Экспериментальное обоснование мишенной терапии и диагностики пигментной меланомы с использованием α- и β-излучающих радионуклидов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.01, кандидат биологических наук Куцало, Полина Вячеславовна

• Куцало, Полина Вячеславовна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Куцало, Полина Вячеславовна

Список условных сокращений

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Клеточные линии

2.2. ^ ' 'At , синтез ^ ^ t M C

2.3. Синтез ^^^1-МС

2.4. Исследование накопления ^*^At-MC и ^^^At в ионной форме клетками пигментной меланомы человека и китайского хомячка in vitro

2.5. Исследование накопления '•^ ' l-MC и Na ' ^ ' l клетками пигментной меланомы человека и китайского хомячка in vitro

2.6. Определение выживаемости клеток пигментной меланомы

211 человека и китайского хомячка после введения A t M C и At в ионной форме in vitro

2.7. Исследование фармакокинетики ^^^1-МС и ^ " A t M C in vivo

Глава 3. Результаты экспериментов

3.1. Исследование накопления A t M C и ^'^At в ионной форме клетками пигментной меланомы человека и китайского хомячка in vitro

3.2. Исследование накопления ^^ ' l -MC и Na'" ' ' l клетками пигментной меланомы человека и китайского хомячка in vitro

3.4. Определение эффективности воздействия A t M C и ^^'At в ионной форме на фибробласты китайского хомячка in vitro

3.5. Исследование фармакокинетики '^^ ^1-МС in vivo Oil

3.6. Исследование фармакокинетики A t M C in vivo

Глава 4. Обсуждение результатов

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальное обоснование мишенной терапии и диагностики пигментной меланомы с использованием α- и β-излучающих радионуклидов»

Актуальность проблемы.

Различные виды ионизирующих излучений широко применяются в диагностике и терапии злокачественных новообразований. Одним из основных методов лечения является лучевая терапия, основанная на дистанционном или контактном облучении патологических очагов с помощью различных закрытых источников. Тем не менее, при высокой эффективности облучения опухолей с использованием внешних источников (у-лучи, рентгеновское излучение, нейтроны) этот метод имеет ряд недостатков. Это обусловлено прежде всего тем, что большинство применяемых видов излучения характеризуется неблагоприятным для клинического использования глубинным дозовым распределением. Кроме того, такой способ облучения требует знания точной геометрии опухоли, что не всегда представляется возможным, особенно при развитии метастатического процесса. И, наконец, во всех новообразованиях, кроме злокачественных клеток, присутствуют также нормальные клеточные элементы, которые неизбежно подвергаются облучению при воздействии на опухоль. Таким образом, лучевая терапия, как правило, не обеспечивает достаточной избирательности в поражении раковых клеток, и оказывает цитотоксическое действие не только на опухолевые, но и на окружающие нормальные ткани.

Альтернативой лучевой терапии является так называемая мишенная или радионуклидная радиотерапия (Wheldon Т.Е., 1994). В данном случае избирательное воздействие на опухолевые клетки достигается путем введения в организм цитотоксических агентов -соединений, меченых радионуклидами. За счет использования метаболических, иммуннологических и других особенностей опухолевых клеток осуществляется доставка таких соединений непосредственно к злокачественным клеткам, что обеспечивает воздействие на клеточном или молекулярном уровне. На этом же принципе основаны методы радионуклидной диагностики.

В современной радионуклидной терапии и диагностике используются прежде всего (3-излучатели. Однако в последние годы проявляется активный интерес в отношении а-излучающих радионуклидов. По своим физическим свойствам эти радионуклиды являются оптимальными для мишенной радиотерапии многих новообразований, в частности, асцитных и диссеминированных опухолей. В наших исследованиях был использован чистый а-излучатель 211А1:5 который в соединении с опухолеспецифичными носителями представляется весьма эффективным для радиотерапии злокачественных новообразований (Amaldi U. et al., 1997; McDevitt M.R. et al., 1998; Wilbur D.S., 2001).

Пигментная меланома является одним из наиболее злокачественных новообразований. Эта опухоль характеризуется активным метастазированием уже на ранних стадиях развития, зачастую до обнаружения первичного очага (Ak I. et al., 2001; Вересова О.В. и Коростелева Т.А., 1975). Опухолевые клетки диссеминируют по системам кровеносных и лимфатических сосудов по всему организму, а образовавшиеся микрометастазы оказываются практически недоступными известным на сегодняшний день методам диагностики и терапии.

