Эколого-биологическая оценка штаммов Lactobacillus acidophilus, используемых в производстве пробиотических продуктов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат биологических наук Иркитова, Алена Николаевна

• Иркитова, Алена Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Иркитова, Алена Николаевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ 4 ГЛАВА 1. ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS

1.1. Характеристика и распространение

1.2. Антагонистическая активность

1.3. Пробиотические свойства

1.4. Практическое применение 31 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Питательные среды и условия культивирования

2.3. Методы исследования 47 ГЛАВА 3. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДУЕМЫХ ШТАММОВ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS

3.1. Морфолого-культуральные свойства отечественных

штаммов L. acidophilus

3.2. Характеристика штамма L. acidophilus СКМ-506 58 ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ НА РОСТ И ПРОЯВЛЕНИЕ АНТАГОНИСТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ШТАММОВ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ПО ОТНОШЕНИЮ К ШТАММАМ ESCHERICHIA COLI

4.1. Характер субстрата

4.2. Аэробные и анаэробные условия

4.3. Активная кислотность среды

4.4. Нейтрализация молочной кислоты 76 ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ШТАММОВ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS

5.1. Молекулярно-генетическая идентификация штаммов

5.2. Желчеустойчивость

5.3. Биосовместимость штаммов L. acidophilus между собой

2

5.4. Биосовместимость штаммов L. acidophilus и Propionibacterium freude-nreichii

5.5. Жизнеспособность L. acidophilus и P. freudenreichii в различных экологических условиях

5.5.1. Выращивание на разных средах

5.5.2. Совместное и раздельное культивирование 95 ГЛАВА 6. БИОТЕХНОЛОГИЯ АЦИДОФИЛЬНОГО ПРОБИОТИЧЕС-КОГО НАПИТКА НА ОСНОВЕ МОЛОЧНОЙ (ПОДСЫРНОЙ) СЫВОРОТКИ

6.1. Разработка рецептуры экспериментального напитка

6.2. Изучение динамики численности заквасочных бактерий в процессе хранения пробиотического сывороточного напитка

6.3. Оценка органолептических показателей напитка

6.4. Оценка эффективности использования напитка в лечебно-профилактическом питании 116 ВЫВОДЫ 120 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 122 ПРИЛОЖЕНИЕ 1 140 ПРИЛОЖЕНИЕ 2 142 ПРИЛОЖЕНИЕ 3

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эколого-биологическая оценка штаммов Lactobacillus acidophilus, используемых в производстве пробиотических продуктов»

ВВЕДЕНИЕ

Микроорганизмы рода Lactobacillus широко распространены в природе и являются представителями микрофлоры человека и теплокровных животных. Они обладают высокой биологической и функциональной активностью, что определяет их практическое использование в качестве пробиотиков и в производстве пищевых продуктов. Среди бактерий, применяемых как про-биотики, наиболее широко известна своим полезным действием Lactobacillus acidophilus, которая заселяет кишечник новорожденного ребенка и, вступив с ним в устойчивый симбиоз, сопровождает человека на протяжении всей его жизни, оказывая благотворное влияние на его здоровье (Королева, 1975; Каган, 2008). L. acidophilus является наиболее сильным антагонистом среди других представителей рода Lactobacillus. Антагонистическая активность L. acidophilus к патогенной, условно-патогенной и технически-вредной микрофлоре обусловлена сложной системой конкурентных и аллелопатических взаимоотношений. Изучение этих взаимоотношений, которые характерны как для представителей микробоценозов организма человека, так и микробных популяций в окружающей среде на фоне действия факторов различной природы, является актуальной проблемой экологии микроорганизмов (Тучина, 2008). Особенно важно, что антагонистическая активность, привлекающая к данному виду лактобацилл наибольшее внимание исследователей, четко проявляется не только в опытах in vitro, но и in vivo - непосредственно в естественных системах L. acidophilus!организм хозяина.

Штаммы, обладающие антагонистической активностью, различаются по силе и характеру воздействия на ингибируемый микроорганизм, а также по ширине и специфичности спектра ингибируемых микробов. Антагонистическая активность L. acidophilus - важное, но далеко не единственное свойство этой бактерии. L. acidophilus обладает также высоким уровнем колонизационной способности, желчеустойчивости и антибиотикоустойчивости.

Все это определяет постоянно растущий интерес исследователей к изучению L. acidophilus и выделению штаммов, перспективных для использования в пищевой промышленности. Следует отметить, что входя в состав про-биотических продуктов или лекарственных препаратов, а также при попадании внутрь организма-хозяина, производственные штаммы L. acidophilus оказываются в среде обитания, где на рост и антагонистическую активность ацидофильной палочки влияют разные экологические факторы, поэтому детальное изучение влияния этих факторов на пробиотические микроорганизмы имеет не только большое теоретическое, но и практическое значение. Кроме того, характеристика штаммов L. acidophilus, описанных в патентах, не является завершенной, комплексной по оценке биологических и экологических свойств L. acidophilus. Поэтому необходимо описывать и вести мониторинг особенностей коллекционных штаммов, используемых в промышленности, для обеспечения экологической безопасности продуктов питания.

Цель работы: изучить эколого-биологические свойства штаммов L. acidophilus, используемых в производстве пробиотических продуктов.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать морфолого-культуральные свойства исследуемых штаммов L. acidophilus.

2. Изучить влияние экологических факторов (выращивание на разных средах, аэробные и анаэробные условия, активная кислотность среды, наличие молочной кислоты) на рост и антагонистическую активность штаммов L. acidophilus по отношению к тест-штаммам Escherichia coli в условиях in vitro.

3. Определить желчеустойчивость исследуемых штаммов L. acidophilus.

4. Оценить биосовместимость штаммов L. acidophilus между собой и со штаммами Propionibacterium freudenreichii.

5. Выявить жизнеспособность штаммов!,, acidophilus и штаммов P. freudenreichii в различных экологических условиях (выращивание на разных средах, совместное и раздельное культивирование).

6. Разработать пробиотическую закваску и биотехнологию ацидофильного пробиотического напитка на основе молочной подсырной сыворотки.

Научная новизна работы. Впервые дана комплексная эколого-биологическая характеристика штаммов L. acidophilus из сибирской коллекции микроорганизмов ГНУ СО РАСХН СибНИИсыроделия. Выявлена зависимость роста и антагонистической активности исследуемых штаммов L. acidophilus от аэробных и анаэробных условий выращивания, активной кислотности среды. Для получения количественной оценки антагонистических взаимоотношений L. acidophilus и Escherichia coli нами модифицированы 2 метода - метод капель и метод культивирования на жидкой среде Кесслера. Проведена оценка биосовместимости штаммов L. acidophilus между собой и с P. freudenreichii. Разработана пробиотическая закваска с учетом результатов по биосовместимости штаммов. Разработана биотехнология и рецептура пробиотического напитка на основе молочной (подсырной) сыворотки с применением пробиотической закваски.

Положения, выносимые на защиту:

1. Антагонистическая активность исследуемых штаммов L. acidophilus по отношению к тест-штаммам Е. coli зависит от аэробных и анаэробных условий, активной кислотности среды, наличия молочной кислоты и не зависит от среды культивирования.

2. Жизнеспособность штамма L. acidophilus СКМ-500 не изменяется при раздельном и совместном культивировании с P. freudenreichii, а при использовании разных сред численность сохраняется на терапевтически значимом уровне (не менее 10ö КОЕ/мл).

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты позволили выявить, что антагонистическая активность коллекционных штаммов L. acidophilus является индивидуальным, штаммоспецифиче-ским признаком, а степень проявления этого признака зависит от экологических условий.

Результаты исследования могут быть использованы научно-исследовательскими организациями микробиологического профиля и предприятиями молочной промышленности для селекции коллекционных и промышленных штаммов молочнокислых бактерий, для мониторинга качества заквасок и бактериальных препаратов, обеспечения экологической безопасности продуктов питания. Модифицированные нами методы позволяют количественно оценить антагонистическую активность штаммов ацидофильной палочки и могут быть внедрены в практику микробиологических лабораторий и лабораторий по оценке качества пищевой продукции.

На основе полученных результатов разработана пробиотическая закваска и утверждена нормативно-техническая документация на производство пробиотического напитка на основе молочной (подсырной) сыворотки «Алтайское лето» ТУ 9222-056-00419710-10.

Результаты исследования использованы при проведении занятий по Экологии микроорганизмов, Микробиологии, Прикладной биотехнологии, Прикладной экологии со студентами биологического факультета Алтайского государственного университета.

Апробация работы. Результаты работы были апробированы на научных конференциях различного уровня: научно-практическая конференция «Интеллектуальный потенциал ученых России» (Барнаул, 2009); XI городской научно-практической конференции «МОЛОДЕЖЬ-БАРНАУЛУ» (Барнаул, 2009); Международной научной конференции «Биотехнология начала III тысячелетия» (Саранск, 2010); Всероссийской молодежной научной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты современной биологии» (Томск, 2010); 4-й Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с Международным участием «Технологии и оборудование химической, биотехнологической и пищевой промышленности» (Бийск, 2011); Всероссийской выставке «РосБиоТех» (Москва, 2010); Слете молодых сыроделов (Барнаул, 2011); Всероссийской с международным участием школе-конференции молодых ученых «Совре-

менные проблемы микробиологии, иммунологии и биотехнологии» (Пермь, 2011) и др.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ, в том числе 3 из них - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 6 глав, выводов, библиографического списка и приложения. Диссертация иллюстрирована 26 рисунками и 35 таблицами. Основной текст изложен на 144 страницах машинописного текста. Библиографический список включает 173 наименований работ, в том числе 85 - зарубежных авторов.

Личный вклад автора. Автором определены цель и задачи исследования, спланированы и выполнены лабораторные эксперименты на всех этапах исследования, лично выполнена обработка и обсуждение полученных результатов.

Благодарности. Автор выражает сердечную, искреннюю благодарность научному консультанту к.б.н. Я.Р. Катанка мудрые советы, терпение и понимание, за помощь в планировании экспериментов. Автор работы признателен своему научному руководителю д.б.н., проф. Г.Г. Соколовой за ценные замечания и консультационную помощь в написании работы.

ГЛАВА I. ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ LACTOBACILLLUS ACIDOPHILUS

1.1. Характеристика и распространение

Официально начало истории ацидофильной палочки относится к 1900 году, когда Moro Е. описал микроб, выделенный им из фекалий грудного младенца, и дал ему название Bacillus acidophilus (Moro, 1900). Однако эта культура была впоследствии утрачена, а сохранившееся описание недостаточно, чтобы уверенно отнести ее к современному виду Lactobacillus acidophilus. Мы рассматриваем описание вида, предложенное Hansen Р.А., Мос-quot G. в 1970 г. и представленное в 8-ом издании определителя Берги неотиповым штаммом АТСС 4356 (Bogovic-Matijasic, Rogelj, 1998).

Морфология. Палочки с закругленными концами, размером обычно 0,60,9 х 1,5-6 мкм, располагаются поодиночке, парами или в виде коротких цепочек. Неподвижны. Жгутиков не образуют. В отличие от L. bulgaricus и L. lactis не содержат гранул метахроматина. Спор не образуют. Колонии обычно шероховатые (R-форма). Микроскопическое исследование обычно обнаруживает скрученные или пушистые волокнистые выступы с темной волокнистой массой в центре колонии. Глубинные колонии имеют неправильную форму с радиальными или разветвленными выступами. Не имеют характерной окраски.

Физиолого-биохимические свойства. Тип брожения - гомоферментатив-ное с образованием DL-молочной кислоты (в отличие от L. bulgaricus, образующей только D-изомер лактата). Обычно на долю других конечных продуктов ферментации углеводов приходится менее 10 %. Гидролизует эскулин. Ферментирует амигдалин, целлобиозу, фруктозу, галактозу, лактозу, мальтозу, салицин, сахарозу и трегалозу. Некоторые штаммы ферментируют гликоген (обычно слабо). Некоторые штаммы ферментируют мелибиозу и раффинозу. Факультативный анаэроб. Каталазу не образует. Не

растет при 15°С, может не расти при 22°С; обычно растет при 45 "С и может расти при 48°С; оптимум в пределах 35-3 8°С. Растет при начальных значениях рН от 5,0 до 7,0 с оптимумом в пределах рН 5,5-6,0. Аммиак из аргинина не образует. Активность кислотообразования и продолжительность свертывания молока варьируют; кислотообразование колеблется в пределах 0,3-1,9 % молочной кислоты.

Пептидогликан клеточной стенки относится к типу Ь-лизин-Б-аспартат; тейхоевая кислота обычно отсутствует; у некоторых штаммов выявляются небольшие количества глицерол-тейхоевой кислоты. Клеточные стенки не содержат каких-нибудь различимых гексоз и пентоз. Штаммы проявляют серологическое разнообразие и не дают групповых реакций.

Для роста требуют присутствия ацетата или мевалоновой кислоты, рибофлавина, пантотената кальция, ниацина и фолиевой кислоты. Не нуждаются в добавках тиамина, пиридоксаля и тимидина. Обычно не нуждаются в витамине В12 (цианкобаламине). Мутантные штаммы могут нуждаться в деок-сирибозидах (Квасников, Нестеренко, 1975).

Содержание ГЦ в ДНК, определенное у 6 штаммов по плавучей плотности ДЕК, составило 36,7 ± 0,7 моль% (Buchanan, Gibbons, 1974; Starr et al., 1981).

Исследователи отмечают высокую устойчивость штаммов ацидофильной палочки к щелочной реакции среды (рост при рН=8,3), наличию в среде 0,4 % фенола, желчи (20 %) или поваренной соли (2 %) и связывают эту особенность с ее адаптацией к специфической нише естественного местообитания (Королева, 1975; Банникова и др., 1987).

Ацидофильная палочка способна подавлять рост ряда представителей патогенных, условно-патогенных и технически-вредных микроорганизмов (Королева, 1975; Keogh, 1976; Банникова и др., 1987) за счет неспецифического и специфического антагонизма. Неспецифический антагонизм проявляют не только штаммы L. acidophilus, но и многие другие группы и виды

молочнокислых бактерий, а специфический антагонизм, это скорее штаммо-вое, чем видовое свойство ацидофильной палочки.

Зарубежные исследователи характеризуют штаммы L. acidophilus как относительно слабые кислотообразователи, свертывающие молоко при 0,5 %-ном инокулюме и оптимальной температуре культивирования в лучшем случае не ранее, чем за 24 час. В СССР в 1940-50-х гг. были селекционированы штаммы, идентифицированные как L. acidophilus, с очень высокой скоростью кислотообразования. Эти штаммы, способные свертывать молоко за 9-15 ч, а при 3-5 %-ном инокулюме - за 5-6 ч, отличаются от вышеприведенного описания и по морфологии (размер клеток 1,0-1,5 х 3-40 мкм), у некоторых штаммов наличие в клетках метахроматиновых зерен (колонии R- и S-форм), и по некоторым физиолого-биохимическим признакам (например, по спектру ферментации углеводов) (Квасников, Нестеренко, 1975; Королева, 1975). В коллекции культур СибНИИ сыроделия нетипичные для L. acidophilus свойства проявляет промышленный штамм 630, используемый в производстве детского пробиотического кисломолочного продукта «Биолакт». Этот штамм образует в молоке невязкий сгусток, а его клетки содержат, подобно клеткам L. bulgaricus и L. lactis, метахроматиновые зерна.

