Фармакогностическое изучение семян чернушки дамасской (Nigella damascena L.), выращенной в условиях Ставропольского края тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат фармацевтических наук Маширова, Светлана Юрьевна

• Маширова, Светлана Юрьевна
• кандидат фармацевтических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Маширова, Светлана Юрьевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

введение

глава 1. ботаническая, фармакогностическая и

медико-биологическая характеристика чернушки дамасской

1.1 Характеристика рода Чернушка (NigeПa)

1.2 Химический состав

1.3 Применение чернушки в традиционной и научной медицине

1.4 Культивирование и агротехника чернушки дамасской

Заключение по главе 1

глава 2 объекты и методы исследования

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования углеводов

2.2.1 Свободные моносахариды

2.2.2 Олиго- и полисахариды

2.2.3 Выделение полисахаридов из растительного сырья

2.2.4 Кислотный гидролиз

2.2.5 Хроматографический анализ углеводов

2.2.6 Газожидкостная хроматография (ГЖХ)

2.2.7 Спектрометрия в инфракрасной области

2.2.8 Количественное определение галактуронидов

2.2.9 Определение физико-химических характеристик пектинов

2.3 Методы исследования липидов

2.3.1 Выделение липидов из растительного сырья

2.3.2 Определение физико-химических показателей жирного масла

2.3.3 Газожидкостная хроматография (ГЖХ)

2.3.4 Газожидкостная хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС)

2.4 Методы исследования белков, пептидов, аминокислот

2.4.1 Качественное обнаружение аминокислот

2.4.2 Выделение и очистка пептидного комплекса

2.4.3 Выделение аминокислот и определение

аминокислотного состава

2.4.4 Исследование пептидов методом электрофореза

2.4.5 Исследование пептидов методом ВЭЖХ

2.5 Методы исследования эфирных масел

\

2.5.1 Газожидкостная хроматография (ГЖХ)

2.6 Методы исследования ферментной активности

2.6.1 Определение липолитической активности

2.6.2 Определение протеолитической активности

2.7 Методы исследования макро- и микроэлементного состава

2.8 Общие методики стандартизации сырья

2.8.1 Методы отбора проб для анализа

2.8.2 Морфолого-анатомические исследования

2.8.3 Определение числовых показателей качества сырья

2.8.4 Определение микробиологической чистоты сырья

2.8.5 Определение содержания радионуклидов

2.8.6 Определение сроков хранения сырья

2.8.7 Статистическая обработка данных

2.8.8 Валидация методик количественного определения

2.9 Методы токсико-фармакологических исследований

2.9.1 Исследование «острой» токсичности

2.9.2 Изучение антибактериальной активности

2.9.3 Изучение ранозаживляющей активности

2.9.4 Изучение гиполипидемической активности

2.9.5 Изучение гепатозащитной активности

2.9.6 Изучение желчегонной активности

2.9.7 Изучение диуретической активности

2.9.8 Оценка биохимического профиля сыворотки крови

лабораторных животных

2.9.9 Определение биохимических показателей в гомогенате печени лабораторных животных

глава 3. морфолого-анатомические исследования семян чернушки дамасской

3.1 Морфологическая характеристика семян чернушки дамасской

3.2 Анатомическая характеристика семян чернушки дамасской

выводы по главе 3

глава 4. фотохимическое изучение растительного сырья

4.1 Исследование углеводов

4.1.1 Выделение полисахаридов

*

4.1.2 Изучение химического состава углеводных фракций

4.1.2.1 Групповые качественные реакции на углеводы

4.1.2.2 Изучение мономерного состава углеводных фракций методом хроматографии на бумаге

4.1.2.3 Изучение мономерного состава углеводных фракций методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ)

4.1.2.4 Изучение углеводных фракций методом ИК-спектроскопии

4.1.2.5 Изучение физико-химических характеристик пектинов

4.2 Исследование липидов

4.2.1 Выделение липидов

4.2.2 Определение физико-химических показателей жирного масла

4.2.3 Определение жирнокислотного состава

4.2.4 Определение компонентного состава жирного масла

4.2.5 Хроматографическое изучение липидов

4.3 Белки, пептиды, аминокислоты

4.3.1 Качественное обнаружение аминокислот

4.3.2 Количественное определение белка и пептидов

4.3.3 Определение аминокислот методом жидкостной

хроматографии на аминокислотном анализаторе

4.3.4 Электрофоретический анализ пептидов

4.3.5 Изучение пептидов методом ВЭЖХ

4.4. Эфирные масла

4.4.1 Определение содержания эфирного масла

4.4.2 Определение подлинности эфирного масла

4.4.3 Изучение эфирного масла методом ГЖХ

4.4.4 Изучение эфирного масла методом ВЭЖХ

4.5 Ферменты

4.5.1 Определение липолитической активности

4.5.2 Определение протеолитической активности

4.5.3 Выделение фермента липазы

4.6 Разработка методики подлинности семян чернушки дамасской

4.7 Макро- и микроэлементный состав, тяжелые металлы, радионуклиды

4.7.1 Определение макро-и микроэлементного состава

4.7.2 Определение содержания тяжелых металлов

4.7.3 Определение содержания радионуклидов

4.8 Определение числовых показателей

4.9 Определение микробиологической чистоты

4.10 Обоснование норм качества «Чернушки дамасской семена»

выводы по главе 4

глава 5. изучение фармакологической активности

5.1 Изучение «острой» токсичности

5.2 Изучение антибактериальной активности

5.3 Изучение ранозаживляющей активности

5.4 Изучение гиполипидемической активности

5.5 Изучение гепатозащитной активности

5.6 Изучение желчегонной активности

5.7 Изучение диуретической активности

выводы по главе 5

общие выводы

список литературы

приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение семян чернушки дамасской (Nigella damascena L.), выращенной в условиях Ставропольского края»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Несмотря на достаточно высокие темпы развития мировой фармацевтической индустрии, для России остается острым вопрос внедрения в медицинскую практику отечественных препаратов. Одним из путей решения данной проблемы является развитие фитохимических производств, для которых необходимо наращивать научный потенциал в сфере получения и расширения сведений о химическом составе лекарственного растительного сырья (ЛРС), фармакологической активности и развития сырьевой базы.

Пищеварительные ферменты - одна из наиболее часто используемых в гастроэнтерологии групп лекарственных средств. Нарушения процессов пищеварения различной степени выраженности выявляются практически при всех заболеваниях пищеварительного тракта [82].

Применение препаратов, содержащих панкреатин, на первый взгляд, кажется более физиологичным. Но по некоторым данным преимуществом лекарственных препаратов растительного происхождения является отсутствие в их составе животного белка и компонентов желчи, что делает возможным назначение данных ферментных препаратов при аллергиях, а также в тех случаях, когда присутствие желчных кислот крайне нежелательно [114].

Нигедаза - ферментный препарат липолитического действия, полученный из семян чернушки дамасской {Nigella (Латаьсепа £.), используется как в отечественной, так и в зарубежной медицинской практике. Однако после распада СССР сырьевая база чернушки дамасской осталась в Украине, и в настоящее время производство данного препарата в России затруднено из-за дефицита сырья. Перспективным направлением увеличения заготовок отечественного сырья является расширение его сырьевой базы. Поэтому Ставропольским НИИ сельского хозяйства проведены интродукционные исследования по введению чернушки дамасской в промышленную культуру в регионе Ставропольского края.

Для фармацевтического производства необходимо предусматривать внедрение малоотходных технологий, что будет способствовать повышению рента-

бельности и снижению себестоимости фитопрепаратов. Это возможно за счет выявления дополнительных групп биологически активных соединений (БАС) и расширения возможности медицинского применения [79].

В мировой литературе есть достаточно сведений о фармакологической активности различных групп БАС, в частности, жирного масла, углеводов, компонента эфирного масла - тимохинона, но химические исследования данных групп БАС носят фрагментарный характер, так как в большей мере проводились только в отношении ферментов.

В то же время с учетом возможности получения из данного сырья различных комплексов биологических веществ, необходимо разработать нормативную документацию, учитывающую различные пути их использования и современные требования, предъявляемые к стандартизации ЛРС.

Таким образом, углубленное фитохимическое изучение семян Nigella д,ата&сепа является актуальным и позволит расширить рамки их медицинского использования.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось комплексное фитохимическое исследование и установление фармакологической активности различных фармацевтических субстанций, полученных из семян Nigella с1ата8сепа.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Проанализировать современное состояние исследований по химическому составу, биологическим и фармакологическим свойствам Nigella с1ата8сепа.

2. Изучить химический состав семян Nigella о?атавсепа, выращенной в Ставропольском крае, по группам биологически активных соединений: углеводы, ли-пиды, пептиды, эфирные масла, ферменты, а также макро- и микроэлементы.

3. Определить критерии оценки подлинности и качества семян Nigella сИатазсепа для включения их в нормативную документацию.

4. Провести фармакологический скрининг фракций, полученных из семян Nigella с1ата$сепа.

5. Разработать нормативную документацию на лекарственное сырье «Чернушки дамасской семена».

Научная новизна. В результате проведенных исследований экспериментально подтверждена возможность использования семян NigeПa с1ата8сепа в качестве источника трех целевых групп БАС: ферментов, жирного и эфирного масел, что доказывает перспективу расширения ее использования в медицинской практике.

Впервые с помощью современных физико-химических методов (ВЭЖХ, ГЖХ, ГХ-МС, электрофореза и др.) проведено систематическое фитохимическое изучение семян Ш^еИа (Латазсепа, выращенных в Ставропольском крае. Данные исследования показали возможность комплексного использования сырья при его промышленной переработке.

Впервые определен качественный и количественный состав углеводов (выход углеводов составил около 3,55%). Проведен анализ физико-химических характеристик пектинов.

