Эффективность протоколов вспомогательных репродуктивных технологий у женщин с бесплодием и наличием репродуктивно значимых аутоантител тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Сафарян Галина Хачиковна

• Сафарян Галина Хачиковна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Сафарян Галина Хачиковна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные подходы к оценке роли носительства аутоантител в развитии репродуктивных неудач

1.2. Эффективность протоколов ЭКО (ЭКО/1С81) при носительстве аутоантител

1.3. Современные стратегии повышения эффективности программ ВРТ при носительстве аутоантител

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Анализ клинических и анамнестических данных

3.2. Гормональный метод

3.3. Ультразвуковое исследование

3.4. Протокол контролируемой овариальной стимуляции

3.5. Техника оплодотворения и культивирование эмбрионов

3.6. Перенос эмбрионов в полость матки

3.7. Ведение посттрансферного периода

3.8. Диагностика беременности

3.9. Иммуноферментный метод анализа фолликулярной жидкости

3.10. Оценка эффективности протоколов ЭКО (ЭКО/1С81)

3.11. Статистический анализ

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Клинико-анамнестическая характеристика пациентов обследованных групп

4.2. Результаты гормонального исследования женщин перед началом программы ЭКО (ЭКОЯС81)

4.3. Результаты исследования содержания аутоантител методом иммуноферментного анализа в фолликулярной жидкости у пациенток в программе ЭКО (ЭКОЯС81)

4.4. Результаты исследования показателей овариального резерва в зависимости от содержания аутоантител в фолликулярной жидкости у пациенток в программе ЭКО (ЭКОЯС81)

4.5. Показатели эффективности контролируемой овариальной стимуляции в зависимости от содержания аутоантител в фолликулярной жидкости у пациенток в программе ЭКО (ЭКОЯС81)

4.6. Разработка математической модели прогнозирования субоптимального ответа у женщин с бесплодием в программах ЭКО (ЭКОЯС81)

4.7. Показатели параметров оплодотворения и раннего эмбриогенеза у пациенток обследованных групп в программах ЭКО (ЭКОЯС81)

4.7.1. Оценка количества и доли зрелых ооцитов у пациенток обследованных групп в программах ЭКО (ЭКОЯС81)

4.7.2. Оценка количества двупронуклеарных зигот и эффективности оплодотворения ооцитов у пациенток обследованных групп в программах ЭКО (ЭКОЯС81)

4.7.3. Оценка эмбрионов оптимального качества на 3 день культивирования у пациенток обследованных групп в программах ЭКО (ЭКОЯС81)

4.7.4. Оценка эмбрионов оптимального качества на 4 день культивирования у пациенток обследованных групп в программах ЭКО(ЭКО/1СБ1)

4.7.5. Оценка эмбрионов оптимального качества на 5 день культивирования у пациенток обследованных групп в программах ЭКО (ЭКО/ТСБТ)

4.8. Показатели клинической эффективности лечения бесплодия у пациенток

обследованных групп в программах ЭКО (ЭКО/1СБ1)

4.8.1. Разработка математической модели прогнозирования отсутствия клинической беременности на цикл лечения бесплодия

4.8.2. Разработка математической модели прогнозирования отсутствия живорождения на цикл ЭКО(ЭКО/1СБ1)

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

Бесплодие и повторные неудачи после программ ЭКО (ЭКО/ICSI) при аутоимунных заболеваниях и/или носительстве аутоантител являются предметом пристального внимания и повышенного интереса различных исследователей [58, 77, 97, 99, 105, 138, 146, 150, 157, 190, 213,]. Предполагается, что иммунологические факторы оказывают пагубное влияние на различные стадии репродуктивного процесса - фолликулогенез [31, 41, 58, 60, 61, 106, 150, 188], оплодотворение и эмбриогенез [43, 109, 199], а также на имплантацию [35, 62, 63, 76, 77, 106, 130, 134, 140, 141, 183, 219]. Было показано, что для женщин с диагнозом идиопатического бесплодия характерно определение повышенных уровней сывороточных антифосфолипидных антител, антинуклеарных антител и аутоантител к ткани щитовидной железы [44, 58, 59, 66, 107, 179, 198, 213]. Также результаты современных исследований позволили установить взаимосвязь показателей клеточного иммунитета и повторные неудачи имплантации в программах ЭКО (ЭКО/1СБ1) при аутоиммунных заболеваниях [36, 72]. Исходя из вышеперечисленного, становится очевидным существование разнообразных механизмов воздействия аутоантител на репродуктивный потенциал женского организма.

Рядом авторов были получены данные о снижении результативности программ по лечению бесплодия при наличии циркулирующих в крови аутоантител [44, 58, 76, 77, 107, 125, 207, 213]. Однако, несмотря на многочисленные углубленные исследования в области репродуктивной иммунологии, до настоящего времени сведения о непосредственном влиянии различных аутоантител на репродуктивную функцию женщины, а также на эффективность программ экстракорпорального оплодотворения неоднозначны. Внедрение в клиническую практику методов ВРТ обеспечило реальную возможность изучения продуцируемых в организме человека различных

аутоантител путем исследования фолликулярной жидкости (FF), полученной в день забора созревших ооцитов. Именно фолликулярная жидкость формирует микроокружение ооцита и, соответственно, биохимические характеристики последней играют решающую роль в определении качества яйцеклетки, потенциала ее оплодотворения и дальнейшего развития эмбриона. Согласно результатам ряда работ, существует прямая корреляционная зависимость между содержанием отдельных определяемых аутоантител в сыворотке крови и в фолликулярной жидкости, что может свидетельствовать в пользу их влияния на самые ранние этапы репродуктивного процесса [39, 107, 131, 183, 207].

В то же время исследования, посвященные оценке значения определяемых аутоантител в фолликулогенезе при контролируемой овариальной стимуляции гонадотропинами в циклах ЭКО (ЭКО/ICSI) и взаимосвязи иммунологических факторов с показателями эмбриологической и клинической эффективности программ ВРТ в дальнейшем, единичны, носят противоречивый характер и ограничены определением в фолликулярной жидкости, как правило, лишь одного типа аутоантител.

Все вышеперечисленное диктует необходимость поиска и систематизации репродуктивно значимых аутоиммунных маркеров, определяющих снижение женской фертильности и/или неудачи программ экстракорпорального оплодотворения, имея в виду разработку стратегии персонализированной тактики преодоления бесплодия.

Цель исследования:

Определение влияния носительства репродуктивно значимых аутоантител на эффективность и прогноз лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий.

Задачи исследования

1. Определить уровни аутоантител к тиреоидной пероксидазе (АТ-ТРО), к тиреоглобулину (АТ-ТG), к фосфатидилинозитолу (anti-PI), к фосфатидилсерину (anti-PS), к кардиолипину (anti-CL), к Бета-2 гликопротеину 1 (Anti-b2GPI), антиядерных антител (ANA), к ламинину-1 (anti-LAM1), к ароматазе (anti-ARO), к

а-энолазе 1 ^^-£N01), к хорионическому гонадотропину-бета (anti-CGb), к селен-связывающему белку 1 (апй^ВР1), к мезотелину (anti-MSLN) в фолликулярной жидкости и изучить частоту выявления аутоантител у женщин с бесплодием, вступающих в программы ЭКО (ЭКО/1СБ1).

2. Определить наличие взаимосвязи содержания аутоантител к тиреоидной пероксидазе и тиреоглобулину в сыворотке крови и в фолликулярной жидкости среди носительниц антитиреоидных аутоантител в программах ЭКО (ЭКО/1СБ1).

3. Изучить основные показатели овариального резерва и овариальный ответ на стимуляцию овуляции в протоколах ВРТ у женщин с бесплодием и носительством репродуктивно значимых аутоантител.

4. Изучить основные эмбриологические показатели программ ЭКО (ЭКО/1СБ1) у женщин с бесплодием в зависимости от наличия репродуктивно значимых аутоантител.

5. Изучить клиническую эффективность протоколов ЭКО (ЭКО/1СБ1) у женщин с бесплодием и носительством репродуктивно значимых аутоантител.

6. Разработать прогностическую модель клинической эффективности контролируемой стимуляции яичников в программах ЭКО (ЭКО/1СБ1) у пациенток с бесплодием и наличием репродуктивно значимых аутоантител.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

В настоящей работе подтверждено отрицательное влияние носительства аутоантител на эффективность программ экстракорпорального оплодотворения у женщин с бесплодием. Впервые проведено исследование содержания широкой панели аутоантител в фолликулярной жидкости стимулированных яичников, и определена частота их встречаемости среди женщин с бесплодием. Выявлена достоверная сопряженность уровня определяемых в фолликулярной жидкости аутоантител со снижением основных параметров, характеризующих овариальный резерв.

Впервые у пациенток с бесплодием и наличием репродуктивно значимых аутоантител выполнен сравнительный анализ основных показателей эффективности овариальной стимуляции гонадотропинами, показателей раннего эмбриогенеза человека, а также клинических исходов программ экстракорпорального оплодотворения. Впервые выявлены прогностически наиболее значимые аутоиммунные маркеры, определяющие снижение эффективности овариальной стимуляции а также клинической эффективности программ ВРТ.

Впервые установлены пороговые значения содержания аутоантител к тиреоидной пероксидазе в сыворотке крови - 305,0 МЕ/мл и в фолликулярной жидкости - 105,0 МЕ/мл, а также уровня аутоантител к кардиолипину более 5,1 МЕ/мл, превышение которых сопровождается снижением количества полученных в день трансвагинальной пункции ооцитов. Впервые выявлена зависимость доли зрелых ооцитов и эффективности оплодотворения от содержания в фолликулярной жидкости аутоантител к ароматазе. Определено неблагоприятное влияние увеличения концентрации аутоантител к тиреоидной пероксидазе и кардиолипину в фолликулярной жидкости на показатели раннего эмбриогенеза человека in vitro. Впервые установлены пороговые значения аутоантител к тиреоидной пероксидазе в сыворотке крови, характеризующие снижение клинической эффективности протоколов ЭКО (ЭКО/ICSI) на начатый цикл лечения.

Практическая значимость работы

Определены аутоиммунные маркеры, позволяющие прогнозировать исход программ ЭКО (ЭКО/ICSI) у женщин репродуктивного возраста с бесплодием. Доказано, что в прогнозе эффективности контролируемой овариальной стимуляции имеет значение содержание в фолликулярной жидкости стимулированных яичников аутоантител к тиреоидной пероксидазе и кардиолипину. Учитывая достоверную высокую корреляционную зависимость содержания аутоантител к тиреоидной пероксидазе в сыворотке крови и

фолликулярной жидкости, определены также их пороговые сывороточные значения в прогнозировании овариального ответа на стимуляцию. Показано достоверное снижение ответа яичников на овариальную стимуляцию при значениях аутоантител к тиреоидной пероксидазе в сыворотке крови выше 305 МЕ/мл, в фолликулярной жидкости более 105,0 МЕ/мл, а также при фолликулярных значениях аутоантител к кардиолипину, превышающих 5,1 МЕ/мл.

С помощью логистического регрессионного анализа создана математическая модель прогноза клинической беременности в программах ВРТ для женщин-носительниц репродуктивно значимых аутоантител. Показано, что повышение значений аутоантител к тиреоидной пероксидазе в сыворотке крови более 305,0 МЕ/мл, в фолликулярной жидкости более 105,0 МЕ/мл, является неблагоприятным прогностическим фактором для достижения клинической беременности после программы ЭКО.

Основываясь на данных логистического регрессионного анализа, выявлено достоверное снижение частоты родов и повышение частоты прерывания индуцированной беременности раннего срока при сывороточных значениях аутоантител к тиреоидной пероксидазе выше 125,0 МЕ/мл, в связи с чем наличие у пациентов сывороточных значений, превышающих данный порог, может рассматриваться для решения вопроса о целесообразности переноса эмбрионов в «свежем» цикле программы экстракорпорального оплодотворения.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Наличие диагностических титров репродуктивно значимых аутоантител в фолликулярной жидкости у пациенток с бесплодием достоверно снижает интенсивность овариального ответа на проводимую стимуляцию, а также параметры раннего эмбриогенеза человека в программах ЭКО (ЭКО/1С81), выражающиеся получением меньшего числа ооцитов, доли зрелых ооцитов, снижением показателей эффективности оплодотворения, количества двупронуклеарных зигот, вероятности получения морфологически качественных эмбрионов на 3 и 4 сутки культивирования, доли и количества бластоцист оптимального качества.

2. У пациенток-носительниц репродуктивно значимых аутоантител снижение клинической эффективности, выражающейся в частоте наступления клинической беременности после программ ВРТ, обусловлено надпороговым содержанием АТ-ТРО в фолликулярной жидкости выше 105,0 МЕ/мл и в сыворотке крови более 305,0 МЕ/мл.

3. Логистическая регрессионная модель, основанная на определении концентрации АТ-ТРО в сыворотке крови, с чувствительностью 79,5% и специфичностью 71,4% позволяет достоверно прогнозировать вероятность родов живым плодом при значениях аутоантител к тиреоидной пероксидазе в сыворотке крови менее 125,0 МЕ/мл, что является основанием рекомендовать перенос эмбриона после достижения целевого уровня аутоантител в сыворотке крови менее указанного порогового значения.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эффективность протоколов вспомогательных репродуктивных технологий у женщин с бесплодием и наличием репродуктивно значимых аутоантител»

Апробация работы

Основные материалы диссертации представлены на IV международной научной школе-конференции «Академия аутоиммунитета» Санкт-Петербург, 2021 г.; II Общероссийской научно-практической конференции для акушеров-гинекологов "Оттовские чтения", Санкт-Петербург, 2020 г.; Международной

еженедельной онлайн конференции «Шенфельдовская пятница» №42, Тель-Авив, Израиль, 2021 г.; Международной еженедельной онлайн конференции «Шенфельдовская пятница» №60, Тель-Авив, Израиль, 2021 г.; XIV Региональном научно-образовательном форуме «Мать и Дитя» и Пленум Правления РОАГ, Москва, 2021 г.; XXII Всероссийском научно-образовательном форуме «Мать и Дитя» и Пленум Правления РОАГ, 2021 г.; Научно-практической школе по репродуктологии, Санкт-Петербург, 2021 г.; Международной конференции, посвященной актуальным вопросам клинического внедрения современных биотехнологий в репродуктивную медицину «Медицина для будущего. От планирования к родам», Санкт-Петербург, 2021 г.; III Общероссийской научно-практической конференции для акушеров-гинекологов "Оттовские чтения", Санкт-Петербург, 2021 г.; Конкурсе молодых учёных в рамках научно-практической конференции для акушеров-гинекологов «Репродуктивная Медицина: взгляд молодых - 2021», Санкт-Петербург, 2021 г.; Научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы акушерства, гинекологии и репродукции глазами молодых ученых», Самара, 2021 г.; Международной еженедельной онлайн конференции «Шенфельдовская пятница» №92, Тель-Авив, Израиль, 2022 г.; 5-ом Всемирном онлайн конгрессе ЭКО, 2022 г.; II научно-практической конференции с международным участием «Здоровье женщины, плода, новорожденного», Санкт-Петербург, 2022 г.

Разработанные модели для прогнозирования ответа яичников на контролируемую овариальную стимуляцию и исходов клинической эффективности программ экстракорпорального оплодотворения применяются в учебной программе кафедры акушерства, гинекологии и репродуктологии Медицинского факультета Санкт-Петербургского государственного университета и в клинической практике отделения вспомогательных репродуктивных технологий ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д. О. Отта».

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы, из которых 3 входят в перечень изданий, рекомендованных ВАК, в том числе 1 статья опубликована в изданиях, рецензируемых в международной базе данных Scopus.

Личный вклад автора в исследование

Все этапы научного исследования, включая выбор темы, разработку цели и задач, сбор клинического материала, проведение иммуноферментного анализа фолликулярной жидкости, статистическую обработку полученных результатов, их интерпретацию и обобщение, были выполнены непосредственно автором.

Все этапы лечения бесплодия методами ЭКО (ЭКО/ICSI) на базе отдела Вспомогательных Репродуктивных Технологий ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д. О. Отта» г. Санкт-Петербург (руководитель отдела - д. м. н., профессор Гзгзян А. М.) сопровождались личным участием автора.

Структура и объем диссертации

Текст рукописи изложен на 136 страницах машинописного текста. Состоит из оглавления, введения, литературного обзора, глав с описанием материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списков сокращений и литературы. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 19 таблицами. В библиографический список включено 25 отечественных и 199 зарубежных источников.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные подходы к оценке роли носительства аутоантител в

развитии репродуктивных неудач

Известно, что аутоиммунный тиреоидит, представляющий основную причину развития гипотиреоза, негативно отражается на женской фертильности и сопровождается нарушениями менструального цикла, а также бесплодием и невынашиванием беременности [21, 53]. Наряду с характерной ультразвуковой картиной и повышением концентрации тиреотропного гормона в сыворотке крови диагностическим маркером данного недуга являются циркулирующие в крови аутоантитела против тиреоидной пероксидазы (АТ-ТРО) и тиреоглобулина (АТ-ТG) [16]. По различным данным распространенность аутоиммунного тиреоидита среди женщин с идиопатическим бесплодием составляет около 10% [16, 213]. Немаловажно отметить, что изолированное носительство аутоантител к ткани щитовидной железы среди женщин репродуктивного возраста составляет, в среднем, 8-14% и, зачастую, не диагностируется в связи с отсутствием у больных характерных признаков заболевания [174].