О существовании «нетипичных» штаммов L. acidophilus сообщали и зарубежные исследователи. Так, из рубца и сычуга телят и козлят, питавшихся молоком, были выделены штаммы ацидофильной палочки, способные ферментировать крахмал и декстрин, а также устойчивые к ауреомицину (Mann, Oxford, 1955).

У L. acidophilus обнаружено наличие протеолитических и липолитических свойств. Согласно данным JI.A. Банниковой (1987), все 6 исследованных ими штаммов L. acidophilus проявляли протеолитическую активность (оцениваемую по накоплению свободного тирозина) на уровне, сходном с уровнем у штаммов L. bulgaricus, L. helveticus и L.casei, и заметно превосходящем уровень активности, выявленный у лактококков. В свою

очередь египетские исследователи сообщили, что изученные ими штаммы L. acidophilus обладали внутриклеточной эстеразной активностью (El-Soda, Abd-el-Wahab et al., 1986).

Лизогения L. acidophilus. Бактериофаги наносят большой ущерб молочной промышленности; особенно страдает от них сыродельная отрасль, что объясняется использованием щадящих режимов пастеризации молока, контакта полуфабриката с нестерильной внешней средой и широким применением лактококков, наиболее предрасположенных к фаголизису (Гудков, 2003; Кувалдина, 2005). У нас и за рубежом опубликовано большое количество работ, посвященных изучению бактериофагов молочнокислых бактерий, но лишь считанные единицы из них касаются термофильных лактобацилл. Так, описаны вирулентные бактериофаги, специфичные для видов L. bulgaricus, L. helveticus и L. lactis (Kiuru, Tybeck, 1955; Sozzi, Maret, 1975), однако мы не нашли в доступной литературе ни одного сообщения о вирулентных бактериофагах ацидофильной палочки. Вряд ли таковые отсутствуют в Природе, а, значит, они могут представлять потенциальную угрозу как крупнотоннажному производству ацидофильных молочных продуктов, так и нормальной микробиоте ЖКТ человека и животных. В этой связи представляют интерес работы по выявлению умеренных фагов L. acidophilus. Применив обработку митомицином С, исследователи (de Klerk, Hugo, 1970; Yokokura et al., 1974) индуцировали у ряда штаммов L. acidophilus лизис клеток, причем в некоторых лизатах электронная микроскопия выявила присутствие зрелых фагочастиц или фагоподобных структур. Ни один из полученных лизатов не давал негативных колоний, из чего исследователи заключили, что имеют дело с дефектными фагами. Тихоненко А.С. с соавторами (1986) исследовали 17 производственных штаммов L. acidophilus из коллекции ВНИМИ. Не обнаружено спонтанного выделения умеренных фагов, но после УФ-индукции в дозе 260 эрг/мм2 умеренные фаги обнаружили у 3 штаммов (8а, Зе, 5е). Электронная микроскопия показала, что все эти фаги имеют одинаковую морфологию и принадлежат к IV типу

по классификации А.С. Тихоненко (1968). Исследованные штаммы существенно различались по толщине клеточной стенки (от 30 до 70 нм); при этом индуцибельные штаммы обладали значительно менее толстой клеточной стенкой. Из результатов этих исследований можно сделать вывод, что лизогенные производственные штаммы L. acidophilus представляют реальную опасность для индигенных лактобацилл этого вида, чувствительных к высвобождаемому фагу. Не исключена также возможность появления у этих умеренных бактериофагов вирулентных мутантов.

Местообитание. Естественным местообитанием ацидофильной палочки является пищеварительный и урогенитальный тракты млекопитающих, включая человека, и птиц (Квасников, Нестеренко, 1975, Hansen, Mocquot, 1970; Buchanan, Gibbons, 1974; Starr et al., 1981).

Имеющиеся в литературе данные по животным - как месту обитания L. acidophilus, многочисленны, но довольно фрагментарны. У всех исследованных млекопитающих в ЖКТ обнаружена разнообразная лактофлора, представленная и кокковидными, и палочковидными формами; L. acidophilus выявлен в рубце и сычуге молодняка и (реже) взрослых жвачных животных (крупный рогатый скот, козы, овцы), в ЖКТ поросят, жеребят, крыс и мышей (Квасников, Нестеренко, 1975; Savage, 1977; Тимошко, 1990). Показано, что в эпителиальных тканях подвздошной, слепой и ободочной кишок собак локализовано большое разнообразие лактобацилл, среди которых преобладает L. acidophilus (Mitsuoka et al., 1976; Davis et al., 1977). Этот же вид, а также L. salivarius, доминируют среди лактобацилл ЖКТ крыс (Raibaud et al., 1973). Лактобациллы густо колонизируют поверхность эпителия зоба цыплят, утят и индюшат (Квасников, Нестеренко, 1975; Savage, 1977). В ряде исследований выявлена штаммовая специфичность колонизации лактобациллами ЖКТ хозяина, заключавшаяся в том, что адгезию к кишечному эпителию проявляют только штаммы, выделенные от этого же вида животных (Fuller, 1973; Kawai, Shegara, 1977). Не обнаружено лактобацилл в ЖКТ таких пойкилотермных животных, как

лягушки и черепахи (Starr et al., 1981), а в кишечнике рыб и насекомых лактобациллы хотя и обнаружили, среди них не было представителей вида L. acidophilus (Квасников, Нестеренко, 1975).

L. acidophilus редко обнаруживается в сыром молоке, но может содержаться в некоторых ферментированных молочных продуктах, изготовленных с применением заквасок из специально подобранных штаммов этих бактерий (Богданов, 1957).

В ротовой полости человека доминируют грамотрицательные анаэробы и стрептококки, а на долю лактобацилл приходится только около 1 % всей микрофлоры здорового рта. При этом популяция лактобацилл представлена, главным образом, видами L. casei, L. casei subsp. rhamnosus и L. fermentum, тогда как L. acidophilus обнаруживается приблизительно лишь в пятой части исследуемых проб (Buchanan, Gibbons, 1974; Starr et al., 1981). Лактобациллы локализуются внутри матрикса зубного налета, образуемого оральными стрептококками {Streptococcus mutans и др.). Кариесное поражение зубов существенно увеличивает численность лактобацилл, в том числе L. acidophilus, однако считается, что это не причина, а следствие кариеса, так как в кариесных полостях создаются условия, благоприятные для их размножения (Бостанджян, 2005).

Микрофлора желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) меняется качественно и количественно в зависимости от возраста и диеты хозяина, а также от участка ЖКТ. Вскоре после рождения ЖКТ ребенка быстро заселяется коли-формами, клостридиями и другими анаэробными видами, за которыми следуют лактобациллы. Последние, благодаря специфическим условиям среды обитания (кислота, образующаяся в желудке, и защитные факторы материнского молока) быстро занимают доминирующее положение. Они доминируют в желудке, двенадцатиперстной кишке и в тонком кишечнике, достигая численности 104-108 КОЕ в 1 г содержимого кишечника с максимумом в нижней части тонкой кишки (Нетребенко, 2001). Эта популяция лактобацилл состоит, главным образом, из L. acidophilus, L. fermentum и L. salivarius с

примесью некоторых анаэробных видов (Reuter, 1978). Хотя желудок является неблагоприятной средой обитания даже для таких кислотоустойчивых бактерий, как лактобациллы, Bernhardt Н. (1989) выделил из желудочного сока большое разнообразие штаммов, в основном L. acidophilus и L. fermentum. При этом в желудочном соке с рН ниже 3,0 выявлялись только штаммы L. acidophilus. В тощей кишке и, особенно, толстом кишечнике, где сосредоточена основная масса кишечных микробов и царствуют бифидобактерии и бактероиды, на долю лактобацилл приходится лишь 0,07-1 % всей флоры (Drasar, Hill , 1974). Лактобациллы (в основном L. acidophilus, L. fermentum и L. salivarius) могут достигать здесь очень высокой численности - до 109 КОЕ/г (Reuter, 1997).

Влагалище здоровых взрослых женщин содержит высокие уровни бифидобактерий и лактобацилл, которые защищают его от инвазии Trichomonas vaginalis, Candida и других патогенов. Общая численность лактобацилл обычно превышает 105 КОЕ в 1 мл секрета влагалища (Levison et al., 1977). Среди них обнаружено более десятка разных видов, представляющих все три группы рода Lactobacillus, при явном доминировании L. acidophilus - от 44 до 67 % от общего числа изолятов (Starr et al., 1981). Источником энергии для них служит гликоген, выделяемый эпителиальными клетками. Поскольку лишь немногие штаммы ацидофильной палочки (включая вагинальные изоляты) способны ферментировать этот полисахарид в чистых культурах, полагают, что они пользуются продуктами гидролиза гликогена, образующихся под действием гликогеназы тканей хозяина или, возможно, ферментов других микроорганизмов (Starr et al, 1981).

Растения не являются природным резервуаром для лактобацилл. На интактных растениях молочнокислые бактерии присутствуют сравнительно редко, причем доля лактобацилл не превышает 10 % от всей лактофлоры; сами лактобациллы в основном представлены стрептобактериями и бетабактериями, a L. acidophilus практически не встречается (Sui et al., 2004).

При квашении овощей и силосовании трав, основанных, как известно, на процессе молочнокислого брожения, численность лактобацилл резко возрастает, однако и в этом случае присутствие L. acidophilus рассматривается как нетипичное и, по-видимому, указывающее на фекальное загрязнение растительной массы (Mundt, Hammer, 1968). В то же время установлено, что некоторые растительные экстракты и отвары (капустный, морковный, томатный соки, соевое молоко) могут служить хорошей питательной средой для чистых культур L. acidophilus (Wang, Kradej, 1974).

1.2. Антагонистическая активность

Многие штаммы L. acidophilus обладают антагонистической активностью по отношению к патогенным, условно-патогенным и технически-вредным микробам (Sui et al., 2004), которая проявляется не только в опытах in vitro, но и непосредственно в естественных системах L. acidophilus/организм хозяина. Штаммы, обладающие антагонистической активностью, различаются по силе и характеру воздействия на ингибируе-мый микроб, а также по ширине и специфичности спектра ингибируемых микробов.

Результат антагонистического воздействия может проявляться в виде замедления или остановки роста тест-микроба, гибели и даже лизисе его клеток. Спектр ингибирования может включать чувствительные штаммы этого же вида (L. acidophilus), других видов лактобацилл или других родов молочнокислых бактерий, или же микроорганизмов совершенно иного систематического положения, может быть широким или узким (табл. 1). Кроме того, сам антагонист не застрахован от антагонистического действия другого микроорганизма, например, лактобацилл, патогенных и условно-патогенных бактерий (Глушанова и др., 2004; Глушанова, Шендеров, 2005; Gilliland, Speck, 1977; Schfoppa et al., 1981) или пропионовокислых бактерий (Карасевич и др., 1979).

Спектры антагонистического действия штаммов L. acidophilus

Штаммы L. acidophilus Ингибируемые микроорганизмы Ссылка

В-2505 (БАД «Биобактон») широкий спектр патогенных и условно-патогенных микроорганизмов Бельмасова, Храмцов, 2009

11 1 из 2 тест-штаммов Е. coli и 1 из 3 тест-штаммов сальмонелл. Гаврилова Н.Н. и др., 2005

317/402 (промышленный штамм «Ларине») 109 из 166 клинических штаммов патогенных и условно-патогенных микоорганизмов. Глушанова и др., 2004

K3III24, Ml00, NK I, 317/402 (промышленные штаммы) более 60 % индигенных штаммов лактоба-цилл (458 кишечных и вагинальных изолятов человеческого происхождения + 98 изолятов из фекалий белых крыс и мышей Глушанова, тендеров, 2005

495 (ВПКМ В-6535) (Энтероцид П) S.aureus, M.luteus, B.subtilis, E.coli, S. typhi-murium, S.abortus-bovis, S.dublin, S. gallinarum, E.faecalis, S.sanguis, P.aeruginosa Карпушина и др., 1997

В-2991 (ВКПМ) Bee 4 тест-культуры (S. typhimurium, P. vulgaris, E. coli и S. aureus) Машенцева и др., 2006

В-3324, В-6535 (ВКПМ) 3 из 4 тест-культур (S. typhimurium, P. vulgaris, E. coli и S. aureus). Машенцева Н.Г. и др., 2006

5 изолятов из фецес поросят 4 тест-культуры (E.coli, P. vulgaris, S. chole-rae suis и В. subtilis) Степанов К.М., 2009

Не указан (промышленный штамм) E. coli K-12 и S. aureus 209P Цинберг М.Б. и др., 2004

33 (изолят из ЖКТ здорового ребенка) 7 эталонных штаммов энтеробактерий и 5 штаммов других патогенных и условно-патогенных бактерий (включая L. monocytogenes) Червинец Ю.В. и др., 2006

N2 (продуцент лак-тоцина В) Только на лактобациллы (L. leichmanii, L. bulgaricus, L. helveticus и L. lactis). Barefoot S.F. et al., 1984

88 (11088) (продуцент лактоци-на F) L. acidophilus 6032, L. lactis 970, L. helveticus, L. bulgaricus 1489, L. leichmanii 4797, L. fermentum 1750 и S.faecalis 19433 Barefoot S.F. et al., 1983; Muriana P.M. et al., 1987

R плесени Batish V.K. et al., 1990

LF221 L. helveticus ATCC 15009 Bogovic-Matijasic В., Rogelj I., 1998

Изолят из ЖКТ человека Salmonella enterica Serovar Typhimurium Coconnier-Polter M.-H. et al., 2005

LA15 B. subtilis ATCC 6633 Fernandes C.F. et al., 1988

NCFM L. acidophilus NCFM Ferreira C.L., Gil-liland S.E., 1988

7Tai и CHL Candida albicans Jack M. et al., 1990

Не указан патогенный штамм E. coli Watkins B.A., Miller B.F., 1983

Все это разнообразие проявлений антагонизма отражает сложный характер взаимоотношений между антагонистом и ингибируемым микроорганизмом в зависимости от физиологического состояния каждого из этих партнеров при данных совокупных условиях внешней среды.

Таким образом, антагонистическая активность штаммов L. acidophilus является их индивидуальным физиологическим свойством, а степень его выраженности зависит от условий культивирования (состав среды, время культивирования, индивидуальные свойства тест-штамма и т.д.) (Глушанова, Шендеров, 2005).

В основе антагонистического действия L. acidophilus лежат неспецифические и специфические механизмы. Общим свойством молочнокислых бактерий является продуцирование молочной кислоты (которая сама по себе проявляет определенный бактерицидный эффект) и связанное с этим снижение рН среды до значений, несовместимых с жизнедеятельностью многих групп микроорганизмов (например, споровых аэробов). Кроме того, в кислых условиях может усиливаться действие специфических факторов антагонизма (Подкопаев, 1983).

