Эпидемиологический мониторинг за циркуляцией высокопатогенного вируса гриппа птиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.30, кандидат медицинских наук Шипулин, Герман Александрович

• Шипулин, Герман Александрович
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шипулин, Герман Александрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Грипп птиц - общая эпидемиологическая характеристика.

1.2. Структура и функция вириона.

1.3. Факторы патогенности вирусов гриппа А.

1.4. Факторы резистентности вирусов гриппа А к противовирусным препаратам.

1.5. Эволюция вирусов гриппа А.

1.6. Методы диагностики гриппа птиц.

1.7. Методы типирования вирусов гриппа птиц.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эпидемиологический мониторинг за циркуляцией высокопатогенного вируса гриппа птиц»

Активный эволюционный процесс в некоторых группах возбудителей инфекций в сочетании с активизацией миграционных потоков в человеческих популяциях создает предпосылки для» возникновения и глобального распространения инфекционных болезней. В настоящее время значительную обеспокоенность вызывает распространение в мире эпизоотий высоко патогенного гриппа птиц. Впервые эта проблема привлекла всеобщее внимание в 1997 году, когда масштабная эпизоотия высоко патогенного гриппа* в Гонконге была приостановлена только выбраковкой всей популяции птиц. Большинство экспертов ВОЗ считают, что эти меры, вероятно, помогли предотвратить надвигающуюся пандемию.

Начиная с 1997 г. по настоящее время по« всему миру неоднократно регистрировались эпизоотии* гриппа у домашних и диких птиц, при которых отмечались также случаи инфицирования млекопитающих и человека. Наиболее значительная эпизоотия была зарегистрирована в 2003-2004 гг. в странах Юго-Восточной Азии, где в течение нескольких месяцев были уничтожены более 100 миллионов- домашних птиц. В этот же период отмечались случаи заболевания птиц гриппом в Италии, Голландии, Бельгии и Германии. За время этих вспышек были уничтожены около 50* миллионов домашних птиц. С мая 2005 года в странах Юго-Восточной Азии началась новая эпизоотия, вызванная высоко патогенным вирусом гриппа А субтипа Н5>11, которая затем распространилась по территории Казахстана, России, Украины, Азербайджана и ряда Европейских стран.

До 1997 года считалось, что вирусы гриппа птиц не опасны для людей, так как регистрировались лишь редкие случаи инфицирования людей с клинической картиной конъюнктивита или легких форм ОРЗ в случае тесного контакта человека с инфицированной птицей. Однако во время эпизоотий в Гонконге в 1997 г., Таиланде и Вьетнаме в 2003-2004 гг., во Вьетнаме в 2005 г. было показано, что вирус гриппа птиц может вызывать у людей тяжелые формы пневмонии, приводящие1 к летальному исходу. По данным Всемирной организации здравоохранения с декабря 2003 г. по 11 марта 2008 г. в ряде стран мира (Азербайджан, Камбоджа, Китай, Джибути, Египет, Индонезия, Ирак, Лаос, Нигерия, Таиланд, Турция, Вьетнам) зарегистрировано 372 лабораторно подтвержденных случаев инфицирования людей вирусом гриппа птиц А/Н51Ч1, из них у 235 пациентов заболевание привело к летальныму исходу.

Глобальное распространение высокопатогенного вируса гриппа птиц, а также возрастание числа людей, инфицирующихся при контакте с заболевшей птицей, заставило ВОЗ в 2005 выработать план подготовки к возможной пандемии. В настоящий момент, по мнению экспертов ВОЗ, мы находимся в фазе 3 пандемического процесса, что требует от каждого государства выстраивания своих собственных планов действий на случай возникновения эпидемии.

