Эффективность образования сестринских хроматидных обменов при индукции в клетках млекопитающих моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Евграфов, Олег Вадимович

• Евграфов, Олег Вадимович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Евграфов, Олег Вадимович

Введение

Часть I. Обзор литературы.

Глава I. Сестринские хроматидные обмены

1.1. Существуют ли спонтанные сестринские хроматидные обмены?.

1.2. Роль бромдезоксиуридина в образовании сестринских хроматидных обменов

1.3. Первичные повреждения ДНК, индуцирующие сестринские хроматидные обмены

1.4. Репликация и образование сестринских хроматидных обменов.2.

1.5. Участие репарационных процессов в образовании сестринских хроматидных обменов

1.6. Модификаторы процесса образования сестринских хроматидных обменов

1.7. Модели механизмов образования сестринских хроматидных обменов

Глава 2. Псоралены как ДНК-повреждающие агенты

2.1. Свойства псораленов, не активированных УФ-излучением.

2.2. Фотохимическая реакция псораленов с ДНК

2.3. Биологическое действие активированного светом псоралена . .4?

2.4. Мутационное действие псораленов

Часть II. Собственные исследования.

Глава 3. Материалы и методы.5А

3.1. Объекты исследования.

3.2. Фиксация и приготовление препаратов

3.3. Дифференциальное окрашивание хромосом

3.4. Анализ распределения сестринских хроматидных обменов по длине хромосомы

3.5. Индукция моноаддуктов и меш-штевых сшивок в ДНК in vitro и в ДНК клеток, культивированных in vitro.

3.6. Выделение ДНК.

3.7. Гидролиз ДНК.

3.8. Спектрофотометрия

3.9. Измерение радиоактивности

3.10. Тонкослойная хроматография.62.

3.11. Электронная микроскопия ДНК в тотально денатурирующих условиях.62.

3.12. Определение дополнительного синтеза ДНК, индуцированного моноадцуктами

3.13. Математическая обработка . 64

Глава 4. Экспериментальная часть

4.1. Исследование фотохимических реакций 8-меток-сипсоралена с ДНК.

4.1.1. Изучение динамики образования моноаддуктов ДНК.

4.1.2. Определение параметров фотореакции трансформации моноаддуктов в межнитевые сшивки

4.2. Изучение эффективности моноаддуктов и меняйте вых сшивок ДНК в индукции GX0.&

4.3. Зависимость частоты образования СХО от величины мутагенной нагрузки

4.4. Образование СХО в раду клеточных поколений . 9?

4.5. Феномен из о окрашивания.

4.6. Исследование распределений сестринских хро-матидных обменов . 1\

4.6.1. Распределение сестринских хроматидных обменов по клеткам.

4.6.2. Сравнение распределений спонтанных, индуцированных моноаддуктами и межнитевыми сшивками ДНК сестринских хроматидных обменов по длине первой хромосомы клеток китайского хомячка.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эффективность образования сестринских хроматидных обменов при индукции в клетках млекопитающих моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК»

Актуальность теш. Нет необходимости доказывать, что исследование процессов, происходящих на поврежденной ДНК, имеет в настоящее время большое теоретическое и прикладное значение. Одним из следствий этих процессов, достаточно легко выявляемым на цитологическом уровне, являются сестринские хроматидные обмены (СХО), представляющие собой симметричные внутрихромосом-ные межхроматидные обмены. Сестринские хроматидные обмены индуцируются широким классом мутагенов и канцерогенов (Latt, 1974; Perry, Evans, 1975), и в настоящее время СХО используются как высокочувствительный тест на ДНК-повревдающее воздействие (Perry, Evans, 1975; веек, Obe, 1975; Wolff, 1979).

Хотя механизм образования сестринских хроматидных обменов неизвестен, в настоящее время нет никаких сомнений в том, что индукция обменов связана с процессом репликации ДНК и прямо или косвенно - с репарацией первичных повреждений ДНК. Именно первичные повреждения ДНК являются причиной, запускающей цепь биохимических реакций, приводящих к индуцированному сестринскому хроматидному обмену. Кажемся естественным начинать изучение феномена индуцированных сестринских хроматидных обменов с качественного и количественного анализа первичных повреждений с тем, чтобы в дальнейшем попытаться проследить всю последовательность их трансформаций. Эта задача, однако, наталкивается на ряд трудностей принципиального характера. Во-первых, большинство известных ДНК-повреждающих агентов индуцируют несколько типов первичных повреждений, и вследствие этого вычленить вклад одного из типов первичных повреждений оказывается сложным. Во-вторых, количественные методы учета большинства типов первичных повреждений, как правило, нуждаются в совершенствовании. Решение этих двух задач позволило бы поднять изучение молекулярных механизмов СХО и других явлений, происходящих вследствие поражения ДНК, на качественно новую ступень.

В последнее время в исследованиях молекулярных механизмов процессов, протекающих на пораженной ДЕК, большое место занимают системы, принципиально позволяющие оценивать вклад первичных повреждений определенного типа в конечный биологический эффект. Классическим примером исследования такого рода является изучение вклада пиримидиновых димеров в индукцию точковых мутаций и структурных хромосомных перестроек, основанное на использовании фотореактивации - вида репарации, селективно устраняющей именно этот тип первичных повреждений. В отличие от всех других видов репарации, для фотореактивации необходимо облучение видимым светом, и клетки, инкубированные на свету, отличаются от содержащихся в темноте в тех же условиях только по количеству пиримидиновых димеров. Эта система была использована в ряде работ для изучения индукции сестринских хроматидных обменов пиримиди-новыми димерами ( Kato, I974d; Kanjc et al., 1980; Wolff, 1982).

Существует также возможность изучать роль однонитевых разрывов в образовании того или иного биологического эффекта, поскольку воздействие УФ-излучения с длиной волны 313 нм на ДНК, содержащую бровдезоксиуридин (БУдР), вызывает только этот тип первичных повреждений.

