Фармако-токсикологические свойства и применение Полисилара в ветеринарии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.03, кандидат наук Варивода Андрей Юрьевич

• Варивода Андрей Юрьевич
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Варивода Андрей Юрьевич

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Стимуляторы роста животных

2.1.1 Биогенные и тканевые препараты

2.1.2 Кормовые антибиотики

2.1.3 Пробиотики

2.1.4 Ферментные препараты

2.1.5 Препараты на основе янтарной кислоты

2.1.6 Белково-витаминные стимуляторы, микроэлементы, алюмосиликаты

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1 Состав и физико-химические свойства Полисилара

4.2 Токсикологическая оценка

4.2.1 Острая токсичность препарата

4.2.2 Хроническая и субхроническая токсичность препарата

4.2.3 Влияние Полисилара на патоморфологию внутренних органов животных при длительном введении

4.2.4 Влияние препарата Полисилар на показатели крови

4.2.5 Влияние Полисилара на функцию почек

4.2.6 Влияние на функцию желудочно-кишечного тракта

4.2.7 Местно-раздражающее действие препарата

4.2.8 Ветеринарно-санитарная оценка мяса

4.3. Фармакологические свойства Полисилара

4.3.1 Фармакодинамика препарата

4.4 Разработка показаний к применению и лечебно-профилактическая

эффективность Полисилара

4.4.1 Влияние препарата Полисилар на продуктивность и сохранность свиней

4.4.2 Профилактическая эффективность при антенатальной гипотрофии

поросят

4.4.3 Лечебная эффективность при гипотрофии поросят

4.4.4 Профилактическая эффективность Полисилара при гастроэнтеритах у поросят

4.5 Экономическая эффективность Полисилара при профилактике гипотрофии у поросят-отъемышей

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

6. ВЫВОДЫ

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармако-токсикологические свойства и применение Полисилара в ветеринарии»

1 ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В условиях промышленной технологии ведения животноводства широкое распространение имеют болезни обмена веществ, связанные с недостатком или неправильным соотношением белка, углеводов, витаминов, минералов и других биологически активных веществ. В свою очередь, общее нарушение обменных процессов зачастую сопровождается снижением иммунной защиты организма животных, активизацией патогенной и условно-патогенной микрофлоры и развитию на этом фоне различных заболеваний [87, 99].

В связи с этим, разработка, исследование и производство комплексных препаратов, предназначенных для профилактики и лечения болезней, связанных с нарушением обмена веществ, а также средств стимуляции роста и продуктивности животных является актуальным направлением ветеринарной науки [71, 68].

Степень разработанности темы. В последние годы сохранилась тенденция к созданию и использованию препаратов, изготовленных на основе природного сырья. К таким веществам относится обширная группа алюмоси-ликатных минералов, обладающих ценными специфическими свойствами -сорбционными, ионообменными, связующими, тиксотропными [104].

Расширение ассортимента фармацевтических препаратов, обладающих обменностабилизирующими свойствами и использующихся в качестве стимуляторов роста, является перспективным направлением современной ветеринарной науки. Применение аминокислот исключительно важных для животных, таких как метионин, ведет к восстановлению нарушенных функций организма и обеспечивает повышение выхода продуктов животноводства. В связи с этим целесообразно применение синтетических аминокислот, к которым относится препарат полизон, по химическому строению представляющий собой производное метионина. Препарат обладает выраженным мио-тропным действием, способствует активизации белкового обмена, в резуль-

тате чего ускоряются темпы роста, увеличивается прирост массы тела, более полно усваиваются корма рациона [113, 61, 52].

В качестве функциональных стимуляторов в последние годы активно исследуются дикарбоновые кислоты и их производные. Янтарная кислота участвует в биохимических реакциях энергетического, структурного и ферментного обеспечения организма, способствует повышению его иммунобиологической реактивности, устойчивости к ряду инфекционных заболеваний, нормализует обмен веществ, а также стимулирует рост и сохранность животных [60, 51, 46].

На основании вышеизложенного разработан комплексный препарат Полисилар, включающий эти элементы. Внедрению нового лекарственного средства в ветеринарную практику должно предшествовать всестороннее изучение его фармако-токсикологических свойств и лечебно-профилактической эффективности, что и вошло в задачи наших исследований.

Цели и задачи исследований. Цель настоящей работы состояла в разработке препарата Полисилар, изучении его фармако-токсикологических свойств и разработке показаний к применению в ветеринарной медицине. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить физико-химические свойства Полисилара;

- провести оценку возможных проявлений различных видов токсичности препарата на организм животных (острая, субхроническая, хроническая токсичность, местно-раздражающее действие);

- дать ветеринарно-санитарную оценку мяса животных после применения лекарственного средства;

- изучить фармакологические свойства (фармакодинамику) препарата;

- оценить влияние Полисилара на продуктивность и сохранность свиней;

- определить лечебно-профилактическую эффективность при гипотрофии и гастроэнтеритах поросят;

- разработать инструкцию по применению Полисилара.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований разработан новый препарат - Полисилар. Впервые определены его основные токсикологические параметры: показано, что препарат относится к группе малотоксичных соединений, при этом не обладает местно-раздражающим действием, что гарантирует безопасность его применения животным. Проведенной оценкой фармакологических свойств Полисилара установлено, что его фармакодинамика характеризуется положительным влиянием на гематологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота, снижая при этом уровень эндогенной интоксикации и накопление продуктов перекисного окисления липидов в организме животных. Установлена лечебная и профилактическая эффективность Полисилара при гипотрофии и гастроэнтеритах поросят, впервые экспериментально и теоретически обосновано его применение в ветеринарии.

По результатам исследований зарегистрирована заявка на патент РФ № 2014154543.

Практическая и теоретическая значимость работы. Предложен новый комплексный препарат Полисилар для профилактики и лечения гипотрофии свиней, снижения их заболеваемости гастроэнтеритами, который можно использовать в качестве обменностабилизирующего средства, а также для повышения сохранности и продуктивности животных. Дано экономическое обоснование использования Полисилара в животноводстве, что расширяет перспективы его практического применения в ветеринарной медицине.

Данные проведенных исследований учтены при разработке НТД (временная инструкция по применению препарата Полисилар в ветеринарии).

Изложенные в диссертационной работе материалы могут быть использованы при составлении научно-информационной литературы, в учебном процессе сельскохозяйственных ВУЗов, а также в ветеринарной практике.

Апробация материалов диссертации. Результаты экспериментальных

и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены и

обсуждены на заседаниях кафедры терапии и фармакологии, а также Ученых

6

советах факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»; научной студенческой конференции факультета ветеринарной медицины КубГАУ (Краснодар, 2013); Х международна научна практична конференция «Бъдещето въпроси от света на науката (Болгария, 2014); на IV международной конференции «Инновационные разработки молодых ученых - развитию агропромышленного комплекса» (Ставрополь, 2015).

Публикации результатов исследований. Основные материалы диссертации опубликованы в 9 научных статьях, 3 из которых - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- состав и физико-химические свойства Полисилара;

- токсикологическая оценка препарата;

- фармакологические свойства (фармакодинамика) лекарственного средства;

- результаты применения Полисилара в качестве средства повышающего продуктивность и сохранность свиней, а также лечебно-профилактического препарата при гипотрофии и гастроэнтеритах поросят.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 164 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 161 источник, в том числе иностранных - 24. Работа иллюстрирована 44 таблицами и 4 рисунками.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Стимуляторы роста животных

В настоящее время одной из актуальных проблем АПК России является поиск путей ускорения роста сельскохозяйственных животных с целью получения максимальной продуктивности при снижении затрат, которые находятся в прямой зависимости от количества и качества потребляемого корма. Оптимизация кормления позволяет выявить значительные резервы повышения эффективности производства животноводческой продукции. От соответствия питательности рационов научно обоснованным нормам зависят удои, привесы, показатели воспроизводства, развитие животных и сохранность их здоровья, продукционного генетического потенциала.

Данная задача может быть решена только с использованием научно-обоснованных методов увеличения продуктивности и экономической эффективности животноводства, что позволит определить наиболее значимые изменения в структуре кормового рациона, степень дефицитности отдельных питательных веществ, получить оптимальные рационы кормления животных при их минимальной себестоимости [96]. Во всем мире вопросы нормализации обменных процессов животных успешно решаются с помощью так называемого «принципа дополняющего действия кормов», а наилучшим способом является применение кормовых добавок. Они балансируют рационы по питательным веществам и способствуют более эффективному их усвоению, что стимулирует рост и продуктивное здоровье животных.

В связи с этим в животноводстве в настоящее время в рацион вводят различные добавки, содержащие витамины, микроэлементы, синтетические аминокислоты и ряд биологически активных веществ, оказывающих стимулирующее действие на рост животных [115, 126, 103].

Стимуляторами (от лат. Stimulo - подгоняю, поощряю) роста называют различного рода вещества, которые при введении их в организм способству-

ют более усиленному росту по сравнению со здоровыми животными, питающимися нормальными сбалансированными рационами.

Стимуляторы действуют длительное время без каких-либо отрицательных влияний на живой организм и обладают свойством активизировать функции организма в целом или его отдельных систем. При их помощи можно регулировать многие биохимические и физиологические процессы в организме. При этом физиологические процессы, присущие здоровому организму, сохраняются и проявляются активнее, повышается устойчивость организма к неблагоприятным факторам внешней среды [64].

К числу стимуляторов относятся антибиотики, некоторые витамины, тканевые и другие препараты, отдельные органические и минеральные вещества и пр. Сейчас существуют различные стимуляторы роста: на основе органических химических веществ, на основе ферментов.

При всем разнообразии используемых биологически активных веществ, которые постоянно изменяются и совершенствуются, с учетом новых достижений науки и практики, стимуляторы роста можно разделить на следующие группы:

1) микрокорма - необходимые кормовые вещества, применяемые в малом количестве (аминокислоты, витамины, микроэлементы). Эта группа средств, необходимых для животных, имеет широкое распространение и большие перспективы;

2) вещества, положительно влияющие на животных на фоне полноценного кормления (антибиотики, бактерийные препараты, факторы роста);

3) вещества, влияющие на обменные процессы в организме (гормоны, транквилизаторы, соединения мышьяка, препараты серы и др.);

4) средства, стимулирующие рост и откорм, в особенности больных, переболевших и ослабленных животных (тканевые препараты, лизаты, АСД, АЦС, сыворотки и кровь животных);

5) вещества, повышающие использование кормов (дрожжи, ферменты, горечи, соли).