Опыт борьбы с гриппом птиц, накопленный за последние 10 лет, показал, что для разработки и проведения эффективных противоэпизоотических и противоэпидемических мероприятий, необходимо построение системы постоянного мониторинга за циркуляцией вируса гриппа, основанной на использовании лабораторных методов точной и быстрой идентификации и характеристики циркулирующих штаммов вируса гриппа А, с целью определения их генетического родства, степени патогенности и выявления мутаций резистентности к противовирусным препаратам. Среди лабораторных методов диагностики гриппа птиц наиболее эффективным считается метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Главными преимуществами ПЦР в сравнении с культуральным подходом являются его более высокая чувствительность, быстрота и безопасность для персонала. По диагностической значимости ПЦР более ценный метод, чем серология, поскольку позволяет выявлять вирус на самых ранних стадиях инфекции, задолго до появления антител, что крайне важно для проведения мероприятий, направленных на раннюю карантинизацию больных животных и людей. Кроме явных диагностических преимуществ, метод ПЦР, дополненный методом секвенирования ДНК, является универсальным молекулярно-генетическим подходом к опредлению большинства биологических свойств вирусов гриппа птиц, позволяющим выявлять родство циркулирующих штаммов, предсказывать его опасность для человека и эффективность противовирусной терапии.

Цель и задачи исследований

Целью исследований являлось создание системы эпидемиологического мониторинга за циркуляцией высокопатогенного вируса гриппа птиц на основе разработанных нами тест-систем для молекулярной диагностики и генотипирования.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать и стандартизовать диагностические наборы на основе ПЦР для обнаружения РНК вируса гриппа А и идентификации наиболее значимых субтипов вируса гриппа птиц.

2. Разработать молекулярно-генетические методики для выявления маркеров патогенности, устойчивости к противовирусным препаратам, а также для установления степени родства штаммов вируса гриппа птиц.

3. Провести молекулярно-генетический анализ маркеров патогенности и адаптации к организму человека штаммов вируса гриппа птиц, циркулировавших во время эпизоотии гриппа у диких и домашних птиц 2005-2007 гг. в России и в странах СНГ.

4. Определить генетические маркеры устойчивости к противовирусным препаратам штаммов вируса высокопатогенного гриппа птиц, циркулировавших в России и в странах СНГ.

5. На основе разработанных молекулярно-генетических тест-систем и методик охарактеризовать эпизоотологическую и эпидемиологическую ситуацию в очагах птичьего гриппа в России.

Научная новизна исследования

На основе разработанных нами тест-систем для диагностики и методик для генотипирования создана система эпидемиологического мониторинга на молекулярном уровне за циркуляцией высокопатогенных штаммов вируса гриппа птиц.

Впервые в России разработаны ПЦР тест-системы для выявления и дифференциации штаммов вирусов А/Н5Ш и А/Н5/Н7, обладающие высокой аналитической чувствительностью (5*10 гэ/мл в варианте о электрофоретической детекции, 1*10 гэ/мл в варианте флуоресцентной детекции) и 100% специфичностью.

Проведен молекулярно-генетический анализ родства штаммов вируса высокопатогенного гриппа птиц, циркулировавших на территории России и сопредельных государств в июле 2005 г. - феврале 2007 г., что позволило определить географическое положение очагов инфекции, из которых в июле 2005 г. и в феврале 2007 г. происходил занос на территорию России вирусов высокопатогенного гриппа птиц, а также определить связь штаммов, циркулировавших на территории России, со штаммами, вызвавшими заболевания у людей и животных в ряде стран СНГ.

Разработаны молекулярно-генетические методики для оценки потенциальной патогенности и вирулентности вируса гриппа птиц для домашней птицы, млекопитающих и человека, а также для определения его к устойчивости к противовирусным препаратам.

Обнаружен и охарактеризован штамм вируса А/Н5Ш, имеющий мутацию, обусловливающую его устойчивость к озельтамивиру («Тамифлю»), препарату, используемому для профилактики и лечения птичьего гриппа у людей.