Наконец, существует класс мутагенов, способных индуцировать строго один или два типа первичных повреждений ДНК, к которому относится большое количество агентов, образующих межни-тевые сшивки ДНК и их монофункциональные производные. Среди них наиболее перспективными являются фурокумарины - производные псоралена, способные ковалентно присоединяться к ДНК при воздействии длинноволнового УФ-излучения. Важно, что посредством дозирования облучения можно точно и воспроизводимо индуцировать определенное количество повреждении. Монофункциональные производные псоралена, такие как ксантилетин, 5,7-диметоксикумарин, 3-карбоксипсорален, способны индуцировать только моноаддукты, в то время как бифункциональные могут присоединяться к пирими-динам, находящимся в разных цепях ДНК, и образовывать таким образом межнитевую сшивку.

После того как был обнаружен метод индукции в ДНК практически исключительно моноаддуктов при использовании бифункциональных псораленов, активированных коротким (15 не) импульсом УФ-лазера, появилась уникальная возможность отделить вклад моноаддуктов и межнитевых сшивок в различные биологические эффекты. Сопоставление эффектов от этих двух различных типов первичных повреждений представляет особый интерес, поскольку последствия возникновения в ДНК межнитевых сшивок изучены значительно меньше, чем различные биологические эффекты от моноаддуктов. Так, не вполне ясно: являются ли сшивки эффективными индукторами сестринских хроматидных обменов, как считают некоторые авторы (shafer, 1977; Latt, 1974; Капо, Fujiwara, 1981), или, наоборот, они лишь слабо индуцируют обмены (carrano et al., 1979. Wolff, 1978); каковы точные механизмы удаления межнитевых сшивок из генома эукариотов и мутагенные последствия этого процесса.

Между тем, межнитевые сшивки представляют собой весьма важный и потенциально опасный тип первичных повреждений, поскольку повреждаются обе нити ДНК практически в одном сайте. Можно полагать, что репарация такого повреждения может быть мутационной и в ряде случаев приводить к появлению полного разрыва молекулы ДНК. Очевидно, что межнитевая сшивка, физически связывая две нити ДНК, препятствует процессу репликации. Следовательно, репликация участка, содержащего межнитевую сшивку, может произойти лишь после некоторых энзиматических реакций, связанных с разрывами ДНК в районе повреждений. Поскольку образование сестринских хроматидных обменов происходит именно в Б-фазе и для этого необходимы разрывы в родительских нитях ДНК, ясно, что межнитевые сшивки представляют особый интерес при исследованиях молекулярных механизмов СХО.

Целью работы являлось исследование механизмов образования спонтанных, индуцированных моноаддуктами и межнитевыми сшивками ДНК сестринских хроматидных обменов. При этом ставились следующие основные задачи:

- Разработать количественные методы учета моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК и на их основе определить эффективность этих первичных повреждений в индукции сестринских хроматидных обменов.

- Проанализировать распределения спонтанных, индуцированных моноаддуктами и межнитевыми сшивками ДНК сестринских хроматидных обменов по длине хромосомы, выявить их особенности и различия между собой.

- Оценить роль репарации этих первичных повреждений в индукции сестринских хроматидных обменов.

- На основе полученных результатов построить модели индукции сестринских хроматидных обменов межнитевыми сшивками ДНК и моноаддуктами.

Научная новизна работы. Данные, полученные в настоящей работе, расширяют наши знания о механизмах образования сестриноких хроматидных обменов, возникающих на базе двух типов первичных повреждений - моноаддуктов 8-метоксипсоралена и межнитевых сшивок ДНК.

Впервые определена абсолютная эффективность этих двух типов первичных повреждении в индукции сестринских хроматидных обменов в клетках китайского хомячка.

Цитогенетическими методами показаны различия в процессах образования спонтанных, индуцированных моноаддуктами и межните-выми сшивками ДНК сестринских хроматидных обменов. В частности показано, что моноадцукты являются длительноживущими повреждениями и реализуются в сестринские хроматидные обмены на протяжении, по крайней мере, трех клеточных циклов, тогда как межни-тевые сшивки - в течение первых двух клеточных циклов после индукции первичных повреждений.

Обнаружен неаддитивный эффект первичных повреждений изучаемых типов.

На основе полученных экспериментальных результатов и литературных данных, предложены новые схемы индукции сестринских хроматидных обменов моноаддуктами и межнитевыми сшивками ДНК.

Практическая значимость работы. Настоящая работа относится к области фундаментальных исследований и может быть использована в практике научных исследований в различных лабораториях.

Способ определения количества моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК, разработанный соискателем, может быть использован при исследованиях эффективности этих первичных повреждений в индукции различных типов мутаций и канцерогенеза.

Закономерности образования сестринских хроматидных обменов, индуцированных межнитевыми сшивками, исследованные в настоящей работе, могут служить основой тест-систем, направленных на выявление агентов, индуцирующих этот тип первичных повреждений ДНК.

Результаты, представленные в работе, могут быть также использованы для совершенствования сестринских хроматидных обменов как теста на ДНК-повреждающие агенты, использующегося для анализа загрязнений окружающей среды.

Часть I. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Генетика», Евграфов, Олег Вадимович

Выводы

1. Использование 8-метоксипсоралена, активированного 7Ф-излучением импульсного лазера, и метода двукратного облучения позволяет строго разделить биологические эффекты моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК. С помощью электронной микроскопии ДНК в денатурирующих условиях и использования 3Н-8-метоксипсоралена разработан метод оценки числа моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК, позволяющий провести количественный анализ эффективности этих первичных повреждений в индукции сестринских хроматидных обменов.

2. С помощью метода двукратного облучения показано, что эффективность межнитевых сшивок в индукции сестринских хроматидных обменов значительно выше, чем моноаддуктов.

3. Сравнительный анализ числа первичных повреждении и сестринских хроматидных обменов позволил определить эффективность моноаддуктов 8-метоксипсоралена и межнитевых сшивок ДНК в индукции СХО в клетках двух линии китайского хомячка. Она составила 3,62*Ю-3 и 5.52-Ю-3 (для моноаддуктов) и 0,37 и 0,15 (для межнитевых сшивок) соответственно в клетках линий СН0-К1 и ЕЕЫ-И-РАР 28, КЛОН 237.