В последние десятилетия наблюдается резкий рост числа заболеваний меланомой, что, вероятно, вызвано как усилением солнечной активности, так и увеличением числа факторов, провоцирующих развитие онкологических новообразований в целом. В частности, в США с 1973 по 1998 год число случаев заболевания и смертности от меланомы возросло на 120,5 % и 39,0 %, соответственно (Ak I. et al, 2000). Риск появления меланомы увеличился для жителей США с 1 на 1500 человек в 1930 г до 1 на 75 человек в 1998 г (Whited J.D. and Grichnik J.M., 1998). Это четвертый по распространенности вид злокачественных новообразований в Австралии и Новой Зеландии, десятый - в США, Канаде и

Скандинавии (Serraino D. et al., 1998). Наиболее часто меланома встречается в Новой Зеландии, где ежегодно регистрируется около 78 случаев на 100 ООО человек (Jones W.O. et al., 1999).

Учитывая отсутствие на сегодняшний день достаточно эффективных методов диагностики и терапии пигментной меланомы, представляется актуальным поиск и разработка новых методов ранней диагностики и лечения этого новообразования.

Методы мишенной радиотерапии с использованием различных радионуклидов рассматриваются в качестве весьма перспективных в диагностике и терапии меланомы. Целенаправленная доставка радиоактивного изотопа к клеткам меланомы может осуществляться с помощью различных опухолеспецифичных носителей. Одним из таких носителей является 3,7-диметиламино-феназотионин хлорид (метиленовый синий, MC), который характеризуется высокой связывающей способностью с пигментом меланином (Potts A.M., 1962). Таким образом, MC может быть использован для доставки радионуклидов к клеткам меланомы как с целью цитотоксического воздействия, так для визуализации опухоли и ее метастазов.

Цель и основные задачи исследования.

Цель настоящих исследований заключается в экспериментальном обосновании диагностики и мишенной радиотерапии пигментной меланомы человека с использованием метиленового синего, л] 1 меченного радиоизотопами At и I.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

211 2,II исследовать кинетику накопления МС, меченного At, и At в ионной форме клетками пигментной меланомы человека и непигментированными клетками in vitro; получить количественную оценку степени селективности цитотоксического действия in vitro 211At-MC на клетки пигментной меланомы человека по сравнению с непигментированными клетками

211 а также с At в ионной форме); исследовать кинетику накопления МС, меченного 1311, и Nai31I в ионной форме клетками пигментной меланомы человека и непигментированными клетками in vitro;

211 131 исследовать фармакокинетику At-MC и I-MC на животных с имплантированной пигментной меланомой.

Научная новизна.

Проведенные исследования являются первыми в нашей стране работами по экспериментальному обоснованию мишенной радиотерапии злокачественных новообразований с использованием радионуклидов, распадающихся с эмиссией а-частиц.

Впервые получена точная количественная оценка степени

Л1 1 селективности действия At в комплексе с МС на клетки пигментной меланомы человека по сравнению с непигментированными клетками по критерию выживаемости in vitro.

Исследована кинетика накопления МС, связанного с изотопами

211 At и 1311, на клетках млекопитающих in vitro. Показано, что препараты МС, меченного изотопами 21'At и 1311, селективно накапливаются в клетках пигментной меланомы in vitro.

011

Впервые исследована фармакокинетика At-MC in vivo на животных с имплантированной меланомой, а также фармакокинетика

1 Л 1

I-MC. Показано значительное накопление препаратов на основе МС в пигментной меланоме, свидетельствующее о принципиальной возможности их использования в диагностике и терапии этого типа новообразований.

Научно-практическая значимость работы.

Результаты проведенных исследований по действию 211 At-MC и 1311

МС на клетки пигментной меланомы свидетельствуют о высокой степени избирательности накопления радиоактивных препаратов на основе МС клетками пигментной меланомы человека in vitro и in vivo,

211 а также высокой цитотоксичности At-MC. и

Полученные экспериментальные данные дают основание полагать, что в перспективе 21 ^-МС может быть рекомендован в качестве препарата для комплексной терапии пигментной меланомы человека с целью воздействия на диссеминированные опухолевые клетки и предотвращения процесса метастазирования. МС, меченный изотопами йода, представляется эффективным РФП для диагностики метастазов и терапии первичных очагов пигментной меланомы и ее метастазов.

Заключение диссертации по теме «Радиобиология», Куцало, Полина Вячеславовна

ВЫВОДЫ

1. Исследована кинетика накопления 211At-MC и 211 At в ионной форме клетками пигментной меланомы человека и непигментированными фибробластами китайского хомячка in vitro. Максимум накопления активности пигметированными клетками достигается через 2-3 ч после введения соединений и в 3 раза превышает уровень накопления непигментированными клетками. 211

Накопление At в ионной форме in vitro происходит одинаково у клеток обоих типов. Максимальные значения накопленной активности при введении 211 At в ионной форме на порядок ниже по сравнению с 211At-MC.