Хорошо известно, что манифестный гипотиреоз является фактором риска снижения фертильности. При этом особенно актуальным может быть исследование возможного значения для репродуктивной системы женщин изолированного носительства антитиреоидных аутоантител в случаях, когда причина бесплодия остается неизвестной. В мировой литературе имеется большое количество работ, посвященных изучению механизмов влияния изолированного носительства аутоантител к ткани щитовидной железы на репродуктивный потенциал женского организма [16].

Существуют несколько предполагаемых механизмов воздействия антитиреоидных антител на показатели овариального резерва. Аутоиммунные тиреопатии могут быть частью аутоиммунного полиэндокринного синдрома II с поражением других эндокринных желез, таких как синдром Карпентера (сочетание

с сахарным диабетом I типа) и синдром Шмидта (сочетание с первичным гиперкортицизмом) [16, 61, 97]. Также имеются данные о том, что после исключения из исследования женщин с установленными причинами сниженного овариального резерва, встречаемость носительства АТ-ТРО значительно различается в группах со сниженным (22,7%), нормальным (14,0%) и высоким (10,3%, р<0,05) овариальным резервом [129, 149].

Учеными из Массачусетского университета была проведена оценка взаимосвязь между функциональным состоянием щитовидной железы, носительством антитиреоидных антител и показателями овариального резерва среди 378 женщин с бесплодием неясного генеза [16]. По результатам работы авторы выявили связь между сниженной концентрацией свободного трийодтиронина (1Г3) и сниженным количеством антральных фолликулов (р = 0,009) [16]. Зависимость между уровнями ТТГ, Т4, свободного тироксина (1Г4) и фолликулярным пулом выявлена не была. Касательно носительства аутоантител, среди женщин-носительниц АТ-ТРО отмечено меньшее число антральных фолликулов (среднее расхождение — 2,3 фолликула; 95 % ДИ 3,8-0,5; р = 0,01). Немаловажно также отметить, что функциональный статус щитовидной железы и наличие аутоантител не оказывали влияния на уровень фолликулостимулирующего гормона, определяемого на 3-й день менструального цикла. Таким образом, авторы указали на прямую зависимость только между концентрацией 1Г3 и носительством АТ-ТРО с количеством антральных фолликулов [16, 59].

Другая теория, предложенная МоП:е1еопе и соавт. (2011 г.), объясняет причину снижения фертильности у женщин с АИТ присутствием АТ-ТО и АТ-ТРО в фолликулярной жидкости [16, 107]. Получены данные о положительной корреляционной зависимости сывороточных значений антитиреоидных аутоантител и значениями в фолликулярной жидкости, что указывает на их способность свободно проходить через гематофолликулярный барьер [107]. По мнению исследователей аутоантитела к щитовидной железе способны оказывать прямое цитотоксическое действие на растущий фолликул и негативно влиять на

качество будущего эмбриона за счет взаимодействия с zona pellucida, нарушая ее функциональную роль, что существенно снижает частоту оплодотворения, число эмбрионов оптимального качества и, соответственно, частоту наступления беременности [16]. О прямом негативном влиянии аутоантител к ткани щитовидной железы на качество эмбриона впервые сообщили в 2000-х гг. Так, Lee и соавт. указали на обнаружение антитиреоидных аутоантител на поверхности предимплантационного эмбриона [143]. О содружественных результатах, характеризующихся снижением качества эмбрионов, полученных в результате программ ВРТ, среди женщин-носительниц АТ-ТРО независимо от уровня ТТГ заявили Werghofer и соавт [199]. Крайне важно подчеркнуть при этом ключевое влияние антитиреоидных аутоантител, а не гипотиреоза, на основные морфологические характеристики полученных эмбрионов.

Возможно, что антитиреоидные антитела оказывают прямое эмбриотоксическое влияние на трофобласт, препятствуя нормальному течению беременности [16, 210, 193]. Об этом свидетельствуют результаты экспериментальных исследований: у мышей, иммунизированных человеческим IgG-TG и IgG-TPO, наблюдалось патологическое иммунное распознавание вышеуказанных и плацентарных антигенов АТ-ТГ, АТ-ТРО, что сопровождалось снижением массы плодов и плацент, приводя к задержке развития беременности [16, 210, 211].

Повышенный риск бесплодия, неудачные исходы циклов ЭКО и ранние репродуктивные потери объясняют повышением активности NK и NK-подобных клеток в крови женщин, пораженных аутоиммунным тиреоидитом [16, 72, 168]. Иммунологический статус женщин с АИТ несомненно изменен за счет увеличения числа NK и NK-подобных клеток, потенциала их цитотоксичности и преобладания проинфламматорных реакций, что отражается на репродуктивном потенциале [16].

На сегодняшний день широко обсуждается роль антител к фосфолипидам (АФА) на этапе имплантации эмбриона, при беременности раннего срока, в том числе, с исходом в ранние репродуктивные потери и/или многократные неудачи программ экстракорпорального оплодотворения [37, 177].

Антифосфолипидный синдром (АФС) является наиболее распространенной приобретенной тромбофилией и характеризуется наличием аутоантител к кардиолипину (апй-СЬ), антител к р2 гликопротеину 1 (ап1>Ь2ОР1) и волчаночному антикоагулянту (ЬЛ) [45]. Средний возраст дебюта заболевания составляет 31 год с соотношением больных женского и мужского пола 5:1 [45, 203]. АФС ассоциируется с системной красной волчанкой (СКВ) примерно в 35% случаев, у 5 % пациентов наблюдается волчаночноподобный синдром, у 5% -другие иммунопатологические заболевания, только у 55% пациентов наблюдается изолированный АФС [149].

Хорошо известными осложнениями беременности при антифосфолипидном синдроме являются невынашивание беременности, преэклампсия, задержка внутриутробного развития плода а также антенатальная гибель плода. [5, 50, 51, 52]. При этом данные о роли антифосфолипидных антител в развитии бесплодия и неудачах программ экстракорпорального оплодотворения на сегодняшний день неоднозначны. Гипотеза о пагубном влиянии антифосфолипидных антител на женскую фертильность впервые была выдвинута более 30 лет назад [5, 117, 149]. В настоящее время известно, что до 9% женщин с анамнезом многократных неудач программ экстракорпорального оплодотворения имеют более одного вида циркулирующих антифосфолипидных аутоантител [179]. По данным других ученых встречаемость АФА достигает 60% у женщин с диагнозом идиопатического бесплодия [5, 66]. Еще три десятилетия назад в экспериментальном исследовании было продемонстрировано, что у мышей, ранее не иммунизированных антителами к кардиолипину, после введения иммуноглобулинов класса 1§М и к вышеуказанному, отмечалась отсрочка в наступлении оплодотворения и клинической беременности, в то время как скорость резорбции эмбрионов была повышена [144].

Широко обсуждается вопрос о влиянии антифосфолипидных антител на процесс имплантации эмбриона. Механизмы, лежащие в основе дефекта плацентации были продемонстрированы в ряде экспериментальных исследований. Было обнаружено, что культивирование клеток эндометрия человека с анти- Р2ОРТ

IgG, полученными от пациенток с антифосфолипидным синдромом, приводило к снижению выработки VEGF и, соответственно, ингибированию роста сосудов эндометрия [47].

По данным Di Simone и соавт. отмечено отставание дифференцировки синцитиотрофобласта при культивировании клеток трофобласта физиологически протекающей беременности с антифосфолипидными аутоантителами класса IgG, что приводит к снижению выработки хорионического гонадотропина [9, 48].

Добавление антифосфолипидных антител класса IgG к культуре клеток цитотрофобласта приводило к подавлению экспрессии a-1-интегрина и VE-кадгерина и повышению экспрессии a-5-интегрина и E-кадгерина. Нарушение обеспечивающих инвазию трофобласта процессов описано на культуре клеток цитотрофобласта после добавления IgG АФА, полученных от пациентов с АФС, за счет подавления экспрессии альфа 1 интегрина и VE-кадгерина и активации экспрессии альфа 5 интегрина и Е-кадгерина [2, 46, 136]. Все вышеперечисленное приводит к снижению инвазии трофобласта, нарушению процессов ангиогенеза, клинически проявляющимся прерыванием беременности раннего срока [2, 116, 169].

Рядом экспериментальных работ было показано непосредственное эмбриотокисческое влияние антифосфолипидных антител. Так, кокультивирование мышиных эмбрионов в среде, содержащей IgG АФА, сопровождалось задержкой их развития или даже гибелью [154]. В другом исследовании была отмечена потеря эмбрионами способности к имплантации после культивирования в среде с антифосфолипидными антителами и переноса мышам, не иммунизированным АФА [89]. Более того, наличие у женщин с бесплодием, проходящих лечение методами экстракорпорального оплодотворения, повышенных титров антикардиолипиновых аутоантител сопровождалось нарушением качества предимплантационного эмбриона по сравнению с женщинами, негативными на АФА (50% vs 20%) [125].

Еще одной причиной неудач имплантации среди женщин-носительниц антифосфолипидных аутоантител в настоящее время считается повышение

цитотоксичности NK-клеток. Повышение активности указанного звена иммунной системы среди пациенток с бесплодием в программах экстракорпорального оплодотворения было отмечено у 88% носительниц аутоантител к фосфатидилэтаноламину и фосфатидилсерину относительно 25% женщин группы сравнения, что может быть объяснением многократных неудач имплантации [36]. При этом, существуют и противоположные данные. В исследовании, проведенном Mariee и соавт., результаты иммуногистохимического исследования эндометрия женщин с повторными неудачами программ ВРТ подтвердили отсутствие зависимости количества маточных NK-клеток от содержания аутоантител к ткани щитовидной железы и антифосфолипидных аутоантител [200].

Имеются сообщения об обнаружении АФА не только в крови, но и в фолликулярной жидкости. В своем клиническом исследовании Matsubayashi и соавт. проводили определение содержания антифосфолипидных аутоантител класса IgG в фолликулярной жидкости женщин-носительниц АФА с анамнезом повторных неудач программ ЭКО. Авторы сообщили о достоверной корреляционной зависимости содержания определяемых маркеров в крови и фолликулярной жидкости [131].

В настоящее время имеется ограниченное количество работ, оценивающих функцию яичников при носительстве антифосфолипидных антител. Относительно недавно, в 2016 году, Vega и соавт. обнаружили, что у 14,2% женщин из исследуемой группы при наличии по крайней мере одного вида АФА уровень АМГ был значительно снижен [41]. Однако, большим недостатком данной работы является отсутствие информации об активности аутоиммунного процесса среди испытуемых женщин, т.е. находились ли они в активной стадии заболевания или являлись бессимптомными носителями антител. Авторами другого перекрестного исследования сообщалось о достоверно меньшем количестве антральных фолликулов, определяемых при ультразвуковом сканировании, среди пациенток с АФС (<5 фолликулов) относительно группы контроля (<10 фолликулов), несмотря на сопоставимые между группами сывороточные уровни АМГ [172].

Еще одним маркером репродуктивных неудач принято считать антинуклеарные антитела. По своей природе они представляют большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра и вовлечены в патогенез нескольких системных аутоиммунных заболеваний [56, 78, 96, 159, 175, 223].

Данные, представленные в литературе, указывают на то, что наличие АКА также связано с иммунологически индуцированным бесплодием. Так, рядом исследований показано, что встречаемость антинуклеарных аутоантител среди женщин, вступающих в циклы экстракорпорального оплодотворения, достигает 20 - 28,7% [44, 198]. Кроме того, по различным данным распространенность АNА составляет 35,1% среди женщин с повторными неудачами ЭКО [135] и 27% среди женщин с наружным генитальным эндометриозом [165]. В некоторых работах была выявлена взаимосвязь данных маркеров с неблагоприятными репродуктивными исходами, включая привычное невынашивание беременности [151] и повторные неудачи программ ЭКО и переноса эмбрионов [63, 76, 140, 141]. Тем не менее, основные патогенетические механизмы, приводящие к этому, на сегодняшний день до конца не изучены. Есть данные, указывающие на положительную корреляцию между сывороточными уровнями АNА и фолликулярными в группе женщин, пораженных аутоиммунным недугом. При этом, отмечается отрицательная корреляция вышеупомянутых с количеством морфологически качественных эмбрионов, полученных в циклах ЭКО/ICSI [43].

В дополнение к этому, в экспериментальном исследования in vivo на мышиных эмбрионах, коинкубация которых со стадии зиготы проводилась с выделенными и очищенными иммуноглобулинами ANА IgG, отчетливый флуоресцентный сигнал был обнаружен непосредственно в самих эмбрионах. Более того, отмечалось серьезное отставание в развитии некоторых эмбрионов или даже их гибель [152, 154]. Однако, так как zona pellucida не содержит ядерных антигенов и фосфолипидов, остается неизвестным специфический эпитоп для данных антител. В связи с этим, ученые предполагают, что мишенью антител может быть неизвестный кофактор глицериновой или белковой природы [194]. Еще

в одной экспериментальной работе после микроинъекции антицентромерных антител IgG в ооциты крыс отмечалась остановка деления хромосом с последующим арестом в интерфазе мейоза и профазе митоза [167]. Все вышеперечисленное позволяет предположить, что ANA способны оказывать прямое токсическое действие на яйцеклетку и развивающийся эмбрион, приводя в итоге к снижению фертильности.

Все чаще в научных кругах обсуждается вопрос о влиянии антител против ламинина-1 на репродуктивный потенциал женского организма. Впервые описанный в 1978 году, ламинин представляет собой мультифункциональный адгезивный гликопротеин базальных мембран и тонкого внеклеточного матрикса и состоит из a-, ß-, и у-цепочек [25, 81, 149]. Известно, что в клетках человеческих эмбрионов на ранних стадиях развития ламинин-1 увеличивает экспрессию коллагеназы IV типа, усиливая адгезию трофобласта в периимплантационный период [161]. В экспериментальном исследовании на мышиных эмбрионах на стадии развития бластоцисты обнаружено, что ламинин-1 локализуется во внутренней клеточной массе и в базальной мембране трофэктодермы [83, 215]. В первом триместре беременности у человека a-1 цепь ламинина обнаруживается в базальной мембране трофобласта и непосредственно контактирует с клетками вневорсинчатого трофобласта. Во втором триместре эта цепь селективно определяется в месте непосредственного контакта ворсинчатой базальной мембраны с пролиферирующими островками трофобластических клеток [149, 156]. Таким образом, ламинин-1 может играть важную роль во всех процессах, связанных с имплантацией эмбриона, плацентацией и эмбриогенезом.

Аутоантитела к ламинину-1 были впервые выделены в 1989 году из сывороток приматов с нарушением репродуктивной функции, а при культивировании эмбрионов крыс с данной сывороткой, в последних отмечались аномалии развития [71, 173]. Далее было продемонстрировано, что введение здоровым обезьянам полученных от мышей ламинина-1 или ламинин-содержащих пептидов (YIGSR или RGD) приводило к развитию бесплодия и/или самопроизвольному прерыванию беременности среди испытуемых животных [160,

184]. Позднее были созданы экспериментальные модели, в которых у животных после введения мышиного ламинина-1 определялись высокие титры антител к данному антигену и отмечена тенденция к неудачным исходам беременности среди испытуемых животных, а именно повышение частоты резорбции плодов, снижение массы плаценты и веса эмбрионов для данного срока беременности [28, 133].

Роль антител к ламинину-1 в развитии репродуктивных неудач также активно изучалась у людей. В начале 2000-х гг. в своем клиническом исследовании Inagaki и соавт. сообщили о том, что анти-ламинин-1 IgG были выявлены у 31,1% женщин с рецидивирующими потерями беременности раннего срока [130]. В последующем частота живорождений в данной группе пациенток была значительно ниже относительно аналогичного показателя в группах сравнения (р<0,05). Исходя из этого, авторы предположили, что антитела IgG к ламинину-1 способны пагубно влиять на самых ранние этапы беременности в период имплантации эмбриона, эмбриогенеза и активного ангиогенеза в плаценте [149].

В мировой литературе существуют также данные, указывающие на связь носительства антител к ламинину-1 с бесплодием, особенно вызванным эндометриозом (29% пораженных женщин) [33, 39]. Присутствие ап1>ЬАМ1 в испытуемой группе достоверно коррелировало с наличием эндометриоза. При сравнении средних значений содержания антител в группах женщин с бесплодием и выявленным эндометриозом и без эндометриоза, более высокие показатели отмечались в основной группе (1,1 +/- 1,2 МЕ/мл) относительно группы сравнения (0,5 +/- 0,3 МЕ/мл) (р<0,05) [33].

В настоящее время также известно, что ламинин-1 наряду с фибронектином принимает активное участие в созревании ооцитов путем ускорения формирования полярных телец [208]. Высказывались мнения о том, что ап1>ЬАМ1 могут присутствовать и в фолликулярной жидкости. И, действительно, существуют данные о наличии вышеуказанных в фолликулярной жидкости женщин с бесплодием. Впервые данные антитела были обнаружены Сассауо и соавт. в фолликулярной жидкости 31% женщин, пораженных эндометриозом, и положительно коррелировали с сывороточными значениями [39]. На основании

данного факта, авторы предположили, что антитела к ламинину-1 наряду с другими биологическими молекулами, способны проникать через гемато-фолликулярный барьер [149]. При этом количество зрелых ооцитов М11 отрицательно коррелировало с содержанием антител в фолликулярной жидкости (Яб = -0,549; р<0,05).