4. Показано, что при увеличении количества первичных повреждений типа моноаддуктов 8-метоксипсоралена и межнитевых сшивок ДНК происходит снижение числа индуцированных сестринских хроматидных обменов в пересчете на одно первичное повреждение.

5. Анализ сестринских хроматидных обменов в ряду клеточных поколений показал, что процесс формирования СХО, индуцированных межнитевыми сшивками ДНК, ограничен двумя клеточными циклами, тогда как моноаддукты 8-метоксипсоралена индуцируют СХО, по крайней мере, в течение трех клеточных циклов. Данные по радио

- 145 изотопному анализу эксцизионной репарации моноадцуктов свидетельствуют о том, что индукция сестринских хроматидных обменов моноадцуктами в ряду клеточных поколений может быть обусловлена перекиванием этого типа первичных повреждений.

6. Изучение распределений спонтанных, индуцированных моно-аддуктами и индуцированных межнитевыми сшивками сестринских хроматидных обменов по длине 1-й хромосомы клеток китайского хомячка, в том числе относительно и (з~-районов, а также в районе ди, характеризующемся высокой частотой чередования узких и (Г-полос, показало отличие всех трех типов распределения друг от друга и от равномерного распределения.

7. При дифференциальной окраске хромосом для выявления сестринских хроматвдных обменов в некоторых клетках, обработанных 8-метоксипсораленом, наблюдается изоокрашивание и промежуточное между светлым и темным окрашивание некоторых районов хромосомы, механизм образования которых предположительно связан со специфическими нарушениями репликации хромосом. Границы промежуточно окрашенных районов являются "горячими точками" образования сестринских хроматидных обменов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Евграфов, Олег Вадимович, 1984 год

1. Белогуров A.A., Завильгельский Г.Б. 1978. lex А- зависимый путь репарации межнитевых сшивок в ДНК бактерий и бактериофагов.-Молекулярная биология.12,4,886-893.

2. Белогуров A.A., Завильгельский Г.Б. 1978. Механизм инактивирующего действия фотосенсибилизаторов 8-метоксипсоралена на бактерии и бактериофаги.- Генетика. 14,2,321-327.

3. Дубинин Н.П., Сойфер В.Н. 1970. Актуальные проблемы современной теории мутации.- Изв.АН ССР. Сер.биол. 4, 483-488.

4. Дубинин Н.П., Тарасов В.А. 1979. Молекулярные механизмы образования хромосомных аберраций.- Успехи современной генетики, Москва, "Наука", 8,113-146.

5. Жлоба A.A. 1984. Влияние 5-бромдезоксиуридина на образование структурных изменений хромосом при действии ионизирующего излучения разных энергий.- Автореферат кандидатской диссертации, Обнинск, 1984, ВНШСР.

6. Засухина Г.Д., Македонов Г.П., Швецова Т.П., Крючков В.П., Крамер-Агеев Е.А. 1982. Антимутагенное действие интерферона в клетках человека при воздействии быстрыми нейтронами и 4-нитрохолин-1-оксидом.- Доклады Академии Наук СССР, 264, 5, 1250-1252.

7. Лучник H.B. 1963. Об одном из возможных применений теории вероятностей в радиационной цитогенетике.- В сб. "Применение математических методов в биологии", 2,177, Изд. ЛГУ, Ленинград.

8. Матусевич Л.Л. 1973. Изучение репаративной активности УФ-облученных клеток высших организмов, инфицированных вирусами.- Автореферат кандидатской диссертации, Москва, 1973г.

9. Машковский М.Д. 1978. Лекарственные средства.- Москва, Изд."Медицина" , т.2, I3I-I33.

10. Пешехонов В.Т. 1982. Репарация и мутагенез при действии активированного светом 8-метоксипсоралена в клетках Е.соЖ .- Автореферат кандидатской диссертации, 1882, Ленинград.

11. Пешехонов В.Т., Тарасов В.А. 1981. Репарация и мутагенез в клетках Е. coli при индукции в ДНК моноаддуктов и поперечных сшивок активированным светом 8-метоксипсораленом. Зависимость от генов uvr А и pol А .- Генетика, 17, II, 1945 1951.

12. Сафронов В.В., Иванова З.И., Макаров В.Б. 1981. Авторадиографический анализ молекулярных механизмов дифференциального окрашивания сестринских хроматид,- Цитология, 23, I, 94 98.

13. Столбова Н.Г., Груздев А.Д. 1979. Цитогенетдоеский эффект фотосенсибилизаторов.- Радиобиология, 19, 6, 833 836.

14. Тарасов В.А. 1975. Радиационный мутагенез в клетках эукариот: количественные закономерности и молекулярные подходы.~ Докторская диссертация, Москва, 1975 г.

15. Тарасов В.А., Македонов Г.П. 1976. Молекулярные механизмы образования хромосомных аберраций.- III Всесоюзный симпозиум "Молекулярные механизмы генетических процессов"., Тезисы докладов, 4-5, Москва, "Наука", 1976 г.

16. Тарасов В.А. 1982. Молекулярные механизмы репарации и мутагенеза. Москва, "Наука", 1982 г.

17. Шаршунова М., Шварц В., Михалец Ч. 1980. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии.- Изд. "Мир", Москва, 1980 г.

18. Abe S., Sasaki M. 1977» Studies on chromosomal aberrations and , sister chromatid exchanges induced by chemicals.- Proc. Jap. Acad. 53, 1, 46-49.

19. Arlett C.F., Heddle J.A., Broughton B.C., Rogers A.M. 1980. Cell killing and mutagenesis by 8-methoxypsoralen in mammalian (rodent) cells.- Clin.Exp.Dermatol. 5,2, 147-158.

20. Arlett C.F., Lehman A.R. 1972. The biochemical manifestations of radiation induced damage in cultured mammalian cells.-"The Bases of the biological effects of UV radiation Brno, Book of Abst.

21. Ashwood-Smith M.J., 1978. Frameshift mutations in bacteria produced in the dafk by several furocoumarins$ absence of activity of 4,518-trimethylpsoralen.- Mutat. Res. 58,1,23-27.