2. Исследована кинетика накопления I-MC и Na131I клетками пигментной меланомы человека и непигментированными фибробластами китайского хомячка in vitro. Характер накопления 1311131

МС и Na I в клетках обоих типов in vitro аналогичен накоплению 2I1At-MC и 21'At в ионной форме. Максимум накопления 1311-МС в клетках пигментной меланомы достигается через 2 ч после введения и в 3 раза выше накопления этого соединения в непигментированных клетках.

131

Накопление Na I происходит в обоих типах клеток одинаково и в незначительной степени.

3. По критерию выживаемости клеток пигментной меланомы человека in vitro цитотоксическое действие 21'At-MC на клетки пигментной меланомы более чем в 20 раз превышает эффективность 21'At в ионной форме.

4. По критерию выживаемости фибробластов китайского хомячка in

911 vitro эффективность действия At-MC на непигментированные клетки в среднем в 2 раза выше по сравнению с действие 21'At в ионной форме.

5. Комплекс 211 At-MC in vitro оказывает выраженное селективное действие на пигментированные опухолевые клетки по сравнению с непигментированными: эффективность цитотоксического действия

211 211 At-MC на порядок превышает эффективность действия At-MC на непигментированные клетки. ill

6. Исследована фармакокинетика I-MC в организме мышей с трансплантированной пигментной меланомой и у интактных животных. Максимум накопления активности в опухоли достигается через 5 ч после внутривенного введения 1311-МС и в среднем составляет 4,1 %/ г. Уровень накопленной активности в опухоли остается практически постоянным на протяжении 24 ч, снижение радиоактивности в два раза наблюдается через 48 ч после введения.

131

При этом I-MC практически полностью выводится из всех основных органов и тканей к концу первых суток после введения.

7. Фармакокинетика I-MC в организме мышей-опухоленосителей не меняется в течение по крайней мере 11 суток после его изготовления, что свидетельствует о стабильности препарата.

8. Изучена фармакокинетика At-MC в организме мышей с перевитой пигментной меланомой и интактных животных. Максимальное 211 накопление At-MC в опухоли наблюдается через 5 ч после внутривенного введения соединения и составляет 6 %/ г. Уровень накопленной активности незначительно снижается к 12 ч после введения.

911

9. Биораспределение At-MC в организме животных отличается более медленным выведением соединения по сравнению с 1311-МС из большинства органов и тканей, более высоким уровнем активности, аккумулированной в органах желудочно-кишечного тракта и щитовидной железа, что, вероятно, является следствием недостаточно высокой стабильности исследуемого комплекса 21'At-MC in vivo.

10. Полученные экспериментальные данные дают основание полагать, что МС, меченный изотопами йода, может быть использован в качестве эффективного препарата для диагностики и терапии пигментной меланомы и ее метастазов. 21 lAt в перспективе может рассматриваться в качестве эффективного адъюванта в комплексной терапии пигментной меланомы для мишенного воздействия на

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Куцало, Полина Вячеславовна, 2002 год

1. Вересова О.В, Коростелева Т.А, 1975, Иммунологические реакции при злокачественной меланоме кожи у человека. Вопросы онкологии, 21, С. 74-80.

2. Касаткин Ю.Н, Пурижанский И.И, Лыжина В.Д, Кижаев Е.В, Московский медицинский журнал «В помощь практикующему врачу», Москва, 1999, февраль, С. 17-19.

3. Красавин Е.А, Козубек С, 1991, Мутагенное действие излучений с разной ЛПЭ. Энергоатомиздат, Москва, 182 с.

4. Наркевич Б .Я, Костылев В. А, 2001, Физические основы ядерной медицины. АМФ-Пресс, Москва.

5. Норсеев Ю.В, Шмакова Н.Л, 1989, Введение астата в моноклональные антитела, ОИЯИ.

6. Пурижанский И.И, Касаткин Ю.Н, Кижаев Е.В, Лыжина В.Д, Лисенков П.И, Московский медицинский журнал «В помощь практикующему врачу», Москва, 1999, июнь, С. 24-26.

7. Халкин В.А, Цупко-Ситников В.В, Зайцева Н.Г, 1996,

8. Радионуклиды для терапии. Актиний-225: свойства, получение, применение, Дубна, ОИЯИ.

9. Шмакова H.JX, Норсеев Ю.В., Вайнсон А.А., Сюч 3., Фадеева Т.А.,

10. Фоменкова Т.Е., Халкин В.А., Череватенко А.П., 1990, Действие а211излучения At на клетки асцитного рака Эрлиха. Экспериментальная онкология, 12, С. 58-60.

