Электрохимический метод определения патогенных микроорганизмов (Salmonella Thyphimurium) с использованием магнитных наночастиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Глазырина, Юлия Александровна

  • Глазырина, Юлия Александровна
  • кандидат химических науккандидат химических наук
  • 2010, Екатеринбург
  • Специальность ВАК РФ02.00.02
  • Количество страниц 145
Глазырина, Юлия Александровна. Электрохимический метод определения патогенных микроорганизмов (Salmonella Thyphimurium) с использованием магнитных наночастиц: дис. кандидат химических наук: 02.00.02 - Аналитическая химия. Екатеринбург. 2010. 145 с.

Оглавление диссертации кандидат химических наук Глазырина, Юлия Александровна

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

Биосенсоры.

1.1. Ферментные сенсоры.

1.2. Сенсоры на основе микроорганизмов.

1.3. Сенсоры на основе надмолекулярных структур клетки.

1.4. Иммуносенсоры.

1.5. ДНК-сенсоры.

1.6. Постановка задачи.

ГЛАВА 2. АППАРАТУРА И ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА.

2.1. Оборудование и средства измерений.

2.2. Реактивы, рабочие растворы.

2.3. Методики эксперимента.

ГЛАВА 3. СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ НАНОЧАСТИЦ Ге301.

3.1. Выбор метода синтеза наночастиц Ре304.

3.2. Определение динамики изменения размеров агрегатов наночастиц Ре304 в водных суспензиях.

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ НАНОЧАСТИЦ Ге304 С РАЗЛИЧНЫМИ КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК.

4.1. Электронно-микроскопическое исследование взаимодействия наночастиц Ре304 с различными культурами клеток.

4.2. Жизнеспособность клеточных культур при воздействии наночастиц.

4.3. Определение количества наночастиц, поглощенных клетками.

ГЛАВА 5. ПРИМЕНЕНИЕ НАНОЧАСТИЦ Ге304 В ГИБРИДНОМ ИММУНОАНАЛИЗЕ.

5.1. Метод детектирования магнитной нанометки.ВО

5.2. Применение магнитного поля.

5.3. Определение правильности и специфичности метода электрохимического иммуноанализа.

5.4. Анализ реальных объектов.

5.4 Антитела, меченные наночастицами РезС>4.

5.5. Использование микроорганизмов Escherichia coli в качестве модельной системы.

ВЫВОДЫ.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Аналитическая химия», 02.00.02 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Электрохимический метод определения патогенных микроорганизмов (Salmonella Thyphimurium) с использованием магнитных наночастиц»

Актуальность темы Сальмонеллез является одним из наиболее распространенных в развитых странах инфекционных заболеваний. Заболеваемость сальмонеллезом повсеместно имеет тенденцию к росту, особенно это касается крупных городов с централизованной системой продовольственного снабжения.

Диагноз сальмонеллеза традиционно подтверждается бактериологическими, серологическими (реакция агглютинации (РА), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)) методами, а также иммуноферментным анализом (ИФА) и методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Недостатками этих методов являются: в ряде случаев низкая чувствительность и специфичность, поздние сроки подтверждения диагноза (РА, РНГА), высокая стоимость используемых реагентов (ИФА) и оборудования (ПЦР), необходимость создания специальных условий и длительность проведения анализа (бактериологический метод).

Объединение достижений и знаний в области нанотехнологий, толстопленочной печати, органической, полимерной, аналитической химии, электрохимии и биохимии ведет к рождению новой генерации сенсоров и иммуносенсоров. Не в малой степени интерес к иммуносенсорам обусловлен уникальной специфичностью иммунореакции образования комплексов антител с антигенами или гаптенами.

Диссертация посвящена развитию новых подходов к созданию гибридного электрохимического метода иммуноанализа, включающего стадию магнитной сепарации наночастиц и интенсификацию процесса концентрирования определяемых компонентов в магнитном поле, для диагностики сальмонеллеза. Предлагается использовать магнитные наночастицы оксида металла (Ре304) в качестве детектируемой (электрохимической) сигналообразующей метки и магнитное концентрирование коньюгата на специальном твердом субстрате.