22. Ashwood-Smith M.J., Grant E. 1977* Conversion of psoralen DNAmonoagducts in E.coli to interstraud DNA cross links by near-ultraviolet light (320-360 nm). Inability of amgelicin to form crosslinks in vivo.- Experientia, 33, 384-386.

23. Ashwood-Smith M.J., Grant E.L., Heddle J.A., Friedman G.B. 1977* Chromosome damage in Chinese hamster cells sensitized to near-ultraviolet light by psoralen and angelicin.- Mutat. Res. 43, 3, 377-385.

24. Averbeck D. 1982, Photobiology of furocoumarins. in C.Helene,

25. M.Charlier, Th.Montenay-Ganestier, G.Laustriat (eds) Trends in Photobiology, Plenum, N.Y. p.295-308.

26. Averbeck D., Moustacchi E. 1980. Decreased photo-induced mutagenicity of mono-functional as opposed to bi-functional furocoumarins in yeast.- Photochem.Photobiol. 31, 475-478.

27. Beaumont P.C., Land E.J., Navaratnam S., Parsons B.J., Phillips G.O., 1980. A pulse radiolysis study of the complexing of furocoumarins with DNA and proteins.- Biochira. Biophys. Acta 608,1, 182-189.

28. Beaumont P.O., Parsons B.J., Phillips G.O., Allen J.C., 1979.

29. A laser flash photolysis study of the reactivies of the triplet states of 8-methoxypsoralen and 4-51-8 trimethylpsoralen with nucleic acid bases in solution.- Biochim. Biophys. Acta 562, 2, 214 -221.

30. Beek B., Obe G. 1975. The human leukocyte test system. VI. The use of sister chromatid exchanges as possible indicators for mutagenic activities. Humangenetik 29» 127-134.

31. Belogurov A.A., Zavilgelsky G.B. 1981. Mutagenic effect of furo-coumarin monoadducts and cross-links on bacteriophage lambda.-Mutat. Res. 84, 1, 11-15.

32. Bender M.A. Relationship of DNA lesions and their repair tochromosomal aberrayion production.- In: DNA repair and mutagenesis in Eukaryotes. Plenum Press, N.Y.-L., 1980, p.245--265.

33. Bender M.A., Griggs H.G., Bedford J.S. 1974. Mechanisms of chromosomal aberration production III. Chemical and ionizing radiation.- Mutation Res., 23, N 2, p.197-212.

34. Bender M.A., Griggs H.G., Bedford J.S. 1974. Recombinational DNA repair and sister chromatid exchanges.- Mutat. Res. 24, 2, 117-123.

35. Bensasson R.V., Land E.J., Salet C. 1978. Triplet excited state of furocoumarins: reaction with nucleic acid bases and aminoacids.- Photochem. Photobiol. 27, 3, 273-280.

36. Bevilacqua R., Bordin P. 1973. Photo-C^-cycloaddition of psoralen and pyrimidine bases: effect of oxygen and paramagnetic ions.- Photochem.Photobiol• 17, 3, 191-194.

37. Bianchi M., Bianchi N., Cortes L., Reigasa M. 1982. Cysteamine protection of SCP induced by UV and fluorescent light. -Mutat. Res., 104, 4/5, 281-286.

38. Boor V., Lerche A., 1976. In vitro crosslinking of DBA by 8-methoxypsoralen visualed by electron microscopy.- Biochim. Biophys. Acta 519, 2, 356-364.

39. Bradley M.O., Hsu I.H., Harris C.C. 1979. Relationship between sister chromatid exchange and mutagenicity, toxicity and DNA damage.- Nature, 282, 5736, 318-320.

40. Brewen J.C., Peacock W.J. The effect of tritiated thymidin on sister-chromatid exchange in a ring chromosomes. Mutation Res., 1969, 7, N 3, 433-440.

41. Bridges B.A. 1979. An estimate of genetic risk from 8-metho-xypsoralen photochemotheragy.- Hum.Genet. 49, 1, 91-96.

42. Bridges B.A., Mottershead R.P. 1979. Inactivation of Escherichia coli by near-ultraviolet light and 8-methoxypsoralen: different responses of strain B/r and K-12.- J.Bacteriol., 139, 2, 454-459.

43. Bridges B.A., Mottershead R.P., Knowles A. 1979. Mutation induction and killing of Escherichia coli by DNA adductedand crosslinks: a photobiological study with 8-methoxypsora-len.- Chem Biol. Interactions 27, 2-3, 221-233.

44. Burger P.M., Simons J.W.L.M. 1979. Mutagenicity of 8-methoxyp-soralen and long-wave ultraviolet irradiation in diploid human skin fibroblasts. An improved risk estimate in photo-chemotherapy.- Mutat. Res. 63, 2, 371-380.

45. Carrano A.V., Johnston G.R. 1977. The distribution of mitomycin-C-induced sister chromatid exchanges in the euchromatin and heterochromatin of the Indian muntjac.- Chromosoma, 64, 2, 97-107.

46. Carrano A.V., Thompson L.H., Lindl P.A., Minkler J.L. 1978. Sister chromatid exchange as on indicator of mutagenesis.-Nature 271, 5645, 551-553.

47. Carrano A.V., Thompson L.H., Stetka D.G., Minkler T.L., Mazrimas J,A., Pong S., 1979. DNA crosslinking, sister chromatid exChange and specific locus mutations.- Mutat.Res. 63, 1, 175-188.

48. Cassuto E., Gross N., Bardwell E., Howard-Flanders P. 1977.

49. Genetic effects of photoadducts and photocross-links in the DNA of phage K exposed to 360 nm light and tri-methylpsora-len or khellin.- Biochim. Biophys. Acta, 475, 589-600.

50. Cech T., Potter D., Pardue M.L. 1977« Electron microscopy of DNA cross-linked with trimethylpsoralen: A probe for chromatin structure.- Biochemistry 16, 24, 5313-5321.

51. Chambers J.C., Taylor J.H. 1982. Induction of sister chromatid exchanges by 5-fluorodeoxycytidine: correlation with DNA methylation.- Chromosoma. 85, 5, 603-610.

52. Chao Ch.C.-K., Rosenstein B.S. 1984. Inhibition of the UV induction of sister-chromatid exchanges in ICR-2A frog cells by pretreatment with -rays. Mutat. Res., 139,1, 35-39.