Изучен липидный комплекс семян Nigella ¿¡атаясепа (содержание составляет до 30 %), выращенной в Ставропольском крае методами ГЖХ, спектрофото-метрии и ГХ-МС и определены физико-химические показатели жирного масла.

В результате анализа пептидных фракций (содержание составило от 0,84% до 1,94%) методом эксклюзионной ВЭЖХ идентифицированы пептиды и определено их количество.

Методом ГЖХ и физико-химическими методами установлены показатели подлинности эфирного масла (содержание составляет до 3%). Разработана методика определения тимохинона в эфирном масле методом ВЭЖХ.

Подтверждена липолитическая активность (~9,5 ЛЕ/мг) и впервые установлена протеолитическая активность белков семян Ш%е\1а с1ата8сепа (-17,6 ЕД/мг).

Методом атомно-абсорбционной спектроскопии определен набор макро- и микроэлементов в семенах Nigella ¿.атаБсепа (27 элементов).

На основании морфолого-анатомического исследования определены анатомические признаки, позволяющие проводить диагностику семян Nigella ёатаэсепа (цельное сырье, порошок).

Разработаны числовые показатели, регламентирующие качество сырья.

Проведены фармакологические скрининговые исследования различных субстанций на основе исследуемого сырья, результаты которых могут быть использованы при получении новых фитопрепаратов, обладающих антибактериальным, ранозаживляющим, гиполипидемическим, гепатозащитным, желчегонным и диуретическим действиями.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая значимость исследования вытекает из новизны полученных результатов и заключается в получении новых сведений о химическом составе и фармакологической активности различных групп БАС, выделенных из семян Nigella с1ата$сепа. В результате проведенной работы показана возможность использования исследуемого вида растительного сырья в комплексных малоотходных технологиях получения современных лекарственных фитопрепаратов. Данные, полученные в ходе фармакологических исследований, являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего углубленного изучения различных фармацевтических субстанций.

Практическая значимость исследования заключается в том, что в результате фитохимического и фармакологического исследования доказана возможность использования отечественного сырья Nigella ¿¡атаясепа для производства ферментного препарата «Нигедаза», а также в качестве источников эфирного и жирного масел, обладающих антибактериальной, ранозаживляющей, гиполипидеми-ческой, гепатозащитной и желчегонной активностями.

Предложен новый вид ЛРС для включения в Государственную фармакопею России XII издания.

Разработаны нормы качества и методики стандартизации семян NigeПa ¿атаБсепа в соответствии с современными требованиями и пути использования, которые включены в проект фармакопейной статьи (ФС).

Для определения подлинности и качества семян Nigella (¿атаясепа разработаны и предложены методики ТСХ-анализа, ГЖХ и спектрометрии.

Разработана методика ВЭЖХ для количественного определения тимохино-на в эфирном масле семян Ш^еИа с1ата8сепа и проведена валидационная оценка по параметрам: специфичность, линейность, прецизионность.

Результаты комплексного фитохимического исследования Nigella с1ата8сепа, выращенной на базе Ставропольского НИИ сельского хозяйства, позволили подготовить для передачи в Государственную комиссию по испытанию и охране селекционных достижений РФ новый сорт этой культуры.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

> Фармакопейная статья (ФС) «Чернушки семена» (проект для включения в Государственную фармакопею России XII издания);

> Инструкция по сбору и сушке «Чернушки семена» (утверждена ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии 27.07.2012 г.).

Результаты диссертационных исследований используются в учебных процессах на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России и кафедрах фармакогнозии и ботаники ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России и ГБОУ ВПО ДВГМУ Минздрава России.

Методологическая основа, объекты и методы исследования. Методологической основой настоящей диссертационной работы послужили научные подходы к расширению номенклатуры отечественного официального ЛРС с использованием ресурсосберегающих технологий на основе комплексного фитохимического изучения.

Объектом исследования служили высушенные измельченные семена чернушки дамасской (Nigella ¿[атаясепа Ь.) семейства лютиковых - ЯапипсиШсеае, заготовленные в период их полного созревания (2006-2010 гг.) от растений, выращенных на территории Ставропольского края (ГНУ «Ставропольский НИИСХ» РАСХН, г. Михайловск).

Фитохимические исследования проводились с использованием комплекса различных физико-химических методов: хроматография колоночная (КХ), тон-

кослойная (ТСХ), бумажная (БХ), газожидкостная (ГЖХ), газожидкостная хрома-то-масс-спектрометрия (ГХ-МС), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), электрофорез, спектрометрия в УФ, видимой и ИК- областях, атомно-абсорбционная спектроскопия (ААС) и др.

Скрининговые микробиологические и фармакологические исследования включали изучение антибактериальной, ранозаживляющей, гиполипидемиче-ской, гепатозащитной, желчегонной и диуретической активностей.

Положения, выносимые на защиту: на защиту выносятся следующие положения, характеризующиеся научной новизной:

1. Результаты фитохимического исследования семян Nigella с1атазсепа, выращенной в Ставропольском крае, по группам биологически активных соединений: липиды, эфирные масла, углеводы, пептиды, ферменты, а также макро- и микроэлементы.

2. Результаты по разработке критериев подлинности и показателей качества растительного сырья.

3. Результаты скринингового фармакологического исследования биологически активных комплексов семян чернушки дамасской.

Степень достоверности и апробация результатов. Оценка степени достоверности научных результатов определяется большим объемом проанализированной информационной базы, комплексностью и детальностью исследования, использованием большого количества современных физико-химических методов анализа, математико-статистической обработкой полученных результатов.

Материалы исследования доложены и обсуждены на региональных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2011 г., 2012 г.).

Публикации. Основные положения диссертации отражены в 10 научных работах, в том числе 5 статьях в журналах, входящих в перечень рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертаций, рекомендованных ВАК РФ.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ПМФИ - филиала ВолгГМУ Минздрава России по зарегистрированной теме: «Фармакогностическое исследование дикорастущих и культивируемых растений с целью расширения сырьевой базы и внедрения в медицинскую практику» (№ Гос. регистрации 01201354514).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 145 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», трех глав экспериментальной части, общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержится 32 таблицы, 35 рисунков. Список цитируемой литературы включает 188 источников, из них - 39 на иностранных языках.

В первой главе рассмотрены ботаническая, фармакогностическая и медико-биологическая характеристика рода Nigella. Во второй главе приведены основные материалы и методы исследований, используемые в экспериментальной работе. В третьей главе приведены результаты морфолого-анатомического исследования исследуемого сырья. В четвертой главе отражены результаты фитохимического анализа семян Nigella damascena. Пятая глава посвящена изучению фармакологической активности некоторых фитосубстанций, полученных из семян Nigella damascena. В разделе «Основные результаты и выводы» приведены заключительные результаты и выводы по проделанной работе. Приложение включает проект ФС на сырье «Чернушки дамасской семена», Инструкцию по сбору и сушке «Чернушки семена», акты о внедрении результатов диссертационной работы и материалы изучения «острой» токсичности.

ГЛАВА 1. БОТАНИЧЕСКАЯ, ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКАЯ И МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЧЕРНУШКИ ДАМАССКОЙ

1.1 Характеристика рода Чернушка (Nigella)

Род Чернушка - Nigella принадлежит к отделу Magnoliophyta, классу Mag-noliopsida, подклассу Ranunculidae, надпорядку Ranunculanae, порядку Ranuncu-lales, подпорядку Ranunculineae, семейству Ranunculaceae, подсемейству Deiph-nioideae, трибе Nigelleae [127]. Род Чернушка {Nigella) состоит из 14-20 видов, произрастающих в Средиземноморье, Южной и Юго-Восточной Европе, на Кавказе, в Малой и Средней Азии, Северной Африке, в СНГ - 11 видов [87].

Название чернушка происходит от латинского nigellus, что означает «черноватый» [147].

В мировой практике используются как пищевые и лекарственные растения только четыре вида: Nigella damascena L. (чернушка дамасская) - растет в Европейской части и на Кавказе, N. sativa L. (ч. посевная), N. indica (ч. индийская) -произрастают в Индии, Афганистане, Пакистане и N. grandulifera (ч. железистая) - встречается в Туркмении и в западных районах Китая [87, 147].

Чернушка дамасская {Nigella damascena L.) - травянистое однолетнее растение высотой 20-60 см, стебель прямостоячий, ребристый, с жесткими дважды-трижды перисто-рассеченными на линейно-щетинистые сегменты, края листовой пластинки завернуты вниз, длиной 6-10 см и шириной 4-5см. Листья покрыты мелкими трихомами. Верхушечные листья приближены к основанию плодов.

Цветки верхушечные, одиночные, в диаметре 4 см, окружены ажурным зеленым покрывалом из верхних перисто-рассеченных листьев, в несколько раз превышающий цветок, простые или махровые, чашечка пятичленная, листочки имеют, белую, голубую или синюю окраску (Рисунок 1).

Лепестки - двугубые нектарники, по длине меньше чашечки, округленные, переходящие в короткий и узкий ноготок. Цветет в июне - августе. Плоды созревают в августе — сентябре [55].

Рисунок 1 - Внешний вид чернушки дамасской

Плод состоит из пяти сильно вздутых, гладких, с ровным носиком, сросшихся почти до верха листовок, окруженных тонко-рассеченной, красивой оберткой из верхушечных листьев, длиной 1-1,5 см. Семена черные, мелкие (2,2-3 мм длиной и 1,5-2 мм шириной), клиновидные, трехгранные, с поперечно-морщинистой поверхностью с приятным земляничным запахом [149].

