Экологические и физиолого-биохимические аспекты процесса биодеструкции хитозана микроскопическими грибами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.16, кандидат биологических наук Дормидонтова, Ольга Владимировна

• Дормидонтова, Ольга Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дормидонтова, Ольга Владимировна

I. ВВЕДЕНИЕ.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Экологические и физиолого-биохимические особенности грибов-деструкторов материалов.

2.2. Механизмы биодеградации природных и синтетических полимерных материалов микроорганизмами.

2.3. Действие микроскопических грибов на физико-механические свойства полимеров.

2.4. Природные полимеры на основе глюкозамина, их свойства и ^ применение

2.4.1. Хитин и хитозан - представители природных полимеров.

2.4.2. Структура и свойства хитина и хитозана.

2.4.3. Области практического применения хитозана.

2.4.4. Основные ферменты, участвующие в биодеструкции хитина и хитозана.

III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1.1. Объекты исследований.

3.1.2.Основные методы исследований.

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.2. 1. Получение полимерных композиций на основе хитозана. Получение сыпучих солей хитозана.

3.2.2. Исследование деструкции природных и синтетических полимеров стандартными культурами микромицетов.

3.2.3. Исследование устойчивости хитозана к штаммам грибов, выделенным из воздуха.

3.2.4. Изменение физико-механических свойств полимеров, подвергшихся деструкции микроорганизмами.

3.2.5. Исследование возможности деструкции хитозана "дикими" штаммами микромицетов

3.2.5.1. Изменение вязкости растворов хитозана, подвергшихся деструкции.

3.2.5.2. Изменение количества редуцирующих Сахаров в среде культивирования микромицетов.

3.2.5.3. Исследование взаимосвязи между содержанием редуцирующих Сахаров и вязкостью растворов хитозана.

3.2.6. Изучение влияния экологических и физиолого-биохимических факторов на процесс деструкции хитозана микроскопическими грибами

3.2.6.1. Зависимость скорости деструкции хитозана от его исходной молекулярной массы.

3.2.6.2. Зависимость скорости деструкции хитозана от рН, природы и концентрации кислоты-растворителя.

3.2.6.3. Влияние кислорода на деструктивные процессы хитозана.

3.2.6.4. Влияние температуры на деструкцию хитозана.

3.2.6.5. Зависимость деструкции от концентрации посевного материала, вносимого в среду культивирования.

3.2.6.6. Влияние некоторых примесей на деструкцию хитозана.

3.2.6.7. Оценка хитозаназной активности.

3.2.6.8. Выявление ингибиторов хитозаназной активности.

3.2.6.9. Определение молекулярной массы хитозаназ мицелиальных грибов в полиакриламидном геле.

3.2.6.10. Фосфатазная активность грибов-деструкторов хитозана.

3.2.6.11. Исследование интенсивности дыхания грибов-деструкторов хитозана.

3.2.7. Исследование возможности получения низкомолекулярных олигомеров хитозана с помощью "диких" штаммами микромицетов

3.2.7.1. Основы выделения низкомолекулярных олигомеров хитозана

3.2.7.2. Определение влажности олигомеров хитозана.

3.2.7.3. Определение плотности порошков хитозана

3.2.7.4. Определение вязкости 2,5% растворов олигомеров хитозана

3.2.7.5. Определение рН 2,5% растворов олигомеров хитозана.

3.2.7.6. Определение количества нерастворимых примесей олигомеров хитозана

3.2.7.7. Зольность олигомеров хитозана.

3.2.7.8. Спектральный анализ олигомеров хитозана.

3.2.7.9. Анализ молекулярной массы и полидисперсности олигомеров хитозана.

3.2.7. Ю.Исследование поверхностно-активных свойств олигохитоза

3.2.7.11. Биоцидная активность олигомеров хитозана.

3.2.8. Основные этапы получения олигомеров хитозана с помощью микромицетов.

IV. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экологические и физиолого-биохимические аспекты процесса биодеструкции хитозана микроскопическими грибами»

Биоповреждения - реакция окружающей среды на то новое, что вносит в нее человек. Во всех ситуациях, связанных с биоповреждениями, взаимодействуют, с одной стороны, организмы и окружающая среда, с другой - творение человеческих рук. Поэтому проблема биоповреждений основывается на комплексных эколого-технологических подходах, изучающих взаимодействия этих компонентов, прежде всего с точки зрения хозяйственной деятельности и существования человека.

Экологический аспект данной проблемы касается взаимоотношений человека с окружающей средой. Человек насыщает биосферу новыми для нее материалами и изделиями, одни из которых биосфера отторгает и разрушает, другие вовлекаются в искусственные и естественные биоценозы и становятся ее компонентами. Учитывая это человек меняет технологические характеристики создаваемых материалов и изделий из них. Ему выгодно, чтобы материалы и изделия служили определенный срок, и только затем разрушались под влиянием деятельности живых организмов (Ильичев, 1987).

В последнее время в различных отраслях промышленности (медицине, сельском хозяйстве, бытовой химии) широкое применение находят полимерные композиции, содержащие в своем составе природные полимеры, в частности хитин и хитозан (Чернецкий, Нифантьев, 1997). Хитозан является природным полисахаридом, полимерная цепь которого построена из Р (1—>4) связанных остатков глюкозамина. Вместе с тем, основная масса его производится путем деацетилирования хитина - второго биополимера после целлюлозы по распространенности в природе.

