Электрические свойства водоросли Chlorella pyrenoidosa в оценке действия пентахлорфенола на функциональное состояние клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.16, кандидат биологических наук Озерова, Елена Сергеевна

• Озерова, Елена Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Озерова, Елена Сергеевна

I. ВВЕДЕНИЕ.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Загрязнение экосистем фенольными соединениями и их взаимодействие с водорослями.

2.2. Проблемы биотестирования и мониторинга фенольного загрязнения пресных вод.

2.3. Электрические свойства клеток как способ оценки функционального состояния водорослей.

2.4. Изученность вопросов оценки функционального состояния водорослей по их электрическим свойствам.

2.5. Влияние фенольных соединений на фотосинтетическую активность зеленых водорослей.

Цель и задачи исследования.

III. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Объект исследования.

3.2. Методы исследования. культуры водоросли С. pyrenoidosa в широком диапазоне ^ частот.

4.1.1. Выбор фазы развития культуры для использования водоросли в качестве тест-объекта.

4.1.2. Частотная зависимость электрических параметров клеток и коэффициент поляризации.

4.1.3. Импедансная диаграмма в комплексной плоскости.

4.2. Электрические свойства клеток водоросли С. pyrenoidosa при действии ингибиторов метаболизма.

4.2.1. Электрические свойства клеток водоросли при действии 2,4® динитрофенола.

4.2.2. Электрические свойства клеток водоросли при действии диурона.

4.3. Электрические свойства клеток водоросли С. pyrenoidosa при действии пентахлорфенола.

4.3.1. Частотная зависимость электрических параметров клеток водоросли и коэффициент поляризации в присутствии пентахлорфенола.

4.3.2. Комплексная импедансная диаграмма суспензии клеток водоросли при действии пентахлорфенола.

4.4. Влияние действия пентахлорфенола на фотосинтетическую активность водоросли С. pyrenoidosa по характеристикам флуоресценции.

VI. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Электрические свойства водоросли Chlorella pyrenoidosa в оценке действия пентахлорфенола на функциональное состояние клеток»

В ближайшем будущем пресная вода станет не менее значимым лимитирующим развитие человечества фактором, чем энергетические ресурсы планеты. Сохранение или улучшения качества воды в естественных и искусственных водоемах при современном уровне антропогенного загрязнения водных экосистем крайне актуально для Российской Федерации, богатейшей в мире по запасам пресной воды (Рыбальский, 1993; Ваганов и др., 2002). Глобальное загрязнение особенно опасно для пресных вод, поскольку они составляют около 3% от общих запасов воды на планете и являются наиболее пригодными для использования в промышленных и бытовых целях (Израэль и др., 1991; Кожова, Бейм, 1993; Галазий и др., 1995).

Загрязнение пресных вод промышленными стоками, содержащие в зависимости от используемых технологий различные фенольные соединения (Ф), такие как фенол, бутилфенол, дифенилпропан, хлор- и нитрофенолы, а также и пестициды с фенольными ядрами, нитрофенолы, является наиболее распространенным (Pentachlorophenol, 1987; Корте и др., 1997; Фёдоров, Яблоков, 1999). Некоторые из хлорфенольных соединений, например, пентахлорфенол (ПХФ) обладают ярко выраженным бактерицидным, фунгицидным, гербицидным и альгицидным действием. Эти свойства определяет область практического применения ПХФ для защиты изделий из дерева, консервирования кожи и текстиля, средства борьбы с термитами, пестицида и дефолианта, а в качестве гербицида ПХФ до начала 1970-х г.г. использовался на рисовых полях в Японии (Pentachlorophenol, 1987; Корте и др., 1997). Следует также учитывать образование ряда хлорированных соединений, а также и ПХФ при широко распространенном хлорировании питьевой воды и промышленных стоков на очистных сооружениях (Стом и др., 1990; Strobel, Deiter, 1990; Руководство. 1994).

В целях защиты поверхностных вод от отрицательного загрязнения необходима регламентация их состава и количества. Для этого используют приемы экспериментальной токсикометрии: подбор соответствующих тест-объектов и тест-функций оценки опасности вод, по данным которых разрабатываются и обосновываются величины предельно-допустимых концентраций (ПДК) (Рыбальский и др., 1993; Aunaas, Zachariassen, 1994; Булгаков, 2002).

Фотосинтез - основной процесс новообразования органического вещества в водоемах за счет энергии НАДФН и АТФ. Активность фотосистемы 2 (ФС 2) определяет первичную продукцию водорослей (Oquist et al., 1982; Baker et al., 1989; Маторин, Венедиктов, 1990; Krall, Gerald, 1992; Маторин, 1993). Известно, что проницаемость клеток растений находится в тесной связи с энергообеспеченностью клетки, а АТФ является посредником между фотосинтетическими реакциями и транспортными процессами в мембранной системы (Spanswick, 1972; Альварес и др., 1982).

Взаимодействие Ф как и гербицидов с клетками находятся в зависимости от процессов поглощения, связанных со спецификой проницаемости внешних мембран и отражаются в изменениях функциональных реакций водорослей, на чем и основано использование этих показателей состояния микроводорослей, в частности хлорококковых, для целей биологического мониторинга. Микроводоросли могут служить биомаркерами (или биоиндикаторами) при острых или долговременных токсических воздействий (Repetto et al., 2001; Булгаков, 2002; Podola et al., 2004).

Вопросы влияния Ф или ФС 2 - гербицидов на водоросли - основу функционирования водных экосистем - исследованы недостаточно, что относится и к высокотоксичному ПХФ - компоненту стоков и пестициду. Работы проводили в основном с фенолом, не учитывая активности промежуточных продуктов окисления Ф, ФС 2 - гербицидов и рассматривали, как правило, их влияние на рост численности клеток и фотосинтез. Недостаточно изучены начальные процессы взаимодействия химического загрязнителя с клетками водорослей, в частности с внешним мембранным комплексом. В целях биотестирования применяется оценка функционирования клеточных мембран с помощью микроэлектродных методов (Юрин и др., 1979; Воробьёв, Мусаев, 1979; Воробьёв, 1980; Плеханов, Максимова 1997; Плеханов, 1999). Однако, крайне трудно выбрать те функциональные реакции водорослей, которые бы объективно и специфически отражали влияние Ф на водоросли, позволяли использовать их для токсикометрии Ф и совершенствования нормативных величин ПДК.