Механизм действия стимуляторов очень сложен; в его основе, по-видимому, лежат реакции нервно-рефлекторного характера, изменяющие обмен веществ и энергию организма. Практически стимулирующий эффект складывается из трех основных факторов: лучшее переваривание кормов, более полное всасывание продуктов пищеварения и улучшение синтетических (ассимиляционных) процессов [127].

Многими исследователями (Берстон М., 1970; Антипов В.А., 1991; Субботин В.В., Сидоров М.Ф., 1998; Иванов А., 2002; Егоров, И.К., Демидова О.В., 2003; Данилевская Н.В., 2005; Кузнецова Т.С., 2007; Иванова А.Б., Ноздрин Г.А., 2008; Ашихмин Д., 2010;), изучены вопросы увеличения производства продуктов животноводства и повышения их качества при использовании ростостимулирующих, антистрессовых, адаптогенных препаратов, минеральных веществ, аминокислот и ферментных препаратов в виде инъекций или кормовых добавок.

Фармакологическая стимуляция роста является ценным вспомогательным факторов увеличения живой массы, улучшения развития и повышения резистентности. Наивысшая эффективность достигается только правильным выбором и точным применением нужных препаратов. Оптимально физиологическая стимуляция выражается повышением прироста массы на 14-20%. Повышение более 25% обычно является патологическим, кратковременным и скоро сменяющимся нарушением развития. Основная часть ростостимули-рующих препаратов не оказывает негативного влияния на общее состояние и физиологические закономерности жизненно важных процессов [136].

2.1.1 Биогенные и тканевые препараты

Применение стимуляторов роста в животноводстве началось с применения тканевых препаратов с лечебной целью. Начало применения тканевых препаратов относится к глубокой древности - временам Гиппократа, но научное обоснование получено и строго экспериментальная проверка проведена лишь в ХХ веке.

Тканевые препараты приготавливаются из разных тканей и органов животного и растительного происхождения.

Теория тканевых препаратов, известная под названием теории гистоли-затов, создана и разработана М.П. Тушновым (1938). Гистолизатами, по М.П. Тушнову, называются органотерапевтические препараты, действующим началом которых служат продукты распада тканей отдельных органов.

Первоначально М.П. Тушнов рекомендовал органотерапевтические препараты - лизаты - в качестве лечебного средства, а в скором времени - как стимулятор, повышающий продуктивность сельскохозяйственных животных [123].

М.П. Тушновым разработаны методы приготовления гистолизата, при котором под влиянием различных факторов - аутолиза, ферментолиза или гидролиза - получаются продукты распада, близкие по химическому составу, но различные по специфическому действию на организм в зависимости от исходного материала для расщепления. При этом была выявлена и изучена специфичность действия лизатов на различные ткани. Выяснилось, что ова-риолизаты повышают яйценоскость птиц, маммолизаты - лактационную деятельность, миолизат благотворно действует на качество мяса.

Применение лизатов повышает привесы животных на 19 - 23%, влияет на откорм и на молочную продуктивность [34].

Биогенные стимуляторы представляют собой комплекс биологически активных веществ животного и растительного происхождения, оказывающих разностороннее стимулирующее воздействие на различные системы и органы макроорганизма. Биогенные стимуляторы образуются в фито- и зооорганиз-мах в ответ на ряд неблагоприятных внешних воздействий (температура, световое и рентгеновское облучение, воздействие токсических агентов и др.).

Биогенные стимуляторы, введенные в какой-либо другой организм,

усиливают обмен веществ, повышают энергетические процессы и жизненные

функции организма, увеличивают его сопротивляемость к болезнетворным

факторам и регенеративные свойства. Биогенные стимуляторы не специфич-

11

ны ни в видовом, ни в гистологическом отношении. Более того, биогенные стимуляторы и растительного и животного происхождения действуют на ткани и организм животного и человека.

Отмечено, что в изолированных тканях, находившихся в неблагоприятных условиях существования, происходит накопление карбоновых кислот и аминокислот, обладающих высокой биологической активностью.

Впервые биогенные стимуляторы с лечебными целями применил В. П. Филатов в 1913 г., используя копирование на холоде роговиц для пересадки с целью восстановления зрения.

В отличие от концепции М.П. Тушнова, по которой действующим началом гистолизатов являются продукты распада белков, тканей и обмена клеток, обладающие видовой и тканевой специфичностью, лечебное действие тканевых препаратов, приготовленных по В.П. Филатову, оказывают вещества, вырабатываемые живыми клетками в процессе жизнедеятельности их в крайне неблагоприятных условиях.

Впоследствии В. П. Филатовым и его учениками были испытаны и другие животные и растительные материалы - стекловидное тело и сосудистая оболочка глаза, кожа, печень, селезенка, плацента, мышцы, листья алоэ, агавы, люцерны, гороха и других растений, а также препараты лиманной грязи или пресных озер, торфа, чернозема.

Основные положения образования и свойств тканевых препаратов по В.П. Филатову состоят в том, что растительные или животные ткани, отделенные от организма, под воздействием неблагоприятных условий, затрудняющих жизнь, но не превышающих, норму реакции, подвергаются биохимической перестройке. В результате этого в тканях образуются вещества, стимулирующие биохимические процессы в них и способствующие сохранению их жизни в неблагоприятных условиях. Эти вещества названы В.П. Филатовым биогенными стимуляторами.

Препараты, содержащие биогенные стимуляторы, изготовляют из тканей растительного и животного происхождения, подвергнутых неблагопри-

12

ятным воздействиям (охлаждение, ультрафиолетовое или рентгеновское облучение, содержание в темноте и т. п.), а также из торфа, лиманных грязей, в которых образование биогенных стимуляторов обусловлено вымершей микрофлорой и микрофауной [8, 146].

2.1.2 Кормовые антибиотики

Использование антибиотиков в ветеринарии началось сразу же после их открытия. Это объясняется целым рядом преимуществ, которыми обладают антибиотики по сравнению с другими химиотерапевтическими веществами: антимикробное действие в очень малых дозах; широкий спектр противо-микробного действия, что особенно важно при использовании антибиотиков в борьбе с инфекциями, вызванными несколькими возбудителями, сравнительно малая токсичность. Обладая специфическим механизмом действия, антибиотики избирательно подавляют развитие тех или иных патогенных микроорганизмов. Подавляя развитие патогенных микроорганизмов и, определенным образом, стимулируя защитные силы организма животного, антибиотики показали высокую эффективность действия при лечении и профилактике многих заболеваний сельскохозяйственных животных.

Однако помимо применения в ветеринарии, антибиотические вещества используются и для стимуляции роста сельскохозяйственных животных.

Принципиальная возможность стимулирующего действия антимикробных препаратов на рост животных была показана советским ученым А.Р. Ми-ненковым в 1943 году. Он обнаружил, что ежедневные добавки в корм поросятам и цыплятам небольших порций азотобактера очень заметно ускоряет рост и увеличивает привесы животных на 15-30% по сравнению с контрольными.

Ускорение прироста животных А.Р. Миненков объяснил наличием

стимулирующих веществ в культуре азотобактера. Стимулирующее действие

продуктов метаболизма азотобактера (витамины, ауксины) на растения и

13

микроорганизмы было показано неоднократно. Вскоре была обнаружена возможность стимулировать животных не культурой микробов, а продуктами их метаболизма - антибиотическими веществами.

Исследование действия антибиотиков па рост и развитие сельскохозяйственных животных проводились учеными многих стран: США, Великобритании, Франции, Польши, Германии, Швеции, Италии и других. Значительные успехи в этом направлении достигнуты в Советском Союзе благодаря работам, проведенным под руководством З. В. Ермольевой, Н.А. Красильни-кова, Н. И. Леонова, К. М. Солнцева, А. X. Саркисова и других ученых.

Практическое использование антибиотиков в качестве добавок в корм сельскохозяйственных животных впервые начало широко применяться в 50-е годы XX столетия. В Европе эта практика продержалась до тех пор, пока Евросоюз не ввел запрет на их использование в 2006 г (Красильников Н.А., Уранов А.А., 1974; Тахтаджян А.Л., 1974). [74, 118]

К кормовым антибиотикам относят препараты, при введении которых в рационы животных и птицы улучшается обмен веществ, повышается коэффициент использования кормов, активизируется резистентность организма. Вследствие этого молодые животные лучше развиваются и быстрее растут, снижается их заболеваемость и сокращается отход. При рациональном применении кормовых антибиотиков в условиях правильного кормления и содержания животных повышается прирост массы тела, снижается расход кормов на единицу продукции и себестоимость мяса, сокращается период откорма. Кормовые антибиотики в малых дозах регулируют состав кишечной микрофлоры. В кишечнике уменьшается содержание клостридий и других бактерий, образующих токсины и служащих конкурентами нормальной физиологической микрофлоры. Считают, что при добавлении 10—40 г активного вещества на 1 т корма в кишечнике животных создаются концентрации, достаточные для устранения или подавления патогенной микрофлоры. Кроме того, снижение продуктивности может быть вызвано стойловым утомлением

животных, зависящим от степени зараженности окружающей среды микро-

14

бами. Введение в рацион антибиотиков устраняет их неблагоприятное воздействие на организм.

Кормовые антибиотики положительно влияют на обменные процессы в организме: активизируют функциональную деятельность органов пищеварения, гормональной системы, улучшают усвоение микро- и макроэлементов, витаминов и т. д. При скармливании кормовых препаратов животным качество мяса и мясопродуктов не ухудшается [41].

Для того чтобы удовлетворить нужды сельского хозяйства, была создана специальная отрасль промышленности для производства кормовых антибиотиков. Первые опыты по изучению действия антибиотиков на рост животных были проведены с использованием кристаллических медицинских антибиотиков. В дальнейшем для этой цели стали использовать неочищенные антибиотические препараты, содержащие мицелий и культуральную жидкость продуцентов. Оказалось, что такие комплексные препараты антибиотиков еще более эффективны при добавке в корма сельскохозяйственных животных, чем очищенные антибиотики, так как, помимо антибиотиков, содержат и другие микробные метаболиты, способные оказывать положительное воздействие на обмен веществ животных.

К таким биологически активным продуктам жизнедеятельности микроорганизмов в первую очередь следует отнести витамины группы В, некоторые незаменимые аминокислоты, гормоноподобные вещества и ряд неинде-фицированных факторов роста [42].