На протяжении многих десятилетий хитиновые панцири, как отход переработки ракообразных, засоряет побережье мирового океана, что создает серьезную экологическую проблему. При этом мировой потенциал источников достаточен для производства 150 тыс. т хитозана в год.

Хитозан обладает уникальными пленко-, волокно- и комплексообра-зующими свойствами, растворимостью в водных растворах ряда органических и неорганических кислот, биосовместимостью и отсутствием токсичности, что обусловливает значительно возросший в последнее время научный и практический интерес как к хитозану так и к композициям на его основе. В значительной мере этому способствовала организация в 80-х годах прошлого столетия в ряде ведущих стран мира (Японии, США, Норвегии, Италии) промышленного производства хитина и хитозана. Существенно, что при этом решается сразу две задачи: человечество получает ценнейшее сырье и снимается острая экологическая проблема.

В процессе эксплуатации материалы на основе хитозана могут подвергаться негативным воздействиям различных микроорганизмов, в том числе микроскопических грибов. Быстрый рост мицелия, мощность и лабильность ферментативных систем позволяет этим живым организмам использовать в качестве источников питания различные полимеры, как природного, так и искусственного происхождения (Лугаускас и др., 1987; Ермилова, 1991). В результате таких воздействий происходит изменение основных физико-химических характеристик материала и их деградация. С другой стороны, в ряде случаев необходимо добиться ускорения процессов биоутилизации (Lorcks, Pommeranz, 1996). Кроме того, в настоящее время существует задача получения хитозанов с заданным значением молекулярной массы, включая низкомолекулярные олигосахариды, являющиеся биологически активными веществами (Комаров и др., 2001). Олигомеры хитозана находят широкое применение в медицине в качестве носителя биологически активных соединений при получении противовирусных и противоопухолевых препаратов, а также в качестве иммуномодуляторов (Васюкова и др., 2000; Васюкова и др., 2001).

По данным литературы (Latzko, Hempel, 1995; Варламов и др., 1997; Ба-бенко и др., 1998) некоторые бактерии и грибы, являющиеся активными продуцентами хитиназ, способны осуществлять деструкцию высокомолекулярного хитозана до низкомолекулярных водорастворимых форм. Следует отметить, что олигомеры хитозана, полученные с помощью различных микроорганизмов (бактерий, актиномицетов, грибов), отличаются по своей биологической активности.

В настоящее время актуальным является поиск и разработка высокотехнологичных промышленных методов получения олигохитозанов. Известно, что факторы внешней среды (источники питания, кислород, кислотность, влажность, температура и др.) могут стимулировать или ингибировать интенсивность данного процесса. Изучение данного вопроса позволит не только расширить знания о механизмах процесса биодеструкции полимерных материалов, но и предложить промышленный метод получения олигохитозана.

Цели и задачи исследований. В настоящей работе исследовались экологические и физиолого-биохимические аспекты процесса деструкции хитозана микроскопическими грибами, с целью разработки экобиотехнологических основ биоутилизации природного полимера и получения его олигомерных форм.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

• выявить наиболее активных микромицетов-деструкторов хитозана и полимерных материалов на его основе;

• исследовать влияние роста микромицетов - активных деструкторов хитозана на физико-механические свойства некоторых полимерных материалов;

• определить оптимальные значения ряда экологических факторов для роста и осуществления процесса деструкции хитозана микромицетами;

• исследовать некоторые физиолого-биохимические особенности грибов - активных деструкторов хитозана;

• определить физико-химические и биологические свойства олигомеров хитозана, полученных с помощью микромицетов;

•разработать основы экобиотехнологического метода биоутилизации и получения олигомерных фракций хитозана.

Научная новизна работы. Впервые исследована возможность деструкции грибами гомо- и гетерополимерных пленок на основе хитозана.

Установлены активные микромицеты-деструкторы среди стандартных культур из списков ГОСТ 9.049-91 {Aspergillus terreus, Aspergillus niger, Peni-cillium ochro-chloron, Penicillium funiculosum и Trichoderma viride).

Выделены «дикие» штаммы микроскопических грибов, идентифицированные как Paecilomyces sp. НУ-10 и Penicillium sp. НУ-12, значительно превышающие стандартные культуры по своей способности осуществлять деструкцию хитозана и материалов на его основе.

В лабораторных условиях исследовано влияние роста грибов Paecilomyces sp. НУ-10 и Penicillium sp. НУ-12 на физико-механические показатели полимерных материалов. Установлено, что рост грибов на полимерных пленках (поливинилхлориде, полиэтилене) приводит к ухудшению таких показателей как прочность материалов при разрыве (стр) и относительное удлинение (ер). В присутствии хитозана в питательной среде ухудшение данных показателей усиливается.

Определены оптимальные экологические условия, обеспечивающие наиболее эффективный процесс деструкции хитозана микромицетами. В частности, показано, что скорость деструкции зависит от температуры, природы и кислотности среды, аэрации, количества примесей, молекулярной массы субстрата.