В настоящее время наблюдается стремление к использованию высокочувствительных откликов биосистем на клеточном и субклеточном уровнях вплоть до специфических мембранных структур и отдельных биохимических реакций (Aunaas, Zachariassen, 1994; Степанова и др., 1998). Это связано с ростом требований к нормированию содержания загрязняющих веществ в биологических объектах, а также с необходимостью определения механизмов их токсического действия (Юрин, 2002; Yen et al., 2002; Huang et al., 2003).

В числе наиболее перспективных методов исследования следует отметить пока слабо изученное поведение клеток водорослей при прохождении через них переменного электрического тока в зависимости от его частоты, которое сводится к регистрации и анализу их электрических свойств в широком диапазоне частот. Электрические свойства в общем случае определяются двумя основными параметрами клеток сопротивлением R (проводимостью с) и ёмкостью С (диэлектрической проницаемостью е), величины, которых зависят от частоты электрического поля и состояния внешних мембран (Шван, 1963; Pethig, Kell, 1987; Келл, 1992; Markx, Davey, 1999; Grimnes, Martinsen, 2000). В отличие от микроэлектродных методов, измерение электрических параметров не повреждает клетки, в связи с чем, позволяет изучать клетки без нарушения их основных функций. Зависимость электрических свойств от частоты позволяет путем выбора соответствующих диапазонов измерений и исследуемых параметров провести детальный анализ функциональных характеристик клеток водорослей.

В настоящей работе представлены результаты разработки метода измерения электрических свойств и поиска тех чувствительных функциональных параметров зеленых водорослей, которые связаны с жизнеспособностью и состоянием главного барьера проницаемости клеток, при действии Ф, в частности ПХФ. Исследование направлено на объективную оценку физиологических эффектов и последствий влияния ПХФ на водоросли в целях совершенствования методов биотестирования и биологического мониторинга водных экосистем.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Загрязнение поверхностных вод феиольными соединениями и их взаимодействие с водорослями

Основными представителями среди токсических органических загрязнений водоемов являются Ф, которые присутствуют в сточных водах самых различных предприятий, например, нефтехимических, органического синтеза, переработки древесины, лакокрасочной и фармацевтической (Флёров, 1973; Харлампович, Чуркин, 1974; Корте и др., 1997). Попадая в водоемы со сточными водами техногенные Ф вовлекаются подобно их природным аналогам, в естественный круговорот веществ, в связи с чем исследование их взаимодействия с водорослями представляет особенный интерес, поскольку оно напрямую связано с возможностями самоочищения, а также с особенностями функционирования водорослей в условиях загрязнения.

Сточные воды лакокрасочной промышленности содержат фенол, бутилфенол, дифенилпропан, а-нафтол, нитрофенолы (Корте и др., 1997). При производстве пестицидов в стоках присутствуют хлор- и нитрофенолы, пестициды с фенольными ядрами являются источниками Ф в водоёмах (Мельников и др., 1977). В стоках красильного производства присутствует 1,4-бензохинон в количествах 300-800 мг/л (Thielemann,

1974). Резорцин характерен для сточных вод производства лекарственных препаратов, нефтехимических заводов (Грушко, 1976). Основным источником поступления Ф и других органических веществ в водоёмы являются сточные воды целюлозо-бумажных комбинатов (ЦБК) (Лейте,

1975). Древесина исходно содержит водорастворимые Ф - флавоноиды, оксикоричные кислоты и ряд других (Блажей, Шутый, 1977). Один из главных органических компонентов стоков ЦБК с сульфатным способом варки целлюлозы - лигнин и фенольные продукты его деструкции. Лигнин - это сложный фенолсодержащий полимер, в виде которого в стоки уходит до 30% обрабатываемой древесины (Стом и др., 1990). В продуктах деструкции лигнина, образующихся при варке целлюлозы обнаружены гваякол, пирокатехин, 4-метилпирокатехин, фенол, крезолы, ванилиновая, уксусная, n-оксибензойная кислота, протокатеховый и оксикоричный альдегиды и ряд других (Непелин, 1963). В сточных водах Байкальского ЦБК лигнин находят во взвесях в концентрации 4 мг/л и в растворе - 20 мг/л (Стом и др., 1990). При деструкции лигнина в водоёме постоянно и длительное время образуются токсические продукты - Ф, спирты, органические и жирные кислоты, меркаптаны, кетоны (Грушко, 1976). Нелетучие Ф - второй по объёмам органический компонент стоков ЦБК (411 мг/л), почти половина из которого составляет плохо метаболизируемый гваякол (Стом и др., 1974). Летучие Ф в водоёмах окисляются преимущественно биохимически, а окислительная трансформация многоатомных Ф идёт в основном путем автоокисления (Роговская, 1972). Для производств, где отбеливание целлюлозы осуществляется с применением хлора (Байкальский ЦБК, Котласский ЦБК и другие), наблюдали повышенное содержание хлорированных Ф до 20 соединений.

Некоторые из хлорфенольных соединений используются в качестве гербицидов, в том числе и ПХФ. Собственно ПХФ не аккумулируется по трофической цепи, но его производные, например, тетрахлоргваякол, накапливаются в клетках планктона. В водной среде хлорфенолы под влиянием бактерий или действием света разлагаются. Токсическое действие ПХФ наиболее эффективно сохраняется в почвах на протяжении

1-3-х месяцев, тогда как в водной среде значительно дольше (Мельников и др., 1977; Pentachlorophenol, 1987; Корте и др., 1997).

Нормы сброса стоков рассчитываются в надежде на их многократное разбавление и большую ассимиляционную емкость водоемов (Кожова, Бейм, 1993). Однако, непрерывность процесса загрязнения, длительное разрушение отдельных органических компонентов, например лигнина, трансформация, миграция в экосистемах заставляет искать возможности биотестирования, прогнозирования последствий загрязнения для продукционных процессов в водоемах и исследования механизмов действия отдельных компонентов стоков.