Этими же учеными впервые получены данные о высоких титрах антител к ламинину-1 среди женщин, пораженных аутоимммунным тиреоидитом, относительно группы контроля (43,2% уб 3,6%). Оценка степени зрелости ооцитов выявила обратную зависимость их числа от фолликулярных значений апй-ЬЛМ [16]. Таким образом, выдвигается предположение о синергичном негативном влиянии аутоантител к ламинину-1 наравне с аутоантителами к тиреоидной пероксидазе на женскую фертильность при аутоиммунном поражении щитовидной железы [16, 38].

В 2018 году группой немецких ученых с помощью методов вестерн-блоттинга и масс-спектрометрии была обнаружена новая мишень для антител к трофобласту, а именно энолаза-1 ^N01), определяемая в линии JEG-3 клеток хориокарциномы и в ткани вневорсинчатого трофобласта первого триместра беременности [35, 149]. Как известно, EN01 представляет гликолитический фермент массой 45-47 кДа, экспрессируется в большом количестве в цитоплазме множества клеток и катализирует реакции гликолиза [74]. Определено, что антитела к энолазе-1 вырабатываются при аутоиммунных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, системный склероз и др. [30, 32, 149]. Наряду с этим, обсуждается возможная взаимосвязь данных антител с эндометриозом и преждевременной недостаточностью яичников [65, 189]. Багар1к и соавт. выявили более высокую частоту встречаемости к энолазе-1 среди женщин с трубным фактором бесплодия [189]. Согласно другим данным, ЕК01 является специфическим антигеном для анти-эндометриальных антител среди женщин с эндометриозом [65, 149]. Также более высокие сывороточные значения ап1>ЕК01 отмечены в группе женщин с привычным невынашиванием относительно контрольной группы. В более позднем исследовании (2019 г.)

высокое содержание антител к энолазе-1 было определено в децидуальной ткани плацент первого триместра беременности около 9 недель гестации у женщин с привычным невынашиванием в анамнезе [35]. Предполагается, что механизм избыточной экспрессии генов, кодирующих гликолитические ферменты, может носить адаптивный характер в случаях неполной инвазии трофобласта и вытекающей из этого гипоксии в формирующейся ткани плаценты [68, 115]. Более того, в ряде исследований было обнаружено, что ап1>ЕК01 ингибируют выработку Р-ХГЧ и прогестерона клетками человеческой ворсинчатой оболочки трофобласта. Таким образом, авторы предположили, что данные антитела могут стать новым аутоиммунным биомаркером привычного невынашивания беременности [35]. Кроме того, наряду с наличием антител к энолазе-1 отмечается повышение сывороточных значений провоспалительных цитокинов 1Ь-1р, ТЫБ-а и PGE2, потенцирующее неблагоприятные условия для развития и поддержания беременности [30].

В мировой литературе есть также сообщения о развитии преждевременной недостаточности яичников в присутствии ап1>ЕК01. При обследовании 110 женщин с данным состоянием антитела к а-энолазе-1 были выявлены у 19,1% пациентов [31]. Высказывается предположение о том, что в основе развития яичниковой недостаточности среди пациенток с выявленными маркером лежит дефект системной иммунорегуляции, при этом сами антитела являются индикатором аутоиммунной этиологии овариальной недостаточности и могут использоваться в качестве диагностического маркера данного недуга [149].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сафарян Галина Хачиковна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Активность овариальной ароматазы: методы оценки и клиническое значение в протоколах экстракорпорального оплодотворения / П.П. Яковлев, Ю. С. Крылова, И. Д. Мекина [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2018. -Т. 67, №2. - С. 61-69.

2. Антифосфолипидный синдром и ранние репродуктивные потери / М. И. Кривонос, М. С. Зайнулина, С. А. Сельков [и др.] // Акушерство, гинекология и репродукция. - 2016. - Т. 10, № 4. - С. 114-122.

3. Гзгзян, А. М. Аутоиммунный гипогонадизм: патогенез, диагностика, принципы лечения: Дисс. д-ра мед. наук / Гзгзян А. М. - Санкт-Петербург., 2007. 218 с.

4. Дефицит овариальной ароматазы как причина нормогонадотропной ановуляции / Я.А. Самойлович, В.В. Потин, М.А. Тарасова [и др.] // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2015. - № 2. - С. 25-31.

5. Дискуссионные вопросы ведения женщин с антифосфолипидными антителами при применении ВРТ / М. И. Мирашвили, М. С. Зайнулина, С. А. Сельков [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2013. - Т. 62, № 3. -С. 26-33.

6. Заморина, С. А. Хорионический гонадотропин - фактор индукции иммунной толерантности при беременности / С. А. Заморина, С. В. Ширшев // Иммунология. - 2013. - Т. 2. - С. 105-107.

7. Коллектив авторов. Прегравидарная подготовка. Клинический протокол Междисциплинарной ассоциации специалистов репродуктивной медицины (МАРС). Версия 2.0. — М. : Редакция журнала StatusPraesens. 2020. - С. 128.

8. Кривонос, М. И. Патогенетически обоснованная профилактика неблагоприятных исходов экстракорпорального оплодотворения у женщин с наличием антифосфолипидных антител: Дисс. кандидата мед. наук / М. И. Кривонос - Санкт-Петербург., 2019. 172 с.

9. Макацария А. Д. Тромбогеморрагические осложнения в акушерско-гинекологической практике. Под ред. Макацария А. Д. - М. : Медицинское информационное агентство Россия. 2011. С 496.

10. Менжинская, И.В. Ассоциация антител к гонадотропинам и женским половым гормонам с нарушениями репродуктивной функции / И. В. Менжинская, Л. В. Ванько // Акушерство и гинекология. - 2017. - Т.9. - С. 20-27.

11. Назаренко, Т. А. Ингибиторы ароматазы в репродуктивной медицине / Т. А. Назаренко, Д. В. Дмитриев // Проблемы репродукции. - 2007. - Т. 1. - С. 1420.

12. Объедкова, К. В. Адьювантная терапия препаратами рекомбинантного соматотропного гормона для оптимизации протоколов экстракорпорального оплодотворения у пациенток со «слабым» ответом яичников: Дисс. кандидата мед. наук / Объедкова К. В. - Санкт-Петербург., 2018. 120 а

13. Овариальная ароматаза р450 при синдроме поликистозных яичников. Медицинский академический журнал / В.А. Савина, И.М. Кветной, М.А. Клещев [и др.] // Медицинский академический журнал. - 2012. - Т. 12, № 1. - С 66-72.

14. Оценка эффективности протоколов вспомогательных репродуктивных технологий у пациенток — носительниц антитиреоидных аутоантител / Г. Х. Сафарян, Е. С. Бородина, К. Т. Нгуен [и др.] // Проблемы репродукции. - 2021. - Т. 27, № 6. - С. 107-114.

15. Перминова, С. Г. Бесплодие у женщин с заболеваниями щитовидной железы: принципы диагностики, тактика ведения / С. Г. Перминова // Акушерство и гинекология: Новости. Мнения. Обучение. - 2013. - Т. 2. - С. 18-24.

16. Результативность протоколов ЭКО/ИКСИ у женщин с субклиническим гипотиреозом и носительством антител к щитовидной железе / Г. Х. Сафарян, А. М. Гзгзян, Л. Х. Джемлиханова [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2019. - Т. 68. - № 4. - С.83-94.

17. Савина, В.А. Овариальная ароматаза р450 при нормогонадотропной недостаточности яичников / В.А. Савина // Журнал акушерства и женских болезней. - 2012. - Т. LXI, № 1. — С. 84-89.

18. Северин, Е. С. Биохимия: учебное пособие / Е.С. Северин. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство». 2003. - 779 с.

19. Сидельникова, В.М. Привычная потеря беременности / В. М. Сидельникова. - М. : Триада-Х. 2005. - 304 с.

20. Статистический анализ данных в системе R / Буховец А.Г., Москалев П. В., Богатова В. П. - Воронеж: ВГАУ. 2014. - 124 с.

21. Фадеев, В. В. По материалам клинических рекомендаций по диагностике и лечению заболеваний щитовидной железы во время беременности и в послеродовом периоде Американской тиреоидной ассоциации / В. В. Фадеев // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. - 2012. - Т. 8, № 1. - C.7-18.

22. Экспрессия сигнальных молекул в эндометрии человека: оптимизация имплантационной восприимчивости под действием аллогенного гидролизата плаценты / Кветной И.М., Клейменова Т.С., Родичкина В.Р. [и др.] // Молекулярная медицина. - 2018. - Т. 16, №1. - С. 37-43.

23. Эффективность протоколов экстракорпорального оплодотворения у пациенток с нормогонадотропной ановуляцией в зависимости от активности овариальной ароматазы / Яковлев П.П., Коган И.Ю. , Тарасова М.А. [и др.] // Акушерство и гинекология. - 2018. - Т. 12. - С. 56-62.

24. A further exploration of the impact of antinuclear antibodies on in vitro fertilization-embryo transfer outcome / Y. Ying, Y. P. Zhong, C. Q. Zhou [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2013. - Vol. 70, № 3. - P. 221-229.

25. A new nomenclature for the laminins / R. E. Burgeson, M. Chiquet, R. Deutzmann [et al.] // Matrix Biology. - 1994. - Vol. 14, № 3. - P. 209-211.

26. A retrospective study on IVF outcome in euthyroid patients with anti-thyroid antibodies: effects of levothyroxine, acetyl-salicylic acid and prednisolone adjuvant treatments / A. Revelli, S. Casano, L. D. Piane [et al.] // Reproductive Biology and Endocrinology. - 2009. - Vol. 7. - P. 137.

27. A retrospective study on IVF/ICSI outcome in patients with anti-nuclear antibodies: the effects of prednisone plus low-dose aspirin adjuvant treatment / Q. Zhu, L. Wu, B. Xu [et al.] // Reproductive Biology and Endocrinology. - 2013. - Vol. 5, №2 11. - P. 98.

28. Abortion in mice induced by intravenous injections of antibodies to type IV collagen or laminin / J. M. Foidart, M. Yaar, A. Figueroa [et al.] // The American Journal of Pathology. - 1983. - Vol. 10. - P. 346-357.

29. Alpha Scientists in Reproductive Medicine and ESHRE Special Interest Group of Embryology. The Istanbul consensus workshop on embryo assessment: proceedings of an expert meeting // Human Reproduction. - 2011. - Vol. 26, № 6. - P. 1270-1283

30. Alpha-enolase expressed on the surfaces of monocytes and macrophages induces robust synovial inflammation in rheumatoid arthritis. / S. Bae, H. Kim, N. Lee [et al.] // The Journal of Immunology. - 2012. - Vol. 189, № 1. - P. 365-372.

31. Alpha-enolase: a novel autoantigen in patients with premature ovarian failure / V. Sundblad, L. Bussmann, V. A. Chiauzzi [et al.] // Clinical Endocrinology (Oxford). - 2006. - Vol.65, № 6. - P. 745-751.

32. Alpha-enolase: a promising therapeutic and diagnostic tumor target / M. Capello, S. Ferri-Borgogno, P. Cappello [et al.] // The FEBS Journal. - 2011. - Vol. 278, № 7. - P. 1064-1074.

33. An association of IgG antilaminin- 1 autoantibodies with endometriosis in infertile patients / J. Inagaki, M. Sugiura-Ogasawara, M. Nomizu [et.al] // Human Reproduction. - 2003. - Vol. 18. - P. 544-549.

34. Angiogenic activity of human chorionic gonadotropin through LH receptor activation on endothelial and epithelial cells of the endometrium / S. Berndt, S. P. d'Hauterive, S. Blacher [et al.] // The FASEB Journal. - 2006. - Vol. 20, №№ 14. - P. 26302632.

35. Anti a-enolase antibody is a novel autoimmune biomarker for unexplained recurrent miscarriages / Y. Ye, C. Kuhn, M. Kösters [et al.] // EBioMedicine. - 2019. -Vol. 41. - P. 610-622.

36. Antibodies to phosphatidylethanolamine and phosphatidylserine are associated with increased natural killer cell activity in non-male factor infertility patients / G. Sher G, J. D. Fisch, G. Maassarani [et al.] // Human Reproduction. - 2000. - Vol. 15. - P. 1932-1936.

37. Anti-corpus luteum antibody: A novel serological marker for ovarian dysfunction in systemic lupus erythematosus? / S. G. Pasoto, V. S. Viana, B. B. Mendonca [et al.] // The Journal of Rheumatology. - 1999. - Vol. 26, № 5. - P. 10871093.

38. Anti-laminin-1 antibodies in serum and follicular fluid of women with Hashimoto's thyroiditis undergoing in vitro fertilization / D. Caccavo, N. M. Pellegrino, C. Nardelli [et al.] // International Journal of Immunopathology and Pharmacology. -2016. - Vol. 29, № 2. - P. 280-287.

39. Anti-laminin-1 antibodies in sera and follicular fluid of women with endometriosis undergoing in vitro fertilization / D. Caccavo, N. M. Pellegrino, I. Totaro [et al.] // International Journal of Immunopathology and Pharmacology. - 2011. - Vol. 24. - P. 481-488.

40. Anti-mesothelin antibodies and circulating mesothelin relate to the clinical state in ovarian cancer patients / I. Hellstrom, E. Friedman, T. Verch [et al.] // Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention. - 2008. - Vol. 17. - P. 1520-1526.

41. Anti-mullerian hormone levels decline with the presence of antiphospholipid antibodies / M. Vega, D. H. Barad, Y. Yu [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2016. - Vol. 76, № 4. - P. 333-337.

42. Anti-Müllerian hormone reduces follicle sensitivity to folliclestimulating hormone in human granulosa cells / L. Pellatt, S. Rice, N. Dilaver [et al.] // Fertility Sterility. - 2011. - Vol. 96, № 5. - P. 1246-1251.e1.

43. Antinuclear antibodies predicts a poor IVF-ET outcome: Impaired egg and embryo development and reduced pregnancy rate / Y. Ying, Y. P. Zhong, C. Q. Zhou [et al.] // Immunological Investigations. - 2012. - Vol. 41, № 5. - P. 458-468.

44. Antinuclear antibody reduces the pregnancy rate in the first IVF-ET treatment cycle but not the cumulative pregnancy rate without specific medication / K.

Kikuchi, H. Shibahara, Y. Hirano [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2003. - Vol. 50. № 4. - P. 363-367.

45. Antiphopholipid syndrome / G. Ruiz-Irastorza, M. Crowther, W. Branch [et al.] // Lancet. - 2010. - Vol. 376. - P. 1498-1509.

46. Antiphospholid antibodies regulate the expression of trophoblast cell adhesion molecules / N. Di Simone, R. Castellani, D. Caliandro [et al.] // Fertility Sterility. - 2002. - Vol. 77. - P. 805-811.

47. Antiphospholipid antibodies affect human endometrial angiogenesis / N. Di Simone, F. Di Nicuolo, S. D'Ippolito [et al.] // Biology of Reproduction. - 2010. - Vol. 83. - P. 212-219.

48. Antiphospholipid antibodies affect trophoblast gonadotropin secretion and invasiveness by binding directly and through adhered beta2-glycoprotein I / N. Di Simone, P. L. Meroni, N. de Papa [et al.] // Arthritis and Rheumatology. - 2000. - Vol. 43. - P. 140-150.

49. Antiphospholipid antibodies and invitro fertilization success: a meta-analysis / M. D. Hornstein, O. K. Davis, J. B. Massey [et al.] // Fertility Sterility. - 2000. - Vol. 73, № 2. - P. 330-333.

50. Antiphospholipid Antibodies in Stillbirth / R. M. Silver, C. B. Parker, U. M. Reddy [et al.] // Obstetrics and Gynecology. - 2013. - Vol. 122. - P. 641-657.

51. Antiphospholipid syndrome and pre-eclampsia / L. Heilmann, M. Schorsch, T. Hahn [et al.] // Seminars in Thrombosis and Hemostasis. - 2011. - Vol. 37. - P. 141145.

52. Antiphospholipid Syndrome during pregnancy: The state of the art / F. A. Di Prima, O. Valenti, E. Hyseni // Journal of Prenatal Medicine. - 2011. - Vol. 5. - P. 4153.

53. Antityroid antibodies and antiphospholipid syndrome: evidence of reduced fecundity and of poor pregnancy outcome in recurrent spontaneous abortions / C. De Carolis, E. Greco, M. D. Guarino [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2004. - Vol. 52. - P. 263-266.

54. Aromatase activity in granulosa cells as a predictor of pregnancy potential / M.S. Neal, E.V. Younglai, A.C. Holloway [et al.] // International Congress Series. -2004. - Vol. 1271. - P. 139-142.

55. Association between thyroid autoantibodies and miscarriage and preterm birth: meta-analysis of evidence / S. Thangaratinam, A. Tan, E. Knox [et al.] // British Medical Journal. - 2011. - Vol. 342. - P. d2616.

56. Association between antinuclear antibody titers and connective tissue diseases in a Rheumatology Department / R. Menor Almagro, J. F. Rodríguez Gutiérrez, M. A. Martín-Martínez [et al.] // Reumatologia Clinica. - 2017. - Vol. 13, № 3. - P. 150155.

57. Association between thyroid autoimmunity and ovarian reserve in women with hypothyroidism / F. A. Morales-Martínez, L. H. Sordia-Hernández, M. M. Ruiz [et al.] // Thyroid Research. - Vol. 14, № 1. - P. 6.

58. Association of serum autoantibodies with pregnancy outcome of patients undergoing first IVF/ICSI treatment: A prospective cohort study / X. Chen, M. L. Mo, C. Y. Huang // Journal of Reproductive Immunology. - 2017. - Vol. 122. - P. 14-20.