Практическая значимость работы

В результате проведенного исследования установлено, что разработанные нами методы молекулярно-генетического мониторинга за циркуляцией высокопатогенного вируса гриппа птиц позволяют:

• оценить эпизоотологическую и эпидемиологическую ситуацию по птичьему гриппу в России и ряде стран СНГ;

• своевременно провести адекватные профилактические и противоэпидемические мероприятия, направленные* на предотвращение распространения заболеваемости птичьим гриппом в России;

• выявить эпидемиологические связи циркулирующих в России штаммов высокопатогенного вируса гриппа со штаммами сопредельных стран.

Внедрение в практику

Впервые в России разработаны и внедрены в ветеринарную практику и систему санэпиднадзора тест-системы «ГРИПП» - (Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных № ПВР-1-3.5/01553 от 14 марта 2006 года) и «АмплиСенс Influenza virus Н5» (Регистрационное удостоверение № J1C-001511 от 14.04.2006, Сертификат производства МИБП № 000592, ФСП 42-0115-7239-05) для выявления и дифференциации вируса гриппа птиц методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции.

На базе ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора было налажено производство тест-систем «ГРИПП» и «АмплиСенс Influenza virus Н5». В рамках Государственного заказа данные тест-системы поставляются в Центры гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора и ветеринарные Центры для проведения мониторинга за гриппом птиц на территории России.

Результаты выполненной работы вошли в Методические Указания по лабораторной диагностике гриппа птиц у людей МУК 4.2.2136< — 06 «Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоковирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА), у людей».

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены:

- на заседаниях Ученого совета ФГУ ВГНКИ и ФГУН ЦНИИЭ эпидемиологии Роспотребнадзора (Москва, 2003-2007 гг.);

- на Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Москва, 2004 г.);

VI Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (Волгоград, 2005 г.); на Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005 г.);

- на совместном заседании президиума РАСХН и РАМН «Итоги выполнения совместного Постановления от 14 апреля 2005 г. по проблеме «Грипп А — непредсказуемый и социально опасный зооноз» (Москва, 2005 г.); на Международной конференции по инфекционным болезням (1СЕГО) Общества микробиологов (Атланта (США), 2006 г.);

- на международной научно-практической конференции "«Высокопатогенный грипп птицы: актуальные аспекты эпизоотологии, эпидедимиологии, диагностики и профилактики» (Судак, АР Крым (Украина), 2006 г.);

- на международных семинарах-совещаниях специалистов стран СНГ по проблеме гриппа птиц (Новосибирск, 2006 и 2007 гг.); на международной конференции «Готовность к пандемии гриппа: международная оценка» (Санкт-Петербург, 2007 г.); на IX конгрессе Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007 г.).

Публикации результатов исследований

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждения, выводы, практические предложения, список литераттуры и приложения. Работа иллюстрирована 54 рисунками и 47 таблицами. Список литературы содержит 87 источников, в т.ч. 81 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Эпидемиология», Шипулин, Герман Александрович

ВЫВОДЫ

1. Впервые разработаны и зарегистрированы в РФ ПЦР тест-системы «ГРИПП» и «АмплиСенс Influenza virus Н5», позволяющие выявлять РНК вируса гриппа А и идентифицировать субтипы H5N1, Н5 и Н7. Тест-системы обладают 100% специфичностью и имеют аналитическую о чувствительность - 5*10 гэ/мл в варианте электрофоретической детекции и 1*10 гэ/мл в варианте флюоресцентной детекции.

2. На основе разработанных нами молекулярно-генетических тест-систем и методик охарактеризована эпизоотия гриппа у диких и домашних птиц в России и СНГ, обусловленная генетически-близкой группой высокопатогенных штаммов вируса гриппа A/H5N1, выделенных от павших диких водоплавающих птиц (2005 г.) на озере Кукунор провинции Цинхай в Китае. Штаммы, вызвавшие эпизоотию, у птиц в Московской области (февраль 2007 г.) обнаружили наибольшую гомологию с изолятами, циркулировавшими (2006 г.) в Иране, Азербайджане и Адыгее.

