Экспрессия гена липопротеинлипазы в мононуклеарах периферической крови при В-клеточном хроническом лимфолейкозе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Бидерман, Белла Вениаминовна

• Бидерман, Белла Вениаминовна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бидерман, Белла Вениаминовна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. В-клеточный хронический лимфолейкоз. Факторы прогноза. ^ *

1.1.1. Доброкачественная форма ХЛЛ.

1.1.2. Пол и возраст.

1.1.3. Время удвоения лимфоцитов.

1.1.4. Морфология клеток.

1.1.5 Тип инфильтрации костного мозга.

1.1.6. Иммунологические факторы прогноза.

1.1.7. |32-микроглобулин.

1.1.8. Цитокины.

1.1.9. Цитогенетические и молекулярно-биологические 22 маркеры, как факторы прогноза.

1.2. Мутационный статус генов вариабельного региона 24 иммуноглобулинов.

1.2.1. Организация и перестройка генов вариабельного региона 24 иммуноглобулинов. Формирование В-клеточного репертуара.

1.2.2. Соматическая гипермутация.

1.2.3. Изучение У-генов при лимфатических опухолях.

1.3. Изучение профиля экспрессии генов при В-клеточном 37 хроническом лимфолейкозе.

1.3.1. Исследования экспрессионного профиля с помощью 37 микрочипов.

1.3.2. ПЦР в реальном времени.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Пациенты.

2.2. Выделение, селекция и активация клеток.

2.3. Выделение РНК и обратная транскрипция.

2.4. ПЦР в реальном времени.

2.5. Анализ генов IgVH.

2.6. Статистический анализ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Характеристика пациентов.

3.2. Выбор контрольного гена.

3.3. Экспрессия LPL, DMD, ZAP70 и ZBTB20 в неселектирован- 53 ных МПК В-ХЛЛ, С019-селектированных клетках В-ХЛЛ и нормальных субпопуляциях клеток крови.

3.4. Корреляция уровней экспрессии генов LPL, DMD, ZAP70 и 55 ZBTB20 с мутационным статусом IgVH.

3.5. Корреляция уровня экспрессии LPL и DMD с выживаемостью 57 и другими прогностическими факторами.

3.6. Экспрессия SEPT 10, ADAM29, SLAM, LPL в неселекти- 59 рованных МПК В-ХЛЛ и корреляция ее с мутационным статусом генов вариабельного региона иммуноглобулинов.

3.7. Экспрессия LPL, ZAP70 и IL-lb в CD3+, CD38+ и CD38- 61 клетках.

3.8. Связь экспрессии LPL и факторов транскрипции.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Мутационный статус генов IgVH и другие факторы прогноза 64 В-ХЛЛ.

4.2. Сравнение прогностической значимости мутационного 67 статуса генов IgVH и экспрессионного профиля исследованных генов.

4.3. Липопротеинлипаза. Ее функции и причины экспрессии в норме и в клетках В-ХЛЛ.:.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия гена липопротеинлипазы в мононуклеарах периферической крови при В-клеточном хроническом лимфолейкозе»

Одной из наиболее распространенных лимфатических опухолей является В-клеточный хронический лимфолейкоз (B-XJIJ1). Существуют разные формы этого заболевания, различающиеся по клинической картине. В одних случаях болезнь быстро прогрессирует, а в других — годами не требует лечения. Общая выживаемость варьирует от нескольких месяцев до 20 лет и более.

В прогнозировании течения B-XJIJ1 могут иметь значение клинические, морфологические, цитогенетические, молекулярные и серологические параметры. Основным критерием, позволяющим прогнозировать течение В-XJ1JI, является мутационный статус перестроенного гена иммуноглобулина в опухолевом клоне. Наличие мутаций (или, иными словами, высокая степень дифференцировки В-клетки) коррелирует с благоприятным прогнозом, отсутствие мутаций - с неблагоприятным. Однако, определение мутационного статуса трудо- и ресурсоемко и, по-видимому, не может быть использовано в качестве рутинного анализа. В то же время высокая распространенность B-XJIJT, а также появление новых возможностей лечения, требует ранней оценки прогноза заболевания с тем, чтобы как можно раньше начать лечение, адаптированное к риску прогрессии заболевания у каждого конкретного больного.