Естественно произрастает в Крыму, на Кавказе, Средиземноморье, Балканах и Малой Азии. Встречается как сорное растение в ряде южных районов европейской части России, в Центральной Азии. Растет по степным склонам, сорным местам. Изредка дичает. В России культивируется как декоративное и лекарственное растение [9]. В качестве лекарственного сырья используют собранные в период полной зрелости и высушенные семена [67, 99].

Чернушка посевная (Nigella sativa L.) - однолетнее травянистое светло-зеленое растение с прямым ветвистым стеблем высотой 15-80 см. Листья череш-

ковые, дважды и трижды перисто-рассеченные на узколинейные доли. Цветки одиночные, относительно крупные, горизонтально расположенные, с голубыми чашелистиками продолговато-притупленные, суженные при основании в ноготок, и с зелеными лепестками, лепестки короче чашелистиков. Верхняя губа лепестков с длинными линейными окончаниями, нижняя - длиннее верхней, рассеченная на две доли. Белесые цветки на верхушках ветвей довольно крупные, выделяются зеленоватым или голубоватым рисунком на концах лепестков, голубые чашелистики продолговатые, притуплённые, суженные при основании в ноготок. Цветет в июле-августе (Рисунок 2).

Рисунок 2 - Внешний вид чернушки посевной

Плод - коробочка с клиновидными, трехгранными черными семенами. Цветет с начала июля по август, плоды созревают в августе - сентябре [67].

Плодов - листовок обычно 5. Каждая листовка вздутая, с длинным, закрученным вдоль носиком.

Характерная особенность чернушки посевной заключается в том, что ее листовки при созревании растрескиваются только при механическом воздействии, и это значительно сокращает потери урожая семян. Семена с сильным пряно-перечным ароматом.

К настоящему времени чернушку посевную культивируют в Европе, Малой Азии и Индии, на Украине, в Средней Азии. В России выращивают как декоративное растение [10, 87].

Встречается в южных областях европейской части России, в Украине, на Кавказе, в Средней Азии. В Южной России чернушку посевную можно встретить и в культуре, и как одичавшее растение. Дикорастущая чернушка посевная чаще всего встречается в посевах, по сорным местам, на степных склонах.

Чернушка полевая {Nigella агмепз18 Ь.) - однолетнее травянистое растение высотой 20-50 см. Листья перисто-рассеченные на линейные или копьевидно-линейные доли. Стебель прямостоячий, ветвистый, ребристый, по ребрам иногда мелко-бугристо-шершавый, прямой, ветвистый. Листья 2-4 см длиной, перисто-рассеченные на немногочисленные узколинейные доли, иногда с завороченными вниз и мелко-бугорчато-шершавыми краями [67, 99].

Чашелистики 1,5-2 см длиной, округло обратнояйцевидные, с резко выступающими жилками, по верхнему краю слегка волнисто выемчатые и на вершине сразу коротко заостренные, в нижней части также внезапно суженные в ноготок. Лепестки-нектарники на коротких ножках мелкие, верхняя губа при основании округло-расширенная и затем сразу вытянутая в длинное остроконечие, значительно короче яйцевидной, слегка опушенной нижней губы, которая часто окрашена в зеленый цвет, с синими поперечными полосками и рассечена на две сверху мозолисто утолщенные дольки. Пыльники длиннозаостренные на вершине. Листовки продолговатые, сильно шершавые от мелких бугорков, при основании до половины сросшиеся, на спинке сильно ребристые, с ребрами, переходящими на длинный бугристый вдоль закругленный носик, почти равный листовкам [119] (Рисунок 3).

Рисунок 3 - Внешний вид чернушки полевой

Произрастает в Европейской части России (Крым, Средний Днепр, Верхний Днепр, Нижний Дон), на Кавказе (Дагестан, Восточное, Западное и Южное Закавказье), в Средней Азии [8, 58, 136].

Чернушка восточная (Ы'^еПа опеЫаШ Ь.) - однолетнее растение высотой 30-40 см с маленькими цветами и декоративными соплодиями. Стебель голый, резко гранистый. Листья дважды перисто-рассеченные с узколинейными немногочисленными дольками, по краям вниз завернутыми и усаженными густо короткими щетинками, проходящими иногда и на среднюю жилку (Рисунок 4).

Чашелистики желтые, до 1,5 см длиной, продолговатые, к основанию суженные в короткую ножку, на верхушке переходящие в короткое, иногда окрашенное остроконечие, снизу по жилкам снабженные короткими щетинками, по отцветении поникающие [136]. Произрастает на Кавказе.

Рисунок 4 - Внешний вид чернушки восточной

Чернушка реснитчатая (Т^щеИа с Шаг ¿я ОС.) чем-то напоминает ч. восточную, но в отличие от нее имеет распластанную крону, прижимающуюся к земле. Желтовато-зеленый цветок сильно опушен ресничками-волосками (Рисунок 5).

Декоративная листовка расположена горизонтально, у ч. восточной вертикально. Произрастает в Украине, Израиле [148].

Чернушка железистая {Nigella grandulifera Ь.) - стебель 20-40 см высотой, маловетвистый, прямой, ребристый. Листья перисто-рассеченные на ланцетно-линейные дольки. Чашелистики мелкие, 8-9 мм длиной, бледно-синие, продолговато-треугольные или обратнояйцевидно-треугольные, наверху заостренные, внизу суженные в короткую ножку. Нектарники очень мелкие, опушенные, верхняя губа ланцетная, короче нижней губы, разделенной на 2 маленькие обратнояйце-видные синие дольки, тупо оканчивающиеся утолщением. Пыльники наверху притуплённые, листовки в числе 5-9, вздутые, на спинке округлые, слегка киле-видные, почти до вершины, сросшиеся с ровным или закрученным носиком.

Рисунок 5 - Внешний вид чернушки реснитчатой

Семена яйцевидно-трехгранные, почти гладкие, только под лупой тонкобугристые [136].

Чернушка чернушковая {Nigella т§е11ая1гит Ь.) достаточно сильно отличается от других видов длинными нитевидными листиками, очень мелкими голубыми цветками с заостренными лепестками (Рисунок 6). Встречается в Украине, Израиле [141].

Чернушка испанская (Nigella Ызратса Ь.) (Рисунок 7). Родина — юг Испании, Северная Африка. Растение однолетнее, быстро разрастающееся. Стебли прямостоячие около 60 см высотой. Листья темно-зеленые, глубокораздельные. Цветки темно-голубые до 6 см в диаметре со слабым ароматом. Плодолистики крупные, темно-красные. Цветет с июня по сентябрь. Плоды похожи на плоды чернушки дамасской, но не окружены оберткой [15].

Рисунок 7 - Внешний вид чернушки испанской

1.2 Химический состав

Наиболее полно изучен химический состав чернушки посевной [79]. Методом ГЖХ изучен состав различных углеводных фракций. Установлены наиболее важные характеристики пектинов: рН 1 % водных растворов, содержание свободных и этерифицированных карбоксильных групп, полигалактуроновой кислоты. В результате изучения хлороформно-метанольной фракции методом ГХ-МС идентифицировано 36 компонентов, помимо жирных кислот, присутствуют ретинолы, токоферолы, ситостерины [61]. Методом гель-электрофореза определены молекулярные массы пептидов, в результате чего зафиксированы низкомолекулярные пептиды от 250 кДа до 11 кДа [63]. Семена ее содержат тимохинон [151], макро-и микроэлементы: кальций, железо, медь, фосфор, калий, магний, марганец, цинк, молибден, хром, селен, стронций, бор и йод, стероиды: кампестерин, ситостерин, стигмастерин, альфа-спинастерин [78, 79]. В семенах содержится липаза [16].

Выделены и охарактеризованы биоактивные пептиды семян чернушки посевной, относящиеся к классу дефензинов и липидпереносящим белкам [41].

Семена чернушки дамасской содержат 40-44 % жирного масла, в состав которого входят ненасыщенные жирные кислоты [53, 187]; до 1,5 % эфирного масла [160, 161, 163, 178, 180], витамин Е, тритерпеновые сапонины [166], кумарины [165], хиноны: тимохинон [184, 185, 186], клетчатку, калий, кальций, марганец, цинк и медь, стероиды: кампестерин, ситостерин, стигмастерин, холестерин, альфа-спинастерин. В стеблях, листьях, цветках и семенах содержится алкалоид да-масценин до 0,3 % [99]. В семенах идентифицировано фенольное соединение — 1-0-(2,4-дигидрокси)фенилацетилглицерол [150].

В семенах чернушки накапливается очень важный фермент липолитическо-го действия - липаза [42, 84]. В кристаллическом нигеллоне, выделенном из растения, содержатся 15 аминокислот, протеины [159]. Фосфолипиды представлены фосфатидилхолином и фосфатидилинозитолом. Семена содержат жирное масло, фермент - липазу, тритерпеновые сапонины, кумарины, тимохинон и следы алкалоидов [99].

Из гидролизата надземной части чернушки полевой выделено три вещества флавоноидной природы и идентифицированы как кемпферол, кверцетин и рамно-цитрин [150].

Химический состав надземной части представлен кумаринами, флавонои-дами: кверцетином, рамноцином и кемпферолом, витамином С.

В траве чернушки посевной и дамасской методом ВЭЖХ идентифицированы пигменты: лютеин, зеаксантин, (3-криптоксантин, а-каротин, [3-каротин, неок-сантин и каротиноиды [177].

Чернушка железистая, как и другие виды, содержит флавоноиды, эфирное масло, сесквитерпеновые углеводороды, стероиды, алкалоиды, витамины, жирное масло и ферменты [87].

