dietary effects on phytate excretion / F. Grases, J.G. March, R.M. Prieto et al.// Scand. J. Urol. Nephrol. 2000. - V. 34, № 3. - P. 162-164.

56. Grases, F. Effects of phytate and pyrophosphate on brushite and hydroxyapatite crystallization. Comparison with the action of other polyphosphates / F. Grases, M. Ramis, A. Costa-Bauza // Urol. Res. 2000. - V. 28, № 2. - P. 136-140.

57. Green, M.L. Ethylene glycol induces hyperoxaluria without metabolic acidosis in rats / M.L Green, M. Hatch, R.W. Freel // Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2005. -V. 289.-P. F536-F543.

58. Greischar, A. Influence of urine pH and citrate concentration on the upper limit of metastability for calcium phosphate / A. Greischar., Y. Nakagawa, F.L. Coe // J. Urol. 2003. - V. 169, № 3. - P. 867-870.

59. Guerra, A. Concentrated urine and diluted urine: the effects of citrate and magnesium on the crystallization of calcium oxalate induced in vitro by an oxalate load / A. Guerra, T. Meschi, F. Allegri et al. // Urol. Res. 2006. - V. 34, №6.-P. 359-364.

60. Hamm, L.L. Renal handling of citrate / L.L. Hamm // Kidney Int. 1990. - V. 38.-P. 728-735.

61. Hamm, L.L. Pathophysiology of hypocitraturic nephrolithiasis / L.L. Hamm, K.S. Hering-Smith // Endocrinol. Metab. Clin. North. Am. 2002. - V. 31, № 4. -P.885-893.

62. Harahap, A.R. Distribution of the murine plasma cell antigen PC-1 in non-lymphoid tissues / A.R. Harahap, J.W Goding // J. Immunol. 1988. - V. 141. -P. 2317-2320.

63. Hassani, M.A. Influence of urinary citrate levels on spontaneous calcium oxalate dehydrate crystalluria / M.A. Hassani, C. Hennequin, A. Lacour, M. Daudon // Prog. Urol. 2005. - V. 15, № 4. - P. 650-655.

64. He, Y. Sodium dicarboxylate cotransporter-1 expression in renal tissues and its role in rat experimental nephrolithiasis / Y. He, X. Chen, Z. Yu et al. // J. Nephrol. 2004. - V. 17, № 1. - P. 34^2.

65. Heilberg, I.P. Renal stone disease: causes, evaluation and medical treatment / LP. Heilberg, N Schor. // Arq. Bras. Endocrinol. Metab. 2006. - V. 50, № 4. - P. 823-831.

66. Hennequin, C. Validation by image analysis of a turbidimetric method to study calcium oxalate crystallization / C. Hennequin, V. Lalanne, T. Drueke et al. // Clin. Nephrol. 1997. - V. 48. - P. 292-299 .

67. Hess, B. Diagnostic markers in calcium nephrolithiasis current and traditional ideas with a new look / B. Hess // Schweiz. Med. Wochenschr. - 1995. - V. 125, №: 51- 52. - P. 2460-2470.

68. Hess, B. Pathophysiology, diagnosis and conservative therapy in calcium kidney calculi / B. Hess // Ther. Umsch. 2003. - V. 600, № 2. - P. 79-87.

69. Ho, A.M. Role of the mouse ank gene in control of tissue calcification and arthritis / A.M. Ho, M.D. Johnson, D.M. Kingsley // Science. 2000. - V. 289. -P. 265-270.

70. Hojgaard, I. The effects of citrate and urinary macromolecules on the aggregation of hydroxyapatite crystals in solutions with a composition similar to that in the distal tubule /1. Hojgaard, H.G. Tiselius // Urol. Res. 1998. - V. 26, № 2. - P. 89-95.

71. Holmes, R.P. Glyoxylate synthesis, and its modulation and influence on oxalate synthesis / R.P. Holmes, D.G. Assimos // J. Urol. 1998. - V. 160, № 5. - P. 1617-1624.

72. Jaipakdu, S. The effects of potassium and magnesium supplementations on urinary risk factors of renal stone patients / S. Jaipakdu, V. Prasongwatana, A. Premgamone et al. // J. Med. Assoc. Thai. 2004. - V. 87, № 3. - P. 255-263.

73. Johanson, G. Effects of magnesium hydroxide in renal stone disease / G. Johanson, U. Backman, B.G. Danielson et al. // J. Am. Cell. Nutr. 1982. - V. 1, №2.-P. 179-185.