59. Association of Thyroid Function and Autoimmunity with Ovarian Reserve in Women Seeking Infertility Care / TIM. Korevaar, L. Mínguez-Alarcón, C. Messerlian [et al.] // Thyroid. - 2018. - Vol. 28, № 10. - P. 1349-1358.

60. Autoantibodies to mesothelin in infertility / J. L. Luborsky, Y. Yu, S. L. Edassery [et al.] // Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention. - 2011. - Vol. 20, №2 9. - P. 1970-1978.

61. Autoantigens in ovarian autoimmunity associated with unexplained infertility and premature ovarian failure / S. L. Edassery, S. V. Shatavi, J. P. Kunkel [et al.] // Fertility Sterility. - 2010. - Vol. 94, № 7. - P. 2636-2641.

62. Autoimmune disorders affect the in vitro fertilization outcome in infertile women / S. H. Zou, Z. Z. Yang, P. Zhang [et al.] // National journal of andrology. - 2008. - Vol. 14, № 4. - P. 343- 346.

63. Autoimmune disorders: another possible cause for in vitro fertilization and embryo transfer failure / E. Geva, A. Amit, L. Lerner-Geva [et al.] // Human Reproduction. -1995. - Vol. 10. - P. 2560-2563.

64. Autoimmunity and antigenic targets in ovarian pathology / T. Forges, P. Monnier-Barbarino, G. C. Faure [et al.] // Human Reproduction Update. - 2004. - Vol. 10, № 2. - P. 163-175.

65. Autoreactive epitopes within the human alpha-enolase and their recognition by sera from patients with endometriosis / M. Walter, H. Berg, F. A. Leidenberger [et al.] // Journal of Autoimmunity. - 1995. - Vol. 8, № 6. - P. 931-945.

66. Backos, M. Antiphospholipid antibodies and infertility / M. Backos, R Rai , L. Regan // Human Fertility. - 2002. - Vol. 5. - P. 30-34.

67. Beckett, G. J. Selenium and endocrine systems / G. J. Beckett, J. R. Arthur // Journal of Endocrinology. - 2005. - Vol. 184, № 3. - P. 455-465.

68. Beyond oxygen: complex regulation and activity of hypoxia inducible factors in pregnancy / K. G. Pringle, K. L. Kind, A. N. Sferruzzi-Perri [et al.] // Human Reproduction Update. - 2010. - Vol. 16, № 4. - P. 415-431.

69. Bussen, S. Thyroid autoantibodies in euthyroid non-pregnant women with recurrent spontaneous abortions / S. Bussen, T. Steck // Human Reproduction. - 1995. -Vol. 10, № 11. - P. 2938-2940.

70. Can Supplementation with Vitamin D Modify Thyroid Autoantibodies (Anti-TPO Ab, Anti-Tg Ab) and Thyroid Profile (T3, T4, TSH) in Hashimoto's Thyroiditis? A Double Blind, Randomized Clinical Trial / R. Chahardoli, A. A. Saboor-Yaraghi, A. Amouzegar [et al.] // Hormone and Metabolic Research. - 2019. - Vol. 51, № 5. - P. 296-301.

71. Carey, S. Autoantibodies to laminin and other basement membrane proteins in sera from monkeys with histories of reproductive failure identified by cultures of whole rat embryos / S. Carey, N. Klein // Fertility Sterility. - 1989. - Vol. 51. - P. 711-718.

72. Characteristics of peripheral blood NK and NKT-like cells in euthyroid and hypothyroid women with autoimmunity, experiencing reproductive failure / E. Miko, M.

Meggyes, K. Doba [et al.] // Journal of Reproductive Immunology. - 2017. - Vol. 124. -P. 62-70.

73. Characterization of antihuman chorionic gonadotropin serum antibody appearing after ovulation induction / G. D. Braunstein, S. K. Bloch, J. L. Rasor [et al.] // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 1983. - Vol. 57, № 6. - P. 11641172.

74. Chen, S. H. Enolase: human tissue distribution and evidence for three different loci / S. H. Chen, E. R. Giblett // Annals of Human Genetics. - 1976. - Vol. 39, № 3. - P. 277-280.

75. Circulating antiovarian antibodies in premature ovarian failure / M. D. Damewood, H. A. Zacur, G. J. Hoffman [et.al] // Obstetrics and Gynecology. - 1986. -Vol. 68, № 6. - P. 850-854.

76. Circulating autoimmune antibodies may be responsible for implantation failure in in vitro fertilization / E. Geva, Y. Yaron, J. B. Lessing [et al.] // Fertility Sterility.

- 1994. - Vol. 62. - P. 802-806.

77. Cline, A. Is there a role of autoimmunity in implantation failure after in-vitro fertilization? / A. Cline, W. Kutteh // Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. -2009. - Vol. 21. - P. 291-295.

78. Clinical features and antinuclear antibodies profile among adults with systemic lupus erythematosus and lupus nephritis: A cross-sectional study / N. Ahmed, M. Shigidi, A.N. Al Agib [et al.] // The Pan African Medical Journal. - 2017. - Vol. 27. -P. 114.

79. Cole, L.A. Hyperglycosylated hCG, a review / L. A. Cole // Placenta. - 2010.

- Vol. 31, № 8. - P. 653-664.

80. Cole, L.A. New discoveries on the biology and detection of human chorionic gonadotropin / L. A. Cole // Reproductive Biology and Endocrinology. - 2009. - Vol. 7, № 8.

81. Colognato, H. Form and function: the laminin family of heterotrimers / H. Colognato, P. Yurchenco // Developmental Dynamics. - 2000. - Vol. 218. - P. 213-234.

82. Combining CA 125 and SMR serum markers for diagnosis and early detection of ovarian carcinoma / M. W. Mcintosh, C. Drescher, B. Karlan [et al.] // Gynecologic Oncology. - 2004. - Vol. 95. - P. 9-15.

83. Compositional and structural requirements for laminin and basement membranes during mouse embryo implantation and gastrulation / J. H. Miner, C. Li, J. L. Mudd [et al.] // Development. - 2004. - Vol. 131. - P. 2247-2256.

84. Coulam, C. B. Chemical pregnancies: immunologic and ultrasonographic studies / C. B. Coulam, R. Roussev // American Journal of Reproductive Immunology. -2002. - Vol. 48, № 5. - P. 323-328.

85. Coulam, C. Does immunotherapy for treatment of reproductive failure enhance live births? / C. B. Coulam, B. Acacio // American Journal of Reproductive Immunology. - 2012. - Vol. 67, № 4. - P. 296-304.

86. CYP19 gene variants affect the assisted reproduction outcome of women with polycystic ovary syndrome / L. Lazaros, N. Xita, E. Hatzi [et al.] // Gynecology Endocrinology. - 2013. - Vol. 29, № 5. - P. 478-482.

87. Decreased selenium-binding protein 1 enhances glutathione peroxidase 1 activity and downregulates HIF-1alpha to promote hepatocellular carcinoma invasiveness / C. Huang, G. Ding, C. Gu [et al.] // Clinical Cancer Research. - 2012. - Vol. 18. - P. 3042-3053.

88. Decreased selenium-binding protein 1 in esophageal adenocarcinoma results from posttranscriptional and epigenetic regulation and affects chemosensitivity / A. L. Silvers, L. Lin, A. J. Bass [et al.] // Clinical Cancer Research. - 2010. - Vol. 16, № 7. - P. 2009-2021.

89. Defective maternal-fetal interaction in a murine autoimmune model / B. Tartakovsky, B. L. Bermas, Z. Sthoeger [et al.] // Human Reproduction. - 1996. - Vol. 11. - P. 2408-2411.

90. Development of anti-human chorionic gonadotropin antibodies in patients with hypogonadotropic hypogonadism. A study of four patients / B. Claustrat, L. David, A. Faure [et al.] // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 1983. - Vol 57, № 5. - P. 1041-1047.

91. Down-regulation of the CYP19A1 gene in cumulus cells of infertile women with endometriosis / I. D. Barcelos, F. C. Donabella, C. P. Ribas [et al.] // Reproductive Biomedicine Online. - 2015. - Vol. 30, № 5. - P. 532- 541.

92. Effect of antithyroid antibodies on ICSI outcome in antiphospholipid antibody-negative euthyroid women / M. Karacan, F. Alwaeely, Z. Cebi [et al.] // Reproductive Biomedicine Online. - 2013. - Vol. 27, № 4. - P. 376-380.

93. Effect of levothyroxine on miscarriage among women with normal thyroid function and thyroid autoimmunity undergoing in vitro fertilization and embryo transfer: a randomized clinical trial / H. Wang, H. Gao, H. Chi [et al.] // Journal of the American Medical Association. - 2017. - Vol. 318, № 22. - P. 2190-2198.

94. Effect of levothyroxine supplementation on pregnancy outcomes in women with subclinical hypothyroidism and thyroid autoimmuneity undergoing in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection: an updated meta-analysis of randomized controlled trials / M. Rao, Z. Zeng, S. Zhao [et al.] // Reproductive Biology and Endocrinology. - 2018. - Vol. 16, № 1. - P. 92.

95. Effect of levothyroxine treatment on in vitro fertilization and pregnancy outcome in infertile women with subclinical hypothyroidism undergoing in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection / C. Kim, J. Ahn, S. Kang [et al.] // Fertility Sterility. - 2011. -Vol. 95, № 5. - P. 1650-1654.

96. Ehrenstein, M. Antinuclear antibodies and lupus: Causes and consequences / M. Ehrenstein // Rheumatology. - 1999. - Vol. 38. - P. 691-693.

97. Endocrine autoimmune diseases and female infertility / A. Sen, V. A. Kushnir, D. H. Barad [et al.] // Nature Reviews Endocrinology. - 2014. - Vol. 10, № 1. -P. 37-50.

98. Epigenetic alterations of CYP19A1 gene in Cumulus cells and its relevance to infertility in endometriosis / E. Hosseini, F. Mehraein, M. Shahhoseini [et al.] // Journal of Assisted Reproduction and Genetics. - 2016. - Vol. 33, № 8. - P. 1105-1113.

99. ESHRE ART Fact Sheet 2018. URL: https://www.eshre.eu/Press-Room/Resources

100. Evaluation of serum anti-Müllerian hormone levels in women with Hashimoto thyroiditis in the reproductive age / I. Öztürk Ünsal, S. Heppen, P. Akhanli [et al.] // Turkish Journal of Medical Sciences. - 2021. - Vol. 51, № 2. - P. 716-721.

101. Evidence of gonadal and gonadotropin antibodies in women with a suboptimal ovarian response to exogenous gonadotropin / W. R. Meyer, G. Lavy, A. H. DeCherney [et al.] // Obstetrics and Gynecology. - 1990. - Vol. 75, № 5. - P. 795-799.

102. Expression of the CYP19 (aromatase) gene: an unusual case of alternative promoter usage / E. R. Simpson, M. D. Michael, V. R. Agarwal [et al.] // The FASEB Journal. - 1997. - Vol. 11. - P. 29-36.

103. Expression of the gene encoding aromatase cytochrome P450 (CYP19) in fetal tissues / K. Toda, E. R. Simpson, C. R. Mendelson [et al.] // Molecular Endocrinology. - 1994. - Vol. 8, № 2. - P. 210-217.

104. Fan, J. Impacts of Anti-dsDNA Antibody on In Vitro Fertilization-Embryo Transfer and Frozen-Thawed Embryo Transfer / J. Fan, Y. Zhong, C. Chen // Journal of Immunology Research. - 2017. - Vol. 2017. - 8596181.

105. Farquhar, C. Assisted reproductive technology: an overview of Cochrane Reviews / C. Farquhar, J. Marjoribanks // The Cochrane Database of Systematic Reviews. - 2018. - Vol. 8, № 8. - CD010537

106. Female Infertility and Serum Auto-antibodies: A Systematic Review / A. Deroux, C. Dumestre-Perard, C. Dunand-Faure [et al.] // Clinical Review in Allergy & Immunology. - 2017. - Vol. 53. - P. 78-86.

107. Female infertility related to thyroid autoimmunity: the ovarian follicle hypothesis / P. Monteleone, D. Parrini, P. Faviana [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2011. - Vol. 66, № 2. - P. 108-114.

108. Follicular fluid steroid hormone levels are associated with fertilization outcome after intracytoplasmic sperm injection / J.D. Lamb, A.M. Zamah, S. Shen, [et al.] // Fertility Sterility - 2010. - Vol. 94. - P. 952-957.

109. Follicular fluid thyroid autoantibodies, thyrotropin, free thyroxine levels and assisted reproductive technology outcome / S. Medenica, E. Garalejic, B. Arsic [et al.] // PLoS ONE. - 2018. - Vol. 13, № 10. - e0206652.

110. Follicular hyperandrogenism downregulates aromatase in luteinized granulosa cells in polycystic ovary syndrome women / F. Yang, Y. C. Ruan, Y. J. Yang [et al.] // Reproduction. - 2015. - Vol. 150, № 4. - P. 289-296.

111. Follicular steroid hormones as markers of oocyte quality and oocyte development potential / N. L. Carpintero, O. A. Suarez, C. C. Mangas [et al.] // Journal of Human Reproductive Sciences. - 2014. - Vol. 7, № 3. - P. 187-193.

112. Frattarelli, J. L. Adjuvant therapy enhances endometrial receptivity in patients undergoing assisted reproduction / J. L. Frattarelli, B. T. Miller, R. T. Scott Jr// Reproductive BioMedicine Online. - 2006. - Vol. 12, № 6. - P. 722-729.

113. Functional and physical interaction between the selenium-binding protein 1 (SBP1) and the glutathione peroxidase 1 selenoprotein / W. Fang, M. L. Goldberg, N. M. Pohl [et al.] // Carcinogenesis. - 2010. -Vol 31, № 8. - P. 1360-1366.

114. Gardner, D.K., Sakkas, D. Assessment of embryo viability: the ability to select a single embryo for transfer - a review // Placenta. - 2003. - Vol. 24 (B). - P. 5-12.

115. Gharesi-Fard, B. Alteration in the expression of proteins in unexplained recurrent pregnancy loss compared with in the normal placenta / B. Gharesi-Fard, J. Zolghadri, E. Kamali-Sarvestani // Journal of Reproduction and Development. - 2014. -Vol. 60, № 4. - P. 261-267.

116. Gleicher, N. Autoantibodies in infertility: current opinion / N. Gleicher // Human Reproduction Update. - 1998. - Vol. 4, № 2. - P. 169-176.

117. Gleicher, N. The reproductive autoimmune failure syndrome / N. Gleicher, A. el-Roeiy // American Journal of Obstetrics and Gynecology. - 1988. - Vol. 159. - P. 223-227.

118. Gonadotrophins for ovulation induction in women with polycystic ovary syndrome / N. S. Weiss, E. Kostova, M. Nahuis [et al.] // The Cochrane Database of Systematic Reviews. - 2019. - Vol. 1, № 1. - CD010290.

119. Gonadotropin therapy failure secondary to human chorionic gonadotropininduced antibodies / R. Z. Sokol, R. D. McClure, M. Peterson [et al.] // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 1981. - Vol. 52, № 5. - P. 929-933.

120. Gougeon, A. Human ovarian follicular development: from activation of resting follicles to preovulatory maturation / A. Gougeon // The Annales d'Endocrinologie. - 2010. - Vol. 71, № 3. - P. 132-143.

121. Growth Patterns of nondominant ovarian follicles during the normal menstrual cycle / T. D. Pache, J. W. Wladimiroff, F. H. de Jong [et al.] // Fertility Sterility.

- 1990. - Vol. 54, № 4. - P. 638-642.

122. Guidelines of the American Thyroid Association for the diagnosis and management of thyroid disease during pregnancy and the postpartum / E. K. Alexander, E. N. Pearce, G. A. Brent [et al.] // Thyroid. - 2017. - Vol. 27, № 3. - P. 315-389.

123. Haapsamo, M. Low-dose aspirin and uterine haemodynamics on the day of embryo transfer in women undergoing IVF/ICSI: a randomized, placebo-controlled, double-blind study/ M. Haapsamo, H. Martikainen, J. Rasanen // Human Reproduction.

- 2009. - Vol. 24, № 4. - P. 861-866.

124. Hardy, C. M. Development of mouse-specific contraceptive vaccines: infertility in mice immunized with peptide and polyepitope antigens / C. M. Hardy, G. Clydesdale, K. J. Mobbs // Reproduction. - 2004. - Vol. 128, № 4. - P. 395-407.

125. High levels of anticardiolipin antibodies in patients with abnormal embryo morphology who attended an in vitro fertilization program / F. Azem, E. Geva, A. Amit [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 1998. - Vol. 39. - P. 161-163.

126. High prevalence of autoimmune thyroiditis in patients with polycystic ovary syndrome / O. Janssen, N. Mehlmauer, S. Hahn [et al.] // European Journal of Endocrinology. - 2004. - Vol. 150, № 3. - P. 363-369.

127. Humoral immune response to mesothelin in mesothelioma and ovarian cancer patients / M. Ho, R. Hassan, J. Zhang [et al.] // Clinical Cancer Research. - 2005.

- Vol. 11. - P. 3814-3820.

128. Identification of differentially expressed markers in human follicular cells associated with competent oocytes/ M. Hamel, I. Dufort, C. Robert [et al.] // Human Reproduction. - 2008. - Vol. 23, № 5. - P. 1118- 1127.

129. Idiopathic low ovarian reserve is associated with more frequent positive thyroid peroxidase antibodies / C. W. Chen, Y. L. Huang, C. R. Tzeng [et al.] // Thyroid.

