Долговременное действие пептидных регуляторов-индукторов тревожности: отложенные и инверсные эффекты тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Рудько, Ольга Игоревна

• Рудько, Ольга Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Рудько, Ольга Игоревна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

I. ВВЕДЕНИЕ

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Характеристика тревожно-фобических расстройств

2. Теории возникновения тревожно-фобических расстройств.

3. Холецистокининергическая система, рецепторы, агонисты 18 и антагонисты.

4. Роль агонистов ХЦК-В рецепторов в этиологии тревожных 27 расстройств.

5. Метод инверсной иммунорегуляции

III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

IV. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Прямые эффекты пептидов

1.1 Кратковременные эффекты пептидов

1.1.1 Холецистокингш

1.1.2 Холецистокинин

1.1.3 Пентагастргш

1.2 Отставленные эффекты пептидов

1.2.1 Холецистокгшин-4 через 24 часа

1.2.2. Холецистоканин-3 через 24 часа

1.2.3. Пентагастргш через 24 часа

1.2.4 Холецистокинин-4 через 5 дней

1.2.5 Холецистокинин-3 через 5 дней

1.2.6 Пентагастрин через 3 дня

1.3 Биохимические эффекты пептидов

1.4 Обсуждение результатов

2. Инверсные эффекты пептидов

2.1 Иммунизация конъюгатом ХЦК-4 с Б С А 81 2.1.1.Поведенческие эффекты иммунизации.

2.1.2 Влияние иммунизации на болевую чувствительность 86 крыс.

2.1.3 Влияние иммунизации на алкогольную мотивацию 87 крыс.

2.1.4 Иммунологические последствия иммунизации

2.1.5 Биохимические последствия иммунизации.

2.2 Эффекты иммунизации к ХЦК

2.2.1 Поведенческие эффекты иммунизации.

2.2.2 Иммунологические последствия иммунизации

2.2.3 Биохимические последствия иммунизации

2.3 Подбор веществ, способных эффективно заменить БСА и 97 ПАФ.

2.3.1 Использование столбнячного анатоксина в качестве 99 антигена-носителя.

2.3.2 Использование полиоксидония в качестве 102 иммуност имулятора

2.3.3 Эффекты иммунизации к ХЦК-4 конъюгированному 103 со СтА, с использованием иммуномодулятора полиоксидония.

2.4 Обсуждение результатов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Долговременное действие пептидных регуляторов-индукторов тревожности: отложенные и инверсные эффекты»

Раскрытие внутренних нейрохимических механизмов, контролирующих эмоции тревожности и страха, и возможность коррекции патологических проявлений этих состояний является одной из важных проблем физиологии и медицины и требует изучения многочисленных эндогенных химических индукторов и ингибиторов этих форм поведения.

Среди эндогенных факторов тревожности и страха важную роль играют агонисты широко представленных в мозге рецепторов холецистокинина (ХЦК) типа В. В последнее время наибольшее внимание привлекает самый меньший из обнаруживаемых в мозге С-концевых фрагментов холецистокинина тетра-пептид Trp-Met-Asp-Phe-NH2 (ХЦК-4) {Crawlley JN, Corwin RL, 1994; Fink H et al., 1998). Большое количество клинических данных указывает на особую анксиогенную активность именно ХЦК-4, вызывающего у людей, изначально не страдающих паническими расстройствами, сильные панические атаки. Пациенты, страдающие паническими расстройствами, более реактивны к анксиогенному действию ХЦК-4 и других агонистов ХЦК-В рецепторов. (Bradwejn J et.al, 1991). Показано, что анксиогенное влияние ХЦК-4 опосредовано стимуляцией некоторых отделов дофаминергической системы через ХЦК-В рецепторы {Crawley JN, 1995). Однако способность ХЦК-4 и особенно его малоизученных аналогов оказывать анксиогенное действие на животных нуждается в дальнейшем углубленном изучении, так как имеющиеся на сегодняшний день в литературе результаты не лишены противоречий.

Мишенью наших исследований помимо ХЦК-4 были его структурные аналоги - ранее не изученный ХЦК-3 (HCl-Met-Asp-Phe-NH2) и пентагастрин в двух модификациях: pAla-Trp-Met-Asp-Phe-NH2 (ПГ) и N-tert-butyloxycarbonyl-(3Ala-Trp-Met-Asp-Phe-NH2 (Тэ^Ж-ПГ); влияние их на психоэмоциональный статус крыс и биохимические изменения в мозге, сопровождающие эти эффекты.

Особый интерес представляет исследование мало изученного феномена долговременности эффектов пептидов как на поведенческом, так и на биохимическом уровне.

Широкое распространение в клинической практике тревожных состояний, в том числе сопровождаемых приступами панических атак, определяет большой интерес не только к нейрохимическим механизмам этих явлений, но и к методам их купирования. Несмотря на применение большого количества анксиолитических и антидепрессивных препаратов, проблема коррекции патологической тревожности и депрессий далека от успешного решения, методы купирования таких состояний на длительное время отсутствуют. Наши исследования, основанные на идее, выдвинутой академиком И.П.Ашмариным {Ашмарин И.П., Гомазков О.А., 1989), направлены на разработку принципиально нового подхода к длительной коррекции тревожных и панических состояний путем иммунокоррекции. Нами использовался метод инверсной иммунорегуляции - активной иммунизации к- конъюгатам ХЦК-4 и его структурного аналога с антигеном-носителем.

В течение последних двух десятилетий опубликовано большое число работ, в которых исследовались эффекты иммунизации к широкому кругу соединений, близких по структуре или даже идентичных соединениям реципиента, в том числе и к регуляторным пептидам {Ашмарин И.П., Гомазков О.А. 1989, Ашмарин И.П. и др., 1991, Евсеев В.А. и др., 1995; Мартьянов А.А. и др., 1998; Данилова Р.А. и др., 1988). Активная иммунизация животных гетерологичным или гомологичным биорегулятором, индуцируя образование аутоантител к нему, ведет к длительным изменениям активности соответствующего биорегулятора и физиологических функций, с которыми он связан (как правило противоположной направленности). Прицельность подавления определенных систем регуляции позволяет плодотворно использовать такой подход для изучения механизмов патологического поведения и обосновать возможность его иммунокоррекции. Опыт, накопленный в исследованиях с использованием метода инверсной иммунорегуляции (активной иммунизации к алкогольдегидрогеназе, психостимулятору сиднофену, ингибитору МАО паргилину), позволяет нам расценивать такой подход, как наиболее направленный, длительный и стабильный в плане вызываемых физиологических изменений. Несмотря на наличие ряда работ по активной иммунизации к регуляторным пептидам {Pekas JC, 1991, Zhang К et.al, 2007 и др.), исследования по иммунизации животных к ХЦК-4 и его аналогам как в отечественной, так и в зарубежной литературе не опубликованы. Поэтому были необходимы исследования для оценки возможности и эффективности иммунизации к конъюгатам ХЦК-4 и ХЦК-3, а также изучение корреляции поведенческих эффектов иммунизации с биохимическими изменениями в мозге.

Одной из важных проблем в плане применения метода иммунокоррекции в клинике является подбор допущенных к применению на людях антигенов-носителей и адъювантов. При положительных эффектах иммунизации на животных это может позволить без предварительной проверки на безвредность перейти к испытаниям описанного подхода к коррекции тревожных и панических состояний у людей.

Целью настоящего исследования являлось изучение кратковременных и долговременных (отставленных и инверсных) поведенческих и биохимических эффектов пептидных регуляторов — индукторов тревожности - ХЦК-4 и его аналогов.

В работе были поставлены следующие задачи

1. Оценка эффективности и направленности действия аналогов ХЦК-4 -ХЦК-3, £(Ж-пентагастрина и пентагастрина, и сопоставление их действия с анксиогенными эффектами ХЦК-4.

2. Изучение долговременности вызываемых ХЦК-4 и его аналогами эффектов на поведенческом и биохимическом уровнях после однократного парентерального введения.

3. Для получения особо длительных инверсных эффектов - проведение активной иммунизации белых крыс синтезированными конъюгатами ХЦК-4 и ХЦК-3 с антигенами-носителями.

4. Оценка эффективности иммунизации на: иммунологическом поведенческом биохимическом уровнях.

5. Сравнение направленности и длительности поведенческих и биохимических эффектов пептидов при однократном парентеральном введении и при использовании метода инверсной иммунорегуляции.