74. Jung, A. The binding of pyrophosphate and two diphosphonates by hydroxyapatite crystals / A. Jung, S. Bisaz, H. Fleisch // Calcif. Tissue Res. -1973.-V. 11.-P. 269-280.

75. Khan, S.R. Animal tnodels of kidney stone formation: an analysis / S.R. Khan // World. J. Urol. 1997. - V. 15, № 4. - P. 236-243.

76. Khan, S.R. Calcium oxalate urolithiasis in the rat: is it a model for human stone disease? A review of recent literature / S.R Khan, R.L. Hackett // Scan. Electron. Microsc. 1985. - Pt. 2. - P. 759-774

77. Kok, D.J. Modulation of calcium oxalate monohydrate crystallization kinetics in vitro / D J. Kok, S.E. Papapoulos, L J.M.J. Blomen, O.L.M. Bijvoet // Kidney Int.- 1988. -V. 34. P. 346-350.

78. Kulaksizoglu, S. Impact of various modifiers on calcium oxalate crystallization / S. Kulaksizoglu, M. Sofikerim, C.Cevik // Int. J. Urol. 2007. - V. 14, № 3. - P. 214-218.

79. Kumar, S. A new model of nephrolithiasis involving tubular dysfunction/injury / S. Kumar, D Sigmon., T. Miller et al. // J. Urol. 1991. - V. 146, № 5. - P. 1384-1389.

80. Labeeuw, M. Role of magnesium in the physiopathology and treatment of calcium renal lithiasis / M. Labeeuw, N. Pozet, P. Zech, J. Traeger // Presse. Med.- 1987. V. 16, № 1. - P. 25-27.

81. Lieske, J.C. The effect of ions at the surface of calcium oxalate monohydrate crystals on cell-crystal interactions / J.C. Lieske, G. Farell, S. Deganello // Urol. Res. 2004. - V. 32, № 2. - P. 117-123.

82. Lingeman, J. Divergence between stone composition and urine supersaturation: clinical and laboratory implications / J. Lingeman, R. Kahnoski, H. Mardis et al. //J. Urol.-1999.-V. 161,№4.-P. 1077-1081.

83. March, J.G. Determination of pyrophosphate in renal calculi and urine by means of an enzymatic method / J.G. March, B.M. Simonet, F. Grases // Clin. Chim. Acta. -2001.-V. 314.-P. 187-194.

84. Marini, M.A. Calorimetric and potentiometric studies on the binding of calcium by phytic acid / M.A. Marini, W.J. Evans, N.M. Morris // J. Appl. Biochem. -1985.-V. 7, № 3. -P.180-191.

85. Maruch, D. Rapid colorimetric assay of P-galactosidase and N-acetyl-P-glucosaminidase in human urine / D. Maruch // Clin. Chim. Acta. 1976. - V. 73.-P. 453^156.

86. Massey, L. Magnesium therapy for nephrolithiasis / L. Massey // Magnesium Res.-2005.-V. 18, №2.-P. 123-126.

87. Messa, P. Urinary citrate, bone resorption and intestinal alkali absorption in stone formers with fasting hypercalciuria / P. Messa, G. Mioni, L. Paganin et al. // Scanning Microsc. 1994. -V. 8, № 3. - P. 531-538.

88. Moochhala, S.H. Renal calcium stones: insights from the control of bone mineralization / S.H. Moochhala, J.A. Sayer, G. Carr, N.L. Simmons // Exp. Physiol. 2008. - V. 93, № 1. - P. 43^19.

89. Müller, G. Pathogenesis of hyperoxalurias and calcium oxalate calculi in intestinal diseases / G. Müller, W. Schütte, T. Möller // Dtsch. Z. Verdau. Stoffwechselkr. 1987. - V. 47, № 3. - P. 105-112.

90. Nouwen, E.J. Human intestinal versus tissue-nonspecific alkaline phosphatase as complementary urinary markers for the proximal tubule / E.J. Nouwen, M.E. De Broe // Kidney Int. Suppl. 1994. - V. 47. - P. S43-S51.

91. Oqawa, Y. Oxalate and urinaiy stones / Y. Oqawa, T. Miyazato, T. Hatano // World. J. Surg. 2000. - V. 24, № 10. - P. 1154-1159.