Д. Чотински с соавторами (1985), на изучали влияние биологически активных веществ на рост и развитие цыплят-бройлеров. Цыплят (1358 гол.) выращивали с суточного до 49-дневного возраста на одинаковых рационах, но с добавкой различного количества кормовых антибиотиков. Цыплята 1 группы (контроль) добавки не получали. Бройлерам 2, 3, 4, 5, 6, 7 групп в комбикорма добавляли 36 млшир(-1) цинкбацитрацина, 20 млшир(-1) пейзо-на, 4,8 мл^ир(-1) флавомицина, 20 млшир(-1) хлортетрациклина, 20 млшир(-1) виргиниамицина и 10 млшир(-1) авотана соответственно. У цып-

15

лят, получавших различные антибиотики, живая масса увеличивалась на 2,47,6%, затраты корма на 1 кг прироста снижались на 1,3-8,3%, отложение белка в теле повышалось на 2,4-9,4%, а энергии на 6,8-22,5% по сравнению с контрольной группой. Установлено, что при включении в комбикорма для цыплят кормовых антибиотиков повышается энергия роста птицы, улучшается оплата корма, а качество получаемой продукции не ухудшается.

Испытания кормовых антибиотиков - кормогризина и бациллихина в промышленном кролиководстве показали, что кормогризин (в дозе 5 г чистого гризина на 100 кг корма) уменьшает в 2 раза общий отход животных от желудочно-кишечных заболеваний. Бациллихин (в дозе 37 г чистого бацитрацина на 100 кг корма) увеличивает сохранность молодняка на 5,7%, а прирост живой массы - на 17% к 3-месячному возрасту [101].

Н.Г. Макарцевым (1984), был проведен опыт на 4 группах поросят раннего отъема в свиноводческом комплексе «Кузнецовский» Московской области в возрастные периоды 26 - 60 и 61-106 дней Поросята 1 (контрольной) группы в составе полнорационных комбикормов получали добавки антибиотиков медицинского назначения (пенициллин, дигидрострептомицин и окси-тетрациклин), 2, 3 и 4 групп - добавки кормовых антибиотиков фрадизина (тилозина), фрадизина с бацитрацином и фрадизина с кормогризином. Добавка фрадизина в рацион поросят 2 группы способствовала увеличению среднесуточного прироста на 6,0-2,6% по сравнению с контролем, и снизилась затрата корма на 1 кг прироста в среднем на 2,7%. Наибольшая эффективность отмечена при добавке фрадизина с бацитрацином и кормогризином. Среднесуточный прирост свиней 4 группы был выше на 16,6% и 7,1% по сравнению с контролем. При добавке кормовых антибиотиков улучшилась переваримость питательных веществ корма, увеличивалось отложение азота, кальция и фосфора в теле и снижались случаи желудочно-кишечных заболеваний поросят.

Монензин, добавляемый в рационы крупного рогатого скота в дозе 200

мг/кг корма, увеличивал прирост на 13,7%. Монензин, добавляемый в рацио-

16

ны ягнят в дозе 10 мг/гол/дн. повышал прирост на 20% и снижал расход корма на 19% [140].

Н.Г. Макарцев с соавторми (1984), использовали антибиотики в рационах растущих и откармливаемых свиней в условиях промышленных комплексов. В научно-хозяйственном опыте, проведенном на 5 группах поросят раннего отъема (125 голов) в период выращивания и откорма (26-222 дней) были изучены кормовые формы антибиотиков в питании молодняка свиней (фради-зин, кормогризин и бацитрацин), а также оценено их влияние на продуктивность животных, усвоение азота, кальция и фосфора рациона, накопление витаминов и микроэлементов в организме животных. Показано, что наибольшая эффективность от применения фрадизина при выращивании поросят получена при скармливании его в смеси с бацитрацином и особенно кормогризином. Среднесуточный прирост массы тела у поросят этих групп был выше, чем в контроле, соответственно на 8,5 и 16,6% в период с 26-го до 60-го дня возраста и на 3,6 и 7,1% - с 61-го до 106-го дня. Расход корма на 1 кг прироста снизился соответственно на 3,6 и 5,8% по отношению к 1 группе. Добавки кормового препарата фрадизина в состав комбикормов в период откорма свиней оказали положительное влияние на увеличение прироста массы тела (на 4,5%) и снижение затрат корма на 1 кг прироста (на 3,2%).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Варивода Андрей Юрьевич, 2016 год

Норма

Наименование показателя Химически Чистый для Чистый (ч.)

чистый (х. ч.) анализа (ч. д. а.)

Внешний вид Порошок белого цвета или прозрачные бесцветные кристаллы лимонного вкуса

Молекулярная масса 118,09

Янтарная кислота (С4Н604), не менее 99,9 99,9 99,7

Температура плавления, °С (препарат должен плавиться в 185-187 185-187 184-187

интервале 1,0°С)

Нерастворимые в воде вещества, %, не более 0,002 0,002 0,005

Остаток после прокаливания в виде сульфатов, %, не более 0,005 0,010 0,020

Л Сульфаты ^04 -), не более 0,002 0,002 0,005

Л Фосфаты (Р04 -), не более 0,0005 0,0010 0,0020

Продолжение таблицы 3

Хлориды (С1), не более 0,0005 0,0010 0,0010

Аммонийные соли (МН4+), %, не более 0,001 0,001 0,005

Железо ^е), %, не более 0,0005 0,0005 0,0040

Тяжелые металлы (РЬ), не более 0,0005 0,0010 0,0020

Вещества, восстанавливающие КМп04 Должен выдерживать испытания

Гарантийный срок хранения 3 года

Янтарная кислота является универсальным промежуточным метаболитом, образующимся при взаимопревращении углеводов, белков и жиров в растительных и животных клетках. В физиологических условиях янтарная кислота диссоциирована, поэтому название ее аниона - сукцинат, часто применяют как синоним термина «янтарная кислота». Она является продуктом пятой и субстратом шестой реакции в цикле Кребса. Являясь естественным веществом, янтарная кислота присутствует во всех организмах.

Превращение янтарной кислоты в организме связано с продукцией энергии, необходимой для обеспечения жизнедеятельности. При возрастании нагрузки на любую из систем организма, поддержание ее работы обеспечивается преимущественно за счет окисления янтарной кислоты. Мощность системы энергопродукции, использующей янтарную кислоту, в сотни раз превосходит все другие системы энергообразования организма. Кроме того, янтарная кислота обладает и такими эффектами, как актопротекторный и противовирусный. Участвуя в цикле трикарбоновых кислот, усиливает анаболические процессы в организме, способствует нормализации обмена веществ, повышению иммунобиологической реактивности, устойчивости к ряду инфекционных заболеваний. Усиливая продукцию медиаторов торможения в коре головного мозга, обладает противострессовым действием. Янтарная кислота ослабляет действие токсических веществ, токсинов бактерий и

микотоксинов на организм, улучшает рост, развитие, продуктивность и сохранность животных, проявляет общеукрепляющие и восстанавливающие свойства [3].

Полизон - фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио (Б-оксо-Б-имино)-масляной кислоты. Препарат содержит не менее 80% действующего вещества, 35% фосфат-иона, рН 1%-ного водного раствора - 3-5. Выпускается в форме 2,5 и 10%-ного порошка от белого до кремового цвета. Производится ООО «Поливит» (г. Уфа).

По химическому строению он представляет собой производное метио-нина - незаменимой аминокислоты, необходимой для роста и азотистого равновесия организма животных. Обладает выраженным миотропным действием, необходимым для осуществления реакций трансметиллирования, приводящих к биосинтезу холина, креатинина, адреналина и других биологических веществ.

Полизон способствует активизации белкового обмена, в результате чего ускоряются темпы роста, увеличивается прирост массы тела, более полно усваиваются корма рациона (из наставления по применению № 13-4-03/0481 от 26.06.2002 г).

Таким образом, все компоненты препарата Полисилар, в той или иной степени, могут оказывать влияние на различные стороны обмена веществ, потенцируя и дополняя друг друга. При этом они обладают фармацевтической совместимостью (физической, химической), а при смешивании не образуют эвтектических смесей (не теряют сыпучесть).

Однако внедрение новых современных препаратов в клиническую практику осуществимо лишь при условии детального изучения их специфической фармакологической активности и безопасности для животных и человека.

Поэтому следующим этапом наших исследований явилось изучение токсикометрических характеристик препарата Полисилар.

4.2 Токсикологическая оценка 4.2.1 Острая токсичность препарата

Токсикометрическую оценку препарата Полисилар проводили в остром опыте на лабораторных животных (белые нелинейные мыши) и птице по методике Deishmann и Le Blanc [102].

Сущность данной методики состоит в том, что берется шкала доз, интервал между которыми отличается друг от друга в 1,5 раза. Каждая доза дается только одному животному, при этом находятся две крайние дозы, большая из которых вызывает гибель животного, а меньшая - нет. Путем простого нахождения средней между ними испытываются несколько промежуточных доз (как правило - 1-2), меньшая из которых, не вызывающая гибели животного принимается за LD0, а большая, вызвавшая гибель - за LD50. На основании этих данных строится график зависимости доза-эффект (критерий эффективности - гибель подопытного животного). Две промежуточные дозы - LD16 и LD84 определяются графически, аналогично находится LD100 (предполагаемая абсолютно смертельная доза). После чего измеряется интерполяционный угол X, зная который можно построить график зависимости для другого вида животного.

В первой серии опытов было использовано 16 белых беспородных мышей (со средней массой тела 21,3 грамма), животных разбили на две группы по принципу пар-аналогов и поместили в специальные отдельные клетки за двое суток до начала эксперимента для адаптации.

В подготовительный период животным было обеспечено полноценное питание, включающее в себя зерносмесь (состоящую из пшеницы, ячменя, риса, семян подсолнечника), овощи и неограниченный доступ к воде. За 6 часов до введения исследуемого образца кормление и поение было прекращено.

После затравки в течение 14 дней проводили наблюдения за мышами, регистрируя характер токсического действия изучаемого препарата, в динамике оценивая поведение, двигательную активность и тактильную чувстви-

тельность животных, поедаемость корма и отправление физиологических функций, корниальный и кожный рефлексы.