Работа является частью исследований, проводимых на кафедре физики и химии Уральского государственного экономического университета в рамках заданий Министерства промышленности и науки Свердловской области «Нанотехнологии в био- и химических сенсорах для мониторинга окружающей среды и здоровья человека». Исследования выполнены при поддержке Международного научно-технического центра (МНТЦ, грант «Разработка электрохимических биосенсоров с использованием наноструктуированных материалов на основе углеродсодержащих соединений» (2006-2008 гг. Выполненные исследования соответствуют приоритетному направлению развития науки, технологии и техники "03. Индустрия наносистем и материалов" и критической технологии РФ "07. Нанотехнологии и наноматериалы" (Пр-842 от 21.06.2006).

Цель работы Создание нового гибридного электрохимического метода иммуноанализа для определения патогенных микроорганизмов, основанного на применении магнитных наночастиц для магнитной сепарации и концентрирования конъюгатов микроорганизм — наночастицы на поверхности твердофазной подложки.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи; осуществить синтез наночастиц с воспроизводимыми целевыми характеристиками; исследовать структуру полученных наночастиц, их физико-химические свойства и динамику изменения размера агрегатов в водной суспензии; выбрать условия и способы иммобилизации наночастиц на/в поверхности/объеме клетки; выбрать рабочие условия формирования иммунокомплекса антиген (патогенный микроорганизм - сальмонелла) - антитело; найти условия формирования электрического сигнала; сравнить результаты анализа инфицированных сальмонеллезом проб, полученные с использованием предложенного подхода и традиционных методов; показать возможность расширения предложенного подхода для других видов микроорганизмов.

Научная новизна работы. Впервые в качестве метки в электрохимическом иммуноанализе использованы магнитные наночастицы оксида переходного металла Fe304.

Впервые проведено комплексное исследование процессов агрегации наночастиц Fe304 в зависимости от их концентрации в водной суспензии. Показано, что накопление наночастиц на/в клетке и их электрохимическая активность зависит от природы клеток. Влияние наночастиц Fe304 на жизнеспособность клеточных культур на примере их взаимодействия с культурой клеток L41 (онкогенная клеточная линия человека (кровь больного лейкемией)), клетками эмбрионального легкого человека, трансформированного вирусом SV-40 (клетки WI-38), микроорганизмами Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus не значительно.

Получены зависимости количества поглощенных клетками наночастиц от времени их взаимодействия. Показана взаимосвязь электрохимического отклика с количеством наночастиц, содержащихся в иммунокомплексе и концентрацией искомых возбудителей в растворе.

Предложен новый гибридный вариант иммуноанализа, включающий: стадию магнитной сепарации, что позволило осуществить отделение несвязанных наночастиц; стадию магнитного концентрирования, что позволило сократить время анализа и увеличить его чувствительность.

Практическая значимость работы. Предложен алгоритм реализации гибридного иммуноэлектрохимического метода диагностики сальмонеллеза.

Предложенный алгоритм гибридного иммуноэлектрохимического метода анализа отличается от известных исключением: применения нестабильных ферментов и дорогостоящего оборудования; введения в анализируемый раствор специальных субстратов, обеспечивающих протекание сигналообразующей реакции; необходимости создания специальных условий для проведения анализа.

Метод обеспечивает возможность подтверждения диагноза в ранние сроки заболевания.

Предложено использование бактериального антигена для определения патогенных микроорганизмов, позволяющее увеличить чувствительность анализа.

Предложенный метод анализа обеспечивает предел обнаружения 8.18 КОЕ/см3 для бактерии и антигена 1.51 хЮ"6 мг/см3 Salmonella thyphimurium, что соответствует характеристикам ПЦР анализа.

Простота и экономическая эффективность метода позволяет организовать иммуноанализ на месте в небольших клиниках.

На основе результатов работы получен патент РФ № 2397243 от 20.08.2010.