Основным способом освобождения стоков от Ф является биологическая очистка, благодаря которой из стоков удаляется до 97% Ф, причём главным образом в прудах-аэраторах (Meinck, 1970; Черноусов, 1972). Большое значение в биологической очистке стоков имеют представители фитопланктона. В основном это хлорококковые, эвгленовые и вольвоксовые водоросли, менее существенна роль диатомовых и цианобактерий (Афанасьева, Телитченко, 1980). В литературе имеются сведения о том, что одноклеточные водоросли, в частности рода Chlorella, способствуют дефеноляции сточных вод (Костяев, 1972, 1975; Werner, Pawlitz, 1978), в том числе и путем активного поглощении Ф клетками хлореллы (Лукина, 1972). Ранее существовало мнение, что водоросли не способны разрушать Ф, а могут лишь только замедлять или ускорять его деструкцию через влияние на фенол-разрушающие бактерии. При достаточном количестве биогенных элементов, - когда водоросли не подавляют жизнедеятельность бактерий в результате конкуренции за биогены, - кислород, продуцируемый водорослями, стимулирует деятельность аэробных фенолразрушающих бактерий. Однако при этом на

17 видах водорослей с использованием альгологически чистых культур установлено наличие стимулирующих и ингибирующих рост концентраций фенола, причем наиболее устойчивыми оказались хлорококковые водоросли (Костяев, 1972, 1975). Несмотря на это альгицидное действие фенола связывается лишь с продуктами их распада под действием бактерий.

Возможно, что Ф по аналогии с другими ксенобиотиками, окисляются в клетках водорослей пероксидазами с участием цитохрома Р-450, обнаруженного у растений и цитохрома Ь-5 (Арчаков, 1975). Вопрос о ферментах, разрушающих Ф в растениях, в настоящее время изучен не до конца. Более распространенным у водорослей принято считать окисление Ф экзогенного происхождения фенолоксидазами (Стом и др., 1974; Hoist, Youpp, 1976; Стом, 1982). Эндогенные Ф в водной среде могут метаболизироваться водорослями и другими гидробионтами за счет трансформации ферментными системами, в основном оксидазного типа (Минаева, 1978; Котелевцев, 1997).

Заключение диссертации по теме «Экология», Озерова, Елена Сергеевна

VI. выводы

1. Разработана методика определения электрических свойств культуры водоросли Chlorella в широком диапазоне частот и анализа данных для оценки жизнеспособности клеток микроводорослей, проницаемости внешних мембран и общего уровня метаболизма. Установлено наличие Р-дисперсии для клеток С. pyrenoidosa в области частот 1 кГц-10 МГц.

2. Выполнена экспериментальная проверка возможностей и показана адекватность разработанного метода исследования электрических свойств культур микроводорослей с помощью классических ингибиторов метаболизма - 2,4-ДНФ и ДХММ.

3. Максимальная функциональная активность клеток культуры по электрическим параметрам проявляется на 5-7 сут. роста культуры, тогда как по фотосинтетической активности - на 3-5 сут., что указывает на отставание по времени изменений энергозависимых параметров клеток, определяемых по их электрическим свойствам, по отношению к световым процессам фотосинтеза и определяет оптимальную фазу развития культуры при использовании водоросли как тест-объекта.

4. В концентрациях 0,1-1,0 мМ ПХФ-Na вызывал уменьшение величины Rs суспензий клеток водоросли С. pyrenoidosa только на низких частотах. Повышение концентрации ПХФ-Na до 10 мМ приводило к снижению величины Rs как на высоких, так и низких частотах, сопровождающееся изменением характера дисперсионной кривой. Величина коэффициента поляризации Кп при этом снижалась от 2,56±0,05 у интактных клеток до 2,34±0,07 при 1,0 мМ и до 1,83±0,05 при 10 мМ ПХФ-Na. Полученные результаты указывают на увеличение проницаемости внешнего мембранного комплекса и снижение жизнеспособности клеток.

5. Использование импедансной диаграммы в анализе действия ПХФ-Na на клетки культуры водоросли С. pyrenoidosa показало что в концентрациях 0,1-1,0 мМ ПХФ-Na вызывает изменение только величины сопротивления клеток RK суспензии, тогда как сопротивление межклеточной среды RMK остаётся неизменным. При увеличении концентрации ПХФ-Na до 10 мМ снижается величина сопротивления как самих клеток RK, так и межклеточной среды RMK. Это является свидетельством нарушения барьерных функций внешнего мембранного комплекса и снижения жизнеспособности клеток.

6. Судя по скорости выделения кислорода, ПХФ-Na уже в концентрации 0,001 мМ подавляет фотосинтетическую активность водоросли С. pyrenoidosa. Исходя из измерений характеристик флуоресценции, ПХФ-Na только при высоких концентрациях - от 0,01 мМ и более вызывает ингибирование ЭТ и подавление активности ФС 2.

7. Анализ токсических эффектов и возможных путей воздействия ПХФ-Na на клетки хлорококковых водорослей по электрическим параметрам и флуоресценции Хл показал возможность их использования в целях биотестирования. При этом становится доступным анализ действия ПХФ-Na как на начальные процессы преобразования поглощенной энергии, так и на энергозависимые параметры, связанные с состоянием внешних мембран клеток.

У. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Определение опасности химических загрязнителей для биологических объектов в принипе сводится к определению минимально недействующих и максимально допустимых концентраций этого вещества. В этих целях используются тест-объекты, в частности лабораторные культуры пресноводных зеленых микроводорослей, ответные реакции которых на действие исследуемого вещества является количественным и качественным критерием оценки его токсичности. Особенно часто в качестве тест-объекта применяются водоросли Chlorella благодаря их высокой чувствительности к токсикантам и методической несложности проведения отдельных тестов.

Методы оценки токсичности с использованием тест-объектов часто бывают как недостаточно точными и специфическими, так и излишне трудоёмкими. Вместе с этим, для успешной разработки и адекватного применения таких методов необходимо детально представлять общие механизмы токсического действия на клеточном уровне. Поскольку большинство токсикантов действует на клетки путем вмешательства в механизмы клеточного гомеостаза, то исследование характера ответных реакций делает перспективным применение методов экспресс-тестирования для оценки жизнеспособности клеток и уровня их метаболизма.

Предполагается, что исследуемое вещество, для того чтобы оказать влияние на физиологические состояние тест-объекта должно на первом этапе взаимодействовать с поверхностными структурами клетки и затем проникнуть внутрь неё. Внешний мембранный комплекс клеток водоросли, постоянно контролирующий обмен энергией, питательными веществами и продуктами метаболизма, одновременно выполняет функцию наиболее чувствительного индикатора этих процессов. Мембранный комплекс, если в нём не происходит каких-либо структурных или функциональных изменений, находится в состоянии адаптивного равновесия, отвечающего оптимальным условиям существования клетки. Изменение этого равновесного состояния является одним из ведущих компонентов действия токсиканта, которой в дальнейшем определяет практически всю структуру ответной реакции тест-объекта.

