Фармакогностическое изучение энотеры двухлетней Oenothera biennis L. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Чернова, Елена Владимировна

• Чернова, Елена Владимировна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Чернова, Елена Владимировна

2.1 Объект исследования........................................................................36

2.2 Методы исследования.......................................................................36

2.2.1 Биологические методы............................................................36

2.2.2 Методы обнаружения и идентификации биологически активных соединений (БАС)................................................................................39

2.2.2.1 Приготовление водных и спиртовых извлечений...............................39

2.2.2.2 Фенольные соединения...............................................................39

2.2.2.3 Дубильные вещества..................................................................41

2.2.2.4 Полисахариды...........................................................................41

2.2.2.5 Аминокислоты..........................................................................42

2.2.2.6 Липиды....................................................................................42

2.2.3 Хроматографические методы....................................................47

2.2.3.1 Методы бумажной и тонкослойной хроматографии.............................47

2.2.3.2 Метод колоночной хроматографии.................................................47

2.2.3.3 Метод препаративной тонкослойной хроматографии...........................48

2.2.3.4 Метод газо-жидкостной хроматографии...........................................48

2.2.3.5 Метод жидкостной хроматографии.................................................48

2.2.3.6 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии.....................48

2.2.4 Спектральные методы............................................................50

2.2.4.1 Метод УФ-спектрофотометрии......................................................50

2.2.4.2 Метод масс-спектроскопии..........................................................52

2.2.4.3 ИК-спектральный анализ.............................................................53

2.2.4.4 Эмиссионный спектральный анализ................................................53

2.2.5 Титриметрические методы.......................................................53

2.2.6 Гравиметрические методы.......................................................54

2.2.7 Фармакологические методы....................................................54

2.2.7.1 Изучение острой токсичности........................................................54

2.2.7.2 Изучение противовоспалительного действия....................................55

2.3 Методы стандартизации сырья и масла................................................56

2.3.1 Отбор проб для анализа.........................................................56

2.3.2 Методы морфолого-анатомического исследования.......................56

2.3.3 Определение числовых показателей качества сырья.......................57

2.3.4 Определение содержания радионуклидов.................................57

2.3.5 Определение влияния длительного хранения семян на состав БАС и установление срока годности масла........................................................57

2.3.6 Определение микробиологической чистоты...............................58

2.4 Статистическая обработка данных......................................................58

ГЛАВА 3 ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА СЕМЯН И ТРАВЫ ЭНОТЕРЫ ДВУХЛЕТНЕЙ

3.1 Изучение липидов семян энотеры двухлетней........................................59

3.1.1 Определение основных показателей семян и масла......................59

3.1.2 Изучение жирнокислотного состава..........................................60

3.1.3 Изучение нейтральных липидов................................................61

3.1.4 Изучение полярных липидов....................................................62

3.1.5 Изучение неомыляемой фракции..............................................67

3.1.6 Изучение позиционно-видового состава триацилглицеридов..........68

3.1.7 Изучение влияния сроков хранения семян на состав БАС и

определение срока годности масла.........................................................70

3.2 Фитохимическое изучение надземной части..........................................72

3.2.1 Изучение фенольных соединений.............................................72

3.2.2 Изучение дубильных веществ и полисахаридов...........................77

3.2.3 Изучение аминокислотного состава...........................................78

3.2.4 Изучение элементного состава.................................................80

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 3.......................................................................81

ГЛАВА 4 ИНТРОДУКЦИОННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЫРЬЕВЫХ ЗАПАСОВ ЭНОТЕРЫ ДВУХЛЕТНЕЙ В ДИКОРАСТУЩЕЙ ФЛОРЕ

4.1 Определение сырьевых запасов энотеры двухлетней в Краснодарском крае..82

4.2 Изучение всхожести семян................................................................87

4.3Изучение онтогенеза энотеры двухлетней на опытных делянках ботанического

сада ПМФИ - филиала ВолгГМУ......................................................................88

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 4....................................................................93

ГЛАВА 5 МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТРАВЫ ЭНОТЕРЫ ДВУХЛЕТНЕЙ, УСТАНОВЛЕНИЕ ТОВАРОВЕДЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СЫРЬЯ

5.1 Морфолого-анатомическое исследование травы энотеры двухлетней.........94

5.2 Определение товароведческих показателей...........................................99

5.2.1 Определение содержания радионуклидов................................100

5.2.2 Определение микробиологической чистоты...............................101

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 5.....................................................................103

ГЛАВА 6 ПОЛУЧЕНИЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ТРАВЫ И ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАСЛА И СУХОГО ЭКСТРАКТА ЭНОТЕРЫ ДВУХЛЕТНЕЙ

6.1 Получение сухого экстракта травы энотеры двухлетней.........................104

6.2 Предварительные фармакологические исследования масла семян и сухого экстракта травы энотеры двухлетней.....................................................107

6.2.1.Изучение острой токсичности масла семян энотеры двухлетней.... 107

6.2.2 Изучение противовоспалительной активности масла..................108

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 6.....................................................................109

ЗАКЛЮЧЕНИЕ................................................................................110

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ................................................................113

ПРИЛОЖЕНИЕ

129

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение энотеры двухлетней Oenothera biennis L.»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Эссенциальные жирные кислоты (витамин F), являясь универсальными эндогенными биорегуляторами, привлекают внимание исследователей, а поиск источников данных соединений является весьма актуальной задачей. F-витаминные свойства растительных масел связывают с наличием в их составе триацилглицеридов ненасыщенных жирных кислот семейства оо-З или со-6. Известно множество, главным образом, импортных лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище, содержащих витамин F и зарегистрированных в РФ: эссенциале, липостабил, эгамол, фитос- F, омеганол, омегамама «9 месяцев», омакор и др.

Еще в начале 80-х годов были установлены преимущества энотеры двулетней (э. двухлетней), как экономически наиболее перспективного растительного источника эссенциальных жирных кислот, в том числе со-6 у-линоленовой кислоты (ГЛК), содержание которой в масле семян может достигать 10%. За рубежом э. двухлетнюю относят к пищевым, медоносным, кормовым, техническим, лекарственным и декоративным растениям. В отечественной литературе представителям рода Oenothera уделяется недостаточное внимание: в научно-практической медицине, фармацевтической, пищевой промышленности нашей страны семена и жирное масло энотеры не используются и в промышленных масштабах не производятся. Между тем, некоторые виды рода энотера представляют научный и практический интерес, т.к. довольно широко представлены во флоре Кавказа (э. двухлетняя) и могут служить новыми источниками биологически активных веществ (БАВ) и фитопрепаратов.

Поэтому весьма актуальным являются ресурсные исследования э. двухлетней в дикорастущей флоре (на территории Краснодарского края) и возможности ее интродукции в условиях Ставропольского края с целью выявления источника жирного масла с высоким содержанием эссенциальных жирных кислот, а также технологических приемов для его выделения,

переработки и рационального комплексного использования.

Степень разработанности темы. В Институте химии растительных веществ АН РУЗ в Ташкенте в результате исследований липидов э. двухлетней флоры Узбекистана были идентифицированы ряд оксигенированных ацилглицеридов и 5 классов липофильных веществ. В Белгородском государственном университете при изучении масла семян э. двухлетней, произрастающей на территории Белгородской области, было установлено, что основными ненасыщенными жирными кислотами масла являются линолевая, олеиновая и у-линоленовая. В Государственном НИИ органической химии и технологии совместно с ВИЛАРом разработан комплексный метод извлечения ценных компонентов из жмыха семян э. двухлетней. Методом перекристаллизации путем образования комплексов включения жирных кислот с мочевиной китайским исследователям Wang H., Ling M. и др. удалось получить из масла семян э. двухлетней фракцию жирных кислот, на 95,6% обогащенную ГЛК. В семенах, корнях и надземной части энотеры двухлетней выявлено значительное количество дубильных веществ, фенолкарбоновых кислот, флавоноловых гликозидов гиперозида и изокверцетрина, антоцианов, тритерпеновых сапонинов, ситостерина, аскорбиновой кислоты, слизи, смолы.