Проведены испытания предложенного иммуноэлектрохимического метода количественного определения Salmonella thyphimurium в сравнении с традиционно используемыми методами - ПЦР анализа и бактериального посева в ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор», г. Новосибирск. Получен акт испытаний, подтверждающий возможность использования предложенного электрохимического способа иммуноанализа для диагностики патогенных микроорганизмов.

Результаты диссертационной работы использованы ФГУН «Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Роспотребнадзора при выполнении

Федеральной целевой программы "Развитие инфраструктуры наноиндустрии в Российской Федерации на 2008 - 2010 годы" для разработки нормативно-методического обеспечения и средств контроля содержания наночастиц на объектах производственной сферы.

На защиту выносятся:

- результаты экспериментальных исследований структуры, размерного состава наночастиц Fe304, синтезированных различными методами, полученные с помощью измерения дифракции и электронной микроскопии высокого разрешения (ПЭМ). Выбор оптимального способа получения стабильных в суспензии наночастиц с узким распределением по размерам, определенной формы, состава, структуры;

- результаты исследования взаимодействия наночастиц Fe304 с различными культурами клеток с целью выбора оптимальных условий,их взаимодействия;

- способ количественного определения патогенных микроорганизмов, основанный на формировании иммунокомплексов с участием меченых магнитными наночастицами бактерий (антигенов) и отличающийся повышенной чувствительностью и сокращенным временем анализа;

-алгоритмы количественного определения бактерий Salmonella typhimurium, Escherichia coir,

- результаты анализа фекальных масс животных, инфицированных Salmonella typhimurium, подтвержденные данными независимого стандартного бактериологического метода.

Апробация работы. Результаты исследований представлены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, Россия 2007 г.), на Международном семинаре-ярмарке «Российские технологии для индустрии» «Нанотехнологии в электронике, энергетике, экологии и медицине» (Санкт-Петербург, Россия, 2007 г.), на VII Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием «Электрохимические методы анализа (ЭМА-2008)» (Уфа, Россия, 2008 г.), на

Третьей Всероссийской конференции по наноматериалам «НАНО-2СЮ9» (Екатеринбург, Россия, 2009 г.), на выставке-ярмарке продукции и технологий промышленных предприятий и научных организаций Свердловской области «Нанотехнологии 2009» (Екатеринбург, Россия, 2009- г.), на 9 Семинаре «(Био)сенсоры и биоаналитические микротехнологии для защиты окружающей среды и клинического анализа» (Монреаль, Канада, 2009 г.), на III Всероссийской конференции с международным участием «Аналитика России» (Краснодар, Россия, 2009 г.), на научно-практической конференции «Нанотехнологии - производству» (Екатеринбург, Россия, 2009 г.), Съезде аналитиков России (Москва (пансионат «Клязьма») 2010 г.), на Симпозиуме с международным участием «Теория и практика электроаналитической химии» (Томск, Россия, 2010 г.).

Публикации. По содержанию диссертационной работы опубликовано 18 работ, в том числе 1 патент РФ, 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 1 глава в монографии, тезисы 13 докладов на всероссийских и международных конференциях.

Личное участие автора состоит в решении основных задач исследования, планировании и проведении экспериментов, обработке, интерпретации и систематизации результатов исследования.

Автор выражает искреннюю благодарность: научному консультанту, доц. кафедры аналитической химии Уральского федерального университета им. первого Президента России Б.Н. Ельцина (г. Екатеринбург) к.х.н. Козициной А.Н.; с.н.с. ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор», (г. Новосибирск) к.б.н. Агафонову А.П. за предоставление биологических образцов, результатов ПЦР анализа и бактериального посева, а также за помощь в проведении электронно-микроскопических исследований; коллективам Института физики металлов УрО РАН (г. Екатеринбург) и клинико-диагностического центра (лабораторной диагностики ВИЧ, инфекционных патологий, болезней матери и ребенка) (г. Екатеринбург) за помощь в проведении электронно-микроскопических исследований; д.ф-м.н., проф. Сафронову А.П. (УрГУ им. A.M. Горького, г. Екатеринбург) за предоставление результатов исследований суспензий методом динамического рассеяния света.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста, включая 16 таблиц, 49 рисунков и состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы из 150 наименований и 3 приложений.