Вовлечение различных техногенных соединений Ф в естественный круговорот веществ определяет непрерывность процесса загрязнения окружающей среды, а их трансформация и миграция в экосистемах заставляет искать возможности биотестирования, прогнозирования последствий загрязнения для продукционных процессов в водоемах и исследования механизмов токсического действия. Как сам ПХФ, так и его водорастворимая соль ПХФ-Na являются заметным компонентом в сбросах различных химических производств, причем даже уже в очищенных водах присутствуют их весьма высокие концентрации.

К числу наиболее перспективных методов исследования, которые могут с успехом использоваться при работе с тест-объектами, относится изучение реакций клеток водоросли на прохождение через них переменного электрического тока в зависимости от его частоты, т.е. оценка их электрических свойств. В отличие от других методов, которые применяются в биотестировании, измерение электрических свойств не повреждает клетки, что позволяет изучать реакции клеток без нарушения их основных функций на действие токсикантов. Зависимость электрических свойств от частоты позволяет путем выбора соответствующих диапазонов измерений и определяемых параметров провести детальный анализ функциональных характеристик клеток водорослей.

В настоящей работе представлены результаты разработки метода измерения электрических свойств и поиска тех чувствительных функциональных параметров зеленых водорослей, которые связаны с жизнеспособностью и состоянием проницаемости клеток при действии соединений Ф, в частности ПХФ. Основное направление исследований состояло в объективной оценке физиологических эффектов и последствий влияния ПХФ-Na на водоросли в целях совершенствования методов биотестирования и биологического мониторинга водных экосистем.

В результате проведенных исследований была разработана методика определения электрических свойств клеток культуры водоросли С. pyrenoidosa в диапазоне частот от 1 кГц до 10 МГц. Предложенный метод анализа электрических свойств клеток водоросли продемонстировал его применимость для оценки жизнеспособности клеток микроводорослей, проницаемости внешних мембран и общего уровня метаболизма.

Исходя из определения энергозависимых характеристик клеток водоросли по их электрическим параметрам и фотосинтетической активности установлена оптимальная фаза развития культуры для использования водоросли в качестве тест-объекта. Показано, что максимальная функциональная активность клеток культуры по электрическим параметрам проявляется на 5-7 сут. роста культуры, тогда как по фотосинтетической активности - на 3-5 сут.

Выполненная экспериментальная апробация и оценка возможностей разработанного нами метода определения электрических свойств клеток водоросли и анализа полученных данных с использованием традиционно применяемых ингибиторов метаболизма (2,4-ДНФ и ДХММ) позволила установить его высокая чувствительность. Сравнительное исследование действия 2,4-ДНФ и ДХММ на клетки водоросли на основе определения их электрических свойств показало общий характер действия ингибиторов при концентрациях 0,1 мМ, заключающийся в нарушении проницаемости и снижении уровеня метаболизма клеток водоросли. Вместе с этим, влияние ДХММ в концентрации 0,01 мМ состояло, исходя из результатов определения электрических свойств, в активации обменных процессов клеток водоросли без изменения проницаемости внешнего мембраного комплекса.

Влияние ПХФ-Na на мембраны клеток водоросли, как было установлено, заключалось в характерной для многих разобщителей фазности в действии в зависимости от их концентрации. Эта особенность была обнаружена в исследованиях действия ПХФ-Na при различных концентрациях - активация при 0,1 мМ, ингибирование при 1,0 мМ и необратимое нарушение функционирования мембран при 10 мМ. Исходя из полученных результатов, действие ПХФ-Na при концентрации 10 мМ и ДХММ в концентрации 0,1 мМ может рассматриваться как однонаправленное и разобщающее. Вместе с тем, характер влияния ПХФ-Na в концентрации 1,0 мМ и ДХММ в концентрации 0,01 мМ имел существенные различия, несмотря на общность в результирующем активирующем действии. В присутствии ПХФ-Na в концентрации 1,0 мМ отмечалось изменение в проницаемости мембран клеток водоросли, тогда как действие ДХММ в концентрации 0,01 мМ состояло в активации метаболизма, которое не сопровождалось каким-либо нарушением транспортных функций внешнего мембранного комплекса.

Исходя из полученных результатов, действие ПХФ-Na на СВК может определяться влиянием на фотосинтетический ЭТ и изменениями в темновом метаболизме. Таким образом, в использованных нами концентрациях ПХФ-Na мог действовать и как разобщитель, что приводило к существенному снижению фотосинтетической активности. Таким образом, использование СВК, исходя из результатов воздействия ПХФ-Na, является перспективным для целей биотестирования или скрининга, поскольку может производиться быстро и требует лишь стандартного оборудования.

В присутствии ПХФ-Na в среде в относительно низких концентрациях процессы ФЭТ не нарушаются вплоть до Qa, происходит разделение заряда в РЦ и эффективность работы ФС 2 не снижается. Только при более высоких концентрациях ПХФ-Na начинается снижение Fm, затем Fc и Fv/Fm. Неспецифическая деструкция фотосинтетического аппарата происходит при длительном повышении концентрации ПХФ-Na. Таким образом, ПХФ-Na только в высоких концентрациях снижает эффективность функционирования ФС 2, а при низких - нарушения фотосинтеза происходит после ФС 2. Несмотря на отличия в кинетике параметров быстрой флуоресценции при действии ПХФ-Na по сравнению с интактными клетками, Fv/Fm в высоких концентрациях подавлялся незначительно и за счет снижения Fm. Очевидно, в низких концентрациях ПХФ-Na вызывает нарушение сопряжения ЭТ и фосфорилирования, тогда как в высоких приводит к ингибированию ЭТ и подавлению активности ФС 2. Это отражается в дальнейшем на энергообеспеченности клеток водорослей и связанных с ней функциональных параметрах внешних мембран.

Выполненный анализ токсических эффектов ПХФ-Na и возможных путей реализации его воздействия на клетки водорослей по электрическим параметрам и флуоресценции Хл показал возможность их использования в целях биотестирования. При этом становится доступным анализ действия ПХФ-Na как на начальные процессы преобразования поглощенной энергии, так и на энергозависимые параметры, связанные с состоянием внешних мембран клеток.

Таким образом, использование метода измерения электрических свойств и последующим анализом, включая построение импедансных диаграмм в комплеской плоскости, позволяет значительно повысить информативность метода оценки функционального состояния клеток водоросли и открывает новые возможности для биотестирования широкого класса химических загрязнителей окружающей среды.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Озерова, Елена Сергеевна, 2006 год

1. Альберт А. Избирательная токсичность. В 2-х томах. T.l. М.: Медицина, 1989.400 с.

