Динамика плазменно-растворимых антигенов системы HLA при трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток больным гемобластозами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Голубенко, Рамиля Ахметовна

• Голубенко, Рамиля Ахметовна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Голубенко, Рамиля Ахметовна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика больных и доноров

2.2. Методы исследования

ГЛАВА 3. ЗНАЧЕНИЕ ПЛАЗМЕННОРАСТВОРИМЫХ НЬА В ДИАГНОСТИКЕ ОСТРОЙ И ХРОНИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА

3.1. Динамика плазменнорастворимых НЬА у больных с острой и хронической реакцией трансплантат против хозяина методом ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител

3.2. Определение плазменнорастворимых НЬА методом иммуноферментного анализа

3.3. Анализ динамики химеризма у больных с острой и хронической реакцией трансплантат против хозяина

ГЛАВА 4. ИММУНОСЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ У РЕЦИПИЕНТОВ КОСТНОГО МОЗГА 4.1. Изучение частоты выявления антиэритроцитарных антител, естественных изогемагглютининов и лимфоцитотоксических антител 4.2 Изучение специфичности метода ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Динамика плазменно-растворимых антигенов системы HLA при трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток больным гемобластозами»

Острая реакция трансплантат против хозяина (РТПХ) является серьёзным осложнением трансплантации аллогенного костного мозга, приводящим, примерно, в 15 - 20% случаев к летальному исходу. Течение позднего посттрансплантационного периода может значительно осложнять хроническая РТПХ, которая, примерно, в таком же проценте случаев заканчивается фатально. Известно, что в основе иммунологических осложнений после трансплантации аллогенного костного мозга (ТКМ) лежит конфликт между иммунокомпетентными клетками донора и реципиента. Отсутствие различий по основным антигенам системы НЬА у пар указывает на наличие у реципиента других неизвестных антигенов, которые участвуют в индукции РТПХ. Критерии диагностики РТПХ являются ограниченными и заключаются, в основном, в оценке клинической картины заболевания и результатов гистологических исследований материала из пораженных органов-мишеней, которые не всегда бывают информативными. Что же касается иммунологических показателей, то их роль в диагностике РТПХ остается мало изученной. Работами Зотикова Е.А. с соавт.(1995 г) было показано, что у реципиентов с острой РТПХ выявляются плазменнорастворимые НЬА антигены (в 37%случаев), но не было проведено корреляции этого показателя с клиническими проявлениями различных форм РТПХ и приживлением трансплантанта по данным исследования эритроцитарного химеризма. Отмечено также появление в ряде случаев антител к эритроцитам и лимфоцитам у реципиентов костного мозга (Порешина Л.П.с соавт.,1993г). Однако не изучены динамика иммуносерологических показателей, частота их встречаемости и значение в диагностике РТПХ. В связи с этим, детальный анализ иммуносерологических показателей у больных до и после трансплантации костного мозга представляется актуальным.

Выявление возможной связи этих показателей с проявлениями острой и хронической РТПХ является важным для ее диагностики и своевременного начала терапии.

Цель исследования

Изучить динамику плазменнорастворимых HLA у больных после трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток, частоту выявления эритроцитарных, лимфоцитотоксических антител и естественных изогемагглютининов с учетом характера эритроцитарного химеризма.

Задачи исследования

1. Установить частоту обнаружения плазменнорастворимых HLA у реципиентов костного мозга и их значение для диагностики реакции трансплантат против хозяина.

2. Модифицировать и применить метод иммуноферментного анализа для выявления плазменнорастворимых антигенов и сопоставить результаты их исследования методом ингибиции анти-HLA антител с данными иммуноферментного анализа.

3. Установить влияние темпа нарастания донорских эритроцитов в крови реципиента на развитие и степень тяжести реакции трансплантат против хозяина.

4. Установить значение в диагностике реакции трансплантат против хозяина антиэритроцитарных, антилимфоцитарных антител, динамики естественных изогемагглютининов.

Научная новизна

На основании 715 исследований, проведенных у 49 реципиентов аллогенных гемопоэтических клеток, установлена роль плазменнорастворимых антигенов (ПРА) в диагностике острой и хронической реакции трансплантат против хозяина. Новыми являются данные, показавшие, что ПРА выявляются у до 93% пациентов с острой РТПХ, и до 100% больных с хронической формой и практически отсутствуют у больных без этих осложнений и лиц контрольной группы.