При определении острой токсичности нового лекарственного средства препарат Полисилар вводился мышам внутрижелудочно в виде водной взвеси, с помощью полиэтиленового зонда и шприца, в дозах от 0,42 г/кг до 7,1 г/кг массы тела (пользуясь шкалой интервалов, составленной авторами метода). Для удобства введения навеску образца разводили дистиллированной водой до объема 0,3 мл, контрольным животным в том же объеме вводили дистиллированную воду. Результаты опытов представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Определение острой токсичности препарата Полисилар на мышах (п = 8)

№ Масса тела, г Доза, г/кг массы тела Доза, г/животное Эффект

1 22,2 0,42 0,009 Гибели не зарегистрировано. Кратковременное угнетение, связанное с манипуляциями, проходящее в течение 30 мин. В дальнейшем отклонений в поведении и клиническом состоянии не выявлено.

2 20,6 0,62 0,12

3 21,4 0,94 0,02

4 20,2 1,4 0,03

5 20,5 2,1 0,04

6 21,8 3,2 0,07

7 22,3 4,7 0,1

8 21,5 7,1 0,15

В течение 30-ти минут после введения препарата зарегистрировано незначительное угнетение животных, как в опытных, так и контрольных группах. Подобная реакция обусловлена проведением манипуляций и значительным объемом вводимых веществ. В дальнейшем отклонений в поведении и клиническом состоянии мышей не выявлено. По показателям общего состояния, внешнего вида, шерстного покрова, видимых слизистых оболочек, отношению к воде и пище, подвижности, ритму и частоте дыхания подопытные мыши не имели отличий от контрольных за весь период наблюдений.

Во второй серии опытов по определению острой токсичности препарата Полисилар использовали цыплят со средней массой тела 552,5 г. Для экс-

перимента по принципу парных аналогов было подобрано 16 особей птицы, из которых сформировали 2 группы. В опытной группе препарат Полисилар вводили в виде 20%-ной водной взвеси per os однократно, при помощи пластикового катетера, в дозах от 0,42 г/кг до 7,1 г/кг массы тела. Контрольная группа получала дистиллированную воду в аналогичном объеме. Наблюдения за цыплятами вели в течение 14 суток. Результаты опытов представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Определение острой токсичности препарата Полисилар на

птице (n = 8)

№ Масса тела, г Доза, г/кг массы тела Доза, г/животное Гибель Клиника интоксикации

1 540 0,42 0,27 Нет Отсутствует

2 558 0,62 0,35 Нет Отсутствует

3 546 0,94 0,51 Нет Отсутствует

4 551 1,4 0,77 Нет Отсутствует

5 562 2,1 1,18 Нет Отсутствует

6 549 3,2 1,76 Нет Реакция на введение

7 554 4,7 2,6 Нет Реакция на введение

8 560 7,1 4,0 Нет Реакция на введение

Установлено, что в течение периода наблюдений введение препарата Полисилар не вызывало гибели и острой интоксикации птиц, не влияло отрицательно на их общее состояние и поведение (цыплята были подвижны, с хорошо выраженным аппетитом, рефлексы сохранены).

Таким образом, на основании проведенных токсикометрических исследований были получены параметры острой токсичности нового препарата Полисилар при пероральном введении. Установлено, что по ГОСТу 12.1.007-76 лекарственное средство Полисилар относится к IV классу опасности - малоопасные вещества.

4.2.2 Хроническая и субхроническая токсичность препарата

Первую серию экспериментов по определению параметров субхронической токсичности препарата Полисилар проводили на лабораторных животных (белые беспородные мыши) со средней массой тела 27,2±1,9 г. По принципу парных аналогов было отобрано 40 животных, которых разделили на 4 группы - по 10 особей в каждой.

Поскольку в остром опыте среднесмертельная доза (ЬВ50) установлена не была, а для проведения эксперимента необходимо было определить 3 уровня токсических доз, отправным моментом для выбора дозировок явился максимальный объем использованный при однократном введении (7100 мг/кг массы тела). Схема опыта представлена в таблице 6.

Таблица 6 - Схема опыта при определении субхронической токсичности препарата Полисилар на мышах (п = 10)

Группы Доза препарата

1 опытная 1/5 - 1420 мг/кг массы тела (38,6 мг/животное)

2 опытная 1/10 - 710 мг/кг массы тела (19,3 мг/животное)

3 опытная 1/20 - 142 мг/кг массы тела (3,9 мг/животное)

4 контрольная Болюсы без препарата

Образцы препарата Полисилар задавали мышам в течение 28 дней один раз в сутки индивидуально в виде болюсов, состоящих из желтка, крупы и растительного масла. Контрольная группа получала только болюсы без препарата.

За всеми животными в течение срока эксперимента велись наблюдения: учитывалось общее состояние, аппетит, двигательные и поведенческие реакции.

При оценке изменений, наблюдаемых у животных в субхроническом токсикологическом эксперименте, исключалась возможность влияния всех побочных факторов, не связанных с приемом препарата (заболевание животных, их питание, содержание и т. п.).

Критериями оценки субхронической токсичности препарата явились: число павших животных и сроки гибели, возможная картина интоксикации, клиническое состояние животных, активность (повышенная, адинамия), реактивность (равнодушие, возбудимость, агрессивность), состояние шерстного покрова (выпадение шерсти, пятнистая шерсть, сухость, влажность, изменение цвета), состояние слизистых оболочек, характер дыхания, сердцебиения, мочеиспускания, а также влияние препарата на периферическую кровь, биохимические показатели сыворотки крови и весовые показатели массы тела животных.

Определение массы тела у всех животных проводили в начале опыта и по его окончанию. Кровь для морфо-биохимических исследований брали в конце опыта у пяти животных из каждой группы.

В результате проведенных опытов было установлено, что Полисилар в испытанных дозах не оказал выраженного токсического действия на организм животных. На всем протяжении эксперимента существенных отклонений от нормы в поведении, общем состоянии и аппетите лабораторных мышей не регистрировали. Животные были подвижны, реакции и рефлексы сохранены. Тактильная и болевая чувствительность не нарушались, изменения мышечного тонуса (ослабление или повышение) не наблюдалось. При исследовании шерстного покрова - выпадения шерсти, алопеций, изменения цвета и структуры не установлено. Отклонений в функциях пищеварения и мочеотделения отмечено не было.

Анализ динамики массы тела мышей выявил незначительные отличия в интенсивности роста животных, используемых в эксперименте, в сторону увеличения гравиметрических показателей (таблица 7).

Колебания в средних показателях между группами составили от 1,0 до 2,6%. Наименьший процент прироста был зарегистрирован в контрольной группе - 13,3%, а максимальный показатель установлен в 1-й опытной группе - 15,9% , но достоверность этих данных подтверждена не была, поскольку различия между группами составляли менее 5%.

Таблица 7 - Динамика массы тела белых мышей при определении суб-

хронической токсичности препарата Полисилар (М±т; п=10)

Группы Масса в начале опыта, г Масса в конце опыта, г Прирост

грамм %

1 опытная 26,9±2,0 31,2±1,4 4,3 15,9

2 опытная 27,4±2,1 31,5±1,8 4,1 14,9

3 опытная 28,1±1,5 32,1±2,2 4,0 14,2

4 контроль 26,3±1,8 29,8±1,2 3,5 13,3

В конце эксперимента у пяти животных из каждой группы брали кровь для гематологических и биохимических исследований, для чего мышей подвергли эвтаназии методом усыпления эфиром. У этих же животных было проведено макроскопическое исследование внутренних органов (рисунок 1) и определены массовые коэффициенты органов (0,1 г/10 г веса тела). Данные представлены в таблице 8.

Рисунок 1. Макроскопическое исследование внутренних органов мышей после применения препарата Полисилар в субхроническом эксперименте

Таблица 8 - Массовые коэффициенты органов белых мышей при определении субхронической токсичности препарата Полисилар (M±m; n=10)

Массовые коэффициенты органов Группы

1 опытная 2 опытная 3 опытная 4 контрольная

Печень 35,2±1,2 35,3±0,9 34,9±1,1 35,4±1,0

Почки 9,5±0,7 9,6±0,6 9,3±0,5 9,4±0,3

Сердце 3,5±0,3 3,6±0,4 3,5±0,2 3,4±0,3

Селезенка 3,3±0,14 3,6±0,11 3,2±0,15 3,4±0,09

Легкие с трахеей 6,8±0,3 6,1±0,2 6,4±0,4 6,6±0,15

Изменений во внешнем виде лабораторных мышей выявлено не было -состояние кожных и шерстных покровов обычное. При вскрытии внутренние органы в торакальной и абдоминальной полостях были обычными по цвету, консистенции, анатомо-топографическим параметрам. Абсолютная и относительная масса внутренних органов мышей, которым вводили исследуемый препарат, не выходила за пределы физиологической нормы для животных данного вида и значимо не отличалась от показателей контрольной группы.

При гематологическом исследовании крови животных (данные представлены в таблице 9) установлены изменения в уровне эритроцитов у мышей первой опытной группы, проявляющиеся некоторым их снижением до

12

границ видовой нормы (7,05±0,24 10 /л), в группах же с меньшими дозировками препарата значимой разницы с контрольными животными не выявлено.

Аналогичная ситуация проявилась и в содержании лейкоцитов, введение образца Полисилара в максимальной дозировке привело к повышению на уровне тенденции концентрации лейкоцитов на 13,9%, более низкие дозировки препарата не оказывают влияния на содержание данных клеток белой крови.

По остальным гематологическим показателям крови существенных различий по группам установлено не было, все изменения регистрировались в пределах видовых значений нормы.