Некоторые штаммы L. acidophilus способны с помощью своих перокси-даз активировать кислород с образованием перекиси водорода и ряда пере-кисных соединений (тиоционат, гипотиоционат), обладающих сильным бактерицидным действием на многие микроорганизмы, включая эукариоты. Особенно чувствительны к действию перекисей стафилококки и псевдомонады. Показано, что именно такой механизм задействован в ингибировании штаммами L. acidophilus 7Tai и CHL роста дрожжей С. albicans (Jack et al., 1990). Хотя многие ингибируемые бактерии (энтеробактерии, споровые аэробы, псевдомонады и др.) относятся к каталазоположительным видам, то есть, имеют эффективное средство защиты от перекисей, они, тем не менее, оказываются беззащитными от действия L. acidophilus, так как последняя подавляет у них синтез каталазы (Черкасов, 2006).

Известно, что у L. acidophilus, как и у других гомоферментативных видов лактобацилл, пируват, образовавшийся в результате гликолиза гексоз, далее под действием лактатдегидрогеназ превращается в молочную кислоту. Однако при определенных условиях культивирования штаммы L. acidophilus могут образовывать из пирувата также ацетоин и диацетил (Benito de Cardenas, Oliver, 1990). Эти ароматические соединения обладают ингибирующим действием на некоторые патогенные микробы (например, возбудителя туберкулеза) и усиливают бактерицидное действие других продуктов метаболизма. В сочетании с низким значением рН они снижают скорость роста колиформ и некоторых других кишечных бактерий (Степаненко, 1999).

Особый интерес вызывает продуцирование некоторыми штаммами L. acidophilus специфических антибиотических веществ, называемых бактерио-цинами. Бактериоцины - вещества белковой природы (полипептиды), обычно с узким спектром бактерицидного действия. При обработке протеазами они утрачивают активность, что позволяет легко отличать их от других бактерицидных веществ. Различают несколько групп бактериоцинов, образуемых молочнокислыми бактериями (Машенцева и др., 2006; Коробов, 2011):

- лантибиотики, модифицированные бактериоцины, биосинтез которых кодируется особыми плазмидами и происходит в большинстве случаев на рибосомах (I);

- термостабильные пептиды, подвергшиеся минимальной модификации, синтезируемые на рибосомах (II);

- термолабильные пептиды большого размера (III);

- сложные бактериоцины, содержащие липидные или белковые компоненты (IV).

Большинство бактериоцинов - это мелкие термостабильные пептиды, относящиеся к группе II. Они имеют сходный размер (молекулярная масса около 6 кДа) и проявляют одинаковый тип ингибиторной активности (бактерицидное, но не бактериолитическое действие). В таблице 2 приведены примеры бактериоцинов, продуцируемых различными штаммами L. acidophilus.

Бактериоцины, образуемые штаммами L. acidophilus

Обозначение Штамм-продуцент Характеристика Авторы

1 2 3 4

Ацидофилин не указан Проходит через мембранный фильтр, термостабилен, максимальная активность при pH 5,0-5,6, угнетает развитие гнилостных бактерий, стрептококков, стафилококков, возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В, дизентерии, туберкулеза и дифтерии Vincent, Veomett R.C. et al.; Квасников, Несте-ренко О.А., 1975

Лактоци- дин не указан Проявляет активность в отношении патогенных и сапрофитных видов, кислотоустойчивых бактерий и плесневых грибов Vincent et al., 1959; Квасников, Нестеренко, 1975

Лактоцин В N2 Мол. масса 6-6,5 кДа, синтез кодируется хромосомными генами, активен в отношении близкородственных лактобацилл Barefoot, Klaen-hammer T.R. , 1984

Лактоцин F 88 (11088) Пептид, состоящий из 75 аминокислотных остатков; термостабилен; максимальное образование при pH 7,0; активен в отношении близкородственных лактобацилл и S. faecalis Barefoot, Klaen-hammer, 1983; Muriana, Klaen-hammer, 1991

Необозна- ченный комплекс LF221 Образуется во время логарифмической фазы роста, максимальное образование при pH 6,5; бактерицидное (но не бактериолитическое) действие на растущие клетки L. helveticus АТС С 15009 Bogovic-Matijasic, Rogelj, 1998

Ацидоцин В М46 В нативном состоянии комплекс мол. массой 100 кДа, распадается на пептиды мол. массой 2-4 кДа; термостабилен, чувствителен к трипсину; активен против Clostridium sporogenes и узкого спектра близкородственных лактобацилл Minekus et al., 1994

Ацидоцин J1229 JCM 1229 Мол. масса 6301 Да. Максимальное образование при pH 5,0. Узкий спектр ингибирования. Нарушает проницаемость клеточной мембраны у чувствительных клеток Tahara, Kanatani, 1996

Ацидофилин 801 IBB 801 Молекулярная масса менее 6,5 кДа. Не чувствителен к каталазе, чувствителен к протеоли-тическим ферментам. Термостабилен. Активен против патогенов Е. coli Row и Salmonella panama 1467 и узкого спектра близкородственных лактобацилл. Бактерицидное (не бактериолитическое) действие. Zamfir et al., 1999

Продолжение таблицы 2

1 2 3 4

Ацидоцин СН5 СН5 В нативном состоянии олигомер, способный диссоциировать на мономеры (мол. масса более 5 кДа) с более высокой активностью. Не чувствителен к каталазе, чувствителен к про-теолитическим и гликолитическим ферментам. Термостабилен. Активен в отношении Bacillus sp., Micrococcus sp., Arthrobacter sp., Brevibac-terium sp., Corynebacterium sp. и некоторых лактобацилл. Бактерицидное (не бактериоли-тическое) действие Chumchalova et al., 2004

Исследовательская группа Т. Tahara (Tahara et al., 1992; Tahara, Kanatani, 1996) определила аминокислотную последовательность N-терминального участка у ряда бактериоцинов, продуцируемых разными штаммами L. acidophilus, и установила, что у многих из них она почти или даже полностью идентична.

Такую же аминокислотную последовательность N-терминального участка обнаружили чешские исследователи у ацидоцина СН5, бактериоцина, продуцируемого штаммом L. acidophilus СН5 (Chumchalova et al., 2004). Тот факт, что многие бактериоцины из разных штаммов L. acidophilus являются одним и тем же соединением или вариантом этого соединения, может, по мнению чешских исследователей, указывать на то, что их продуценты являются дубликатами одного штамма. Вероятнее, однако, что между разными штаммами бактерий (не обязательно принадлежащих к L. acidophilus или к лактобациллам) происходит обмен генами, кодирующими синтез этих бактериоцинов. Более удивительно другое: при почти полном сходстве структур, эти бактериоцины обладают совершенно разными спектрами ингибирования, например ацидоцины J1229 и СН5. По-видимому, процесс взаимодействия антагонист/ингибируемый микроорганизм настолько неустойчив, что даже незначительные изменения в структуре бактериоцина способны изменить равновесие в пользу одного из партнеров.

Важнейшей задачей является выяснение деталей механизмов действия бактериоцинов, вызывающих гибель чувствительных микроорганизмов. По-

казано, например, что они могут встраиваться в клеточную мембрану, приводя к нарушению ее проницаемости и протонного потенциала, блокировать репликацию ДНК и белковый синтез, мешать делению клеток, то есть, вызывать изменения, которые несовместимы с жизнедеятельностью клетки «противника» (Tahara, Kanatani, 1996; Papagianni, 2003; Coconnier-Polter et al., 2005).

Некоторые исследователи возлагают на бактериоцины большие надежды, как на новое поколение антибиотиков и пищевых консервантов. Полная расшифровка их структуры, их генетических детерминантов и тонких механизмов ингибирования позволит осознанно конструировать новые соединения с высокой антагонистичесой активностью по отношению к конкретным видам нежелательных микроорганизмов (Chumchalova et al., 2004).

В ряде работ, вещества, ответственные за ингибиторное действие L. acidophilus, остались не идентифицированными. Так, зарубежная группа исследователей (Medellin-Pena, Griffiths, 2009) установили, что культуральная жидкость промышленного штамма L. acidophilus La-5 (активный антагонист патогенного штамма Е. coli 0157:Н7) содержит соединения, мешающие транскрипции генов кишечной палочки, ответственных за ее колонизацию. Кроме того, эти соединения препятствуют концентрации F-актина в местах контакта Е. coli с эпителиальной клеткой и, таким образом, адгезии патогена к кишечному эпителию.

Таким образом, ингибирование антагонистом чувствительной культуры не означает пассивного поведения жертвы, ее гибель - это лишь конечный результат их взаимодействия. Электронно-микроскопическое исследование совместных двуштаммовых культур, находящихся в односторонних антагонистических взаимоотношениях, в которых в качестве антагониста выступал штамм L. acidophilus Д75, выявило у обоих партнеров изменения на популя-ционном и клеточном уровнях, отсутствовавшие в чистых культурах антагониста и чувствительного штамма (Рыбальченко, 2006).

1.3. Пробиотические свойства

Многие штаммы L. acidophilus входят в группу классических пробиотиков - микроорганизмов кишечного происхождения, регулярный прием которых в определенных («терапевтических») дозах оказывает достоверное благотворное действие на жизнедеятельность отдельных тканей, органов и общее здоровье организма потребителя (Каган, 2007).

Рассмотренная нами ранее антагонистическая активность L. acidophilus -важный, но далеко не единственный, компонент пробиотических свойств этой бактерии. Было показано, что даже в простейших лабораторных двухштаммовых системах антагонист/чувствительная культура ингибирование представляет сложный процесс взаимодействия партнеров. В условиях in vivo этот процесс еще более усложняется за счет дополнительного взаимного влияния других членов микробиоты ЖКТ и организма хозяина.

Для выполнения своих полезных функций пробиотический штамм L. acidophilus, демонстрирующий высокую антагонистическую активность по отношению к патогенным и условно патогенным микробам в опытах in vitro, при введении в организм хозяина должен успешно выдержать давление со стороны индигенной микрофлоры и специфических условий среды кишечника (присутствие пищеварительных ферментов, желчных солей, защитных факторов иммунной системы хозяина и т.п.).

Антагонистические взаимоотношения с патогенными и условно-патогенными микроорганизмами. Формирование нормальной кишечной микрофлоры начинается с момента рождения ребенка; этот процесс зависит от ряда факторов, таких как состав микрофлоры родовых путей и ЖКТ матери (и, как предполагают, толерантность к этой микрофлоре, переданная ребенку еще во время его внутриутробного развития), диета (естественное или искусственное вскармливание), врожденная патология, инфекционные забо-

левания и связанный с ними прием медикаментов (особенно антибиотиков) и другие. Нередко влияние этих факторов приводит к появлению в кишечной микробиоте условно-патогенных или даже патогенных микробов, к которым организм хозяина привыкает и не изгоняет с помощью своей иммунной системы (Ганина, 1987; Мирошник, 1997; Соколова, Соловьева, 1999). В отношении патогенных микробов это явление носит название «бациллоносительство». Вред этих микробов для здоровья организма хозяина и риск для здоровья окружающих очевиден, а борьба с ними проблематична.

Например, при санации ацидофильным молоком детей ясельного возраста L. acidophilus лучше всего приживалась в ЖКТ здоровых детей, значительно хуже - у детей с длительно неустойчивым стулом и совсем не приживалась у детей, являющихся дизентерийными бациллоносителями (Квасников, Нестеренко, 1975). Для нормализации состава микробиоты ЖКТ с помощью пробиотикотерапии огромное значение имеет степень выраженности антагонистической активности у используемого штамма-пробиотика и специфичность его ингибиторного спектра, а также величина дозы и продолжительность курса его приема.

Антагонистические взаимоотношения с индигенными лактобациллами. Установлено, что чаще всего вводимый в организм хозяина пробиотический штамм L. acidophilus вступает в антагонистические отношения не только с нежелательными микробами кишечного микробного сообщества, но и с его полезными представителями. Так, в опытах Н.А. Глушановой и др. (2004) популярный промышленный штамм L. acidophilus 317/402 («Нарине») оказался биосовместимым с индигенными лактобациллами лишь менее, чем в 10 % случаев, тогда как в 60-65 % случаев он ингибировал индигенные лактобациллы, а в 24-36 % случаев, наоборот, индигенные лактобациллы проявляли антагонизм к этому пробиотику. Аналогичный результат получен и при использовании промышленного штамма L. acidophilus КЗШ24 (Глушанова, Шендеров, 2005). Таким образом, антагонистические взаимоотношения с индигенными лактобациллами могут быть одной из

причин, почему экзогенный пробиотический штамм ацидофильной палочки зачастую быстро вытесняется из кишечника человека вскоре после окончания курса пробиотикотерапии. Для сохранения в ЖКТ высокой популяции пробиотического штамма предлагается его постоянный прием пациентом (Sui et al., 2004; Рыбальченко и др., 2006). Альтернативой может быть нормализация кишечной микрофлоры за счет восстановления индигенных лактобацилл с помощью приема специальных стимуляторов роста (пребиотиков) или же селекции пробиотического штамма среди индигенных лактобацилл, выделенных от данного пациента.

Колонизационная способность. Попавший в ЖКТ экзогенный пробиотический штамм L. acidophilus может прикрепляться (адгезировать) к эпителиальным клеткам кишечника (то есть, колонизировать кишечник) или же располагаться только в просвете кишки. В обоих случаях он может оказывать благотворный эффект на здоровье хозяина, однако лишь в случае колонизации кишечника можно рассчитывать на сохранение этого эффекта и после окончания курса приема пробиотика. Способность пробиотических штаммов L. acidophilus прикрепляться к кишечному эпителию зависит от их способности синтезировать специальные вещества - адгезины. Это могут быть лектины или лектиноподобные соединения, плотно связанные с бактериальной клеткой, или белково-липотейхоевые комплексы, отделяющиеся («слущивающиеся») от бактериальной клеточной стенки в окружающую среду и защищающие эпителиальные клетки от фиксации на них патогенных и условно-патогенных микробов (Анохина и др., 2006).

Опубликовано множество работ отечественных и зарубежных авторов, посвященных тем или иным аспектам адгезии различных представителей кишечной микрофлоры, включая лактобациллы вида L. acidophilus. В качестве примера укажем на публикацию группы французских исследователей (Coconnier et al., 1992). Эти исследователи наблюдали с помощью сканирующей электронной микроскопии четкую связь клеток штамма L. acidophilus BG2F04 (выделен из кишечника человека) как с

микроворсинками на поверхности монослоя культуры эпителиальных клеток кишечника человека, так и со слоем слизи, образуемой этой культурой. В адгезии принимали участие углеводы поверхности бактериальной стенки и фактор, присутствовавший в бесклеточной культуральной жидкости штамма BG2F04. О белковой природе этого фактора говорило то обстоятельство, что обработка трипсином резко снижала адгезионную способность L. acidophilus.

В настоящее время установлено, что адгезионная способность L. acidophilus носит выраженный штаммовый характер, а при высокой адгезивности штамма зависит от его биосовместимости с организмом хозяина. В исследовании К.М. Степанова (2009) адгезивные свойства штаммов L. acidophilus, выделенных от поросят, усиливались с повышением кислотности среды. Эти факты следует учитывать как при селекции пробиотических штаммов L. acidophilus, так и при индивидуальном назначении пробиотика для конкретного пациента (Оришак и др., 2010).