Исследований по введению в культуру, ресурсных исследований, изучения фитохимического состава э. двухлетней в условиях интродукции и сравнительному изучению дикорастущих и интродуцированных видов не проводилось.

Цель и задачи работы. Цель - экспериментальное обоснование применения э. двухлетней как сырьевого источника масла, содержащего у-линоленовую кислоту; проведение фитохимических исследований надземной части с целью комплексного использования сырья.

Для реализации поставленной цели необходимо решение следующих задач:

1. Интродуцировать э. двухлетнюю на базе ботанического сада ПМФИ -филиала ВолгГМУ Минздрава России и определить ее сырьевые запасы в дикорастущей флоре Краснодарского края;

2. Выделить, изучить, идентифицировать различные классы липидов семян;

3. Провести фитохимическое исследование надземной части растения;

4. Дать фармакологическую оценку противовоспалительного действия масла семян и острой токсичности сухого экстракта травы э. двухлетней;

5. Установить морфолого-анатомические диагностические признаки и товароведческие показатели сырья;

6. Разработать нормативную документацию на масло из семян э. двухлетней.

Научная новизна. Впервые проведены ресурсные исследования (определены сырьевые запасы и величины возможных ежегодных заготовок семян и масла) э. двухлетней во флоре Краснодарского края; осуществлена интродукция данного вида на базе ботанического сада ПМФИ - филиала ВолгГМУ Минздрава России, определена сырьевая продуктивность семян и надземной части э. двулетней в условиях интродукции. Впервые проведено сравнительное изучение качественного состава и количественного содержания БАВ семян дикорастущих растений и культивируемых образцов э. двухлетней (подробно изучен состав нейтральных и полярных липидов, неомыляемой фракции, позиционно-видовой состав триацилглицеридов, а также установлено высокое содержание в масле со-6 у-линоленовой кислоты и значимое количество са-3 а-линоленовой кислоты). Изучен химический состав травы э. двухлетней (установлено содержание и состав фенольных соединений, гидролизуемых дубильных веществ, полисахаридов, аминокислот) определены товароведческие показатели сырья.

Получен сухой экстракт травы э. двухлетней, определены оптимальные параметры экстракции. Установлено, что сухой экстракт является малотоксичным и может представлять несомненную перспективу для дальнейших фармакологических исследований в качестве средства, обладающего кардиотоническим действием. Установлено, что масло семян обладает противовоспалительной активностью.

Проведено морфолого-анатомическое изучение надземной части э. двухлетней, установлены диагностические признаки и товароведческие показатели сырья.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретическая значимость. В результате проведенных экспериментальных исследований состава семян э. двухлетней доказана целесообразность ее применения как источника жирного масла с высоким содержанием эссенциальных жирных кислот, в особенности со-6 у-линоленовой кислоты. Результаты определения химического состава травы и предварительные фармакологические исследования свидетельствуют о необходимости дальнейшего более глубокого изучения надземной части э. двухлетней для получения новых лекарственных препаратов.

Практическая значимость. Методики анализа масла семян э. двухлетней, включенные в проект ФСП «Масло семян энотеры», апробированы в ГУЗ «Республиканский центр контроля качества и сертификации лекарственных средств Министерства Здравоохранения РСО-Алания» (акт апробации от 17.02.2012г.). Материалы информационного письма «Изучение позиционно-видового состава триацилглицеридов методом панкреатического гидролиза» включены в лекционный курс и практические занятия кафедры органической химии ПМФИ - филиала ВолгГМУ по курсу: «Липиды» (акт о внедрении от 04.02.2013 г.). Разработана «Инструкция по сбору и сушке травы и семян энотеры двулетней» (утверждена ПМФИ - филиалом ВолгГМУ 05.02.2013 г.).

Методология и методы исследования. Методология фармакогиостического исследования подразумевает научно обоснованную и целесообразно организованную последовательность действий и включает несколько блоков: информационно-исследовательский, фитохимический, технологический, стандартизационный и фармакологический. При проведении работы использовались следующие методы исследований: биологические, химические, физико-химические (ГЖХ, УФ-спектрофотометрия, ВЭЖХ, жидкостная хроматография, масс-спектроскопия и др.), микробиологические, технологические и фармакологические.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения липидов семян э. двухлетней.

2. Результаты фитохимического изучения надземной части э. двухлетней.

3. Результаты ресурсных и интродукционных исследований э. двухлетней.

4. Результаты морфолого-анатомических исследований надземной части э. двухлетней.

5. Результаты технологических исследований по разработке сухого экстракта травы.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов достигается благодаря использованию современных химических, физико-химических, технологических, биологических и фармакологических методов, позволяющих получать воспроизводимые и однозначные результаты. Результаты измерений статистически обработаны. Апробация методик анализа липидов в условиях ГБУЗ «Республиканский центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» МЗ РСО-Алания показала их воспроизводимость, что также подтверждает достоверность полученных данных.

Основные положения диссертационной работы доложены на научных конференциях ГБОУ ВПО Пятигорской ГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» в январе 2008, 2009, 2010 и 2011 г. (г. Пятигорск). По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, в т.ч. 3 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 128 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 6 глав собственных исследований, общих выводов, списка цитируемой литературы, включающего 132 источника, из которых 39 иностранных авторов и приложения. Диссертация иллюстрирована 16 рисунками и 32 таблицами.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ГЛ - гликолипиды

ГЖХ - газо-жидкостная хроматография

ГЛК - у-линоленовая кислота

ДАТ - диацилглицериды

КХ - колоночная хроматография

МАГ - моноацилглицериды

МЭЖК - метиловые эфиры жирных кислот

НЛ - нейтральные липиды

ПЛ - полярные липиды

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ПТСХ - препаративная тонкослойная хроматография

СЖК - свободные жирные кислоты

СЭТС - сложные эфиры тритерпеновых соединений

ТАГ - триацилглицериды

ТСХ - тонкослойная хроматография

ФЛ - фосфолипиды

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Биологическая роль эссеициальных жирных кислот

Выяснению многогранной роли жиров в обеспечении процессов жизнедеятельности организма посвящено значительное число биохимических и физиологических исследований и работ.

Биологические свойства масел обусловлены жирнокислотным и триглицеридным составами, а также наличием в них биологически активных соединений (токоферолов, стеролов, фосфолипидов, каротиноидов и др.). Однако базовым критерием ценности является жирнокислотный состав, характеристикой которого является его сбалансированность по соотношению эссенциальных жирных кислот, представленных 2 основными наиболее значимыми классами:

- кислоты семейства со-3 (в структуре жирной кислоты первая двойная связь находится у третьего атома углерода, считая от концевой метильной группы): а-линоленовая (цис-9,12,15-октадекатриеновая) С18:3,

эйкозапентаеновая (цис-5,8,11,14,17-эйкозапентаеновая) С20:5, докозапентаеновая (цис-4,8,12,15,21-докозапентаеновая) С22:5, цис-4,7,10,13,16,19-докозагексаеновая С22:6;

- кислоты семейства со-6 (в структуре жирной кислоты первая двойная связь находится у шестого атома углерода, считая от концевой метильной группы): линолевая (цис-9,12-октадекадиеновая) С 18:2,

у-линоленовая (цис-6,9,12-октадекатриеновая) С 18:3, арахидоновая (цис-5,8,11,14-эйкозатетраеновая) С20:4.