2. Альварес П.П., Булычев А.А., Денеш М., Курелла Г.А. Светозависимые электрические реакции в клетках морских зеленых сифоновых водорослей // Научн. докл. высш. школы. Биол. науки. 1982. №7. С.39-44.

3. Андреев B.C. Кондуктометрические методы и приборы в биологии и медицине. М.: Медицина, 1973.336 с.

4. Апарцин М.С., Саксонов М.Н., Стом Д.И. К вопросу о действии пирокатехина и n-бензохинона на клетки Нителлы // Докл. АН СССР. 1979. Т.244, № 2. С.510-512.

5. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. 327 с.

6. Афанасьева А.Ф., Телитченко М.М. Интенсификация очистки аэрированием биопрудов и математическая модель этого процесса // Самоочищение и биоиндикация загрязненных вод. М.,1980. С. 159165.

7. Бакуненко Л.И., Стонов Л.Д., Маторин Д.Н. Использование замедленной флуоресценции хлореллы для определения гербицидных свойств соединений // Химия в сельском хозяйстве. 1977. Т. 15, № 33. С.67-70.

8. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова думка, 1976.260 с.

9. Блажей А., Шутый JI. Фенольные соединения растительного происхождения. М.: Мир. 1977. 239 с.

10. Воробъёв Л.Н. Регулирование мембранного транспорта в растениях. // Итоги науки и техники. Сер. Физиология растений. М.: ВИНИТИ, 1980. Т.4. С.5-77.

11. Воробьёв Л.Н., Мусаев Н.А. Электрические характеристики клеточной оболочки и плазмалеммы клеток Nitellopsis obtusa. Низкочастотный импеданс // Физиология растений. 1979. Т.26, вып.4. С.711-720.

12. Галазий Г.И., Тарасова Е.Н., Мамонтов А.А., Мамонтова Е.А. Опыт и проблемы химического мониторинга Байкала // Проблемы экологии. 1995. Новосибирск: Наука. Т.2. С.11-17.

13. Гапочка Л.Д. Об адаптации водорослей. М.: Изд-во Моск. ун-та. 1981.80 с.

14. Гизе А. Физиология клетки. М.: ИЛ, 1959. 455 с.

15. Гольдфельд М.Г., Карапетян Н.В. Физико-химические основы действия гербицидов // Итоги науки и техники. Сер. Биологическая химия. М.: ВИНИТИ, 1989. Т.ЗО. 164 с.

16. Готовский Ю.В., Перов Ю.Ф. Особенности биологического действия физических и химических факторов малых и сверхмалых интенсивностей и доз. М.: Изд-во ИМЕДИС, 2003. 388 с.

17. Грушко Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных водах. Л.: Химия, 1976.128 с.

18. Израэль Ю.А., Анохин Ю.А., Кокорин А.О. Мониторинг состояния озера Байкал. Л.: Гидрометеоиздат, 1991. 260 с.

19. КагаваЯ. Биомембраны. М.: Высшая школа, 1985. 303 с.

20. Келл Д.Б. Изучение электрического импеданса. Принципы и возможности спектроскопии электрического адмитганса // Биосенсоры: основы и приложения: Пер. с англ. Под ред. Э. Тернера, И. Краубе, Дж. Уилсона. М.: Мир, 1992. С.344-374.

21. Кёртис Г. Биоэлектрические измерения // Биофизические методы исследования / Под ред. Ф.Юбера. М.; ИЛ. 1956. С.126-149.

22. Климов В.В. Окисление воды и синтез молекулярного кислорода // Соросовский образоват. журн. 1996. №11. С.9-12.

23. Кожова О.М., Бейм A.M. Экологический мониторинг Байкала. М.: Экология, 1993.352 с.

24. Кол К.С. Нервный импульс (теория и эксперимент) // Теоретическая и математическая биология. М.: Мир, 1968. С. 154-193.

25. Корте Ф., Бахадир М., Клайн В. и др. Пентахлорфенол (ПХФ) // Экологическая химия. М.: Мир, 1997. С.332-358.

26. Костяев В.Я. Действие фенола на Scenedesmus acuminatus Lagerh. Chod. II Тр. Ин-та биол. внутр. вод АН СССР. JL: Наука. 1969. Т.19, № 22. С.90-93.

27. Костяев В.Я. Биологические факторы разрушения фенола // Антропогенные факторы в жизни водоемов. JL: Наука, 1975. С.85-88.

28. Костяев В.Я. Влияние фенола на водоросли и роль водорослей в биологической деструкции фенола // Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1972.21 с.

29. Костяев В.Я. Влияние фенола на гидрохимический режим, фитопланктон и фитообрастания в искусственных водоемах // Влияние фенола на гидробионтов. JL: Наука, 1973. С.119-151.

30. Костяев В.Я.а. Влияние фенола на водоросли // Там же. С.98-113.

31. Котелевцев С.В. Функциональный отклик мембранных структур клеток животных на воздействие антропогенных факторов окружающей среды// Автореф. дис. докт. биол. наук. М., 1997. 77 с.

32. Куценко С.А. Основы токсикологии. Научно-методическое издание. СПб.: Изд-во Фолиант, 2004. 720 с.

33. Лейте В. Определение органических загрязнений питьевых, природных и сточных вод. М.: Химия. 1975. 199 с.

34. Либерман Е.А. Переносчики ионов через биологические мембраны // Биологические мембраны. М.: Медицина, 1974. С.48-66.

35. Лукина Г.А. Детоксицирующая активность хлореллы // Инф. бюлл. Института биол. внутр. вод. 1972. № 13. С.12-15.

36. Лядский В.В., Горбунов М.Ю., Венедиктов П.С. Импульсный флуориметр для исследования первичных реакций фотосинтеза у зеленых растений // Научн. докл. высшей школы. Биол. науки. 1987. № 12. С.96-102.

37. Максимов В.Н. Многофакторный эксперимент в биологии. М.: Изд-во МГУ, 1980.279 с.

38. Максимова И.В. Коллекция культур микроводорослей кафедры микробиологии МГУ // Культивирование коллекционных штаммов водорослей / Под ред. Громова Б.В. JL: Изд-во ЛГУ, 1983. С.74.

39. Маторин Д.Н. Воздействие природных факторов среды и антропогенных загрязнений на первичные процессы фотосинтеза микроводорослей // Автореф. дис. докт. биол. наук. М.: МГУ. 1993. 45 с.