Таблица 9 - Гематологические показатели крови белых мышей при примене-

нии препарата Полисилар в субхроническом эксперименте (М±т; п=5)

Показатели Группы границы

1 опытная 2 опытная 3 опытная Контроль нормы

1 9 Эритроциты, 10 /л 7,05±0,24 7,84±0,38 7,92±0,21 8,14±0,19 7-10,5

Лейкоциты, 109/л 9,8±0,25 9,1±0,42 7,9±0,33 8,6±0,72 5-15

Гемоглобин, г/л 124,3±5,1 133,7±7,4 115,6±6,9 127,3±5,2 80-140

Гематокрит, л/л 0,276±0,01 0,333±0,12 0,292±0,01 0,242±0,01 0,2000,350

Средний объем эритроцитов, фл. 51,3±4,8 47,3±2,4 48,8±3,0 50,1±4,2 45-58

Среднее содержание гемоглобина в 17,5±0,91 17,9±0,56 16,4±2,4 16,3±0,48 15-18

эритроците, пг

Средняя конц. гемоглобина, г/л 357,4±9,8 348,3±6,1 364,3±10,4 347,5±8,7 310-370

Тромбоциты, 109/л 203,3±11,7 196,7±9,3 214,5±10,7 190,1±8,4 200-400

Лейкоформула, %: эозинофилы 1,3±0,05 0 2,6±0,01 1,5±0,01 0-4

палочкоядерные 2,2±0,02 1,3±0,06 1,8±0,02 2,7±0,04 1-5

сегментоядерные 25,6±1,3 24,5±2,4 29,5±2,6 24,3±1,9 18-30

лимфоциты 67,6±3,7 71,5±2,3 63,8±1,4 68,7±2,2 60-78

моноциты 3,3±0,06 2,7±0,05 2,3±0,02 2,9±0,04 2-5

При оценке биохимического профиля крови (таблица 10) установлено, что длительное введение образца препарата Полисилар оказало влияние на концентрацию общего белка в сыворотке крови. Так, уровень общего белка в первой опытной группе превысил значения контрольных аналогов на 30,3%, во второй опытной группе - на 21,2% и в третьей опытной группе - на 9,8% при уровне достоверности Р< 0,05.

Оценивая концентрацию другого метаболита белкового обмена - мочевины установлено, что ее уровень в опытных группах был выше показателя контрольных мышей на 16,2%, 11,8% и 7,3% соответственно (на уровне тенденции). Поскольку содержание мочевины, как правило, напрямую коррелирует с концентрацией общего белка, то можно говорить об активизации про-

теинсинтетической функции печени у опытных животных под влиянием

66

компонентов препарата. При этом стабильный уровень креатинина в опытных группах исключает почечную задержку. Возрастание показателей белкового обмена можно объяснить поступлением в организм животных полизона, который является производным метионина (незаменимая аминокислота), что и приводит к интенсификации азотистого метаболизма.

Таблица 10 - Биохимические показатели крови белых мышей при применении препарата Полисилар в субхроническом эксперименте (M±m; n=5)

Показатели Группы

1 опытная 2 опытная 3 опытная Контроль

Общий белок, г/л 82,2±1,4* 76,5±2,1* 69,3±2,8* 63,1±1,6

Мочевина, мМ/л 7,9±0,9 7,6±1,2 7,3±0,9 6,8±0,5

Холестерин, мМ/л 2,3±0,2 2,5±0,1 2,2±0,4 2,0±0,3

Глюкоза, мМ/л 10,9±3,0 9,7±2,1 12,4±0,8 11,5±0,6

АлАТ, Ед/л 59,7±2,4 48,3±3,2 51,2±2,3 62,4±3,1

АсАТ, Ед/л 266,3±8,4 246,4±9,5 261,4±9,2 253,6±10,7

Билирубин общий, мкМ/л 4,4±0,2 4,5±0,3 4,7±0,5 4,5±0,6

Щелочная фосфатаза, мМ/л 231,7±16,2 212,5±12,1 195,8±10,5 234,7±14,6

Кальций общий, мМ/л 2,5±0,2 2,4±0,3 2,4±0,1 2,3±0,3

Фосфор неорганический, мМ/л 4,0±0,7 3,9±0,5 4,4±0,8 3,6±0,6

Креатинин, мМ/л 38,3±2,5 41,3±1,5 36,6±0,8 35,8±1,8

Степень достоверности: * - Р< 0,05 по отношению к контролю

По остальным биохимическим показателям сыворотки крови существенных различий по группам установлено не было, все изменения регистрировались в пределах видовых значений нормы.

Таким образом, длительное применение исследуемого образца препарата Полисилар не привело к развитию токсикоза, и не позволило установить его вредного влияния на организм лабораторных мышей.

Во второй серии субхронических экспериментов определение кумулятивных свойств препарата Полисилар проводили на белых беспородных крысах по методике Лим с соавторами (1961).

При токсикологической оценке изучаемого вещества чрезвычайно важным является выяснение вопроса - обладает ли данное соединение кумуля-

тивным свойством. При многократном поступлении вещество может либо накапливаться в организме (материальная кумуляция, кумуляция вещества), либо вызывать суммирование эффекта, т.е. суммирование изменений, связанных с длительным действием яда (функциональная кумуляция). Выяснение степени кумулятивного действия вещества позволяет с большой вероятностью довольно быстро предсказать возможность развития хронического отравления.

Для изучения кумулятивных свойств Полисилара было сформировано две группы белых крыс по 10 особей в каждой:

1-я опытная - препарат Полисилар вводился перорально дробно в возрастающих дозах в соответствии со схемой, представленной в таблице 11;

2-я контрольная - интактные животные.

Поскольку, в остром опыте среднесмертельная доза (ЬВ50) установлена не была, то для расчета дозировок использовался максимальный объем препарата, введенный животным при определении острой токсичности (7100 мг/кг массы тела), соответственно 1/10 равнялась 710 мг/кг массы тела. Эту дозу вводили первые 4 дня, затем каждые последующие 4 дня дозу повышали в 1,5 раза. Наблюдения за животными проводили в течение 28 дней, при этом учитывали: общее клиническое состояние, характер и степень активности, реакцию животных на ориентировку, координацию движений, тактильные и болевые раздражители, наличие тремора, судорог, парезов, параличей, выделений из носа, глаз, мочевыводящих путей.

Таблица 11 - Схема введения препарата Полисилар лабораторным животным при изучении кумулятивных свойств

Доза препарата Дни введения

1-4 5-8 9-12 13-16 17-20 21-24 25-28

Ежедневно вводимая доза (г/кг массы тела) 0,71 1,06 1,59 2,39 3,58 5,37 8,05

Суммарная доза за 4 дня 2,84 4,24 6,36 9,56 14,32 21,5 32,2

Продолжение таблицы 11

Суммарная доза по периодам введения 2,84 7,08 13,44 23 37,32 58,8 91,02

В результате проведенных исследований установлено, что суммарно введенные дозы Полисилара белым крысам составили 91,02 г/кг массы тела и в течение всего эксперимента гибели животных не зарегистрировано. Это не позволило рассчитать коэффициент кумуляции по показателю смертельный эффект, но учитывая, что полученные дозы составляют 12,8 условной ЛД50, то возможный коэффициент кумуляции превышает 12 и Полисилар относится к веществам 4 класса (малоопасные).

Следовательно, при изучении субхронической токсичности препарата Полисилар кумулятивных свойств у него не выявлено.

Третью серию по определению токсичности препарата Полисилар проводили в хронических экспериментах на белых беспородных крысах с начальной средней массой тела 200,5 г, из которых сформировали 4 группы -по 10 особей в каждой. Образцы препарата Полисилар задавали животным в течение 2-х месяцев один раз в сутки индивидуально в виде болюсов, состоящих из желтка, крупы и растительного масла, контрольная группа получала только болюсы без препарата (схема опыта представлена в таблице 12).

Таблица 12 - Схема опыта при определении хронической токсичности препарата Полисилар на крысах (п = 10)

Группы Доза препарата

1 опытная 1/5 - 1420 мг/кг массы тела (284 мг/животное)

2 опытная 1/10 - 710 мг/кг массы тела (142 мг/животное)

3 опытная 1/20 - 142 мг/кг массы тела (28,4 мг/животное)

4 контрольная Болюсы без препарата

Токсическое действие препарата при его длительном применении оценивали по сохранности и клиническому состоянию животных, взвешивание проводилось двукратно - в начале опыта и на момент завершения эксперимента (на 60-тый день).

В результате проведенных опытов было установлено, что в течение всего экспериментального периода существенных отклонений от нормы в поведении, общем состоянии и аппетите подопытных животных не регистрировали. Крысы были подвижны, реакции и рефлексы сохранены, тактильная и болевая чувствительность не нарушались, изменений в функциях пищеварения и мочеотделения отмечено не было.

В процессе исследований возможное токсическое действие при длительном применении препарата изучалось по изменению массы тела подопытных крыс (так как вес является наиболее интегральным показателем, характеризующим возможное токсическое действие вещества).

Результаты анализа этих данных показали (таблица 13), что исследуемый образец не оказал негативного влияния на весовые характеристики животных.

Так, по завершении эксперимента масса тела подопытных животных, в среднем по группе составила 228,6+4,1г (1-я группа), 225,9+2,7 г (2-я группа) и 219,8+3,2 г (3-я группа). При расчете процента прироста разница между опытными и контрольными крысами составила 8%, 5,8% и 4,3% соответственно по группам.

Таблица 13 - Динамика массы тела лабораторных крыс при определении хронической токсичности препарата Полисилар (М±т; п=10)

Группы Масса тела :г)

Фон Конец опыта Прирост массы тела за период опыта, %

1-я группа 199,7+2,6 228,6+4,1 14,5

2-я группа 201,2+1,9 225,9+2,7 12,3

3-я группа 198,4+3,1 219,8+3,2 10,8

Контроль 202,5+2,5 215,7+2,9 6,5

Влияние препарата Полисилар на физиологические реакции крыс в хроническом эксперименте оценивали в тесте «открытое поле», проведенного после последнего введения препарата. Для этого использовали прямоугольную камеру размером 60х60х60 см., с деревянными боковыми и задней

70

стенками, при этом передняя стенка - стеклянная. Над камерой размещен источник света, пол камеры был приподнят и разделен на 9 квадратов с отверстиями для регистрации исследовательской активности, при этом характер и количество движений животных отмечает регистратор. Через сутки после последнего введения препарата по пять крыс из каждой группы индивидуально помещали в камеру и проводили тестирование. Для определения выраженности эффекта использовали отношение количества движений в опыте против контроля. В течение 4-х минут наблюдения регистрируют ряд компонентов поведения: вертикальную и горизонтальную активность (отражает неспецифический уровень возбуждения); количество заглядываний в норки (как показатель исследовательской активности животного); число фекальных болюсов (как показатель эмоциональной активности). Данные по влиянию препарата Полисилар на структуру поведения крыс в тесте «открытое поле» представлены в таблице 14.

Анализ этих данных показал, что как в контрольной, так и в опытных группах достоверных изменений в поведенческих реакциях не выявлено.