Альтернативным способом оценки прогноза B-XJTJI может быть анализ уровня мРНК генов, экспрессирующихся по-разному при вариантах B-XJIJ1 с различным мутационным статусом. В последние годы в экспериментах с микрочипами было найдено несколько десятков генов, экспрессия которых существенно различается у больных различными типами В-клеточного хронического лимфолейкоза. Различия в экспрессии некоторых из этих генов (LPL, ZBTB20, ZAP-70 и др.) по результатам экспериментов с микрочипами довольно велики и относительно постоянны. Мы предположили, что эти гены могут использоваться в качестве альтернативных маркеров, заменяющих мутационный статус. Сам по себе экспрессионный анализ с помощью микрочипов вполне решает проблему прогнозирования течения В-XJTJI. Однако этот анализ еще более трудоемок, дорог и не всегда надежен.

В то же время, мы считаем, что выборочная оценка уровня экспрессии наиболее значимых генов методом ПЦР в реальном времени при адекватных контролях представляет собой разумную альтернативу этому важному методу и может стать мощным оружием диагноза и прогноза. Кроме того, детальный анализ этих генов может открыть неизвестные пока аспекты патогенеза B-XJIJI.

В данной работе нами изучен характер экспрессии генов LPL, ZAP-70, ZBTB20, DMD, SEPT 10, SLAM, ADAM29 методом ПЦР в реальном времени у больных различными типами B-XJIJI и здоровых доноров в различных субпопуляциях клеток крови. Выявлена достоверная корреляция уровня экспрессии генов LPL, DMD, SEPT 10, SLAM, ADAM29 с мутационным статусом генов вариабельного региона иммуноглобулинов. В исследовании продемонстрировано, что оценка уровня экспресии LPL методом ПЦР в реальном времени может быть новым надежным прогностическим маркером при В-ХЛЛ.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выяснить прогностическое значение уровня экспрессии, определенного с помощью ПЦР в реальном времени, генов, экспрессия которых различается при разных вариантах B-клеточного хронического лимфолейкоза.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Определение мутационного статуса генов вариабельного региона иммуноглобулинов на ретроспективной выборке больных.

2. Определение уровня экспрессии генов LPL, ZAP-70, ZBTB20, DMD, SEPT 10, SLAM, ADAM29 методом ПЦР-РВ у данной выборки больных, в разных субпопуляциях клеток крови больных и доноров.

3. Оценка корреляции уровня экспрессии вышеуказанных генов и мутационного статуса генов вариабельного региона иммуноглобулинов, а также других прогностических признаков B-XJ1JL

4. Определение прогностической значимости уровня экспрессии генов LPL, ZAP-70, ZBTB20, DMD, SEPT 10, SLAM, ADAM29 при В-ХЛЛ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Проведено определение уровня экспрессии генов LPL, ZAP-70, ZBTB20, DMD, SEPT 10, SLAM, ADAM29 на большой коллекции образцов мононуклеаров периферической крови больных В-ХЛЛ и в отдельных субпопуляциях клеток крови. Проведен статистический анализ корреляции уровня экспрессии исследуемых генов с клиническими данными больных В-ХЛЛ. Установлена значительная корреляция относительной экспрессии генов LPL, DMD, SEPT 10, SLAM, ADAM29 с мутационным статусом генов вариабельного региона иммуноглобулинов. Показано, что увеличение уровня экспрессии LPL не связано со статусом активации клеток и не зависит от уровня экспрессии известных транскрипционных факторов. Предложен новый маркер прогноза при B-клеточном хроническом лимфолейкозе.

ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ ТЕОРИИ И ПРАКТИКИ

Измерение уровня экспрессии LPL методом ПЦР в реальном времени может предсказать прогноз на ранних стадиях В-ХЛЛ, что даст возможность своевременно назначить лечение, адаптированное к риску прогрессии заболевания, у каждого конкретного больного. Кроме того, детальный анализ генов, экспрессия которых коррелирует с мутационным статусом генов вариабельного региона иммуноглобулинов, может открыть неизвестные пока аспекты патогенеза В-ХЛЛ.

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликованы 7 работ, в т.ч. 2 работы в изданиях, рекомендованных ВАК. Материалы диссертации доложены на III международной конференции, посвященной лечению лимфатических заболеваний (Палермо, 2006г.), на VI съезде гематологов и трансфузиологов республики Беларусь (Минск, 2007г.), на XII международном симпозиуме по ХЛЛ (Лондон, 2007), на XI Российском онкологическом конгрессе в рамках VI конкурса молодых ученых по онкологии (Москва, 2007).