1.3 Применение чернушки в традиционной и научной медицине

В народной медицине семена чернушки применяются достаточно разнообразно. Растертая чернушка с виноградным уксусом помогает при болях в суставах [28]. Настой семян чернушки дамасской обладает мочегонным, желчегонным, общеукрепляющим и глистогонным действием [67], способствует увеличению лактации у кормящих матерей, нормализует менструальный цикл, уменьшает метеоризм и нормализует стул при наличии запоров [7]. Отвар семян эффективен при бронхиальной астме, бессоннице, связанной с тревогой, женских заболеваниях, почечнокаменной болезни, гепатите, некоторых кожных заболеваниях [181]. При местном наружном применении масло чернушки используют для косметических масок, компрессов, массажа [14, 112, 158].

Из семян чернушки дамасской получен препарат «Нигедаза», содержащий фермент липолитического действия. «Нигедаза» - препарат, рекомендованный в качестве средства, возмещающего недостающую или полностью отсутствующую липолитическую активность дуоденального сока, обусловленную патологией органов пищеварения (панкреатиты, холецистопанкреатиты, хронические гепатиты, хронические гастриты, энтероколиты и т. д.), а также при возрастном снижении липолитической активности [100, 102, 103]. Следует отметить, что «Нигедаза» яв-

ляется препаратом растительной липазы, используемым как в отечественной, так и в зарубежной медицинской практике [48, 59, 121].

В эксперименте бутанольный экстракт надземной части и семян, эфирное масло проявляют антибактериальную активность [154], спиртовой экстракт семян - эстрогенподобную [152, 157, 164], что связано с наличием фенольных соединений [165]. Мазь на основе жирного масла обладает ранозаживляющим действием [38].

Жирное масло чернушки имеет множество показаний для применения, как высокоэффективное мочегонное, желчегонное, мягкое слабительное, как иммуностимулирующее средство, к тому же оно дает результаты в лечении различных дерматологических заболеваний, связанных с нейрогуморальными и гистамин-ными нарушениями в организме [30, 158, 170].

Благодаря наличию ряда медиаторных веществ, масло чернушки стимулирует секрецию гистаминазы (антагониста биогенных аминов) и выработку проти-вогистаминных антител. К тому же поставка в ткани циклооксигеназы обеспечивает высокий коэффициент антисеротонинной активности. При клинических испытаниях на пациентах с аллергическими заболеваниями (аллергический ринит, бронхиальная астма, атопическая экзема) после лечения, проведенного маслом чернушки в капсулах в дозе 40-80 мг/кг/сут, было выявлено, что субъективные аллергические ощущения уменьшались у всех пациентов [170]. Отмечено снижение содержания триацилглициридов в плазме и повышение уровня липопротеидов высокой плотности, в то время как количество эозинофилов, кортизола и адрено-кортикотропинов не изменилось [166].

Препараты чернушки стимулируют синтез иммуномодуляторов, что позволяет быстро нейтрализовать инфекционную агрессию, и оказывают противовоспалительное действие на местном и системном уровне, устраняя симптомы простуды [158].

Эфирное масло, введенное непосредственно в твердые опухоли, ингибиро-вало их развитие, и даже уменьшило их объем после 30 дней лечения; ацетатные и

этиловые фракции эфирного масла обладают сильным цитотоксическим эффектом против опухолевых клеток [153, 158].

Компонент эфирного масла чернушки - тимохинон имеет антиастматическое, антигистаминное [162], бактерицидное [183], противоопухолевое [156, 173, 179], противосудорожное [171], антиоксидантное, желчегонное действие [184].

Другими не менее важными компонентами эфирного масла чернушки являются тимол и карвакрол, для которых характерны антиоксидантная, антибактериальная и противогрибковая активности благодаря их фенольной структуре. Наряду с другими результатами, антиоксидантная активность тимола полезна для выработки новых препаратов вместо антибиотиков или микостатиков, так как проявление одной молекулой всех трех видов активности - антибактериальной, противогрибковой и антиоксидантной - может дать и синергетические эффекты

[5].

Согласно заключениям американских онкологов, тимохинон блокирует активность воспалительных цитокинов [182].

Дихлорэтановый экстракт обладает противолейшманиозной активностью, что может служить амфоторицину Б альтернативой [155]. Обнаружена и подтверждена антимикробная активность по отношению к грамположительным бактериям, синегнойной палочке и золотистому стафилококку [157].

В России качество сырья чернушки дамасской регламентирует ВФС 421691-87, а Фармакопея Китая - сырье чернушки железистой [22].

1.4 Культивирование и агротехника чернушки дамасской

Чернушка дамасская довольно неприхотливое растение, к почвам нетребовательна, может произрастать на засоленных почвах. Молодые всходы переносят весенние заморозки. Размножается семенами, посев проводят ранней весной широкорядным способом. Норма высева семян 12-15 кг/га, глубина заделки 1,5-2 см. Прорастают они при температуре 5-6° С. Всходы появляются через 14-15 дней. Почву готовят основной вспашкой, ранневесенним боронованием, культивацией и

предпосевным прикатыванием. Уход заключается в прополке сорняков и рыхлении междурядий [97].

Согласно агрорекомендациям при заготовке сырья используют следующую технологию. Надземную часть растения срезают на высоте 5 см от поверхности почвы, когда большинство нижних листьев пожелтело, а листовки приобрели светло-коричневый цвет. Плоды со зрелыми семенами обмолачивают, очищают от посторонних частей и высушивают на чердаках, раскладывая на чистых подстилках тонким слоем, в хорошую погоду - на открытом воздухе под навесом, в тени. Можно сушить в сушилках при температуре не выше 30-35 °С. Иногда допустимо листовки оставлять в чистых помещениях для досушивания, после чего сухие плоды обмолачивают и мелкие семена чернушки отделяют на решетках [43, 142].

Установлен кариотип чернушки дамасской, что позволяет проводить генетический контроль различных сортов этого вида [167, 168, 169].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ГЛАВЕ 1

1. В России в дикорастущем виде встречаются только 3 вида: чернушка дамасская, ч. посевная и ч. полевая.

2. В полной мере изучен химический состав только чернушки посевной, химический состав других видов изучен недостаточно.

3. Чернушка дамасская и посевная используются в народной и научной медицине в качестве лекарственного сырья с широким спектром фармакологической активности, в том числе для лечения социально значимых заболеваний.

4. Обеспечение сырьевой базы возможно за счет введения чернушки дамасской и чернушки посевной в промышленную культуру.

5. Существующая нормативная документация регламентирует только липоли-тическую активность семян чернушки дамасской и не предусматривает оценку по содержанию других действующих веществ.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Маширова, Светлана Юрьевна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Химические исследования чернушки дамасской в большей мере проводились только в отношении ферментов. Хорошо изучены приемы возделывания, интродукции, агротехники, что позволяет ввести чернушку дамасскую в промышленную культуру. Установленная фармакологическая активность позволяет рекомендовать ее для использования в терапии заболеваний, в том числе социально значимых. Поэтому чернушка дамасская является перспективным лекарственным растением для введения в отечественную медицинскую практику и включения в ГФ РФ XII издания.

2. Проведено комплексное фитохимическое изучение с использованием различных физико-химических методов, в результате которых выделены и изучены углеводы, липиды, эфирное масло, пептиды, установлена ферментная активность и макро- и микроэлементный состав.

- Выделены и изучены различные фракции полисахаридных комплексов семян Nigella ¿атазсепа: ВРПС-Х (выход составил от 0,37% до 0,57%), ВРПС-Г (от 0,37% до 0,55%), ПВ (0,38-0,52%) и ГЦ (2,97-3,37%). Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав методом ГЖХ. Определены физико-химические характеристики пектинов.

- Изучен липидный комплекс семян Nigella с!атаБсепа, выращенной в Ставропольском крае, с определением физико-химических показателей жирного масла. Установлен компонентный состав нейтральных липи-дов методом ГЖХ (основными по содержанию являются жирные кислоты: линолевая (47,44 %), олеиновая (25,66 %) и пальмитиновая (14,65 %). Методом ГХ-МС идентифицированы 30 компонентов, среди которых производные ретинола, токоферола и ситостерина.

- Разработана методика экстракции пептидов из семян Nigella с1ата8сепа, на основе которой получены пептидные экстракты и установлен их аминокислотный состав (содержание пептидного комплекса составило от 0,84 до 1,94%). Методами гель-электрофореза и ВЭЖХ определены молекулярные массы пептидов и их количество.

- Изучен химический состав эфирного масла семян Nigella сЗатаясепа, выращенной в Ставропольском крае, методом ГЖХ (содержание составляет до 3 %). Установлены показатели подлинности эфирного масла. Разработана методика определения тимохинона в эфирном масле методом ВЭЖХ с валидационной оценкой.

- Подтверждена липолитическая активность (9,5 ЛЕ/мг) и впервые установлена протеолитическая активность белков семян Nigella с1ата$сепа (17,6 ЕД/мг).

- Методом атомно-абсорбционной спектроскопии определен набор макро- и микроэлементов в семенах Nigella (Латазсепа (27 элементов).

3. По итогам проведенных фитохимических и фармакологических исследований в качестве приоритетных групп биологически активных комплексов и перспективных в отношении создания на их основе фармацевтических субстанций, обладающих фармакологической активностью, определили: ферменты, эфирные и жирные масла.

- Разработаны числовые показатели, определены микробиологическая чистота, содержание тяжелых металлов и радионуклидов, регламентирующие качество сырья «Чернушки дамасской семена».

- На основании морфолого-анатомического исследования уточнены морфологические и выявлены диагностически значимые анатомические признаки, позволяющие проводить диагностику семян Nigella (Яатаясепа цельного сырья и в виде порошка.

4. Проведены фармакологические скрининговые исследования различных субстанций на основе исследуемого сырья, что может являться рекомендацией для получения новых фитопрепаратов, обладающих антибактериальным, ранозаживляющим, гиполипидемическим, гепатозащитным, желчегонным и диуретическим действием. Исследование острой токсичности показало, что данные субстанции относятся к классу практически нетоксичных.