Похожие диссертационные работы по специальности «Аналитическая химия», 02.00.02 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Глазырина, Юлия Александровна

ВЫВОДЫ

1. Сравнительный анализ размерного состава наночастиц Fe304 полученных в различных условиях (соосаждение, использование ПАВ) показал возможность получения суспензий с узким размерным составом с максимумом при 50 и 10 нм. Комплексом физических методов (измерение электронной дифракции, ПЭМ, динамическое светорассеяние) подтверждена ожидаемая химическая структура наночастиц, а также дана оценка их агрегативной устойчивости. Выбраны условия получения наночастиц, позволившие получить высокоустойчивые суспензии, не склонные к агрегации в течение, по крайней мере 24 ч и имеющие максимальную долю частиц с линейными размерами около 10 нм.

2. Показано, что взаимодействие наночастицt Fe304 с клетками микроорганизмов и тканей человека зависит от природы клеток. Наблюдается накопление наночастиц как на поверхности клеток, так и в цитозоле и субклеточных структурах клетки. Характер взаимодействия, как и структура полученных агрегатов, определяются природой клеток и связаны, по-видимому, с особенностями строения клеточной мембраны.

3. Исследования цитотоксичности полученных наночастиц Fe304 по отношению к различным культурам клеток показали их низкую активность, что позволило использовать суспензии наночастиц в иммунохимических экспериментах.

4. Разработан новый вариант электрохимического определения S. thyphimurium SL 7207, основанный на их взаимодействии с наночастицами Fe304 с последующей магнитной сепарацией несвязанных наночастиц и магнитным концентрированием образующегося конъюгата и определением его концентрации. В качестве источника информации использована концентрация ионов железа, найденная методом ИВ, в растворе образующемся после кислотного разложения иммунокомплексов. Способ позволяет достичь предела обнаружения 8.18 КОЕ/см3 и 1.51х10"6 мг/см3 (1.51 КОЕ /см3) для бактерий и бактериального антигена, соответственно. Надежность и правильность результатов электрохимического иммуноанализа подтверждены результатами, полученными на модельных и реальных объектах, а также путем сравнения с традиционными вариантами бактериального анализа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Глазырина, Юлия Александровна, 2010 год

1. Будников Г.К. Биосенсоры как новый аналитических устройств. // Соросовский образовательный журнал. 1996. - №12. - С. 26 -32.

2. Bacon N.C., Hall Е.А.Н. A sandwich enzyme electrode giving electrochemical scavenging of interferents // Electroanalysis. 1999. - V 11. - №.10-11. - P.749-756.

3. Albarela-Sirvent M., Merkoci A., Alegret S. Thick-film biosensors for pesticides produced by screen-printing of graphite-epoxy composite and biocomposite pastes // Sensors and Actuators B. 2001. - № 79. - P. 48-57.

4. Wang J., Chen L., Liu J. Critical comparison of metallized and mediator-based-carbon paste glucose biosensors // Electroanalysis. 1997. - V 9. - № 4. - P. 298-301.

5. Saby C., Mizutani F., Yabuki S. Glucose sensor based on carbon paste electrode incorporating poly(ethylene glycol) modified glucose oxidase and various mediators // Analytica Chimica Acta. - 1995. - № 304. - P. 33-39.

6. Wang J., Pamidi Р.У.А., Park D.S. Screen-printed sol-gel enzyme:containing carbon inks // Analytical Chemistry. 1996. - V 68. - № 15. - P. 2705-2706.

7. Christie I.M., Vadgama P. Modification of electrode surfaces with oxidized phenols to confer selectivity to amperometric biosensors for glucose determination // Analytica Chimica Acta. 1993. - № 274. - P. 191-199.