Таблица 14 - Влияние препарата Полисилар на структуру поведения белых крыс в хроническом эксперименте (M±m; n = 5)

Группы Горизонтальная активность Вертикальная активность Заглядывания Болюсы

1-я группа 3,5±0,2 0,7±0,1 2,3±0,7 2,7±0,3

2-я группа 2,7±0,6 1,1±0,2 2,9±0,4 2,6±0,5

3-я группа 3,9±0,4 0,5±0,1 3,1±0,1 2,5±0,6

Контроль 3,1±0,3 0,9±0,1 2,6±0,2 2,8±0,4

4.2.3 Влияние Полисилара на патоморфологию внутренних органов животных при длительном введении

При завершении хронического эксперимента по оценке токсических свойств препарата Полисилар по 5 крыс из каждой группы были подвергнуты эвтаназии передозировкой эфира. При некропсии, состоящей из подготовки крыс к вскрытию, наружного осмотра состояния полостей и расположения органов, проводили макроскопическое исследование внутренних органов, а также определяли их абсолютную и относительную массу.

При макроскопическом исследовании органов у животных как опытных, так и контрольной групп не было выявлено отклонений от нормы.

Расположение органов в полостях было анатомически правильное. Плевра, брюшина и перикард были окрашены в розовый цвет. Поверхность их была гладкая, влажная, блестящая. В перикардиальной полости выявляли незначительное количество прозрачной желтоватой жидкости.

Сердце не увеличено в размере, конусовидной формы. Миокард умеренно плотной консистенции, светло-коричневого цвета. Соотношение толщины миокарда правой половины к левой было 1:3. Эндокард гладкий, блестящий, влажный, розового цвета.

Легкие не увеличены, симметричные, мягкой консистенции, с поверхности и на разрезе розового цвета. Легочная плевра гладкая, блестящая, слизистая оболочка трахеи и бронхов светло-розового цвета, гладкая, влажная, блестящая.

Селезенка не увеличена в размере, края заостренные, форма вытянутая, консистенция умеренно плотная, капсула гладкая, блестящая. Цвет с поверхности и на разрезе коричневый, соскоб незначительный кровянистый.

Печень не увеличена в размере, края заостренные, капсула гладкая, блестящая, окрашена в темно-коричневый цвет. На разрезе рисунок хорошо выражен. Соскоб с поверхности разреза незначительный кровянистый. Проходимость желчных протоков сохранена. Желчный пузырь заполнен желчью

72

желтовато-зеленого цвета, вязкой консистенции. Слизистая оболочка желчного пузыря гладкая, влажная, блестящая.

Дольки в поджелудочной железе хорошо выражены. Цвет розовый, форма вытянутая, консистенция мягкая.

Почки не увеличенные, симметричные, окрашены в коричневый цвет. Жировая капсула хорошо развита, фиброзная хорошо снимается. Корковый и мозговой слой хорошо выражен. Почечная лоханка пустая. Слизистая оболочка ее розового цвета, гладкая, влажная, блестящая.

Желудок заполнен кормовыми массами. Слизистая оболочка светло-розового цвета, гладкая, влажная, блестящая.

Тонкий и толстый отделы кишечника местами заполнены содержимым. Слизистая оболочка гладкая, влажная, блестящая, на всем протяжении имела светло-розовый цвет.

Мочевой пузырь заполнен небольшим количеством мочи желтого цвета, водянистой консистенции. Слизистая оболочка розового цвета, гладкая, влажная, блестящая.

У самок яичники не увеличенные, округлой формы, серого цвета, умеренно плотной консистенции. Матки не беременные, не увеличенные, овальной формы. Слизистая оболочка розового цвета, гладкая, влажная, блестящая.

У самцов семенники с придатками не увеличенные, вытянутой формы, умеренно плотной консистенции, серо-белого цвета.

Кровеносные сосуды оболочек головного мозга наполнены умеренно. Мозговые извилины выражены хорошо. Головной мозг не увеличен, слегка вытянутой формы, мягкой консистенции. С поверхности цвет серый, а в глубине белый. В мозговых желудочках небольшое количество прозрачной желтой жидкости.

Результаты оценки абсолютной и относительной массы внутренних органов крыс представлены в таблице 15.

При анализе этих данных установлено, что по массе внутренних органов не выявлено патологии и изменений между показателями во всех группах. Это свидетельствует об отсутствии дополнительной нагрузки на органы при длительном назначении Полисилара в токсичных дозах и о его хорошей переносимости животными.

Таблица 15 - Влияние препарата Полисилар абсолютную и относительную массу внутренних органов крыс в хроническом эксперименте (M±m; n = 5)

Органы Группы

1 опытная 2 опытная 3 опытная контроль

Масса тела, граммы 228,6+4,1 225,9+2,7 219,8+3,2 215,7+2,9

Сердце грамм 1,6±0,3 1,3±0,2 1,4±0,4 1,5±0,3

% 0,69 0,58 0,63 0,69

Легкие грамм 2,5±0,1 2,3±0,2 2,1±0,1 2,4±0,3

% 1,09 1,01 0,95 1,1

Селезенка грамм 0,9±0,16 0,8±0,09 1,0±0,12 0,9±0,05

% 0,39 0,35 0,45 0,41

Печень грамм 10,4±0,2 9,8±0,4 10,3±0,6 9,4±0,5

% 4,54 4,33 4,68 4,35

Почки грамм 1,2±0,3 1,4±0,4 1,1±0,4 1,3±0,2

% 0,52 0,61 0,50 0,60

После проведения вскрытия проводили отбор материала для гистологического исследования. Кишечник отбирали в области перехода пилориче-ской части желудка в двенадцатиперстную кишку, желудок - в фундальной области, поджелудочную железу в центральной части, кожу в месте инъекции препарата, почку, сердце, селезенку и печень отбирали таким образом, чтобы в кусочках имелись все структурные компоненты.

Материал фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Проводку материала осуществляли общепринятыми в патоморфологии методами по Меркулову Г.А. (1969). После формалиновой фиксации материал промывали в проточной воде. Обезвоживание проводили в спиртах нарастающей концентрации от 40 до 96 % (схема 1).

Схема 1- Проводка гистологического материала

1 Фиксация материала в 10%-ном растворе формалина 2-3 суток

2 Промывка материала в проточной воде с 9 до 12 час

3 Обезвоживание материала в 50%-ном спирте с 12 до 16 час

4 Обезвоживание материала в 70%-ном спирте с 16 до 9 час

5 Обезвоживание материала в 80%-ном спирте с 9 до 16 час

6 Обезвоживание материала в 96%-ном спирте с 16 до 9 час

7 Обезвоживание материала в 100%-ном спирте с 9 до 16 час

8 Целлоидин-касторовое масло с 16 до 9 час

9 Хлороформ 1 с 9 до 11 час

10 Хлороформ 2 с 11 до 13 час

11 Хлороформ 3 с 13 до 16 час

12 Хлороформ-парафин (в термостате при Т + 37°С) с 16 до 9 час

13 Парафин 1 (в термостате при Т+56°С) с 9 до 12 час

14 Парафин 2 (в термостате при Т+56°С) с 12 до 16 час

15 Заливка в парафин в 16 час

Уплотнение материала осуществляли парафином, в термостате при по-

стоянной температуре +56 °С. Заливку материала осуществляли в парафин. Серийные парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм, изготавливали при помощи санного микротоам МС-2. Микропрепараты окрашивали гематоксилином и эозином (схема 2).

Схема 2 - Окраска микропрепаратов гематоксилином и эозином

1 Депарафинирорвание

- ксилол 20-30 мин

- промывка препарата 96%-ным спиртом 2-3 мин

- промывка препарата в водопроводной воде 3-5 мин

2 Окраска ядер:

- гематоксилином через фильтр 1-3 мин

- промывка в воде (до посинения среза) 20-30 мин

3 Дифференцировка:

- солянокислый спирт (до розового оттенка) 1-2 сек

- промывка в воде (до посинения среза) 20-30 мин

4 Окраска цитоплазмы:

- эозином через фильтр 20-30 сек

- промывка препарата 96%-ным спиртом 1-2 мин

- высушивание препарата фильтровальной бумагой

5 Просветление: - ксилол 15-20 мин

6 Заключение препарата в бальзам под покровное стекло

Микрофотографии изготавливали при помощи микроскопа «Микмед -1» и цифрового фотоаппарата «Canon А 470». Фотографирование осуществляли при увеличении х150 (окуляр 15, объектив 10); х300 (окуляр 15, объектив 20); х600 (окуляр 15, объектив 40) .

У животных, участвующих в хроническом эксперименте по оценке токсических свойств препарата Полисилар при гистологическом исследовании сердца, легких, почек, селезенки, печени, поджелудочной железы, 12-ти перстной кишки, желудка, брыжеечных лимфатических узлов и кожи изменений структуры не выявлено.

В сердце хорошо определялись все структурные компоненты: эпикард, миокард, с проводящей системой и эндокард (рис. 2).

Рис. 2. Эпикард и миокард с проводящей системой сердца животного первой опытной группы. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 300

Эпикард состоял из рыхлой соединительной ткани, представленной ок-сифильно окрашенными волокнами и небольшим количеством фиброцитов. Сверху он был выслан мезотелием. Миокард состоял из тяжей мышечных волокон, разделенных между собой соединительнотканными прослойками.

Расположенные в них кровеносные сосуды, изменений стенок не имели. Мышечные волокна располагались параллельно. В мышечных волокнах хорошо определялась сарколемма, цитоплазма с поперечнополосатой исчер-ченностью и центрально расположенные ядра. Проводящая система сердца состояла из атипических мышечных волокон, которые переходили в основные мышечные волокна. В отдельных участках эндокарда отчетливо просматривались внутренний, средний и наружный слои. В большей его части такого разделения не было.

В легких хорошо определялись все различного диаметра бронхи, альвеолы, междольковая соединительная ткань с кровеносными сосудами. Бронхи имели разветвляющую структуру и заканчивались альвеолами. Внутренняя поверхность альвеол была выстлана хорошо определяющимся альвеолярным эпителием.

Печень имела хорошо выраженную дольчатую структуру. Дольки отделены друг от друга междольковыми соединительнотканными перегородками. Печеночные балки в печеночных дольках имели радиальное расположение. Гепатоциты содержали базафильно окрашенные ядра и оксифильно окрашенную цитоплазму. Синусоидные капилляры и печеночные триады видимых изменений своей структуры не имели (рисунок 3).