40. Маторин Д.Н., Вавилин Д.В., Попов И.В., Венедиктов П.С. Метод биотестирования природных вод с применением регистрации замедленной флуоресценции микроводорослей // Методы биотестирования качества водной среды. М.: Изд-во МГУ, 1989. С.10-20.

41. Маторин Д.Н., Венедиктов П.С. Люминесценция хлорофилла в культурах микроводорослей и природных популяциях фитопланктона // Итоги науки и техн. Сер. Биофизика. 1990. Т. 40, вып.1. С.49-100.

42. Маторин Д.Н., Венедиктов П.С., Рубин А.Б. Замедленная флуоресценция и её использование для оценки состояния растительного организма // Изв. АН СССР. Сер. биол. 1985. № 4. С.508-520.

43. Мельников Н.Н., Волков А.И., Короткое О.А. Пестициды и окружающая среда. М.: Химия. 1977. 240 с.

44. Минаева В.Г. Флавоиоиды в онтогенезе растений и их практическое использование. Новосибирск: Наука, 1978.252 с.

45. Мирошников А.И., Фомченков В.М., Иванов А.Ю. Электрофизический анализ и разделение клеток. М.: Наука, 1986. 184 с.

46. Патин С.А. Влияние загрязнения на биологические ресурсы и продуктивность Мирового океана. М.: Пищевая промышленность, 1979. 304 с.

47. Перов Ю.Ф. Материалы к изучению физико-химических основ гемолиза//Автореф. дисс. канд. мед. наук. Воронеж, 1971. 22 с.

48. Плеханов С.Е. Первичные функциональные реакции пресноводных зеленых водорослей на химическое загрязнение // Автореф. дис. докт. биол. наук. 1999. М., МГУ. 50 с.

49. Плеханов С.Е., Максимова И.В. Внеклеточное органическое вещество водоросли Clorella: количественные аспекты // Вестник Моск. ун-та. Сер. 16. Биология. 1997. № 2. С.25-28.

50. Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии. Под ред. Б.В. Гнеденко. М.: МГУ, 1980.150 с.

51. Погосян С.И., Лебедева Г.В., Ризниченко Г.Ю. Связь функциональной структуры популяции одноклеточных водорослей с ее динамикой // Проблемы экологического мониторинга и моделирования экосистем. Л.: Гидрометиздат. 1991. Т. XIII. С.280-297.

52. Реттер У., Лозе X. Электрохимическая импедансная спектроскопия // Электроаналитические методы. Теория и практика. / Под ред. Ф.Шольца. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. С. 150-167.

53. Роговская Ц.И. Интенсификация процессов биохимической очистки промышленных сточных вод // Теория и практика биологического самоочищения загрязненных вод. М., 1972. С. 105-112.

54. Руководство по контролю качества питьевой воды. 2-е изд. Т.1. Всемирная организация здравоохранения, 1994. 258 с.

55. Рыбальский К.Г., Малярова М.А., Горбатовский В.В., Рыбальская В.Ф., Красюкова Т.В., Левин С.В. Экология и безопасность. М.: ВНИИПИ, 1993.320 с.

56. Саляев Р.К. Поглощение веществ растительной клеткой. М.: Наука, 1969. 206 с.

57. Скулачев В.П. Аккумуляция энергии в клетке. М.: Наука, 1969.440 с.

58. Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран. М.: Наука, 1989. 564 с.

59. Степанова Н.Ю., Петров A.M., Шагидуллин А.Г., Габайдуллин А.Г. Разработка комплексного подхода для оценки воздействия выпусков сточных вод на окружающую среду // Тез. докл. 1 съезда токсикологов России. М., 1998. С.319.

60. Стойнов З.Б., Графов Б.М., Савова-Стойнова Б.С., Елкин В.В. Электрохимический импеданс. М.: Наука, 1991. 336 с.

61. Стом Д.И. Фитотоксичность и механизм детоксикации фенолов водными растениями // Автореф. дис. докт. биол. наук. Киев, 1982. 48 с.

62. Стом Д.И., Бейм A.M. Действие фенолов на некоторые виды водорослей // Гидробиол. ж. 1976. Т. 12, № 6. С.53-57.

63. Стом Д.И., Бобовская Л.П., Тимофеева С.С. Влияние фенолов и продуктов их окисления на водные растения и содержание в них сульфгидрильных групп // Докл. АН СССР. 1974. Т. 216, № 3. С.698-701.

64. Стом Д.И., Гурман В.И., Константинов Г.Н., Кашина Н.Ф., Зилова Е.А. Некоторые перспективы оценки влияния продуктов техногенеза на экосистему оз. Байкал // Геохимия техногенных процессов. М.: Наука, 1990. С.117-123.

65. Струбицкий И.В. Регуляция фенольными соединениями иферредоксин: тиоредоксиновой системой энергетического обмена Microcystis aeruginosa Kutz. emend. Elenk II Автореф. дис.канд. биол.т наук. Киев, 1986.20 с.

66. Тарусов Б.Н. Электропроводность как метод определения жизнеспособности тканей // Арх. биол. наук. 1938. Т.52, вып. 2. С.178-181.

67. Фёдоров Л.А., Яблоков А.В. Пестициды токсический удар по биосфере и человеку. М.: Наука, 1999.462 с.

68. Федтке К. Биохимия и физиология действия гербицидов. М.: Аг-ропромиздат, 1985. 223 с.

69. Флёров Б. А. Экспериментальное исследование фенольного отравления у рыб // Влияние фенола на гидробионтов. Л., 1973. С.5-38.

70. Хоботьев В.Г., Капков В.И. Культивирование зеленых водорослей и использование их в токсикологических экспериментах // Методики биологических экспериментов. М.: Наука, 1971. С.219-231.

71. Черноусов Ю.И. Изучение фенолов сточных вод сульфатцеллюлоз-ного производства// Автореф. дис. канд. хим. наук. JL, 1972.23 с.

72. Шван Г. Спектроскопия биологическтих веществ в поле переменного тока // Электроника и кибернетика в биологии и медицине. М., ИЛ. 1963. С.71-108.

73. Элиас В.В. Исследование физиологических реакций харовых и хлорококквых водорослей на фенолы сточных вод //Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2005. 25 с.

74. Юрин В.М. Основы ксенобиологии. Минск: Новое знание, 2002. 267 с.

75. Юрин В.М., Бобров В.А., Коренец Л.А., Плакс А.В., Стом Д.И. Действие фенольных соединений на электрофизиологические свойства плазмалеммы и тонопласта клеток Nitella flexilis II Физиол. раст. 1979. Т. 26, вып. 4. С.703-710.