8. Cummings E.A., Linquette-Mailley S., Mailley P., Cosnier S., Eggins B.R., McAdams E.T. A comparison of amperometric screen-printed, carbon and theirapplication to the analysis of phenolic compounds present in beers // Talanta. 2001. -№55.-P. 1015-1027.

9. Loechel C., Chemnitius G.-C., Borchardt M., Cammann K. Amperometric bienzyme based biosensor for the determination of lactose with an extended linear range // Zeitschrift fur Lebensmitteluntersuchung und forschung A. 1998. - 207. -P. 381-385.

10. Prodromidis M.I., Karayannis M. I. Enzyme based amperometric biosensors for food analysis // Electroanalysis. 2002. -V 14. - № 4. - P. 241-261.

11. Lenarczuk T., Wencel D:, Glab S., Koncki R. Prussian blue-basedi optical glucose biosensor in flow-injection analysis // Anal Chim Acta. 2001. - № 447. - Pi 23-32.

12. Cosnier S., Perrot H., Wessel R. Biotinylated polypyrrole modified quartz crystal microbalance for the fast and reagentless determination of avidin concentration // Electroanalysis.-2001.-V 13.-№ 11.-P. 971-974.

13. Catterall K., Morris K., Gladman C., Zhao H., Pasco N., John R. The use of microorganisms with broad range substrate utilisation for the ferricyanide-mediated rapid determination of biochemical oxygen demand // Talanta. 2001. - V 55. — P. 1187-1194.

14. Petanen T., Romantschuk M. Use of bioluminescent bacterial sensors as an alternative method for measuring heavy metals in soil extracts // Analytica Chimica Acta. -2002. № 456. - P. 55-61.

15. Lee J.I., Karube I. Reactor type sensor for cyanide using an immobilized microorganism // Electroanalysis. 1996. - V 8. - № 12. - P. 1117-1120.

16. Koblizek M., Masojidek J., Komenda J., Kucera T., Pilloton R., Mattoo A.K., Giardi M.T. A sensitive Photosystem II-based biosensor for detection of a class of herbicides // John Wiley & Sons, Inc. 1998. - P. 664-669.

17. Harms II, Wells MC, van der Meer JR. Whole-cell living biosensors are they ready for environmental application? // Appl Microbiol Biotechnol: - 2006: - № 701 -P. 273-280.

18. Warsinke A., Benkert A., Scheller F.W. Electrochemical; immunoassays // Presenilis J Anal. Chem. 2000. - V 366. - P. 622-634.

19. Медянцева Э:П., Халдеева E.B., Будников Г.К. Иммуносенсоры в< биологии и медицине: аналитические возможности, проблемы и перспективы // Ж. Аналитической химии. 2001. - Т. 56. - № 10. - С. 1015-1031.

20. Skladal P. Advances in electrochemical5 immunosensors // Electroanalysis. -19.97. V 9. - № 10. - P. 737-745. .

21. Stefan R.-I., Ikoos van Stadën J.E., Aboul-Enein H.Y.Immunosensors. in,clinical analysis// Fresenius J^AnaL Chem:-2000L- №366;—P: 659-668;25: Hage D.S. Immunoassays // Anal. Chem. 1999 - V 71. - P. 294R-304R.

22. Ghindilis; A.L., Atanasov P., Wilkins M., Wilkins E. Immunosensors: electrochemical sensing and other engineering approach // Biosens. Bioelectron. -1998. V 13.- №1,- P. 113-131.

23. Berggren C., Bjarnason В., Johansson G. Capacitive biosensors // Electroanalysis. 2001.- V 13. - № 3. - P. 173-180.

24. Li Q., Luo G., Feng J. Direct electron transfer for heme proteins on nanocrystalline Ti02 film // Electroanalysis. 2001. - V 13. - № 5. - P. 359-363.

25. Bataillard P., Gardies F., Jaffrezic-Renault N., Martelet C. Direct detection of immunospecies by capacitance measurements // Anal. Chem. — 1988. № 60. - P. 2374-2379.

26. Berggren C., Johansson G. Capacitance measurements of antibody-antigen interactions in a flow system // Anal. Chem. 1997. - № 69. - P: 3651-3657.