53. Proc.Natl. Acad. Sci 71, 4508-4512. Dal^Acqua P., Rodighiero G. 1966. Changes in the melting curveof DNA after the photoreaction with scin-photosensitizingfurocoumanus.- Atti Acad. Naz. Lincei. Rend. CI. Sci.Dig., e natur. 40, 4, 595-600.

54. Dall*Acqua P., Carrieri S., Radigiero G. 1978. Pluorimetric determination of 4*, 5f-cycloadducts in the DNA-psoralen photoreaction.- Photochem. Photobiol. 37, 1, 77-79.

55. Dall*Acqua P., Rodigiero G., Musajo L. 1966. The dark interaction between furocumarins and nucleic acids,- Rend. Sci Pis. r Mat. Nat. 40, 411-422.

56. Dall*Acqua P., lerbojevich M., Marciani S., Vedaldi D., Recher M. 1978. Investigation on the dark interaction between furocou-marins end DNA.- Chem.-Biol. Interact. 21, 1, 103-115.

57. Davidson R.L., Kaufman E.R., Dougherty C.O., Ouellette A.M.,

58. Difolco C.H., Latt S.A. 1980. Induction of sister chromatid exchanges by BUdR is largely independent of the BUdR content of DNA.- Nature 284, 5751, 74-76.

59. Deaven L.L., Petersen D.P. 1973* The chromosomes of CHD, and aneuploid Chinese hamster cell line: G-band, and autoradiographic analyses.- Chromosoma, 41, 2, 129-144»

60. DiPaolo J.A., Popescu N.C., 1981. Relationship of carcinogen-induced sister-chromatid exchange (SGE) and neoplastic cell transformation.- abstracts in Mutat. Res., 85, 6, 439.

61. Dolfini S.P., Cadirola S. 1981. Relationship between sister chromatid exchanges and DNA replication in somatic cells of Drosophila melangaster.- Chromosoma 83, 1, 81-91.

62. Drake J.W., Mc Guire J. 1967. Properties of r, mutants of bacteriophage 14 photodynamically induced in the presence of triopyronin and psoralen.- J.Virol. 1, 260-267.

63. Paed M.J.W., Peterson S, 1980. Effect of 8-methoxypsoralen in the dark on sister-chromatid exchange frequency in human lymphocytes.- Mutat. Res. 78, 4, 389-391.

64. Francis A.A., Snyder R.D., Dunn W.G., Regan D. 1981. Classification of chemical agents as to their ability to induce long -a short patch DNA repair in human cells.- Mut.Res. 83, 2, 159-169.

65. Frederiksen S., Hearst J.E., 1979. Binding of 4'-aminomethyl 4,5,3- trimethyl psoralen to DNA, RNA and protein in HeLa cells and Drosophila cells.- Biochim. Biophys. Acta 563, 2, 343-355.

66. Fujiwara ¥., Tatsumi M. 1977. lovv-level DNA exchanges in normal human and xeroderma pigmentosum cells after UV irradiation.-Mutat. Res. 43, 2, 279-290.

67. Fujiwara Y., Tatsumi M., Sasaki M.S. 1977. Gross-link repair in human cells and its possible defect in Fanceni's anemia cells.- J. Mol. Biol. 113, 4, 635-649.

68. Ganesan A. 1978. Distribution and quantitation of DNA damage. In DNA Repair Mechanisms, ed. by Hanawalt P.C., Friedberg E.G., Fox G.F. A.P. p.15-1Q. New York, San-francisco, London.

69. Gatti M. Sister chromatid exchange in Drosophila. In: Sister Chromatide exchange. Ed. Wolff Sh. Wiley & Sons. N.Y., 1982, p.267-296.

70. Gatti M., Pimpinelli S., Baker B.S., 1980. Relationship between cromatid interchanges, SGF's and meiotic recombination in Drosophila melangaster.- Proc. Natl. Acad. Sei. 77» 3» 1575-1579.

71. Gatti M., Santini G., Pimpinelli S. and Olivier! G. Lack of spontaneous sister chromatid exchanges in somatic cells of Dro-sophila melanogaster. Genetics, 1979, 91, 2, 255-274.

72. Goyal G.C., Grossweiner L.I. 1979* The effect of ША binding on initial 8-methoxypsoralen photochemistry,- Photochem. Photo-biol. 29, 4, 847-850.

73. Haglund U., Zech L. 1979. Simultaneous staining of sister chromatid exchanges and Q-bands inhuman chromosomes after treatment with methyl methane sulphonate, quinacrine mustard, and quinacrine.- Hum.Genet., 49, 3, 307-317.

74. Hanson C.V., Riggs J.L. 1978. Photochemical inactivation of ША an RNA viruses by psoralen derivatives.- J. Gen. Virol. 40, 2, 345-358.

75. Hart R.W., Hall K.H., Daniel F.B. 1978. ША repair and mutagenesis in mammalian cells.- Photochem. Photobiol., 28, 1, 131-135.

76. Hoo J.I., Parslow M.I., 1979. Reration between the SCE points and the ША replication bands.- Chromosoma 73, 1, 67-74.1.ali S., Bridges B.A., Ashwood-Smith M.J., Scott B.R. 1970.

77. Mutagenesis in E.coli. IV. Photosensitization to near ultraviolet light by 8-methoxypsoralen.- Mutation Res. 9, 1, 21-30.1.ushima Т., Wolff Sh. 1974. Sister chromatid exchanges induced by light flashes to 5-bromodeoxyuridine substituted Chinese

78. Johnston B.H., Hearst J.E. 1981. Low-level psoralen-deoxyribo-nucleic acid cross-links induced by single laser pulses.-Biochemistry 20, 4, 739-745.

79. Johnston N.H., Johnson M.A., Moore C.B., Hearst J.E. 1977. Psoralen-DNA photoreaction: controlled production of mono- and diadducts with nanosecond ultraviolet laser pulses,- Science 197, 4306, 906-908.

80. Kanda N. 1982. Spontaneous sister chromated exchange in vivo.-In: Sister chromatid exchange. Ed. A.A.Sandberg. Alan R.1.as, Inc., H.Y., p.279-296.