Селезенка снаружи была покрыта соединительнотканной капсулой, от которой внутрь отходили трабекулы. Паренхима была представлена красной и белой пульпой. Кровеносные сосуды нарушений структуры не имели. Фолликулы белой пульпы имели округлую форму и различную величину. Состояли из большого количества малых лимфоцитов. В центре каждого фолликула располагалась центральная артерия. Красная пульпа была представлена ретикулярной тканью, большим количеством эритроцитов и небольшим количеством лейкоцитов.

Поджелудочная железа состояла из хорошо выраженных долек угловатой формы. Междольковые и внутридольковые кровеносные сосуды были хорошо выражены и нарушений структуры в их стенках не выявляли.

Секреторный отдел железы нарушений структуры не имел, и был представлен панкреатическими островками Лангерганса и альвеолами.

Рис. 3. Печеночные балки и синусоиды печени животного первой опытной группы. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 600

Слизистая оболочка желудка имела характерную складчатость, железистый эпителий ее был хорошо выражен. Главные клетки имели небольшой размер, призматическую и кубическую форму, базофильно окрашенную цитоплазму. Оксифильно окрашенные ядра у таких клеток были расположены на периферии. Обкладочных клеток по количеству было меньше, но по размеру они были крупнее, и поэтому выступали за пределы главных клеток. Форма их была овальная или грушевидная. Ядра у этих клеток были расположены по центру.

В двенадцатиперстной кишке хорошо определялись серозная, мышечная и слизистая оболочка. Серозная оболочка была представлена волокнами рыхлой соединительной ткани и небольшим количеством фиброцитов. Мышечная оболочка состояла из двух слоев миоцитов. Слизистая оболочка кишечника имела пальцевидные ворсинки, покрытые призматическими эпите-

лиоцитами, среди которых располагались светлые овальной формы бокаловидные гландулоциты с мелким базофильно окрашенным ядром и мутной цитоплазмой. Между ворсинками залегали кишечные железы, которые нарушений структуры не имели. Мышечный слой был незначительной толщины и без резких границ переходил в подслизистую основу, в которой располагались кровеносные сосуды.

При патогистологическом исследовании брыжеечных лимфатических узлов снаружи хорошо определялась соединительнотканная капсула, от которой внутрь отходили крупные трабекулы, разветвляющиеся на более мелкие в центральной части лимфатического узла. В расположенной между тра-бекулами ретикулярной ткани отчетливо определялись корковая и мозговая зоны. Корковая зона состояла из различных по размеру, округлой формы лимфатических фолликулов, представленных лимфатическими клетками. От них внутрь направлялись мякотные шнуры. Между ними хорошо выявлялись центральные синусы и кровеносные сосуды. Изменений в стенках сосудов выявлено не было.

В паренхиме почек наблюдали разделение на корковое и мозговое вещество. Корковое вещество состояло из почечных телец нефронов. В капсуле нефрона была хорошо выраженная узкая полость. Капилляры почечного тельца не расширены. Вокруг почечного тельца располагались проксимальные извитые канальцы, выстланные однослойным призматическим эпителием. Мозговое вещество содержало радиально расположенные собирательные трубки и петли Генле, между которыми находились тонкие соединительнотканные прослойки с мелкими и крупными сосудами, не имеющими нарушений структуры.

При исследовании кожи патоморфологических изменений структуры не выявляли. При этом в эпидермисе хорошо определись пять его слоев: ба-зальный, шиповатый, зернистый, блестящий и роговой. Базальный слой располагался на базальной мембране, контактирующей с дермой, и был представлен одним слоем цилиндрической формы клеток с базофильно окрашен-

79

ной цитоплазмой. Среди этих клеток в небольшом количестве располагались клетки с отростчатой цитоплазмой, большим и светлым ядром - меланоциты. В цитоплазме их содержались черного цвета зерна пигмента меланина. Над базальным слоем располагался шиповатый, который был представлен несколькими рядами отростчатых клеток. Среди клеток шиповатого слоя обнаруживались клетки в состоянии митоза. Над шиповатым слоем располагался зернистый слой. Он состоял из двух рядов вытянутой формы клеток. Большая часть таких клеток не имела ядер. Над зернистым слоем располагался блестящий, который состоял из нескольких рядов плоских безъядерных клеток. Самый верхний слой эпидермиса роговой был представлен ороговевшими плоскими клетками. В дерме кожи выделись два слоя: сосочковый и сетчатый. Среди структурных компонентов дермы определялись волосяные фолликулы.

Таким образом, при патоморфологическом и гистологическом исследовании крыс, участвующих в хроническом эксперименте, патологии и изменений в строении внутренних органов выявлено не было. Следовательно, длительное применение препарата Полисилар не оказывает токсического действия на внутренние органы животных и не изменяет их структуру.

4.2.4 Влияние препарата Полисилар на показатели крови

При оценке токсикологических параметров препарата Полисилар были проведены опыты на собаках, которым длительно применяли новое лекарственное средство. Эксперименты проводили с соблюдением правил программы доклинических испытаний по оценке безопасности лекарственных средств, все собаки содержались в стандартных условиях питомника при свободном доступе к пище и воде.

Для постановки опыта по принципу парных аналогов было сформировано 3 группы взрослых собак по 5 особей в каждой. Первая и вторая группа

ежедневно в течение 30 дней получала препарата Полисилар в трех- и пяти-

80

кратной условно-терапевтической дозе (3 г/кг и 5 г/кг массы тела). Препарат задавался один раз в день индивидуально при кормлении, перемешанный с небольшим количеством пищи. Третья группа животных служила контролем и получала аналогичный рацион, без добавления препарата.

В течение эксперимента ежедневно, проводилось наблюдение за клиническим состоянием животных и их сохранностью. Взвешивание собак и лабораторные исследования крови, мочи и кала осуществлялось 2 раза (фон и в конце опыта).

При фоновых морфо-биохимических исследованиях крови все параметры соответствовали норме для животных этого возраста.

Проведенными исследованиями установлено, что длительное применение Полисилара не влияло отрицательно на клиническое состояние и поведение животных, гибели не регистрировали ни в одной из групп. Аппетит и двигательная активность соответствовали здоровым животным. Параметры дыхания и температуры тела также были в норме и значимо не отличались от показателей контрольной группы (результаты представлены в таблице 16).

В норме температура тела собак колеблется от 37,5 до 39,0 градусов (оптимальными являются показатели от 38,0 до 38,8 градусов). Частота дыхательных движений у собак в норме колеблется от 10 до 30 дыхательных движений в минуту.

Таблица 16 - Влияние препарата Полисилар на частоту дыхания и температуру тела собак в хроническом эксперименте (М±т; п = 5)

Группы ЧДД (дых. дв./мин.) Температура тела

фон Конец опыта фон Конец опыта

1-я опыт 13,6±0,3 12,9±0,5 38,3±0,2 38,1±0,1

2-я опыт 14,1±0,6 13,7±0,2 38,5±0,1 38,2±0,1

3-я контроль 14,3±0,3 13,9±0,6 38,6±0,3 38,4±0,2

Гравиметрическими исследованиями установлено (таблица 17), что в конце хронического эксперимента зарегистрировано незначительное увелче-ние массы тела у собак всех групп. В первой опытной группе прирост составил 7,3%, во второй - 5,6%, в контроле этот показатель равнялся 1,2%.

Таблица 17 - Влияние препарата Полисилар на массу тела собак в

хроническом эксперименте (М±т; п = 5)

Группы Масса тела (кг)

Начало опыта Через 30 дней Прирост массы тела за период опыта, %

1-я группа 14,3+0,6 15,3+1,1 7,3

2-я группа 15,2+0,7 16,1+0,9 5,6

Контроль 15,6+0,7 15,9+0,8 1,2

При изучении хронической токсичности препарата Полисилар оценивали ряд гематологических показателей собак, результаты лабораторного анализа крови в конце опыта приведены в таблице 18.

При анализе этих данных установлено, что после месячного применения препарата все определяемые показатели были в норме и значимо не отличались от их уровня, как к контрольной группе, так и по отношению к фоновым данным. Только в группе с максимальной дозировкой препарата количество сегментоядерных гранулоцитов к концу срока дачи препарата превышало аналогичный показатель у собак второй и третьей группы на 12,8% и 8,8% соответственно (на уровне тенденции). Данный факт свидетельствует о защитной реакции организма на токсические дозы исследуемого препарата.

Таблица 18 - Влияние препарата Полисилар на гематологические по-

казатели собак в хроническом эксперименте (М±т; п = 5)

Показатели в конце эксперимента

Группы НЬ гр% Лейк. 109/л Эрит. 1012/л СОЭ Мм/ч. Лейкограмма, %

Э П/я С/я Л М

1-я опыт 15,4±0,6 7,4±0,4 6,8±0,5 2,6±0,2 3,1+0,1 1,4±0,2 71,2±2,8 20,8±1,2 3,5±0,7

2-я опыт 14,8±0,9 8,3±0,7 5,9±0,6 2,8±0,1 2,9±0,4 2,7±0,3 63,1±1,9 26,3±1,6 5,1±0,9

Контроль 15,2±0,8 8,7±0,9 6,1±0,8 3,1±0,3 3,4±0,2 2,5±0,1 65,4±3,1 24,1±1,9 4,6±0,5

норма 11-17 6-17 5,2-8,4 2,5-3,5 2,5-9,5 0-3 43-71 21-40 3-10

Данные исследования биохимических показателей крови собак при изучении хронической токсичности Полисилара приведены в таблице 19.

Таблица 19 - Влияние препарата Полисилар на биохимические показатели собак в хроническом эксперименте (М±т; п = 5)

Показатели в конце экспе- Группы

римента 1 опытная 2 опытная контроль норма

Глюкоза, мМ/л 5,1+0,2* 4,9*+0,4 3,8+0,6 3,3-5,6

Холестерин, мМ/л 3,8+0,7 4,1+0,5 3,6+0,8 2,8-6,9

Белок общий, г/л 68,4+2,1 65,4+1,9 62,7+2,8 55-71

Мочевина, мМ/л 5,4+1,1 5,9+1,6 5,6+1,7 3,5-9,2

Креатинин, мМ/л 71,9+3,8 64,5+2,3 67,1+1,9 55-114

Общий билирубин, мкМ/л 4,9+0,6 3,8+0,3 4,7+0,5 1,7-10,6

Прямой билирубин, мкМ/л 1,4+0,2 2,1+0,7 1,9+0,6 0-2,5

АсАТ, Ед 36,8+3,4 35,4+2,9 37,3+2,1 16-43

АлАТ, Ед 22,3+2,7 26,4+2,1 30,1+1,9 15-58

Степень достоверности: * - Р< 0,05 по отношению к контролю

В результате анализа этих данных установлено, что в группах с применением Полисилара уровень глюкозы был достоверно выше по отношению к контрольной группе (с разницей 34,2 и 28,9%).