11. Шмакова Н.Л., Норсеев Ю.В., Куцало П.В., Красавин Е.А., Фадеева

12. Т.А., 2001, Экспериментальные подходы к мишенной радиотерапии с211использованием At, Сообщение ОИЯИ, Дубна, 16 с.

13. Ярмоненко С.П., 1988, Радиобиология человека и животных. М.: Высшая школа, 424 с.

14. Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А., Календо Г.С., Рампан Ю.И., 1976, Биологические основы лучевой терапии опухолей, «Медицина».

15. Ak I, Stokkel М.Р.М., Bergman W., Pauwels E.K.J., 2000, Cutaneous malignant melanoma: clinical aspects, imaging modalities and treatment. Eur. J. Nucl. Med., 27, 447-458.

16. Alex J.C., Weaver D.L., Fairbank J.T., Rankin B.S., Krag D.N., 1993, Gamma-probe-guided lymph node localization in malignant melanoma, Surg. Oncol., 2, 303-308.

17. Allen B.J., Blagojevic N., 1996, Alpha- and beta-emitting radiolanthanides in targeted cancer therapy: The potential role of terbiun-149. Nucl. Med. Commun., 17, 40-47.

18. Apostolidis C., Carlos-Marquez R., Janssens W., Molinet R., Nikula T., Ouadi A., 2001, Cancer treatment using Bi-213 and Ac-225 in radioimmunotherapy, Nuclear News, 44, 29-33.

19. Balch C.M, Houghton A.N, Milton G.W., Sohen A.S, Soong S.J, eds, 1992, Cuteneous melanoma. Philadelphia: Lippincott; 165-187.

20. Bard D.R, Knight C.G, Page-Thomas D.P., 1990, A chelating derivative of a-melanocyte stimulating hormone as a potential imaging agent for malignant melanoma. Br. J. Cancer, 62, 919-922.

21. Blois M.S., 1965, On chlorpromazine binding in vivo. J. Invest. Dermatol., 45, 475-481.

22. Bloomer W.D, McLaunglin W.H, Neirinckx R.D, Adelstein S.J, Gordon P.R, Ruth T.J, Wolf A.P, 1981, Astatine-211 tellurium radiocolloid cures experimental malignant ascites. Science, 212, 340-341.

23. Blumgard H.L. and Yens O.C, 1927, Studies on velocity of blood flow;the method utilized. J. Clin. Invest., 4, 1-13.

24. Bohlmann M.K., Eckstein F.S., Stauffer E., Allemann Y., Carrel T.P., 2002, Isolated amelanotic malignant melanoma of the heart. Br. J. Dermatol, 146,912-915.

25. Boni R., Steinert H., Huch Boni R., et al., 1997, Radioiodine-labelled a-methyl-tyrosine in malignant melanoma: cell culture studies and results in patients. Br. J. Dermatol, 137, 96-100.

26. Boyd Ch.M., Lieberman L.M., Beierwalyes W.H., Varma V.M., 1970a, Diagnostic efficacy of a radioiodinated chloroquinine analog in patients with malignant melanoma. J. Nucl. Med., 11, 479-486.

27. Boyd Ch.M., Beierwalyes W.H., Lieberman L.M., Bergstrom I.J., 19706, 125I-labeled chloroquinine analog in the diagnosis of ocular melanomas. J. Nucl Med., 11, 303.

28. Breslow A., 1970, Thickness, cross-sectional areas and depth of invasion in the prognosis of cutaneous melanoma. Ann. Surg., 172, 902-908.

29. Brown I., 1986, At-211: Its possible applications in cancer therapy. Appl Rad. Isot., 37.

30. Brown I., Carpenter R.N., Mitchell J.S., 1984, Int. J. Appl. Isot., 35, 843.

31. Brown I., Mitchell J.S., 1998, The Development of a Astatinated Endoradiotherapeutic Drug: Part IV ~ Late Radiation Effects. Int. J. Radiat. Oncol Biol. Phys., 40(5), 1177-1183.

32. Cascinelli N., Ferrario M., Tonelli T., Leo E., 1987, A posible new toolfor clinical diagnosis of melanoma: the computer. J. Am. Acad. Dermatol., 16,361-367.

33. Chevitz O, Hevesy G, 1937, Studies on the metabolism of phosphorus in animals, KGL, Biol. Meddelser, 13, 9-33.

34. Clark W.H, 1967, A classification of malignant melenoma in man correlated with histogenesis and biological behavior. In: Hu WMAF (ed) Advances in biology of the skin. The pigmentary system. London: Pergamon; 621-647.