76. Юрин В.М., Гончарик М.Н., Галактионов С.Г. Перенос ионов через мембраны растительных клеток. Минск: Наука и техника, 1977. 160 с.

77. Юрин В.М., Сафронова Н.И. Комбинированное действие химических соединений на биоэлектрическую реакцию клеток Nitella II Гид-робиол. ж. 1981. Т. 17, №3. С.100-107.

78. Юрин В.М., Соколик А.И., Кудряшов А.П. Регуляция ионного транспорта через мембраны растительных клеток. Минск: Наука и техника. 1991. 271 с.

79. Яглова JI.Г. Электропроводимость биологических систем // Биофизика. Под. ред. Б.Н.Тарусова и О.Р.Кольс. М.: Высшая школа, 1968. С. 186-210.

80. Aunaas Т., Zachariassen К.Е. Physiological biomarkers and the Trondheim biomonitoring system // Biomonitoring of Coastal Waters and Estuaries / K.Y.M. Kramer ed. Boca Raton: CRC Press. 1994. P. 107-133.

81. Bernhardt J., Pauly H. Dielectric measurements of Nitellopsis obtusa cells with intracellular electrodes // Rad. Environm. Biophys. 1974. V.ll, N.l. P.91-100.

82. Blinks L.R. The direct current resistance of Nitella I I J. Gen. Physiol. 1930. V.13, N.4, P.495-508.

83. Bordi F., Cametti C., di Biasie A. Passive electrical properties of biological cell membranes determined from Maxwell-Wagner conductivity dispersion measurements // Bioelectrochem. Bioenerg. 1989. V.22, N.2. P.135-144.

84. Buchel C., Wilhelm C. In vivo analysis of slow chlorophyll fluorescence induction kinetics in algae: progress, problems, and perspectives // Photochem. Photobiol. 1993. V.58, N.2. P.137-148.

85. Cole K.S. Electric phase angle of cell membranes // J. Gen. Physiol. 1932. V.15, N.6. P.641-649.

86. Cole K.S. Membranes, Ions and Impulses. Berkely and Los Angeles, Univ. California Press, 1968. 456 p.

87. Curtis H.J., Cole K.S. Transverse electric impedance of Nitella II J. Gen. Physiol. 1938. V.21, N.l. P.198-201.

88. Davey C.L., Davey H.M., Kell D.B. On the dielectric properties of cell suspensions at high volume fractions // Bioelectrochem. Bioenerg. 1992. V.28, N.l/2. P.319-340.

89. Demmig В., Bjorkman O. Comparison of the effect of excessive light on chlorophyll fluorescence (77 K) and photonyield of O2 evolution in leaves of higher plants//Planta. 1989. V. 171,N.2. P.171-184.

90. Firstenberg-Eden R., Eden G. Impedance Microbiology. Research Studies Press: Letchworth, 1984.170 p.

91. Firstenberg-Eden R., Zindulis J. Elecrtochemical changes in media due to microbial growth // J. Microbiol. Methods. 1984. V.2. N.2, P. 103115.

92. Gabrielli C. Electrochemical impedance spectroscopy: principles, instrumentation, and application // Physical Electrochemistry / I. Rubinstein ed. Marcel Dekker, New York, 1995. P.243-247.

93. Grimmes S., Martinsen 0.G. Cole electrical impedance model a critique and an alternative // IEEE Trans. Biomed. Eng. 2005. V.52, N.l. P.132-155.

94. Grimnes S., Martinsen 0.G. Bioimpedance and Bioelectricity Basics. New York. Academic, 2000. 237 p.

95. Harris C.M., Kell D.B. On the dielectrically observable consequences of the diffusional motions of lipids and proteins in membranes. 2. Experiments with microbial cells, protoplasts and membrane vesicles // Eur. Biophys. J. 1985. V.13, N.l. P.l 1-24.

96. Hause L.L., Komorowski R.A., Gayon F. Elecrtode and electrolyte impedance in the detection of bacterial growth // IEEE Trans. Biomed. Eng. 1981. V.28, N.5. P.403-410.

97. Hoist R.W., Yopp J.H. An algal polyphenol oxidase characterization of the o-diphenol-oxidase from the charophyte Nitella mirabilis II Phycologia. 1976. V.15,N.2. P. 119-124.

98. Holt J.S., Powles S.B., Holtum J.A.M. Mechanisms and agronomic aspects о f herbicide resistance // Annu. Rev. Plant. Physiol. Plant Mol. Biol. 1993. V. 44, N.2. P.203-229.

99. Huang G.L., Mao Y., Headley J.V., Sun H.W. Themporal changes in the toxicity of pentachlorphenol to Chlorella pyrenoidosa algae // Environ. Sci. Health. B. 2003. V.38, N.5. P.551-559.

100. Kleczkowski L. Inhibitors of photosynthetic enzymes/carriers and metabolism // Annu. Rev. Physiol. Plant. Mol. Biol. 1994. V.45, N.4. P.339-367.

101. Krall J.P., Edwards G.E. Relationship between photosystem II activity and C02 fixation in leaves // Physiol. Plantarum. 86. Copenhagen., 1992. P.180-187.

102. Kwan H., Pavel S. The effect of pentachlorphenol on electrical conductivity of lipid bilayers // Biphys. J. 1975. V.15, N.2. Part 2. P.309.

103. Luyet B. Variation of the electric resistance of plant tissues for alternating currents of different frequences during death // J. Gen. Physiol. 1932. V.15, N. 3. P.283-287.

104. Mackey B.M., Derrick C.M. Conductance measurements of the lag phase of injured Salmonella typhimurium II J. Appl. Bact. 1984. V.57, N. 2. P.299-308.

105. Malkin S., Siderer Y. The effect of salt concentration on the fluorescence parameters of isolated chloroplast // Biochim. Biophis. Acta. 1974. V. 368. P.422-431.

106. Markx G.H., Davey C.L. The dielectric properties of biological cells at radiofrequencies: applications in biotechnology // Enz. Microb. Technol. 1999. Vol.25, N.3-5. P.161-171.

107. Meinck F. Das Abwasser Problem der Zellstoff und Papierindustrie in den Vereinigten Staten // Papier. 1970. V. 24, N.9. P.589-591.

108. Moreland D.E. Mechanisms of action of herbicides // Ann. Rev. Plant Phisiol. 1980. V.31. P.597-638.

109. MorelandD.E., Hilton J.L. Actions onphotosynthetic systems // Herbicides / L.J.Audus ed. NewYork. Academic Press. 1976. V.l. P.493-523.