6. В случае анксиолитического действия иммунизации - проведение исследований с использованием антигенов-носителей и иммуностимуляторов, допущенных к применению в клинике.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Физиология», Рудько, Ольга Игоревна

VI. выводы

1. Сравнительный анализ эффектов ХЦК-4, обладающего анксиогенными свойствами, и его аналогов выявил значительное сходство прямых поведенческих эффектов ранее не исследованного меньшего структурного аналога ХЦК-4 - трипептида ХЦК-3 (HCl-Met-Asp-Phe-NH2) и пентагастрина (|3Ala-Trp-Met-Asp-Phe-NH2).

2. Выявленный анксиолитический эффект деривата пентагастрина - Бок-пентагастрина (N-t-BOC-|3Ala-Trp-Met-Asp-Phe-NH2) свидетельствует о том, что один и тот же пептид в зависимости от модификации может оказывать разнонаправленное действие на поведение животных.

3. Продемонстрирован весьма важный факт отставленных во времени изменений как на поведенческом, так и на биохимическом уровне, наблюдающихся не только в пределах нескольких часов, но и нескольких суток после однократного введения.

4. Показана возможность и эффективность активной иммунизации крыс не только к фрагменту ХЦК (30-33), но и ХЦК (31-33) (ковалентно связанных с БСА), которая вызывает долговременные анксиолитические изменения в поведении крыс, по своей направленности противоположные анксиогенному действию самих пептидов. Иммуноферментный анализ свидетельствует о наличии антител к ХЦК-4 и ХЦК-3 в сыворотках крови иммунизированных крыс.

5. Инверсные эффекты иммунизации как к ХЦК-4, так и ХЦК-3, направленность которых противоположна тем, что наблюдаются после однократного парентерального введения этих пептидов, выражаются не только в поведении, но и в содержании биоаминов и их метаболитов в мозге крыс.

6. Наличие анксиолитических компонентов в поведении иммунизированных крыс, их длительность, а также разработанный режим иммунизации с использованием наиболее оптимальных и эффективных для людей антигенов-носителей и иммуностимуляторов, разрешенных к применению в клинике указывает на перспективность развития данного направления в плане длительной иммунокоррекции патологических состояний тревожности.

V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Поиск возможных путей направленной и долговременной модуляции функций мозга с помощью экзо- и эндогенных регуляторов - одна из важнейших задач современной нейрофизиологии. Исследования в этом направлении представляют интерес как в фундаментальном аспекте для развития представлений о функции регуляторов центральной нервной системы, так и в практическом для создания наиболее совершенных моделей патологических состояний и обоснования новых принципиальных подходов к длительной коррекции патологического поведения.

Задачей настоящего исследования было изучение кратковременных и отложенных эффектов пептидных регуляторов-индукторов тревожности. Основными объектами наших экспериментов послужили С-концевые тетра-и трипептидные фрагменты ХЦК. Существует много данных о физиологической активности ХЦК-4 и его взаимодействии с В-рецепторами мозга. Предполагается, что именно изменения в активности ХЦК системы, будь это гиперчувствительность В-рецепторов к внутриклеточным ответам, связанным с этими рецепторами, и/или нарушения в обороте ХЦК, могут быть нейробиологической основой панических атак {Bradwejn J, et al., 1994 a; Shlik J, et al., 1997 b). В то же время биологическая активность более короткого фрагмента Met-Asp-Phe-NH2 (ХЦК-3) недостаточно исследована in vivo. Имеются только отдельные данные об эффектах ХЦК-3 в тканевых препаратах {Steigerwalt RW, Williams JA, 1984, Knight M., et.al 1984), причем было показано значительно меньшее сродство пептида к рецептору, чем у ХЦК-4 и пентагастрина.

Синтез структурного аналога ХЦК-4 - ХЦК-3 и оценка его влияния на поведение крыс ранее не проводились.

Мы обнаружили значительное сходство прямых поведенческих эффектов ХЦК-4 и ХЦК-3. Причем, ХЦК-3 оказался эффективен в значительно меньших дозах, чем ХЦК-4. Традиционно считается, что минимальный биологически активный фрагмент гастрина/холецистокинина это С-концевая амидированная тетрапептидная последовательность (Morley JS et.al, 1965). Согласно гипотезе, высказанной Ренфельдом (Rehfeld JF, 2000) в реализации основных биологических эффектов ХЦК4 большая роль принадлежит строению N-терминали тетрапептида. Например, эндогенные пептиды ХЦК-8 и ХЦК-5, обладающие анксиогенными свойствами {Наг г о J et.al., 1990, Rex A et.a.,l 1994), представляют собой расширения N-терминали ХЦК-4. Было показано также, что наиболее важным для узнавания молекулы рецептором является гидрофобное взаимодействие, в данном случае взаимодействие с участием боковых радикалов двух ароматических аминокислот ХЦК-4 - фенилаланина и триптофана, причем важность триптофана в качестве фармакофорной группы несомненна (Гудашева Т.А. и др., 2007).

Основываясь на этом, разработка веществ, способных взаимодействовать с ХЦК-В рецепторами шла в направлении усложнения дизайна молекулы тетрапептида. Известные селективные агонисты этих рецепторов ВС 197 и ВС264 - структурные производные ХЦК-8 (Noble F, Roques BP, 2002), также как и некоторые антагонисты - (Анохина И.П. и др., 1998; Проскурякова Т.В. и др., 2005). Среди антагонистов рецепторов В-типа есть и дипептоидное производное ХЦК-4 - синтетический дериват а-триптофана PD-134,308 (CI-988) (Horwell et al., 1991), который отличается высокой афинностью к ХЦК-В рецептору. Совсем недавно была синтезирована и изучена новая серия дипептидных соединений, базирующихся на структуре ХЦК-4 и являющихся его L- и D-изомерами (Гудашева Т.А. и др., 2007). Однако, впервые выявленный нами анксиогенный эффект ХЦК-3, (в структуре которого триптофан отсутствует) позволяет предположить, что среди агонистов рецепторов ХЦК В, играющих важную роль в этиологии тревожных состояний, наряду с аналогом ХЦК-4 — пентагастрином и аналогом ХЦК-8 — церулеином, является и ХЦК-3.

Сравнительная оценка дериватов пентагастрина показала, что один и тот же пептид в зависимости от модификации оказывает противоположное влияние на поведение животных. Пептид со структурной формулой рА1а-Тгр-Met-Asp-Phe-NH2 оказывал ХЦК-4-подобное анксиогенное действие, в то время, как эффекты БОК-ПГ носили анксиолитическую направленность.

Как уже отмечалось, коммерческий препарат пентагастрина не идентичен эндогенной С-концевой пентапептидной последовательности гастрина и ХЦК (Gly-Trp-Met-Asp-PheNH2). Возможно, именно эта модификация объясняет, почему эффекты БОК- пентагастрина не всегда идентичны анксиогенному действию ХЦК-4 как было показано, например, в опытах на обезьянах (Palmour RM et.al 1992, Rupniak NMJ et.al, 1993), a иногда (как в нашем случае) имеют анксиолитическую направленность (Данилова и др. 1998). Однако, скорее всего, одного добавления БОК-структуры недостаточно для столь кардинального изменения свойств пептида: известно, что эффекты модифицированного тетрапептида (БОК-ХЦК-4, N-t-Boc-Trp-Met-Asp-PheNH2), идентичны действию ХЦК-4 во всех используемых тестах и носят ярко выраженный анксиогенный характер (Rex A et.al 1994; Koks S, et.al., 1999). Трудно пока предложить удовлетворительное объяснение указанному феномену, скорее всего основную роль в нем играет характер взаимодействия пентагастрина с рецепторами ХЦК В-типа.

Весьма важным является впервые выявленное нами существование отставленных во времени изменений как в поведении крыс, так и на биохимическом уровне после однократного введения ХЦК-4 и ХЦК-3 (см. гл. 1.3). Проблема объективной оценки длительности действия регуляторных пептидов (РП) и путей продления их эффектов имеет особое значение для их использования в качестве лекарственных средств. Нестабильность большинства регуляторных пептидов в организме (т ^ < 20 мин) побудила к созданию очень большого числа аналогов. Приходится однако признать, что подавляющее большинство из них приобретали не только повышенную стабильность, но также те или иные побочные негативные активности за счет вводимых для стабилизации D-аминокислот или дополнительных радикалов иной природы. Невелики успехи и на пути создания так называемых пептоидов - непептидных соединений с конформацией близкой к РП. В этом случае также не удается избежать побочных нежелательных эффектов.