Устойчивость к желчи. Микроэкология кишечника характеризуется присутствием желчи, продуцируемой клетками печени. Помимо своих основных функций, связанных с пищеварением, желчь (точнее, содержащиеся в ней желчные кислоты) предупреждает адгезию экзогенных микробов к кишечному эпителию. Штаммы L. acidophilus, приспособившиеся к данной экологической нише, проявляют довольно высокую устойчивость к желчи; например, в отличие от штаммов болгарской палочки, неспособной колонизировать кишечник, они выдерживают присутствие в питательной среде солей желчи в концентрации 20 % (Королева, 1975). Тем не менее, штаммы L. acidophilus, очевидно, существенно различаются по устойчивости к этому фактору. Так, в опытах (Fernandes et al., 1988), моделирующих условия ЖКТ человека, было выявлено, что добавление в среды желчных солей снижает рост и антагонистическую активность по отношению к тест-культуре (В. subtilis АТСС 6633) у 5 из 10 исследованных коллекционных штаммов L. acidophilus, причем гликохолат натрия оказывал более сильный эффект, чем таурохолат натрия. В свою очередь, другие исследователи (Gil-

liland et al., 1983) показали, что 5-суточиый курс скармливания новорожденным телятам штамма L. acidophilus с высокой желчеустойчивостью привел к более высокой популяции этой бактерии в ЖКТ подопытных животных, по сравнению с аналогичным курсом приема штамма L. acidophilus с низкой желчеустойчивостью. Хотя и не обнаружено прямой связи между желчеустойчивостью и способностью штаммов L. acidophilus ассимилировать холестерин, некоторые исследователи (Gilliland, Walker, 1990) полагают, что штаммы, обладающие (помимо способности ассимилировать холестерин и продуцировать бактериоцины) высокой устойчивостью к желчи, будут иметь преимущество при диетотерапии с целью снижения содержания холестерина в организме человека.

Конфигурация молочной кислоты. При ферментации глюкозы различные виды лактобацилл образуют молочную кислоту в виде D (-) или L (+) изомеров (соответственно право- и левовращающий оптические изомеры) или их смеси (рацемата). Так, штаммы L. casei образуют L(+) лактат, штаммы L. bul-garicus - D (-) лактат, а штаммы L. acidophilus - DL-лактат (Buchanan et al., 1974; Квасников, Нестеренко, 1975). В организме человека L (+) лактат обладает высокой биологической активностью, включаясь через пировиноград-ную кислоту в цикл трикарбоновых кислот или используясь в синтезе гликогена. Напротив, D (-) изомер очень медленно распадается в организме, а у новорожденных он вообще не утилизируется. Таким образом, конфигурация образующейся молочной кислоты должна учитываться при подборе лактобацилл в состав пробиотических продуктов, особенно, продуктов для детского питания. В этой связи важно отметить, что в литературе описаны штаммы L. acidophilus, продуцирующие только биологически ценную L (+) форму молочной кислоты (Горбатова, 2004).

Устойчивость к антибиотикам. Следствием широкого и зачастую бесконтрольного применения антибиотиков явилось то, что в настоящее время многие представители микробиоты ЖКТ приобрели устойчивость к различным антибиотикам и достаточно легко обмениваются генами,

кодирующими эту устойчивость. Для прогнозирования поведения промышленных штаммов L. acidophilus в присутствии антибиотиков (например, в молоке во время выработки ацидофильных кисломолочных продуктов или в процессе пробиотикотерапии на фоне приема антибиотиков) принято определять спектр их антибиотикоустойчивости. Как и вышеперечисленные свойства, антибиотикоустойчивость L. acidophilus носит ярко выраженный штаммовый характер. В работе индийских ученых 7 исследованных штаммов ацидофильной палочки проявили устойчивость только к 2 из 19 использованных антибиотиков, устойчивость еще к 11 из этих антибиотиков варьировала в зависимости от штамма (Gupta, 1995). В свою очередь спектр устойчивости штамма L, acidophilus В-2505, используемого в БАД «Биобактон», включает не менее 24 наименований различных антибиотиков и сульфаниламидных препаратов (Бельмасова, Храмцов, 2009). Гены, кодирующие устойчивость к антибиотикам, могут располагаться на хромосоме или же иметь плазмидную локализацию. Во избежание их переноса в патогенные или условно-патогенные бактерии предлагается (Шевелева, 2004) в качестве пробиотиков использовать лишь штаммы с хромосомным типом антибиотикоустойчивости. В этой связи заметим, что хромосомные гены также способны к генному переносу (путем иммобилизации трансмиссибельными плазмидами), хотя и с гораздо меньшей частотой, чем плазмидные гены (Брода, 1982).

Влияние на здоровье организма хозяина. Благотворное влияние пробиотических штаммов L. acidophilus на организм хозяина разнообразно (Литяева, 1992; Глушанова, 2003). Помимо своей главной функции поддержания или восстановления нормального состава кишечной микробиоты и, следовательно, нормального состояния защитного барьера слизистой оболочки ЖКТ макроорганизма, ацидофильная палочка (совместно с бифидобактериями и некоторыми другими видами лактобацилл) стимулирует механизмы общего и местного иммунитета, подавляет рост и активность многих патогенных бактерий, профилактирует и способствует

лечению диареи различной этиологии, инфекционных и аллергических заболеваний, инактивирует различные токсические, мутагенные и канцерогенные соединения эндо- и экзогенного происхождения, снижает содержание холестерина в крови и печени, повышает сохранность поголовья и продуктивность сельскохозяйственных животных (табл. 3).

Таблица 3

Пробиотические эффекты L. acidophilus (в виде чистых культур и

смесей с другими микроорганизмами) на организм человека и животных

Штамм Эффект Авторы

1 2 3

97 + 630; 317/402; BL2027; La5; Np51; и др. Нормализация кишечной микробиоты за счет исключения патогенных и снижения численности условно-патогенных видов в результате бактериостатического, бактерицидного или бактериолитического действия, подавления их колонизационной способности в ЖКТ человека и животных Watkins, Miller, 1983; Сте-паненко,1999; тендеров,2001; Рыбальченко и др., 2006; Peterson et al., 2007

LAFTIL10; HN017 и др. Повышение или модуляция общего иммунитета, иммунитета ЖКТ человека и животных (повышение содержания лизоцима в крови, бактерицидной активности сыворотки крови, фагоциатарной активности, стимуляция выработки иммуноглобулинов и др.) Lin et al., 2007; Paturi Gu-naranjan et al., 2007

LB; LA-1; R0052 Подавление Helicobacter pylori (вызывает у человека язву желудка) в опытах in vitro и in vivo Coconnier et al., 1998; Mi-chetti et al., 1999; Gotteland M. et al., 2008

NCFM Улучшение гомеостаза глюкозы, повышение чувствительности к инсулину у больных диабетом второго типа Andreasen et al., 1987

A4; FERM-P-14204; FERM-Р-14205; СНО 220 Снижение уровня общего холестерина и холестерина низкой плотности в крови и печени Benbadis L. et al.,1995; Lee étal, 2010; Ooietal., 2010; Patent US N 5516684

NK1; NK2; NK5; NK12 и Др. Профилактика и лечение «диареи путешественников», острой диареи младенцев, диареи, вызванной антибиотикотерапией, диареи, вызванной ротавирусами Hove, Norgaard, 1999; Van Niel et al., 2002; Усенко, 2006; Шустер и др., 2009

Не указан Профилактика онкозаболеваний толстой кишки за счет снижения активности в ЖКТ ферментов, способствующих переходу прокарциногенов в карциногены Хамагаева и др., 1989; Во-govic-Matijasic, Rogelj, 1998

Продолжение таблицы 3

1 2 3

NCF ТМ Снижение у человека и крыс уровеня ферментов, связанных с превращением про-карциногенов в карциногены Семенихина, Рожкова, 2002

Излечивание крыс от экспериментально привитой опухоли саркома 80 путем внутривенных инъекций клеточных экстрактов ацидофильной палочки Bol, 1984

LA-1 (L.johnsonii) Снижение реакции на лактозу у младенцев с непереносимостью лактозы Child, Brees, 2006

NCIB 1748 Предотвращение ожирения, повышение ощущения сытости, улучшение энергетического обмена Ohlson et al., 2007

Не указан Профилактика и лечение некротического энтероколита у недоношенных младенцев Hoyos, 1999; Lin et al., 2005

то же Профилактика и лечение аллергических заболеваний (атопический дерматит, аллергический ринит) Rosenfeldt, Benfeldt et al., 2003

то же Обезвреживание токсинов и мутагенов эк-зо- и эндогенного происхождения Степаненко, 1999

YIT 2001 Лечение гепатитов, улучшение работы печени Cl.GB №2338244, 2009

К1;5е; 20т; 22/2п; 97 + 630; 317/402; и др. Улучшение развития и повышение продуктивности сельскохозяйственных животных (сокращение падежа, повышение ежесуточных привесов и среднесдаточного веса, яйценоскости птицы, сокращение расхода кормов, сокращение расходов на медикаменты и т.п.) Васин А.Д. и др., 1982; Семенищев, 1983; Каган др., 1996; Кузнецова, Про-сакова, 2007

Многие из заявленных эффектов уже общепризнанны, некоторые пока еще нуждаются в подтверждении. В ряде случаев положительные результаты, полученные одними авторами, не подтверждаются или даже опровергаются другими (Hove et al., 1999), что вполне объяснимо, поскольку на взаимодействие пробиотика с организмом хозяина влияет так много факторов, что невозможно создать совершенно идентичные условия проведения подобных экспериментов или клинических испытаний в разных исследовательских группах. Так, из 3 пробиотических штаммов L. acidophilus (Lai, La2 и NCFM) лишь один штамм (Lai) снижал симптомы непереносимости лактозы и детей, страдающих этой патологией, причем положительный эффект наблюдался только при использовании высокой дозы пробиотика ( Child, 2006). Даже при использовании одного и того же штамма

30

пробиотика результат может оказаться отрицательным из-за неспособности данного штамма колонизировать эпителиальные клетки данного пациента (Бойцов и др., 2004).

Способность L. acidophilus продуцировать гликолитические, протеолитические и липолитические ферменты и расщеплять конъюгаты желчных кислот указывают на определенную долю участия ацидофильной палочки в пищеварительном процессе (гидролизе компонентов пищи, способствованию всасыванию продуктов гидролиза в кровь, стимуляции перистальтики кишечника). В спектр благотворного действия кишечной микрофлоры на организм хозяина входит также синтез и поставка ряда незаменимых витаминов. Этим свойством обладает и ацидофильная палочка. Показано, что все 4 штамма L. acidophilus, входящие в состав отечественного пробиотического препарата Аципол, продуцируют витамины РР, В5 (пантотенат кальция и D-пантенол) иВ, 2 (Шустер и др., 2009).

Однако не менее важное значение придается ацидофильной палочке в поддержании здоровья урогенитальной системы организма хозяина и, особенно, репродуктивного тракта женщин. В отличие от ЖКТ, в котором этот вид вместе с другими индигенными лактобациллами составляет лишь минорный компонент микробиоты, L. acidophilus является доминирующим видом вагинальной микрофлоры (Giorgi, Torriani et al., 1987) и играет главную роль в поддержании нормального состава и функционирования этой микрофлоры, защищающей влагалище от микробных инфекций (Муравьева, 1997; Коршунов и др., 1999).

1.4. Практическое применение

Селектированные штаммы L. acidophilus используют для производства ацидофильных молочных продуктов, фармацевтических и ветеринарных препаратов, пищевых и кормовых добавок лечебно-профилактического назначения. Во всех этих случаях эксплуатируются пробиотические свойства

этой лактобациллы и в первую очередь ее антагонистическая активность по отношению к патогенной, условно-патогенной и гнилостной микрофлоре.

Кисломолочные напитки диетического и лечебно-профилактического назначения. Промышленное производство ацидофильных молочных продуктов, ориентированное на диетическое и лечебно-профилактическое питание населения, началось с 30-х гг. прошлого века, пик их популярности пришелся на 70-80-е гг. (Королева, 1975). В то время ассортимент молочных магазинов включал «Ацидофильное молоко», «Ацидофилин», «Ацидофильную простоквашу» и другие ацидофильные продукты.

Известно более 20 наименований отечественных и зарубежных продуктов этой группы, которые, судя по видовому составу микрофлоры, в большинстве своем являются аналогами. Напитки содержат L. acidophilus в виде монокультуры или в смеси с другими заквасочными микроорганизмами обычного или пробиотического назначения (лактококки, термофильный стрептококк, бифидобактерии, пропионовокислые бактерии, дрожжи, микрофлора кефирной закваски). Примером современного многовидового про-биотика может служить «Биоматрикс (BioMatrix)» российской компании «Биопродукт», в микробный комплекс которого, помимо бифидобактерий, входят 4 вида лактобацилл (L. acidophilus, L. casei, L. fermentum и L. planta-rum (BioMatrix, 2003).

Для диетического питания лиц с аллергией на коровье молоко разработан ацидофильный напиток на основе соевого молока (ГОСТ 10078-95). Национальный стандарт требует, чтобы в кисломолочных напитках пробиотического статуса общее содержание пробиотических видов лактобацилл (там, где они предусмотрены) составляло не менее 106 КОЕ/см3. Хотя при культи-

8 9

вировании в молоке уровень L. acidophilus может достигать 10 и даже 10 КОЕ/см3 (Королева, 1975), на практике коммерческие ацидофильные напитки

7 3

содержат эту лактобациллу в количестве не более 10 КОЕ/см .

Общий недостаток ацидофильных напитков - склонность к перекисанию при хранении. К сожалению, несмотря на хорошо доказанный благотворный

эффект, сегодня у нас они почти исчезли из продажи, вытесненные менее полезными, но более привлекательными (длительный срок годности, улучшенные органолептические показатели) йогуртом и кисломолочной продукцией, обогащенной бифидобактериями (Каган и др., 2008). За рубежом ацидофильная палочка сохраняет свои позиции на рынке пробиотических кисломолочных напитков.

В связи с этим представляется перспективной разработка в СибНИИсы-роделия пробиотического напитка «Алтайское лето» (ТУ 9222-056-0041971010; Сергеева и др., 2009), в котором высокие органолептические показатели сочетаются с терапевтически-значимыми уровнями пробиотических бактерий (L. acidophilus и P. freudenreichii) и с использованием побочного продукта сыродельного производства (подсырной сыворотки).

Сыры с L. acidophilus. В нашей стране создано около 10 видов сыров, при выработке которых используются закваски, содержащие ацидофильную палочку. Эти сыры относятся к типу мягких термокислотных («МЧС»), мягких сычужно-кислотных («Геленджикский», «Масис», «Айболит» и др.) и полутвердых сычужных («Покровский», «Алтайский кудесник», «Вальмен» и др.). Включение в сыры штаммов L. acidophilus преследует цель усилить давление на незаквасочную микрофлору и придать сырам диетические и про-биотические свойства (Каган, 2009).

Мясные продукты. Выпускаемый на Украине бактериальный концентрат «Ацидобакт» содержит штаммы L. acidophilus, отобранные по антагонистической активности к патогенной микрофлоре (стафилококку, протею, сальмонелле, патогенному серотипу кишечной палочки). Концентрат предназначен для приготовления копчено-вареных продуктов из говядины - рулета «Славутич», «Шейка говяжья деснянская» и др. (Янковский, 1989).

Список отечественных и зарубежных ацидофильных молочных продуктов представлен в таблице 4.