Исследованы физиолого-биохимические особенности микромицетов — активных деструкторов хитозана. Выявлена высокая хитозаназная активность мицелиальных грибов - активных деструкторов хитозана, установлена их молекулярная масса и ингибиторы; определена интенсивность дыхания и фосфатазная активность данных микромицетов.

Полученные экспериментальные данные позволят в определенной мере понять механизмы биоутилизации хитозана микромицетами в природных условиях.

Впервые показана возможность получения олигомеров хитозана с помощью микроскопических грибов Paecilomyces sp. НУ-10 и Penicillium sp. НУ-12. Исследованы основные физико-химические и биологические свойства олигомеров хитозана (плотность, вязкость, зольность, ИК-спектры, полидисперсность, поверхностно-активные свойства, биоцидная активность).

Подана заявка на патент «Способ получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана» №2001109818/04(010276). Приоритет от 11.04.2001.

Практическая значимость работы.

• С помощью микромицетов Paecilomyces sp. НУ-10 и Penicillium sp. НУ-12 получены олигомеры хитозана и исследованы их физико-химические и биологические свойства. Олигомеры хитозана, являясь биологически активными веществами, могут найти широкое применение в медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве.

• Предложена схема экобиотехнологического метода деструкции хитозана с помощью микроскопических грибов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Регулирование биостойкости материалов возможно как на экологическом уровне за счет изменения факторов внешней среды, влияющих на деструктивные процессы хитозана микромицетами, так и на физиолого-биохимическом уровне за счет активации или ингибирования ферментных систем микроскопических грибов, способных деструктировать хитозан и синтетические полимеры на его основе.

2. Изменение вязкости раствора, содержание редуцирующих Сахаров, физико-механические свойства полимерных материалов могут являться основой контроля процесса биодеструкции хитозана и материалов на его основе, а также получения его олигомерных форм.

3. Молекулярная масса олигомеров, соотношение различных фракций олигомеров, их количество и свойства зависят от используемого штамма гриба-деструктора и от условий его культивирования.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Экология», Дормидонтова, Ольга Владимировна

IV. ВЫВОДЫ

1. Наиболее активными деструкторами гомополимерных и гетерополи-мерных (ХТЗ+ПВПД и ХТЗ+ПВС) пленок на основе хитозана являются стандартные культуры грибов Aspergillus terreus, Aspergillus niger, Penicillium ochro-chloron, Penicillium funiculosum и Trichoderma viride.

2. Выделенные из воздуха «дикие» штаммы микромицетов, относящиеся к классу Hyphomycetes, порядку Moniliales, семейству Moniliaceae, идентифицированные как Paecilomyces sp. НУ-10 и Penicillium sp. НУ-12, превосходят по своей способности вызывать деструкцию хитозана и полимеров на его основе стандартные культуры грибов из списка ГОСТа 9.049-91.

3. Рост грибов Paecilomyces sp. НУ-10 и Penicillium sp. НУ-12 на полимерных материалах (поливинилхлориде и полиэтилене) приводит к ухудшению их разрывного напряжения и относительного удлинения. Внесение в питательную среду хитозана приводит к еще большему ухудшению физико-механических свойств данных полимеров.

4. Процесс деструкции хитозана микромицетами сопровождается увеличением количества редуцирующих Сахаров в среде культивирования. Выявлена связь между количеством редуцирующих Сахаров, вязкостью растворов хитозана и его молекулярной массой. Показано, что данные показатели могут служить контролем процесса деструкции хитозана.

5. Определены оптимальные значения экологических факторов внешней среды для роста и протекания процесса деструкции хитозана микромицетами: температура, аэрация, концентрация хитозана, концентрация посевного материала, природа и концентрация кислоты-растворителя, рН среды, молекулярной массы субстрата.

6. Выявлены некоторые физиолого-биохимические особенности грибов - активных деструкторов хитозана: активность хитозаназ, максимум которых наблюдался на 8-10 сутки культивирования и составил 820 мкМоль PC • мг"1 белка • час"1, молекулярная масса хитозаназ 10-12 кДа, ингибиторы хитозаназ

Ill

- АБП-40 (0,01 M), Гидол (0,01 М), Катон (0,001 М), фосфатазная активность, интенсивность дыхания.

7. Определены некоторые физико-химические и биологические свойства олигомеров хитозана, полученных с помощью Paecilomyces sp. НУ-10 и Penicillium sp. НУ-12 (плотность, вязкость, зольность, ИК-спектры, полидисперсность, поверхностно-активные свойства, бактерицидное и фунгицидное действие). Предложена схема промышленного метода микробиологической деструкции хитозана для получения его олигомеров.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дормидонтова, Ольга Владимировна, 2003 год

1. Абрамова Н.Ф., Шкулова Г.А., Астахова JI.C., Шашалович М.П. Влияние старения на грибостойкость пластмасс //Матер. II Всесоюзн. конф. по биоповреждениям. Горький. 1981. С. 35-37.

2. Абызов С.С., Белякова Л.П. Мицелиальные грибы из толщи ледника центральной Антарктики //Известия АН СССР. Серия биология. 1982. №3. С. 432-436.