Клетки организма человека способны образовывать моноеновые жирные кислоты, то есть жирные кислоты, содержащие одну двойную связь, например пальмитолеиновая — 16:1 или олеиновая кислота 18:1. Однако способность синтезировать некоторые ПНЖК, состоящие из 18 углеродных атомов и

содержащие две и три двойные связи, клетки животных и человека утратили. Поэтому ПНЖК (семейств со-3 и со-6) являются незаменимыми или эссенциальными для человека и должны поступать с пищей.

ПНЖК входят в состав фосфолипидов мембран всех клеток, особенно много их содержит мозговая ткань. Дефицит этих соединений приводит к уменьшению текучести мембран и нарушению их функций. Установлено, что докозагексаеновая (22:6) и арахидоновая (20:4) кислоты являются ключевыми строительными блоками клеточных мембран мозга и сетчатки глаза. Эти же кислоты составляют пятую часть от общего содержания жирных кислот в фосфолипидах головного мозга и влияют на передачу сигнала между нервными клетками через синапсы. В фосфолипидах мембран сетчатки глаза около 60% ПНЖК представлены докозагексаеновой кислотой, которая влияет на фоторецепторную функцию сетчатки через активацию зрительного пигмента родопсина [88].

Важную роль ПНЖК играют в процессах терморегуляции, поскольку один из путей метаболизма линолевой кислоты является ее окисление, сопровождаемое выделением энергии (за счет этого организм получает 3-5% энергии).

Кроме того, ПНЖК являются предшественниками эйкозаноидов (тканевых гормонов): простациклинов, простагландинов (ПГ), лейкотриенов (ЛТ) и тромбоксанов (ТК) (рис.1).

Тканевые гормоны, образованные из разных предшественников, выполняют в организме схожие функции, отличающиеся по интенсивности воздействия и изменяющиеся в зависимости от места образования (тканеспецифичный процесс). В зависимости от исходной жирной кислоты все эйкозаноиды делят на три группы:

- производные эйкозатриеновой кислоты образуются путем удлинения линолевой кислоты (С 18:3). Для этой группы в соответствии с числом двойных связей ПГ и ТК присваивается индекс 1, ЛТ - индекс 3 (ПГЕ1, ПГ11, ТКАЛ, ЛТАЗ);

производные арахидоновой кислоты (С20:4). Эйкозаноидам этой группы присваивается индекс 2 или 4 (ПГЕ2, ПГ12,ТКА2, ЛТА4);

- производные эйкозапентаеновой кислоты (С20:5). По числу двойных связей присваиваются индексы 3 или 5 (ПГЕЗ, ПГ13, ТКАЗ, ЛТА5).

Подразделение эйкозаноидов на группы имеет клиническое значение, так как их активность напрямую зависит от числа двойных связей. Например, в ряду простациклинов от ПЦИ до ПЦ13 возрастает антиагрегационная и вазодилататорная активность, в ряду ТК1 до ТКЗ снижается проагрегационная и вазоконстрикторная активность [22].

ПНЖКсо-6 Арахидоновая кислота (20:4)

1 I

Липоксигеназа Циклооксигеназа

1 I

Лейкотриены Простагландины

I I

Простациклины Тромбоксаны

1

Простагландины

Простагландины серии 2; Лейкотриены серии 4

Простациклин - вазоконстриктор; Тромбоксан - активатор агрегации тромбоцитов; Лейкотриен - индуктор воспалительного каскада.

ПНЖКсо-3

Эйкозапентаеновая кислота (20:5)

1

1

Липоксигеназа

Циклооксигеназа

1

I

Лейкотриены

Простагландины

I

Простациклины

Тромбоксаны

Простагландины серии 3; Лейкотриены серии 5.

Простациклин - вазодилататор; Тромбоксан - подавляет агрегацию тромбоцитов; Лейкотриен - противовоспалительное действие

Рисунок 1 - Синтез эйкозаноидов из со-6 и со-3 ПНЖК [45]

В 1920-30 гг. рядом ученых было высказано предположение, что помимо терморегуляторной и защитной функции, жиры выполняют еще другие функции, и была описана «новая болезнь, возникающая при исключении жира из диеты», основным симптомом которой является эпидермальная гиперпролиферация [49].

В ряде исследований было выявлено, что эпидерма кожи не способна самостоятельно синтезировать линолевую кислоту, поэтому эпидермальный фермент липоксигеназа-15 преобразовывает 13-гидроксиоктадекадиеновую кислоту, которая обеспечивает антипролиферативные свойства. Незначительные количества со-6 арахидоновой кислоты метаболизируется через циклооксигеназный путь к простагландину Е2; F2, D2. Другие ПНЖК, полученные от масел, также трасформируются в ЖК, проявляющие противовоспалительные свойства in vitro (рис. 2). Именно поэтому добавление в диету масел, богатых ПНЖК, может использоваться в терапии воспалительных заболеваний кожи [132], а также в косметических средствах для профилактики и коррекции возрастных изменений кожи [2].

[Dietary •corn oil

15-lipoxygenase IbAl -( 13-HODE]

^ ^ A^-desatMrase

{deficient in skin epidermis)

Dietary

evening primrose oil

[GLA]

elung№w

(active in skin epidermis)

(15-lipoxygenase)^. №GLA] ^Cyclooxygeriase

115-HETrE] (antiinflam maiory)

[PGE,]

As- dess» lurusc

(deficient in skin epidermis)

fAAJ

Рисунок 2 - Метаболизм линолевой и 7-линоленовой кислот в эпидерме [132]

13-НСЮЕ - 13-гидроксиоктадекадиеновая кислота; БОЬА - дигомо-у-линоленовая кислота; 15-НЕТгЕ - 15-гидроксиэйкозатриеновая кислота; РОЕ1 - простагландин Е^ АА - арахидоновая кислота

Большой интерес среди ПНЖК ю-6 вызывает у-линоленовая кислота (ГЛК), которая является метаболитом линолевой кислоты, первым промежуточным продуктом в цепочке превращений линолевой кислоты в арахидоновую и предшественником простагландинов - эндогенных биорегуляторов в организме. Преобразование линолевой кислоты в ГЛК происходит под влиянием специфического печеночного фермента А 6 - десатуразы, однако таким образом преобразуется не более 3% суточной дозы линолевой кислоты. Активность фермента А 6 десатуразы снижается при старении организма,

гиперхолестеринемии, чрезмерном потреблении насыщенных жирных кислот и транс-изомеров ненасыщенных жирных кислот, при стрессах, злоупотреблении алкоголем, радиационном облучении, а также при ряде заболеваний: сахарном диабете, экземе, бронхиальной астме, вирусных инфекциях. В таких случаях в ГЛК превращается не более 1% линолевой кислоты.

Исходя из вышеизложенного, становится понятной биологическая ценность ГЛК. Она характеризуется чрезвычайно высокой биодоступностью (не требуя А -десатуразы) и может легко «удлиняться» на 2 атома углерода, превращаясь в дйгомо ГЛК - непосредственного предшественника синтеза простагландинов, в частности простагландина Е и его производных (рис.3) [40].