35. Cobb L.M, Humm J.L, 1986, Radioimmunotherapy of malignancy using antibody-targeted radionuclides. Br. J. Cancer, 54, 863.

36. Coderre J.A, Packer S, Fairchild R.G. et al., 1986, Iodothiouracil as a melanoma localizing agent. J. Nucl. Med., 27, 1157-1164.

37. Cohen M.B, Saxton R.E, Lake R.R. et al, 1988, Detection of malignant melanoma with iodine-123 iodoamphetamine. J. Nucl. Med., 29, 12001206.

38. Cortnay-Luck N.S, Epentos A.A, Moore R, Larche M, Pestasides D, Dhokia B, Ritter M.A, 1986, Developement of primary and secondary immune responses to mouse Mabs used in the diagnosis and therapy of malignant melanoma. Cancer Res., 46, 6489-6495.

39. Deb N, Goris M, Trisler K. et al, 1996, Treatment of hormone-refractory prostate cancer with 90Y-CYT-356 Mab. Clin. Cancer Res., 2, 1289.

40. Dencker L, Larsson B, Olander K, Ullberg S, Yokota M, 1979, Falseprecursors of melanin as selective melanoma-seekers. Br. J. Cancer, 39, 449-452.

41. DeNardo G.L., O'Donnel R.T., Kroger L.A., et al., 1995, Strateges for developing effective RIT for solid tumors. Clin. Cancer Res., 5 (Suppl), 3219.

42. Divgi C.R., Larson S.M., 1989, Radiolabelled monoclonal antibodies in the diagnosis and the treatment of malignant melanoma. Semin Nucl Med, 19, 252-261.

43. Doberenz I., Doberenz W., Wunderlich G., Franke W.G., Heidelbach J.G.,

44. Fischer S., Dreyer R., Kessler L., 1990, Case report. Endoarterielle211therapie eines Zungenkarzinoms mit At-markierten

45. Humanserumalbumin-Mikrosparen erste klinische Erfahrungen. Nuc. Compact., 21, 124-127.

46. Dubois D., Ledermann J.A., Link E.M., Stauss H., Collins M., 1992, Malignant melanoma. Lancet, 340, 948-951.

47. Essner R., 1997, The role of lymphoscintigraphy and sentinel node mapping in assessing patients risk in melanoma. Semin Oncol, 24 Suppl 4,4.11.

48. Feggi L, Indelli M, Pansini G.G, Santini A, Prandini N, Virgili A.R, 1993, Immunoscintigraphy in malignant melanoma; a five-year clinical experience. Nucl. Med. Commun., 14, 145-148.

49. Fisher M.R, Barker B, Amparo E.G., Brandt G, Brant-Zawadski M, Hricak H, Higgins G.B, 1985, MR imaging using specialized coils. Radiology, 157, 443-447.

50. Forrest I.S, Gutmann F, Keyzer H, 1966, In vitro interaction of chlorpromazine and melanin. Rev. Agress., 7, 147-152.

51. Foster R, Hanson P, 1996, Electron-donor-acceptor complex formation by compounds of biological interest. I. Optical absorption spectra of mixtures of phenothiazines and related compounds with electron acceptors. Biochem. Biophys. Acta., 112, 482-489.

52. Foster R, Fyfe C.A, 1996, Electron-donor-acceptor complex formation by compounds of biological interest. II. The asosiation-constant of various 1,4-dinitrobenzene-phenothiazine drugs. Biochem. Biophys. Acta., 112, 490-495.

53. Garg P.K., Harrison C.L., Zalutsky M.R., 1990, Comparative tissue711 1 1distribution in mice of the a-emitter At and 1J1I as labels of a monoclonal antibodiy and F(ab')2 fragment, Cancer Res., 50, 3514-3520.

54. Gatenby R.A., Moldofsky P.J., Weiner L.M., 1988, Metastatic colon cancer: corellation of oxygen levels with I-F(ab')2 uptake. Radiology, 166, 757.

55. Hamilton J.G., Asling C.W., Garrison W.M., Scott K.G., 1953, Univ. Calif. Publ. Pharmacol., 2, 283.

56. Hamilton J.G., Durbin P.W., Asling C.W., Johnston M.E., 1956. Proc. Int. Conf. Peaceful Uses Atomic Energy, Geneva, 1956.

57. Hamilton J.G., Durbin P.W., Parrott M., 1954, The accumulation and destructive action of astatine-211 in the thyroid gland of rats and monkeys. J. Clin. Endocrin. Metab., 14, 1161-1178.