5. На основании проведенных исследований разработаны проекты нормативной документации: ФС «Чернушки дамасской семена», Инструкция по сбору и сушке сырья «Чернушки дамасской семена».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Экспериментально обоснована возможность использования семян Ш-%е\\а ¿¡атазсепа, выращенной в Ставропольском крае, в качестве источников БАС, относящихся к различным классам соединений и обладающих фармакологической активностью. Полученные данные могут быть рекомендованы для использования в деятельности фармацевтических производств в РФ. Перспективы дальнейшей разработки темы диссертационного исследования включают в себя научно-исследовательские направления, заключающиеся в разработке и внедрении новых отечественных препаратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Маширова, Светлана Юрьевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Анализ факторов, определяющих снижение доступности Cs-137 для включения в сельскохозяйственные пищевые цепочки / C.B. Фесенко [и др.] // ДАН РФ. - M., 1995. - Т. 343, № 5. - С. 715-718.

2. Антропогенные воздействия на лекарственные растения / С.А. Листов [и др.] - M.: МЗ СССР, 1990.-106 с.

3. Бадяев, В.В. Охрана окружающей среды при эксплуатации АЭС / В.В. Бадяев, Ю.А. Егоров, C.B. Казаков. - М.: Энергоатомиздат, 1990 - 224 с.

4. Березовская, И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения / И.В. Березовская // Хим.-фармац. журн. - 2003. - Т. 37, № 3. - С. 32-34.

5. Брага, П.К. Тимол: антибактериальная, противогрибковая и антиокси-дантная активность / П.К. Брага // 12-й Всемирный конгресс по репродукции человека 10-13 марта 2005 г. - Венеция, Италия, 2005. -С. 115-117.

6. Бузина, Г.В. Титрометрический метод количественной и качественной характеристики пектиновых веществ / Г.В. Бузина, О.Ф. Иванова, Л.Б. Сосновский // Хлебопекарная и кондитерская пром-сть. - 1965. — № 4. — С. 15-18.

7. Вайс, Р.Д. Фитотерапия. Руководство: пер. с нем. / Р.Д. Вайс, Ф.М. Фин-тельман. - М.: Медицина, 2004. - 552 с.

8. Васюков, В. М. Растения Пензенской области (конспект флоры): Монография / В.М. Васюков. - Пенза: Изд-во Пенз. гос. ун-тета, 2004. - С. 138.

9. Васюков, В.М. Конспект культивируемых растений Пензенской области / В.М. Васюков // Самарская Лука: проблемы региональной и глобальной экологии. - 2010. - Т. 19, № 2. - С. 44-82.

10. Васюков, В.М. Культивируемые растения Пензенской области / В.М. Васюков, P.P. Канеев // Изучение флоры Восточной Европы: достижения и перспективы: тез. докл. Междунар. конф. 23-28 мая 2005 г. -М., СПб.: Товарищество научных изданий КМК, 2005. - С. 16-17.

11. Венгеровский, А.И. Механизм действия гепатопротекторов при токсических поражениях печени / А.И. Венгеровский, A.C. Саратиков // Фарма-кол. и токсикол. - 1988. - Т. 51, № 1. - С. 89-92.

12. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. - М.: Наука, 1972. - 252 с.

13. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестник Российской академии медицинских наук. - М: Медицина, 1998.-Вып. 7.-С. 43-51.

14. Войткевич, С.А. Эфирные масла для парфюмерии и ароматерапии / С.А. Войткевич. - М.: Пищ. пром-сть, 2001. - 283 с.

15. Вульф, Е.В. Мировые ресурсы полезных растений (Пищевые, кормовые, технические, лекарственные и др.): справочник / Е.В. Вульф, О.Ф. Малеева. - Л.: Наука, 1969. - 569 с.

16. Выделение и изучение фермента липазы из семян чернушки посевной / Т.В. Орловская [и др.] // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): материалы... - Пятигорск, 2002.-С. 18-19.

17. Гепатозащитное действие гранул сухого экстракта горечавника бородатого / С.М. Николаев [и др.] // Эксперим. и клин, фармакол. - 2001. - Т. 64, № 1.-С. 49-52.

18. ГОСТ 20264.2-88. Препараты ферментные. Методы определения проте-олитической активности. - Введ. 1988-02-08. - М.: Стандартинформ, 1988.-15 с.

19. ГОСТ 30178-96. Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов. - Введ. 1998-01-01. - М.: Стандартинформ, 2010. - 10 с.

20. ГОСТ 5479-64. Масла растительные и натуральные жирные кислоты. Метод определения неомыляемых веществ. - Введ. 1965-07-01. - Минск: Межгос. совет по стандартизации, метрологии и сертификации, 1966. -С. 42-44.

21. ГОСТ Р 53434-2009. Принципы надлежащей лабораторной практики. -Введ. 2010-03-01. -М.: Стандартинформ, 2010. - 16 с.

22. Государственная Фармакопея КНР (на английском языке) - Пекин, 2005.-668 с.

23. Государственная фармакопея Российской Федерации. - 12-е изд. - М.: Науч. центр экспертизы средств мед. применения, 2007. - Ч. 1. - 704 с.

24. Государственная фармакопея Российской Федерации. - 12-е изд. - М.: Науч. центр экспертизы средств мед. применения, 2010. - Ч. 2. - 678 с.

25. Государственная фармакопея СССР. - 10-е изд. - М.: Медгиз, 1968. -1081 с.

26. Государственная фармакопея СССР: в 2 вып. - 11-е изд. - М.: Медицина, 1987-1989.-2 вып.

27. Гравель, И.В. Региональные проблемы экологической оценки лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов на примере Алтайского края: дис. ... докт. фармац. наук: 15.00.02 / Гравель И. В. - Москва, 2005. -395 с.

I

*

28. Дикорастущие полезные растения России / отв. ред. A.JI. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. - СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. - 663 с.

29. Дополнения и изменения № 5 к санитарно-эпидемическим правилам СанПин 2.3.3 1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» СанПин 2.3.2.2227-07. - М., 2007. -261 с.

30. Ефремова, М.П. Изучение влияния жирных масел чернушки дамасской и посевной на ЦНС и актопротекторный эффект в эксперименте / М.П. Ефремова, С.Ю. Маширова, A.B. Сергеенко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2012. - Вып. 67. - С. 328-329.

31. Ефремова, М.П. Экспериментальные исследования общетоксических свойств жирных масел чернушки дамасской и посевной / Ефремова М.П., Сергиенко A.B., Маширова С.Ю. // Экология и здоровье: сб. науч. тр. □ Ессентуки.-2010.-Вып. 14. - С. 127-131.

32. Жбанков, Р.Г. Инфракрасные спектры и структура углеводов / Р.Г. Жбанков. - Минск: Наука и техника, 1972. - 456 с.

33. Зависимость колориметрической реакции галактуроновой кислоты и нейтральных моносахаридов с карбазолом от условий ее проведения / М.П. Филиппов [и др.] // Изв. АН МССР: Сер. биол. и хим. наук. - 1976. - № 1. - С. 75-86.

34. Зайцев, Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике / Г.Н. Зайцев. - М.: Наука, 1984. - 424 с.

35. Защитное действие комбинации эссенциале диэтилникотинамидом на монооксигеназы и глюкуранил-, глутатионтрансферазы печени крыс при тетрахлорметановом поражении / М.И. Бушма [и др.] // Эксперим. и клин, фармакол. - 1994. - Т. 57, № 4. - С. 62-63.

36. Зенкевич, И.Г. Способ получения метиловых эфиров для газохромато-графического определения жирных кислот в составе триглицеридов масел растений / И.Г. Зенкевич, А.И. Пименов, Н.М. Станкевич // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы 7 Междунар. съезда 3-5 июля 2003 г. - Спб., 2003.-С. 339-344.

37. Изменения морфофункционального состояния печени крыс при острой интоксикации тетрохлорметаном и их коррекция антигипоксантами, ан-тиоксидантами и ангиопротекторами / А.Ю. Дубовая [и др.] // Эксперим. и клин, фармакол. - 1996. - Т. 59, № 4. - С. 51-54.

38. Изучение антибактериального и ранозаживляющего действия чернушки посевной / Б.А. Узденова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг

новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2006. — Вып. 61.-С. 392-394.

39. Изучение химического состава некоторых пищевых растений, культивируемых в Ставропольском крае / В.А. Челомбитько [и др.] // Вопросы биол., мед. и фармац. химии. - 2012. - № 4. - С. 44-47.

40. Использование нингидриновой реакции для количественного определения а-аминокислот в различных объектах: метод, рекомендации / A.B. Симонян [и др.]. - Волгоград, 2007. - 106 с.

41. Исследование биоактивных пептидов из некоторых видов растений / Т.В. Орловская [и др.] // Химия природ, соединений. - 2010. - № 2. - С. 276-277.

42. Исследование топографии активного центра липазы из Nigella damascena L. (чернушка дамасская) / И.В. Гмошинский [и др.] // Биоорган. химия. - 1982. - Т. 8, № 6. - С. 822-829.

43. Итоги интродукции культурных растений в Главном ботаническом саду / Отв. ред. Б.Н. Головкин. - М.: Наука, 1988. - 304 с.

44. Каухова, И.Е. Новая методика получения растительных препаратов / И.Е. Каухова // Фармация. - 2006. - № 1. - С. 37-39.

45. Клепцова, И.А. Эколого-гигиеническая оценка техногенного загрязнения лекарственного растительного сырья (на примере Томского района): дис. ... канд. мед. наук: 14.00.07 / Клепцова И.А. - Томск, 2001. - 118 с.