Они свидетельствует о том, что наличие ПРА является характерным для РТПХ и может использоваться в качестве дополнительного теста ее диагностики. Установлено прогностическое значение появления ПРА для ранней диагностики острой и хронической РТПХ после немиелоаблативного кондиционирования, выявлено соответствие степени тяжести РТПХ и уровня ПРА. В то же время не обнаружено корреляции между темпом увеличения содержания донорских эритроцитов в крови, развитием и степенью тяжести РТПХ. Впервые в отечественной практике модифицирован метод иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления ПРА у реципиентов костного мозга, при использовании которого получены данные, аналогичные таковым при применении метода ингибиции анти-HLA антител. На основании анализа частоты выявления антиэритроцитарных, антилимфоцитарных антител, динамики естественных изогемагглютининов у реципиентов костного мозга сделано заключение о том, что эти показатели не имеют диагностической значимости. Новизна исследования заключается в детальном исследовании динамики иммуносерологических показателей и их значения в диагностике РТПХ, которые являются мало изученными и практически не освещены в литературе. Результаты работы углубляют наши знания об особенностях иммунологических изменений, происходящих у реципиентов костного мозга в посттрансплантационном периоде при развитии острой и хронической форм РТПХ.

Практическое значение работы

Вопросы, освещенные в данной работе, представляют не только научный, но и практический интерес. Показано, что появление ПРА специфично для острой и хронической РТПХ и может использоваться в ее диагностике. Это является важным, так как подходы к распознаванию такого серьезного осложнения аллогенной ТКМ являются ограниченными. В то же время не найдено диагностической значимости других иммуносерологических показателей, изученных у реципиентов костного мозга. Модифицирован метод иммуноферментного анализа для выявления плазменнорастворимых НЬА у реципиентов костного мозга, который до сих пор не использовался в отечественной практике. Он может быть применим в тех случаях, когда в НЬА-фенотипе пациента не содержатся антигены, специфичные анти-НЬА антителам тест-реагента, который используется в методе ингибиции лимфоцитотоксических анти -НЬА антител. Важно, что результаты определения ПРА с помощью ИФА не имели принципиальных различий с данными, полученными методом ингибиции лимфоцитотоксических анти -НЬА антител, который применяется в ГНЦ РАМН на протяжении длительного времени. Проведенные исследования могут способствовать улучшению диагностики РТПХ и результатов миелотрансплантаций.

Положения, выносимые на защиту

1. Появление плазменнорастворимых антигенов является характерным признаком острой и хронической РТПХ и может использоваться в диагностике этих осложнений.

2. Результаты определения ПРА с помощью метода иммуноферментного анализа аналогичны данным, полученным с помощью метода ингибиции лимфоцитотоксических анти - НЬА антител.

3. Обнаружение противоэритроцитарных антител, динамика эритроцитарного химеризма и естественных изогемагглютининов не имеют значения для диагностики РТПХ.

Апробация работы и публикации.

Апробация работы состоялась на заседании Проблемной комиссии Гематологического научного центра РАМН «Гемобластозы и депрессии кроветворения» 23 июня 2006 года. Материалы и основные положения диссертационной работы были доложены на конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург, 2004г), научно-практической конференции «Новое в гематологии и трансфузиологии» (Москва, 2005 г), 15-ой Международной конференции «СПИД, рак и общественное здоровье» (Санкт-Петербург, 2006), 32-ом ежегодном Европейском конгрессе по трансплантации костного мозга (стендовый доклад), в г. Гамбурге в 2006 г.

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем и структура работы.

Диссертация изложена на 129 стр. и состоит из введения, обзора литературы, методической главы, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 8 рисунками. Диссертация выполнена в отделении химиотерапии гемобластозов и трансплантации костного мозга (научный руководитель член-корр. АМН РФ проф. В.Г. Савченко ), лаборатории иммуногематологии (зав. к.м.н. Л.Л.Головкина) с участием н.с. М.Н.Васильевой, а также лаборатории клинико-вирусологической диагностики гепатитов и СПИД (зав.- д.б.н. Ф.П.Филатов ) с участием с.н.с., к.б.н. Т.А. Гаранжа ГНЦ РАМН (директор- академик А.И. Воробьев).

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Голубенко, Рамиля Ахметовна

Выводы.

1. При исследовании 49 пациентов с гемобластозами установлено, что наличие плазменнорастворимых НЬА антигенов может использоваться для диагностики острой и хронической формы реакции трансплантат против хозяина, при которой методом ингибиции анти-НЬА антител они выявлены у 21 из 23 (91%), и 29 из 30 больных (97%) соответственно, и не обнаружены у большинства пациентов без этих осложнений, а также у всех лиц контрольной группы.