81. Kanji Ishizaki, Osamu Nikaido, Hiraku Takebe, 1980. Radiation Biology Center, Kyoto Univ., Kyoto, 606.

82. Photoreactivation of ultraviolet light-induced sister chromatid exchanges in potorous cells.- Photochem. Photobiol. 31,3, 277-279.

83. Kanne D., Straub K., Rapoport H., Hearst J.E., 1982. Psoralen-deoxyribonucleic acid photoreaction. Characterization of the monoddition products from 8-methoxypsoralen and 4,5,8-trimethylpsoralen.- Biochemistry, 21,5, 861-871.

84. Kano Y., Fujiwara Y. 1981. Roles of DNA interstrand crosslinking and the repair in the induction or sister-chromâtid exchange and a higher induction in Panconi*s anemia cells.- Mutation Res., 81, 3, 365-375.

85. Kato H. 1973. Induction of sister chromatid exchanges by UV light and its inhibition by caffeine. Exptl. Cell Res., 82, 2, 383-390.

86. Kato H. 1974. Photoreactivation of sister chromatid exchanges induced by ultraviolet irradiation.- Nature 249» 5457,552553.

87. Kato H. 1974. Spontaneous sister chromatid exchanges detected by a BUdR-labelling method.- Nature, 251, 5470, 70-72.

88. Kato H. 1974. Possible role of DNA synthesis in formation of sister chromatid exchanges.- Nature, 252, 5485, 739-741.

89. Kato H. 1974. Induction of sister chromatid exchanges by chemical mutagens and its possible relevance to DNA repair.-Exp. Cell Res., 85, 2, 239-247.

90. Kato H. 1977* Mechanisms for sister chromatid exchanges andtheir relation to the production of chromosomal aberrations.-Chromosoma, 59, 3, 179-191.

91. Kato H. 1977« Spontaneous and induced sister chromatid exchanges as revealed by a BUdR-labeling method.- Int.Rev.Cytol. 49, 55-97.

92. Kato H., Sagai Т., Yosida Т.Н. 1973. Stable telocentric chromosomes produced by centric Fission in Chinese hamster cells in vitro.- Chromotoma 40, 2, 183-192.

93. Kihlman B.A. 1975. Sister chromatid exchanges in vicia faba.II. Effects of thiotepa, caffeine and 8-ethoxycaffeine on the frequency of SCE»s.- Chromosoma, 51, 1, 11-18.

94. Kihlman B.A. 1966. Action of chemicals on deviding cells.- New Jersey, Prentice Hall Inc., Englewood Cliff.

95. Kim S.-H., Peckler В., Graves В., Kanne D., Rapoport H.,

96. Hearst J.E. 1983. Sharp kink of DBA at psoralen-link site deduced from crystal structure of psoralen-thymine mono-adduct.- CSHSQB v.XLVII, 361-365.

97. Kirkland D.J., Creed K.L., Mannisto P. 1983. Comparative bacterial mutagenicity studies with 8-methoxypsoralen and 4,5*,8-trimethylpsoralen in the presence of near-ultraviolet light and in the dark.- Mutat.Res. 116, 73-82.

98. Kittler L., Hradecna Z., Siihnel J. 1980. Cross-link formation of phage lambda DNA in situ photochemically induced by the furocoumarin derivative angelicin.- Biochim. Biophys. Acta 607, 2, 215-220.

99. Kraemer K.H., Waters H.L., Ellingson O.L., Tarone R.E. 1979. Psoralen plus ultraviolet radiation-induced inhibition of

100. Mantulin W.W., Song P. 1973. Excited state of skin-sensitizing coumarins and psoralens.- J, Amer. Chem, Soc, 95, 5122-5129.

101. Marmur J. 1961. A procedure for the isolation of deoxyribonucleic acid from microorganisms.- J.Mol. Biol., 3, 208-218.

102. Mathews M.M. 1963. Comparative study of the lethal photosensiti-zation of Sarcina Lutea by 8-methoxypsoralen and toluidene blue.- J.Bac.85, 322-328.

103. Mazrima J.A., Stetka D.G. 1978. Direct evidence for the role of incorporated BUdR in the induction of sister-chromatid exchanges.- Expl. Cell Res. 117, 1, 23-30.- 162

104. Sc^-photosensitizing-furocoximorins: photochemical interaction between DNA and O^CH^ bergopten (5-methoxypsoralen)Photochem.

105. Photoreactions at 3655 A between pyriAidine bases and skinphoto-sensitizing furocoumarins.- Photochem. Photobiol. 6, 6,711-719«

106. Giese A.C. Acad. Press N.Y., London.

107. Musajo L., Rodighiero G., Breccia A., Dall^cqua P., Malesani G.

108. G. 1966. Scin-photosensitizing-furocoumarins: photochemi14.cal interaction between DNA and 0 ^CH^ bergapten (5-metho-xypsoralen).- Photochem.Photobiol. 5,9, 739-745.

109. Muscarella D.E., Bloom S.E. 1982. The longevity of chemically induced sister chromatid exchanges in Chinese hamster ovary cells.- Environ. Mutagen. 4, 547-657.

110. Natarajan A.T., Csukas I., van Zeeland A.A. 1981. Contribution of incorporated 5-bromodeoxyridine in DNA to the frequencies of sister-chromatid exchanges induced by inhibitors of poly-(ADP-ribase)-polymerase.- Mutat Res. 84, 1, 125-132.

111. Ockey C.H., 1980. Differences between "spontaneous" and induced sister-chromatid exchanges with fixation time and their chromosome localization.- Cytogenet. Cell Genet. 26, 223-235.

112. Ockey C.H. 1981. Methyl me thane-sulphonat e (MNS) induced SCE'a are reduced by BRdU used to visualise them.- Chromosoma 84» 2, 243-256.

113. Oginsky E.K., Green G.I., Griffith D.G., Fowlks W.L. 1959. Lethal photosehsitization of bacteria with 8-methoxypsoralen to longwavelength UV radiation.- J.Bacteriology 78, 821-833.