Представленные нами данные свидетельствуют о способности анксиогенных олигопептидов ХЦК-4, ХЦК-3 и, в меньшей степени, пентагастрина индуцировать не только поведенческие, но и биохимические пролонгированные эффекты, идентичные по характеру ранним эффектам этих пептидов в течение 1-12 суток.

Объяснить этот феномен прямым действием исследуемых пептидов на ХЦК-В рецепторы вряд ли возможно. Период полураспада ХЦК-4 в грубой синаптосомальной фракции составляет 3 мин (Deschodt-Lanckman М., et al., 1981а), в плазме крови - 13 мин (Koulisher D., et al., 1982), чуть более стабильными (до 3-х часов) являются его аналоги - Вос-ХЦК-4 и Аос-ХЦК-4 (Deschodt-Lanckman М., et al., 1981а), и, следовательно, уже к 10-15 часу после парентерального введения можно полагать их отсутствие в организме (Агимарин И.П. и др., 2004, Ашмарин И.П. и др., 1996). Возможно, именно такая нестабильность является причиной отсутствия внимания исследователей к долговременным эффектам ХЦК-4: длительность описываемых в литературе наблюдений эффектов пептида (выраженные эмоции страха у людей и крыс) невелика - минуты-часы (Crawley J. N., CorwinR. L., 1994; Koszycki D., rt al., 1998).

Однако уже давно была установлена способность РП не только вызывать прямые эффекты, но и индуцировать выход других регуляторов, в том числе других РП, нейротрофинов, гормонов и регуляторных соединений (Ашмарин И.П., Обухова М.Ф., 1986; Королева С.В., Ашмарин И.П., 2006), что ведет в ряде случаев к возникновению гораздо более длительных опосредованных эффектов.

Например, многочисленные рилизинг-факторы гипоталамуса способны вызывать непосредственно быстрые физиологические эффекты и одновременно регулировать выход значительно более устойчивых гормонов.

Всесторонне изучены быстрые воздействия тиролиберина на эмоциональный статус, двигательную активность, кровообращение мозга и дыхание при одновременной индукции выхода тиротропина, который, в свою очередь, стимулирует выход гормонов щитовидной железы (Hildebrand A et.al, 1989, Kadar et.al, 1992). Гонадолиберин оказывает быстрое стимулирующее действие на половое поведение, индуцируя при этом выход лютеинизирующего и фолликулстимулирующего гормонов, обеспечивающих овуляцию и сперматогенез (Nakajima S et.al, 1989). Процессы такого типа характеризуются существенными отличиями быстрых начальных и последующих длительных эффектов. Для лабильных пептидов - таких, как холецистокинины-3 и -4, такой механизм длительных эффектов, идентичных начальным представляется маловероятным. Поздние и начальные эффекты этих пептидов, представленные выше, весьма сходны.

Опубликованы исследования, в которых показано возрастание в плазме крови концентраций адренокортикотропина, кортизола и С-белка после введения ХЦК-4 (Strdhle A et al., 2000, Radu D et.al, 2002). Однако период, в течение которого это наблюдается, не превышает 1-2 часа. Кроме того, эти соединения в физиологических концентрациях не обладают анксиогенным действием, которое можно было бы сопоставить по интенсивности и ряду особенностей с ХЦК-4. Это не позволяет считать описанный механизм основным объяснением пролонгированного действия ХЦК-4 и -3, хотя, в принципе, нельзя исключить индукцию каких-либо других долгоживущих регуляторных соединений и, наконец, «запуск» последовательной многоступенчатой индукции многих различных регуляторов (Roscetti G et al., 1988).

С другой стороны представляется вполне вероятным объяснить эффекты, продолжающиеся до 12 суток с момента однократного введения, предположив возможность включения механизмов, сходных с теми, которые функционируют при формировании оперативной или долговременной памяти. Можно предположить, что наблюдаемый нами феномен может быть следствием длительного изменения чувствительности рецепторов после кратковременного воздействия пептида, обусловленного существованием некоторой цепной реакций или индукции процессов, аналогичных процессам консолидации памяти.

Общепринятое понятие памяти в поведенческих экспериментах подразумевает воспроизведение первоначального поведения. Мы же изучали отставленные эффекты ХЦК-3 и ХЦК-4 на крысах без каких-либо предварительных воздействий на поведение; кратковременное действие этих пептидов исследовалось на других группах. Поэтому, отставленные эффекты не могут быть охарактеризованы как обычное воспроизведение. Можно лишь предположить, что цепь биохимических и физиологических реакций, обусловленных введением ХЦК-3 и ХЦК-4, сходна с действием систем памяти. Такое предположение не противоречит и отмеченным изменениям биохимических показателей на 5-й день наблюдения.

Для восприятия предложенного нами объяснения (Ашмарин И.П. и др., 2007), необходимо иметь в виду, что, при тестировании тревожности или депрессивности экспериментальных животных в приподнятом крестообразном лабиринте или при неизбегаемом плавании возможен выброс эндогенного ХЦК-4, действующего на рецепторы обычного уровня чувствительности. Если же до тестирования животное уже подвергалось воздействию вводимых извне агонистов ХЦК-В рецепторов, то возможно повышение чувствительности, гиперсенситизация рецепторов. Этот процесс сходен с реакциями проторения синапса, формирования кратковременной или оперативной памяти, длительность которой может измеряться сутками. Они рассмотрены в большом числе исследований последних трех десятилетий и включают, например, такие реакции, как аутофосфорилирование протеинкиназ, демаскирование резервных рецепторов и т.п. В результате при тестировании на 1-12 сутки после введения ХЦК-4 или ХЦК-3, секретируемый эндогенный ХЦК-4 воздействует на гиперсенситизированные рецепторы, что и объясняет явление пролонгированного анксиогенного эфекта. Однако это предположение требует проверки на биохимическом уровне.

Публикаций об отставленных эффектах регуляторных пептидов очень немного. По-видимому, общее положение о нестабильности РП в организме являлось "психологическим тормозом" для исследования отставленных во времени вторичных эффектов. Полученные нами результаты согласуются с данными по применению церулеина (Харро Дж. и др., 1989, Harro,J. et al, 1990) на мышах, где показано, что через 30 мин после внутрибрюшинного введения анксиогенный эффект отсутствовал, а при тестировании через 72 часа наблюдался. В 1983-1984 гг. было показано изменение уровня серотонина и активности МАО на 3-5-й дни после введения аналога энкефалина (Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NH2) (Узбеков М.Г., 1983; Доведова Е.Л., 1984). В 1989 г. была показана способность ХЦК-8 и церулина оказывать длительное (до Зх суток) воздействие на ГАМК-эргическую систему мозга мышей (Nagahama Н., 1989).

Другим важным аспектом наших исследований является демонстрация долговременных эффектов, смоделированных путем активной иммунизации против эндогенных анксиогенных пептидов — ХЦК-3 и ХЦК-4.

Иммунизация крыс синтезированными ковалентными конъюгатами ХЦК-4 и ХЦК-3 с антигеном-носителем сопровождалось формированием антител к ХЦК-4 (титр 1:6400) и ХЦК-3 (титр 1:12800). Направленность вызванных иммунизацией длительных поведенческих эффектов была противоположна прямому действию ХЦК-3 и ХЦК-4. В поведенческих экспериментах у крыс отмечался выраженный анксиолитический эффект. Более того, показано и наличие атидепрессивного эффекта. Наряду с долговременным антидепрессивным и анксиолитическим действием иммунизации к ХЦК-4 и ХЦК-3, нами впервые показаны изменения уровня биоаминов в стриатуме (см. стр 108-109), направленность которых, особенно по содержанию ДА и 5-ОТ, противоположна прямому действию исследуемых пептидов. Биохимические изменения в мозге дают основание предполагать, что образующиеся в результате иммунизации антитела к ХЦК-3 и ХЦК-4 проходят через ГЭБ.

В настоящее время ревизован ряд представлений о непроницаемости ГЭБ для аутоантител и крупных пептидов. Было показано, что существуют участки поверхности мозга, проницаемые для достаточно крупных молекул, а также не изолированные гематоэнцефалическим барьером (например, гипофиз), и что иммуноглобулины способны проникать из крови в мозг при помощи ретроградного аксонального транспорта (Meeker M.L. et al., 1987). Важной является также способность избирательного проникновения антител в цитоплазму нейронов, содержащих комплиментарный им антиген. Эти процессы могут быть также усилены при колебаниях давления крови (в интервалах близких к физиологическим) и при введении иммуноадъювантов (Ашмарин И.П. и др., 1997; Крыжановааш Г. Н., Магаева С. В., 1990; Марьянович А. Т., Поляков Е. А., 1991; PassaroEJretal., 1982b;ReiberHetal., 1988; Reiber Н et al., 1984).