Исследования показали, что ГЛК снижает уровень холестерина и липопротеинов низкой и очень низкой плотности при диете, обогащенной холестерином [105], нормализует фосфолипидный состав микросомальных мембран при Ъп - дефицитной диете и липидный состав мембран гепатоцитов при алкогольном поражении печени, снижает уровень перекисного окисления липидов, нормализует активность НФДФН-оксидазы, НАДН-оксидазы и НАДФН-редуктазы и повышает содержание цитохромов Р-450 и Ь5 относительно не только облученных, но и контрольных животных, что позволяет рекомендовать ГЛК как один из компонентов комплексной терапии радиационных повреждений и профилактики неблагоприятных последствий радиационного облучения [9].

12 9

СНЗ(СН2)4СН=СНСН2СН=СН(СН2)7СООН

-Hn

9,12 -18:2 -линолевая кислота (0"6

12 *9 6

СНз(СН2)4СН=СНСН2СН=СНСН2СН=СН(СН2)4СООН

6,9,12 -18:3 -у -линоленовая кислота ~ (0"6

14 11* 8

СНз(СН2)4СН=СНСН2СН=СНСН2СН=СН(СН2)бСООН

-Н2

8,11,14 - 20:3 - эйкозатриеновая кислота со - 6 дигомо - у -линоленовая кислота

Простагландины

14 11 8 5

СНЗ(СН2)4СН-СНСН2СН=СНСН2СН=СНСН2СН-СН(СН)ЗСООН

5,8,11,14 - 20:4 - арахидоновая кислота

со - 6

Простагландины

Рисунок 3 - Метаболизм о>-6 жирных кислот в организме человека

Включение в питание больных острым повреждением легких и острым респираторным дистресс-синдромом ГЛК и эйкозопентаеновой кислоты снижает микрососудистую проницаемость для белка, уменьшает количество нейтрофилов в альвеолярной жидкости, улучшает показатели оксигенации и легочной гемодинамики [60].

Кроме того, ГЛК применяется для лечения и профилактики остеопороза и мочекаменной болезни, рассеянного склероза, для профилактики атопических дерматитов у детей с высокой генетической предрасположенностью, профилактики аутоиммунного энцефаломиелита [121,127], для лечения

гиперпролиферации [113,114] и в косметических средствах для сухой, чувствительной кожи и противовозрастной косметики.

Что касается со-З жирных кислот, то еще в середине 1970-х - начале 1980-х гг. эпидемиологические исследования показали, что для населения Японии и Гренландии характерен низкий уровень сердечно - сосудистых заболеваний, что объяснили значительным употреблением рыбы, богатой со-З ПНЖК. Позже было установлено, что в результате метаболизма со -3 ПНЖК (а -линоленовой, эйкозапентаеновой и декозагексаеновой), встроенных в фосфолипидный домен клеточной мембраны, образуются простагландины и тромбоксаны (РС13, РвЕЗ, ТхАз и другие), по своей биологической активности существенно отличающиеся от таковых, образующихся в каскаде метаболизма арахидоновой кислоты (РС12, РОЕ2, ТхА2 и другие), чем во многом обусловлены такие свойства со -3 ПНЖК, как антиагрегационная, антиатерогенная и вазодилатирующая активность. Помимо этого, встроенные в клеточную мембрану кардиомиоцитов со -3 ПНЖК в значительной мере модифицируют функциональную активность трансмембранных потенциалзависимых ионных каналов, в частности, вызывают дозозависимое подавление выходящего трансмембранного натриевого тока, замедляют работу медленных потенциалзависимых трансмембранных кальциевых каналов Ь-типа и частично блокируют выход ионов калия из сердечных клеток, т.е. проявляют свойства антиаритмических лекарственных средств I, Ш и IV классов по классификации Е.М. Уаг^Иап \¥ПНат8е [45]. Экспериментальные данные, свидетельствующие о наличии у со-З ПНЖК мембранностабилизирующего (антиаритмического) действия, нашли подтверждение в ряде клинических исследований. Так, например, в крупном рандомизированном плацебо-контролируемом исследовании, в котором приняло участие более 9,5 тысяч пациентов с систолической дисфункцией левого желудочка, имеющих в анамнезе инфаркт миокарда, было показано, что систематический прием омега-3 ПНЖК у этой категории больных статистически

значимо, более чем на 50%, снижает риск возникновения внезапной сердечной смерти [112]. Это объясняет использование препаратов со-3 ПНЖК для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний [32]. Значительное число исследований посвящено изучению возможных профилактических и лечебных эффектов со-3 ПНЖК при бронхиальной астме. Показано, что в развитии аллергических реакций важную роль играет уменьшение содержания в сыворотке крови ПНЖК со-3 класса и увеличение соотношения ПНЖК со-6/со-З класса, что поддерживает хроническое аллергическое воспаление в дыхательных путях [36]. В настоящее время со-3 ПНЖК используют в профилактике и лечении таких заболеваний, как сахарный диабет 1-го и 2-го типа, ревматоидный артрит, атопический дерматит, болезнь Крона, системная красная волчанка, нефропатии [31].

ПНЖК вызывают большой интерес в педиатрии, поскольку имеют особо важное значение для развития ребенка. Известно, что грудное молоко содержит эссенциальные жирные кислоты: линолевая кислота (со-6) — 8-30%, арахидоновая (со-6) — 0,5-0,8%, а-линоленовая кислота (со-3) — 0,5-2,0%, докозагексаеновая (со-3) — 0,1-0,4% от общего количества жирных кислот [22].

Последствия недостаточного поступления эссенциальных ПНЖК в организм человека как в детском, так и в зрелом возрасте могут проявляться как на молекулярном уровне, так и на органном уровне. Так, при недостаточном поступлении в организм линолевой и а-линоленовой кислот наблюдается снижение образования их метаболитов, в частности снижение уровня арахидоновой и докозагексаеновой кислот в мембранах и фосфолипидах крови. Параллельно происходит замещение недостающих длинноцепочечных ПНЖК производными не эссенциальных жирных кислот семейства со-9, которые могут синтезироваться в организме, или производными, принадлежащими к другим семействам. Эти изменения в конечном итоге могут вести к серьезным нарушениям в работе иммунной системы, внутренних органов, нарушению

зрительной и репродуктивной функций и др. В связи с этим достаточное поступление с пищей ПНЖК является важным условием поддержания здоровья [31]. Ежедневная потребность в ПНЖК равна 10-20% от общего количества получаемых калорий (соотношение ПНЖК со-6 и со-З типа является 4:1) [120]. Многие эксперты считают, что около 80% населения потребляют недостаточное количество эссенциальных жирных кислот. Есть несколько путей обеспечения организма ПНЖК, например:

- создание генномодифицированных источников растительных масел с высоким содержанием ПНЖК;

- увеличение в питании доли масел с повышенным содержанием ПНЖК (льняное, рыжиковое, рапсовое масла);

- применение биологически активных добавок к пище в виде масляных препаратов с высоким (до 30%) содержанием ПНЖК и др.

В настоящее время продукты питания с существенным содержанием ПНЖК составляют менее 3% всех известных пищевых продуктов.

В НИИ питания РАМН в конце 1990-х гг. была сформирована концепция создания таких продуктов и разработаны специализированные продукты [3,72].

Поскольку основными источниками эссенциальных жирных кислот со-З являются преимущественно животные липиды (липиды морских организмов), а со-6 - растительные, то значительный интерес для нас представляют именно ПНЖК со-6 типа, одним из наиболее значимых представителей которых является у-линоленовая кислота (ГЛК).

Впервые ГЛК была открыта в 1919 г. в жирном масле семян энотеры двухлетней чешскими исследователями Heidushka и Luft, которые и дали этому соединению современное название [108]. Содержание ГЛК в сумме высших жирных кислот после омыления масла семян энотеры доходит до 10%, что гораздо выше, чем в семенах традиционных масличных культур. В таблице 1

приведены 4 вида рода энотера, содержащие более 2% у-линоленовой кислоты в семенах и/или свыше 8% у-линоленовой кислоты в выделенном масле.