114. Omar A., Wiesmann U.N., Krebs A. 1377» Induction of multinucleate cells by 8-MOP and UV treatment In vitro and in vivo*-Dermatologica 155(2), 65-79.

115. Ou C.-N., Song P.-S., 1978. Photobinding of 8-methoxypaoralen to transfer RNA an 5-fluorouracil-enriched transfer RNA.-Biochemistry 17,6, 1054-1059.

116. Ou C.-N., Tsa C.H., Tapley, Jr.,K.J., Song P.S. 1978. Photobinding of 8-methoxypsoralen and 5-7-dimethoxycoumarin to DNA and its effect on template activity. Biochemistry 17, 6, 1047-1053.

117. Painter R.B. 1980. A replication model for sister-chromatid exchange.- Mutation Res., 1980, 70, N 3, p.337-341.

118. Painter R.B. 1982. A replication model for sister chromatid exchange. In: ed. A.A. Saudberg Progress and Topics in Cytogenetics 2 "Sister chromatid exchange".-Alan R. Liss, Inc., N.Y. p.115-121.

119. Painter R.B., Mathur V. 1984. Effect of prior X-irradiation on ultraviolet light-induced sister-chromatid exchange.-Mutat.Res. 139, 3, 123-126.

120. Palitti P., Becchetti A. 1977. Effect of caffeine on sister chromatid exchanges and chromosomal aberration induced by mutagens in Chinese hamster cells.- Mutat.Res. 45, 1, 157-159.

121. Pathak M.A., Kramer D.M. 1969. Photosensitization of skin in vivo by furocoumarins (psoralens).- Biochim. Biophys. Acta 195, 1, 197-206.

122. Peckler S., Graves B., Kazme D., Hapoport H., Hearst J.E.,

123. Kim S.-H. 1982» Structure of a psoralen-thymine monoadduct formed in photoreaction with DNA.- J. Molecular Biol. 162, 1, 157-172.

124. Perry P.E. 1983. Induction of sistex^-chromatid exchanges (SCEs) by thymidine and the potentiation of mutagen-induced SCEs in Chinese hamster ovary cells.- Mutation Res. 109» 2, 219-229.

125. Perry P., Evans H.J. 1975* Cytotogical detection of mutagen-carcinogen exposure by sister chromatid exchange.- Nature, 258, 5531, 121-125.

126. Quinto I., Averbeck D., Moustacchi E., Hrisoho Z., Moron J. 1984. Frameshift mutagenicity in Salmonella typhimunum of furocoumarins in the dark.- Mutat.Res., 136, 1, 49-54.

127. Radman M. 1980. Is there SOS induction in mammalian cells? Photochem.Photobiol. 32, 823-830

128. Rainaldi R., Mariani T. 1982. The distribution of inducedsister-chromatid exchanges: a tool for identifying agents directly interacting with DNA.- Mutat.Res., 103, 3-6, 333-337.

129. Rainaldi G., Sessa M.R., Mariani T. 1984. Inhibitors of DNA synthesis induce sister chromatid exchanges of the early S phase of the cell cycle.- Chromosoma, 90, 1, 46-49.

130. Reid B.D., Walker I.G. 1969. The response of mammalian cells to alkylating agents II. On the mechanism of the removal of sulfur-mustard-induced cross-links.- Biochim. Biophys. Acta 179, 1, 179-188.

131. Rodighiero G. 1980. Light induced covalent combination between furocoumarins and DNA. A chemical approach, in; Lasers in photomedicine and photobiology. (Springer Series in optical sciences) ed. Pratesi R., Sacchi C.A. p.48-55.

132. Sahar E., Kittrel C., Pulghum S., Peld M., Latt S.A. 1981.

133. Sister-chromatid exchange induction in Chinese hamster ovary cells by 8-methoxypsoralen and brief pulses of laser light. Assesment of the relative importance of 8-methoxypsoralen-DNA monoadducts and crosslinks.- Mutation Res. 83, 1, 91-105.

134. Sasaki M.S. 1977. Sister chromatid exchange and chromatid interchange as possible manifestation of different DNA repair processes.- Nature, 269, 5629, 623-625.

135. Sasaki M.S. 1980. Chromosome aberration formation and sister chromatid exchange in relation to DNA repair in human cells, in; DNA repair and mutagenesis in Eukaryotes Plenum Press N.Y., London ed. Generose ff.M., Shelby M.D., de Serres P.J. pp.285-313.

136. Scheney R.L., Hsie A.W. 1981. Interaction of 8-methoxypsoralen and near u.v. light causes mutation and cytotoxicity in mammalian cells.- Photochem.Photobiol. 33, 2, 179-185.

137. Sohonberg S. 1980. Lack of spontaneous sister chromatid exchanges in somatic cells of Drosophila melanogaster.- Genetics, 94, 2, 518-519.

138. Schvartzman J.В., Cortes P. 1977. Sister chromatid exchanges in Allium сера.- Chromosome, 62, 2, 119-131.

139. Schvartzman J.В., Gutierrez С. 1980. The relationship between the cell time available for repair and the effectiveness of a damaging treatment in provoking the formation of sister-chromatid exchanges.- Mutat.Res. 72, 3, 483-489.

140. Schubert I., Sturelid S., Dobel P., Rieger R. 1979. Intrachro-mosomal distribution patterns of mutagen-induced sister chromatid exchanges and chromatid aberrations in reconstructed karyotypes of Vicia Faba.- Mutat. Res. 59, 1, 27-38.

141. Scott B.R., 1976. Failure to detect a mutagenic activity of 8-methoxypsoralen (in the dark) in strains of Solmonella tym-phimurium and Escherichia coli.- Mut Res. 40, 2, 167-168.

142. Scott B.R., Maley M.A. 1981. Mutagenicity of monoadducts andcross-links induced in Aspergillus nidulans by 8-methoxypso-ralen plus 365 nm radiation.- Photochem. Photobiol. 34,1, 63-67.

143. Scott B.R., Pathak M.A., Mohn G.R. 1976. Molecular and genetic basis of furocoumarin reactions.- Mutation Research, 39, 1, 29-74.

144. Seki Т., Mozu K., Kondo S., 1978. Differential causes of mutation and killing in Escherichia coli after psoralen plus light treatment: monoadducts and cross-links.- Photochem. Photobiol. 27, 1, 19-24.