Выполненные нами исследования по активной иммунизации крыс с использованием эндогенного регуляторного пептида ХЦК-4 и его аналога ХЦК-3, являющихся анксиогенами, позволили впервые показать возможность направленной и длительной (месяцы) иммунокоррекции патологических состояний тревожности и страха и, возможно, депрессий.

Полученные данные, и опыт, накопленный в исследованиях, выполненных на кафедрах ВНД и ФЧЖ Биофака МГУ, свидетельствуют о том, что инверсная иммунорегуляция — иммунизация ковалентными конъюгатами эндогенных регуляторов с антигенами-носителями, представляется весьма перспективным путем долговременной коррекции ряда патологических состояний. Развитие этого метода может привести к созданию практичных способов долговременной коррекции различных форм хронических психических заболеваний - методов, которые не требуют систематического введения лекарств. В настоящее время такой подход уже получил в принципе основательную клиническую апробацию для решения проблем долговременной контрацепции - иммунизацией к конъюгатам фрагментов хорионгонадотропина {Stevens VS, 1996, Cui С et al, 2007). Иммунизация к крупному пептиду - бета-амилоиду - рассматривается сейчас как один из возможных путей терапии болезни Альцгеймера {Lemere СА, et.al., 2004, Buttini Мet.al, 2005; AsuniAA, et.al 2006). Во П стадии находится клиническая апробация подавления влечения к кокаину {Foxetal., 1996; KantakKMet al., 2001, Випсе CJetal., 2003; Kosten T, Owens SM, 2005). Несмотря на наличие ряда работ по активной иммунизации к регуляторным пептидам, исследований по иммунизации животных к ХЦК-4 и ХЦК-3 в зарубежной литературе не опубликовано.

Показанная нами возможность и эффективность использования при иммунизации разрешенных для применения к клинике столбнячного анатоксина в качестве антигена-носителя (вместо БСА) и нового иммуномодулятора -полиоксидония, созданного в Ин-те иммунологии Минздрава РФ, (вместо ПАФ, запрещенного Минздравом России для применения на людях) расширяют возможности такого направления. Полученные нами данные о возможности направленной и длительной иммунокоррекции патологических форм проявления тревожности и страха, в том числе и с использованием столбнячного анатоксина и полиоксидония, в настоящее время не имеют аналогов ни в России, ни за рубежом.

Таким образом, проведенные в рамках нашей работы исследования позволили не только уточнить роль ХЦК-4 в этиологии тревожных и панических состояний, но и впервые выявить анксиогенные свойства его меньшего структурного аналога - ХЦК-3. Данные по изучению отставленных анксиогенных эффектов ХЦК-4 и ХЦК-3 не только по физиологическим, но и биохимическим показателям на сегодняшний день в зарубежной литературе отсутствуют. Также получены принципиально новые данные о возможности направленной и длительной (месяцы) иммунокоррекции патологических форм проявления тревожности и страха иммунизацией ковалентными конъюгатами этих пептидов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Рудько, Ольга Игоревна, 2008 год

1. Александровский Ю.А. Пограничные психические расстройства. Учебное пособие 3-е издание, Москва, «Медицина» 2000 г. 496 стр.

2. Анохина И.П., Беспалова Ж.Д., Проскурякова Т.В., Панкратова Н.В., Палькеева М.Е., Петриченко О.Б Оценка психотропной активности аналогов тетрапептида холецистокинина. Бюл.эксперим.биологии и медицины. 1998; 125(6):647-650.

3. Ашмарин И.П., Гомазков О.А. Длительное изменение физиологического и биохимического статуса организма посредством иммунизации эндогенными регуляторами. Изв. АН СССР. Сер. биол. 1989. № 1. С. 1118

4. Ашмарин И.П., Данилова Р.А. ГЬцежецкий А.В., Сагимбаева Ш.К., Федорова И.М., Обухова М.Ф., Швядас В.К. Влияние гетеро- и гомологичной экзогенной алкогольдегидрогеназы на потребление этанола белыми крысами. Докл. АН СССР, 1991, 319 (2): 1256-1259

5. Ашмарин И.П., Данилова Р.А., Рудько О.И. «Исследование пролонгированного действия короткоживущих анксиогенных олигопептидов на крысах», Биомедицина, 2007, №6, стр. 103-110.

6. Ашмарин И.П., Данилова Р.А., Рудько О.И., Обухова М.Ф., Андреева JI.A. Долговременное действие пептидных регуляторов, отложенные и инверсные эффекты холецистокинина -4 и -3. Медицинский академический журнал, 2004, 4(1):4-13

7. Ашмарин И.П., Данилова Р.А., Федорова И.М. и др. Роль алкогольдегидрогеназы в формировании алкогольной мотивации Нейрохимия. 1997. Т.14. Вып. 1. С. 3-13.

8. Ашмарин .И.П., Кустова Е.В., Данилова Р.А. Действие на некоторые функции мозга белых крыс иммуностимулятора полного адъюванта Фрейнда. Биол.Науки №3, 1992;

9. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф. Регуляторные пептиды. Функционщ-непрерывная совокупность. Биохимия. 1986;51(4):531-45.

10. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф., Мартьянов А.А. и др. Активная иммунизация к экзогенным и эндогенным антидепрессантам. Образование антител к биогенным амнам и пептидным регуляторам. Биол. Науки. 1991. N3. С. 15-24.

11. Ашмарин И. П. В кн.: чтения им. А. Д. Сперанского. М. 1984.С. 7-9

12. Брагин Е.О., Батуева Н.Н., Котов А.В. Толпыго С.М., Бурбаева Г.Ш. Сравнительный анализ роли системы бета-эндорфинов механизмах различных видов анальгезии. Бюл.эксперим.биологии и медицины. 1987, 104(10):394-6.

13. Буров Ю.В., Ведерникова Н.Н. Нейрохимия и фармакология алкоголизма М. Медицина. 1985. 240 с.

14. Вейн А. Вегетативные расстройства. Медицинское информационное агентство М.2003 752 с. ISBN 5-89481-121-Х

15. Герштейн JI.M., Доведова E.JL, Узбеков М.Г., Голикова Т.Л., Сергутина А. В., Ашмарин И.П. " Пролонгированное действие тетрапептидамида на особенности обмена белков и медиаторов в отдельных микроструктурах мозга" Нейрохимия, 1984, т. 3(3);236-243

16. Гудашва Т.А., Кирьянова Е.П., Колик Л.Г., Константинопольский М.А., Середенин С.Б. Дизайн и синтез дипептидных аналогов холецистокинина-4 с анксиолитической и анксиогенной активностью. Биоорганическая химия, 2007; 33(4):413-20.

17. Данилова Р.А., Обухова М.Ф., Ашмарин И.П. и др. Длительное изменение эмоционального статуса и обучаемости белых крыс после иммунизации коньюгатом сиднофена с серумальбумином. Докл. АН СССР.1988. Т.ЗОЗ. N6. С. 1512-1514

18. Данилова Р.А., Федорова И.М., Рудько О.И., Кушнир Е.А., Ашмарин И.П. Индукторы и ингибиторы тревожности: Дифференциальное действие пентагастринов на поведение белых крыс. Физиол.журн. СССР им.Сеченова. 1998. Т.84. N10. С 1100-1107.

19. Иванова А.С. и др. Экспериментальное доклиническое изучение безопасности применения полимерного иммуностимулятора полиоксидония. М.- 1986

20. Карамян А. И., Панков Ю. А., Кофман И. Л., соллертинская Т.Н., Бурбаева Г.Г., Дустов С.А. Эффекты конъюгата бета-эндорфина с БСА на условный пищевой рефлекс ежей. Докл.АН. СССР.1987;293(3):755-9

21. Королева С.В., Ашмарин И.П. Разработка и применение экспертной системы анализа функционального континуума регуляторных пептидов. Биоорганическая химия, 2006;32(3):249-257

22. Крыжановский Т.Н., Магаева С.В. Нейроиммунные процессы в механизмах недемиелинизирующей патологии ЦНС. Итоги науки и техники. Нейроиммунология: молекулярные и клинические аспекты, ВИНИТИ, Москва, 1990 25:121168

23. Мартьянов А.А., Емельянова Т.Г., Обухова М.Ф., Волкова Н.В., Рябинина М.А., Вакулина О.П., Сахаров И.Ю., Ашмарин И.П. Физиологические эффекты активной иммунизации крыс трийодтиронином. Бюл.эксперим.биологии и медицины. 1998 Nov; 126(11):497-501.