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 90 страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа содержит 12 рисунков и 6 таблиц. Список цитированной литературы включает 108 наименований.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Бидерман, Белла Вениаминовна

ВЫВОДЫ

1. Измерение уровня экспрессии гена липопротеинлипазы позволяет предсказать прогноз на ранних стадиях B-клеточного хронического лимфолейкоза, что может быть использовано при выборе терапии, т.к. низкий уровень экспрессии данного гена определяет группу пациентов с очень благоприятным прогнозом.

2. Уровень экспрессии генов LPL, DMD, ADAM29, SLAM, SEPT 10 достоверно коррелирует с мутационным статусом генов вариабельного региона иммуноглобулинов в мононуклеарах периферической крови у больных B-клеточным хроническим лимфолейкозом.

3. Корреляция экспрессии гена ZAP70 с мутационным статусом генов вариабельного региона иммуноглобулинов наблюдается только в клетках, экспрессирующих молекулы CD19. Уровень транскрипции гена ZBTB20 с мутационным статусом генов вариабельного региона иммуноглобулинов не коррелирует.

4. Экспрессия липопротеинлипазы в мононуклеарах периферической крови при В-клеточном хроническом лимфолейкозе не связана со статусом активации клеток, не зависит от уровня экспрессии известных транскрипционных факторов, и, по-видимому, отражает другой, неизвестный в настоящее время феномен.

Благодарности

Работа выполнена на базе лаборатории молекулярной гематологии ГНЦ РАМН (зав.лаб. - к.б.н. Судариков А.Б.). За помощь и поддержку в проведении работы выражаю искреннюю благодарность научному руководителю Сударикову А.Б., с.н.с. Никитину Е.А. и всем остальным сотрудникам лаборатории молекулярной гематологии, а также сотруднику лаборатории функциональной морфологии гемобластозов Грецову Е.М., зав. отд. компьютеризации Зингерману Б.В., и сотрудникам ЦКП «Геном» (ИМБ РАН, руководитель - Полтараус А.Б.).

Список публикаций по теме диссертации

1. Никитин ЕА, Малахо СГ, Бидерман БВ, Полтараус АБ, Судариков АБ. Молекулярно-биологические факторы прогноза при В-клеточном хроническом лимфолейкозе. Современная онкология. 2006; 8(1)

2. Biderman BV, Nikitin ЕА, Lorie UU, Byalik ТА, Zingerman BV, Sudarikov AB. Prognostic significance of mRNA expression markers in B-cell chronic lymphocytic leukemia. Ill international conference on innovative treatment of lymphoid malignancies. 2006; Abstract N42

3. Nikitin EA, Malakho SG, Biderman BV, Baranova AV, Lorie YY, Shevelev AY, Peklo MM, Vlasik TN, Moskalev EA, Zingerman BV, Vorob'ev IA, Poltaraus AB, Sudarikov AB, Vorobjev AI. Expression level of lipoprotein lipase and dystrophin genes predict survival in B-cell chronic lymphocytic leukemia. Leuk Lymphoma. 2007; 48(5):912-22.

4. Бидерман БВ, Малахо СГ, Полтораус АБ, Никитин ЕА, Судариков АБ. Новые молекулярные маркеры для оценки прогноза при хроническом лимфолейкозе. VI съезд гематологов и трансфузиологов республики Беларусь. 2007; 206-7

5. Biderman BV, Nikitin ЕА, Grecov ЕМ, Vorobjev IA, Sudarikov AB. High expression levels of LPL are unlikely to be related to an activated state of B-CLL cells. XII International Workshop on CLL. 2007; Abstract 2.35

6. Никитин ЕА, Стадник ЕА, Лорие ЮЮ, Бидерман БВ, Салогуб ГН, Цыба НН, Пустовая ЕИ, Колошейнова ТИ, Колосова ЛЮ, Сафонова ТИ, Зарицкий ЮА, Ковалева ЛГ, Судариков АБ. Прогностическое значение мутационного статуса генов вариабельного региона иммуноглобулинов у больных, получавших комбинированную терапию флударабином и циклофосфаном. Тер. Арх. 2007; 79(7):66-70.