145. Shafer D.A. 1977. Replication bypass model of sister chromatid exchanges and implications for Bloom's syndrome and Fanconi's anemia.- Human Genetics ¿9, 2, 177-190.

146. Shafer D.A. 1982, Alternate replication bypass mechanisms for sister chromatid exchange formation. In: Sister chromatid- 168 exchange. Ed. A.A. Sandberg. Alan R. Liss, Inc. N.Y.,p.67-98.

147. Shiraishi Y., Yosida T.H., Sandberg A.A. 1983. Analyses of bromo-deoxynridine-associated sister chromatid exchanges (SCEs) in Bloom syndrome based on cell fusion. Single and tween SCEs in endoreduplication.- Proc.Natl.Acad.Sci, 80, 14, 4369-4373.

148. Singer B. 1976. All oxygens in nucleic acids react with carcinogenic ethylating agents,- Nature 264, 5584, 333-339.

149. Song P.S., Harter M.L., Moore I.A., Herndon W.C. 1971. Luminescence spectra and photocycloaddition of the excited coumarin's to DNA bases.- Photochem. Photobiol. 14, 521-530.

150. Song P.S., Tapley K.J. 1979. Photochemistry and photobiology of psoralens.- Photochem.Photobiol. 29, 6, 1177-1197.

151. Sono A., Sakaguchi K. 1981. Inhibition of protein synthesis antagonized induction of sister chromatid exchanges by exogene-cus agents.- Mutat. Res. 80, 1, 121-131.

152. Stetka D.G. 1979. Further analysis of the replication by pass model for sister chromatin exchange.- Hum.genet. 49, 1, 63-69.

153. Stetka D.G. 1982. Operative and non-operative mechanisms of sister chromatid exchange.- In: Sister Chromatid exchange N.Y.: Alan R. Liss Inc. 1982, p.99-114.

154. Sutherland G. 1974. Photoreactivating enzyme from human Leukocytes. Nature, 248, N 5444, p.109-112.

155. Swanbeck G., Thesso M. 1974. Induction of respiratory deficient mutants, in yeast to psoralen and light.- J. Invest.Dermatol., 63, 242-244.

156. Tice R., Chaillet J., Schneider E.L. 1976. Demonstration of spontaneous sister chromatid exchanges in vivo.- Exp. Cell Res. 102, 426-429.

157. Tice R.R., Schvartzman J.B. 1982. Sister chromatid exchange: A measure of ША lesion persistence. In: ed. Sandberg A*A. Progress and Topics in Cytogenetics у 2 Sister chromatid exchange H.Y. Alan R. Lisa, Inc. p#33-45.

158. Tjerneld F., Norden В., Ljunggren B. 1979. Interaction between DNA and 8-methoxypsoralen studied by linear dichroism.-Photochem. Photobiol. 29, 6, 1115-1118.

159. Veronese F.M., Schiavon 0., Bevilacqua R., Bordin F., Rodigiero G. 1981. The effect of psoralens and angelicins on proteins in presence of UV-A irradiation.- Photochem. Photobiol. 34» 3, 351-354.

160. Waksvik H., Brogger A., Stene J. 1977. Psoralen/UVA treatment and chromosomes. I.Aberrations and sister chromatid exchange in human lymphocytes in vitro and synergism with caffeine.-Hum. Genet. 38, 2, 195-207.

161. Witkin E.M. 1974. Thermal enhancement of ultraviolet mutability in tif-1 uvrA derivative of Escherichia coli B/r: Evidencethat ultraviolet mutagenesis depends upon an inducible function.- Proc.Natl,Acad.Sci. 71, 5, 1930-1934.

162. Wolff S. 1978. Relation between DNA repair, chromosome aberrations, and sister chromatid exchanges. In: DNA repair mechanisms ed. by Hanawalt P.O., Priedberg E.C., Pox C.P., A.P. N.Y. San Prancisco, London p.751-760.

163. Wolff S. 1979. Sister chromatid exchange: The most sensitive mammalian system for determining the effects of mutagenic carcinogens. In: K.Berg(ed.) Genetic Jamage in Man Causedby Environmental Agents. A.P. N.Y. p.229-246.1982.

164. Wolff S. Chromosome aberration, Sister chromatid exchange and the lessions that produce them sister chromatid exchange. Wiley Sons, N.Y. 41-57.

165. Wolff Sh., Bodycote J., Painter R.B. 1974. Sister chromatid exchanges induced in Chinese hamster cells by U V irradiation of different stages of the cell cycle: The necessity for cells to pass through S.- Mutation Res., 25, 1, 73-81.

166. Wolff Sh., Perry P. 1974. Differential Giemsa staining of sister chromatids and the study of sister chromatid exchange without autoradiography.- Chromosoma (Berl.) 1974 48, 4, 341-353.

167. Wolff S., Perry P. 1975. Insight on chromosome structure from sister chromatid exchange ratios and the lack of both iso-labelling and heterolabelling as determined by the PPG technique.- Exp. Cell Res., 93, 1, 23-30.

168. Wolff S., Rodin B., Cleaver J.E. 1977. Sister chromatid exchanges induced by mutagenic carcinozens in normal and xeroderma pigmentosum cells.- Nature 265, 5592, 347-349.- 171

169. Wollenzien P.L., Youvan D.C., Hearst J.E. 1978. Structure of psoralen-crosslinked ribosomal RNA from Drosophila melano-gaster.- Proc. Natl.Acad.Sci 75, 4, 1642-1646.

170. Wulf H.C., Wettermark G. 1977. Toxic effect of 8-methoxypsora-len on lymphocyte division. Arch. Derm. Res. 260, 2, 67-92.

171. Wulf H.C. 1978. Acute effect of 8-methoxypsoralen and ultraviolet light on sister chromatid exchange.- Arch. Dermatol. Res. 263, 1, 37-46.

172. Yoshikawa K., Mory N., Sakakibara Sh., Mizuno N., Song P.-S., 1979. Photocon^ugation of 8-methoxypsoralen with proteins.-Photochem. Photobiol. 29,6, 1127-1134.