Таблица 1 - Состав жирных кислот семян и масла в видах, энотеры, содержащих ГЛК в значимых количествах (%) [129]

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Чернова, Елена Владимировна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алгоритмизация радиационного анализа в контроле качества лекарственного растительного сырья / A.A. Абрамов [и др.] // Вестн. Моск. ун-та. - 2002. - Т.43, № з. _ с. 194-199.

2. Аравийская, Е.Р. Профилактика и коррекция возрастных изменений кожи с помощью омега-3 ПНЖК / Е.Р. Аравийская, Е.В. Соколовский, Д.В. Васильев // Экспериментальная и клиническая дерматокосметология. - 2009. - №3. - С.31-35.

3. Бакуменко, O.E. Разработка сухих молочных смесей для беременных и кормящих женщин / O.E. Бакуменко, В.Г. Байков, В.В. Бессонов / Диетология: проблемы и горизонты // материалы 1 Всерос. съезда диетологов и нутрициологов, Москва 4-6 дек. 2006. - М., 2006 - С.43-44.

4. Бандюкова, В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографирования на бумаге / В.А. Бандюкова // Раст. ресурсы. - 1965. - Т. 1, вып. 4. - С. 591-596.

5. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды / В.А. Бандюкова // Химия природных соединений. - 1983. - № 3. - С.263-273.

6. Березовская, И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения / И.В. Березовская // Хим.- фармац. журн. - 2003. - Т.37, № 3. - С. 32-34.

7. Борисов, Ю.П. Определение радионуклидов в лекарственном растительном сырье / Ю.П. Борисов // Ломоносов-2000: материалы междунар. конф. -М., 2000. - С. 158-160.

8. Вандышев, В.В. К фармакогностическому изучению энотеры двулетней / В.В. Вандышев, Я.А. Грицюк, Г.И. Климахин // 6 Международный съезд «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» 4-6 июля 2002г., СПб. - 2002. - С. 202-205.

9. Влияние гамма-линоленовой кислоты на систему микросомального

окисления печени крыс при у-облучении / Л.Б. Заводник [и др.] // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2001.- Т. 64, № 4.- С. 59-62. Ю.Воробьева, Н.Н. Изучение бактериостатического действия растительных масел энотеры, рапса и подсолнечника на условно-патогенную микрофлору, вызывающую порчу пищевых продуктов (Чехия) / Н.Н. Воробьева // Пищевая и перерабатывающая пром - сть. - 2000. - №.3. - С. 765.

П.Гейссман, Т.А. Цветные реакции на флавоноидные соединения / Т.А. Гейссман // Химические методы анализа растений. Сб. статей. - М.: Изд-во ИП, 1960.-469с.

12.ГОСТ 12036-66 - ГОСТ 12047-66. Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения качества. - М., 1966. - 171с.

13.Государственная фармакопея Российской Федерации. - 12-е изд. - М.: Науч.центр экспертизы средств мед. применения, 2008. - Ч. 1. - 704с.

14.Государственная фармакопея СССР: в 2-х вып. / МЗ СССР. - 11-е изд., -доп. - М.: Медицина, 1987-1989. - Вып. 1,2.

15.Гроссгейм, А.А. Растительные богатства Кавказа / А.А. Гроссгейм - М.: Медицина, 1952. -632с.

16.Дикорастущие полезные растения России / под ред. Буданцева А.Л., Лесиовской Е.Е. - СПб.: СПХФА, 2001. -391с.

17.Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта с основами статистической обработки результатов исследований / Б.А. Доспехов. - М.: Колос, 1979. -416с.

18.Дудкин, М.С. Углеводы Symphytum asperum / М.С. Дудкин, Н.А. Денисюк // Химия природ, соединений. - 1984. - № 1. - С. 15-20.

19.Жукова, Л.А. Онтогенетический атлас лекарственных растений / Л.А. Жукова, Э.В. Шестакова. - Йошкар-Ола: МарГУ, 1997. - 27с.

20.Зайцев, Г.Н. Методика биометрических расчетов / Г.Н. Зайцев. - М.:

Медицина, 1973. - 256с.

21.3алепугин, Д.Ю. Извлечение ценных компонентов из семян ослинника двулетнего (Oenothera biennis L.) с использованием современных методов экстракции / Д.Ю. Залепугин, В.А.Быков // Сверхкритические флюиды: теория и практика. - 2008. - Т.З, № 3. - С. 54-70.

22.Захарова, И.Н. Роль полиненасыщенных жирных кислот в формировании здоровья детей / И.Н. Захарова, E.H. Суркова // Педиатрия. - 2009. - Т. 88, №6. -С. 84-91.

23.Игнатьева, И.П. Онтогенетический морфогенез вегетативных травянистых растений: метод, указания. -М., 1989. - 63 с.

24.Идентификация некоторых фенольных соединений 4 видов лекарственных растений (бурачника лекарственного, энотеры двухлетней, морозника кавказского, морозника абхазского) методом ВЭЖХ / С.С. Ляшенко, Е.В. Чернова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. -Пятигорск, 2013. - Вып. 68. - С. 65-67.

25.Изменение биологически активных компонентов при хранении семян Viburnum opulus / С.Г. Юнусова [ и др. ] / Химия природ, соединений. -2004. - №5.-С. 349-351.

26.Изучение липидов семян энотеры двулетней - Oenothera biennis / О.Н. Денисенко, С.Г. Юнусова, М.С. Юнусов, Е.В. Чернова // Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ. - 2006. - т.З, № 3. - С. 46.

27.Изучение жирнокислотного состава полярных липидов некоторых представителей флоры Кавказа (Helleborus abchasicus A.Br, и Helleborus caucasicus A.Br., Borago officinalis L., Oenothera biennis L.) / З.В. Ищенко [и др.] // Bon. биологич., мед. и фармац. химии. - 2013.- № 3. - С. 52-56.

28.Изменение жирнокислотного состава масел энотеры двухлетней (Oenothera biennis L.) и морозника кавказского (Helleborus caucasicus

A.Br.) в процессе хранения / E.B. Чернова [и др.] // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки: сб. работ молодых ученых 4 междунар. научн.-практ. конференции. - Владикавказ, 2013. - С.261 -263.

29.Имашева, А.К. Терапевтический эффект использования кедрового масла при ожоговой травме / А.К. Имашева, A.C. Ажиков, М.В. Лазько // Естественные науки. - 2008. - № 4 (25). - С. 75-77.

30.Интродукционные исследования энотеры двулетней (Oenothera biennis L.) на базе ботанического сада Пятигорской ГФА / Е.В. Чернова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2012. - Вып. 67. - С. 137-138.

31. Использование полиненасыщенных жирных кислот в питании здоровых детей / И.Я. Конь [и др.] // Лечащий врач. - 2006. - № 1. - С. 21-32.

32.Карпов, Ю.А. Препараты со 3- полиненасыщенных жирных кислот как средство профилактики сердечно-сосудистых осложнений / Ю.А. Карпов, К.А. Талицкий // Артериальная гипертензия. - 2007. - Т. 13, № 2. -С. 160-168.

33.Кейтс, М. Техника липидологии: пер. с англ. / М. Кейтс.- М.: Мир, 1975.

- 322с.

34.Климахин, Г.И. Динамика образования жирного масла в семенах ослинника двулетнего в условиях культуры / Г.И. Климахин, В.В. Семикин, B.C. Фонин // Химия, технология, медицина: сб. науч. тр.Т. 17.