24. Марьянович А. Т., Поляков Е. А. Нейропептиды и гематоэнцефалический барьер. Успехи физиол. наук. 1991; 22(2):33-51.

25. НекрасовА.В., Пучкова Н.Г., Иванова А.С. Химические аспекты создания полиоксидония. Иммунология. 2000; №5:19-23

26. Орликов А.Б.Нейрохимия тревоги. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 1991;91(11): 116-20.

27. Проскурякова Т.В., Беспалова Ж.Д., Палькеева М.Е., Петриченко О.Б., Панкратова Н.В., Шохонова В.А., .Анохина И.П. Биологическая активность аналогов холецистокинин-(30-33)-тетрапептида. Биоорганическая химия. 2005; 31 (2): 130-139.

28. Узбеков М.Г. Отставленный эффект тетрапептида tyr-D-ala-gly-phe-NH2 на содержание серотонина в синаптосомах мозга кролика. Бюл. экспер.биол., мед., 1983, т. 95, №2, стр. 38-40.

29. Соллертинская Т.Н. Нейропептилная компенсация нарушенных функций мозга в восходящем ряду млекопитающих. Взаимодействие нервной и иммунной систем. Физиол.Человека. 2001;27(1):55-64).

30. Харро Дж, Полд М, Визар И. Участие ХЦК-В-эргических механизмов в регуляции эмоционального поведения у грызунов. Журнал ВНД. 1989; 39(5):877-83.

31. Abelson J.L., Nesse R.M. Colecystokinin-4 and panic. Arch.Gen.Psychiatry 1991; 47:395

32. Abelson,J.L., Nesse,R.M. Pentagastrin infusions in pacients with panic disorder I. Symptoms and cardiovascular responses. Biol.Psychiatry 1994; 36:73-83.

33. Abelson,J.L., Nesse,R.M., Vinik,A.I.Pentagastrin infusionsin pacients with panic disorder II. Neuroendocrinology.Biol.Psychiatry 1994; 36:84-96.

34. Angst J. Comorbidity of anxiety, phobia, compulsion and depression.Int Clin Psychopharmacol. 1993 Sep;8 Suppl 1:21-5.

35. Ashmarin I.P., E. Buzinova, M. Vinogradova, M. Potier, A. Pshezhetsky. Learning disability in rats induced by the immunosuppression of cathepsin A in blood plasma. Neuroscience Research Communications 1997, 21(2): 153162

36. Benkelfat C, Bradwejn J, Meyer E, Ellenbogen M, Milot S, Gjedde A, Evans E. Functional neuroanatomy of ССК-4-induced anxiety in normal healthy volunteers. Am J Psychiatry 1995;152: 1180-4.

37. Bertoglio LJ, Zangrossi H Jr.Involvement of dorsolateral periaqueductal gray cholecystokinin-2 receptors in the regulation of a panic-related behavior in rats .Brain Res. 2005 Oct 12;1059(l):46-51.

38. Bi S, Chen J, Behles RR, Hyun J, Kopin AS, Moran TH. Differential body weight and feeding responses to high-fat diets in rats and mice lacking cholecystokinin 1 receptors. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2007 Jul;293(l):R55-63. Epub 2007 Apr 4.

39. Bock MG, DiPardo RM, Evans BE, Rittle KE, Whitter WL, Veber DE, Anderson PS, Freidinger RM.Benzodiazepine gastrin and brain cholecystokinin receptor ligands: L-365,260.J Med Chem. 1989 Jan;32(l):13-6.

40. Boissy A. Fear and fearfulness in animals. Q Rev Biol. 1995 Jun;70(2):165-91.

41. Boulenger J-P et al. Plasma neuropeptide Y reactivity to cholecystokinin challenge in panic disorders and normal controls. Biol Psychiatry 1997; 42: 48S.

42. Bradwejn J, Koszycki D, Annable L, Couetoux-du-Tertre A., Reines S., Karkanias C. A dose-renging study of the behavioral and cardiovascular effects of CCK-tetrapeptide in panic disorder. Biol.Psychiatry 1992; 32(10):903-12.

43. Bradwejn J, de Montigny C. Benzodiazepines antagonize cholecystokinin-induced activation of rat hippocampal neurons. Nature, 1984; 312:363-364

44. Bradwejn J, Koszycki D, Bourin M.Dose ranging study of the effects of cholecystokinin in healthy volunteers. J Psychiatry Neurosci. 1991 Jul;16(2):91-5.

45. Bradwejn J, Koszycki D, Materissan G. Colecystokinin tetrapeptide induces panic attacks in patients with panic disorder. CanJ.Psychiatry. 1990; 35(1):83-5 & 1991; 48(7):603-10.

46. Bradwejn J, Koszycki D, Paradis M, Reece P, Hinton J, Sedman A. Effect of CI-988 on cholecystokinin-tetrapeptide induced panic symptoms in healthy volunteers. Biol Psychiatry 1995; 38: 742-6.

47. Bradwejn J, Koszycki D, Shriqui C. Enhanced sensitivity of panic disorder to cholecystokinintetrapeptide: Clinical and behavioral results. Arch Gen Psychiatry 1991; 48: 603-10.

48. Bradwejn J, Koszycki D. Comparison of the panicogenic effect of cholecystokinin 30-33 and carbon dioxide in panic disorder.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 1991;15(2):237-9.

49. Bradwejn J, Koszycki D. Imipramine antagonism of the panicogenic effects of cholecystokinin-tetrapeptide in panic disorder patients. Am J Psychiatry 1994; 151:261-3.

50. Brambilla F, Bellodi L, Perna G, Garberi A, Panerai A, Sacerdote P. Lymphocyte cholecystokinin concentration in panic disorder. 1993. Am J Psychiatry 1993; 150: 1111-3.

51. Brawman-Minzter O. Lydiard RB, Bradwejn J, Villarreal G, Knapp R, Emmanuel N, Ware MR, He Q, Ballenger JC. Effects of cholecystokinin agonist pentagastrin in patients with generalized anxiety disorder. Am J Psychiatry 1997; 154: 700-2.

52. Bunce CJ, Loudon PT, Akers C, Dobson J, Wood DM.Development of vaccines to help treat drug dependence.Curr Opin Mol Ther. 2003 Feb;5(l):58-63.

53. Charney DS, Heninger GR.Abnormal regulation of noradrenergic function in panic disorders. Effects of clonidine in healthy subjects and patients with agoraphobia and panic disorder.Arch Gen Psychiatry. 1986 Nov;43(l 1): 104254.

54. Chen DY, Deutsch JA, Gonzalez MF, Gu Y. The induction and suppression of c-fos expression in the rat brain by cholecystokinin and its antagonist L364,718. Neurosci Lett. 1993 Jan 4;149(l):91-4.

55. Clerc P, Saillan-Barreau C, Desbois C, Pradayrol L, Fourmy D, Dufresne M.Transgenic mice expressing cholecystokinin 2 receptors in the pancreas.Pharmacol Toxicol. 2002 Dec;91(6):321-6. Review.

56. Crawley JN, Corwin RL.Biological actions of cholecystokinin.Peptides. 1994;15(4):731-55.

57. Crawley JN. Interactions between cholecystokinin and other neurotransmitter systems. In: Bradwejn J, Vasar E (eds), Cholecystokinin and anxiety: from neuron to behavior. 1995; Austin: Springer Verlag-R.G. Landes Co., 33-56.

58. Cui С, Stevens VC, Schwendeman SP.Injectable polymer microspheres enhance immunogenicity of a contraceptive peptide vaccine.Vaccine. 2007 Jan 5;25(3):500-9.

59. De Leeuw AS, den Boer JA, Slaap BR et al. Pentagastrin has panic inducing properties in obsessive-compulsive disorder. Psychopharmacology 1996; 126: 229-37.

60. Deakin J.F.5HT2 receptors, depression and anxiety.Pharmacol Biochem Behav. 1988 Apr;29(4):819-20.

61. Denavit-Saubie M, Hurle MA, Morin-Surun MP, Foutz AS, Champagnat J. The effects of cholecystokinin-8 in the nucleus tractus solitarius. Ann NY Acad Sci 1985; 448: 375-84.