3. Маркеров адаптации вируса гриппа птиц к организму человека, судя по результатам секвенирования генов гемагглютинина и генов, кодирующих внутренние белки; не обнаружено.

4. Изученные штаммы вируса гриппа A/H5N1 не имеют молекулярных маркеров устойчивости к ремантадину, однако среди них обнаружен вариант, имеющий мутацию резистентности к озельтамивиру (Тамифлю).

5. Мониторинг за циркуляцией вирусов птичьего гриппа на молекулярном уровне позволяет своевременно оценить эпизоотологическую и эпидемиологическую ситуацию по птичьему гриппу A/H5N1 и провести адекватные профилактические и противоэпидемические мероприятия.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕЕОМЕБРАЦИИ

Научные разработки и положения диссертационной работы нашли отражение в нормативных документах, внедренных в ветеринарную и медицинскую практику:

1. Инструкция на тест-систему «ГРИПП» на основе полимеразной; цепной реакции и дифференциации вирусов гриппа птиц методом ПЦР и ТУ (Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору РФСертификаты соответствия, за № РОСС R.OB01.B14500 и за № РОСС К.ФВО 1 .В 14513, выдан ФГУ ВГНКИ 13.04.2006 г., Регистрационное удостоверение - № 77-1-3.5-0407 за № ПВР-1-3.5/01553, выдано Департаментом ветеринарии Минсельхоз. РФ от 14.03.2006 г.).

2. . Инструкция на тест-систему «АмплиСенс Influenza virus Н5» на основе

ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией для* обнаружения РНК вируса гриппа А и идентификации субтипа H5N1 (Федеральная Служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития Регистрационное удостоверение № JIC-001511 от 14.04.2006; Сертификат производства МИБП № 000592, ФСП 42-0115-7239-05).

3. Методические Указания по лабораторной диагностике гриппа птиц у людей «Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоковирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА), у людей».

Тест-система «ГРИПП» была включена в Государственный заказ Минсельхоза в 2005 -2007 гг. и в количестве 2500 наборов поставлена в региональные и районные ветеринарные Центры для проведенияшониторинга за гриппом птиц, на территории РФ. Начиная с 2006 г. было произведено и поставлено для нужд Роспотребнадзора около 200 наборов «АмплиСенс Influenza Н5».

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шипулин, Герман Александрович, 2008 год

1. Онищенко, Г.Г. Усиление надзора и контроля за гриппом, как важнейший элемент подготовки к сезонным эпидемиям и очередной пандемии: Руководство. Текст. / Г.Г. Онищенко, О.И. Киселев, А.А. Соминина Mi, СПб.: Роза мира, 2004. - 124 с.

2. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии Текст. / Под ред. Страчунского Л.С., Белоусова Ю.Б., Козлова C.Hi— М.: Боргес, 2002.

3. Разработка и испытания ПЦР тест-систем для диагностики гриппа птиц. Текст. / Г.А. Шипулин [и др.]// Инфекционные болезни. 2005. — Т. 3, №4.-С. 25-29.

4. Экология и эволюция вирусов гриппа в России (1979-2002 гг.) Текст. / Д.К. Львов [и др.] // Вопросы вирусологии. — 2004. — Т. 49, № 3. — С. 1725.

5. Abed Y. Generation and Characterization of recombinant influenza A (H5N1) viruses harboring amantadine resistance mutations Text. / Abed Y. [et al.] // Antimicrob. Agen. Chemother. 2005. - Vol. 49. - № 2. - P. 556-559.

6. Beard C.W. Demonstration of type-specific influenza antibody in mammalian and avian sera by immunodiffusion Text. / Beard C.W. // Bull. WHO. -1970. Vol. 42. - P. 779-785.