- 2017. - Vol. 27, № 9. - P. 1194-1200.

130. IgG anti-laminin-1 autoantibody and recurrent miscarriages / J. Inagaki, E. Matsuura, M. Nomizu [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2001. -Vol.45, № 4. - P. 232-238.

131. IgG-antiphospholipid antibodies in follicular fluid of IVF-ET patients are related to low fertilization rate of their oocytes / H. Matsubayashi, T. Sugi, T. Arai [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2006. - Vol. 55, № 5. - P. 341-348.

132. Immunity to melanoma: unraveling the relation of tumor immunity and autoimmunity / T. Ramirez-Montagut, M. J. Turk, J. D. Wolchok [et al.] // Oncogene. -2003. Vol. 22, № 20. - P. 3180-3187.

133. Immunization of naive mice with mouse laminin-1 affected pregnancy outcome in a mouse model / S. T. Matalon, M. Blank, E. Matsuura [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2003. - Vol. 50. - P. 159-165.

134. Immunochemical and biological characteristics of a human autoantibody to human chorionic gonadotropin and luteinizing hormone / A. Pala, I. Coghi, G. Spampinato [et al.] // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 1988. - Vol. 67, № 6. - P. 1317-1321.

135. Immunodiagnostic evaluation in women with reproductive failure / A. Kaider, B. Kaider, P. Janowicz [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology.

- 1999. - Vol. 42, № 6. - P. 335-346.

136. Immunoglobulins in the mouse uterus during the oestrous cycle / F. Rachman, V. Casimiri, A. Psychoyos [et al.] // Journal of Reproduction and Fertility. -1983. - Vol. 69, № 1. - P. 17-21.

137. Immunological Microenvironment Alterations in Follicles of Patients With Autoimmune Thyroiditis / N. Huang, D. Liu, Y. Lian [et. al] // Frontiers in Immunology.

- 2021. - Vol. 12. - 770852.

138. Impact of thyroid autoimmunity on cumulative delivery rates in in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection patients / D. Unuane, B. Velkeniers, S. Deridder [et al.] // Fertility Sterility. - 2016. - Vol. 106. - P. 144-150.

139. In women with thyroid autoimmunity, does low-dose prednisolone administration, compared with no adjuvant therapy, improve in vitro fertilization clinical results?/ K. Litwicka, C. Arrivi, M. T. Varricchio [et al.] //Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. - 2015. - Vol. 41, № 5. - P. 722-728.

140. Incidence of autoantibodies in the infertile population / J. Cubillos, A. Lucena, C. Lucena [et al.] // Early Pregnancy. - 1997. - Vol. 3, № 2. - P. 119-124.

141. Incidence of autoimmune antibodies in failed embryo transfer cycles / A. Birkenfeld, T. Mukaida, L. Minichiello [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 1994. Vol. 31, № 2-3. - P. 65-68.

142. Increase of circulating CXCL9 and CXCL11 associated with euthyroid or subclinically hypothyroid autoimmune thyroiditis / A. Antonelli, S. M. Ferrari S.M, S. Frascerra [et al.] // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 2011. - Vol. 96, № 6. P.1859-1863.

143. Increased fetal abortion rate in autoimmune thyroid disease is related to circulating TPO autoantibodies in an autoimmune thyroiditis animal model / Y. L. Lee, H. P. Ng, K. S. Lau [et al.] // Fertility Sterility. - 2009. - Vol. 91, № 5. - P. 2104-2109.

144. Induction of anti-phospholipid syndrome in naive mice with mouse lupus monoclonal and human polyclonal anti-cardiolipin antibodies / M. Blank, J. Cohen, V. Toder [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1991. - Vol. 88, № 8. - P. 3069-3073.

145. Induction of trophinin in human endometrial surface epithelia by CGbeta and IL-1beta / K. Sugihara, M. Kabir-Salmani, J. Byrne [et al.] // FEBS Letters. - 2008. - Vol. 582, № 2. - P. 197-202.

146. Infertility and the provision of infertility medical services in developing countries / W. Ombelet, I. Cooke, S. Dyer [et al.] // Human Reproduction Update. - 2008. - Vol. 14, № 6. - P. 605-621.

147. Infertility caused by hCG autoantibody / F. Amato, G. M. Warnes, C. A. Kirby [et al.] // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 2002. - Vol. 87, № 3. - P. 993-997.

148. Infertility Workup for the Women's Health Specialist: ACOG Committee Opinion, Number 781 // Obstetrics and Gynecology. - 2019. - Vol. 133, № 6. - P. e377-e384.

149. Influence of reproductively significant autoantibodies on the quality of oocytes, obtained embryos and the chances of implantation in Assisted Reproductive Technologies cycles. Literature review / G. Safarian, A. Gzgzyan, L. Dzhemlikhanova [et al.] // Vestnik of Saint Petersburg University. Medicine. - 2020. - Vol. 15, № 4. - P. 256-273.

150. Insights into the autoimmune aspect of premature ovarian insufficiency / K. Sharif, A. Watad, C. Bridgewood [et al.] // Best Practice & Research: Clinical Endocrinology and Metabolism. - 2019. - Vol. 16. - P. 101323.

151. Intravenous immunoglobulin therapy in pregnant patients affected with systemic lupus erythematosus and recurrent spontaneous abortion / R. Perricone, C. De Carolis, B. Kroegler [et al.] // Rheumatology. - 2008. - Vol. 47, № 5. - P. 646-651.

152. Investigation of the impact of antinuclear antibody on the outcome of in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection treatment / Y. Li, Y. Wang, Y. Ma [et al.] // Taiwanese Journal of Obstetrics and Gynecology. - 2015. - Vol. 54, № 6. - P. 742748.

153. IVF/ICSI efficiency in women with Hashimoto thyroiditis / G. Safarian, A. Gzgzyan, L. Dzhemlikhanova [et al.] // Vestnik of Saint Petersburg University. Medicine. - 2019. - Vol. 14, № 4. - P. 374-376.

154. Kaider, B. Murine embryos as a direct target for some human autoantibodies in vitro / B. Kaider, C. Coulam, Roussev RG // Human Reproduction. -1999. - Vol. 14, № 10. - P. 2556-2561.

155. Koehler, V. F. Vitamin D Status and Thyroid Autoantibodies in Autoimmune Thyroiditis / V. F. Koehler, N. Filmann, W. A. Mann // Hormone and Metabolic Research. - 2019. - Vol. 51, № 12. - P. 792-797.

156. Korhonen, M. Immunohistochemical localization of laminin and fibronectin isoforms in human placental villi / M. Korhonen, I. Virtanen // Journal of Histochemistry and Cytochemistry. - 2001. - Vol. 49. - P. 313-322.

157. Kuharic, M. Thyroid Autoimmunity and Infertility / M. Kuharic, D. Rozic, I. Karner // Southeastern European Medical Journal. - 2017. - Vol. 1, № 2. - P. 1-10.

158. Kutteh, W. Antiphospholipid antibody-associated recurrent pregnancy loss: treatment with heparin and low-dose aspirin is superior to low-dose aspirin alone / W. Kutteh // American Journal of Obstetrics and Gynecology. - 1996. - Vol. 174, № 5. - P. 1584-1589.

159. Kuwana, M. Circulating Anti-Nuclear Antibodies in Systemic Sclerosis: Utility in Diagnosis and Disease Subsetting / M. Kuwana // Journal of Nippon Medical School. - 2017. - Vol. 84. - P. 56-63.

160. Laminin immunized monkeys develop sera toxic to cultured rat embryos and fail to reproduce / B. S. Weeks, N. W. Klein, H. Kleinman [et al.] // Teratology. - 1989. - Vol. 40. P. 47-57.

161. Laminin in the human embryo implantation: analogy to the invasion by malignant cells / T. Turpeenniemi-Hujanen, L. Ronnberg, A. Kauppila [et al.] // Fertility Sterility. - 1992. Vol. 58. - P. 105-113.

162. Levothyroxine treatment and pregnancy outcome in women with subclinical hypothyroidism undergoing assisted reproduction technologies: systematic review and meta-analysis of RCTs / B. Velkeniers, A. Van Meerhaeghe, K. Poppe [et al.] // Human Reproduction Update. - 2013. - Vol. 19, № 3. - P. 251-258.

163. Levothyroxine treatment in thyroid peroxidase antibody-positive women undergoing assisted reproduction technologies: a prospective study / R. Negro, T. Mangieri, L. Coppola [et al.] // Human Reproduction. - 2005. - Vol. 20, № 6. - P. 15291533.

164. Low-dose aspirin for in vitro fertilization or intracytoplasmic sperm injection: a systematic review and a meta-analysis of the literature / F. Dentali, W. Ageno, E. Rezoagli [et al.] // The Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2012. - Vol. 10, № 10. - P. 2075-2085.

165. Lucena, E. Immune abnormalities in endometriosis comprising infertility in IVF patients / E. Lucena, J. Cubillos // Journal of Reproductive Medicine. 1999. - Vol. 44. - p. 458-464.

166. Makabe, S. Oocyte-follicle cell interactions during ovarian follicle development, as seen by high resolution scanning and transmission electron microscopy in humans / S. Makabe, T. Naguro, T. Stallone // Microscopy Research and Technique. -2006. - Vol. 69. - P. 436-449.

167. Microinjected kinetochore antibodies interfere with chromosome movement in meiotic and mitotic mouse oocytes / C. Simerly, R. Balczon, B. R. Brinkley [et al.] // Journal of Cell Biology. - 1990. - Vol. 111, № 4. - P. 1491-1504.

168. NK and trophoblast cells interaction: cytotoxic activity on recurrent pregnancy loss / D. I. Sokolov, V. A. Mikhailova, A. O. Agnayeva [et al.] // Gynecological Endocrinology. - 2019. - Vol. 35, № 1. - P. 5-10.

169. Obstetric antiphospholipid syndrome: A recent classification for an old defined disorder / S. D'Ippolito, P. L. Meroni, T. Koike [et al.] // Autoimmunity Reviews. - 2014. - Vol. 13. - P. 901-908.

170. Oocyte polarized light microscopy, assay of specific follicular fluid metabolites, and gene expression in cumulus cells as different approaches to predict fertilization efficiency after ICSI / A. Revelli, S. Canosa, L. Bergandi [et al.] // Reproductive Biology and Endocrinology. - 2017. - Vol. 15, № 1. - P. 47.

171. Ovarian autoimmunity: greater frequency of autoantibodies in premature menopause and unexplained infertility than in the general population / J. Luborsky, B. Llanes, S. Davies [et al.] // Clinical Immunology. - 1999. - Vol. 90, № 3. - P. 368-74.

172. Ovarian reserve in women with primary antiphospholipid syndrome / L. Yamakami, P. Serafini, D. de Araujo [et al.] // Lupus. - 2014. - Vol. 23, № 9. - P. 862867.

173. Parr, M. Immunohistochemical localization of immunoglobulins A, G and M in the mouse female genital tract / M. Parr, E. Parr // Journal of Reproduction and Fertility. - 1985. - Vol. 74. - P. 361-70.

174. Pathophysiological aspects of thyroid hormone disorder/thyroid peroxidase autoantibodies and reproduction / R. Vissenberg, V. D. Manders, S. Mastenbroek [et al.] // Human Reproduction Update. - 2015. - Vol. 21, № 3. - P. 378-387.

175. Patients with antinuclear antibody-positive juvenile idiopathic arthritis constitute a homogeneous subgroup irrespective of the course of joint disease / A. Ravelli, E. Felici, S. Magni-Manzoni [et al.] // Arthritis and Rheumatology. - 2005. - Vol. 52, № 3. - P. 826-832.

176. Potential markers that complement expression of CA125 in epithelial ovarian cancer / D. G. Rosen, L. Wang, J. N. Atkinson [et al.] // Gynecologic Oncology. - 2005. - Vol. 99, № 2. - P. 267-277.

177. Practice Committee of American Society for Reproductive Medicine. Definitions of infertility and recurrent pregnancy loss: a committee opinion // Fertility Sterility. - 2013. - Vol. 99, № 1. - P. 63.

178. Pregnancy outcome is not affected by antiphospholipid antibody status in women referred for in vitro fertilization / I. T. Chilcott, R. Margara, H. Cohen [et al.] // Fertility Sterility. - 2000. - Vol. 73, № 3. - P. 526-530.

179. Prevalence of antiphospholipid antibodies among women experiencing unexplained infertility and recurrent implantation failure / R. Sauer, R. Roussev, R. S. Jeyendran [et al.] // Fertility Sterility. - 2010. - Vol. 93, № 7. - P. 2441-2443.

180. Prevalence, specificity and significance of ovarian antibodies during spontaneous premature ovarian failure / P. Fénichel, C. Sosset, P. Barbarino-Monnier [et al.] // Human Reproduction. - 1997. - Vol. 12, № 12. - P. 2623-2628.

181. Randomised controlled trial of aspirin and aspirin plus heparin in pregnant women with recurrent miscarriage associated with phospholipid antibodies (or antiphospholipid antibodies) / R. Rai, H. Cohen, M. Dave [et al.] // British Medical Journal. - 1997. - Vol. 314, № 7076. - P. 253-257.

182. Recombinant versus urinary gonadotrophin for ovarian stimulation in assisted reproductive technology cycles / M. van Wely, I. Kwan, A. L. Burt [et al.] // The Cochrane Database of Systematic Reviews. - 2011. - Vol. 2. - CD005354.

183. Relationship between Antithyroid Antibody and Pregnancy Outcome following in Vitro Fertilization and Embryo Transfer / Y. P. Zhong, Y. Ying, H. T. Wu [et al.] // International Journal of Medical Science. - 2012. - Vol. 9. - P. 121-125.

184. Reproduction and sera embryotoxicity after immunization of monkeys with the laminin peptides YIGSR, RGD, and IKVAV / B. J. Chambers, N. W. Klein, S. H. Conrad [et al.] // Proceedings National Academy of Sciences of the United States of America. -1995. - Vol. 92. - P. 6818-6822.

185. Schumacher, A. Human Chorionic Gonadotropin as a Pivotal Endocrine Immune Regulator Initiating and Preserving Fetal Tolerance / A. Schumacher // International Journal of Molecular Science. - 2017. - Vol. 18, № 10.

186. Selenium binding protein 1 in ovarian cancer / K. Huang K, D. Park, S. Ng [et al.] // International Journal of Cancer. - 2006. - Vol. 118, № 10. - P. 2433-2440.

187. Selenium dependent glutathione peroxidase activity in human follicular fluid / T. Paszkowski, A. I. Traub, S. Y. Robinson [et al.] // Clinica Chimica Acta. - 1995. -Vol. 236, № 2. - P. 173-180.

188. Selenium-Binding Protein 1 (SBP1) autoantibodies in ovarian disorders and ovarian cancer / Y. Yu-Rice, S. Edassery, N. Urban [et al.] // Reproduction. - 2017. - Vol. 153, № 3. - P. 277-284.

189. Serum antiendometrial antibodies in infertile women - potential risk factor for implantation failure / A. Sarapik, K. Haller-Kikkatalo, M. Utt [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2010. - Vol. 63, № 5. - P. 349-357.

190. Simon, A. Assessment and treatment of repeated implantation failure (RIF) / A. Simon, N. Laufer // Journal of Assisted Reproduction and Genetics. - 2012. - Vol. 29. - P. 1227-1239.

191. Simpson, E. R. Biology of aromatase in the mammary gland / E. R. Simpson // Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. - 2000. - Vol. 5, № 3. - P. 251258.

192. Soluble member(s) of the mesothelin / megakaryocyte potentiating factor family are detectable in sera from patients with ovarian carcinoma / N. Scholler, N. Fu,

Y. Yang [et al.] // Proceedings National Academy of Sciences of the United States of America. - 1999. - Vol. 96, № 20. - P. 11531-11536.

193. Stagnaro-Green, A. Thyroid antibodies and miscarriage: where are we at a generation later? / A. Stagnaro-Green // Journal of Thyroid Research. - 2011. - P. 841949.

194. Sthoeger, Z. Anti-cardiolipin antibodies induce pregnancy failure by impairing embryonic implantation / Z. M. Sthoeger, E. Mozes, B. Tartakovsky [et al.] // Proceedings National Academy of Sciences of the United States of America. - 1993. -Vol. 90. - P. 6464-6467.

195. Sunkara, S. K. Association between the number of eggs and live birth in IVF treatment: an analysis of 400 135 treatment cycles / S. K. Sunkara, V. Rittenberg, N. Raine-Fenning [et al.] // Human Reproduction. - 2011. - Vol. 26, № 7. - P. 1768-1774.

196. Systematic evaluation of candidate blood markers for detecting ovarian cancer / C. Palmer, X. Duan, S. Hawley [et al.] // PLoS ONE. - 2008. - Vol. 3, № 7. -e2633

197. Talwar, G. P. Immunological approaches against human chorionic gonadotropin for control of fertility and therapy of advanced-stage cancers expressing hCG subunits / G. P. Talwar, J. C. Gupta, N. V. Shankar // American Journal of Reproductive Immunology. - 2011. - Vol. 66, № 1. - P. 26-39.

198. Taniguchi, F. Results of prednisolone given to improve the outcome of in vitro fertilization-embryo transfer in women with antinuclear antibodies / F. Taniguchi // Journal of Reproductive Medicine. - 2005. - Vol.50, № 6. - P. 383-388.

199. The impact of thyroid function and thyroid autoimmunity on embryo quality in women with low functional ovarian reserve: a case-control study / A. Weghofer, E. Himaya, V. A. Kushnir [et al.] // Reproductive Biology and Endocrinology. - 2015. -Vol. 13, № 43. - P. 1-6.