27. Varlan A.R., Suls J., Sansen W., Veelaert D., Deloof A. Capacitance sensor for the allastostatin direct immunoassay // Sensors .and Actuators B. 1997. - № 44. -P. 334-340.

28. Berney Hi, Alderman. J:, Lane W;, Collins JRK. A differential, capacitance biosensor using polyethylene glycol to overlay the biolayer // Sensors; and Actuators B; 1997. - № 44. - Pi 578-584. ;

29. B. König, M: Gratzel. A novel immunosensor for Herpes viruses // Anal. Chem. 1994, 66, 3410344.

30. Su X., Chew F.T., Li S.F.Y. Piezoelectric quartz crystal based label-free analysis for allergy disease // Biosensors & Bioelectronics. 2000. - № 15. - P. 629-639.

31. Fung Y.S., Wong Y.Y. Self-assembled monolayers as the coating quartz piezoelectric crystal immunosensor to detect Salmonella in aqueous solution // Anal. Chem. 2001. - № 73. - P. 5302-5309.

32. Sakai G., Saiki T., Uda T., Miura N., Yamazoe N. Evaluation of binding of, human serum albumin (HAS) to mono polyclonal antibody by means of piezoelectric immunosensing// SensorsandActuators B!,— 1997; №*42. - P:89-94l

33. Masson M:, YumK.S;, Haruyama Ti,.Kobatake E., Aizawa M: Quartz crystal-microbalance bioaffinity sensor for biotin // Anal. Chem. 1995, 67, p. 2212- 2215

34. Bendov I., Willner I., Zisman E. Piezoelectric immünosensors for urine specimens of Chlamydia trachomatis employing, quartz crystal microbalance microgravimetric analyses // Anal. Chem. 1997. - № 69. - P. 3506- 3512.

35. Parkovsky D.B., Riordan T.C., Guilbault G.G. An immunosensor based on the glucose oxidase label and optikal oxygen detection // Anal. Chem. 1999. - № 71. -P. 1568-1573.

36. Surugiu I., Danielsson B., Ye L., Mosbach K., Haupt K. Chemiluminescence imaging ELISA using an imprinted polymer as the recognition element instead of an antibody // Anal. Chem. -2001. №»73: - P: 487-491.

37. Delehanty J.B., Ligher F.S. A microarray immunoassay for simultaneous detection of proteins and bacteria // Anal. Chem. 2002. - № 74. - P. 5681-5687.

38. Sapsford K.E., Charles P.T, Patterson C.H., Lighler F.S. Demonstration of four immunoassay formats using the array biosensor // Anal. Chem. 2002. - № 74. - P. 1061-1068.

39. Penalva J., Puchades R., Maquieira A. Analytical properties of immunosensors working in organic media // Anal. Chem. 1999. - №71. - P. 3862-3872.

40. Petrou P.S., Kakabakos S.E., Christofidis I., Argitis P., Misiakos K. Multi-analyte capillary immunosensor for the determination hormones in human serum samples // Biosensors & bioelectronics. 2002. - № 17. - P. 261-268.

41. Yakovleva J., Davidsson R., Lobanova A., Bengtsson M., Eremi S., taurell Т., Emneus J. Microfluidic enzyme immunoassay using- silicon microchip with immobilized antibodies and chemiluminescence detection // Anal. Chem. 2002. - № 74.-P. 2994-3004. *

42. Turiel E., Fernandez P., Perez-Conde C. Oriented antibody immobilization for atrazine determination by a flow-through fluoroimmunosensor // Fresenius J Anal Chem. 1999. - № 365. - P. 658-662.

43. Решетников C.C. Иммуноферментный анализ альфа-фетопротеина, использование в диагностике заболеваний человека // Новости «Вектор-Бест». — 1997.-№6Б.

44. Scharnweber Т., Ficher М., Suchanek М., Knopp D. Monoclonal antibody to polycyclic aromatic hydrocarbons based on a new benzoa.pyrene immunogen // Fresenius J Anal Chem. 2001. - № 471. - P. 578-585.