7. Buisch W. W. Foreign animal diseases — "The gray book". Electronic resource. / Buisch W.W., Hyde J.L., Mebus Ch.A. - Pat Campbell & Associates and Carter Printing Company, Richmond, Virginia, 1998. — Access mode: http://www.vet.uga.edu/vpp/graybook

8. Characterization of a new avian-like influenza A virus from horses in China Text. / Guo Y., Wang, Kawaoka Y., Gorman O., Ito T., Saito T., Webster R.G. // Virology. -1992. -Vol.188. №.1. -P. 245-255.

9. Characterization of two influenza A viruses from a pilot whale Text. / Hinshaw V.S., Bean W J., Geraci J.R., Fiorelli P., Early G., Webster R.G. // J. Virol. -1986. -Vol. 58. -P. 655-656.

10. Chomczynski P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction Text. / Chomczynski P, Sacchi N. //Anal Biochem. -1987. -Vol.162. №.1. -P. 156-9.

11. Cox NJ. Global epidemiology of influenza: past and present Text. / Cox N.J., Subbarao K. // Annu Rev Med. -2000. -Vol.51. -P.407-421.

12. Cox N.J. Laboratory-based surveillance of influenza A (H1N1) and A (H3N2) viruses in 1980-81: antigenic and genomic analysis Text. / CoxN.J., Bai Z.S., Kendal A.P // Bull. W.H.O. 1983. -Vol.61. -P.143-152.

13. Diseases of Poultry. 10-th ed. Text. / B.W.Calnek [et al.]// Iowa State University Press, USA. 1997. - P.583-605.

14. Donis R.O. Distinct lineages of influenza virus H4 hemagglutinin genes in different regions of the world Text. / Donis R.O., Bean W .J., Kawaoka Y. // Virol. -1989. -Vol.169. -P. 408-417.

15. Early Alterations of the receptor-binding properties of Hl, H2 and H3 avian Influenza virus hemagglutinins after their introduction into mammals Text. / Matrosovich M. [et al.] // J Virol. 2000. - Vol. 74. - № 18. - P. 8502-8512.

16. Emergence of multiple genotypes of H5N1 avian influenza viruses in Hong Kong SAR Text. / Guan Y. [et al.] // PNAS. -2002. -Vol .99. №.13. -P. 8950-8955.

17. Englund L. Avian influenza A virus causing an outbreak of contagious interstitial pneumonia in mink Text. / Englund L., Klingeborn B., Mejerland T. // Acta Vet Scand. -1986. -Vol. 27, N. 4. -P. 497-504.

18. Evolutionary characterization of six internal genes of H5N1 human influenza A virus Text. / Hiromoto Y. [et al.] // J General virol. -2000. -Vol. 81. -P. 1293-1303.

19. Gammelin M.A. Phylogenetic analysis of nucleoproteins suggests that human influenza A viruses emerged from a 19th-century avian ancestor Text. / Gammelin M.A., Altmuller U., Reinhardt J. // Mol.Biol. Evol. -1990. -Vol.7. -P. 194-200.

20. Garcia M. 1996. Heterogeneity in the haemagglutinin gene and emergence of the higly pathogenic phenotype among recent H5N2 avian influenza viruses from Mexoco Text. / Garcia M., Crawford JM., Latimer JW. // J Gen Vir. -Vol.77. -P. 1493-504.

21. Garcia M. Heterogeneity in the haemagglutinin gene and emergence of the higly pathogenic phenotype among recent H5N2 avian influenza viruses from Mexoco Text. / Garcia M., Crawford JM., Latimer JW. // J Gen Virol. —1996. -Vol. 77. P. 1493-1504.

22. Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia Text. / Li KS [et al.] //Nature. -2004. -Vol.430. -P. 209-213.

23. Genetic relatedness of hemagglutinins of the HI subtype of influenza A viruses isolated from swine and birds Text. / Scholtissek C., Burger H'., Bachmann P.A., Hannoun C. // Virology. 1983. - Vol. 129. -P.521-523.

24. Genetic relatedness of the nucleoprotein (NP) of recent swine, turkey and human influenza A virus (H1N1) isolates Text. / Altmuller A. [et al.] & Scholtissek C. // Virus Res. -1991. -Vol. 22. P. 79-87.