92. Pajor, C.Y. Citrate transport by the kidney and intestine / C.Y. Pajor // Semin. Nephrol. 1999. - V. 19. - P. 195-200.

93. Pak, C.Y. Physicochemical basis for formation of renal stones of calcium phosphate origin: calculation of the degree of saturation of urine with respect to brushite / C.Y. Pak // J. Clin. Invest. 1969. - V. 48, № 10. - P. 1914-1922.

94. Pak, C.Y. Spontaneous precipitation of brushite in urine: evidence that brushite is the nidus of renal stones originating as calcium phosphate / C.Y. Pak, E.D.

95. Eanes, B. Puskin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1971. - V. 68, № 7. - P. 14561460.

96. Pak, C.Y. Propensity for spontaneous nucleation of calcium oxalate. Quantitative assessment by urinary FPR-APR discriminant score / C.Y. Pak, R.A. Galosy // Am. J. Med. 1980. - V. 69, № 5. - P. 681-689.

97. Pak, C.Y. Nucleation and growth of brushite and calcium oxalate in urine of stone-formers / C.Y. Pak, K. Holt // Metabolism. 1976. - V. 25, № 6. - P. 665673.

98. Pak, C.Y. Predictive value of kidney stone composition in the detection of metabolic abnormalities / C.Y.Pak, J.R. Poindexter, B. Adams-Huet, M.S. Pearle // Am. J. Med. 2003. - V. 115, № 1. - P. 26-32.

99. Parks, J.H. Correspondence between stone composition and urine supersaturation in nephrolithiasis / J.H. Parks, M. Coward, F.L. Coe // Kidney Int. 1997. - V. 51, №3.-P. 894-900.

100. Parks, J.H. Changes in urine volume accomplished by physicians treating nephrolithiasis / J.H. Parks, E.R. Goldfischer, F.L. Coe // J. Urol. 2003. - V. 169,№3.-P. 863-866.

101. Ratan, S.K. Urinary citrate excretion in idiopathic nephrolithiasis / S.K. Ratan, V. Bhatnagar, D.K. Mitra et al. // Indian Pediatrics. 2002. - V. 39. - P. 819825.

102. Reynolds, T.M. Chemical pathology, clinical investigation and management of nephrolithiasis / T.M. Reynolds // J. Clin. Pathol. 2005. - V. 58, № 2. - P. 134-140.

103. Roberts, N.B. Pyrophosphate in synovial fluid and urine and its relationship to urinary risk factors for stone disease / N.B. Roberts, J. Dutton, T. Helliwell et al. // Ann. Clin. Biochem. 1992. - V. 29. - P. 529-534.

104. Robertson, W.G. Kidney models of calcium oxalate stone formation / W.G. Robertson // Nephron. Physiol. 2004. - V. 98, № 2. - P. 21-30.

105. Rodgers, A. Therapeutic action of citrate in urolithiasis explained by chemical speciation: increase in pH is the determinant factor / A. Rodgers, S. Allie

106. Hamdulay, G. Jackson // Nephrol. Dial Transplant. 2006. - V. 21, № 2. - P. 361-369.

107. Rushton, H.G. Effects of magnesium deficiency on intratubular calcium oxalate formation and ciystalluria in hyperoxaluric rats / H.G. Rushton, M. Spector // J. Urol. 1982. - V. 127, № 3. - P. 598-604.

108. Russell, R.G. Metabolism of inorganic pyrophosphate (PPi) / R.G. Russell // Arthritis Rheum. 1976. - V. 19, № 3. - P. 465-478.

109. Sakhaee, K. Recent advances in the pathophysiology of nephrolithiasis / K. Sakhaee // Kidney Int. 2009. - V. 75, № 6. - P. 585-595.

110. Sakly, R. Comparative study between the anti-lithogenic action of zinc and copper against oxalic lithiasis in the rat / R. Sakly, K. Zarrouk, A. Achour, A. Hedhili, A. Mbazzaa // Ann. Urol. (Paris). 1991. - V. 25, № 5. - P. 250-253.

111. Sakly, R. Study of anti- lithogenic action of zinc sulfate in experimental lithiasis in the rat / R. Sakly, K. Zarrouk, A. Hedhili, A. Achour, A. Mbazzaa // Ann. Urol. (Paris). 1991. - V. 25, № 5. - P. 246-249.

112. Saw, N.K. Effects of inositol hexaphosphate (phytate) on calcium binding, calcium oxalate crystallization and in vitro stone growth / N.K. Saw, K. Chow, P.N. Rao, J.P. Kavanagh // J. Urol. 2007. - V. 177, № 6. - P. 2366-2370.