58. Hamilton J.G. and Soley M.H., 1940, Studies in iodine metabolism of the thyroid gland in situ by the use of radio-iodine in normal subjects and in patients with various type of goiter. Am. J. Physiol., 131, 135-43.

59. Harrison A., Royle L., 1984, Preparation of a 211At-IgG Conjugate which is Stable in vivo. Int. J. Appl. Radiat. Isot., 35, 1005-1008.

60. Harrison A., Royle L., 1985, Cancer Drug Deliv., 2, 227.

61. Hertz S., Roberts A., Evans R.D., 1938, Radioactive iodine as indicator in study of thyroid physiology, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 38, 510-513.

62. Hevesy G., 1923, The absorption and transplantation of lead by plants. Acontribution to the application of the method of radioindicators in the investigation of the change of substance in plants. Biochem. J., 17, 429445.

63. Hoefnagel C.A., 1998, Role of nuclear medicine in melanoma. Eur. J. Nucl. Med., 25, 1567-1574.

64. Hoffmann K., Jung J., el Gammal S., Altmeyer P., 1992, Malignant melanoma in 20MHz B scan sonography. Dermatology, 185, 49-55.

65. Holder W.D., White R.Jr., Zuger J.H., Easton E.J.Jr., Greene F.L., 1998, Effectiveness of positron emission tomography for the detection of melanoma metastases. Ann. Surg., 227, 764-769.

66. Hughes W.L., Gitlin D., 1954, The reaction of astatine with protein, Report BNL-314, 48.

67. Imam S.K., 2001, Status of radioimmunotherapy in the new millenium. Can. Biotherapy and Radiopharm., 16, 237-256.

68. Ithakissios D.S. and Hapke B., 1979, J. Nucl. Med., 20, 785.

69. Jain R.K., 1991, Haemodynamic and transport barriers to the treatment of solid tumors, Int. J. Radiat. Biol, 60, 85.

70. Jardine L.J., 1975, Phys. Rev. C., 11, 1385.

71. Jones W.O., Harman C.R., Ng A.K., Shaw J.H., 1999, Incidence of malignant melanoma in Auckland, New Zealand: highest rates in the world, World J. Surg, 23, 732-735.

72. Kagan R., Witt T., Bines S., Mesleh G., Economou S., 1988, Gallium-67scanning for malignant melanoma. Cancer, 61, 272-274.

73. Kampf G, 1988, Induction of DNA double-strand breaks by ionizing radiation of different quality and their relevance for cell inactivation, Radiobiol. Radiother., 29, 631-658.

74. Kaufmann P.M., Crone-Muzebrock W, 1992, Tumor folow-up using sonography and computed tomography in the abdominal region of patients with malignant melanoma. Aktuelle Radiol., 2, 81-85.

75. Larsen R.H., Akabani G, Welsh P, Zalutsky M.R., 1998, The cytotoxicity and microdosimetry of astatine-211-labeled chimeric monoclonal antibodies in human glioma and melanoma cells in vitro. Radiat. Res., 149(2), P. 155-162.

76. Larsen R.H, Bruland O.S, Hoff P, Alstad J, Lindmo T, Rofstad E.K, 1994a, Inactivation of human osteosarcoma cells in vitro by At-21 l-TP-3 Mab, Rad. Res., 139, 178-184.

77. Larsen R.H, Bruland O.S, Hoff P, Alstad J, Rofstad E.K, 19946, Analysys of TG in the treatment of human osteosarcoma microcolonies in vitro with At-211-labelled monoclonal antibody, Br. J. Cancer, 69, 10001005.

78. Larsen R.H, Hassfjell S.P, Hoff P, Alstad J, Olsen E, Vergote I.B, de Vos L.N, Bjorgum J, Nustad K, 1993, 2nAt-labelling of polymer particles for radiotherapy: synthesis, purification and stability. J. Lab. Comp. Radiopharm., 33, 977-986.

79. Larsen R.H., Vaidyanathan G., Zalutsky M.R., 1997, Cytotoxity of ot-particle-emitting 5-211At.astato-2'-deoxyuridine in human cancer cells, Int. J. Radial Biol., 72(1), 79-90.

80. Larson S.M., 1987, Lymphoma, melanoma, colon cancer: diagnosis and treatment with radiolabeled monoclonal antibodies, Radiology, 165, 297304.

81. Larsson B., Tjalve H., 1979, Studies on the mechanism of drug binding to melanin. Biochem. Pharmacol., 28, 1181-1187.

82. Lawrence J.H., Scott K.G., Tuttle L.W., 1939, Studies on leikemia with aid of radioactive phosphorus. Intern. Clin., 3, 33-58.

83. Link E.M., 1999, Targeting melanoma with 2I!At/131I-methylene blue: preclinical and clinical experience. Hybridoma, 18, 77-82.