46. Конь, И.Я. Углеводы: новые взгляды на их физиологические функции и роль в питании / И.Я. Конь // Вопр. дет. диетол. - 2005. - Т. 3, № 1. - С. 18-20.

47. Копылова, Е. Универсальный солдат. Обзор розничного рынка ферментных препаратов за 9 месяцев 2008 г. / Е. Копылова // Фармацевтический вестник. - 2009. - № 2. - С. 55.

48. Корчагина, JI.H. Липолитические ферменты для медицинских целей, выпускаемые в СССР и за рубежом / Л.Н. Корчагина, В.Ф. Рудюк, В.Т. Чернобай // Получение и применение ферментов витаминов, аминокислот, премиксов: обзор информ. / ЦБНТИ медбиопром. - 1987. — № 1. — 26 с.

49. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.И. Кочетков. - М.: Химия, 1970. - 378 с.

50. Кочетов, Г.А. Практическое руководство по энзимологии / Г.А. Кочетов. -М., 1980.-С. 57.

51. Криштанова, H.A. Перспективы использования растительных полисахаридов в качестве лечебных и лечебно-профилактических средств / H.A.

Криштанова // Вестн. ВГУ. Сер.: Химия, Биология, Фармация. - 2005. -№ 1.-С. 212-221.

52. Кузьмина, A.A. Разработка фитопрепаратов для профилактики и лечения заболеваний органов дыхания у детей: автореф. дис. ... канд. фармац. наук: 15.00.02 и 14.00.25 / Кузьмина A.A. - СПб., 2000. - 29 с.

53. Кулакова, Н. О растительных маслах нового поколения в нашем питании / Н. Кулакова, М.М. Гаппаров, Е.В. Викторова // Масложировая пром-сть. -2005.-№ 1.-С. 4-6.

54. Лабораторная диагностика нарушений обмена липидов. Пособие для врачей / В.В. Долгов [и др.] - Тверь.: Информационно-издательская фирма «Губернская медицина», 1999. - 55 с.

55. Лекарственные растения Государственной фармакопеи / Под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. -М.: ООО «АНМИ», 2003. - С. 344-346.

56. Литвинчук, М.Д. Точный и быстрый метод оценки активности желчегонных средств на крысах / М.Д. Литвинчук, З.И. Новосилец // Бюл. экс-перим. биологии и медицины. - 1980. - № 6. - С. 750-752.

57. Лобаева, Т.А. Изучение физико-химических характеристик, состава и биологической активности фитопрепаратов на основе жирных растительных масел: дис. ... канд. фармац. наук: 15.00.02 / Лобаева Т.А. -М., 2002. - 197 с.

58. Масленников, A.B. Новые и редкие виды для флоры Ульяновской области / A.B. Масленников, Н.С. Раков // Биологические науки. - 1992. - № 8.-С. 46-52.

59. Маслова, Н.Ф. Сравнительная оценка специфического действия и ряда параметров фармакокинетики орнизима-Д, нигедазы и оразы / Н.Ф. Маслова, Т.В. Бомко // Хим.-фармац. журн. - 1995. - № 1. - С. 8-10.

60. Маширова, С.Ю. Изучение гепатозащитной и желчегонной активности фитосубстанций чернушки дамасской / С.Ю. Маширова // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - № 2. - URL: www.science-education.ru/108-8588.

61. Маширова, С.Ю. Изучение компонентного состава липидов семян чернушки посевной и чернушки дамасской / С. Ю. Маширова, Т.В. Орловская // Научные ведомости Белгородского гос. ун-та. Сер.: Медицина. Фармация». - 2012. - № 4 (123). - Вып. 17. - С. 223-226.

62. Маширова, С.Ю. Изучение углеводов Nigella sativa и Nigella damascena / С.Ю. Маширова, Т.В. Орловская, Р.К. Рахманбердыева // Химия природ. соединений. - 2012. - № 3. - С. 414-415.

63. Маширова, С.Ю. Исследование пептидов семян чернушки посевной и чернушки дамасской / С. Ю. Маширова, Т.В. Орловская // Разработка, ис-

А

I

следование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2012. - Вып. 67. - С. 83-86.

64. Маширова, С.Ю. Товароведческие показатели семян чернушки посевной и чернушки дамасской / С. Ю. Маширова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2012.-Вып. 67.-С. 79-81.

65. Маширова, С.Ю. Элементный состав семян чернушки посевной и чернушки дамасской / С. Ю. Маширова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2012.-Вып. 67.-С. 81-83.

66. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. - 15-е изд. перераб. и доп. - М.: Новая волна, 2005. - 1206 с.

67. Мелик-Гусейнов, В.В. Растения народной медицины флоры России и сопредельных государств. Атлас: монография /В.В. Мелик-Гусейнов. -Пятигорск: ПятГФА, 2005. - 521 с.

68. Методические рекомендации по расширению номенклатуры отечественных официнальных лекарственных растений / под общ. ред. Т.Л. Киселевой. - М.: Изд-во Проф. ассоциации натуротерапевтов, 2009. - 88 с.

69. Методы контроля качества эфирных масел / Н.В. Сегуру [и др.] // Фармация. - 2005.-№ 3. - С. 3-5.

70. Методы химии углеводов: пер. с англ. / под ред. Н.К. Кочеткова. - М.: Мир, 1967.-512 с.

71. Моисеева, Г.Ф. Иммуностимулирующие полисахариды высших растений / Г.Ф. Моисеева, В.Г. Беликов // Фармация. - 1992. - № 3. - С. 79-84.

72. Молчан, Н.В. Определение эфирного масла в лекарственном растительном сырье / Н.В. Молчан, И.П. Рудакова, И.А. Самылина // Фармация. -2009.-№5.-С. 3-4.

73. О возможности использования лекарственных растений для лечения и профилактики микроэлементозов и патологических состояний / М.Я. Ловкова [и др.] // Микроэлементы в медицине. - 2005. - Т.6, №4. - С.3-9.

74. Определение содержания тяжелых металлов в лекарственном растительном сырье / И.В. Гравель [и др.] // Фармация. - 2008. - № 7. - С. 3-5.

75. Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье / А.А. Сорокина [и др.] // Фармация. - 2010. - № 3. - С. 3-4.

76. Орловская, Т.В. Изучение аминокислотного состава семян клоповника посевного / Т.В. Орловская // Дальневосточный мед. журн. - 2006. - № 2.-С. 73-74.

77. Орловская, T.B. Морфолого-анатомическое изучение семян чернушки посевной (Nigella sativa L.) и чернушки дамасской (Nigella damascena L.) / T.B. Орловская, С.Ю. Маширова // Традиционная медицина. - 2012. -№ 3. - С. 54-57.

78. Орловская, Т.В. Новый взгляд на пищевые растения, как перспективные источники лекарственных средств / Т.В. Орловская, М.В. Гаврилин, В.А. Челомбитько. - Пятигорск: РИА «КМВ», 2011. - 240 с.

79. Орловская, Т.В. Фармакогностическое исследование некоторых культивируемых растений с целью расширения их использования в фармации: дис. ... д-ра фармац. наук / Орловская Т.В. - Пятигорск, 2011. - 374 с.

80. ОФС 42-0011-03 Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье. Стронций-90, цезий-137. Отбор проб, анализ, оценка результатов. - М., 2003. - 27 с.

81. ОФС 42-0013-03 «Правила приемки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб» // Фармация. - 2003. - № 6. - С. 3-8.

82. Охлобыстин, A.B. Применение пищеварительных ферментов при заболеваниях поджелудочной железы / A.B. Охлобыстин, Е.А. Каленская // Русский медицинский журнал. - 2012. - № 12. - С. 615-620.

83. Оценка безопасности лекарственного растительного сырья в БАДах и фитопрепаратах / В.А. Тутульян [и др.] // Фармация. - 2009. - № 1. — С. 3-5.

84. Пат. 1118673 Российская Федерация, С12 № 9/18 Способ получения ферментного препарата нигедазы / В.Ф. Рудюк, JI.H. Корчагина, В.Т. Чернобай. -№ 3526693; заявл. 03.12.82; опубл. 15.10.84 - 6 с.

85. Пат. 2403566 Российская Федерация, С2 Способ количественного определения восстанавливающих Сахаров / Н.Ш. Кайшева, А.Ш. Кайшев, Т.В. Орловская (РФ). - № 2008149186/21; заявл. 12.12.08; опубл. 10.11.10, Бюл. № 31. - 14 с.

86. Полисахариды в онкологии / Е.П. Зуева [и др.]. - Томск: Печатная мануфактура, 2010.- 108 с.

87. Попова, Н.В. Лекарственные растения мировой флоры / Н.В. Попова, В.И. Литвиненко. - Харьков: СПДФЛ Мосякин В.Н., 2008. - 510 с.

88. Поступление Cs-137 и Sr-90 в растения в зависимости от форм выпавших радионуклидов и их поведения в луговых ценозах / А.Н. Архипов [и др.] // Сб. тез. III съезда по радиационным исследованиям 15-17 окт. 1997 г.-М., 1997.-С. 430.

89. Потанина, О.Г. Оценка доброкачественности лекарственного растительного сырья с учетом диагностически значимых признаков / О.Г. Потанина, И.А. Самылина // Фармация. - 2003. - № 4. - С. 12-14.

4

«1 I

90. Потанина, О.Г. Совершенствование стандартизации и контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных форм из него на основе микроскопического метода исследования: дис. ... д-ра фармац. наук / Потанина О.Г. - М., 2003. - Т. 1. - 432 с.

91. Потанина, О.Г. Совершенствование стандартизации и контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных форм из него на основе микроскопического метода исследования: дис. ... д-ра фармац. наук / О.Г. Потанина. - М., 2003. - Т. 2. - 217 с.

92. Приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.03 «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных»

93. Применение метода ВЭЖХ в фармацевтическом анализе лекарственных средств пептидной природы / Д.М. Каширин [и др.] // Хим.-фармац. журн. - 2000. - Т. 34, № 3. - С. 45-47.

94. Применение метода УФ-спектрофотометрии для определения объемной доли эфирного масла в ароматных спиртах / И.М. Абрамова // Пищевая промышленность: наука и технологии. - 2011. - № 1 (11). - С. 72-75.

95. Пристер, Б.С. Основные факторы, определяющие поведение радионуклидов в системе почва-растение / Б.С. Пристер, JI.B. Перепелятникова, В.И. Дугинов // Пробл. с.-х. радиологии. - Киев, 1992. - Вып. 2. - С. 108-117.

96. Проблемы нормирования тяжелых металлов в лекарственном растительном сырье / О.И. Терешкина [и др.] // Фармация. - 2010. - № 2. - С. 7-11.

97. Раков, Н.С. Культивируемые растения Ульяновской области / Н.С. Раков, C.B. Саксонов // Фиторазнообразие восточной Европы. - 2007. - № 4.-С. 64-108.

98. Растительные пептиды - перспективный источник создания лекарственных средств / A.B. Рогов [и др.] // Фармация. - 2003. - № 6. - С. 41-43.

99. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность / Отв. ред. A.JI. Бу-данцев. - СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2008. - Т.1 Семейства Magnoliaceae - Juglandaceae, Ulmaceae, Moraceae, Cannaba-ceae, Urticaceae. - C. 49-50.

100. Регистр лекарственных средств России PJIC. Энциклопедия лекарств. -17-й вып. / под ред. Г.Л. Вышковского. - М.: «РЛС-2009», 2008. - 1234 с.

101. Рудаков, О.Б. Развитие метода интерпретации хроматограмм при идентификации растительных масел / О.Б. Рудаков // Химия раст. сырья. -2001.-№4.-С. 79.

102. Рудюк, В.Ф. Влияние секретов пищеварительного аппарата на активность липазы семян Nigella damascena L. / В.Ф. Рудюк, Л.H. Корчагин // Хим.-фармац. журн. - 1981. - Т.15, № 2. - С. 59-62.

103. Рудюк, В.Ф. Изучение некоторых свойств липазы из семян Nigella / В.Ф. Рудюк, JI.H. Корчагина // Химия природ, соединений. - 1975. - № 5. - С. 645-648.

104. Руководство ICH «Валидация аналитических методик. Содержание и методология» // Фармация. - 2008. - № 4. - С. 3-10.

105. Руководство по экспериментальному (доклиническому изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., пере-раб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.

106. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П. Фисенко. - М.: Ремедиум, 2000.-С. 114-119.

107. Самылина, И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация / И.А. Самылина, И.А. Баландина // Фармация.

- 2004. -№ 2. - С. 39-41.

108. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учеб. пособие: в 3 т. / И.А. Самылина, О.Г. Аносова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - Т. 1. - 192 с.'

109. СанПин 2.3.2 1078-01 «Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов» от 14.11.2001/22.03.02. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.service-holod.ru/SanPiN2/SanPiN_2_3_2_1078_01.htm. - Загл. с экрана.

110. СанПин 2.3.2. 1078-01. Продовольственное сырье и пищевые продукты. Гигиенические требования безопасности пищевой ценности пищевых продуктов. - М.: ФГУП «ИнтерСЭН», 2002. - 168 с.

111. Саратиков, A.C. Эффективность ферментиндуцирующих средств при экспериментальном поражении печени тетрахлорметаном / A.C. Саратиков, Т.П. Новоженов, А.И. Венгеровский // Эксперим. и клин, фармакол.

- 2003. - Т. 66, № 4. - С. 47-49.

112. Селлар, В. Энциклопедия эфирных масел / В. Селлар. - М.: ФАИР-ПРЕСС, 2004. - 400 с.

113. Сентебова, H.A. Предложения по унификации методов определения триглицеридов в сыворотке крови / H.A. Сентебова, Н.В. Салицкая // Унификация лабораторных методов исследований. - М., 1978. - Вып. 8. -С. 67-75.

114. Сереброва, СЮ. Перспективы применения ферментных препаратов в гастроэнтерологии / С.Ю. Сереброва // Болезни органов пищеварения. -2066.-Т. 8, № 1. - С. 23-27.

115. Сернов, J1.H. Элементы экспериментальной фармакологии / JI.H. Сер-нов, В.В. Гацура. - М.: Медицина, 2000. - 352 с.

i ч 'i

116. Скальный, A.B. Биоэлементы в медицине / A.B. Скальный, И.А. Рудаков. - М.: ОНИКС 21 век: Мир, 2004. - 276 с.

117. Смирнова, Ю.А. Новые виды лекарственных растений для отечественной фармакопеи / Ю.А. Смирнова, Т.Д. Киселева // Фармация. - 2009. -№7.-С. 6-7.

118. Современные методы анализа и оборудование в санитарно-гигиенических исследованиях (научно-практическое руководство) / под ред. Г.Г. Онищенко, Н.В. Шестопалова. - М.: ФГУП Интерсэн, 1999. -496 с.

119. Сорные, лекарственные и ядовитые растения / под ред. В.М. Пенчукова,

A.И. Войковского. -М.: МААО; Ставрополь: АГРУС, 2006. - 264 с.

120. Способы выделения кислоторастворимых полипептидов / A.B. Рогов [и др.] // Фармация. - 2004. - № 2. - С. 46-48.

121. Справочник ВИДАЛЬ «Лекарственные препараты в России». - М.: Аст-раФармСервис, 2007. - 1632 с.

122. Сравнительная эффективность пектиновых энтерособентов в комплексной терапии язвенной болезни / Я.Ю. Макаренко [и др.] // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы V Междунар. съезда. - СПб., 2001. - С. 416-418.

123. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Моносахариды) / Б.Н. Степаненко. - М.: Высш. шк., 1977. - 222 с.

124. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко. - М.: Высш. шк., 1978. - 256 с.

125. Степычева, Н.В. Купажированные растительные масла с оптимизированным жирно-кислотным составом / Н.В. Степычева, A.A. Фудько // Химия раст. сырья. - 2011. - № 2. - С. 27-33.

126. Строев, Е.А. Практикум по биологической химии / Строев Е.А., Макарова В .Г. - М.: Высш. шк., 1986. - 127 с.

127. Тахтаджян, А.Л. Система магнолиофитов / А.Л. Тахтаджян. - Л.: Наука, 1987.-439 с.

128. Титов, В.Н. Жирные кислоты. Физическая химия, биология и медицина /

B.Н. Титов, Д.М. Лисицын. - М. - Тверь: Триада, 2006. - 672 с.

129. Требования к фармакопейной статье «Жирные масла» / Н.В. Сегуру [и др.] // Фармация. - 2007. - № 8. - С. 3-5.

130. Тутельян, В.А. Физиологическая роль коротких пептидов в питании / В.А. Тутельян, В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин // Бюл. эксперим. биологии и медицины.-2003.-Т. 135, № 1.-С. 4-10.

г

А

131. Фетисова, А.Н. Особенности современных способов получения жирного масла из лекарственного растительного сырья и перспективные технологии / А.Н. Фетисова, В.А. Попков, А.Н. Пихоцкий // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы 7 Междунар. съезда 3-5 июля 2003 г. - Спб., 2003. -С. 93-98.

132. Филиппов, М.П. Доступность гидроксильных групп пектиновых веществ для дейтерирования / М.П. Филиппов, М.С. Комисаренко // Химия природ, соединений. - 1987. -№ 3.-343-348.

133. Филиппов, М.П. ИК-спектроскопическое определение карбоксильных групп в пектиновых веществах / М.П. Филиппов // Журн. аналит. химии. - 1973. - Т. 28, вып. 5. - С. 30-31.

134. Филиппов, М.П. Инфракрасные спектры пектиновых веществ / М.П. Филиппов // Методы анализа пищевых продуктов (Проблемы аналитической химии). - М.: Наука, 1988. - Т. 8. - С. 198-216.

135. Филиппов, М.П. Природа связи в растительной ткани, строение и инфракрасные спектры как основа классификации пектиновых веществ: автореф. ... дис. д-ра хим. наук / М.П. Филиппов. - Одесса, 1990. - 38 с.

136. Флора СССР: в 30-ти томах / под ред. B.JI. Комарова. - Д.: Издательство Академии Наук СССР, 2001. - Т. 7. - С. 62-72.

137. Хавезов, И. Атомно-адсорбционный анализ: пер. с болг. / И. Хавезов, Д. Палев; под ред. С.З. Яковлевой. - Д.: Химия, 1983. - 144 с.

138. Характеристика гепатопротекторных лекарственных средств, представленных на фармацевтическом рынке России / В.А. Егоров [и др.] // Фармация. - 1999. - № 6. - С. 23- 25.

139. Химия углеводов / Н.К. Кочетков [и др.]. - М.: Химия, 1967. - 672 с.

140. Хроматография на бумаге / под ред. И.М. Хайца, К. Мацека. - М.: Изд-во иностран. лит., 1962. - 851 с.

141. Черепанов, С.К. Сосудистые растения России и сопредельных государств (в пределах бывшего СССР) / С.К. Черепанов. - СПб.: Мир и семья, 1995.-992 с.

142. Черных, И.В. Интродукция пряно-ароматических и эфиромасличных растений в условиях лесостепной зоны Южного Предуралья и их использование в экопротективной помощи населению: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.05 / Черных И.В. - Уфа, 2004. - 15 с.