62. Depot M, Merani S, Bradwejn J, Mukherjee J, Caille J, Gutkowska J, Caille G.Effect of oral ondansetron on total cholecystokinin plasma levels following CCK-4 panic challenge procedure in healthy men.J Psychiatry Neurosci. 1998 Nov;23(5):298-304.

63. Deschodt-Lanckman M, Bui ND, Noyer M, Christophe J.Degradation of cholecystokinin-like peptides by a crude rat brain synaptosomal fraction: a study by high pressure liquid chromatography.Regul Pept. 1981 Apr;2(l):15-30.

64. Deschodt-Lanckman M, Bui ND. Cholecystokinin octa- and tetrapeptide degradation by synaptic membranes. I. Evidence for competition with enkephalins for in vitro common degradation pathways. Peptides. 1981;2 Suppl 2:113-8.

65. Dockray GJ.Immunochemical evidence of cholecystokinin-like peptides in brain. Nature. 1976 Dec 9;264(5586):568-70.

66. Dufresne M, Seva C, Fourmy D. Cholecystokinin and gastrin receptors.Physiol Rev. 2006 Jul;86(3):805-47.Review.

67. Ebenezer I.S., Parrott R.F. The effects of central administration of the CCK-B receptor agonist pentagastrin on feeding and Cortisol release in sheep. Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol. 1996; 18:235-238.

68. Enna SJ.Role of gamma-aminobutyric acid in anxiety.Psychopathology. 1984;17 Suppl 1:15-24. Review.

69. Ervin FR,Palmour RM, Bradwein J. A new primate model of panic disorder. Biol. Psychiatry. 1991; 29:430S

70. Evans BE, Bock MG, Rittle KE, DiPardo RM, Whitter WL, Veber DF, Anderson PS, Freidinger RM. Design of potent, orally effective, nonpeptidalantagonists of the peptide hormone cholecystokinin. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986 Jul;83(13):4918-22.

71. Faris PL, McLaughlin CL, Baile CA, Olney JW, Komisaruk BR. Morphine analgesia potentiated but tolerance not affected by active immunization against cholecystokinin. Science. 1984 Dec 7;226(4679):1215-7.

72. Faris PL. Role of cholecystokinin in the control of nociception and food intake. Prog Clin Biol Res. 1985;192:159-66.

73. File S.E., Deakin JF.Chemical lesions of both dorsal and median raphe nuclei and changes in social and aggressive behaviour in rats.Pharmacol Biochem Behav. 1980 Jun;12(6):855-9.

74. Fink H, Rex A, Voits M, Voigt JP.Major biological actions of CCK~a critical evaluation of research findings.Exp Brain Res. 1998 Nov;123(l-2):77-83.

75. Flint AJ, Koszycki D, Vaccarino FJ, Cadieux A, Boulenger JP, Bradwejn J.Effect of aging on cholecystokinin-induced panic. Am J Psychiatry. 1998 Feb;155(2):283-5.

76. Fox B.S., Kantak K.M., Edwards M.A. et al. Efficacy of a therapeutic cocaine vaccine in rodent models. Nat. Med. 1996; 2(10): 1129-1132

77. Fraser KA, Davison JS. Meal-induced c-fos expression in brain stem is not dependent on cholecystokinin release. Am J Physiol. 1993 Jul;265(l Pt2.:R235-9.

78. Gardner C.R.Potential use of drugs modulating 5HT activity in the treatment of anxiety.Gen Pharmacol. 1988;19(3):347-56. Review.

79. Gigoux V, Clerc P, Sanchez D, Coll MG, Corominola H, Leung-Theung-Long S, Penicaud L, Gomis R, Seva C, Fourmy D, Dufresne M.Reg genes are CCK2 receptor targets in ElasCCK2 mice pancreas.Regul Pept. 2008 Feb 7; 146(13.:88-98. Epub 2007 Aug 31.

80. Graeff FG. Anxiety, panic and the hypothalamic-pituitary-adrenal axis.Rev Bras Psiquiatr. 2007 May;29 Suppl l:S3-6. Review.

81. Gross C, Santarelli L, Brunner D, Zhuang X, Hen R.Altered fear circuits in 5-HT(1A) receptor КО mice.Biol Psychiatry. 2000 Dec 15;48(12):1157-63. Review.

82. Harro J, Vasar E, Bradwejn J. CCK in animal and human research on anxiety. Trends Pharmacol Sci 1993; 14: 244-9.

83. Harro J, Vasar E, Koszycki D, Bradwejn J. Cholecystokinin in panic and anxiety disorders. In, J. Pankseep (ed), Advances in Biological Psychiatry,

84. Connecticut; JAI Press Inc. 1995: 235-62.

85. Harro J, Vasar E. Evidence that CCK-B receptors mediate the regulation of exploratory behavior in the rat. Eur. J.Pharmacol. 1991; 193:379-381.

86. Harro J., Pold M., Vasar E. Anxiogenic-like action of caerulein, a CCK-8 receptor agonist, in the mouse: influence of acute and subchronic diazepam treatment. Naunyn Schmie-debers Arch. Pharmacol. 1990; 341(l-2):62-67.

87. Huston JP, Schildein S, Gerhardt P, Privou C, Fink H, Hasenohrl RU. Modulation of memory, reinforcement and anxiety parameters by intra-amygdala injection of cholecystokinin-fragments Boc-CCK-4 and CCK-8s. Peptides. 1998; 19(1): 27-37

88. Innis RB, Snyder SH.Distinct cholecystokinin receptors in brain and pancreas. Proc Natl Acad Sci USA. 1980 Nov;77(l 1):6917-21.

89. Innis RB, Synder SH.Cholecystokinin receptor binding in brain and pancreas: regulation of pancreatic binding by cyclic and acyclic guanine nucleotides.Eur J Pharmacol. 1980 Jul 11;65(1): 123-4.

90. Itoh S, Takashima A, Igano K, Inouye K.Memory effect of caerulein and its analogs in active and passive avoidance responses in the rat.Peptides. 1989 Jul-Aug;10(4):843-8.

91. Javanmard M, Shlik J, Kennedy SH, Vaccarino FJ, Houle S, Bradwejn J. Neuroanatomic correlates of ССК-4-induced panic attacks in healthy humans: a comparison of two time points. Biol Psychiatry 1999; 45: 872-82.

92. Jerabek I, Boulenger JP, Bradwejn J, Drumheller A, Lavallee YJ, Jolicoeur FB.CCK4-induced panic in healthy subjects II: neurochemical correlates.Eur Neuropsychopharmacol. 1999 Jan;9( 1-2): 157-64.

93. Jerabek I, Boulenger JP, Bradwejn J, Lavallee YJ, Jolicoeur FB.CCK4-induced panic in healthy subjects I: psychological and cardiovascular effects.Eur Neuropsychopharmacol. 1999 Jan;9(l-2): 149-55.

94. Johnson NJ, Rodgers RJ.Ethological analysis of cholecystokinin (CCKA and CCKB) receptor ligands in the elevated plus-maze test of anxiety in mice.Psychopharmacology (Berl). 1996 Apr;124(4):355-64.

95. Kadar T, Telegdy G, Schally AV.An LH-RH antagonist inhibits the behavioral effects of the agonist D-TRP-6-LH-RH in mice.Pharmacol Biochem Behav. 1992 Apr;41(4):665-8.

96. Kantak KM, Collins SL, Bond J, Fox BS.Time course of changes in cocaine self-administration behavior in rats during immunization with the cocaine vaccine IPC-lOlO.Psychopharmacology (Berl). 2001 Jan;153(3):334-40.

97. Katzman M, Bradwejn J, Koszycki D, Vaccarino F, Richter M. The effect of CCK-4 in social phobia and OCD. American Psychiatric Association, 150th Annual Meeting, San Diego, California, ppl05, May 17-22, 1997.

98. Kellner M, Yassouridis A, Jahn H, Wiedemann K. Influence of clonidine on psychopathological, endocrine and respiratory effects of cholecystokinin tetrapeptide in patients with panic disorder. Psychopharmacology 1997; 133: 55-61.

99. Knight M, Tamminga CA, Steardo L, Beck ME, Barone P, Chase TN.Cholecystokinin-octapeptide fragments: binding to brain cholecystokinin receptors.Eur J Pharmacol. 1984 Oct l;105(l-2):49-55.