Ацидофильные молочные продукты

Группа Примеры

Кисломолочные напитки: а) моновидовые (один или несколько штаммов L. acidophilus) б) поливидовые (L. acidophilus в сочетании с другими заквасочными микроорганизмами - лактококками, бифидобактериями, пропио-новокислыми бактериями, дрожжами или др.) «Ацидофильное молоко», «Наринэ» «Ацидофильная простокваша», «Ацидофилин», «Ацидофильно-дрожжевое молоко», «Биомат-рикс», «Бифацил», «Бифитоник», «Вита», «Алтайское лето» (на сыворотке), «Майский» (на сыворотке), «Ацидолакт» (в т.ч. соевый), «АВ молочные продукты» (Дания), «Биогурт» (ФРГ), «Биокис» (Чехия), «Офилюс» (Франция), «Мил-Мил» (Япония) и др.

Сухие продукты «Бифацид»

Другие молочные продукты: а) коктейли б) мороженое в) сыры Коктейли фирмы Enrich Int. Inc. (США) Пробиотическое мороженое (РФ, США) «МЧС» (мягкий термокислотный), «Ацидоби-филин» (мягкий кислотно-сычужный), «Айболит» (мягкий сычужный), «Алтайский кудесник» (полутвердый сычужный), «Летний» (из пахты) и др.

Детское питание. В случае отсутствия или дефицита у матери грудного молока разработаны его заменители - детские молочные смеси, отвечающие физиологическим потребностям детей определенной возрастной группы. Различают адаптированные (приближенные по составу к женскому молоку), частично адаптированные и неадаптированные молочные смеси (табл. 5).

Ацидофильные молочные продукты детского питания

Группа Примеры

Адаптированные молочные смеси (с рождения): - жидкие - сухие «Ацидофильная малютка», «Кисломолочный», «Грудничок», «Агуша-1» «Адалакт», ««Росток», «Росток-1», «Тонус», «Тонус-1» (Р.Беларусь)

Частично адаптированные молочные смеси (с 3-х или 6-мес. возраста) «Агуша-2», «Ацидомил» (Р. Беларусь)

Неадаптированные молочные смеси (с 12-мес.) «Ацидолакт», «Биолакт», «Биолакт-МК», «Би-филакт кисломолочный», «Дюймовочка», «Малышок», «Наринэ»

Адаптированные смеси предназначены для вскармливания (или докор-ма) младенцев с рождения, частично адаптированные - с 3- или 6-месячного возраста, неадаптированные - для детей, достигших 1- или 3-летнего возраста (Коровина и др., 2004; ОСТ 10 078-95). Искусственное вскармливание значительно увеличивает риск развития у ребенка дисбактериоза кишечника (Мамонова и др., 1985; Шендеров, 2001; Vanderhoof, Young, 2005). Поэтому в рецептуры многих смесей включены пробиотические микроорганизмы, обычно бифидобактерии и/или L. acidophilus (Нетребенко, 2001; Тихомирова, 2010). Примером адаптированных смесей с L. acidophilus служат «Агуша 1», «Ацидофильная малютка», «Кисломолочный грудничок» и другие, частично адаптированных - «Ацидомил» и «Агуша 2», неадаптированных - «Ацидо-лакт», «Биолакт», «Наринэ» и другие.

В соответствии с действующими в России нормативами (ФЗ от 12.06.2008 N 88-ФЗ), содержание L. acidophilus в детских молочных смесях, в

1 3

которых она предусмотрена, должно быть не менее 10 КОЕ/см . Ацидофильные смеси назначают и при естественном вскармливании, если есть необходимость нормализации кишечной микрофлоры, нарушенной в результа-

те инфекционных заболеваний и антибиотикотерапии, при непереносимости лактозы и другой врожденной патологии, а также в качестве пробиотических добавок для профилактических целей. Для растущей пропорции детей с избыточной массой тела показан низкоэнергетический кисломолочный продукт, представляющий собой молочную смесь, сквашенную совместной культурой ацидофильной палочки и термофильного стрептококка (ТУ 10 РСФСР 850-92).

Установлено, что в норме главным источником заселения ЖКТ новорожденного полезными бактериями являются кишечник и родовой тракт матери. Так как, согласно современным представлениям, настройка иммунной системы ребенка на толерантность к индигенной микрофлоре матери начинается еще до его рождения и продолжается в ранний период грудного вскармливания (Попкова и др., 2004), особенно важно, чтобы беременные женщины и кормящие матери имели «правильные» микробиоценозы кишечника и влагалища.

При необходимости беременным женщинам назначают курсы приема пробиотических продуктов, например ацидофильных молочных продуктов, и/или вагинальных пробиотических препаратов (Литяева, 1992), а для лечебно-профилактического питания кормящих матерей разработан сухой кисломолочный продукт «Галактон-4», содержащий ацидофильную палочку в количестве не менее 106 КОЕ/г (Гигиенический сертификат..., 1994).

Фармацевтические препараты и БАДы. Для использования в комплексной терапии и профилактике различных патологических состояний детей и взрослых, связанных с дефицитом индигенной лактофлоры (дисбактериозы кишечника и женских половых путей, острые кишечные инфекции, хронические энтероколиты, воспалительные заболеваний ротовой полости, аллергические проявления на коже, побочные эффекты химио- и лучевой терапии при злокачественных новообразованиях и т.п.) разработаны фармацевтические препараты и биологически активные добавки, содержащие сухую жизнеспособную биомассу пробиотических видов микроорганизмов (табл. 6).

Таблица 6

Фармацевтические препараты и БАДы, содержащие L. acidophilus

(Петров, Спасов, 2007)

Группа Примеры

Фармацевтические препараты «Аципол», «Ацилакт», «Линекс» (Словения), «Солко Триховак»

БАДы «Ацидофилюс», «Ацидофлора», «Вита Баланс 3000» (США), «Витафлор», «Наринэ» (Армения), «Примадофилус», «Пробионикс» (США), «Флорадофилус» (США)

Как правило, эта микробная биомасса упакована в специальные капсулы, которые защищают пробиотические бактерии от вредного действия соляной кислоты при прохождении ими желудка и растворяются к моменту достижения ими толстого кишечника (Петров, Спасов, 2007). Некоторые из этих фармацевтиков и БАДов содержат L. acidophilus. Так, препарат «Аципол», содержащий смесь 4 штаммов L. acidophilus и полисахарид кефирных грибков, показал высокую эффективность при лечении острой инфекционной диареи, лактозной мальабсорбции и атопических заболеваний у детей и как профилактическое средство от антибиотикоассоциированной диареи, послеоперационных инфекций, септических состояний, диареи путешественников, а также при остром панкреатите и для снижения уровня холестерина в крови (Шустер, Мартьянов и др., 2009).

Аналогичными свойствами обладают лечебно-профилактический биопрепарат и БАД по патенту РФ № 2257408 (смесь штаммов L. acidophilus АТ-41 и В. adolescentis В-1, каждый в количестве Ю8-Ю10 КОЕ/капсулу) (Патент РФ № 2257408), БАДы «Витафлор» и «Наринэ» (обе содержат монокультуру селектированных штаммов L. acidophilus), которые можно применять непосредственно или в качестве закваски для приготовления одноименных кисломолочных продуктов, и присутствующие сегодня на нашем аптечном рынке препараты иностранного производства «Ацидофлора» (L. acidophilus, не менее 109 КОЕ/капсулу), «Вита Баланс 3000» (8 видов лактобацилл, вклю-

чая L. acidophilus, а также В. bifidum, общее количество 101U КОЕ/капсулу), «Линекс» (L. acidophilus, В. infantis, V. liberorum и S. faecium, общее количество не менее 1,2 107 КОЕ/капсулу) и «Пробно форте» (L. acidophilus BL 2027, L. plantarum 2203, L. casei BL 2401, L. lactis 2618 и B.lactis BL 2211, общее количество 8109 КОЕ/капсулу). В свою очередь препарат «Солко Три-ховак», представляющий собой таблетированную инактивированную лиофи-лизированную биомассу L. acidophilus, специализирован для профилактики и лечения рецидивирующего неспецифического бактериального вагиноза и рецидивирующего трихомониаза у женщин.

Явные преимущества вышеуказанных фармацевтических препаратов и БАДов перед кисломолочными продуктами, содержащими аналогичные про-биотические бактерии, заключаются в повышенной концентрации полезных бактерий, длительном сроке годности и меньшей требовательности к температурному режиму хранения. Их единственный (если не считать проблемы качества), но весьма существенный, недостаток - значительное повышение стоимости пробиотикотерапии и профилактики, проводимых с их использованием.

Кормовые добавки и ветеринарные препараты. Объективную сравнительную оценку благотворных свойств пробиотических продуктов и препаратов проще всего получить в опытах на животных. В этом случае имеется возможность формировать представительные группы животных-аналогов, обеспечивать одинаковые условия их содержания и строго контролируемую диету, применять нелимитируемые дозировки испытуемых препаратов, исключить эффект плацебо, проводить всесторонний учет показателей здоровья животных, включая гистологический анализ внутренних органов. Поэтому исследования эффективности и безопасности пробиотиков обязательно включают предварительный этап клинических испытаний на животных. Кроме того, если опыты проводятся на сельскохозяйственных животных, положительные результаты испытаний легко перевести в экономический эквивалент. Не удивительно, что даже сам термин «пробиотик» первоначально

был предложен как противопоставление термину «антибиотик» для препаратов лечебно-профилактического назначения, содержащих живые микроорганизмы кишечного происхождения и способных послужить альтернативой порочной практике применения в животноводстве так называемых «кормовых антибиотиков» (Fuller, 1989).

Уже первое поколение разработанных в нашей стране кормовых добавок пробиотического назначения (ацидофильная бульонная культура, «АБК», и пропионово-ацидофильная бульонная культура, «ПАБК»), дало положительные результаты при использовании в сельском хозяйстве (свиноводстве, овцеводстве, мясном и молочном животноводстве, пушном звероводстве, птицеводстве), а также при лечении домашних животных (Анти-пов, Субботин, 1980; Яшков, Черный, 1982; Gedek, 1987). Эффект выражался в снижении частоты и продолжительности желудочно-кишечных инфекций, повышении сохранности поголовья, увеличении продуктивности животных, снижении расходов на медикаменты (Васин и др., 1982; Подкопаев, 1983; Gandhi, Nagarathnam, 1990). Особенно эффективным оказалось включение пробиотиков в кормовые рационы при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных (Платонов, 1985; Сидоров, Субботин, 2001; Калоев, 2003).

Несмотря на общепринятую высокую оценку применения пробиотиков для профилактики и терапии домашних животных, имеется немало сообщений о слабом положительном эффекте или полном отсутствии такового (Сидоров и др., 2000). Причинами могут быть использование некачественных препаратов или биологическая несовместимость содержащихся в них про-биотических бактерий с индигенной микрофлорой или иммунной системой хозяина.

Особенно важно предусмотреть рациональное использование пробиотиков: выбор оптимального препарата с точки зрения цена/эффект, применение его ограниченными курсами в критические периоды жизни животных (новорожденным животным для «правильного» формирования кишечной микро-

флоры, при угрозе желудочно-кишечных заболеваний, при переводе на новые кормовые рационы, для снятия последствий стресса при отъеме от матки, группировании стада, транспортировке, вакцинациях и т.п.).

Современный рынок пробиотических кормовых добавок и средств ветеринарного назначения в основном представлен сложными препаратами, нередко специализированными на определенный вид домашних животных. Такие препараты, помимо поливидовой бактериальной массы лиофильной или контактной сушки, содержат те или иные биологически активные вещества, например, витамины, ферменты или иммуномодуляторы. По сравнению с простыми препаратами типа АБК или ЛПКД, которые можно готовить непосредственно в хозяйстве, это повышает общий благотворный эффект от их применения, но увеличивает и затраты на содержание животных.

Ниже приведен список пробиотических препаратов сельскохозяйственного и ветеринарного назначения, содержащих штаммы L. acidophilus (табл.

7).

Таблица 7

Кормовые добавки и ветеринарные препараты, содержащие

L. acidophilus

Группа Примеры

Жидкие препараты «АБК» (ацидофильная бульонная культура), «ПАБК» (пропионово-ацидофильная бульонная культура), «ЛПКД» (лечебно-профилактическая кормовая добавка), «Ацидокорм», «ЗЦМ-К»

Сухие препараты «Авилакт 1К» (для птицеводства), «Биобактон», «Лактобифадол» («Бифацидобактерин»), «Про-пиацид», «СБА», «СБК АП» (закваска для приготовления ацидофильного молока), «Энтеро-бактерин», «Энтероцид П»

российская 1

государственная!

; к а

Проблемы качества. Функциональная активность пробиотических продуктов и препаратов зависит от количественного содержания в них соответствующих полезных бактерий, что регламентируется действующими нормативами (ФЗ от 12.06.2008 N 88-ФЗ). Однако в процессе хранения бактерии отмирают с той или иной скоростью. По сообщениям отечественных и зарубежных исследователей, от 15 до 50 % продуктов и препаратов, присутствующих сегодня на мировых рынках сбыта в качестве пробиотических, не содержат заявленных пробиотических бактерий или содержат их в недостаточном количестве (Каган, Мироненко, 2007; Каган, 2008).

Особенно остро обстоит дело с сухими препаратами длительных сроков годности (в частности, с БАДами, реализуемыми с помощью сетевого маркетинга) из-за несоблюдения предписанных температурных режимов их транспортировки и хранения, отсутствия видимых показателей порчи и системы экспресс-контроля на пути к потребителю. Выходом могла бы стать практика нанесения производителем на потребительскую тару специальной метки, меняющей окраску синхронно с отмиранием бактерий.

Что касается кисломолочных напитков, обогащенных пробиотическими микроорганизмами, то их функциональная ценность определяется фактическим содержанием микроорганизмов заквасочной микрофлоры. Органы Рос-потребнадзора проверяют качество данных продуктов, как и другой молочной продукции, лишь периодически. Поэтому здесь все зависит от добросовестности производителя, обязанного контролировать по этому показателю каждую партию выпускаемого продукта.

Наименьшую тревогу вызывают кисломолочные продукты, содержащие только пробиотическую микрофлору («Ацидофильное молоко», «Биолакт», «Бифилакт», «Наринэ»), так как все они имеют небольшой срок годности, а потребитель может достаточно объективно судить об их качестве по органо-лептическим показателям (вкусу, запаху, консистенции, отделению сыворотки).

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Иркитова, Алена Николаевна

выводы

1. Показано, что по морфолого-культуральным свойствам исследованные 11 отечественных штаммов L. acidophilus соответствует общепринятому описанию неотипового штамма L. acidophilus АТСС 4356, но отличаются от зарубежного штамма La-5 (СКМ-506).

2. Выявлено, что на рост и антагонистическую активность L. acidophilus по отношению к штаммам тест-культуры Е. coli влияют такие экологические факторы, как аэробные и анаэробные условия, активная кислотность среды и наличие молочной кислоты в культуральной жидкости. В анаэробных условиях антагонистическая активность исследуемых штаммов L. acidophilus повышается по сравнению с аэробными условиями. При смещении активной кислотности среды в щелочную сторону антагонистическая активность исследуемых штаммов L. acidophilus понижается, а при смещении активной кислотности среды в кислую сторону - повышается. Нейтрализация молочной кислоты в культуральной жидкости приводит к уменьшению антагонистической активности штаммов L. acidophilus.