200. The correlation of autoantibodies and uNK cells in women with reproductive failure / N. G. Mariee, E. Tuckerman, S. Laird [et al.] // Journal of Reproductive Immunology. - 2012. - Vol. 95, № 1-2. - P. 59-66.

201. The effect of vitamin D supplementation on thyroid autoantibody levels in the treatment of autoimmune thyroiditis: a systematic review and a meta-analysis / S. Wang, Y. Wu, Z. Zuo [et al.] // Endocrine. - 2018. - Vol. 59, № 3. - P. 499-505.

202. The effects of adjuvant therapies on embryo transfer success / R. Shirlow, M. Healey, M. Volovsky [et al.] // Journal of reproduction & infertility. - 2017. - Vol. 18, № 4. - P. 368-378.

203. The Euro-Phospholipid project: epidemiology of the antiphopholipid syndrome in Europe / R. Cervera, M. C. Boffa, M. A. Khamashta [et al.] // Lupus. - 2009. Vol 18, № 10. - P. 889-893.

204. The HSD-hCG vaccine prevents pregnancy in women, feasibility study of a reversible safe contraceptive vaccine / G. P. Talwar, O. M. Singh, S. K. Gupta [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 1997. - Vol. 37, № 2. - P. 153-160.

205. The Impact of Autoantibodies on IVF Treatment and Outcome: A Systematic Review / M. Simopoulou, K. Sfakianoudis, E. Maziotis [et al.] // International Journal of Molecular Sciences. - 2019. - Vol. 20, № 4. - P. 892.

206. The impact of thyroid autoimmunity on IVF/ICSI outcome: a systematic review and meta-analysis / A. Busnelli, A. Paffoni, L. Fedele L [et al.] // Human Reproduction Update. - 2016. - Vol. 22, № 6. - P. 775-790.

207. The impact of thyroid function and thyroid autoimmunity on embryo quality in women with low functional ovarian reserve: a case-control study / A. Weghofer, E. Himaya, V. A. Kushnir [et al.] // Reproductive Biology and Endocrinology. - 2015. - Vol. 13, №1. - P. 43-49.

208. The in vitro regulation of ovarian follicle development using alginate-extracellular matrix gels / P. Kreeger, J. Deck, T. Woodruff [et al.] // Biomaterials. - 2006. - Vol. 27, № 5. - P. 714-723.

209. The neglected morula/compact stage embryo transfer / J. Tao, R. Tamis, K. Fink [et al.] // Human Reproduction. - 2002. - Vol. 17, № 6. - P. 1513-1518.

210. The pathogenic role of anti-thyroglobulin antibody on pregnancy: evidence from an active immunization model in mice / S. T. Matalon, M. Blank, Y. Levy [et al.] // Human Reproduction. - 2003. - Vol. 18, № 5. - P. 1094-1099.

211. The pathogenic role of circulating Hashimoto's Thyroiditis-derived TPO-positive IgG on fetal loss in naive mice / E. Borodina, I. Katz, A. Antonelli [et al.] // American Journal of Reproductive Immunology. - 2021. - Vol. 85. - e13331.

212. Thrombophilia and outcomes of assisted reproduction technologies: a systematic review and meta-analysis / M. Di Nisio, A. W. Rutjes, N. Ferrante [et al.] // Blood. - 2011. - Vol. 118, № 10. - P. 2670-2678.

213. Thyroid Autoimmunity and ICSI Pregnancy Outcomes / K. Poppe, C. Autin, F. Veltri [et al.] // Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 2018. - Vol. 103, № 5. - P. 1755-1766.

214. Transcriptional regulation and biological functions of selenium-binding protein 1 in colorectal cancer in vitro and in nude mouse xenografts / N. M. Pohl, C. Tong, W. Fang [et al.] // PLoS One. - 2009. - Vol. 4, № 11. - e7774.

215. Trophoblast-specific expression and function of the integrin a7 subunit in the peri-implantation mouse embryo / E. Klaffky, R. Williams, C. C. Yao [et al.] // Developmental Biology. - 2001. - Vol. 239, № 1. - P. 161-175.

216. Tuohy, V. K. Autoimmunity and premature ovarian failure / V. K. Tuohy V, C. Z. Altuntas // Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. - 2007. - Vol. 19, № 4. - P. 366-369.

217. Unraveling the complex relationship between cancer immunity and autoimmunity: lessons from melanoma and vitiligo / H. Uchi, R. Stan, M. J. Turk [et al.] // Advances in Immunology. - 2006. - Vol. 90. - P. 215-241.

218. Waldenstrom, U. Low-dose aspirin in a short regimen as standard treatment in in vitro fertilization: a randomized, prospective study / U. Waldenstrom, D. Hellberg, S. Nilsson [et al.] // Fertility Sterility. - 2004. - Vol. 81, № 6. - P. 1560-1564.

219. Wass, M. Isolation of antibodies to HCG/LH from human sera / M. Wass, K. McCann, K.D. Bagshaw // Nature. - 1978. Vol. 274, № 5669. - P. 369-370.

220. Yang, F. Dynamic function and composition changes of immune cells during normal and pathological pregnancy at the maternal-fetal interface / F. Yang, Q. Zheng, L. Jin // Frontiers in Immunology. - 2019. - Vol. 10. - P. 2317.

221. Yang, W. Selenium-binding protein 1 as a tumor suppressor and a prognostic indicator of clinical outcome / W. Yang, A. M. Diamond // Biomarker Research. - 2013. - Vol. 1, № 1. - P. 15.

222. Yuuki Charlie Barke, Na. Is there evidence to support serum antinuclear antibodies testing in women with recurrent implantation failure undergoing in vitro fertilization? / Y. C. B. Na, S. Asif, N. Raine-Fenning // Human Fertility. - 2017. - Vol. 20, № 4. - P. 224-226.

223. Zachou, K. Autoantibodies and autoantigens in autoimmune hepatitis: Important tools in clinical practice and to study pathogenesis of the disease / K. Zachou // Journal of Autoimmune Diseases. - 2004. - Vol. 1, № 1. - P. 2.

224. Zhang, J. Reduced selenium-binding protein 1 is associated with poor survival rate in gastric carcinoma / J. Zhang, W. G. Dong, J. Lin // Medical Oncology. -2011. -Vol. 28. - P. 481-487.

SAINT PETERSBURG STATE UNIVERSITY

Manuscript copyright

Safarian Galina Khachikovna

ASSISTED REPRODUCTIVE TECHNOLOGIES EFFICIENCY IN WOMEN WITH INFERTILITY AND PRESENCE OF REPRODUCTIVELY SIGNIFICANT AUTOANTIBODIES

3.1.4. Obstetrics and gynecology

Dissertation is submitted for the Candidate of Medical Sciences degree

Translation from Russian

Scientific advisors

Doctor of Medical Sciences, Professor Gzgzyan Alexander Mkrtichevich Doctor of Medical Sciences, Professor Yehuda Shoenfeld

Saint Petersburg 2022

CONTENTS

INTRODUCTION...................................................................................................141

CHAPTER 1. LITERATURE REVIEW...............................................................148

1.1. Modern approaches investigating the role of autoantibody' carrier state on the reproductive failure.................................................................................................148

1.2. Influence of autoantibody carrier state on the efficacy of IVF (IVF/ICSI) outcome...................................................................................................................159

1.3. Modern approaches of ART programs improvement in the autoantibody carrier state..............................................................................................................164

CHAPTER 2. RESEARCH MATERIALS............................................................167

CHAPTER 3. RESEARCH METHODS...............................................................170

3.1. Clinical and anamnestic data analysis.............................................................170

3.2. Hormonal method............................................................................................170

3.3. Sonographic method........................................................................................170

3.4. Ovarian stimulation protocol...........................................................................171

3.5. Fertilization and embryo culture methods.......................................................172

3.6. Embryo transfer into uterine cavity.................................................................174

3.7. Po st-transfer period support..........................................................................174

3.8. Pregnancy diagnostics......................................................................................174

3.9. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of follicular fluid.................175

3.10. IVF (IVF/ICSI) efficiency evaluation............................................................177

3.11. Statistical analysis..........................................................................................178

CHAPTER 4. RESULTS OF THE DISSERTATION.........................................179

4.1. Investigated groups clinical and anamnestic parameters.................................179

4.2. Results of a hormonal profile of the patients before COS initiation within IVF (IVF/ICSI) protocols...............................................................................................184

4.3. Results of the follicular fluid autoantibody evaluation by ELISA in the setting of IVF (IVF/ICSI) program....................................................................................185

4.4. Results of ovarian reserve investigation in relation to follicular fluid autoantibodies assay in patients undergoing IVF (IVF/ICSI)................................188

4.5. Efficiency parameters of controlled ovarian stimulation in relation to follicular fluid autoantibodies assay in patients undergoing IVF (IVF/ICSI)........................190

4.6. Development of mathematical model for suboptimal response prognosis in IVF (IVF/ICSI) protocols...............................................................................................192

4.7. Indicators of fertilization and early embryogenesis among investigated patients undergoing IVF (IVF/ICSI)....................................................................................196

4.7.1. Evaluation of the mature oocytes' number and proportion among investigated patients undergoing IVF (IVF/ICSI).......................................................................196

4.7.2. Evaluation of two-pronuclear zygotes number and fertilization rate in patients investigated undergoing IVF (IVF/ICSI)................................................................197

4.7.3. Evaluation of day 3 high-quality embryos in patients investigated undergoing IVF (IVF/ICSI).......................................................................................................200

4.7.4. Evaluation of day 4 high-quality embryos in patients investigated undergoing IVF (IVF/ICSI).......................................................................................................202

4.7.5. Evaluation of day 5 high-quality embryos in patients investigated undergoing IVF (IVF/ICSI).......................................................................................................204

4.8. Indicators of infertility's treatment clinical efficiency in patients of examined groups undergoing IVF (IVF/ICSI)........................................................................205

4.8.1. Development of a mathematical model predicting the absence of clinical pregnancy per cycle of IVF.....................................................................................207

4.8.2. Development of a mathematical model predicting the absence of live birth per

IVF cycle.................................................................................................................211

CHAPTER 5. DICUSSION OF THE RESULTS.................................................216

CONCLUSIONS...................................................................................................223

PRACTICAL RECOMMENDATIONS.............................................................225

LIST OF ABBREVIATIONS..............................................................................226

REFERENCES ...................................................................................................... 228

INTRODUCTION Background

Infertility and repeated IVF (IVF/ICSI) failures in the setting of autoimmune diseases and/or autoantibody carrier state are highly relevant and attract close attention among researchers worldwide [58, 77, 97, 99, 105, 138, 146, 150, 157, 190, 213]. It is supposed that immunologic factors exert negative effect on various stages of human reproduction - folliculogenesis [31, 41, 58, 60, 61, 106, 150, 188], fertilization and embryonic development [43, 109, 199], as well as implantation [35, 62, 63, 76, 77, 106, 130, 134, 140, 141, 183, 219]. It was reported that women with diagnosis of idiopathic infertility present with higher serum antiphospholipid, antinuclear and antithyroid autoantibody levels [44, 58, 59, 66, 107, 179, 198, 213]. Also, the results of recent studies point on a connection between cell immunity and repeated failures of implantation after IVF (IVF/ICSI) in women with autoimmune disorders [36, 72]. Obviously, summarizing the above-mentioned, there are multiple ways of autoantibody action on female reproductive potential.

A number of authors claimed on decreased efficiency of infertility treatment programs in the presence of circulating autoantibodies [44, 58, 76, 77, 107, 125, 207, 213]. However, despite of the extensive studies in the field of reproductive immunology, there is still no single opinion on autoantibodies' impact on female reproduction and its influence on IVF treatment efficiency. The investigation of follicular fluid obtained on the day of oocyte retrieval for the presence of produced autoimmune biomarkers became possible due to the introduction of assisted reproductive technologies into clinical practice. Taking into account that follicular fluid represents a unique microenvironment for maturing oocyte, it's biochemical characteristics play a crucial role in oocyte quality, its fertilization potential and further embryonic development. Some studies reported on a positive correlation exist between serum and follicular fluid antibody levels making them possible to affect the most initial steps of reproductive process [39, 107, 131, 183, 207].

However, studies on autoantibodies significance in folliculogenesis during controlled ovarian stimulation in IVF (IVF/ICSI) protocols, further relationship between immunologic factors and embryological/clinical outcomes of ART programs are scarce, have confronting results and, as a rule, are limited to singe autoantibody investigation in the follicular fluid.

All the above-mentioned necessitate further studies determining and systematizing reproductively significant autoimmune markers, altering female fertility and/or leading to in vitro fertilization failures, taking into account the strategy of patient-specific fertility restoration.

Aim of the study:

Evaluation of reproductively significant autoantibody carrier state on infertility treatment efficiency and it's prognosis in the setting of assisted reproductive technologies.

Objectives of the study

1. To determine the levels of anti-thyroperoxidase (AT-TPO), anti-thyroglobulin (AT-TG), anti-phosphatidylinositol (anti-PI), anti-phosphatidylserine (anti-PS), anti-cardiolipin (anti-CL), anti-Beta-2 glycoprotein 1 (Anti-b2GPI), antinuclear antibodies (ANA), anti-laminin-1 (anti-LAM1), anti-aromatase (anti-ARO), anti-a-enolase 1 (anti-ENO1), anti-b-human chorionic gonadotropin (anti-CGb), anti-selenium binding protein 1 (anti-SBP1), anti-mesothelin (anti-MSLN) antibodies in follicular fluid and to estimate the prevalence of the latter among women with infertility undergoing IVF (IVF/ICSI).

2. To define the presence of correlation between serum and follicular fluid anti-thyroperoxidase and anti-thyroglobulin levels among women-carriers of antithyroid antibodies, undergoing IVF (IVF/ICSI).

3. To determine main characteristics of ovarian reserve and ovarian response to controlled stimulation in ART programs among women with infertility and depending on the presence of reproductively significant autoantibodies.

4. To determine the main embryological outcome of IVF (IVF/ICSI) protocols in women with infertility depending on the presence of reproductively significant autoantibodies.

5. To determine IVF (IVF/ICSI) protocols clinical efficiency among women with infertility depending on the presence of reproductively significant autoantibodies.

6. To develop the prognostic model of controlled ovarian stimulation clinical efficiency in the setting of IVF (IVF/ICSI) in women with infertility depending on the presence of reproductively significant autoantibodies.

Scientific novelty and theoretical significance

Current study revealed a negative impact of antibody carrier state on in vitro fertilization program efficiency among women with infertility. For the first time, an investigation of follicular fluid for a wide autoantibody panel was carried out, and the prevalence of each autoimmune biomarker in infertile patient population was estimated. A significant correlation was noted between the levels of autoantibodies and ovarian reserve decline.

For the first time, a comparative analysis of the main controlled ovarian stimulation parameters, parameters of early human embryo development as well as clinical efficiency of IVF cycles was performed in infertile women with presence of reproductively significant autoantibodies. For the first time, most important prognostic autoimmune markers, resulting in controlled ovarian stimulation and clinical efficiency decline of ART were established.

A threshold values of serum anti-thyroperoxidase Ab of more than 305,0 IU/ml and follicular fluid anti-thyroperoxidase Ab of more than 105,0 IU/ml as well as anti-cardiolipin higher than 5,1 IU/ml, related to lower number of oocytes retrieved were first established. Also, for the first time, a correlation between oocyte fertilization rate and follicular fluid anti-aromatase antibody was revealed. The elevated levels of follicular fluid anti-thyroperoxidase Ab and anti-cardiolipin Ab were associated with poorer embryological outcome of in vitro cycles. For the first time, threshold values of serum anti-thyroperoxidase Ab related to decreased IVF (IVF/ICSI) clinical efficiency per initiated cycle were established.

The practical significance of work

The present study revealed prognostic autoimmune biomarkers for IVF (IVF/ICSI) outcome in reproductive-aged women with infertility. It was proven that follicular fluid anti-thyroperoxidase and anti-cardiolipin antibody levels are of a prognostic value for controlled ovarian stimulation efficiency outcome. Taking into account a significant high correlation between serum and follicular fluid anti-thyroperoxidase Ab level, their threshold serum value for prognosis of controlled ovarian stimulation efficiency were also determined. It turned out, that serum anti-thyroperoxidase Ab of higher than 305,0 IU/ml and follicular fluid anti-thyroperoxidase Ab levels higher than 105,0 IU/ml as well as follicular fluid anti-cardiolipin Ab higher 5,1 IU/ml were associated with decreased response to controlled ovarian stimulation.

Using logistic regression analysis a mathematic model for clinical pregnancy prognosis in ART programs for women-carriers of reproductively significant autoantibodies was created. According to it, elevated serum anti-thyroperoxidase Ab of more than 305,0 IU/ml and follicular fluid anti-thyroperoxidase Ab of more than 105,0 IU/ml represent prognostically unfavorable factors for clinical pregnancy after IVF.

Based on logistic regression analysis a significant decrease in live birth rate and increase in early pregnancy termination after IVF was associated with serum anti-thyroperoxidase Ab of more than 125,0 IU/ml. Thus, the named threshold value can be used for making a decision regarding embryo transfer in "fresh" IVF cycle.

Main provisions to be defended

1. Presence of diagnostic titers of reproductively significant autoantibodies in follicular fluid of patients with infertility significantly decreases ovarian response to ovarian stimulation, and parameters of early human embryo development in IVF (IVF/ICSI), expressed in lower number of oocytes retrieved, proportion of mature oocytes, fertilization rate, number of 2PN zygotes, lower probability of high quality embryo presence on day 3 and 4 of in vitro development, lower proportion and number of top-quality blastocyst.