100. Koks S, Soosaar A, Voikar V, Bourin M, Vasar E. BOC-CCK-4, CCK(B)receptor agonist, antagonizes anxiolytic-like action of morphine in elevated plus-maze.Neuropeptides. 1999 Feb;33(l):63-9.

101. Koks S, Soosaar A, Voikar V, Volke V, Ustav M, Mannisto PT, Bourin M, Vasar E.Opioid antagonist naloxone potentiates anxiogenic-like action of cholecystokinin agonists in elevated plus-maze.Neuropep tides. 1998 Jun;32(3):235-40.

102. Kopin AS, Lee YM, McBride EW, Miller LJ, Lu M, Lin HY, Kolakowski LF Jr, Beinborn M.Expression cloning and characterization of the canine parietal cell gastrin receptor.Proc Natl Acad Sci USA. 1992 Apr 15;89(8):3605-9.

103. Kopin AS, McBride EW, Schaffer K, Beinborn M.CCK receptor polymorphisms: an illustration of emerging themes in pharmacogenomics.Trends Pharmacol Sci. 2000 Sep;21(9):346-53. Review.

104. Kosten T, Owens SM. Immunotherapy for the treatment of drug abuse. Pharmacol Ther. 2005 Oct;108(l):76-85.

105. Koszycki D, Bradwejn J, Bourin M. Comparison of the effects of colecystokinin-tetrapeptide and carbon dioxide in health volunteers. Eur.Neuropsychopharmacol. 1991; 1(2):137-41.

106. Koszycki D, Bradwejn J, Zacharko. Influence of personality on behavioral response to cholecystokinin-tetrapeptide in patients with panic disorder. Psychiatry Res 1996; 62: 131-8.

107. Koszycki D, Zacharko RM, Le Melledo JM, Young SN, Bradwejn J. Effect of acute tryptophan depletion on behavioral, cardiovascular and hormonal sensitivity to cholecystokinintetrapeptide challenge in healthy volunteers. Biol Psychiatry 1996; 40: 648-55.

108. Koszycki D, Zacharko RM; Le-Melledo JM; Bradwejn J. Behavioral, cardiovascular, and neuroendocrine profiles following CCK-4 challenge in healthy volunteers: a comparison of panickers and nonpanickers. Depress/Anxiety. 1998;8(l):l-7

109. Koulischer D, Moroder L, Deschodt-Lanckman M. Degradation of cholecystokinin octapeptide, related fragments and analogs by human and rat plasma in vitro. Regul Pept. 1982 Aug;4(3): 127-39.

110. Lattmann E, Billington DC, Poyner DR, Howitt SB, Offel M.Synthesis and evaluation of asperlicin analogues as non-peptidal cholecystokinin-antagonists. Drug Des Discov. 2001 ;17(3):219-30.

111. Le Melledo J-M, Bradwejn J, Koszycki D, Bichet F, Bellavance F. The role of beta adrenergic system in CCK-4 induced panic symptoms. Biol Psychiatry 1998; 44: 364-6.

112. LeMelledo J-M, Bradwejn J, Koszycki D, Bichet F. Premenstrual dysphoric disorder and response to cholecystokinin-tetrapeptide. Arch Gen Psychiatry 1995; 52:605-6.

113. Lydiard RB, Ballenger JC, Laraia MT, Fossey MD, Beinfeld MC. CSF cholecystokinin concentrations in patients with panic disorder and in normal comparison subjects. Am J Psychiatry 1992; 149: 691-3.

114. Mardh G, Luehr С A, Vallee BL.Human class I alcohol dehydrogenases catalyze the oxidation of glycols in the metabolism of norepinephrine. Proc Natl Acad Sci USA. 1985 Aug;82(15):4979-82.

115. McCann UD, Slate SO, Geraci M, Roscow-Terrill D, Uhde TW. A comparison of the effects of intravenous pentagastrin on patients with social phobia, panic disorder and healthy control. Neuropsychopharmacology 1997; 16: 229-37.

116. McCann UD, Slate SO, Geraci M, Uhde TW. Peptides and anxiety: A dose-response evaluation of pentagastrin in healthy volunteers. Anxiety 1995; 1: 258-67.

117. Meeker M. L., Meeker R.B., Hayward J.N. Accumulation of circulating endogenous and exogenous immunoglobulins by hypothalamic magnocellular neurons. Brain Res., 1987, V. 423, N 1-2, P. 45-55.

118. Meijler MM, Matsushita M, Wirsching P, Janda KD.Development of immunopharmacotherapy against drugs of abuse.Curr Drug Discov Technol. 2004 Jan;l(l):77-89.

119. Mercer JG, Lawrence CB.Selectivity of cholecystokinin (CCK) receptor antagonists, MK-329 and L-365,260, for axonally-transported CCK binding sites on the rat vagus nerve.Neurosci Lett. 1992 Mar 30;137(2):229-31.

120. Micevych PE, Eckersell CB, Brecha N, Holland KL. Estrogen modulation of opioid and cholecystokinin systems in the limbic-hypothalamic circuit Brain-Res-Bull. 1997; 44(4): 335-43

121. Miyasaka K, Funakoshi A. Cholecystokinin and cholecystokinin receptors. J Gastroenterol. 2003;38(1):1-13.

122. Moran TH, Robinson PH, Goldrich MS, McHugh PR.Two brain cholecystokinin receptors: implications for behavioral actions.Brain Res. 1986 Jan l;362(l):175-9.

123. Morley JS, Tracy HJ, Gregory RA.Structure-function relationships in the active C-terminal tetrapeptide sequence of gastrin.Nature. 1965 Sep 25;207(5004): 1356-9.

124. Muller JE, Straus E, Yalow RS. Cholecystokinin and its COOH-terminal octapeptide in the pig brain. Proc Natl Acad Sci USA. 1977 Jul;74(7):3035-7.

125. Mutt V, Jorpes E.Hormonal polypeptides of the upper intestine. Biochem J. 1971 Dec; 125(3):57P-58P.

126. Nagahama H. Acute and long-lasting effects of peripheral injection of caerulein and CCK-8 on the central GABAergic system in mice. Peptides. 1989 Nov-Dec; 10(6): 1247-51

127. Nakajima S, Komuro T, Shimamura M, Hazato T. Enkephalin-binding protein in human blood.Biochem Int. 1989 Sep;19(3):529-36.

128. Noble F, Roques BP. CCK-B receptor: chemistry, molecular biology, biochemistry and pharmacology. Prog Neurobiol. 1999 Jul;58(4):349-79. Review.

129. Noble F, Roques BP. Phenotypes of mice with invalidation of cholecystokinin (CCK(l) or CCK(2)) receptors. Neuropeptides. 2002 Apr-Jun;36(2-3): 157-70.

130. Parks C.L., Robinson PS, Sibille E, Shenk T, Toth M.Increased anxiety of mice lacking the serotoninlA receptor.Proc Natl Acad Sci USA. 1998 Sep l;95(18):10734-9.

131. Passaro E Jr, Debas H, Oldendorf W, Yamada T. Rapid appearance of intraventricularly administered neuropeptides in the peripheral circulation. Brain Res. 1982 Jun 10;241(2):335-40.

132. Pekas JC Effect of cholecystokinin immunization, enhanced food intake and growth of swine on lean yield and carcass composition. J. Nutr. 1991 Apr; 121(4): 563-7

133. Pell JM, Aston R. Active immunization with a synthetic peptide region of growth hormone: increased lean tissue growth. J Endocrinol. 1991 Oct;131(l):Rl-4.

134. Pellow S, Chopin P, File SE, Briley M. Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat. J Neurosci Methods. 1985 Aug; 14(3): 149-67.

135. Porsolt RD, Anton G, Blavet N, Jalfre M. Behavioural despair in rats: a new model sensitive to antidepressant treatments. Eur J Pharmacol. 1978 Feb 15;47(4):379-91.

136. Radu D, Ahlin A, Svanborg P, Lindefors N. Anxiogenic effects of the CCK(B) agonist pentagastrin in humans and dose-dependent increase in plasma C-peptide levels. Psychopharmacology (Berl). 2002 Jun; 161(4):396-403. Epub 2002 Apr 17.

137. Rehfeld JF. Accurate measurement of cholecystokinin in plasma.Clin-Chem. 1998 May; 44(5): 991-1001

138. Rehfeld JF. Cholecystokinin and anxiety, an overview. In: Dourish CT, Cooper SJ, Iversen SD, Iversen LL, editors, Multiple cholecystokinin receptors in CNS, Oxford University Press, 1992, pp. 117-20.