3. Установлено, что характер субстрата не влияет на антагонистическую активность L. acidophilus по отношению к штаммам тест-культуры Е. coli.

4. Определено, что большинство (7 из 11) исследованных штаммов L. acidophilus являются желчеустойчивыми (до 40%).

5. Установлено, что все исследованные штаммы L. acidophilus являются биосовместимыми между собой (за исключением штамма СКМ-505) и все 11 штаммов биосовместимы с исследованными штаммами P. freudenreichii.

6. Показано, что численность L. acidophilus и P. freudenreichii

7 3 сохраняется на высоком уровне (10 КОЕ/см) во всех исследованных вариантах среды (обезжиренное молоко, сыворотка, обезжиренное молоко/сыворотка).

7. Выявлено, что способ культивирования (совместное или раздельное) не влияет на численность L. acidophilus и P. freudenreichii и на титруемую кислотность при хранении.

8. Разработана пробиотическая закваска и биотехнология приготовления ацидофильного пробиотического напитка на основе молочной (подсырной) сыворотки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Иркитова, Алена Николаевна, 2012 год

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Анохина И.П., Кравцов Э.Г., Яшина Н.В., Ермолаев А.В., Чеснокова B.JL, Далин М.В. Характеристика поверхностных адгезинов лактобактерий, используемых при изготовлении препаратов пробиотиков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2006. - Т. 141. - № 6. - С. 664667.

2. Антипов В.А., Субботин В.М. Эффективность и перспективы применения пробиотиков // Ветеринария, 1980. -№ 12. - С. 55-57.

3. Банникова Л.А., Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Микробиологические основы молочного производства. - М.: Агропромиздат, 1987. - 400 с.

4. Бельмасова Е.В., Храмцов А.А. Изучение свойств штамма ацидофильной культуры // Переработка молока, 2009. - № 7. - С. 50-51.

5. Биоматрикс (BioMatrix). Реклама ООО "Биопродукт", Москва // Молочная промышленность, 2003. - № 9. - С. 24.

6. Богданов В.М. Микробиология молока и молочных продуктов. - М.: Пищепромиздат, 1957. - 296 с.

7. Бойцов А.Г., Рищук С.В., Ильясов Ю.Ю., Гречанинова Т.А. Адгезия лактобактерий к клеткам вагинального и буккального эпителия // Вестник СПбМА им. И.И. Мечникова, 2004. - № 4 (5). - С. 191-193.

8. Бондаренко В.М. Молекулярно-генетические и молекулярно-биологические исследования представителей родов Bifidobacterium и Lactobacillus // Вестник Российской АМН, 2006. - №1. - С. 18-23.

9. Бостанджян Т.М. Комбинированное лечение заболеваний пародонта интерфероном и Lactobacillus acidophilus «Нарине». Дис. ...канд. биол. наук. - Москва, 2005. - 94с.

10. Брода П. Плазмиды. - М.: Мир, 1982. - 220 с.

П.Васин А.Д., Невзгодина М.В., Щукина Л.В. Надежные средства: Ацидофильные бактерии для лечения сельскохозяйственных животных // Ветеринария, 1982. - №10. - С. 15-17.

12. Воробьева Л.И. Пропионовокислые бактерии. - М: Изд-во МГУ, 1995. -

122

288с.

13. Гаврилова H.H., Ратникова И.А., Баякышова К., Захаренко Л.И. Создание ассоциации из молочнокислых и пропионовокислых бактерий в отношении возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза // Биотехнология, 2005. - № 2. - С. 26-32.

14. Ганина В.И. Разработка технологии сухого молочного продукта "Бифацид". Автореф. дис. ...канд. биол. наук. - Москва, 1987.-22 с.

15. Герхардт Ф. Методы общей бактериологии. - М.: Мир, 1984. - 264с.

16. Гигиенический сертификат № 1-П-11/1260 (Украина) "Галактон-4" (сухой кисломолочный продукт). - Украина, 1994.

17. Глушанова H.A. Биологические свойства лактобацилл // Бюллетень Сибирской медицины, 2003. - Т. 2. - № 4. - С. 50-57.

18. Глушанова H.A., Блинов А.И., Бахаев В.В. Об антагонизме пробиотических лактобацилл // Эпидемиология и инфекционные болезни, 2004.-№6.-С. 37-39.

19. Глушанова H.A., Вербицкая Н.Б., Петров JT.H., Блинов А.И., Шендеров Б.А. Исследование ауто-, изо- и гомоантагонизма пробиотических штаммов лактобацилл // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, 2005. - №6 (44). -С.138-142.

20. Глушанова H.A., Шендеров Б.А. Взаимоотношения пробиотических и индигенных лактобацилл хозяина в условиях совместного культивирования in vitro // Микробиология, 2005. - № 2. - С. 56-61.

21. Горбатова К.К. Физика и химия молока. - СПб.: ГИОРД, 2004. - 288 с.

22. Гудков A.B. Сыроделие: технологические, биологические и физико-химические аспекты. - М.: ДеЛи, 2003. - 800 с.

23. Иркитова А.Н. Сравнительная оценка штаммов ацидофильной палочки для использования в составе пробиотических продуктов // Вестник Уральской медицинской академической науки, 2011. -№4/1. - С.30-31.

24. Иркитова А.Н., Каган Я.Р., Сергеева И .Я. Свойства, экологические аспекты и практическое значение ацидофильной палочки // Актуальные

проблемы техники и технологии переработки молока. Вып.8 - Барнаул, 2011.-С. 207-239.

25. Иркитова А.Н., Каган Я.Р., Соколова Г.Г. Антагонистическая активность молочных культур Lactobacillus acidophilus по отношению к тест-штаммам Escherichia coli // Известия АлтГУ, 2011. - №3/2 (71). - С.19-22.

26. Каган Я.Р. Применение методов генетической рекомбинации с целью улучшения биотехнологических свойств штаммов бифидо- и лактобактерий, используемых в продуктах и препаратах пробиотического назначения: отчет о НИР СибНИОС ТПМ- шифр 0419862.01.03.99. -Барнаул, 1999. - 29 с.

27. Каган Я.Р. Разработать научно-обоснованные технологии производства молочных продуктов с профилактическими и функциональными свойствами для населения экологически проблемных районов Алтайского края: отчет о НИР ГНУ СибНИИС СО РАСХН. - шифр 05.01 (10.03.05.01). - Барнаул, 2008. - 111 с.

28. Каган Я.Р. Сыры с пробиотической микрофлорой // Сыроделие и маслоделие, 2009. - № 2. - С. 24-27.

29. Каган Я.Р., Мироненко И.М. Разработать научно-обоснованные технологии производства молочных продуктов с профилактическими и функциональными свойствами для населения экологически проблемных районов Алтайского края: отчет о НИР ГНУ СибНИИС СО РАСХН. -шифр 05.01 (10.03.05.01).-Барнаул, 2007.- 140 с.

30. Каган Я.Р., Отт Е.Ф., Сергеева И.Я. Лечебно-профилактическая кормовая добавка (ЛПКД) для животноводства - препарат, технология, эффективность // Актуальные вопросы патологии животных и человека: Тез. докл. н.-п. конф. - Барнаул, 1996. - С.79-82.

31. Каган Я.Р., Отт Е.Ф., Сергеева И.Я. Расширение сырьевой базы для производства ацидофильной лечебно-профилактической кормовой добавки / Оценка современного состояния микробиологических исследований в Восточно-Сибирском регионе. - Иркутск: Изд-во

Иркутского ун-та, 2002. - С.203-205.

32. Каган Я.Р., Сергеева И.Я., Зуева Л.А., Иркитова А.Н. Пробиотические кисломолочные продукты в магазинах города Барнаула / Актуальные проблемы техники и технологии переработки молока: Сборник научных трудов СибНИИС СО РАСХН. - Вып.5. - Барнаул: АЗБУКА, 2008. - С. 269-282.

33. Калинина JI.H. Изучение микрофлоры кишечника материнского организма при воздействии биоинсектицида энтомофторина // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, 2006. - №1(65). - С.238-243.

34. Калоев Б.С. Заквашивание молока для телят // Животноводство для всех, 2003.-№6.-С. 14-15.

35. Карасевич Е.К., Марьенко В.Г., Зелкова Н.Т. Влияние метаболитов пропионовокислых бактерий на ацидофильную палочку // Известия ТСХА, 1979. - Вып. 5. - С. 177-179.

36. Квасников В.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. - М.: Наука, 1975. - 389 с.

37. Коровина Н.А., Захарова И.Н., Костадинова В.Н., Гетманова И.В., Малова Н.Е., Скуинь Н.А. Пребиотики и пробиотики при нарушениях кишечного микробиоценоза у детей. - М.: МЗ РФ, 2004. - 30 с.

38. Королева Н.С. Техническая микробиология кисломолочных продуктов. -М.: Пищевая промышленность, 1975. - 271 с.

39. Короткая Е.В., Беспоместных К.В. Применение полимеразной цепной реакции для идентификации бактерий рода Lactobacillus // Актуальные проблемы техники и технологии переработки молока. Вып. 8 - Барнаул, 2011.-С. 195-206.

40. Коротченко О.Д. Lactobacillus acidophilus и Streptococcus termophilus в изготовлении молочных и рыбно-гидробионтных пищевых и кормовых добавок. Автореф. дис. ...канд. биол. наук. - Владивосток, 2004. - 23с.

41. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. и др. Микробиология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах. -

М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999. - 80 с.

42. Кувалдина Н.Ф. Проболемы бактериофагии в молочной промышленности / Молочная индустрия 2005 - М.: Пищепромиздат, 2005. -С. 132-134.

43. Кузнецова A.B., Просакова Е.А. Сравнительное изучение действия заквасок ацидофильной и болгарской палочек на продуктивность и развитие органов пищеварения бройлеров // Сборник статей Международной научой конференции молодых ученых и специалистов, посвящ. 120-летию акад. Н. И. Вавилова. - 2007. - С. 436-439.

44. Мамонова JI.X., Лизько H.H., Кривова С.Г., Копылова В.И. Формирование микрофлоры кишечника новорожденных при различных видах вскармливания. Теоретические и клинические аспекты науки о питании. - М., 1985. - Т. 6. - С. 50-57.

45. Машенцева Н.Г., Хорольский В.В., Дорофеева Е.С., Бучинская А.Г., Каниковская A.A., Синеокий С.П. Скрининг молочнокислых микроорганизмов - продуцентов бактериоцинов, перспективных для использования в мясной промышленности // Биотехнология, 2006. - № 6. - С. 20-27.

46. Муравьева В.В. Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста. Автореф. дис. ...канд.биол.наук. - Москва, 1997. - 23 с.

47. Нетребенко O.K. Практика вскармливания детей первого года жизни в России // Детская больница, 2001. - № 3. - С. 52-54.

48. Оришак Е.А., Нилова Л.Ю., Авалуева Е.Б., Бойцов А.Г., Ильинская С.Л. Изучение адгезивности при диагностике дисбиозов // Клинико-лабораторный консилиум, 2010. - № 2 (32). - С. 49-57.

49. ОСТ 10-078-95 (РФ). Ацидолакт соевый для детского и диетического питания. Указатель государственных, республиканских, отраслевых стандартов, технических условий на продукцию молочной промышленности и методы испытаний, действующих в Российской Федерации (по состоянии на 01.01.2008). - Москва, 2008 - 40 с.

50. Патент РФ № 2091075. Комплексный бактериальный препарат для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний животных. -27.09.1997.

51. Патент РФ № 2257408. Лечебно-профилактический биопрепарат на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, биологически активная добавка к пище на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, сухая биомасса бифидо- и лактобактерий и способ ее получения.

52. Патрушева Е.В. Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбаактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина. Автореф. Дис. .. .канд.биол.наук. - Волгоград, 2000. - 23с.

53. Петров В.И., Спасов А.А. Российская энциклопедия биологически активных добавок. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2007. - 1056 с.

54. Платонов А.В. Производство препаратов для животноводства на основе микроорганизмов-симбионтов желудочно-кишечного тракта. - М.: ВНИИСЭНТИ, 1985. - 43 с.

55. Подкопаев В.И. Эффективность лечения желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят / Труды МВА, 1983. - С. 28-30.

56. Попкова С.М., Шмелева Е.А., Лещук С.И., Кичигина Е.Л., Коган В.М. Иммунологическая толерантность и кишечный дисбактериоз. // Биология микроорганизмов и их научно-практическое использование - Иркутск: Изд-во ИГУ, 2004. - С. 90-92.

57. Рыбальченко О.В. Электронно-микроскопическое исследование межклеточных взаимодействий микроорганизмов при антагонистическом характере взаимоотношений // Микробиология, 2006. - Т. 75. - № 4. - С. 550-555.

58. Рыбальченко О.В., Бондаренко В.М., Вербицкая Н.Б. Проявление антагонистического действия бактериоциногенных Lactobacillus acidophilus на клетки Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii и Proteus mirabilis // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 2006. - № 7. - С. 8-11.

59. Семенихина В.Ф., Рожкова И.В. Новые достижения в технологии кисломолочных продуктов // Молочная промышленность, 2002. - №9. - С. 41-42.

60. Семенищев А.И. Кисломолочные продукты при выращивании молодняка. -М.: Колос, 1983.-70 с.

61. Семенов A.B. Условия выявления микробной стимуляции антагонистической активности пробиотиков // Вестник ОГУ, 2009. -№12(106). -С.115-117.

62. Семёнов A.B. Характеристика антагонистической активности юактерий при межмикробных взаимодействиях. Автореф. дис. ...канд. биол. наук. -Оренбург, 2009.-21с.

63. Сергеева И.Я., Каган Я.Р., Отт Е.Ф., Иркитова А.Н. Пробиотический кисломолочный напиток на основе подсырной молочной сыворотки // Актуальные проблемы техники и технологии переработки молока. Вып.6 - Барнаул, 2009. - С. 186-190.

64. Сидоров М.А., Субботин В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи // Ветеринария, 2001. - № 4. - С. 3-7.

65. Сидоров М.А., Субботин В.В., Данилевская Н.В. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками // Ветеринария, 2000.-№ 11.-С. 17-22.

66. Стент Г., Кэлиндар Р. Молекулярная генетика. - М.: Мир. - 646 с.

67. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов. - М.: Сергиев-Посад, 1999.-415 с.

68. Степанов K.M. Идентификация и основные биологические свойства молочнокислых бактерий // Вестник КрасГАУ, 2009. - № 9. - С. 158-161.

69. Технический регламент на молоко и молочную продукцию: федеральный закон Российской Федерации от 12.06.2008 № 88-ФЗ.

70. Тимошко М.А. Микрофлора пищеварительного тракта молодняка сельскохозяйственных животных. - Кишинев: Штиница, 1990. - 189 с.

71. Тихомирова Н.А. Становление и развитие отечественной индустрии детского питания на молочной основе // Молочная промышленность, 2010.-№5.-С. 6-8

72. Тихоненко А.С. Ультраструктура вирусов бактерий. - М.: Наука, 1968. -170 с.