3. Адамсон А. Физическая химия поверхностей. М.: Мир, 1979. 586 с.

4. Актуганов Г.Э., Мелентьев А.И. Внеклеточный комплекс хитинолитиче-ских ферментов штамма Bacillus sp. 739 //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 340-343.

5. Алексеева М.Ф., Кириленко Ю.К., Фролов Ю.Г., Нагапетян Р.А. Производство и использование олигосахарида хитозана и его производных //Матер. 1 междунар. конгр. «Биотехнология состояние и перспективы развития». 2002. С. 389.

6. Анисимов А.А., Смирнов В.Ф. Биоповреждения в промышленности и защита от них. Горький: ГГУ, 1980. 81 с.

7. Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф. Антимикробные полимеры. С.-Пб.: Гиппократ, 1993. 264 с.

8. Бабенко А.Ю., Дмитриева Е.Ю., Шелегедин В.Н. Получение экзогенного препарата хитиназы высокой активности, продуцируемой Vibrio sp. X //Биотехнология. 1998. №3. С. 13-18.

9. Ю.Бабенко А.Ю., Дмитриева Е.Ю., Шелегедин В.Н. Исследование экзогенного препарата хитиназы высокой активности, продуцируемой Vibrio sp. X //Биотехнология. 1999. №3. С. 31-38.

10. П.Бабенко А.Ю., Шелегедин В.Н. Выделение эндохитиназы штамма Vibrio sp. Хи некоторые ее свойства //Биотехнология. 2000. №1. С. 39-45.

11. Баран А. А., Тесленко А .Я. Флокулянты в биотехнологии. JL: Химия, 1990. С. 79-92.

12. Безбородое A.M., Астапович Н.И. Секреция ферментов у микроорганизмов. М.: Наука, 1984. 72 с.

13. Билай В.И., Билай Т.И., Мусич Е.Г. Трансформация целлюлозы грибами. Киев: Наукова думка, 1982. 295 с.

14. Билай В.И., Коваль Э.З. Аспергиллы. Киев: Наукова думка, 1988. 204 с.

15. Билай Т.И. Термостабильные ферменты грибов. Киев: Наукова думка, 1979. 246 с.

16. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.: Медицина, 1982. 464 с.

17. Благник Р.А., Занова В.В. Микробиологическая коррозия. М.: Наука, 1965. 186 с.

18. Борисова Н.Н., Рябцова В.Г., Косенкова А.Р. Устойчивость резин на основе различных каучуков к биологическим воздействиям //Микроорганизмы и низшие растения разрушители материалов и изделий. М.: Наука, 1979. С. 96-107.

19. Варламов В.П., Стояченко И.А., Буданов М.В. Способ получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана. Патент РФ №2073016. МКИ 6С08В37/08. Центр «Биоинженерия» РАН №92015867/04. Опубл. 10.02.97.

20. Васнев В.А. Биоразлагаемые полимеры //Высокомолекулярные соединения. Серия Б. 1997. Т. 39. №12. С. 2073-2086.

21. Гамаюрова B.C., Котляр М.Н., Шарбукова Н.В., Халитов Ф.Г. Химическая модификация хитин-глюканового комплекса //Биотехнология. 1997. №6. С. 30-33.

22. Гафуров Ю.М., Мамонтова В.А., Рассказов В.А. Средства наружного применения препаратов «Полимед», «Автохит», «Гидрохит» //Матер. VI меж-дунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 150-152.

23. Герасимов В.Н., Голов Е.А., Холоденко В.П., Кобель B.C., Миронова Р.И., Расулова Г.Е. Электронно-микроскопические исследования биоповреждений металлов //Матер конф. «Биологические проблемы экологического материаловедения». Пенза: ЦДНТП, 1995. С. 17-18.

24. Головин П.П., Головина Н.А. Сравнительная эффективность антидотных свойств хитозана при микотоксикозе карпа //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С.156-159.

25. Горяйнов Г.И., Горяйнов А.Г. Результаты сравнительного исследования ряда природных энтеросорбентов //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 159-161.

26. ГОСТ 9.048-75. ГОСТ 9.053-75 (91) Материалы и изделия. Методы испытаний на микробиологическую устойчивость. М.: Стандарт, 1992. 64 с.

27. Десяткина О.П., Нармухаметова Г.Л., Соков Ю.Ф. Получение хитина и хитозана из биомассы микроскопических грибов //Матер. 47 Научно-техн.конф. молод, ученых Уфим. гос. нефт. техн. ун-та. Уфа. 1996. Т. 1. С. 119120.

28. Дзумедзей Н.В., Синдеева JI.A., Федорченко М.М. Биодеструкция полимерных материалов на основе диэтиленгликольбисаллилкарбоната //Пластические массы. 1994. №2. С. 37-39.

29. Ежов В.А., Безбородов С.И., Санцевич Н.И. О регуляции биосинтеза внеклеточных фосфогидролаз у Penicillium brevicompactum //Микробиология. 1978. Т. 47. Вып. 4. С. 665-671.