- М.: ВИЛАР, 2006. - Т. 17 - С. 79-82.

35.Клонирование и функциональная характеристика дельта-десатуразы жирных кислот из Oenothera biennis: производство у-линоленовой кислоты методом гетерологичной экспрессии в Sasccharomyces Cerevisiae / X. Шэнхэ [и др.] // Физиология растений. - 2010. - Т.57, № 4. -С. 609-614.

36.Комарова, О.Н. со-З полиненасыщенные жирные кислоты и их метаболиты в патогенезе, профилактике и лечении бронхиальной астмы: современные данные / О.Н. Комарова, И.Я. Конь // Вопросы детской диетологии. - 2006. - Т. 4, № 3. - С.23-34.

37.Косман, В.М. Информационное обеспечение для идентификации фенольных соединений растительного происхождения в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Флавоны, флавонолы, флавононы и их гликозиды / В.М. Косман, И.Г. Зенкевич // Раст. ресурсы. - 1997. - Т. 33, Вып. 2. - С. 14-26.

38.Крылова, И.Л. Методические указания по изучению запасов дикорастущих лекарственных растений / И.Л. Крылова, А.И. Шретер. -М.: ВИЛАР, 1986.-50с.

39.Кулешов, H.H. Агрономическое семеноведение / H.H. Кулешов. - М.: Изд-во Сельскохоз. лит., журн. и плакатов, 1963. -304с.

40.Куцик, Р.В. Энотера двухлетняя. Oenothera biennis L. suubsp. Muricata Rouy et Gamus (син. Onagra biennis L.). Аналитический обзор / P.B. Куцик, Б.М. Зузук // Провизор - 2005. - №3. - С. 45-66.

41.Липиды семян Oenothera L. с различных мест произрастания. Сообщение II / С.Г. Юнусова, М.С. Юнусов, О.Н. Денисенко, Е.В. Чернова // Башкир, химич. журн. - 2009. - № 2. - С. 114-118.

42.Липиды семян Oenothera с различных мест произрастания. Сообщение I / С.Г. Юнусова [и др.] // Химия природ, соединений - 2007. - № 5. - С. 430-433.

43.Лобанова, И.Ю. Выделение и изучение состава флавоноидов листьев осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова // Химия раст. сырья. - 2011. - № 2. - С. 117-122.

44.Мальцева, М.В. Пособие по определению посевных качеств семян лекарственных растений / М.В. Мальцева. - М.: Медгиз, 1950. - 56с.

45.Мартынов, А.И. Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты в кардиологической практике: фармакологические эффекты и терапевтическое применение / А.И. Мартынов, В.В. Чельцов // Диабет и сердце. - 2011. - № 2. - С. 78-86.

46.Методы биохимического исследования растений / А.И. Ермаков [и др.].-Л.: Колос, 1972.- 112с.

47.Методы биохимического анализа растений / под ред. В.В. Полевого, Г.Б. Максимова. - Л.: Изд-во Ленинград, ун-та, 1978. - 192с.

48.Михеев, А.Д. Особенности флоры региона Кавказских Минеральных вод / А.Д. Михеев // Изучение флоры Кавказа: тез. докл. Междунар. науч. конф. 27 сент.-1 окт. 2010 г. - Пятигорск, 2010. - С.77-78.

49.Назаров, П.Е. Полиненасыщенные жирные кислоты как универсальные эндогенные биорегуляторы / П.Е. Назаров, Г.И. Мягкова, Н.В. Гроза // Вестн. МИТХТ.- 2009.- Т.4, № 5.- С. 3-19.

50. Некоторые представители семейств Онагровые (Опа§гасеае) и бурачниковые (Во^тасеае), интродуцированные в ботаническом саду Пятигорской ГФА, как источники эссенциальных жирных кислот / С.С. Ляшенко [и др.] // Фармация и общественное здоровье: материалы ежегодной конференции 18 апреля 2012. - Екатеринбург, 2012. - С. 180182.

51 .Николаева, М.Г. Справочник по проращиванию покоящихся семян / М.Г. Николаева, М.В. Разумова, В.Н. Гладкова; под ред. М. Ф. Даниловой. -М.: Наука, 1985.-347с.

52.Определение витамина Е в растительных маслах / Е.Е. Чупандина [и др.] // Фармация - 2009.- №6. - С. 12-15.

53.Определение содержания пигментов в жирных маслах некоторых представителей флоры Северного Кавказа / З.В. Ищенко [и др.] // Актуальные проблемы науки фармацевтических и медицинских вузов: от

разработки до коммерциализации: Материалы научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию Пермской государственной фармацевтической академии (7-9 декабря 2011 г.). - Пермь, 2011- С. 207-208.

54.0ФС 42-0013-03 Правила приемки лекарственного раст. сырья и методы отбора проб. - М.: Изд-во стандартов, 2003. - 21с.

55.Писарев, Д.И. Жирнокислотный состав семян Oenothera biennis L. флоры Белгородской области / Д.И. Писарев, Т.Я. Жилякова, H.H. Нетребенко // Химия растительного сырья. - 2010. - № 1. - С. 195-196.

56.Писарев, Д.И. Хроматографическое изучение состава жирного масла семян энотеры двулетней / Д.И. Писарев, О.О. Новиков // Научные ведомости Белгород, гос. ун - та. - 2010. - Т.22, № 12. - С. 106-109.

57.Поиск перспективных растительных источников липидов флоры Северного Кавказа / З.В. Ищенко [и др.] // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки: сб. работ молодых ученых 2 междунар. научн.-практ. конференции. - Владикавказ, 2011. - С.208 -211.

58.Попова, Н.Б. Получение капсул «Фитос-F» с гамма-линоленовой кислотой / Н.Б. Попова, Н.К. Луняк, Т.Н. Петровская // Фармацевтическая наука в решении вопросов лекарственного обеспечения. Сб. науч. тр. Т. - М.: НИИ Фармации, 1998. - Т.37, ч. 1 -С.221-227.

59.Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP). РД 64-126-91. -М.: МЗ РФ, 1992. - 78с.

60.Преимущества энтерального питания, обогащенного эйкозопентаеновой и гамма-линоленовой кислотами у пациентов с синдромом острого повреждения легких (реферат) / П. Сингер [и др.] // Инфекции в хирургии. - 2010. - Т. 8, № 2. - С. 82-86.

61. Радиационный контроль. Стронций-90 и цезий-137. Пищевые продукты.

Отбор проб, анализ и гигиеническая оценка: метод, указания по методам контроля МУК 2.6.1.717-98. - М., 1998. - 37с.

62.Республика Адыгея. Путеводитель / под ред. В.Н. Петрова. - Майкоп: Качество, 2010. - 52с.

63.Руководство по методам исследования, технохимическому контролю и отчету производства в масложировой промышленности: в 6 т. / под ред. В.П. Ржехиной, А.Г. Сергеевой. - Л.: ВНИИЖ, 1965. - Т.2. - 418с.

64.Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П. Фисенко. - М.: Ремедиум, 2000. - 398с.

65.Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологически веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - М.: Медицина, 2005.-832с.

66.Сборник методических рекомендаций по стандартизации лекарственных средств / Науч. центр экспертизы средств медицинского применения. -М.: Пеликан, 2006. - 392с.

67.Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.Н. Сернов, В.В. Гацура. - М.: Всерос. науч. центр по безопасности биологически активных веществ, 2000. - 352с.