При изучении показателей белкового обмена наблюдали тенденцию к увеличению концентрации общего белка в сравнении с контрольными показателями. Максимальный уровень зарегистрирован в 1 -й опытной группе (68,4+2,1 г/л), разница с контролем составила 9,1%. Во второй опытной группе концентрация составила 65,4+1,9 г/л, с разницей 4,3%. Вышеобозначенные показатели при увеличении значений, однако не выходили за пределы нормы для животных данного вида.

Выявление возможного токсического действия нового лекарственного средства на почки оценивалось по уровню мочевины и креатинина, а на печень - по содержанию гепатоиндикаторных ферментов и билирубина. Установлено, что месячное введение препарата Полисилар в трех- и пятикратной условно-терапевтической дозе не оказывает повреждающего действия на функцию почек и печени. Содержание всех исследуемых показателей существенно не отличались от их уровня в контрольной группе, и соответствовало средним величинам нормы.

4.2.5 Влияние Полисилара на функцию почек

Для выявления возможного токсического действия препарата Полиси-лар на функцию почек у всех собак каждые 10 дней отбирали мочу и проводили ее анализ по физико-химическим показателям, сравнивая эти данные с показателями мочи контрольных животных.

В моче определяли цвет, запах, консистенцию, удельный вес, концентрацию водных ионов, а также уровень белка, углеводов, гемоглобина, желчных пигментов. По этим данным судили о функциональном состоянии почек.

В результате наблюдений за собаками установлено, что в течение всего опыта акты мочеиспускания у животных всех групп были регулярными, происходящими в естественной позе и безболезненными.

Проведенными исследованиями установлено, что физико-химические показатели мочи собак находились в пределах физиологических норм.

Таблица 20 - Влияние препарата Полисилар на физико-химические свойства мочи собак в хроническом эксперименте (M±m; n = 5)

Показатели Группы

1 опытная 2 опытная контроль

Цвет, прозрачность От светло-желтого до янтарно-желтого, прозрачная

рН 6,4+0,05 6,3+0,03 6,5+0,06

Удельный вес, г/мл 1,031+0,002 1,033+0,003 1,029+0,001

Белок, г/л не обнаружено

Углеводы, ммоль/л не обнаружено

Гемоглобин, г/л не обнаружено

Билирубин, ммоль/л не обнаружено

При оценке физических характеристик мочи установлено (таблица 20), что у всех животных она была водянистой консистенции, специфического запаха, прозрачная (без примесей слизи и крови), от светло-желтого до ян-тарно-желтого цвета.

Лабораторными исследованиями наличия белка, углеводов, гемоглобина и желчных пигментов в моче не обнаружено. Концентрация водородных ионов регистрировалась от 6,3 до 6,5 и удельный вес в среднем 1,031 г/мл.

Таким образом, длительное применение Полисилара в различных дозах не влияет отрицательно на функции органов мочеотделения.

4.2.6 Влияние на функцию желудочно-кишечного тракта

Для выявления возможного токсического действия препарата Полиси-лар на функциональное состояние желудочно-кишечного тракта у собак каждые 10 дней собирали фекалии и проводили их анализ по физико -химическим показателям, сравнивая эти данные с показателями контрольных животных.

При органолептической оценке каловых масс определяли их форму, запах, цвет, консистенцию, а также присутствие посторонних примесей.

Проводили микроскопическое исследование, которое дает представление о переваривающей способности желудочно-кишечного тракта, признаках воспаления, опухолевых клеток, паразитов.

Изучение физико-химических свойств фекалий состояло из определения: рН (с помощью лакмусовой бумаги), наличия крови (бензидиновой пробой), желчных пигментов (пробой Терквея), билирубина (пробой Фуше), жира и крахмала (микроскопически с суданом III и раствором Люголя).

В результате проведенных исследований установлено, что у собак всех групп акты дефекации осуществлялись без напряжения и безболезненно, в естественной для данного вида животного позе. Каловые массы были оформлены, цилиндрической формы, коричневого цвета, имели специфический запах.

В исследуемых пробах наличия гноя, крови, слизи не обнаружено, при микроскопическом исследовании выявлены единичные крахмальные зерна и нейтральный жир, а яйца гельминтов и простейшие отсутствовали.

Проведенными биохимическими исследованиями в каловых массах желчные пигменты выделялись в пределах нормы, реакция рН колебалась в пределах от 6,7 до 7,3, что подтверждает нормальную жизнедеятельность кишечной микрофлоры.

Таким образом, экспериментально доказано, что длительное применение препарата Полисилар не оказывает существенного влияния на функцию желудка и моторику кишечника животных, а также не проявляет отрицательного воздействия на процессы пищеварения.

4.2.7 Местно-раздражающее действия препарата

Эксперименты по изучению местно-раздражающего действия препарата Полисилар проводили на морских свинках методом накожных аппликаций и на кроликах - конъюнктивальной пробой.

В первую серию опытов отбирали по 5 интактных морских свинок, с массой тела 350-370 грамм. Животным выстригали волосы размером 3х3 см, в направлении от задней трети спины к голове, избегая механических повреждений кожных покровов. Препарат предварительно смешивали с водой и равномерно распределяли по поверхности участка лопаточкой, экспозиция длилась 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченным дистиллированной водой. После аппликации Полисилара в течение 14 дней подряд учитывали состояние кожного покрова (припухлость, шелушение, окраску, местную температуру, зуд). Реакцию оценивали с помощью шкалы баллов согласно классификации С.В. Суворова (таблица 21).

Таблица 21 - Классификация опасности по выраженности местно-раздражающих свойств веществ на коже

Выраженность раздражающего действия Средний суммарный балл выраженности эритемы и величины отека Классы опасности

Резко выраженное более 6 1

Выраженное 4,1-6,0 2

Умеренное 2,1-4,0 3

Слабое или отсутствие 0-2,0 4

В результате проведенных экспериментов установлено, что после нанесения Полисилара на кожу общее состояние животных регистрировалось в пределах нормы, аппетит был сохранен, отклонений в параметрах пульса, дыхания и температуры не выявлено. На коже видимого раздражающего действия не наблюдалось (гиперемии, отека и инфильтрации кожи, десквамации эпителия не отмечалось).

Во второй серии экспериментов по изучению местно-раздражающего действия препарата Полисилар использовали конъюнктивальную пробу. Для этого трем кроликам под верхнее веко правого глаза вносили по 1 капле 10,0%-ной водной суспензии Полисилара, одновременно для контроля в левый глаз этим же животным вносили по 1 капле физ. раствора.

После введения веществ учитывали общее клиническое состояние животных (температура тела, количество дыхательных движений, частота пульса), в том числе кровенаполнение конъюнктивы, состояние век и роговицы, наличие выделений. Оценку проводили в баллах согласно таблице 22.

Таблица 22 - Критерии оценки степени раздражающего действия пре-

парата на конъюнктиву

Интенсивность реакции Оценка в баллах Раздражающий эффект

Отсутствие реакции 0 Отсутствует

Слабая гиперемия 2 Слабый

Выраженная гиперемия 4 Слабо выраженный

Наличие лакримации 6 Умеренный

Наличие выделений 8 Выраженный

Отек век 10 Сильно выраженный

В результате оценки раздражающего действия препарата установлено, что через 10 минут у кроликов, которым вводили Полисилар, регистрировали повышенное слезотечение, связанное с механическим воздействием взвеси на слизистую оболочку глаза, которое исчезало в течение 1 часа после закапывания. При этом зуда, гиперемии конъюнктивы и сужения зрачка не наблюдалось.

Таким образом, Полисилар можно охарактеризовать как не проявляющий местно-раздражающего действия препарат.

4.2.8 Ветеринарно-санитарная оценка мяса

Результаты ветеринарно-санитарной экспертизы мяса птицы после применения лекарственного средства позволяют определить качество реализуемой продукции и делать заключение о сроках убоя птицы, с возможностью использования ее мяса в пищу.

С этой целью была проведена ветеринарно-санитарная оценка мяса цыплят-бройлеров после применения препарата Полисилар, для этого сформировали две группы парных аналогов по 10 особей в каждой. Бройлеры первой группы были интактным контролем, а цыплятам второй опытной группы в течение 3-х недель в корма вводился Полисилар из расчета 2% к сухому веществу корма. Через сутки после окончания применения препарата птица была забита, после чего проведена ветеринарно-санитарная экспертиза тушек бройлеров. Все процедуры проводились в соответствии со следующей нормативной документацией:

-«Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов»;

-ГОСТ 7702.0-74 «Мясо птицы. Методы отбора образцов. Органолептические методы оценки качества»;

-ГОСТ 7702.1-74 «Мясо птицы. Методы химического и микробиологического анализа свежести»;

-ГОСТ 9793-74 «Продукты мясные. Методы определения влаги»; -ГОСТ 25011-81 «Продукты мясные. Методы определения белка»; -ГОСТ 23042-86 «Продукты мясные. Методы определения жира»; -ГОСТ 7702.2.0-95 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птицы. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям».

Послеубойный ветеринарно-санитарный осмотр тушек бройлеров проводили при естественном освещении, при наружном осмотре обращали вни-

88

мание на степень обескровливания, цвет кожи, наличие патологических изменений на коже и в суставах, качество обработки тушек. При осмотре ротовой полости оценивали состояние слизистой оболочки рта, языка, зева и глотки, ее запах, наличие узелков, пленок, казеозных наложений. При потрошении тщательно осматривали на наличие патологических изменений сердце, легкие, кишечник и печень (таблица 23).

Таблица 23 - Органолептическая оценка мяса бройлеров после применения

препарата Полисилар (п = 10)

Показатель Признак

Глазное яблоко роговица блестящая, чистая, без кровоизлияний

Клюв глянцевый

Слизистая оболочка ротовой полости бледно-розового цвета

Поверхность тушки сухая, бело-желтого цвета, с розовым оттенком