84. Link E., Blower P.J., Costa D.C., Lane D.M., Lui D., Brown R.S.D., Ell P.J., Spittle M.F., 1998, Early detection of melanoma metastases with radioiodinated methylene blue, Eur. J. Nucl. Med., 25(9), 1322-1329.

85. Link E.M., Brown I., Carpenter R.N., Mitchell J.S., 1989, Uptake and therapeutic effectiveness of 1-125 and At-211 - MTB for pigmented melanoma in animal model system. Cane. Res., 49, 4332-4337.

86. Link E.M, Carpenter R.N, 1990, At-211 MTB for targeted radiotherapy of human melanoma xenografts: treatment of micrometastases. Cane. Res., 15, 2963-2967.

87. Link E, Costa D.C, Lui D, Ell P.J, Blower P.J, Spittle M.F, 1996a, Targeting disseminated melanoma with radiolabeled methylene blue: comparative bio-distribution in man and animals. Acta Oncol, 35(3), P. 331-341.

88. Link E.M, Lukewicz S, 1982, A new radioactive drug selectively accumulating in melanoma cells. Eur. J. Nucl. Med., 7, 469-473.

89. Link E.M, Michalovski A.S, Rosch F, 19966, 211At-Methylene Blue for Targeted Radiotherapy of Disseminated Melanoma: Microscopic Analysis of Tumor Versus Normal Tissue Damage. Eur. J. Cancer., 32 A, 1986-1994.

90. Link E.M, Rydzy M, 1978, Endoirradiation of neoplastic tissues byadministered radioisotopes. Proceedings of the Third Meeting of the Polish Biophysics Society, p. 62.

91. Lui B.L, Jin Y.T, Lui Z.H, Luo C, Kojima M, Maeda M, 1985, Halogen exchanges using crown ethers: Synthesis and preliminary biodistribution of 6-211 At.Astato-methyl-19-norcholest-5(l 0)-en-3 p-ol. Int. J. Appl. Radiat. Isot., 36, 561-563.

92. Macklis R.M, Kinsey B.M, Kassis A.I, Ferrara J.L.M, Atcher R.W, Hines J.I, Coleman C.N, Adelstein S.J, Burakoff S.J, 1988,

93. Radioimmunotherapy with alpha-particle-emitting immunoconjugates. Science, 240, 1024-1026.

94. Macklis R.M., Kaplan W.D., Ferrara J.L.M., 1989, Alpha-particle radioimmunotherapy: animal models and clinical prospects, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 16, 1377-1387.

95. Macklis R.M., Yin J.W., Beresford B., Atcher R.W., Hines J.J., Humm J.L., 1992, Cellular kinetics, dosimetry and radiobiology of a-particle radioimmunotherapy: induction of apoptosis, Radiat. Res., 130, 220-226.

96. McDevitt M.R., Sgouros G., Finn R.D., Humm J.L., Jurlic J.G., Larson S.M., Scheinberg D.A., 1998, Radioimmunotherapy with alpha-emitting nuclides. Eur. J. Nucl. Med., 25, 1341-1351.

97. McLaughlin W.H., Thramann W.M.Jr., Lambrecht R.M., Mulius R.A., Bloomer W.D., 1988, Preliminary observations of malignant melanoma therapy using radiolabeled alpha-methyltirosine. J. Surg. Oncol., 37, 192197.

98. Mitchell W, Epstein J.H, 1965, The affinity of melanin for chlorquinine. J. Invest. Dermatol, 45, 482-488.

99. Murray J.L, Macey D.J, Kasi L.P. et al, 1994, Phase II RIT trial with 131I-CC49 in colorectal cancer. Cancer, 73, 1057.

100. NIH Consensus Development Panel on Early Melanoma, 1992, Diagnosis and treatment of early melanoma. JAMA, 268, 1314-1319.

101. Norseev Yu.V, Shmakova N.L, 1995, At-211: production, injection into monoclonal antibodies, radiobiological effect, possible application to cancer treatment. Nucleonica, 40, 13-26.

102. Olander K, Larsson B, Dencker L, 1983, Thioamides as false melanin precursors: studies in murine melanomas. Acta Pharmacol. Toxicol, 52, 135-142.

103. Packer S, Redvanly C, Lambrecht R.M, Wolf A.P, Atkins H.L, 1975, Quinoline analog labeled iodine-123. Arch. Ophtalmol., 93, 504-508.

104. Paneth F, Hevesy G, 1913, Uber Radioelemente als Indikatoren in der Analytischen Chemie. Monatschr. Chem., 34, 1401-1407.