7. Бидерман БВ, Никитин ЕА, Судариков АБ. Экспрессия липопротеинлипазы - эффективный предиктор прогноза В-клеточного хронического лимфолейкоза. Гематология и трансфузиология. 2008; 53(5):67-71

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Причины экспрессии липопротеинлипазы в клетках B-XJIJT неясны, и возможная функция ее в лейкемических клетках в данный момент непонятна. К началу данного исследования были опубликованы только микрочиповые данные об экспрессии LPL в клетках В-ХЛЛ. Нами независимо установлена высокая диагностическая эффективность определения экспрессии липопротеинлипазы в клетках В-ХЛЛ. Эти данные подтверждаются зарубежными публикациями, появившимися во время выполнения данной работы (Heintel et al., 2005; Oppezzo et al, 2005; van Y Veer et al., 2006). Так же в исследование были включен ряд других генов, данных об экспрессии которых в клетках В-ХЛЛ в литературе пока нет. Кроме того, впервые проведен детальный анализ уровня мРНК LPL в различных субпопуляциях клеток крови. Впервые проведено сравнение уровня мРНК LPL в активированных и неактивированных В-лимфоцитах периферической крови, исследован уровень экспрессии LPL в разных субпопуляциях опухолевого клона B-XJIJ1 и уровень экспрессии генов, связанных с транскрипцией LPL.

В этом исследовании мы показали, что уровень экспрессии генов LPL, DMD, ADAM29, SLAM, SEPT10 хорошо коррелирует с мутационным статусом IgVH, и предсказывает выживаемость для всей группы пациентов. Уровень экспрессии LPL определяет подгруппу пациентов с очень благоприятным прогнозом среди больных со стадией А. Привлекательная сторона LPL как прогностического маркера состоит в возможности определения количества мРНК LPL в неселектированных МПК. Все эти данные говорят о том, что LPL надежный прогностический маркер. Количественный ПЦР-РВ может быть использован для определения экспрессии LPL в клинической практике, и уровень экспрессии LPL может применяться для установления долговременного прогноза у пациентов с В-ХЛЛ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бидерман, Белла Вениаминовна, 2008 год

1. Adami F, Guarini A, Pini М, Siviero F, Sancetta R, et al. Serum levels of tumour necrosis factor-alpha in patients with B-cell chronic lymphocytic leukaemia. Eur J Cancer. 1994; 30A(9): 1259-63

2. Binet JL, Lepoprier M, Dighiero G, Charron D, D'Athis P, et al. A clinical staging system for chronic lymphocytic leukemia: prognostic significance. Cancer. 1977; 40(2):855-64.

3. Boggs D., Sofferman A., Wintrobe M., Cartwright G. Factors influencing the duration of survival of patients with chronic lymphocytic leukemia. American J of Med. 1966; 40: 243-254

4. Campbell MJ, Zelenetz AD, Levy S, Levy R, Use of family specific leader region primers for PCR amplification of the human heavy chain variable region repertoire. Mol Immunol. 1992; 29:193-203.

5. Catovsky D, Richards S, Matutes E, Oscier D, Dyer MJ, et al. Assessment of fludarabine plus cyclophosphamide for patients with chronic lymphocytic leukaemia (the LRF CLL4 Trial): a randomised controlled trial. Lancet. 2007; 21 ;370(9583):230-9.

6. Cheson BD, Bennett JM, Grever M, et al. National Cancer Institute-sponsored Working Group guidelines for chronic lymphocytic leukemia: revised guidelines for diagnosis and treatment. Blood. 1996; 87(12): 4990-4997

7. Cook GP, Tomlison IM. The human immunoglobulin VH repertoire. Immunol Today. 1995; 16:237-42. Review

8. Cordone I, Masi S, Mauro FR, Soddu S, Morsilli O, et al. p53 expression in B-cell chronic lymphocytic leukemia: a marker of disease progression and poor prognosis. Blood. 1998; 91(11):4342-9.

9. Cordone I, Matutes E, Catovsky D. Monoclonal antibody Ki-67 identifies B and T cells in cycle in chronic lymphocytic leukemia: correlation with disease activity. Leukemia. 1992; 6(9):902-6.

10. Crespo M, Bosch F, Villamor N, Bellosillo B, Colomer D, et al. ZAP-70 expression as a surrogate for immunoglobulin-variable-region mutations in chronic lymphocytic leukemia. N Engl J Med. 2003; 348(18): 1764-75.