45. Darwish I.A., Blake D.A. Development and validation of a one-step immunoassay for determination of cadmium in human serum // Anal. Chem. 2002. -№74.-P. 52-58.

46. Galve R., Nichkova M., Camps F., Sanchez-Baeza F., Marco M.-P. Development and evaluation of an immunoassay for biological monitoring chlorophenols in urineas potential indicators of occupational exposure // Anal. Chem. 2002. - № 74. - P. 468-478.

47. Eremenko A.Y., Bauer C.G., Makower A., Kanne B., Baumgarten H., Schelller F.W. The development of a non-competitive immunoenzymometr cocaine // Anal.Chim. Acta. 1998. -V 358. - № 1. - P. 5-13

48. Dai S., Meyerhoff M.E. Nonseparation binding / immunoassay using polycation-sensetive membrane electrode detection // Electroanalysis. 2001. — V 13. - № 4. - P. 276-283.

49. Ercole C., Gallo M.D., Pantalone M., Santucci S., Mosiello L., Laconi C., Lepidi A. A biosensor for Escherichia coli based on a potentiometric alternating biosensing (PAB) transduser // Sensors and Actuators B. 2002. - № 83. -P. 48-52.

50. Liu G.-D., Yan J.-T., Shen G.-L., Yu R.-Q. Renewable amperometric immunosensor for complement 3 (C3) assay in human serum // Sensors and Actuators B. 2001. - № 80. -P. 95-100.

51. Milligan C., Ghindilis A. Laccase based sandwich scheme immunosensor employing mediatorless electroanalysis // Electroanalysis. — 2002. V 14. - № 6. - P. 415-419.

52. Peng T., Cheng Q., Stevens R. Amperometric detection of Escherichia coli heat-labile enterotoxin by redox diacetylenic vesicles on a sol-gel thin-film electrode // Anal. Chem. 2000. - № 72. - P. 1611-1617.

53. Fernandez-Sanchez C., Gonzalez-Garcia M.B., Costa-Garcia A. AC voltammetric carbon paste-based enzyme immunosensors // Biosensors & Bioelectronics. 2000. -№ 14.-P. 917-924.

54. Wilner I., Blonder R., Dagan A. Application of photoisomerizable antigenic monolayer electrodes as reversible amperometric immunosensors // American Chemical Society. 1994. - № 116. - P. 9365-9370.

55. Ju H., Yan G., Chen F., Chen H. Enzyme-linked immunoassay of a-1-fetoprotein in serum by differential pulse voltammetry // Electroanalysis. 1999. - V 11. - № 2. -P. 124-127.

56. Van Es R.M., Setford S.J., Blankwater Y.U., Meijer D. Detection of gentamicin in milk by immunoassay and flow injection analysis with electrochemical measurement // Anal. Chim. Acta. 2001. - № 429. - P. 37-47.

57. Keay R.W., Mcneil C J. Separation-free electrochemical immunosensor for rapid determination of atrazine // Biosensors & Bioelectronics. -1998. № 13. - P. 963-970.

58. Carlo M.D., Lionti I., Taccini M., Cagnini A., Mascini M. Disposable screen-printed electrodes for the immunochemical detection of polychlorinated biphenyls // Anal. Chim. Acta. 1997. - № 342. - P. 189-197.

59. O'Regan T.M., Pravda M.,. O'Sullivan C.K, Guilbaut G.C. Development of disposable immunosensor for the detection of human heart fatty-acid binding protein in human whole blood using screen-printed carbon electrodes // Talanta. 2002. - № 57.-P. 501-510.

60. Liu G.D., Wu Z.Y., Wang S.P., Shen G.L., Yu R.Q. Renewable amperometric immunosensor for Schistosoma japonium antibody assay // Anal. Chem. — 2001. № 73.-P. 3219-3226.

61. Liu C.-H., Liao K.-T., Huang H.-J. Amperometric immunosensors based on protein A coupled polyaniline-perfluorosulfonated ionomer composite electrodes // Anal. Chem. 2000. - 72. - P. 2925-2929.