25. Glycosylation of haemagglutinin and stalk-length of neuraminidase combine to regulate the growth of avian influenza viruses in tissue culture Text. / Baigent S.J. [et al.] // Virus Res. 2001. - Vol. 79. - P. 177-185.

26. Gorman O.T. 1990. Evolution of nucleoprotein gene of influenza A virus Text. / Gorman O.T., Bean W.J., Kawaoka Y. // J. Virol. -Vol.64. -P. 14871497.

27. Goto H. A novel mechanism for the acquisition of virulence by a humaninfluenza A virus Text. / Goto H., Kawaoka Y. // PNAS. -1998. -Vol. 95. -P. 10224-10228.

28. H5N1 influenza: A protean pandemic threat Text. / Guan Y. [et al.] // PNAS. -2004.-Vol. 101.-№.21.-P. 8156-8161.

29. Highly Pathogenic H5N1 Influenza virus infection in migratory Birds Text. / Liu J. [et al.] // Science. 2005. - Vol. 309. - № 5738. - P. 1206.

30. Human and avian influenza viruses target different cell types in cultures.of human airway epithelium Text. / Matrosovich Ml [et al.] // PNAS. 2004. -Vol. 101. -№ 13.-P. 4620-4624.

31. Identification and subtyping of avian influenza viruses by reverse transcription-PCR Text. / Lee M.S. [et al.] // J Virol Methods. 2001. - Vol. 97.-P. 13-22.

32. Incidence of adamantine resistance among influenza A (H3N2) viruses isolated worldwide from 1994 to 2005: a cause for concern Text. / Bright R.A. [et al.] //Lancet. -2005. Vol. 366. - P. 1175-81.

33. Interdependence of Hemagglutinin Glycosylation and Neuraminidase as Regulators of Influenza Virus Growth: a Study by Reverse Genetics Text. / Wagner R. [et al.] // J Virol. 2000. - Vol. 74. - № 14. - P. 6316-6323.

34. Intestinal influenza: replication and characterization of influenza viruses in ducks Text. / Webster R.G., Yakhno M.A., Hinshaw V.S., Bean W.J., Murti K.G. // Virology. 1978. - Vol. 84. - P. 268-278.

35. Ion channel activity of influenza A virus M2 protein: characterization of the amantadine block Text. / Wang C. [et al.] // J Virol. 1993. - Vol. 67. - P. 5585-5594.

36. Kawaoka Y. Avian-to-human transmission of the PB1 gene of Influenza A virus in the 1957 and 1968 pandemics Text. / Kawaoka Y., Krauss S., Webster R.G. // J. Virol. -1989. -Vol. 63. №. 11. - P. 4603-4608.

37. Klenk H.D. Activation cleavage of viral spike proteins by host proteases. In Cvellular receptors for animal viruses Text. / Klenk H.D., Garten W. // Wimmer E Ed.-1995. P.241-280.

38. Krug R.M. Expression and replication of the influenza virus genome Text. / Krug R.M., Alonso-Caplen F.V., Julkunen I. // The Influenza viruses. Plenum Press-New York, 1989. P.89-152

39. Kumar S. MEGA3 : Integrated software for Molecular Evolutionary Genetics Analysis and sequence alignment Text. / Kumar S., Tamura K., Nei M. // Briefings in Bioinformatics. -2004. -Vol. 5. -P. 150-163.

40. Lee C. Characterization of highly pathogenic H5N1 avian influenza A viruses isolated from South Korea Text. / Lee C., Suarez D.L., Tumpey T.M. // J Virol. 2005. - Vol. 79. - № 6. - P. 3692-3702.

41. Lin Y.P. Avian-to-human transmission of H9N2 subtype influenza A viruses: Relationship between H9N2 and H5N1 human isolates Text. / Lin Y.P., Shaw M., Gregory V. // PNAS. 2000. - Vol. 97, N 17. - P. 9654-9658.