113. Schwartz, B.F. Rethinking the role of urinary magnesium in calcium urolithiasis / B.F. Schwartz, J. Bruce, S. Lesile, M.L. Stoller // J. Endourol. 2001. - V. 15, № 3.-P. 233-235.

114. Sharma, V. Sulfite inhibits oxalate production from glycolate and glyoxylate in vitro and from dichloroacetate infused i.v. into male rats / V. Sharma, P.O. Schwille // Biochem. Med. Metab. Biol. 1993. - V. 49, № 2. - P. 265-269.

115. Stitchantrakul, W. Urinary risk factors for recurrent calcium stone formation in Thai stone formers / W.Stitchantrakul, W. Kochakarn, C. Ruangraksa, S. Domrangkitchaiporn // J. Med. Assoc. Thai. 2007. - V. 90, № 4. - P. 688-698.

116. Tiselius, H.G. Estimated levels of supersaturation with calcium phosphate and calcium oxalate in the distal tubule / H.G. Tiselius // Urol. Res. 1997. - V. 25, №2.-P. 153-159.

117. Tiselius, H.G. Effects of citrate on the different phases of calcium oxalate crystallization / H.G. Tiselius, C. Berg, A.M Fornander., M.A. Nilsson // Scanning Microsc. 1993. -V. 7, № 1. - P. 381-389.

118. Toblli, J.E. Urinary calcium oxalate supersaturation beyond nephrolithiasis. Relationship with tubulointerstitial damage / J.E. Toblli, M. Angerosa, I. Stella et al. // Medicina (B. Aires). 2003. - V. 63, № 2. - P. 97-104.

119. Vagelli, G. Magnesium hydroxide in idiopathic calcium nephrolithiasis / G. Vagelli, G. Calabrese, G. Pratesi et al. // Minerva Urol. Nefrol. 1998. - V. 50, № l.-P. 113-114.

120. Vekaria, R.M. Immunolocalization of ectonucleotidases along the rat nephron / R.M. Vekaria, D.G. Shirley, J. Sevigny, R.J. Unwin // Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2006. - V. 290. - P. F550-F560.

121. Vekaria, R.M. Intraluminal ATP concentrations in rat renal tubules / R.M. Vekaria, R.J. Unwin, D.G. Shirley // J. Am. Soc. Nephrol. 2006. - V. 17. - P. 1841-1847.

122. Weber, D.V. Urinary saturation measurements in calcium nephrolithiasis / D.V. Weber, F.L. Coe, J.H. Parks, V. Tembe // Am. Int. Med. 1979. - V. 90. - P. 180-184.

123. Wikstram, B. Urinary pyrophosphate excretion in renal stone formers with normal and impaired renal acidification / B. Wikstram, B.G. Danielson, S. Ljunghall et al. // World J. Urol. 1983. - V. 1. - P. 150-154.iw

124. Wu, L.N. Differential effects of zinc and magnesium ions on mineralization activity of phosphatidylserine calcium phosphate complexes / L.N. Wu, B.R. Genge, R.E. Wuthier // J. Inorg. Biochem. 2009. - V. 103, № 7. p. 948-962.

125. Yagisawa, T. Metabolic risk factors in patients with first-time and recurrent stone formations as determined by comprehensive metabolic evaluation / T. Yagisawa, P.S. Chandhoke, J. Fan // Urology 1998. V. 52. - P. 750-755.

126. Yamaguchi, S. Study of a rat model for calcium oxalate crystal formation without severe renal damage in selected conditions / S. Yamaguchi, J.H. Wiessner, A.T. Hasegawa et al. // Int. J. Urol. 2005. - V. 12, № 3. - P. 290298.

127. Yanagawa, M. The formation of oxalate from glycolate in rat and human liver / M. Yanagawa, E. Maeda-Nakai, K. Yamakawa, I. Yamamoto, J. Kawamura, S. Tada, A. Ichiyama // Biochim. Biophys. Acta. 1990.1 V. 1036, № 1. - P. 2433.

128. Zerwekh, J.E. Reduction of renal stone risk by potassium-magnesium citrate during 5 weeks of bed rest / J.E. Zerwekh, C.V. Odvina, L.A. Wuermser, C.Y. Pak// J. Urol. -2007. V. 177, № 6.-P. 2179-2184.