62. Pravda M., O'Meara C., George G., Guilbaut G. Polishing of screen-printed electrodes improves IgG adsorbtion // Talanta. 2001. - № 54. - P. 887-892.

63. Krishnan R., Ghindilis A.L., Atanasov P., Wilkins E., Montoya J., Koster F.T. Amperometric immunoassay for Hantavirus infection // Electroanalysis. 1996. - V 8. - № 12.-P. 1131-1134.

64. Pumera M., Sanchez S., Ichinose I., Tang J. Electrochemical nanobiosensors. // Sensors and Actuators B. 2007. -№ 123. - P. 1195-1205.

65. Huang X.-J., Choi Y.-K. Chemical sensors based on nanostructured materials. // Sensors and Actuators B. 2007. -№ 122. - P. 659-671.

66. Riu J., Maroto A., Rius F. X. Nanosensors in environmental analysis. // Talanta. 2006. - № 69. - P.887-892.

67. Yang J., Yang Т., Feng Y., Jiao K. A DNA electrochemical sensor based on nanogold-modified poly-2,6-pyridinedicarboxylic acid film and detection of PAT gene fragment. // Anal. Biochem. 2007. - № 1. - P.24-30.

68. Wang H., Li J.S., Ding Y.J., Lei C.X., Shen G.L., Yu R.Q. Novel immunoassay for Toxoplasma gondii-specific immunoglobulin G using a silica nanoparticle-based biomolecular immobilization method. // Anal. Chim. Acta. 2004. - № 501. - P.37 -43.

69. Дыкман JI. А., Богатырев В. А. Наночастицы золота: получение, функционализация, использование в биохимии и иммунохимии. // Успехи химии. 2007. - Т. 76. - № 2. - С. 199-213.

70. Ruo Y., Ying Z., YaQin C., Ying Z. and Ali S. Highly sensitive, reagentless amperometric immunosensor based on a novel redox-active organic-inorganiccomposite film // Sensors and Actuators B: Chemical. 2006. - V 132. - № 2. -P. 625-631

71. Wang S.-F., Tan Y.-M. A novel amperometric immunosensor based on Fe3C>4 magnetic nanoparticles/chitosan composite film for determination of ferritin. // Anal. Bioanal. Chem. 2007. - № 378. - P. 703-708.

72. Tang D., Yuan R., Chai Y., Fu Y. Peculiarities of the electrochemical behavior of modified electrodes containing single-wall carbon nanotubes. // Electrochemistry Communications. 2005. - V 7. - № 2. - P. 177-182.

73. Wang J. Carbon-Nanotube Based Electrochemical Biosensors: A Review // Electroanalysis. 2005. - V 17. - № 1. - P.7-14.

74. Trojanowicz M. Analytical applications of carbon nanotubes. // Trends in Anal. Chem. 2006. - № 25. - P. 480-489.

75. O'Connor M., Kim S.N., Killard A.J., Forster R.J., Smyth M.R., Paradimitrakopoulos F., Rusling J. F. Mediated amperometric immunosensing using single walled carbon nanotube forests. // Analyst. 2004. - № 129. - P. 1176-1180.

76. Viswanathan S., Wu L.-C., Huang M.-R., Ho J.-A. Electrochemical immunosensor for cholera toxin using liposomes and poly (3,4-ethylenedioxythiophene)-coated carbon nanotubes, // Anal. Chem. — 2006. № 78. — P. 1115-1121.

77. Okuno J., Mehashi K., Keman K., Takamura Y., Matsumoto K., Tamiya E. Label-free immunosensor for prostate-specific antigen based on single-walled carbon nanotube array-modified microelectrodes.// Biosensors Bioelectronics. 2007. - № 22.-P. 2377-2381.

78. Zhang L., Yuan R1., Chai Y., Chen S., Wang N. and Zhu Q. Layer-by-layer selfjassembly of films of nano-Au and Co(bpy)33+ for the determination of Japanese B

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.