42. Lipatov A.S. Pathogenesis of Hong Kong H5N1 influenza virus NS reassortants in mice: the role of cytokines and B-and T-cell response. Text. / Lipatov A.S., Andreansky S., Webby RJ. // J. Gen Virol. 2005. - Vol. 86. -P. 1121-1130.

43. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 5 th edition Text. — 2004 chapter 2.7.12. Avian influenza.

44. Mass mortality of harbor seals: pneumonia associated with influenza A viru. Text.,/ Geraci J.R. [et al.] // Science. -1982. -Vol. 215. -P. 1129-1131.

45. McSharry J J. Phenotypic drug susceptibility assay for influenza virus neuraminidase inhibitors Text. / McSharry J J., McDonough A.C., Olson B.A. // Clin Diagn Lab Immunol. 2004. - Vol. 11. - № 1. -P. 21-28.

46. Members of WHO Global Influenza program and collaborating lab Text. // Evolution of H5N1 avian influenza viruses in Asia. Emerging Inf Diseases. — 2005.-Vol. 11. №. 10. -P. 1515-1521.

47. Molecular Basis for High Virulence of Hong Kong H5N1 Influenza A Viruses Text. / Hatta M. [et al.] // Science. 2001. - Vol. 293. - P. 1840-1842.

48. Molecular changes associated with the transmission of avian influenza A H5N1 and H9N2 viruses to humans Text. / Shaw M. [et al.] // J Med Virol. -2002.-Vol. 66.-P. 107-114.

49. Moscona A. Oseltamivir resistance disabling our influenza defenses Text. / Moscona A. // ENGL J MED. -2005. - Vol.353. - № 25. - P. 2633-2636.

50. Munch M. Detection and subtyping (H5 and H7) of avian type A influenza virus by reverse transcription-PCR and PCR-ELISA Text. / Munch M., Nielsen L., Handberg K. // Arch Virol. -2001. -Vol.146. -P.87-97.

51. Naeve C.W. Mutations in the hemagglutinin receptor-binding site can change the biological properties of an influenza virus Text. / Naeve C.W., Hinshaw V.S, Webster R.G. //J. Virol. -1984. -Vol. 51. -P.567-569.

52. Obenauer J.C. Large-Scale Sequence Analysis of Avian Influenza Isolates Electronic resource. / Obenauer J.C., Denson J., Mehta P.K. Access mode: www.sciencexpress.org/ 26 January 2006/Page 3/0.1126/science. 1121586.

53. PB2 amino acid at position 627 affects replicative afficiency, but not cell tropism, of Hong Kong Y5N1 influenza A viruses in mice Text. / Shinya K. [et al.] // Virology. 2004. - Vol. 320. - P. 258-266.

54. Perpetuation of influenza A viruses in Alaskan waterfowl reservoirs Text. / Ito T., Okazaki K., Kawaoka Y., Takada A., Webster R.G., Kida H. // Arch. Virol. -1995. -Vol.140. -P. 1163-1172.

55. Potter C.W. A history of influenza Text. / Potter C.W. // J Appl Microbiol. — 2001.-Vol.91.-P.572-9.

56. Rogers G.N. Receptor determinants of human and animal influenza virus isolates: differences in receptor specificity of the H3 hemagglutinin dased on species of origin. Text. / Rogers G.N., Paulson J.C. // Virol. — 1983. — Vol.127.-P.361-373.

57. Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual Text. / J. Sambrook, E.F. Fritsch , T. Maniatis Cold Spring Harbor Press, 2001.

58. Scholtissek C. On the origin of the human Influenza virus subtypes H2N2 and H3N2 Text. / Scholtissek C., Rohde V., von Hoyningen. // Virol. -1978. -Vol. 87. — P.13-20.

59. Selection of influenza virus mutants in experimentally infected volunteers treated with oseltamivir Text. / Gubareva L.V. [et al.] // J Infect Dis. — 2001. -Vol. 183.-№4.-P. 523-531.