143. Чилимов, А.И. Распределение и динамика Cs-137 в тканях древесных растений / Чилимов А.И., Богачев A.B. // Радиационная биология. -2000. -№40.-С. 231.

144. Шемерянкина, Т.Б. Требования к стандартизации лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов на его основе / Т.Б. Шемерянкина, Т.А. Сокольская, Т.Д. Даргаева // Вопр. биол., мед. и фармац. химии. -2010.-№3.-С. 9-12.

145. Шиков, А.Н. Растительные масла и масляные экстракты: технология, стандартизация, свойства / А.Н. Шиков, В.Г. Макаров, В.Е. Рыженков. -М.: Рус. врач, 2004. - 264 с.

146. Широкова, И. Пептиды: здоровый взгляд в будущее / И. Широкова // Ремедиум. - 2008. - № 6. - С. 62-63.

147. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: учеб. пособие / под ред. Т.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. - 2-е изд., перераб. и доп. - СПб.: Спец. лит., 2010. - 407 с.

148. Энциклопедический словарь лекарственных, эфирномасличных и ядовитых растений. -М.: Изд-во сельхоз. лит., 1951. - С. 188.

149. Энциклопедия лекарственных растений. - М.: Ридерс Дайджест, 2004. -351 с.

150. A new phenolic compound from Nigella damascena seeds / G. Fico [et al.] // Fitoterapia. - Vol. 72, № 4. - P. 462-463.

151. Aboul-Enein, Y.H. Simple HPLC method for the determination of thymoqui-none in black seed oil / Y.H. Aboul-Enein, I.L. Aboul-Basha // Liquid Chromatography. - 1995. -№ 5. - P. 895-902.

152. Agradi, E. Estrogenic activity of Nigella damascena extracts, evaluated using a recombinant yeast screen / E. Agradi [et al.] // Phytotherapy Research. -2002. - Vol. 16, № 5. - P. 414-416.

153. Amr, E. E. Anti-cancer properties of Nigella spp. essential oils and their major constituents, thymoquinone and [3-elemene / Amr E. Edris // Current Clinical Pharmacology. - 2009. - Vol. 4. -P. 43-46.

154. Antibacterial Activity Screening of Nigella L. Species Growing in Turkey / G. Kokdil [et al.] // J. Fac. Pharm. Ankara. - 2005. - Vol. 34, № 3. - P. 183190.

155. Anti-leishmaniasis activity of some extracts isolated from Nigella damascena / C.C. Toma [et al.] // Planter medical. - 2007. - № 1. - P. 285.

156. Badary, O.A. Inhibitory effect of thymoquinone against 20-methylchlolanthrene-induced fibrosarcoma tumorigenesis. / O.A. Badary, A.M. Gamal El-din // Cancer Detect. Prev. - 2001. - Vol. 25, № 4. - P. 362368.

157. Biological screening of Nigella damascena for antimicrobial and molluscicid-al activities / G. Fico [et al.] // Phytother. Res. - 2004. - Vol. 18, № 6. - P. 68-70.

158. Blunden, G. Pharmacological and toxicological properties of Nigella damascena / G. Blunden // Phytother res. - 2003. - № 4. - P. 299-305.

159. Brown, R.H. The amino acid sequence of cytochrome C from Nigella damas-cena L. (Love-in-a-Mist) / R.H. Brown, D. Boulter // Biochem J. - 1973. -Vol. 133.-P. 251-254.

160. Characterization of Nigella sativa L. essential oil-loaded solid lipid nanopar-ticles / Nagi A. ALHaj [et al.] // American Journal of Pharmacology and Toxicology. - 2010.-Vol. 5, № l.-P. 52-57.

161. D'Antuono, L. Seed yield, yield components, oil content and essential oil on-tent and composition of Nigella sativa L. and Nigella damascena L. / L. D'Antuono, F.A. Moretti, A.F.S. Lovato // Indian. Crops Prod. - 2002. -Vol. 15.-P. 59-69.

162. Effect of Nigella sativa (black seed) on subjective feeling in patients with allergic diseases / U. Kalus [et al.] // Phytother. Res. - 2003. - Vol. 17, № 10. -P. 1209-1214.

163. Essential oils of Nigella sativa L. and Nigella damascena L. seed / A.V. Moretti [et al.] // Journal of essential oil research: Jeor. - 2004. - № 5. - P. 1314.

164. Estrogenic activity of Nigella damascena extracts, evaluated using a recombinant yeast screen / E.Agradi [et al.] // Phytotherapy research. - 2002. - № 5. -P. 6.

165. Estrogenic activity of phenolic compounds from Nigella damascena evaluated using a recombinant yeast screen / E. Agradi [et al.] // Plantamedica. - 2001. - № 6. - P. 5.

166. Four new triterpene glycosides from Nigella damascena / H.D. Yoshimitsu [et al.] // Chemical and pharmaceutical bulleting. - 2007. - № 3. - P.91.

167. Ghosh, A. A report on gamma-rays induced paracentric inversionin Nigella damascena L. (Love-in-a-mist) involving marker telocentrics / A. Ghosh, A.K. Datta // Cell and Chrom. Res. - 2004. - Vol. 24. - P. 7-11.

168. Ghosh, A. Cytogenetical studies on the induced viable translocation lines of Nigella damascena L. (Love-in-a-mist) / A. Ghosh, A.K. Datta // Cell and Chrom. Res.-2003.-Vol. 23.-P. 5-10.

169. Ghosh, A. Gamma-rays induced reciprocal translocation in Nigella damascena L. (Love-in-a-mist) / A. Ghosh, A.K. Datta // Caryologia. - 2006. - Vol. 59, № l.-P. 31-36.

170. Herbal treatment of allergic rhinitis: the use of Nigella damascena / S.K. Ni-kakhlang [et al.] // Am. J. Otolaryngol. - 2010. - № 10. - P. 23.

a1

4

171. Hosseinzadeh, H. Related Anticonvulsant effects of thymoquinone, the major constituent of Nigella sativa seeds, in mice / H. Hosseinzadeh, S. Parvardeh // Phytother. Res. - 2004. - Vol. 11, № l. _ p. 56-64.

172. Isolation and characterization of plant cell walls and cell-wall components / W.S. York [et al.] // Meth. Enzymol. - 1985. - Vol. 118. - P. 3-40.

173. Khan, N. Nigella sativa ameliorates potassium bromate induced early events of carcinogenesis: diminution of oxidative stress / N. Khan, S. Sharma, S. Sultana // Experimental Toxicology. - 2003. - Vol. 22. - P. 193-203.

174. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage / U.K. Laemmli // Nature. - 1970. -Vol. 27, № 259. -680 p.

175. Miller, G.L. Protein determination for barge numbers of samples / G.L. Miller //Anal. Chem. - 1959. - Vol. 35, № 5. - P. 964-966.

176. Ohkawa, H. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thyobarbituric acid reaction / H. Ohkawa, N. Ochihi, K. Vagi // Anal. Biochem. - 1979. - Vol. 95, №2.-P. 351-358.

177. Pigments from the aerial parts of Nigella damascena L. and Nigella sativa L. species (Ranunculaceae) / Toma Claudia-Crina [et al.] // 4th conference on medicinal and aromatic plants of south-east European countries: 28th — 31st of may 2006. - Ia§i, Romania, 2006. - P. 80-81.

178. Rchid, H. Volatile components of Nigella damascena L. and Nigella sativa L. seeds / H. Rchid [et al.] // J. of Essential Oil Research. - 2004. - Vol. 16, № 6.-P. 585-587.

179. Salim, E. Chemopreventive potential of volatile oil from black cumin (Nigella sativa L.) seeds against rat colon carcinogenesis / E. Salim, S. Fukushima // Nutr. Cancer. - 2003. - Vol. 45, № 2. - P. 195-202.

180. Seed yield, yield components, oil content and essential oil content and composition of Nigella sativa L. and Nigella damascena L. /D' Filippo [et al.] // Indust Crops Prod. - 2002. - Vol. 15. - P. 59- 69.

181. Tariq, M.J. Nigella damascena L. seeds: folklore treatment in modern day medicine / M.J. Tariq, J.K. Saudi // Gastroenterol. - 2008. - № 14. - P. 105106.

182. The antitumor activity of thymoquinone and thymohydroquinone in vitro and in vivo / S. Ivankovicl [et al.] // Exp. Oncol. - 2006. - Vol. 28, № 3. - P. 220-224.

183. The in vivo antifungal activity of the aqueous extract from Nigella sativa seeds / M.K. Ashfaq [et al.] // Phytother. Res. - 2003. - Vol. 17, № 2. - P. 183-186.

184. Thymoquinone protects against carbon tetracholide hepatotoxicity in mice via an antioxidant / M.N. Nagi [et al.] // Biochem. Mol. Biol. Int. - 1999. - Vol. 47, № l.-P. 153-159.

185. Thymoquinone reduces hepatic glucose production in diabetic hamsters / K.M. Fararh [et al.] // Research in veterinary science. - 2005. - № 3. - P. 219-223.

186. TLC assay of thymoquinone in black seed oil and identification of dithymo-quinone and thymol / L. AbouBasha [et al.] // Journal of liquid chromatography & related technologies. - 1995. - Vol. 18, № l.-P. 105-115.

187. Tulukcu, E. A comparative study on fatty acid composition of black cumin obtained from different regions of Turkey, Iran and Syria / E. Tulukcu // African Journal of Agricultural Research. - 2011. - Vol. 6, № 4. - P. 892895.

188. Uchiyama, M. Determination of Malonaldehyde Precursor in Tissues by Thi-obarbituric Acid Test / M. Uchiyama, M. Mihara // Anal. Biochem. - 1978. -Vol. 94, №86.-P. 271-278.