11. Criel A, Wlodarska I, Meeus P, Stul M, Louwagie A, et al. Trisomy 12 is uncommon in typical chronic lymphocytic leukaemias. Br J Haematol. 1994; 87(3):523-8.

12. Damle RN, Temburni S, Calissano C, Yancopoulos S, Banapour T, et al. CD38 expression labels an activated subset within chronic lymphocytic leukemia clones enriched in proliferating B cells. Blood. 2007; 110(9):3352-9

13. Davis Z, Orchard J, Corcoran M, Oscier D. Divergence from the germ-line sequence in unmutated chronic lymphocytic leukemia is due to somatic mutation rather than polymorphisms. Blood. 2003; 102:3075.

14. De Rossi G, Mandelli F, Covelli A, Luciani M, Martelli M, et al. Chronic lymphocytic leukemia (CLL) in younger adults: a retrospective study of 133 cases. Hematol Oncol. 1989; 7(2): 127-37.

15. Di Giovanni S, Valentini G, Carducci P, Giallonardo P. Beta-2-microglobulin is a reliable tumor marker in chronic lymphocytic leukemia. Acta Haematol. 1989; 81(4):181-5.

16. Dohner H, Stilgenbauer S, James MR, Benner A, Weilguni T, et al. llq deletions identify a new subset of B-cell chronic lymphocytic leukemiacharacterized by extensive nodal involvement and inferior prognosis. Blood.1997; 89(7):2516-22.

17. Faguet GB.Chronic lymphocytic leukemia: an updated review. J Clin Oncol. 1994; 12: 1974-1990

18. Fais F, Ghiotto F, Hashimoto S, Sellars B, Valleto A, et al. Chronic lymphocytic leukemia B cells espress restricted sets of mutated and unmutated antigen receptors. J Clin Invest. 1998; 102:1515-25

19. Finn WG, Kay NE, Kroft SH, Church S, Peterson LC. Secondary abnormalities of chromosome 6q in B-cell chronic lymphocytic leukemia: a sequential study of karyotypic instability in 51 patients. Am J Hematol. 1998; 59(3):223-9.

20. Foa R, Massaia M, Cardona S, Tos AG, Bianchi A, et al. Production of tumor necrosis factor-alpha by B-cell chronic lymphocytic leukemia cells: a possible regulatory role of TNF in the progression of the disease. Blood. 1990; 76(2):393-400.

21. Geisler CH, Hou-Jensen K, Jensen OM, Tinggaard-Pedersen N, Hansen MM,et al. The bone-marrow infiltration pattern in B-cell chronic lymphocytic leukemia is not an important prognostic factor. Danish CLL Study Group. Eur J Haematol. 1996; 57(4):292-300.

22. Hamblin T. Historical aspects of chronic lymphocytic leukaemia. Br J Haematol. 2000; 111(4): 1023-34. Review.

23. Hansen M. Chronic lymphocytic leukemia: clinical study, based on 189 cases followed for a long time. Scandinavian J of Hematology. 1973; 18 (Suppl.):l -286

24. Heintel D, Kienle D, Shehata M, Krober A, Kroemer E, et al. High expression of lipoprotein lipase in poor risk B-cell chronic lymphocytic leukemia. Leukemia. 2005; 19(7): 1216-23

25. Hummel M, Tamaru J, Kalvelage B, Stein H. Mantle cell (previously centrocytic) lymphomas express VH genes with no or very little somatic mutations like the physiologic cells of the follicle mantle. Blood. 1994; 84(2): 403-7

26. Janeway CA, Travers P, Walport M, Shlomchik M. Immunobiology. Garland Science. 2001.

27. Juliusson G, Oscier DG, Fitchett M, Ross FM, Stockdill G, et al. Prognostic subgroups in B-cell chronic lymphocytic leukemia defined by specific chromosomal abnormalities. N Engl J Med. 1990; 323(11):720-4.

28. Kallander CF, Simonsson B, Gronowitz JS, Nilsson K. Serum deoxythymidine kinase correlates with peripheral lymphocyte thymidine uptake in chronic lymphocytic leukemia. Eur J Haematol. 1987; 38(4):331-7.

29. Kay NE, Burton J, Wagner D, Nelson DL. The malignant B cells from B-chronic lymphocytic leukemia patients release TAC-soluble interleukin-2 receptors. Blood. 1988; 72(2):447-50.