2. The decline of ART programs clinical efficiency among patients-carriers of reproductively significant autoantibodies, expressed as lower clinical pregnancy rate, is associated with above threshold level of follicular fluid anti-thyroperoxidase Ab of more than 105,0 IU/ml, in sera - 305,0 IU/ml.

3. The logistic regression model based on serum anti-thyroperoxidase Ab level provides an opportunity to estimate the live birth rate probability after IVF cycle in the presence of serum AT-TPO of less than 125,0 IU/ml with 79,5% sensitivity and 71,4% specificity, which allows to recommend embryo transfer after achievement of serum antibody values less than a threshold limit.

Appraisal of the work

Materials of the dissertation were reported at the international scientific school-conference 4th Academy of Autoimmunity, Saint-Petersburg, 2019; at the II all-Russian scientific-practical conference for obstetricians and gynecologists "Ott reading", Saint-Petersburg, 2019; at the Shoenfeld Fridays' Mosaic of Autoimmunity e-Meetings at Sheba Medical Center e-MEETING #42, Tel-Aviv, Israel, 2021; at the Shoenfeld Fridays' Mosaic of Autoimmunity e-Meetings at Sheba Medical Center e-MEETING #60, Tel-Aviv, Israel, 2021; at the XIV Regional scientific-educational forum «Mother and Child» and Plenum ROAG, Moscow, 2021; at the XXII all-Russian scientific-educational forum «Mother and Child» Plenum ROAG, Moscow, 2021; at the Scientific-practical school in

reproductology, Saint-Petersburg, 2021; at the International conference dedicated to relevant questions of modern biotechnologies clinical introduction to reproductive medicine "Medicine for the future. From planning to delivery", Saint-Petersburg, 2021; at the III all-Russian scientific-practical conference for obstetricians and gynecologists "Ott reading", Saint-Petersburg, 2021; at the scientific conference of young scientists and specialists "Reproductive medicine: a youth's vision - 2021", Saint-Petersburg, 2021; at the Scientific-practical conference with international participation "Relevant questions of obstetrics, gynecology and reproductology with the youth's vision", Samara, 2021; at the Shoenfeld Fridays' Mosaic of Autoimmunity e-Meetings at Sheba Medical Center e-MEETING #92, Tel-Aviv, Israel, 2022; at the 5th IVF-Worldwide Online Congress in Reproductive Medicine, 2022; at the II scientific-practical conference with international participation "Health of woman, fetus, newborn", Saint-Petersburg, 2022 .

The developed models for ovarian response prediction to controlled ovarian stimulation and clinical outcome within IVF programs were introduced into educational process at the Department of Obstetrics, Gynecology and Reproductology of the Medical Faculty, Saint Petersburg State University; and into clinical practice at the Department of Assisted Reproductive Technologies; the Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D. O. Ott.

4 printed works were released based on the dissertation, including 3 articles in peer-reviewed journals, accepted by VAK and 1 article in journals of Scopus database.

Personal contribution of the author to current study

All the steps of scientific research, including topic selection, aim and objectives generation, clinical material collection, ELISA investigation of follicular fluid, statistical analysis, interpretation and generalization of the results obtained, were carried out independently by the author. Current research was performed by the postgraduate student at the Department of Assisted Reproductive Technologies of the Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D. O. Ott (Head of the department - M. D., Professor Gzgzyan A. M.).

Dissertation's structure and volume

The dissertation represents 115 pages of typewritten text. Consists of content, introduction, literature review, chapters with materials and research methods, the results of the own studies, their discussion, conclusions, practical recommendations, list of abbreviations and references. The dissertation is illustrated with 19 figures and 19 tables. The list of references includes 25 domestic and 199 foreign sources.

CHAPTER 1. LITERATURE REVIEW

1.1. Modern approaches investigating the role of autoantibody' carrier state on

the reproductive failure

Autoimmune thyroiditis being the most common cause of thyroid failure, has a negative impact on female fertility, resulting in menstrual irregularities, infertility and pregnancy loss [21, 53]. Along with the specific ultrasound changes and elevated serum TSH level, the circulating serum autoantibodies against thyroperoxidase (AT-TPO) and thyroglobulin (AT-TG) represent another diagnostic marker of the disease. [16]. According to some studies, the prevalence of autoimmune thyroiditis among women with infertility of unknown origin reaches 10% [16, 213]. Nevertheless, the isolated antithyroid autoantiboby presence among women of reproductive age is seen on average in 8-14% of cases and often remains undiagnosed due to the absence of typical clinical features of the disease [174].

The investigation of anithyroid autoantibodies' potential role on female reproductive system is particularly relevant in cases when the reason of infertility remains unknown.

Antithyroid autoantibodies are believed to influence ovarian reserve through several potential ways. According to one of them, thyroid autoimmunity can be a part of polyendocrine autoimmune syndrome II with involvement of other endocrine glands, such as Karpenters' syndrome (concomitant diabetes mellitus type I) and Schmidts' syndrome (concomitant primary hypercorticism) [16, 61, 97]. Also, there is evidence that after the exclusion from investigation of women with known causes of diminished ovarian reserve the frequency of AT-TPO carrier state considerably differed among women with low (22,7%), normal (14,0%) and high (10,3%, p<0,05) ovarian reserve [129, 149].

Scientists from Massachusetts University have assessed of the relationship between the functional state of the thyroid gland, antithyroid antibody carrier state and parameters of ovarian reserve among 378 women with the infertility of unknown origin [16]. Based on the results, authors revealed a connection between reduced level of free

triiodothyronine (FT3) with low antral follicle count (p=0.009) [16]. There was no dependence between the levels of TSH, total T4, free thyroxine (FT4) and the pool of follicles. Regarding autoantibody carrier state, less number of antral follicles was observed in women positive for AT-TPO Ab (average discrepancy - 2,3 follicles; 95% CI 3,8-0,5; p = 0,01) [16]. Thus, the authors pointed on a direct connection only between the FT3 concentration and AT-TPO positivity with antral follicle count [16, 59].

Another theory proposed by Monteleone et al. (2011), explains the reason of fertility decline in women with AIT by the presence of AT-TG and AT-TPO in the follicular fluid [16, 107]. Data on a positive correlation between serum and follicular fluid values were obtained, indicating the antibodies' ability to freely pass the blood-follicle barrier [16, 107]. According to researchers, antithyroid antibodies may exert a direct cytotoxic effect on a growing follicle and negatively affect the quality of the future embryo due to interaction with zona pellucida, violating its functional role, leading to significantly reduced fertilization rate, lower number of top-quality embryos and, accordingly, clinical pregnancy rate [16]. In the 2000's, Lee et al. first reported on a direct negative impact of thyroid autoantibodies on embryo quality. They detected antithyroid autoantibodies on the surface of pre-implantation embryo [143]. Similar results, characterized by impaired embryo quality of the in the settings of ART programs in women-carriers of AT-TPO, were reported by Werghofer et al. [199]. Researchers emphasized the key effect of antibodies against thyroid gland, not hypothyroidism, on the main morphological characteristics of the embryos obtained.

It is also possible that antithyroid antibodies have a direct embryotoxic effect on trophoblast, preventing the normal course of pregnancy [16, 193, 210]. This statement was supported by the results of experimental studies: in mice, immunized by human IgG-TG and IgG-TPO, a pathological immune recognition of the above-mentioned and placental AT-TG and AT-TPO antigens occurred, leading to lower fetal and placental weights and delayed pregnancy development [16, 210, 211].

Infertility, IVF failures and pregnancy loss in women affected by autoimmune thyroiditis are also explained by increasing activity of blood NK and NK-like cells [16, 72, 168]. The immunological status of women with AIT is undoubtedly changed due to

higher NK and NK-like cells number, the potential of their cytotoxicity and the predominance of pro-inflammatory reactions, all of which affect the reproductive potential [16].

Nowadays, the effect of antiphospholipid antibodies (APA) on embryo's implantation, on the course of early pregnancy, including early miscarriage and/or multiple in vitro fertilization failures is actively discussed [37, 177].

Antiphospholipid syndrome (APS) is the most common acquired thrombophilia and is characterized by positive autoantibodies against cardiolipin (anti-CL), antibodies to p2 glycoprotein 1 (anti-b2GP1) and lupus anticoagulant (LA) [45]. The average age of the disease onset is 31 years, with the ratio of female and male patients 5: 1 [45, 203]. APS is associated with systemic lupus erythematosus (SLE) in approximately 35% of cases, 5% of patients exert lupus-like syndrome, 5% have other immunopathological conditions, isolated APS is seen in 55% of patients [149].

Miscarriage, preeclampsia, intrauterine growth retardation and antenatal fetal death are well-known pregnancy complications of antiphospholipid syndrome [5, 50, 51, 52]. However, the role of antiphospholipid antibodies in infertility and multiple IVF failures remain unclear. The hypothesis about harmful effects of antiphospholipid antibodies on female fertility was first proposed more than 30 years ago [5, 117, 149]. Currently it is known, that up to 9% of women with repeated IVF failures are positive for more than one circulating antiphospholipid autoantibodies [179]. According to other studies, in women with idiopathic infertility the prevalence of APA reaches 60% [5, 66]. Three decades ago, an experimental study demonstrated that in mice not previously immunized with anti-cardiolipin antibodies, after the introduction of IgM and IgG immunoglobulins to the latter, a delay in fertilization and clinical pregnancy occurred, while embryo resorption rate increased [144].

The influence of antiphospholipid antibodies on embryo implantation is widely discussed. The mechanisms underlying the defect in placentation were demonstrated in a series of experimental studies. For instance, cultivation of human endometrial cells with anti-p2GPI IgG, obtained from patients with antiphospholipid syndrome, was associated

with decreased VEGF production and, accordingly, inhibition of angiogenesis within endometrium [47].

Di Simone et al. noted a retarded syncytiotrophoblast differentiation while cultivating trophoblast cells of physiologically occurring pregnancy with antiphospholipid IgG antibodies, leading to a decreased production of chorionic gonadotropin [9, 48].

The addition of IgG antiphospholipid antibodies to the culture of cytotrophoblast led to suppressed expression a-1-integrin and VE-kadgerin and increased expression of a-5-integrin and E-kadgerin. Alteration of processes related to trophoblast invasion was described on the culture of cytotrophoblast cells: the suppression of a-1-integrin and VE-kadgerin expression and activation of a-5-integrin and E-kadgerin expression occurred after addition of antiphospholipid IgG obtained from patients with APS [2, 46, 136]. All the above listed, results in decreased trophoblast invasion, altered angiogenesis, leading to clinical manifestation of early miscarriage [2, 116, 169].

A series of experimental studies revealed direct embryotoxic effects of antiphospholipid antibodies. Thus, the co-incubation of mouse embryos with IgG APA was accompanied by a delay or even arrest of their development [154]. In another study, a loss of embryo's capability for implantation was noted after its co-incubation in an environment with antiphospholipid antibodies and transfer to mice not previously immunized with APA [89]. Moreover, the presence of elevated anti-cardiolipin autoantibodies in women undergoing infertility treatment, was accompanied by altered pre-implantation embryo quality when compared to women, negative for APA (50% VS 20%) [125].

The increased NK cells cytotoxicity is believed to be another reason for implantation failures among women-carriers of antiphospholipid autoantibodies, which was noted in 88% of anti-phosphatidyletanolamine and anti-phosphatidylserine positive infertile women undergoing IVF when compared to 25% APA negatives [36]. At the same time, opposite data exist. In a study conducted by Mariee et al., the immunohistochemical evaluation of endometrium obtained from women with multiple IVF failures did not

confirm a correlation between the number of uterine NK cells with the presence of antithyroid and antiphospholipid autoantibodies [200].

There are also reports on the detection of APA in the follicular fluid. In their clinical study, Matsubayashi et al. determined the levels of antiphospholipid IgG autoantibodies in the follicular fluid of women with history of repeated IVF failures. The authors reported on a reliable correlation between APA serum and follicular fluid levels [131].

Nowadays, there is a limited number of studies evaluating ovarian function in the presence of antiphospholipid antibodies. In 2016, Vega et al. reported that the presence of at least one type of APA was associated with significantly reduced serum AMH level in 14,2% of women of the study group [41]. However, no information about the activity of the autoimmune process among women recruited was provided. A significantly lower antral follicle count upon ultrasound examination in patients with APS (<5 follicles) relatively to the controls (<10 follicles), despite of the comparable serum AMH level was determined in another cross-sectional study [172].

Antinuclear antibodies are considered another marker of reproductive failures. They represent a large group of autoantibodies against DNA, nucleoproteins, histones, nuclear ribonucleoproteins and other nuclear components and are involved in the pathogenesis of several systemic autoimmune diseases [56, 78, 96, 159, 175, 223].

Based on the literature, the presence of ANA is also associated with immunologically induced infertility. So, a number of studies have demonstrated that the prevalence of antinuclear autoantibodies among women undergoing in vitro fertilization reaches 20 - 28,7% [44, 198]. In addition, the frequency of ANA in women with history of multiple IVF failures comprises 35,1% [135] and reaches 27% among patients with endometriosis [165]. Some studies highlighted the relationship between named markers with adverse reproductive outcomes, including early miscarriage [151] and multiple IVF-ET failures [63, 76, 140, 141]. Nevertheless, the main pathogenetic mechanisms underlying reproductive failure are not fully understood today. There are data indicating a positive correlation between serum and follicular fluid levels of ANA in women affected by an autoimmune condition. Additionally, a negative correlation between antinuclear

antibody positivity and the number of high-quality embryos obtained in IVF/ICSI cycles has been reported [43].

An experimental study conducted on mouse embryos in vivo, the co-incubication of which from the two-cell stage was carried out with purified ANA IgG revealed a distinct fluorescent signal directly within the embryos. Moreover, a serious delay or even arrest in the development of some embryos was noted [152, 154]. However, since there is no nuclear antigens and phospholipids within zona pellucida, a specific epitope for these antibodies remains unknown. In this regard, scientists suggest that unknown glycerin or protein cofactor may be the target for antibodies [194]. In another experimental study, the microinjection of anti-centromere IgG antibodies into rat oocytes led to interruption in chromosome division, followed by arrest in interphase of meiosis and prophase of mitosis [167]. All of the above-mentioned allows assuming that ANA may exert a direct toxic effect on oocyte and developing embryo, ultimately leading to subfertility.

Recently a large number of reports in scientific community appeared, discussing the effect of antibodies against laminin-1 on female reproductive potential. Laminin represents a multifunctional adhesive glycoprotein of basal membranes and thin extracellular matrix and consists of a-, P-, and y-chains [25, 81, 149]. Laminin-1 is known to increase the expression of type IV collagenase in early human embryo, enhancing the adhesion of trophoblast [161]. In an experimental study conducted on mouse embryos at the blastocyst stage, laminin-1 was located in the inner cell mass and in trophoblast [83, 215]. In humans, during the first trimester of pregnancy, a-1 chain of laminin is detected in the trophoblast' basal membrane and directly contacts with cells of villous trophoblast. In the second trimester, this chain is selectively determined between the villous basal membrane and proliferating islands of trophoblastic cells [149, 156]. Thus, laminin-1 can play a crucial role in all steps associated with embryo implantation, placentation and embryogenesis.

Autoantibodies to laminin-1 were first obtained in 1989 from sera of infertile primates; incubation of that serum with rat embryos resulted in embryonic development abnormalities [71, 173]. It was further demonstrated that the introduction of laminin-1 or

laminin-containing peptides (YIGSR or RGD) to fertile primates led to infertility and/or spontaneous abortion among animals tested [160, 184]. Later, in experimental models, the introduction of mouse laminin-1 resulted in high titers of antibodies against it and unfavorable pregnancy outcome among tested animals, namely increased fetal resorption and decreased weights of placentae and embryos for the given gestational age [28, 133].

The role of anti-laminin-1 antibodies in the development of reproductive failure was also actively investigated in humans. In early 2000's, a clinical study conducted by Inagaki et al. revealed that anti-laminin-1 IgG were identified in 31,1% of women with history of recurrent pregnancy loss [130]. Subsequently, the live birth rate was significantly lower in the same group when compared to controls (p<0,05). Thus, the authors concluded that IgG antibodies to laminin-1 adversely affect the initial stages of pregnancy development, i. e. embryo implantation, embryogenesis and active angiogenesis in the placenta [149].

Additionally, in the available literature, data exist indicating on the connection of antibodies to laminin-1 positivity with infertility, especially caused by endometriosis (29% of women affected) [33, 39]. The presence of anti-LAM1 in the study group reliably correlated with endometriosis. When comparing the average values of antibodies in groups of infertile women with confirmed endometriosis and without endometriosis, higher levels were noted in the main group (1,1 +/- 1,2 IU/ml) versus the comparison group (0,5 +/- 0,3 IU/ml) (p<0,05) [33].

Currently, it is also known that laminin-1, along with fibronectin, takes an active participation in oocyte maturation by accelerating polar body formation [208]. Opinions were expressed regarding anti-LAM1 presence in the follicular fluid. Indeed, the presence of these antibodies was first described by Caccavo et. al in the follicular fluid of 31% of women with infertility and endometriosis. Serum levels of antibodies positively correlated with the levels in the follicular fluid [39]. Based on this fact, the authors suggested that antibodies to laminin-1 along with other biological molecules are capable of penetration through blood-follicle barrier [149]. Thus, the number of mature oocytes MII negatively correlated with the follicular fluid anti-LAM1 (Rs=-0,549; p<0,05).