139. Rehfeld JF. How to measure cholecystokinin in tissue, plasma and cerebrospinal ?uid. Regul Pept 1998;78:31-9.

140. Rehfeld JF. The measurement of cholecystokinin. J Clin Pathol Suppl (Assoc Clin Pathol). 1978; 8: 26-30.

141. Reiber H, Kitze B, Link M, Wagner R. Cellular immune reactions and blood cerebrospinal fluid barrier dysfunction in guinea pigs. Neurochem Res. 1988 May;13(5):463-6.

142. Reiber H, Suckling AJ, Rumsby MG The effect of Freund's adjuvants on blood-cerebrospinal fluid barrier permeability.J Neurol Sci. 1984 Jan;63(l):55-61

143. Reum T, Schafer U, Marsden CA, Fink H, Morgenstern R.Cholecystokinin increases extracellular dopamine overflow in the anterior nucleus accumbens via CCK(B) receptors in the VTA assessed by in vivo voltammetry. Neuropeptides. 1997 Feb;31(l):82-8

144. Roscetti G, Venturelli F, Roda LG.Enkephalin binding systems in human plasma. Ill: Comparative protection of different peptides.Neurochem Res. 1988 Mar;13(3):221-4.

145. Rupniak NMJ, Schaffer L, Iversen SD. Failure of intravenous pentagastrin challenge to induce panic-like effects in Rhesus monkeys. Neuropeptides 1993;25:115-9.

146. Saito A, Sankaran H, Goldfine ID, Williams JA. Cholecystokinin receptors in the brain: characterization and distribution. Science. 1980 Jun 6;208(4448):1155-6.

147. Savasta M, Palacios JM, Mengod G. Regional distribution of the messenger RNA coding for the neuropeptide cholecystokinin in the human brain examined by in situ hybridization. Brain Res Mol Brain Res. 1990 Feb;7(2):91-104.

148. Schenk D, Barbour R, Dunn W, Gordon G, Grajeda H, Guido T, Ни K, Huang

149. Schneier FR, Liebowitz MR, Abi-Dargham A, Zea-Ponce Y, Lin SH, Laruelle M. Low dopamine D(2) receptor binding potential in social phobia. Am J Psychiatry. 2000 Mar;157(3):457-9.

150. Schubert ML, Shamburek RD.Control of acid secretion.Gastroenterol Clin North Am. 1990 Mar;19(l):l-25. Review.

151. Shlik J, Vasar E, Bradwejn J. Cholecystokinin and psychiatric disorders: Role in aetiology and potential of receptor antagonists in therapy. CNS Drugs 1997;8: 134-52.

152. Simmons RD, Blosser JC, Rosamond JR. FPL 14294: a novel CCK-8 agonist with potent intranasal anorectic activity in the rat. Pharmacol Biochem Behav. 1994 Mar;47(3):701-8.

153. Singh L, Field MJ, Hughes J, Menzies R, Oles RJ, Vass CA, Woodruff GN.The behavioural properties of CI-988, a selective cholecystokininB receptor antagonist.Br J Pharmacol. 1991 Sep;104(l):239-45.

154. Singh L., Lewis A.S., Field M.G., Hughes J., Woodruff G.N. Evidence for an involvement of the brain cholecystokinin В receptor in anxiety. Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1991; 88(4):1130-3.

155. Sitthisomwong P, Weiner S, Levin L, Reisman S, Siegel A.The effect of a cholecystokinin agonist on masseter muscle activity in the cat.J Dent Res. 2000 Oct;79( 10): 1823-8.

156. Slaap B.R., Westernberg H.G. et al. Pentagastrin has panic-inducing properties in obsessive compulsive disorder. Psychopharmacology Berl; 1996; 126:339344.

157. Smith GP, Gibbs J. Are gut peptides a new class of anorectic agents? Am J ClinNutr. 1992 Jan;55(l Suppl):283S-285S. Review.

158. Spencer GS. Immunization against cholecystokinin decreases appetite in lambs. J.Anim. Sci. 1992 Dec; 70(12): 3820-4

159. Steigerwalt RW, Williams JA. Binding specificity of the mouse cerebral cortex receptor for small cholecystokinin peptides.Regul Pept. 1984 Jan;8(l):51-9.

160. Stevens VC.Progress in the development of human chorionic gonadotropin antifertility vaccines.Am J Reprod Immunol. 1996 Mar;35(3): 148-55. Review.

161. Strohle A, Holsboer F, Rupprecht R. Increased ACTH concentrations associated with cholecystokinin tetrapeptide-induced panic attacks in patients with panic disorder. Neuropsychopharmacology. 2000 Mar;22(3):251-6.

162. Toth M.5-HT1A receptor knockout mouse as a genetic model of anxiety .Eur J Pharmacol. 2003 Feb 28;463( 1-3): 177-84. Review.

163. Van Megan HJGM, Westenberg MGM, den Boer JA Effect of the selective serotonin reuptake inhibitor fluvoxamine of ССК-4-induced panic attacks. Psychopharmacology 1997; 129: 357-64.

164. Van Megen H.J., Westenberg H.G., Den Boer J.A., Haigh J.R., Traub V. Pentagastrin induced panic attacks: enhanced sensitivity in panic disorder patients. Psychopharmacology Berl. 1994; 114:449-455.

165. Van Vliet IM, Westenbert HGM, Slaap BR, den Boer JA, Ho Pian KL. Anxiogenic effects of pentagastrin in patients with social phobia and healthy controls. Biol Psychiatiy 1997; 42: 76-8.

166. Vanderhaeghen JJ, Signeau JC, Gepts W.New peptide in the vertebrate CNS reacting with antigastrin antibodies. Nature. 1975 Oct 16;257(5527):604-5.

167. Van-Kampen J; Stoessl A J. The effects of CCK-4 on dopamine D1 agonist-induced grooming are blocked by a CCK(A) receptor antagonist: evidence for a novel CCK receptor subtype? Neuropharmacology. 1997 Nov-Dec; 36(11-12): 1679-88

168. Wang H, Wong PT, Spiess J, Zhu YZ.Cholecystokinin-2 (CCK2) receptor-mediated anxiety-like behaviors in rats.Neurosci Biobehav Rev. 2005;29(8): 1361-73 .Review.

169. Webb JK, Rupniak NM, Boyce S.Inhibition of pentagastrin-induced pressor response in conscious rats by the CCK-B receptor antagonist CI-988 and chlordiazepoxide.Regul Pept. 1996 Jan 16;61(l):71-6.

170. Wettstein JG, Bueno L, Junien JL. CCK antagonists: pharmacology and therapeutic interest. Pharmacol Ther. 1994;62(3):267-82. Review.

171. Wilson J, Watson WP, Little HJ. CCK(B) antagonists protect against anxiety-related behaviour produced by ethanol withdrawal, measured using the elevated plus maze.Psychopharmacology-Berl. 1998 May; 137(2): 120-31

172. Wise CD, Berger BD, Stein L. Evidence of -noradrenergic reward receptors and serotonergic punishment receptors in the rat brain. Biol Psychiatry. 1973 6(1):3-21.

173. Wolkowitz OM, Gertz B, Weingartner H, Beccaria L, Thompson K, Liddle RA. Hunger in humans induced by MK-329, a specific peripheral-type cholecystokinin receptor antagonist. Biol Psychiatry. 1990 Jul 15;28(2):169-73.

174. Wu LJ, Ко SW, Toyoda H, Zhao MG, Xu H, Vadakkan KI, Ren M, Knifed E, Shum F, Quan J, Zhang XH, Zhuo M.Increased anxiety-like behavior and enhanced synaptic efficacy in the amygdala of GluR5 knockout mice.PLoS ONE. 2007 Jan 24;2(l):el67.

175. Zacharko R, Koszycki D, Mendella P, Bradwejn J. Behavioral, neurochemical, anatomical and electrophysiological correlates of panic disorder. Multiple transmitter interactions and neuropeptide colocalization. Prog Neurobiol 1995; 47: 371—423.

176. Zhang K, Yuan Z, Bing Y, Chen X, Ding X, Chen D.Effects of active immunization against cholecystokinin 8 on performance, contents of serum hormones, and expressions of CCK gene and CCK receptor gene in pigs.Endocrine. 2007 Dec;32(3):338-44