73. Тихоненко А.С., Мартынкина Л.П., Беспалова И.А. Лизогения у термофильных молочнокислых бактерий / Биология термофильных микроорганизмов. -М.: Наука, 1986. - С. 128-129.

74. ТУ 10 РСФСР 850-92. Продукты низкоэнергетические жидкие для детского питания. Технические условия.

75. ТУ 9222-056-00419710-10. Напиток кисломолочный из сыворотки «Алтайское лето». Технические условия.

76. Тучина Е.С. Оценка фотодинамического воздействия in vitro на бактерии из микробиоценозов ротовой полости и кожи человека. Автореф. Дис. ... канд.биол.наук. - Саратов, 2008. - 19с.

77. Усенко Д.В. Новые направления применения пробиотических продуктов в клинической практике // Педиатрия, 2006. - № 3. - С. 17-21.

78. Хамагаева И.С., Тармакова С.С., Товаров В.Ф., Гончарова Г.И., Семенова Л.П. Заменитель цельного молока с использованием бифидобактерий / Современная технология и безотходная переработка молока. - Ереван: Айастан, 1989. - С. 304-305.

79. Цинберг М.Б., Дерябин Д.Г., Денисова И.В. Биологические характеристики препаратов Bifidobacterium и Lactobacillus, полученных с использованием гидролизатно-молочной и гидролизатно-соевой сред //Антибиотики и химиотерапия, 2004. - Т. 49. - № 8-9. - С. 29-33.

80. Червинец Ю.В., Бондаренко В.М., Шабанова Н.А., Самоукина A.M., Червинец В.М. Бактериоциногенные высокоантагонистические штаммы лактобацилл // Микробиология, 2006. - № 7. - С. 78-82.

81. Черкасов С.В. Бактериальные механизмы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин // Журнал

микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 2006. - № 4. - С. 100105.

82. Шевелева С.А. Оценка безопасности и функциональной эффективности пробиотических продуктов и биологически активных добавок // Новые лекарственные препараты: экспресс-информация, 2004. - № 8. - С. 26-38.

83. Шевцов А.Б. Генеттическая идентификация бактерий рода Lactobacillus spp. Автореф. дис. ...канд. биол. наук. - Астана, 2010. -21с.

84. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. - Т. 3. - Пробиотики и функциональное питание. - М.: Грантъ. -2001.-288 с.

85. Шустер A.M., Мартьянов В.А., Ивашкина Н.Ю., Пиявский С.А., Медников Б.Л. Возможности оптимизации пробиотиков на примере отечественного препарата Аципол® // Русский медицинский журнал, 2009. -Т. 17.-№4.-С. 250-255.

86. Янковский Д.С. Ассортимент заквасок и бакконцентратов УкрНИИмясомолпрома / Современная технология и безотходная переработка молока - Ереван: Айастан, 1989. - С. 272-273.

87. Яшков Е.В., Черный Н.А. Применение сухого ацидофилина в ветеринарии // Свиноводство, 1982. - № 9. - С. 37-38.

88. Vincent J.G., Veomett R.C., Riley R.F. Antibacterial activity associated with Lactobacillus acidophilus // Journal of Bacteriology, 1959. - Vol.78. - № 4. -P. 477-484.

89. Aly E. Abo-Amer. Chromosomal genes-mediated inhibition of intestinal and foodborne pathogens by Lactobacillus acidophilus AA11 // Microbiologia, 2006. - Vol. 48. - №1. - P. 24-30.

90. Andreasen A.S., Larsen N., Pedersen-Skovsgaard Т., Berg R.M.G., Moller K., Svendsen K.D., Jakobsen M., Pedersen B.K. Effects of Lactobacillus acidophilus NCFM on insulin sensitivity and the systemic inflammatory response in human subjects // British Journal of Nutrition, 1987. - Vol. 104. -№ 12.-P. 1831-1838.

91. Barefoot S.F., Klaenhammer T.R. Applied and Environmental Microbiology, 1983.-Vol. 45.-P. 1808-1815.

92. Barefoot S.F., Klaenhammer T.R. Purification and characterization of the Lactobacillus acidophilus bacteriocin lactacin B // Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1984. - Vol. 26. - № 3. - C.328-334.

93. Batish V.K., Lai R., Grover S. Studies on environmental and nutritional factors on production of antifungal substance by Lactobacillus acidophilus R. // Food Microbiology, 1990. - Vol. 7. - № 3. - C. 199-206.

94. De Cardenas I.L.B.,Oliver G. Effect of pyruvate on the growth and the production of diacetyl and acetoin by Lactobacilli.// Microbiologie-Aliments-Nutrition. - 1990. - Vol.8. - P. 295-309.

95. Berger B., Pridmore R.D., Barretto C., Delmas-Julien F., Schreiber K., Arigoni F., Brüssow H. Similarity and differences in the Lactobacillus acidophilus group identified by polyphasic analysis and comparative genomics // Journal of Bacteriology, 2007.-V. 189.-№4.-P. 1311-1321.

96. Bernhardt H. Presence of the genus Lactobacillus (Beijerinck) in the human stomach (author's transl) // Zentralblatt für Bakteriologie, Parasitenkunde, Infektionskrankheiten und Hygiene. Erste Abteilung Originale. Reihe A: Medizinische Mikrobiologie und Parasitologic, 1974. - Vol. 226. - № 3. - P. 479-90.

97. Bogovic-Matijasic B., Rogelj I. Bacteriocin complex of Lactobacillus acidophilus LF221 - production studies in MRS media at different pH values and effect against Lactobacillus helveticus ATCC 15009 // Process Biochemistry, 1998. -, Vol. 33. -№ 3. - P. 345-352.

98. Bol J. The function of lactobacilli as dietary adjuncts // Antonie van Leeuwenhoek,, 1985. - Vol. 50. -№ 2. - P. 193-195.

99. Buchanan R.E., Gibbons N.E. (co-eds) / Bergey's manual of determinative bacteriology, eighth ed / The Williams and Wilkins Comp.- Baltimore, 1974. -1268 p.

100. Child R., Brees A. Culture for health // The world of food ingredients,

2006. -№11. -P. 20-23.

101. Chumchalova J., Stiles J., Josephsen J., Plockova M. Characterization and purification of acidocin CH5, a bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus CH5 // Journal of Applied Microbiology, 2004. - Vol. 96. - № 5. -P. 1082-1089.

102. GB № 2338245 New Zealand, IC A23C 9/12 Immunity enhancing lactic acid bacteria.

103. Coconnier M.-G., Klaenhammer T.R., Kerneis S., Bernet M.-F., Servin A.L. Protein-mediated adhesion of Lactobacillus acidophilus BG2F04 on human enterocyte and mucus-secreting cell lines in culture // Applied and Environmental Microbiology, 1992. - Vol. 58. - № 6. - P. 2034 - 2039.

104. Coconnier M.H., Lievin V., Hemery E. Antagonistic activity against Helicobacter infection in vitro and in vivo by the human Lactobacillus acidophilus strain LB. // Applied and Environmental Microbiology, 1998. -Vol. 64. - № 3. - P. 4373-4380.

105. Coconnier-Polter M.-H., Moal V.L.-L., Servin A.L. A Lactobacillus acidophilus Strain of Human Gastrointestinal Microbiota Origin Elicits Killing of Enterovirulent Salmonella enterica Serovar Typhimurium by Triggering Lethal Bacterial Membrane Damage // Applied and Environmental Microbiology, 2005. - Vol. 71. -P. 6115-6120.

106. Davis C.P., Cleven D., Balish E., Yale C.E. Bacterial association in the gastrointestinal tract of Beagle dogs // Applied and Environmental Microbiology, 1977. - Vol. 34. - P. 194-206.

107. de Klerk H.C., Hugo N. Phage-like structures from Lactobacillus acidophilus // Journal of General Virology, 1970. - Vol. 8. - P. 231 -234.

108. de Man J.C., Rogosa M., Sharpe M.E. A medium for the cultivation of lactobacilli // Journal of Applied Bacteriology, 1960. - Vol. 23. - P. 130-135.

109. Drasar B.S. Hill M.J. Human intestinal flora. - New York: Academic press,, 1974.-263 p.

110. El-Soda M., Abd-el-Wahab H., Ezzat N., Desmazeaud M.J., Ismail A.A.

The esterolytie and lipolytic activities of the lactobacilli. II. Detection of the esterase system of Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus lactis and Lactobacillus acidophilus // Lait, 1986. - Vol. 66. - № 4. - P. 431-443.

111. Fermented «AB» milk products. DSA. 1986. - Vol. 48. - №4. - P. 245. REF. 2077 / NORTH EUROPEAN DAIRY JOURNAL. - 1985. - Vol. 51(8). -P. 229-230.

112. Fernandes C.F., Shahani K.M., Amer M.A. Effect of nutrient media and bile salts on growth and antimicrobial activity of Lactobacillus acidophilus // Journal of Dairy Science, 1988. - Vol. 71. -№ 12. - P. 3222-3229.

113. Fernandes C.F., Shahani K.M., Standinger W.L., Amer M.A. Mode of tumor suppression by Lactobacillus acidophilus // Journal of Dairy Science, 1987.-Vol. 70. - №1. - P. 82.

114. Ferreira C.L., Gilliland S.E. Bacteriocin involved in premature death of Lactobacillus acidophilus NCFM during growth at pH 6 // Journal of Dairy Science, 1988.-Vol. 71.-№2.-P. 306-315.

115. Fuller R. Ecological studies on the lactobacillus flora associated with the crop epithelium of the fowl // Journal of Applied Bacteriology, 1973. - Vol. 36. -P. 131-139.

116. Fuller R. Probiotics in men and animals // Journal of Applied Bacteriology, 1989. - Vol. 66. - P. 365-378.

117. Gandhi A.B. Nagarathnam T. Probiotics in veterinary use // Poultry Guide, 1990. - Vol. 27. - № 3. - P. 43-49.

118. Gasser F. Electrophoretic characterization of lactic dehydrogenases in the genus Lactobacillus // Journal of General Microbiology, 1970. - Vol. 62. -P. 223-239.

119. Gedek B. Probiotics in animal feeding: effects of performance and animal health // Feed Magazine, 1987. - P. 21-23.

120. Gilliland S.E., Bush L.J., Staley T.E. Importance of Bile Tolerance of Lactobacillus acidophilus Used as a Dietary Adjunct // Journal of Dairy Science, 1984.-Vol. 67.-№3.-P. 3045-3051.

121. Gilliland S.E., Speck M.L. Instability of Lactobacillus acidophilus in yogurt // Journal of Dairy Science, 1977. - Vol. 60. - № 9. - P1394-1398.

122. Gilliland S.E., Walker D.K. Factors to consider when selecting a culture of Lactobacillus acidophilus as a dietary adjunct to produce a hypocholesterolemic effect in humans // Journal of Dairy Science, 1990. - Vol. 73.-№4.-P. 905-911.

123. Giorgi A., Torriani S., Dellaglio F., Bo G., Stola E., Bernuzzi L. Identification of vaginal lactobacilli from asymptomatic women // Microbiologica, 1987. - Vol. 10. -№ 4. - P. 377-384.

124. Gotteland M. Andrews M., Toledo M. Modulation of Helicobacter pylori colonization with cranberry juice and Lactobacillus Johnsonii Lai in children // Nutrition, 2008. - Vol. 24. - № 5. - P. 421-426.

125. Gupta P.K., Mital B.K. Antibiotic sensitivity pattern of various Lactobacillus acidophilus strains // Indian Journal of Experimental Biology, 1995.-Vol. 33.-№8.-P. 620-621.

126. Hansen P.A., Mocquot G. Lactobacillus acidophilus (Moro) comb. nov. //International Journal of Systematic Bacteriology, 1970. - Vol. 20. - № 3 - P. 325-327.

127. Hensiek R., Krupp G., Stackebrandt E. Development of diagnostic oligonucleotide probes for four Lactobacillus species occurring in the intestinal tract // Systematic and Applied Microbiology, 1992. - Vol. 15. - № 1. - P. 123128.

128. Hove H., Norgaard H., Mortensen P.B. European Lactic acid bacteria and the human gastrointestinal tract // Journal of Clinical Nutrition, 1999. -Vol. 53.-№ 5.-P. 339-350.

129. Hoyos A.B. Reduced incidence of necrotizing enterocolitis associated with enteral administration of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium infantis to neonates in an intensive care unit // Journal Infectional Desease, 1999.-Vol. 3.-P. 197-202.

130. Jack M., Wood B.J.B., Berry D.R. Evidence for the involvement of

thiocyanate in the inhibition of Candida albicans by Lactobacillus acidophilus // Microbios, 1990. - Vol. 62. - № 250. - P. 37-46.

131. Jin Lee, Younghoon Kim, Hyun Sun Yun, Jong Gun Kim, Sejong Oh, Sae Hun Kim. Genetic and proteomic analysis of factors affecting serum cholesterol reductionby Lactobacillus acidophilus // Applied and Environmental Microbiology, 2010. - Vol. 76. - № 15. - P. 4829-4835.

132. Johnson J.L., Phelps C.F., Cummins C.S., London J., Gasser T. Taxonomy of the Lactobacillus acidophilus group. International // Journal of Systematic Bacteriology, 1980. - Vol. 30. - P. 53-68.

133. Kawai Y., Shegara N. Specific adhesion of lactobacilli to keratinized epithelial cells of the rat stomach // American Journal of Clinical Nutrition, 1977. - Vol. 30. - P. 1777-1780.

134. Keogh B.P. Microorganisms in dairy products - friends and foes // CSIRO Food Research Quart, 1976. - Vol. 36. - № 2. - P. 35-41.

135. Kiuru U.J.T., Tybeck E. Characteristics of bacteriophages active against lactic acid bacteria from Swiss cheese // Suomen Kemmistileht, 1955. - Vol. 28. - P. 57-62.

136. Kullen M.J., Sanozky-Dawes R.B., Crowell D.C., Klaenhammer T.R. Use of the DNA sequence of variable regions of the 16S rRNA gene for rapid and accurate identification of bacteria in the Lactobacillus acidophilus complex // Journal of Applied Microbiology, 2000. - Vol. 89. - № 3. - P. 511-516.

137. Levison M.E., Corman L.C., Carrington E.R., Kaye D. Quantitative microflora of the vagina // American Journal of Obstetrics and Gynaecology, 1977.-Vol. 127.-P. 80-85.

138. Lin H.C., Su B.H., Chen A.C. Oral probiotics reduce the incidence and severity of necrotizing enterocolitis in very low birth weight infants // Pediatrics, 2005.-Vol. 115.-P. 1-4.

139. Lin W.-H., Yu B., Lin C.-K., Hwang W.-Z., Tsen H.-Y. Immune effect of heat-killed multistrain of Lactobacillus acidophilus against Salmonella typhimurium invasion to mice // Journal of Applied Microbiology, 2007. - Vol.

102.-№ l.-P. 22-31.

140. Medellin-Pena M.J., Griffiths M.W. Effect of molecules secreted by Lactobacillus acidophilus strain La-5 on Escherichia coli 0157:H7 colonization // Applied and Environmental Microbiology, 2009. - Vol. 75. - № 15. - P. 1165-1172.