Same researchers reported on high titers of antibodies to laminin-1 among women affected by autoimmune thyroiditis regarding the control group (43.2% vs 3.6%). The assessment of oocytes maturity revealed the inverse dependence of their number with follicular values of anti-LAM IgG [16]. Thus, the assumption of synergistic negative effects of autoantibodies to laminin-1 along with autoantibodies to thyroperoxidase in infertile women with autoimmune thyroiditis was made [16, 38].

In 2018, the German scientists using western-blotting and mass spectrometry found a new target for antibodies to trophoblast, namely Enolase-1 (ENO1), expressed by JEG-3 line choriocarcinoma cells and in the tissue of the first trimester trophoblast [35, 149]. ENO1 represents a glycolytic enzyme with a weight of 45-47 kda, is abundantly expressed in cellular cytoplasm and catalyzes glycolysis reactions [74]. It is determined, that antibodies to enolase-1 are produced in autoimmune diseases, such as rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, etc. [30, 32, 149]. A possible relationship between these antibodies with endometriosis and premature ovarian insufficiency is also discussed [65, 189]. Sarapik et al. revealed a higher incidence of enolase-1 IgA among infertile women with tubal factor [189]. According to other opinion, ENO1 is a specific antigen for anti-endometrial antibodies among women with endometriosis [65, 149]. Also, higher serum titers of anti-ENO1 were observed in women with recurrent pregnancy loss versus the control group. Later in 2019, the high expression of anti-enolase-1 was determined in decidual tissue of placentae after first trimester miscarriage about 9 weeks of gestation in women with history of recurrent pregnancy loss [35]. The mechanism of excessive expression of genes encoding glycolytic enzymes is assumed of an adaptive character in cases of incomplete invasion of the trophoblast and arising from this placental hypoxia [68, 115]. Moreover, in a number of studies anti-ENO1 inhibited the production of P-HCG and progesterone in the cells of human villous trophoblast. Thus, the authors suggested that these antibodies can be a new autoimmune biomarker of the recurrent pregnancy loss [35]. In addition, the presence of antibodies to enolase-1 is associated with increased serum levels pro-inflammatory cytokines IL-1P, TNF-a and PGE2, potentiating adverse conditions for pregnancy development and maintenance of [30].

Also, reports exist on premature ovarian failure (POF) in the presence of anti-ENO1. Investigation of 110 women with POF revealed that 19,1% of patients were a-enolase-1 antibody positive [31]. There is an assumption that systemic immunoregulation defect may be the cause of premature ovarian failure among patients with marker identified, while the antibodies themselves represent indicate autoimmune nature of ovarian insufficiency and can be used as a diagnostic marker of this condition [149].

The role of antibodies to P-hCG on female reproductive function and pregnancy is widely discussed in scientific community. The multiple important functions of this hormone are well studied and are out of doubt [6, 34, 79, 185]. It is known, that during embryo implantation a human chorionic gonadotropin exert a direct effect on epithelial, stromal, endothelial and immune components of the endometrium, increasing the expression of progesterone receptors [34, 79]. The presence of chorionic gonadotropin contributes to cellular adhesion due to the expression of the adhesion mediator on the apical surface of trophectoderm and epithelial cells, known as trophinin [80, 145].

The production of autoantibodies against chorionic gonadotropin was reported after the introduction of a contraceptive vaccine based on the P-subunit of hCG [90, 119, 134, 204]. The ability to develop autoantibodies neutralizing the activity of chorionic gonadotropin was shown in a number of studies, both in vitro and in vivo [90, 134, 147]. Some authors believe that these autoantibodies can be the cause of infertility, multiple IVF failures and miscarriage [19, 147].

The production of antibodies to hCG was reported in a woman after repeated injections of human menopausal gonadotropins and hCG in the setting of controlled ovarian stimulation [73]. In the study of Wass et al. the presence of autoantibodies against chorionic gonadotropin was revealed in pregnant women with a history of recurrent pregnancy loss. Despite of the equal interaction of autoantibodies with the molecules of both hCG and LH, they had low affinity and did not affect the biological activity of hormones [197, 219].

A case of spontaneous IgG antibodies production to chorionic gonadotropin in a woman after spontaneous early pregnancy loss (about 6 weeks of gestation) was described [134]. The indicated autoantibodies were characterized by high affinity to hCG and LH

molecule and neutralized the activity of both hormones. The menstrual cycle in this woman was restored after the level of autoantibodies decreased, as evidenced by the period of amenorrhea due to cross-reactivity of the autoantibodies with endogenous LH after miscarriage. The reason for pregnancy termination in this case could be the neutralizing ability of the antibodies mentioned on activity of endogenous LH in vivo.

The presence of high p-hCG antibody titers was also reported in a woman with a long history of infertility who had preserved menstrual cycle and normal response to controlled ovarian stimulation [147]. Researchers suggested that recombinant hCG injections used as a final trigger in IVF cycles were responsible for maintaining the autoantibodies titer, leading to infertility in this woman.

The most important regulatory factor of female reproductive system is the enzyme - aromatase p450, which catalyzes the reaction of female sex hormones conversion from male [11]. Additionally to gonads, adipose tissue and placenta, aromatase is abundant in many organs of the human body, such as the brain, liver, skin, blood vessels, endometrium, as well as in benign and malignant female tumors [103, 191].

Cyclic changes in serum estradiol are regulated by the timely synthesis of aromatase by the dominant follicle, determining the degree of oocyte maturity, its fertilization potential and the functioning of female reproductive system as a whole [18, 120]. Obviously, the timely expression of aromatase by the ovary has a key effect on the endocrine control of the reproductive system [22, 121].

A number of authors revealed higher fertilization rate of oocytes obtained from follicles with a higher follicular fluid estradiol content [0, 108, 111, 149]. Moreover, the granulosa cells of women with clinical pregnancy obtained after IVF had a higher aromatase activity when compared to non-pregnant women despite of the comparable number of embryos transferred [54]. In summary, the authors highlighted a fundamental role of the enzyme aromatase in follicle's growth and development, oocyte maturation and quality, as well as successful fertilization [128, 170].

Multiple studies all around the world indicate on decreased expression of aromatase in patients with endometriosis and polycystic ovary syndrome [4, 13, 17, 91, 98, 102, 110].

At the same time, the nature of ovarian aromatase p450 deficiency remains not fully understood. Some authors indicate on a defective gene, encoding CYP19 aromatase among patients with polycystic ovary syndrome (PCOS) undergoing IVF [86, 149]. According to others, aromatase deficiency can be associated with excessive production of antimullerian hormone, which, in turn, affects the promotor II of aromatase p450 CYP19 gene, leading to a decreased enzyme activity [42]. A number of domestic and foreign researchers indicate on reliably higher occurrence of autoimmune thyroiditis among women with PCOS undergoing treatment with assisted reproductive technologies [15, 126, 213]. It is possible, that systemic autoimmune diseases launch the immune response towards aromatase as well, which deserves attention of the scientific community and requires further studies on the issue [149].

The fact of antiovarian antibodies associated with premature ovarian insufficiency [64, 75, 216] and infertility [3, 101, 171] is well known. Antibodies to ovarian antigens represent a heterogenic group of autoantibodies directed against own ovarian tissue. To date, antibodies against follicular cells, granulosa cells and theca are distinguished [113, 187].

In 2010, a group of American and German scientists discovered a new target for antiovarian antibodies, namely Selenium-binding protein-1 (SBP-1), antibodies to which were detectable in 60% of women with infertility or premature ovarian failure [61, 67, 149]. By its nature, SBP-1 represents a cytoplasmic protein, mainly expressed by epithelial cells, including lining the ovarian surface [186, 196]. In the preclinical experimental studies of the contraceptive vaccine containing the conjugated SBP-1, also known as SP56, a decrease in mouse fertility by 50% was reported [124, 149]. In the study of Yu-Rice et al. the presence of anti-SBP1 was associated with ovulatory dysfunction (50,0%), infertility of unknown origin (24,3%) and premature ovarian failure (28,0%) in the main group compared to controls [188].

Thus, despite of the limited information regarding the significance of antibodies to Se-binding protein-1, it can be assumed that the latter exert a negative impact on female fertility and reproductive potential.

The world literature has a limited data on the significance of antibodies to mesothelin on female reproductive system. The increased occurrence of antibodies to mesothelin in women with verified ovarian cancer and history of pelvic inflammatory diseases have been reported [40, 82, 149, 176]. In 2011, Luborsky et al. mesothelin antibody positivity was associated with ovulatory dysfunction (59%), premature ovarian failure (44%), infertility of unknown origin (25%) and ovarian cancer [60, 127, 180]. The authors suppose that the detection of anti-mesothelin antibodies in women with infertility of unknown origin could serve as a predictor of ovarian carcinoma in the future. This conclusion reflects an assumption that autoimmunity increases the risk of malignant neoplasms [132, 192, 217].

1.2. Influence of autoantibody carrier state on the efficacy of IVF (IVF/ICSI)

outcome

Large number of studies with conflicting results are devoted to the ART outcome in antithyroid autoantibody positivity.

A meta-analysis of 19 cohort and 12 case-control studies, including in total 12,126 women with spontaneous pregnancy, determined three-fold (p<0,001) and two-fold (p<0,05) risk increase of miscarriage in patients positive for antithyroid antibodies, respectively [16, 55].

A number of authors also assessed ART treatment outcome in women-carriers of ATA [109, 183, 206, 213]. So, Medenica et al. did not reveal a reliable difference in the number of obtained oocytes and fertilization efficiency, regardless of the presence of autoantibodies. However, when assessing the clinical efficacy of cycles, lower implantation rate (21% vs 32%, p<0,05) and clinical pregnancy rate (31% vs 62%, p<0,05) in a group of women with autoimmune thyroiditis relatively to comparison group were noted [16, 109, 149]. Same trend was reported in the earlier study of Zhong et al., which included 90 women with infertility and autoimmune thyroiditis and 1062 women with infertility and normal thyroid function. Both groups were comparable by the number

of retrieved oocytes. However, fertilization rate (64,3% vs 74,6%), implantation rate (17,8% vs 27,1%) and clinical pregnancy rate (33,3% vs 46,7%) were reliably lower in the study group when compared to controls, and the miscarriage rate after IVF - embryo transfer turned out to be significantly higher in the study group (26,9% vs 11,8%, respectively) [16, 183].

However, opposite data exist. Based on the results of a systematic review of 9 articles devoted to IVF (IVF/ICSI) cycles outcome among 4396 women-carriers of antithyroid antibodies, Busnelli et al. revealed no difference in the number of oocytes, fertilization efficiency, implantation rate and clinical pregnancy rate among AT-TPO positives in comparison to controls, while live birth rate per embryo transfer was significantly lower in women with AIT [16]. A miscarriage rate was significantly higher in the presence of circulating autoantibodies even after adjustment by age and TSH concentration [206]. The authors, relying on the theory of Monteleone et al. (2011), consider that the reason of comparable fertilization and implantation results is due to analysis only in IVF/ICSI protocols, but not in the classic IVF cycles. Based on this assumption, they proposed that ICSI technique could improve ART outcome by excluding a direct interaction between sperm and zona pellucida [16].

This theory was confirmed in the meta-analysis dedicated to IVF/ICSI outcome among carriers of antithyroid autoantibodies relative to negative controls, according to which there was no difference in fertilization rate, implantation rate, clinical pregnancy rate per embryo transfer, miscarriage and live birth rates between the groups compared [213]. Thus, the theory proposed back in 2016 [206], seems quite reasonable, taking into account the results obtained in 2018 [213].

However, in recent large systematic review of 14 studies on the results of IVF (IVF/ICSI) cycles including 1,167 women with autoimmune thyroiditis in euthyroid state, the presence of antithyroid autoantibodies was not accompanied by decreased assisted reproductive technologies parameters, such as clinical pregnancy rate, live birth rate and miscarriage rate [205].

The growing interest on the influence of antiphospholipid antibodies on the induced pregnancy course led to a number of clinical studies devoted to the relationship between APA and implantation failures after IVF cycles.

In meta-analysis of 2011, which included 3542 patients, the detection of one or more types of antiphospholipid autoantibodies was associated with 3-fold increased risk of IVF failure [8, 212]. The presence of lupus anticoagulant, antibodies to phosphatidylinositol and phosphatidylserine was most often accompanied with unsuccessful IVF protocol in the research mentioned, however, the authors indicate high heterogeneity of the studies included.

Reports exist, that the prevalence of antiphospholipid autoantibodies in women with biochemical pregnancies after IVF-ET cycles reached 80% [8, 84]. The authors themselves suggest that pregnancy termination occurs due to altered angiogenesis, which was also determined in a series of experimental studies [47, 169] reflecting the role of antiphospholipid autoantibodies in reproductive failure.

In a cohort study, investigating the influence of antiphospholipid antibodies on the first IVF protocol outcome among 1720 women with infertility, no association of the latter with number and quality of oocytes as well as fertilization rate was noted. Further assessment of ART cycles efficiency among anti-cardiolipin (IgG anti-CL) antibody positive women revealed lower live birth rate per embryo transfer (27,9% vs 34,2%) and higher miscarriage rate (17,0% vs 8,3%). Miscarriage rate was also higher in patients positive for IgM anti-cardiolipin antibody (14,8% vs 8,3%) when compared to controls. Besides, a lower implantation rate (23,5% vs 42,7%) and clinical pregnancy rate (36,4% vs 61,0%) in a group of anti-p2GP1 IgG (+) patients was noted [149]. The authors draw a special attention on a reliable live birth rate increase (37,0% vs 19,1%) in APA positive women who received treatment with low doses of acetylsalicylic acid [58].

However, conflicting data exist. According to Chilcott et al. antiphospholipid autoantibodies determined twice in 23,4% of women with infertility undergoing IVF, did not affect the efficacy of the protocol [178]. In another meta-analysis, assessing clinical pregnancy and live birth after IVF (IVF/ICSI) among 703 positive women, no difference

was noted in the above-listed parameters among patients with or without circulating antibodies [49].

Thus, the evaluation of the role of autoantibodies against phospholipids in assisted reproductive technologies failure represent highly relevant subject for the scientific community and practicing clinicians. Despite the fact that a number of experts encourage to screen women with a history of infertility and/or multiple ART failures for antiphospholipid antibodies, current clinical protocols do not recommend their routine evaluation [148].

There is a limited number of studies on the role of antinuclear antibodies in assisted reproductive technologies outcome [24, 27, 43, 63, 76, 104, 140, 141]. In 2012, a group of Chinese scientists conducted a research of embryological outcome in ANA antibody positivity, according to which lower number of MII oocytes, two pronuclear zygotes and high-quality embryos in study group compared to the control was established. Further-on, implantation rate (15% vs 25,7%) and clinical pregnancy rate (28,1% vs 46,4%) were reliably lower among patients-carriers of antinuclear autoantibodies. Based on the results obtained, the authors made a conclusion that ANA disturb oocyte maturation and subsequent embryo development, resulting in decreased implantation and clinical pregnancy rates in IVF/ICSI cycles [43].

Same findings on increased miscarriage rate and decreased live birth rate per embryo transfer in the setting of ART in the presence of antinuclear antibodies was reported by other researchers [27, 58, 63, 76, 140, 141].

However, despite of the data available, a screening for antinuclear antibodies is not routinely recommended in women planning IVF program [222].

Studies evaluating the in vitro fertilization programs efficiency in the presence of antibodies to laminin-1 are scarce [38, 39]. As mentioned, in the prospective cohort study of Italian scientists (2011), an inverse association was found between the number of mature oocytes and follicular fluid anti-LAM1 levels in women with verified endometriosis [149]. In addition, the rate of ongoing pregnancy did not differ significantly between groups studied (36% vs 29%), leading authors to a conclusion of no negative impact of anti-LAM1 on clinical efficiency of IVF programs [39].

In a later study conducted by the same researchers, an inverse correlation between the number of MII oocytes and follicular fluid antibodies to laminin-1 was determined. The implantation and clinical pregnancy rates were significantly lower in a group of patients with concomitant autoimmune thyroiditis (7,9% and 9,1%) compared to controls (23,0% and 31,1%) (p=0,015 and p=0,03, respectively) [16]. Thus, they assumed that anti-LAM1antibodies along with AT-TPO might have a synergic negative impact on the efficiency of infertility treatment using ART in patients with autoimmune thyroid disease [16, 38].

In a number of reports antibodies to P-hCG are considered another possible cause of subfertility, repeated assisted reproductive technologies failures and recurrent miscarriage [6, 19, 147].

Lower clinical pregnancy rate and higher miscarriage rate in IVF cycles among anti-CGB positive patients were reported [10, 62]. Thus, the authors recommend screening patients with multiple IVF-ET failures for anti-CGB antibodies.

However, at present there are no large randomized trials and sufficient evidence directly indicating on negative impact of autoantibodies to P-hCG on IVF outcome, requiring active research implementation on this problem.

Despite the available data on negative effect of anti-a-enolase-1 (ENO1) on the first trimester pregnancy course [35, 65], world literature currently has no trials evaluating in vitro fertilization cycles efficiency in their presence, which requires further investigation on this issue.

In addition, to date, the issue of autoimmune nature of aromatase deficiency, its role in infertility and IVF failures remains obscure [149]. The world scientific database has no previous reports on the presence of anti-aromatase autoantibodies in women with infertility. In this regard, the clarification of autoantibodies to aromatase presence and its significance in long-term results of ART programs is not only of great scientific, but also of practical interest.