60. Shafer A.L. Development and validation of a competitive enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Type A influenza antibodies in avian sera Text. / Shafer A.L., Katz J.B., Eernisse K.A. // Avian Dis. — 1998. — Vol. 42.-P. 28-34.

61. Songyang Z. Recognition of unique carboxyl-terminal motifs by distinct PDZ domains Text. / Songyang Z., Fanning Z., Fu G. // Science. -1997. — Vol: 275.-P. 73-7.

62. Spackman E. Development of a real-time reverse transcriptase PCR assay for type A influenza virus and the Avian H5 and H7 Hemagglutinin subtypes

63. Text. / Spackman E., Senne D.A., Myers T.J. // J. Clin. Microb.- 2002.- Vol. 40. № 9.1 - P. 3256-3260.

64. Starick E. Type- and subtype-specific RT-PCR assays for avian influenza A virus (AIV) Text. / Starick E., Romer-Oberdorfer A., Werner O. // J. Vet. Med. B. Infect. Dis. Vet. Public Health. 2000. - Vol. 47. - P. 295-301.

65. Stevens J. Structure and receptor specificity of the hemagglutinin from an H5N1 influenza virus Text. / Stevens J., Blixt O., Tumpey T.M. // Science. — 2006. Vol. 312. - P. 404-410.

66. Subbarao K. 2000 Molecular aspects of avian influenza (H5N1) viruses isolated from humans Text. / Subbarao K., Shaw M.W. // Rev Med Virol. — 2000.-Vol.10.-P. 337-348.

67. Sugiura A. Neurovirulence of influenza virus in mice. Neurovirulence of recombinants between virulent and avirulent virus strains Text. / Sugiura A., Ueda M. // Virology. 1980. - Vol. 101. - № 2. - P. 440-449.

68. The National Training Course on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance. Text. Harbin, China (May 20 - 26, 2001). - Harbin. - 2001.-P. 79

69. The role of influenza A virus hemagglutinin residues 226 and 228 in receptor specificity and host range restriction Text. / Vines A. [et al.] // J Vorol. —1998. Vol. 72. - № 10. - P. 7626-7631.

70. The surface glycoproteins of H5 influenza viruses isolated from humans, chickens, and wild aquatic birds have distinguishable properties Text. / Matrosovich M., Zhou N., Kawaoka Y., Webster R. // J. Virol. 1999. - Vol. 73.-P. 1146-1155.

71. Type-A influenza viruses isolated from wild free-flying ducks in California Text. / Slemons R.D., Johnson D.C., Osborn J.S., Hayes F. // Avian Dis. -1974. Vol.18.-P.l 19-124.

72. Universal primer set for the full-length amplification of all influenza A viruses Text. / Hoffinann E. [et al.] // Arch Virol. -2001. -Vol. 146. -P. 2275-2289.

73. Webster R.G. Evolution and ecology of Influenza A viruses Text. / Webster R.G. //Microbiol. Rev. 1992. - Vol. 56. - № 1. - P. 152-179.

74. Webster. R.G. Evolution and ecology of Influenza A viruses Text. / Webster. R.G., Bean W.J., Gorman O. T. // Microbiol. Rev. 1992. - Vol. 56, N 1.1. P. 152-179.

75. World Health Organization H5N1 avian Influenza: timeline. Electronic resource. — Access mode:http://www.who.int/csr/disease/avianinfluenza/timeline.pdf;

76. Zambon M.C. Epidemiology and pathogenesis of influenza Text. / Zambon M.C. // J Antimicrob Chemotherapy. 1999. - Vol. 44. - P. 3-9.

77. Zhou N.N. Genetic reassortment of Avian, swine, and human Influenza A viruses in American pigs Text. / Zhou N.N., Senne D.A., Landgraf G. // J Virol. 1999. - Vol. 73. - № 10. - P. 8851-8856.