30. Емельянов Д.Н., Смирнов В.Ф., Чернорукова З.Г., Смирнова О.Н. Изменение механических свойств волокон в процессе биоповреждений микроскопическими грибами //Механика композиционных материалов и конструкций. 1997. №3. С. 55-61.

31. Ермилова И.А. Теоретические и практические основы микробиологической деструкции химических волокон. М.: Наука, 1991. 248 с.

32. Жиряева Е.В., Ермилова И.А., Комарова Т.И., Каневская И.Г. Деструкция синтетического волокна натрон под влиянием некоторых микромицетов //Микология и фитопатология. 1991. Т. 25. №2. С. 141-146.

33. Зиновьева С.В., Васюкова Н.И., Ильинская Л.И., Варламов В.П., Озерец-ковская O.J1. Влияние хитозана на взаимоотношения в системе растение -паразитические нематоды //Доклады Академии наук. 1999. Т. 367. №6. С. 845-847.

34. Ильина А.В., Татаринова Н.Ю., Варламов В.П., Албулов А.И. Низкомолекулярный водорастворимый хитозан //Матер. V междунар. конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 1999. С. 270-273.

35. Ильина А.В., Татаринова Н.Ю., Тихонов В.Е., Варламов В.П. Внеклеточные протеиназа и хитиназа, продуцируемые культурой Streptomyces kurssanovii //Прикладная биохимия и микробиология. 2000. Т. 36. №2. С. 173-177.

36. Ильичев В.Д. Биоповреждения. М.: Высшая школа, 1987. 352 с.

37. Кайминьш И.Ф., Киселева Т.Б., Клявиныи З.В., Озолиня Г.А. Получение диетической пищевой добавки на основе хитозана //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 157.

38. Калашникова Н.А., Родзевич В.И. Активность фосфатаз различных культур плесневых грибов //Прикладная биохимия и микробиология. 1971. Т. 7. Вып. 4. С. 446-450.

39. Каневская И.Г. Биологические повреждения промышленных материалов. Л.: Наука, 1984.-230 с.

40. Кириленко Т.С. Атлас родов почвенных грибов. Киев: Наукова Думка, 1977.- 128 с.

41. Кириллова J1.M. Инвертазная активность сахарозотолерантных и осмо-фильных микромицетов //Прикладная биохимия и микробиология. 1997. 33. № 1.С. 49-52.

42. Коваль Э.З., Михтенштейн В.Н. Зарастание ситаллов грибами при пониженных температурах //Биоповреждения. Горький. 1981. Ч. 1. С. 85-86.

43. Кошевский И.И., Теслюк В.В. Эффективность применения препарата Ми-косан и хитозана для обработки семян гороха //Матер. VI междунар. конф.

44. Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 85-88.

45. Кулёв Д.Х., Львова Е.Б. Хитинсодержащая пищевая добавка из мицели-альной биомассы Aspergillus niger //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 204-207.

46. Кулик Е.С., Виноградова JI.M., Карякина М.И. Влияние метаболитов грибов на физико-механические свойства лакокрасочных покрытий //Биологические повреждения строительных и промышленных материалов. Киев: Наукова думка, 1978. С. 63-67.

47. Куманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство по практическим занятиям по биологической химии. М.: Медицина, 1974. 724 с.

48. Кучерявых П.С. Хитинолитическая активность некоторых мицелиальных грибов-продуцентов гидролаз //Матер 6 молод, научн. конф. «Актуальные проблемы биологии и экологии». Сыктывкар. 1999. С. 120-121.

49. Литвин Ф.Ф. Практикум по физико-химическим методам в биологии. М.: МГУ, 1981.-240 с.

50. Лугаускас А.Ю., Григайтите Л.М., Репечкене Ю.П., Шляужене Д.Ю. Видовой состав микроскопических грибов и ассоциации микроорганизмов на полимерных материалах //Актуальные вопросы биоповреждений. М.: Наука, 1983. С. 71-77.

51. Лугаускас А.Ю., Левинскайте Л.И., Лукшайте Д.И. Поражение полимерных материалов микромицетами //Пластические массы. 1991. №2. С. 2428.

52. Лугаускас А.Ю., Микульскене А.Н., Шляужене Д.Ю. Каталог микромице-тов-биодеструкторов полимерных материалов //Биологические повреждения. М.: Наука, 1987. 340 с.

53. Малкин А.Я., Акдский Л.Л., Коврина В.В. Методы измерения механических свойств полимеров. М.: Химия, 1978. 336 с.

54. Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: Мир, 1971. 247 с.

55. Мелентьев А.И., Актуганов Г.Э. Выделение, очистка и характеристика хитиназы Bacillus sp. 739 //Прикладная биохимия и микробиология. 1999. Т.35. №6. С. 624-628.

56. Миронова Р.И., Носкова В.П., Русланова Г.Е., Холоденко В.П. Биодеградация и биосорбция плавающей нефти природными микромицетами //Биотехнология. 1997. №7. С. 44-48.

57. Михайлова Р.В., Сапунова Л.И., Колесникова С.С. Зависимость ферментативной активности грибов рода Penicillium от источника питания //Контроль и управление биотехнологическими процессами. Горький. 1985. С. 68.