110. Mostafa F.L., Hellng C.S. Impact of four pesticides on the growth and metabolic activities of two photosyntetic algae // J. Environ. Sci. Health.B. 2002. V.37, N.5. P.417-444.

111. Oettmeier W., Reimer S., Link K. Quantitative structure-activity relationship of substituted benzoquinones as inhibitors of photosynthetic electron transport // Z. Naturforsch.C. 1978. V.33, N.4.P.695-703.

112. Oettmeier, W., Masson K. Synthesis and thylakoid membrane binding of the radioactively labeled herbicide dinoseb // Pestic. Biochem. Physiol. 1980. V.14. P.86-97.

113. Oquist G., Hardstrom A., Aim P., Samuelson G., Richardson K. Chlorophyll a fluorescence as an alternative method for estimating primary production // Mar. Biol. 1982. V. 68. N.l. P.71-75.

114. Osterhout W.J.V. Injury, Recovery and Death, in Relation to Conductivity and Permeability. J.B.Lippincott: Philadelphia and London, 1922.276 p.

115. Pentachlorophenol / Environmental Health Criteria; 71. World Health Organization, Geneva, 1987. 137 p.

116. Pethig R., Kell D.B. The passive electrical properties of biological systems; their role in physiology, biophysics and biotechnology // Phys. Med. Biol. 1987. Vol.32, N. 8. P.933-970.

117. Pfister K., Schreiber U. Comparison of diuron- and phenol- type inhibitors: additional inhibitory action at the photosystem II donor site // Z. Naturforsch. C. 1984. V.39, N.5. P.389-392.

118. Pfister K., Lichtenthaler H.K., Burger G., Musso H., Zahn M. The inhibition of photosynthetic light reactions by halogenated naphthoquinones // Ibid. 1981. V.36. N.4. P.645-655.

119. Podola В., Nowack E.C., M. Melkonian. The use of multiple-strain algal sensor chips for detection and identification of volatile organic compoungs // Biosens. Bioelectron. 2004. V.15, N.19. P.1253-1260.

120. Rao P.S., Durve V.S., Khangarot B.S., Shekhwart S.S. Acute toxity of pentachlorophenol and sodium pentachlorophenate to a freshwater ostracod Crypris subglobosa // Acta hydrochim. hydrobiol. 1983. V.ll, N.4. P.457-465.

121. Rehbach M., Sluyters J.H. On the impedance of galvanic cell. IV. Determination of the rate constants of rapid electrode reaction from electrode impedance measurements//Rec. trav. с him. 1 962. V.81, N.4. P.301-306.

122. Repetto G., Jos A., Hazen M.J., Molero M.L., del Peso A., Salguero M., Castillo P.D., Rodrigez-Vicente M.C., Repetto M. A test battery forthe toxicological evaluation on pentachlorphenol // Toxicol in Vitro. 2001. V.15, N.4-5. P.503-509.

123. Schwan H.P. Dielectric spectroscopy, dielectrophoresis and field interactions with biological matherials // Energy Transfer Dynamics studies and Essays in Honor of Herbert Frohlich on his Eightieth Birthday. Springer Verl., Berlin, 1987. P.317-327.

124. Slayman C.L. Movement of ions and electrogenesis in microorganisms // Am. Zoologist. 1970. V.10, N.3. P. 377-392.

125. Sluyters J.H. On the impedance of galvanic cell. I. Theory // Rec. trav. chim. 1960. V.79,N.8. P.1092-1100.

126. Sluyters-Rehbach M., Sluyters J.H. Sine wave method in the study of electrode processes // Electroanalytical Chemistry / A.J. Bard ed. V.4. Marcel Dekker, New York, 1970. P. 1-14.

127. Spanswick R.M. Evidence for an electrogenic ion pump in Nitella translucens. I. The effect of pH, K+, Na+, light and temperature on the membrane potential and resistance // Biochim. Biophys. Acta. 1972. V. 288, N.l.P. 73-89.

128. Stangenberg M. Toxic effects of Microcystis aeruginosa Kg. extracts on Daphnia longispina O.F. Muller and Eucypris virens Jurine // Hydrobiologia. 1968. V.32, N.l/2. P.81-97.

129. Stom D.I., Ivanova G.G., Bashkatova G.V. et al. About the role of quinones in the action of some polyphenols on the streaming of protoplasm in Nitella sp. Cells // Acta hydrochim. hydrobiol. 1974. Bd.2, H.5. S.407-412.

130. Strobel K., Diter H.H. Toxocological risk / benefit aspects of drinking water chlorination and alternative disinfection procedures // Z. Wasser-Abwasser-Forsch. 1990. V.23, H.2. P. 152-162.

131. Thiel A., Boger P. Binding of ioxynil to photosynthetic membranes I I Pestic. Biochem. Physiol. 1986. V.25. P.270-278.

132. Thielemann H. Zur identifiierung und bestimmung von 1,4-Benzochinon in Abwassernder Kohleverarbeitenden Industrie // Z. Wasser und Abwasser Forsch. 1974. Bd.7, H.3. S.91-93.

133. Trebst A., Draber W. Structure-activity correlations of resent herbicides in photosynthetic reactions // Advances in pesticide science / H.Geissbuhler ed. Pergamon Press, Oxford and New York. 1979. P. 11-23.

134. Van Rensen J.J.S. Herbicides interacting with photosystem II // Herbicides and Plant Metabolism. Cambridge Univer. Press. 1989. P.21-36.

135. Van Rensen J.J.S., van der Vet W., van Vliet W.P.A. Inhibition and uncoupling of electron transport in isolated chloroplasts by the herbicide 4,6-dinitro-o-cresol // Photochem. Photobiol. 1977. V.25. P.579-583.

136. Vasil'ev I.R., Matorin D.N., Lyadsky V.V., Venediktov P.S. Multiple action sites for photosystem II herbicides as revealed by delaed fluorescence // Photosynth. Res. 1988. V.15, N.l. P.33-39.

137. Werner D., Pawlitz H. Differential elimination of phenol by diatoms and other unicellular algae from low concentrations // Bull. Environm. Contam. Toxicol. 1978. V.20. P.303-312.

138. Yen J.H., Lin K.H., Wang Y.S. Acute lethal toxicity of environmental pollutants to aguatic organisms // Ecotoxicol. Environ. Saf. 2002. V.52, N.2. P.113-116.