141. Michetti P., Dorta G., Weisel P.H. Effect of whey-based culture supernatant of Lactobacillus acidophilus (johnsonii) Lai on Helicobacter pylori infection in humans // Digestion, 1999. - Vol. 60. - P. 203-209.

142. Mitsuoka T., Kimura N., Kobayashi A. Studies on the composition of the fecal flora of healthy dogs with the special references of lactobacillus flora and bifidobacterium flora // Zentralblatt fur Bakteriologie, Parasitenkunde, Infektionskrankheiten und Hygiene, 1976. - Vol. 235. - P. 485-493.

143. Moro E. Uber den Bacillus acidophilus n. spec.: Ein Beitrag zur Kenntniss der normalen Darmbakterien des Säuglings. // Jahrbuch. Kinderheilkde, Ser. 3, 1900. - Bd. 52. -P. 38-55.

144. Mündt J.O., Hammer J.L. Lactobacilli on plants // Applied Microbiology, 1968.-Vol. 16.-P. 1329-1330.

145. Muriana P.M., Klaenhammer T.R. Cloning, phenotypic expression and DNA sequence of the gene for lactacin F, an antimicrobial peptide produced by Lactobacillus spp. // Journal of Bacteriology, 1991. - Vol. 173. - № 5. - P. 1779-1788.

146. Muriana P.M., Klaenhammer T.R. Conjugal transfer of plasmid-encoded determinants of bacteriocin prouction and immunity in Lactobacillus acidophilus 88 // Applied and Environmental Microbiology, 1987. - Vol. 53. -№3.-P. 553-560.

147. Ooi L.-G., Ahmad R., Yuen K,-H., Liong M.-T. Lactobacillus acidophilus CHO-220 and inulin reduced plasma total cholesterol and low-density lipoprotein cholesterol via alteration of lipid transporters // Journal of Dairy Science, 2010. - Vol. 93. - № 11. - P. 5048-5058.

148. Orla-Jensen S. The lactic acid bacteria. - Copenhagen: Mem. acad. roy.

sci., Sect. Sci. Boil., 1943. - 145 p.

149. Papagianni M. Ribosomally synthesized peptides with antimicrobial properties: biosynthesis, structure, functions and application // Biotechnol. Adv., 2003. - Vol. 21. - № 6. - P. 465^169.

150. Patent US N 5516684. Biological pure culture of Lactobacillus acidophilis FERM-P-14204 or FERM-P-14205. Calpis Food Ind. Co., LTD. (JP).

151. Paturi Gunaranjan, Phillips Michael, Jones Mark, Kailasapathy Kasipathy. Immune enhancing effects of Lactobacillus acidophilus LAFTI L10 and Lactobacillus paracasei LAFTI L26 in mice // Journal of Food Microbiology, 2007. - Vol. 115. -№ 1. -P. 115-118.

152. Peterson R.E., Klopfenstein T.J., Erickson G.E., Folner J., Hinkley S., Moxley R.A., Smith D.R. Effect of Lactobacillus acidophilus strain NP51 on Escherichia coli 0157:H7 faecal shedding and finishing performance in beef feedlot cattle // Journal of food protection, 2007. - Vol. 70. - № 2. - P. 287291.

153. Pot B., Hertel C., Ludwig W., Descheemaeker P., Kersters K., Schleifer K.-H. Identification and classificaton of Lactobacillus acidophilus, L.gasseri and L.johnsonii strains by SDS-PAGE and rRNA-targeted oligonucleotide probe hybridization // Journal of General Microbiology, 1993. - Vol. 135. - № 3.-P. 513-517.

154. Raibaud P., Galpin J., Ducluzeau R., Mocquot G., Oliver G. Le genre Lactobacillus dans le tube digesttif du rat. I. Caracteres des souches homofermentaries isolees de rats holo- et gnotoxeniques // Annales de Microbiologic, 1973.-Vol. 124A.-P. 83-109.

155. Rogosa M., Mitchell J.A., Wiseman R.R. A selective medium for the isolation and enumeration of oral and faecal lactobacilli // Journal of Bacteriology, 1951.-Vol. 62.-P. 132-133.

156. Rosenfeldt V., Benfeldt E., Nielsen S.D. Effect of probiotic Lactobacillus

strains in children with atopic dermatitis // Journal of Allergy Clinical Immunology, 2003. - Vol. 111. - P. 389-395.

157. Savage D.C. Microbial ecology of the gastrointestinal tract // Annual Review of Microbiology, 1977. - Vol. 31. - P. 107-133.

158. Schfoppa F., Del Prete U., Montanago D. Tentative di aggiunta di Lactobacillus acidophilus alio yogurt // Rev.Soc.ital.sci.alim, 1981. - Vol. 10. -№ 4. - P. 247-252.

159. Sharpe M.E. Cell wall and cell membrane antigens used in the classification of lactobacilli // International Journal of Systematic Bacteriology, 1970.-Vol. 20.-P. 509-518.

160. Shimohashi H., Mutai M. Specific antigens of Lactobacillus acidophilus // Journal of General Microbiology, 1977. - Vol. 103. - P. 337-344.

161. Sozzi T., Maret R. Isolation and characterization of Streptococcus thermophilus and Lactobacillus helveticus phages from Emmenthal starters // Lait, 1975.-Vol. 55 - P. 269-288.

162. Starr M.P., Stolp H., Truper H.G., Balows A., Schlegel H.G. (eds). The prokaryotes. Springer-Verlag, 1981.-Vol. II-ch. 131.-P. 1653-1679.

163. Sui J., Leighton S., Busta F., Brady L. 16S ribosomal DNA analysis of the faecal lactobacilli composition of human subjects consuming a probiotic strain Lactobacillus acidophilus NCFM® // Journal of Applied Microbiology, 2004. - Vol. 93. -№ 5. - P. 907-912.

164. Tahara T., Kanatani K. Isolation, partial characterization and mode of action of acidocin J1229, a bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus JCM 1229 // Journal of Applied Microbiology, 1996. - Vol. 81. - № 6. - P. 669-677.

165. Tahara T., Kanatani K., Yoshida K., Miura H., Sakamoto M., Oshimura M. Purification and some properties of acidocin 8912, a novel bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus TK8912 // Biosci., Biotech., Biochem, - 1992-Vol. 56-P. 1212-1215.

166. ten Brink B., Minekus M., Van Der Vossen J.M.B.M., Leer R.J., Huis in't

Veld J.H.J. Antimicrobial activity of lactobacilli: preliminary characterization and optimization of production of acidocin B, a novel bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus M46 // Journal of Applied Microbiology, 1994. -Vol. 77.-№2. -P. 140-148.

167. Uemura J., Toba T., Fujisawa T., Iton T. Identification of species among the Lactobacillus acidophilus group by electrophoresis of lactate dehydrogenases. // Anim.Sci.and Technol, 1994. - Vol. 65, № 2, P. 112-119.

168. Van Niel C.W., Feudtner C., Garrison M.M., Christakis D.A. Lactobacillus therapy for acute infectious diarrhea in children: a meta-analysis // Pediatrics, 2002. - Vol. 109. - P. 678-684.

169. Vanderhoof J.A., Young R.J. Pediatric applications of probiotics // Gastroenterol Clin. North Am, 2005. - Vol. 34 - P. 451-463.

170. Wang H.L., Kradej L., Hesseltine C.W. Lactic fermentation of soy bean milk // Journal of Milk and Food Technology, 1974. - Vol. 37. - P. 71-73.

171. Watkins B.A., Miller B.F. Competitive gut exclusijn of avian pathogens by Lactobacillus acidophilus in gnotobiotic chicks // Poultry Science, 1983. -Vol. 62. -№ 3. - P. 1772-1779.

172. Yokokura T. Kodaira S., Ishiwa H., Sakurai T. Lysogeny in lactobacilli // Journal of General Microbiology, 1974. - Vol. 84. - P. 277-284.

173. Zamfir M., Callewaert R., Cornea P. C., Savu L., Vatafu I., De Vuyst L. Purification and characterization of a bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus IBB 801 // Journal of Applied Microbiology, 1999. - Vol. 87. - № 6.-P. 923-931.

Информация о продукте Лиофилизированная DVS культура

FD DVS La-5® - РгоЫо-Тес™

Описание Термофильная молочная культура. Одноштаммовая

культура, содержит Lactobacillus acidophilus. Штамм .«депонирован в коллекции Chr. Hansen и имеет большую историю безопасного использования. Клиническая документация; по воздействию на здоровье может быть предоставлена по запросу.

Ьа-5°поставляется в удобной лиофилизированной форме. La-5® является зарегестрированной торговой маркой Chr. Hansen.

Применение Культура используется в производстве пробиотических

молочных продуктов (йогурты, сыры, десерты). Ьа-5® может применяться как в отдельности, так и совместно с другими культурами, напр, ВШфэЬаегепит, Бйгергососсш ЙгетюрЫкв (АВТ-серия), йогуртными культурами, а также мезофильнымм ароматообразуюнщми культурами ( тип 1Ю).

Упаковка Размер упаковки Код продукта

5x25 г Ю0021

Альтернативность Ьа-5 может поставляться в замороженной форме, которая также может использоваться в смеси с другими культурами

Хранение и срок годности

Лиофияизированную культуру следует хранить при температуре -18°С или ниже, в. этих условиях срок хранения составляет не менее 24 месяцев. При температуре +5°С срок хранения составляет не менее б недель.

Возьмите культуру из морозильной камеры непосредственно перед использованием. НЕ РАЗМОРАЖИВАЙТЕ КУЛЬТУРУ. Обработайте верх пакета спиртом или хлорньм раствором. Откройте пакет и внесите гранулы непосредственно в пастеризованное сырье при медленном перемешивании. Помешивание ведите 10-15 минут для равномерного распределения культуры.

Дозировка Ьа-5 имеет очень высокую клеточную концентрацию.

Слабо развивается в молоке. Сбраживает лактозу до ЬВ-молочной кислоты.

Рекомендуемая доза внесения зависит от необходимой клеточной концентрации в готовом продукте, Это зависит от срока годности продукта, его рН и кислотности, а также температуры и продолжительности процесса сквашивания. Ьа-5 очень устойчива к кислотному

Инструкция по применению

воздействию в молочньтх продуктах.

Температура сквашивания

Оптимальная температура роста для Ьа-5 37 - 40°С. Может расти в пределах 28 - 43 °С. Благодаря незначительному кислотообразованию практически не оказывает никакого влияния на время сквашивания при температуре 37-43°С.

Кошерный статус Ьа-5 признана кошерной (Circle К D) для: круглогодичного использования.

Техническое обслуживание: За технологической поддержкой и инструкциями вы можете обращаться в российский филиал «Хр.Хансен»,

Примечания:

Справочная информация и аналитические методы предоставляются по требованию

Содержащаяся здесь информация правильна, правдива и добросовестно представлена. Однако из нее не следует выводить или подразумевать какую-нибудь гарантию или свободу от патентных прав. Данная информация приводится исключительно в справочном порядке и для проверки.

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОБИОТИЧЕСКОГО НАПИТКА НА ОСНОВЕ МОЛОЧНОЙ СЫВОРОТКИ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ОНКОБОЛЬНЫХ

В период с 12.12.2008 г. по 02.02.2009 г. в ГУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер» проведены испытания нового пробиотического кисломолочного напитка «Алтайское лето», разработанного в ГНУ СибНИИС СО Россельхозакадемии. Напиток вырабатывается на основе подсырной молочной сыворотки и содержит терапевтически значимые уровни пробиотиче-ской микрофлоры (ацидофильная палочка и проиионовокислые бактерии). Испытания напитка проведены на фоне комплексного лечения онкобольных гастроэнтерологического отделения. Среди пациентов, проходивших лечение, выделили 2 группы онкобольных по 30 человек в каждой. Пациентам каждой группы назначали ежедневный прием пробиотического напитка «Алтайское лето» в дозе 100 мл на человека. Первая группа получала напиток с 12 по 31 декабря 2008 г., вторая - с 12 января по 2 февраля 2009 г. Контролем служили онкобольные этого же гастроэнтерологического отделения, не получавшие указанного напитка.

Эффективность применения пробиотического напитка «Алтайское лето» в комплексном лечении онкобольных проводилась по следующим критериям:

- общеклинические проявления: болевой, диспепсический, характер

стула;

- обследования: общеклинические (обший анализ крови с формулой, биохимические обследования крови, иммунологический статус).

Результаты исследований показали:

Пробиотический молочный напиток «Алтайское лето» оказал положительное действие на состояние пациентов обоих опытных групп онкобольных, отрицательной динамики в клинике и лабораторных исследованиях не выявлено.

При объективном осмотре пациентов, принимавших напиток, установлено достоверное, по сравнению с контрольной группой, уменьшение болевого синдрома и диспепсических расстройств, нормализация стула. По результатам анализов крови, показателям биохимии и иммунологии ухудшения не отмечалось.

Больные охотно принимали напиток, отказов от приема напитка, жалоб или замечаний на его потребительские качества не было.

Таким образом, применение пробиотического напитка «Алтайское лето» в комплексном лечении онкобольных оказывают благотворное влияние на организм человека. Отрицательных последствий применения пробиотического напитка не выявлено.

Заместитель главного врача по лечебной работе и науке ГУЗ «Алтайский краевой дякОЛогич'ёркий диспансер», канд. мерр'наук, засл. врач РФ 3 ч

В.А.Лубенников

г/.

л

Оценка эффективности нового пробиотического напитка на основе молочной сыворотки в комплексном лечении пациентов гастроэнтерологического

профиля

На базе санатория «Обь» проведены клинические испытания лечебного действия на организм пробиотического напитка «Алтайское лето». Испытание проводили на двух группах пациентов: основная группа, принимающая сывороточный напиток (20 пациентов) и контрольная группа, принимающая другие пробиотические продукты на молоке (биолакт, 20 пациентов). Исследование проводилось на больных с постхолецистэктомическим синдромом в ранний послеоперационный период на этапе долечивания в санатории. В течении 18 дней все пациенты основной и контрольной групп принимали физиобальнеолечение и напиток «Алтайское лето».

Эффективность применения в комплексном лечении напитка «Алтайское лето» проводилась по следующим критериям:

- клинические синдромы: болевой, диспепсический, характер стула;

- обследования: общий анализ крови, кал на дисбактериоз.

Результаты исследований показали:

Новый пробиотический продукт оказал положительное действие на испытуемых, отрицательной динамики в клинике и лабораторных исследованиях не выявлено. При объективном осмотре пациентов отмечалось уменьшение болевого, диспепсического синдромов, нормализация стула. В основной группе в 10% исследования анализа кала на дисбактериоз до лечения высевалась УПФ, пониженное содержание бифидобактерий и лактобактерий. После лечения показатели микрофлоры кишечника нормализовались. По результатам анализов крови (СОЭ, лейкоциты, гемоглобин) ухудшения не отмечалось. В контрольной группе также отмечалась положительная динамика лечения (улучшение показателей крови и микрофлоры кишечника).

Таким образом, пробиотический сывороточный напиток «Алтайское лето» в комплексе с физиобальнеолечением оказывает благотворное действие на организм человека. Отрицательных последствий применения данного напитка не выявлено.

Зав.гастроэнтерологическим отделением санатория «Обь»

Коростелева Е .В. 06.08.09.