58. Наплекова Н.Н., Абрамова Н.Ф. О некоторых вопросах механизма воздействия грибов на пластмассы //Известия СО АН СССР. Серия биология. 1976. №3. С. 21-27.

59. Недосеков В.В., Селянинов Ю.О., Шинкарев С.М., Еремец А.И., Цыбанов С.Ж. Применение хитозана для концентрирования антигенов вируса бешенства //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 366-368.

60. Орлов В.Г., Клячко Е.В., Шакулов Р.С. Некоторые характеристики рибосом микромицетов после прекращения роста культур //Биохимия. 1974. Т. 39. Вып. 2. С. 426-431.

61. Панфилова З.И., Дружак А.Б., Салганик Р.И. Ферментный препарат хити-наза //Научно-прикладные разработки: Генетика, селекция, биотехнология /Ин-т цитол. и генет. СО РАН. Новосибирск. 1997. С. 81.

62. Передня А.А. Хитозансодержащие препараты в кормопроизводстве для аквакультуры //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 376-381.

63. Полевой В.В., Максимов Г.Б., Синютина Н.Ф. Методы изучения мембран растительных клеток. Д.: ЛГУ, 1986. 192 с.

64. Порфирьева О.В., Юсупова Д.В., Зоткина Н.Л., Соколова Р.Б., Габдрахма-нова Л.А. Хитинолитический комплекс Serratia marcescens и особенности его биосинтеза//Микробиология. 1997. 66. №3. С. 347-353.

65. Рабинович В.А., Хавин З.Я. Краткий химический справочник. Л.: Химия, 1978.-392 с.

66. Сергеева JI.E. Роль абиотических факторов при биоповреждении целлюлозы //Матер, конф. «Биоповреждения в промышленности». Пенза: ЦДНТП, 1994. Ч. 1.С. 4-5.

67. Си-Дже Ким, Co-Ян Кан, Сеун-Лим Парк, Такум-Шин, Ян-Хван Ко. Эффекты хитоолигосахаридов на функцию печени мыши //Korean J. Food Sci. Technol. 1998. Vol. 30. №3. P. 693-696.

68. Сизова Т.П., Бабьева E.H. Экологические и морфологические особенности почвенных микромицетов из разных природных зон //Микология и фитопатология. 1981. Т.15. Вып. 3. С. 197-200.

69. Сильверстейн Р., Басслер Г., Моррил Т. Спектрометрическая идентификация органических соединений. М.: Мир, 1977. 590 с.

70. Симко М.В. Скрининг экологически безопасных средств защиты ПВХ-материалов от биоповреждений микромицетами на основе изучения продукции индолил-3-уксусной кислоты. Автореферат кандидатской диссертации. Н. Новгород. 2002. 24 с.

71. Смирнов В.Ф., Анисимов А.А., Семичева А.С., Шевелева А.Ф. Влияние фунгицидов на диэлектрические свойства эпоксидного компаунда КД-4 //Пластические массы. 1977. №1. С. 63.

72. Смирнов В.Ф., Веселов А.П., Семичева А.С., Смирнова О.Н., Захарова Е.А. Экологические и биологические аспекты деструкции промышленных материалов микроорганизмами. Н. Новгород: ННГУ, 2002. 99 с.

73. Сумм Б.Д., Должикова В.Д., Деныцикова Г.И., Горюнов Ю.В. Применение метода смачивания в физико-химических исследованиях //Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 1988. Т. 29. №4. С. 398-404.

74. Твердохлебова И.И. Конформация макромолекул (вискозиметрический метод оценки). М.: Наука, 1987.-288с.

75. Терешина В.М., Меморская А.С., Феофилова Е.П., Немцев Д.В., Козлов

76. B.М. Получение из мицелиальных грибов полисахаридных комплексов и определение степени их деацетилирования //Микробиология. 1997. Т. 66. Х91.С. 84-89.

77. Тюпенко Г.И., Горбачева И.Н., Скорикова Е.Е. Электрофорез сульфата хитозана для устранения дефектов слизистой полости рта //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 238-241.

78. Тюпенко Г.И., Скорикова Е.Е., Зезин А.Б. Электрофорез хитозана при лечении заболеваний пародонта //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 241248.

79. Фельдман М.С., Ерофеев В.Т., Шляпникова М.А., Лоскучерявая Н.К., Стручкова И.В., Веселов А.П. Биологическое сопротивление полимерных композитов //Матер, конф. «Биоповреждения в промышленности». Пенза. 1993. С. 84-86.

80. Феофилова Е.П. Биологические функции и практическое использование хитина //Прикладная биохимия и микробиология. 1984. Т. 20. Вып 2.1. C. 147-160.

81. Феофилова Е.П. Клеточная стенка грибов. М.: Наука, 1983. 248 с.

82. Феофилова Е.П., Немцев Д.В., Терешина В.М., Козлов В.П. Полиами-носахариды мицелиальных грибов: новые биотехнологии и перспективы практического использования //Прикладная биохимия и микробиология. 1996. Т. 32. №5. С. 483-492.

83. Фисенко О.В. Суставы будут здоровы! //Аргументы и Факты. Здоровье. 2000. №25. С. 8.