30. Keating M, Lerner S, Kantarjian H, et.al.: The serum beta-2-microglobulin level is more powerful than stage in predicting response and survival in chronic lymphocytic leukemia. Blood. 1995; 86: 606a (abstr)

31. Klein U, Tu Y, Stolovitzky GA, Mattioli M, Cattoretti G, Husson H, et al. Gene expression profiling of B cell chronic lymphocytic leukemia reveals a homogeneous phenotype related to memory B cells. J Exp Med. 2001; 194(11):1625-38

32. Lee JS, Dixon DO, Kantarjian HM, Keating MJ, Talpaz M. Prognosis of chronic lymphocytic leukemia: a multivariate regression analysis of 325 untreated patients. Blood. 1987; 69(3):929-36.

33. Lin K, Sherrington PD, Dennis M, Matrai Z, Cawley JC, Pettitt AR. Relationship between p53 dysfunction, CD38 expression, and IgV(H) mutation in chronic lymphocytic leukemia. Blood. 2002; 100:1404 1409.

34. MacLennan I. Germinal centers. Annual Review Immunology. 1994; 12:11739. Review

35. MacLennan I. Immunology. The centre of hypermutation. Nature. 1991; 354(6352):352-3.

36. Mandelli F, De Rossi G, Mancini P, Alberti A, Cajozzo A, et al. Prognosis in chronic lymphocytic leukemia: a retrospective multicentric study from the GIMEMA group. J Clin Oncol. 1987; 5(3):398-406. .

37. Matsuda F, Ishii K, Bourvagnet P, Kuma Ki, Hayashida H, et al. The complete nucleotide sequence of the human immunoglobulin heavy chain variable region locus. J Exp Med. 1998; 188(11):2151-62.

38. Matsuda F, Shin EK, Nagaoka H, Matsumura R, Haino M, et al. Structure and physical map of 64 variable segments in the 300.8-megabase region of the human immunoglobulin heavy-chain locus. Nat Genet. 1993; 3:88 -94.

39. Mead JR, Irvine SA, Ramji DP. Lipoprotein lipase: structure, function, regulation, and role in disease. J Mol Med. 2002; 80:753-769

40. Melo JV, Catovsky D, Galton DA. Chronic lymphocytic leukemia and prolymphocyte leukemia: a clinicopathological reappraisal. Blood Cells. 1987; 12(2):339-53.

41. Molica S, Dattil A, Levato D: Clinical relevance of the intensity of CD20 antigen in B-cell chronic lymphocytic leukemia. Blood. 1996; 88: 239a, (abstr) (suppl).

42. Montserrat E, Sanchez-Bisono J, Vínolas N, Rozman C. Lymphocyte doubling time in chronic lymphocytic leukaemia: analysis of its prognostic significance. Br J Haematol. 1986; 62(3):567-75.

43. Oppezzo P, Vasconcelos Y, Settegrana C, Jeannel D, Vuillier F, et al. The LPL/ADAM29 expression ratio is a novel prognosis indicator in chronic lymphocytic leukemia. Blood. 2005; 106(2):650-657

44. Orchard JA, Ibbotson RE, Davis Z, Wiestner A, Rosenwald A et al. ZAP-70 expression and prognosis in chronic lymphocytic leukemia. Lancet. 2004; 363(9403):105-11.

45. Pangalis GA, Reverter JC, Bousiotis VA, et.al. Chronic lymphocytic leukemia in younger adults: preliminary results of a study based on 454 patients. Leuk lymph. 1991(suppl); 175-178

46. Pangalis GA, Roussou PA, Kittas C, Kokkinou S, Fessas P. B-chronic lymphocytic leukemia. Prognostic implication of bone marrow histology in 120 patients experience from a single hematology unit. Cancer. 1987; 59(4):767-71.

47. Patalay M, Lofgren IE, Freake HC, Koo SI, Fernandez ML. The lowering of plasma lipids following a weight reduction program is related to increasedexpression of the LDL receptor and lipoprotein lipase. J Nutr. 2005; 135:735 -739.

48. Pines A, Ben-Bassat I, Modan M, Blumstein T, Ramot B. Survival and prognostic factors in chronic lymphocytic leukemia. Eur J Haematol. 1987; 38(2): 123-30.