105. Pijpers R, Borgstein P.J, Mejer S, Hoekstra O.S, van Hattum L.H, Tuele G.J, 1997, Sentinel node biopsy in melanoma patients: dynamic lymphoscintigraphy followed by intraoperative gamma and vital dye guidance. World J. Surg., 21, 788-792.

106. Potts A.M., 1962a, Uveal pigment and phenothiazines in the eye of1.lexperimental animals. Trans. Am. Ophtalmol. Soc., 60, 517-552.

107. Potts A.M., 19626, The concentration of pheothiazines in the eye of experimental animals, Invest. Ophtalmol. Visual Sci., 1, 522-530.

108. Potts A.M., 1964a, Further studies concerning the accumulation of polycycling compounds on uveal melanin. Invest. Ophtalmol. Visual Sci., 3, 400-404.

109. Potts A.M., 19646, The reaction of uveal pigment in vitro with polycyclic compounds. Invest. Ophtalmol. Visual Sci., 3, 405-416.

110. Pressman D, Korngold L, 1953, The in vivo localization of antiWagner osteogenic sarcoma antibodies. Cancer, 6, 7619-7623.

111. Puck T.T, Marcus P.I, Cierciura S.J, 1956, Clonal growth of mammalian cells in vitro. J. Exptl. Med., 103, 273-283.

112. Reynolds J.L, ed, 1982, Martindale The Extra Pharmacopoeia, 28th edn. London, The Pharmaceutical Press, 384-385.

113. Reynolds J.L, Del Vecchio S, Sakahara H, et al, 1989, Antimurine response to mouse Mabs: Clinical findings and implications. Int. J. Radiat. Appl. Instrum. (B), 16, 121.

114. Serraino D, Fratino L, Gianni W. et al., 1998, Epidemiological aspects of cataneous malignant melanoma review. Oncol. Rep, 5, 905-909.

115. Schaling D.F, Oosterhuis J.A, Jager M.J, Kakebeeke-Kemme H, Pau-wels E.K.J, 1994, Possibilities and limitations of radioimmunoscintigraphy and conventional diagnostic modalities inchoroidal melanoma. Br. J. Ophtalmol., 78, 244-248.

116. Shaffer R.N., 1952, a irradiation. Effect of astatine-211 on the arterior segment and on an epithelial cyst. Trans. Am. Ophthalmol. Soc., 50, 607627.

117. Schmid-Wendtner M.H., Baumert J., Stange J., Volkenandt M., 2002, Delay in the diagnosis of cutaneous melanoma: an analisis of 233 patients. Melanoma Res., 12, 389-394.

118. Soler C., Parrot J.L., Thiffet O. et al., 1997, The role of 99mTc sestamibi single photon emission tomography in the follow-up of malignant melanoma and the detection of lymph node metastases. Eur. J. Nucl. Med., 24, 1522-1525.

119. Ulmer A., Metzger S., Fierlbeck G., 2002, Successful palliation of stenozing anorectal melanoma by intratumoral injections with natural interferon-beta. Melanoma Res., 12, 395-398.

120. Vaughan A.T.M., Bateman W.J., Brown G., Cowan J., 1982, The specific Inhibition of Cellular Clonogenic Proliferation Using At-211 Labelled Lectins and Antibodies -1. Int. J. Nucl. Med. Biol., 9, 167-171.

121. Visser G.W.M., Diemer E.L., 1983, Inorganic astatine chemistry: formation of complexes of astatine. Radiochemica Acta, 33, 145.

122. Visser G.W.M., Diemer E.L., Vos C.M., Kaspersen F.H., 1981, The biological behavior of some organic astatine compounds in rats. Int. J. Appl. Radiat. Isot, 32, 913-917.

123. Wagner J.D., Schauwecker D., Davidson D. et al., 1999, Prospective study of fluorodeoxyglucose-positron emission tomography imaging of lymph node basins in melanoma patients undergoing sentinel node biopsy. J. Clin. Oncol., 17, 1508-1515.

124. Wheldon T.E., 1994, Targeting Radiation to Tumours. Int. J. Radiat. Biol., 65, 109-116.

125. Wilbur D.S., 2001, Overcoming and obstacles to clinical evaluation of 211At-labelled radiopharmaceuticals. J. Nucl. Med., 42, 1516-1516

126. Whited J.D., Grichnik J.M., 1998, Does this patient have a mole or a melanoma? JAMA, 279, 696-701.

127. Zalutsky M.R, Zhao X.-G, Alston K.L, Bigner D, 2001, High-level211 211 production of a-particle-emitting At and preparation of At-labeledantibodies for clinical use. J. Nucl. Med., 42, 1508-1515.