84. Фомичев Ю.П., Пучков Ю.Н. Влияние хитозана на выведение радионуклидов из организма и рост телят //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 375-376.

85. Фридрихсберг Д.А. Курс коллоидной химии. Л.: Химия, 1984. 368.

86. Фролов Ю.Г. Курс коллоидной химии. М.: Химия, 1982. 400 с.

87. Хайруллин P.M., Ахметова И.Э., Сурина О.Б., Трошина Н.Б. Влияние хитоолигосахаридов на рост каллусов пшеницы //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 113-115.

88. Харкевич Е.С., Москаленко Т.М., Сахарова Т.Г., Федченко В.А., Жданова Н.Н. Грибостойкость хитина и хитозана: критерии ее оценки //Микология и фитопатология. 2002. Т. 36. Вып. 1. С. 48-54.

89. Червинец В.М., Бондаренко В.М., Албулов А.И., Комаров Б.А. Антимикробная активность хитозана с разной молекулярной массой //Матер. VI междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИИРО, 2001. С. 252-254.

90. Чернецкий В.Н., Нифантьев Н.Э. Хитозан вещество XXI века. Есть ли у него будущее в России? //Российский химический журнал. 1997. Т. 41. №1. С. 80-83.

91. Шур A.M. Высокомолекулярные соединения. М.: Высш. школа, 1981. -260 с.

92. Ак О., Bakir U., Guray Т. Production, purification and characterization of chitosanase from Penicillium spinulosum //Biochem. Arch. 1998. Vol. 14. №4. P. 221-225.

93. Albertson A.C., Randu B. Biodegradation of synthetic polymers the C14-method applied to polyethilenes //Proc. 3-rd Ytern. Biodegradat. Symp. Kingston. 1976. P. 743-751.

94. Calcagno A., Larrondo J., Agut M., Calvo M.A. Chitinase activity of filamentous fungi //Microbios. 1997. 92. №3370. P. 59-61.

95. Der Shyan H., Srinivasang D. Selective precipitation and removal of lipids from cheese whey using chitosan //J. Arg. and Food Chem. 1995. Vol. 43. №1. P. 33-37.

96. Dixit V.W. The effect of fungal growth on polyuretane foam //J. Sci. and Technol. 1971. V. 9. №1. P. 77-78.

97. Domsch K.H., Gams W., Anderson T.N. Compendium of soil fungi. London. N.V. Toronto Sydney: Acad. Press, 1980. 895 p.

98. Elvira C., Galardo A., San Romain J., Lopez B.A. Polimeros biodegrad-abies es medicina: Diseno estructural у desarrolo de materiales //Rev. plast. mod. 1999. Vol. 50. №511. P. 49-59.

99. Escott G.M., Hearn V.M., Adams D.J. Inducible chitinolytic system of Aspergillus fumigatus //Microbiology. 1998. Vol. 144. №6. P. 1575-1581.

100. Gamzazade A.I., Shlimak V.M., Skljar A.M., Stykova E.V., Pavlova S.A., Rogozin S.V. //Acta Polymerica. 1985. V. 36. №8. P. 421-424.

101. Gooday G.W., Trinci A.P.I. Wall structure and biosynthesis in fungi //In: The eucariotic microbial cell: Symp. 30. Cambridge: University Press, 1980. P. 3207-3251.

102. Guseva N.V. Effect of two different levels of chitosan on some immune parameters of young carp (Cyprinus carpio L.) on the background of chronic T-2-mycotoxicosis //9th Int. Conf. "Diseases Fish and Shellfish". Rhodes. 1999. P. 300.

103. Huber R., Stohr J., Hohenhaus S., Rachel R., Burgraf S., Jannasch H., Stetter K. Thermococcus chitonofagus sp. nov., a novel, chitin-degrading, hydrother-mal vent environment //Arch. Microbiol. 1995. Vol. 164. №4. P. 255-264.

104. Jeckson D.T., Saunders V.A., Gooday G.W., Humphereys A.M. Chitinase activities from yeast and hyphal calls of Candida albicans //Mycol. Res. 1996. Vol. 100. №3. P. 321-327.

105. Jennaux C., Muzarelli R.A.A. Foreword //In: Chitin. Oxford, Toronto, Sydney, N.-Y.: Pergamon Press, 1979. P. XIII.

106. Katz D., Rosenberg R.F. Hyphal wall synthesis in Aspergillus nidulans: effect of protein synthesis inhibition and osmotic shock on chitin insertion and morphogenesis//J. Bacteriol. 1971. Vol. 108. №1. P. 184.

107. Kusher D.J. Extreme environments //Contemporary microbial ecology. L.: Acad, press, 1980. P. 29-54.

108. Latzko F., Hampel W. Enzyme formation by a yeast cell wall lytic Arthro-bacter sp.: chitinolytic activity //Appl. Microbiol. Biotechnol. 1995. №44. P. 185-189.

109. Lorcks J., Pommeranz W. Биоразлагаемые полимерные композиции. Патент №19513237. Германия. МКИ 6С 08L 67/02. Опубл. 5.12.96.

110. Lowry О.Н., Rosbraigh N.J., Farr A.L. et all. Protein measurement with the folinphenol reagent IIJ. Biol. Chem. 1951. 193. №2. P. 265-275.