49. Rai KR, Sawitsky A, Cronkite EP, Chanana AD, Levy RN, Patemack BS. Clinical staging of chronic lymphocytic leukemia. Blood. 1975; 46:219-234

50. S7.Rassenti LZ, Huynh L, Toy TL, Chen L, Keating MJ et al. ZAP-70 compared with immunoglobulin heavy-chain gene mutation status as a predictor of disease progression. N Engl J Med. 2004; 351(9):893-901

51. Rojas R, Roman J, Torres A, Ramirez R, Carracedo J, et al. Inhibition of apoptotic cell death in B-CLL by interferon gamma correlates with clinical stage. Leukemia. 1996; 10(11):1782-8.

52. Rosenwald A, Alizadeh AA, Widhopf G, Simon R, Davis RE, et al. Relation of gene expression phenotype to immunoglobulin mutation genotype in B cell chronic lymphocytic leukemia. J Exp Med. 2001; 194(11): 1639-47.

53. Rozman C, Montserrat E, Rodriguez-Fernandez JM, Ayats R, Vallespi T, et al. Bone marrow histologic pattern—the best single prognostic parameter in chroniclymphocytic leukemia: a multivariate survival analysis of 329 cases. Blood. 1984; 64(3):642-8.

54. Sarfati M, Chevret S, Chastang C, Biron G, Stryckmans P, et al. Prognostic importance of serum soluble CD23 level in chronic lymphocytic leukemia. Blood. 1996; 88(11):4259-64.

55. Stf.Schoonjans K, Peinado-Onsurbe J, Lefebvrev AM, Heyman RA, Briggs M, et al. PPARalpha and PPARgamma activators direct a distinct tissue-specific transcriptional response via a PPRE in the lipoprotein lipase gene. EMBO 1996; 15: 5336-5348

56. Semenzato G, Foa R, Agostini C, Zambello R, Trentin L, et al. High serum levels of soluble interleukin 2 receptor in patients with B chronic lymphocytic leukemia. Blood. 1987; 70(2):396-400.

57. S9.Storb U, Peters A, Klotz E, Kim N, Shen HM, et al. Somatic hypermutation of immunoglobulin genes is linked to transcription. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1998; 229: 11-19

58. PO.Storb U. Molecular mechanism of somatic hypermutation of immunoglobulin genes. Curr. Opin. Immunol. 1996; 8: 206-214

59. The French Cooperative Group on Chronic Lymphocytic Leukaemia. Natural history of stage A chronic lymphocytic leukaemia untreated patients. Br J Haematol. 1990; 76(l):45-57.

60. Tobin G, Thunberg U, Laurell A, Karlsson K, Aleskog A, et al. Patients with chronic lymphocytic leukemia with mutated VH genes presenting with Binet stage B or C form a subgroup with a poor outcome. Haematologica. 2005; 90:465-469

61. PP. Walter MA, Surti U, Hofker MH, Cox DW. The physical organization of the human immunoglobulin heavy chain gene complex. EMBO 1990; 9: 3303— 3313

62. Youden WJ. Index for rating diagnostic tests. Cancer. 1950; 3:32-35

63. Воробьев АИ, Бриллиант МД, Тихонова ЛИ, Самойлова PC, Маргулис ЕИ. Зрелоклеточные лимфатические опухоли. Тер.Арх. 1986; 58(9):4-8.

64. Воробьев АИ, Бриллиант МД. Дифференцированная терапия хронического лимфолейкоза. Тер. Арх. 1983; 55(8):7-15.

65. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М. Практика; 1999.

66. Екимов АН, Шипулин ГА, Бочкарев ЕГ, Рюмин ДВ. Новейшие технологии в генодиагностике: полимеразная цепная реакция в реальном времени (Real-Time PCR). 2002. www.PCR.ru/bibliogr/articles.

67. Кременецкая AM, Воробьев ИА, Сидорова ЮВ, Захарова АИ, Шкловский-Корди НЕ, Воробьев АИ. Морфология лимфоцитов. Тер.Архив. 1998; 70(7):37-9

68. Никитин ЕА, Лорие ЮЮ, Меликян АЛ, Самойлова PC, Булычева ТИ, и др. Факторы неблагоприятного прогноза у больных хроническим лимфолейкозом: ретроспективный анализ 206 случаев. Тер архив. 2003; 7: 38-47.

69. Яхнина ЕИ, Никитин ЕА, Асцатуров ИА, Варламова ЕИ, Кобзев ЮН, и др. Доброкачественная форма хронического лимфолейкоза. Тер. Арх. 1997; 69(7): 11-7.