68. Смирнова, О.В. Критерии выделения возрастных состояний и особенности хода онтогенеза у растений различных биоморф / О.В. Смирнова, Л.Б. Заугольнова, H.A. Торопова // Ценопопуляции растений. - М.: Медицина, 1976. - 54с.

69.Сокольская, Т.А. Требования к стандартизации лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов на его основе / Т.А. Сокольская, Т.Д. Даргаева, Т.Б. Шемерянкина // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии. - 2010. - № 3. - С. 9-12.

70.Состав для ухода за кожей, содержащий натуральное масло из Oenothera biennis (oleum Oenotherae) и осмолит из экстремофильных микроорганизмов / РЖ 19Р-2. Технология производства продуктов бытовой химии. Парфюмерия и косметика. - 2006. - № 19. - С.4-5.

71.Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахариды): учеб. пособие для вузов / Б.Н. Степаненко. - М.: Высш. шк., 1978. - 256с.

72.Степычева, Н.В. Купажированные растительные масла с оптимизированным жирно-кислотным составом / Н.В. Степычева, А.А. Фудько // Химия раст. сырья. - 2011. - № 2. - С. 27-33.

73.Стереоспецифический анализ жиров / С.Г. Юнусова [и др.] // Изв. вузов, Пищевая технология. - 1985. - №2. - С. 17-20.

74.Теречик, Л.Ф. Изучение возможности использования муки из семян энотеры (Oenothera biennis) в качестве естественного антиоксиданта в пищевой промышленности: способы экстракции, антиоксидантная активность вытяжек, поглощение перекиси водорода и свободных радикалов. (Канада) / Л.Ф. Теречик // Пищ. и перераб. Пром - сть. - 2002. - № 4. - С. 1581.

75.Теречик, Л.Ф. Изучение возможности удаления химически активных кислородных комплексов и свободных радикалов 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила (гидрофильные и гидрофобные фенольные соединения) с помощью вытяжек из семян бурачника и энотеры (в связи с возможностью использования их в качестве антиоксидантов при производстве растительных масел) / Л.Ф. Теречик // Пищевая и перерабатывающая промышленность. - 2002. - №.3. - С. 1254.

76.Требования к фармакопейной статье «Жирные масла» / Н.В. Сегуру [и др.] // Фармация. - 2007. - № 8. - С. 3-5.

77. Углеводный состав некоторых представителей рода Centaurea флоры Сибири / Т.В. Кадырова [и др.] // Новые достижения в химии и

химической технологии растительного сырья: материалы 4 Всерос. конф. - Барнаул:- 2009. - С. 247-248.

78.Ульченко, Н.Т. Нейтральные липиды семян Oenothera biennis. / Н.Т. Ульченко, А.И. Глушенкова // Химия прир. соединений. - 1999. - № 3. -С. 317-321.

79. Уранов, A.A. Возрастной спектр фитоценопопуляций как функция времени и энергетических волновых процессов / A.A. Уранов // Науч. докл. высшей школы. - 1975. - № 2. - С. 7-34.

80.Химический анализ лекарственных растений /под ред. Н.И. Гринкевич, JI. И. Сафронич. - М.: Высшая школа. 1984. - 176с.

81.Хомик, A.C. Морфолого-анатомическое изучение семян энотеры двулетней / A.C. Хомик, В.В. Вандышев, С.Н. Суслина //Фармация. -2011. - № 3. - С. 10-13.

82.Влияние сроков хранения семян энотеры двулетней (Oenothera biennis L.) на состав биологически активных соединений / Е.В. Чернова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2011. - Вып. 66. - С. 215-216.

83.Чернова, Е.В. Изучение некоторых показателей семян и масла Oenothera biennis / Е.В. Чернова, О.Н. Денисенко, С.Г. Юнусова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 122-123.

84.Чернова, Е.В. Изучение распространения и запасов энотеры двулетней в Майкопском районе Краснодарского края / Е.В. Чернова, О.Н. Денисенко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2010. - Вып. 65.-С. 147-148.

85.Чернова, Е.В. Микроморфологическое исследование энотеры двулетней (Oenothera biennis L.) / Е.В. Чернова, Ф.К. Серебряная, О.Н. Денисенко //

Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2008. - Вып. 63. - С. 107-109.

86.Чернова, Е.В. Фенольные соединения энотеры двулетней / Е.В. Чернова, С.Г. Юнусова, О.Н. Денисенко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2009. -Вып. 64.-С. 122-123.

87.Чечета, О.В. Методика определения каротиноидов методом хроматографии в тонком слое сорбента / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2008. -Т.8, вып. 2.- С. 320-326.

88.Шилина, Н.М. Современные представления о физиологических и метаболических функциях полиненасыщенных жирных кислот / Н. М. Шилина, И.Я. Конь // Вопросы детской диетологии. - 2004. - Т. 2, № 6. -С. 25-30.

89.Шкроботько, П.Ю. Аминокислотный состав подземных органов валерианы Фори и валерианы бузинолистной / П.Ю. Шкроботько, Д.М. Попов, Н.С. Фурса // Фармация. - 2009. - № 7. - С. 19-23.

90.Шталь, Э. Хроматография в тонких слоях: пер. с нем. / Шталь, Э. - М.: Мир, 1965. - 508с.

91.Щербак, Ф.И. Почвенно-мелиоративные и климатические условия ботанического сада института / Ф.И. Щербак // Ученые записки Пятигорск, гос. фармац. ин-та - 1959. - Т. 6. - 320с.

92.Юнусова, С.Г. Введение в химию липидов / С.Г. Юнусова. - Уфа: Реактив, 2000. - 43с.

93.Accumulation of DELTA 6-unsaturated fatty acids in transgenic tobacco plants expressing a DELTA6-desaturase from Borago officinalis / O.Sayanova [et al] // J. of Experimental Botany. - 1999. - Vol. 50. - P. 1647-1652.

94.A1-Shabanah, O.A. Effect of evening primrose oil on gastric ulceration and

secretion induced by various ulcerogenic and necrotizing agents in rats / O.A. al-Shabanah // Food Chem Toxicol. - 1997. - Vol. 35, N 8. - P.769-775.

95.Antioxidant activity of evening primrose phenolics in sunflower and rapeseed oils / S. Schmidt [et al.] // European J. of Lipid Science and Technology. -2003. - Vol. 105, № 8. - P. 427-435.

96.Anti-tumour potential of a gallic acid-containing Phenolic fraction from Oenothera biennis / C.D. Pellegrina [et al] // Cancer Lett. - 2005. - Vol. 226, N 1. - P.17-25.

97.Artaud, J. Identification d'huiles riches en acide y-linolenique / J. Artaud //Ann. Fals. Exp. Chim. - 1992. - Vol. 85. -P. 231-240.

98.Bayles, B. Evening primrose oil / B. Bayles, R.Usatine // Am. Fam. Physician. - 2009. - Vol. 80, N 12. - P. 1405-1408.

99.Borage a source of gamma linolenic acid / J. Janick [et al] // Herbs, Spices, and Medicinal Plants: Recent Advances in Botany, Horticulture, and Pharmacology. - 1989. - Vol. 4. - P. 145-168.

100. Cesar A. C. Enzymatic treatment during oil extraction and antioxidants isolation from Oenothera biennis seeds by cold pressing / A. C. Cesar, E. Curotto, M. E. Zuniga // Grasas y Aceites Sevilla Spain. - 2007. - Vol. 58, N 1. - P.10-14.

101. Content of the essential oil of the carrot and its antibacterial activity / V. Kilibarda [et al] // Pharmazie - 1996. - Vol. 51, N 10. - P.777-778.