111. Miller G.L. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar//Anal. Chem. 1959. V. 31. №3. P. 426-428.

112. Muzarelli R.A.A. Chitin. Oxford, N.-Y., Toronto, Sydney, Paris, Frankfurt: Pergamon Press, 1977. 309 p.

113. Okada Т., Kubo I. Fungus useful for chitin production. Патент 5905035 США, МПК (6) С 12Р 1/ 02, С 12 3 19/04. Asahi Kasel Kogyo K.K. №08/839607. Заявл. 15.04.97. Опубл. 18.05.99. НПК 435/254.1.

114. Okajima S., Kinouchi Т., Mikami Y., Ando A. Purification and some properties of a chitosanase of Nocardioides sp. //J. Gen. and Appl. Microbiol. 1995. Vol. 41. №4. P. 351-357.

115. Onuma Т., Funaguma Т., Нага А. Хитиназа из листьев Турка latifolia //Meijo daigaku nogakubu dakujutshu hokoku = Sci. Repts Fac. Agr. Meijo Univ. 2000. №36. P. 1-9.

116. Palmer R.J., Siebert Jorg, Hirsch P. Biomass and organic acids in sandstone of a weathering building: production by bacterial and fungal isolates //Microbiol. Ecol. 1991. V. 21. №3. P. 253-266.

117. Park Jong-Chul, Matsuoka Hideaki, Takatori Kosuke, Kurata Hiroshi. Adaptation of Aspergillus niger to acidic conditions and its relationship to salt stress and miconazole //Mycol. Res. 1996. 100.№7. P. 869-874.

118. Raper K.B., Thom Ch., Fennel D.I. A manual of the Penicillia. Baltimore: Williams and Wilkins, 1949. 875 p.

119. Reddy M.V. Bhaskara, Arul Joseph, Ait-Barka Essaid, Andres Paul, Richard Claude, Castaigne Francois. Effect of chitosan on growth and toxin production by Alternaria alternataf. sp. lycopersici //Biocontr. Sci. and Technol. 1998. 8. №1. P. 33-43.

120. Saito Y., Sugiyama J., Okano T. What do the characteristic similarities of cellulose and chitin mean //IAWA Journal. 1994. Vol. 15. P. 219.

121. Savitha J., Subramanian C.V. Composition and enzyme activities in Asper-, gillus flavipes grown on crude petroleum oil and glucose //Curr. Sci. (India).1995. 69. №7. P. 596-600.

122. Selvan R. Effect of growth substrates on phosphatases of Aspergillus nidu-laris under head stress //Indian J. Exp. Biol. 1980. V. 18. №4. P. 365-368. (Цит. По РЖ Биохимия. 1980. 24X147).

123. Seuchi Т. Oral preparation for release in lower digestive tracts //High Polym. Japan. 1995. 55. №3. P. 112-115.

124. Shimahara K., Taciguchi Y., Kobayachi T. //Proc. From 4-th Int. Conf. On Chitin and Chitosan /Eds. Skjak-Braek G., Anthousea Т., Saedfod P. London,

125. N.-Y.: Elsevier Appl. Sci., 1989. P. 171.

126. Shoji O., Tadatosi K., Yuzuru M., Akikazu A. Purification and some properties of chitosanase of Nocardioides sp. II J. Gen. and Appl. Microbiol. 1995. Vol. 41. №4. P. 351-357.

127. Sietsma J.H., Wosten H.A.B., Wessels J.G.H. Cell wall growth and protein secretion in fungi //Can. J. Bot. 1995. Vol. 73. Suppl. 1 Sec. A-D. P. 388-395.

128. Simonovicova A., Francova E., Vybohova M. Microfungi of acidificated region of Banska Stiavnica Sobov //Miner. Slov. 1995. 28. №5. P. 355-356.

129. Tokuyasu K., Hayashi K. Characterization of a unique enzyme (deacetylase) for preparation of chitosan from chitin //Beijerinck Centenn. "Microb. Physiol, and Gene Regul.: Emerg. Princ. and Appl.". 1995. P. 193-194.

130. Traderio G., Albo S., Zanardini E., Sorlini C. Research on chromatic alternation of marbles from the fountain of Villa Litta //6th Int. Symp. Microb. Ecol. Barselona. 1992. P. 291.

131. Ulhoa C.J., Peberdy J.F. Trichoderma harzianum. Regulation of chitinasesynthesis in Trichoderma harzianum //J. Gen. Microbiol. 1991. Vol. 137. №9. P. 2163-2169.

132. Wang G.H. Microcapsules / microspheres related to chitosan // J. Food Prot. 1992. 55. №11. P. 916-919.

133. Weir S., Ramsden D.K., Hugher J., Le Thomas F. The strength of yeast floes produced by the cationic flocculant chitosan: Effect of suspension medium and of pretreatment with anionic polyelektrolytes //Biotechnol. Techn. 1994. Vol. 8. №2. P. 129-132.

134. Yazadani-Pedram M., Lados A., Retuert J. On the modification of chitosan throught grating //J. Macromol. Sci. A. 1995. 32. №5. P. 1037-1047.