102. Cronin, H. Top 10 botanical ingredients in 2010 anti-aging creams / H. Cronin, Z.Draelos // J. Cosmet. Dermatol. - 2010. - Vol. 9, N 3. - P. 218-225.

103. Effect of a compound containing isoflavones, primrose oil and vitamin E in two different doses on climacteric symptoms / M.J. Cancelo Hidalgo [et al] // J. Obstet. Gynaecol. - 2006. - Vol. 26, N 4. - P.344-347.

104. Effects of high-gamma-linolenic acid canola oil compared with borage oil on reproduction, growth, and brain and behavioral development in mice / P.E. Wainwright [et al] // Lipids. - 2003. Vol. 38, N 2. - P. 171-178.

105. Effects of gamma linolenic acid on atherosclerosis induced by cholesterol-rich diet in rats / L.M. Shi [et al] // China J. of Chinese materia medica. -2008. - Vol. 33, N 23. - P. 2808-2812.

106. Gerchev, G. Amino acid composition of milk from tsigal and karakachanska sheep breeds reared in the central Balkan mountains region / G. Gerchev, G.Mihailova, I. Tsochev // Biotechnology in Animal Husbandry. -2005.-Vol. 21, N5-6.- P. 111-115.

107. Goffman, F.D. Gamma-linolenic acid and tocopherol contents in the seed oil of 47 accessions from several Ribes species / F.D. Goffman , S. Galletti // J. Agric. Food. Chem. - 2001. - Vol. 49, N 1. - P. 349-354.

108. Heiduschka, A. Fatty oil from the seeds of the Evening Primrose Oenothera biennis, and a new linolenic acid / A. Heiduschka, R. Lueft // Arch. Pharm.- 1919. - Vol. 257. - P. 33-69.

109. Hudson, B.J. Evening primrose oil and seed / B.J. Hudson // J. Amer. Oil Chem. Soc. - 1984. - Vol. 61. - P. 540-543.

110. Inhibitory effects of oenothera biennis (evening primrose) seed extract on Streptococcus mutans and S. mutans-induced dental caries in rats / M. Matsumoto-Nakano [et al] // Caries Res. - 2011. - Vol. 45, N 1. - P.56-63.

111. Johansson, A. Characterization of seed oils of wild, edible Finnish berries / A. Johansson, P. Laakso, H. Kallio // Chemistry and material science. - 1996.-Vol. 204, N 4. - P.300-307.

112. Kryzhanovskii, S.A. co-3 polyunsaturated fatty acids and the cardiovascular system / S.A. Kryzhanovskii, M.B. Vititnova // Human Physiology. - 2009. - Vol. 35, N. 4. - P. 491-501.

113. y-linolenic acid in Borage oil reverses epidermal hyperproliferation in Guinea Pigs / S. Chung [et al] // The American Society for Nutritional Sciences J. Nutr.- 2002.- Vol. 132, N 10. - P. 3090 - 3097.

114. y-linolenic acid supplementation for prophylaxis of atopic dermatitis - a randomized controlled trial in infants at high familial risk / J. van G. Christel [et al] // Americal J. of Clinical Nutrition. - 2003. - Vol. 77, N 4. - P. 943-951.

115. Muuse, B.G. Oenothera species and Borago Officinalis sources of gamma linolenic acid / B.G. Muuse, M.L. Essers, L. M. Van Soest // Netherlands J. of Agricultural Science. - 1988. - Vol. 36. - P. 357-364.

116. Oenothera paradoxa defatted seeds extract containing pentagalloylglucose and procyanidins potentiates the cytotoxicity of vincristine / E. Jaszewska [et al] // J. Physiol. Pharmacol. - 2010. - Vol. 61, N 5. - P. 637-643.

117. Papageorgiou, V.P. Lipids of the hexane extract from the roots of medicinal boraginaceous species / V.P. Papageorgiou, A.N. Assimopoulou // Phytochem. Anal. - 2003. - Vol.14, N 4. - P.251-258.

118. Phytotoic and antimicrobial constituents of Argyreia speciosa and Oenothera biennis / Y.N. Shukla [et al] // J. Ethnopharmacol. - 1999. -Vol. 67, N2. -P.241-245.

119. Polyphenolic profile and bioactivity study of Oenothera speciosa Nutt. aerial parts / M.S. Marzouk [et al] // Molecules. - 2009. - Vol. 14, N 4. - P. 1456-67.

120. Polyunsaturated fatty acids in the food chain in the United States / P.M. Kris-Etherton [et al] // Amer. J. Chem. Nutrition. - 2000. - Vol. 71. - P. 179 -188.

121. Protective mechanisms by omega-6 lipids in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) are associated with cytokines and eicosanoids / L.S. Harbige [et al] // Biochemical Society Transactions. - 1997. - Vol. 25, N 2. -P. 342.

122. Quantitative analysis of anti-inflammatory and radical scavenging triterpenoid esters in evening primrose seeds / J. Zaugg [et al] // J. Agric. Food Chem. - 2006. - Vol. 54, N 18. - P.6623-6628.

123. Saponified evening primrose oil reduces melanogenesis in В16 melanoma cells and reduces UV-induced skin pigmentation in humans / J.H. Koo [et al] // Lipids. - 2010. - Vol. 45, N 5. - P. 401-407.

124. Separation of gamma linolenic acid from evening primrose oil with urea inclusion-orthogonal experiment of optimizing technological parameters and observation of urea inclusion compound / I.H. Wang [et al] // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. - 2010. - Vol. 35, N 10. - P. 1251-1255.

125. Stonemetz, D. A review of the clinical efficacy of evening primrose / D. Stonemetz // Holist Nurs Pract. - 2008. - Vol. 22, N 3. - P.171-174.

126. Synthesis of diverse analogues of Oenostacin and their antibacterial activities / V. Srivastava [et al] //Bioorganic and Medicinal Chemistry. -2007. - Vol.15, N 1.-P. 518-525.

127. The protective effects of omega-6 fatty acids in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in relation to transforming growth factor-beta 1 (TGF-betal) up-regulation and increased prostaglandin E2 (PGE2) production / L.S. Harbige [et al] // Clinical and Experimental Immunology. - 2000. -Vol. 122.-P. 445-452.

128. Thorne, R. Gamma-Linolenic Acid / R. Thome // Alternative Medicine Review. - 2004. - Vol. 9, N 1. - P. 70-78.

129. Uzzan, A. Fatty acid composition and quality data for oils rich in GLA / A. Uzzan, J. Helme // Rev. Franc. Corps Gras. - 1992. - Vol. 39. - P. 339-343.

130. Van, H. Optimization of conditions for selective esterification by lipase to yield pure y-linolenic acid / H. Van, D. Litthauer // South African J. of science. - 2004. - Vol. 100, N 5. - P. 249-250.

131. Vaskovsky, V.E. A universal reagent for phopholipid analysis / V.E. Vaskovsky, E.Y. Kostetsky, I.M. Vasendin // J. Chromatogr. - 1975. - Vol. 114,N 1. -P.129-141.

132. Ziboh, V. A. Metabolism of polyunsaturated fatty acids by skin epidermal enzymes: generation of antiinflammatory and antiproliferative metabolites / V.A Ziboh, C.C. Miller, Y. Cho // American J. of Clinical Nutrition. - 2000. -Vol. 71, N1.-P. 361-366.

Особую благодарность выражаем директору института органической химии Уфимского научного центра РАН, академику Юнусову М.С. за предоставленную возможность выполнить отдельные фрагменты диссертационной работы на базе института и старшему научному сотруднику Юнусовой С.Г. за консультативную помощь при идентификации компонентов

жирного масла семян энотеры двухлетней.