2. Модифицирован, и впервые в отечественной практике, применен для выявления плазменнорастворимых антигенов метод иммуноферментного анализа, с помощью которого они обнаружены у 87% пациентов с реакцией трансплантат против хозяина и не найдены у всех больных без этого осложнения и доноров, что совпадает с результатами, полученными методом ингибиции анти-НЬА антител.

3. Установлено, что появление плазменнорастворимых антигенов у больных без острой реакции трансплантат против хозяина (в среднем на 61,0±8,12 дни) имеет прогностическое значение для развития хронической формы реакции трансплантат против хозяина (в среднем на 149,0±14,8 дни, р < 0,05), которая наблюдалась у всех таких пациентов.

4. Получены данные, свидетельствующие о соответствии уровня плазменнорастворимых антигенов степени тяжести реакции трансплантат против хозяина: при острой форме Ш-1У степени тяжести максимальный уровень плазменнорастворимых HLA выявлялся в 3 раза чаще, чем у больных с I-II степенью тяжести этого осложнения (89% против 29%, р < 0,05).

5. По данным исследования эритроцитарного химеризма на +30, +60 и +90 дни влияния темпа нарастания донорских эритроцитов в крови реципиентов на развитие реакции трансплантат против хозяина и степень ее тяжести не установлено.

6. Взаимосвязи между появлением у больных антиэритроцитарных антител, характером замещения естественных изогемагглютининов реципиента на донорские в результате изменения его группы крови и развитием реакции трансплантат против хозяина не выявлено.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Трансплантация костного мозга применяется в практике лечения гемобластозов с середины 80-х годов. К 2000 году в мире было выполнено более 80 тыс. трансплантаций аллогенного костного мозга. Несмотря на широкое использование этого метода одной из основных причин смерти больных в раннем посттрансплантационном периоде является острая реакция «трансплантат против хозяина». По имеющимся данным развитие острой РТПХ отмечается у 50-80% реципиентов аллогенного костного мозга и в 15-20% случаев она приобретает крайне тяжелое течение с летальным исходом. Течение позднего посттрансплантационного периода может значительно осложнять хроническая РТПХ, которая примерно в таком же проценте случаев заканчивается фатально. Ранняя диагностика острой РТПХ может оказать значительное влияние на успех терапии. Поэтому настоящая работа была посвящена вопросам разработки новых методов диагностики, которые могут способствовать своевременной постановке диагноза, особенно, в случае отсутствия ярких и очевидных клинических симптомов РТПХ. В связи с этим были предприняты исследования плазменнорастворимых антигенов у реципиентов костного мозга. Основанием для их проведения послужили публикации зарубежных авторов, посвященные изучению плазменнорастворимых антигенов при органных трансплантациях, в которых было показано, что ПРА увеличиваются при острой реакции отторжения трансплантата. Основным методом выявления ПРА явился метод ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител, который используется в ГНЦ РАМН в течение многих лет. Одновременно было уделено внимание модификации альтернативного метода выявления плазменнорастворимых антигенов -иммуноферментного анализа (ИФА) для случаев, когда применить метод ингибиции анти-НЬА антител не представляется возможным (НЬАфенотип пациента не содержит антигены, специфичные анти-НЬА антителам тест-реагента).

Нам также было интересно оценить значение иммуносерологических показателей (динамики эритроцитарного химеризма, аутолимфоцитотоксических и антиэритроцитарных антител, естественных изогемагглютининов) в диагностике реакции трансплантат против хозяина.

Под наблюдением находилось 49 реципиентов костного мозга -больных с разными вариантами гемобластозов. Согласно поставленным задачам, прежде всего, предстояло определить частоту выявления ПРА у больных с острой РТПХ, установить роль ПРА для ранней диагностики этого осложнения, выявить зависимость между тяжестью острой РТПХ и уровнем ПРА с учетом степени истощения тест-реагента. Эти исследования проведены у 43 реципиентов костного мозга. Острая РТПХ развилась у 23 больных, что составило 53%, плазменнорастворимые антигены были выявлены в 91% случаев. Для подтверждения специфичности появления ПРА при острой РТПХ нами были проанализированы результаты исследования ПРА у больных без острой РТПХ. В результате выяснилось, что из 20 человек, вошедших в исследование, отрицательные результаты выявлены в 80 % случаев. Только у 4 пациентов с + 19, 27, 41 и 84 дней отмечалось появление ПРА и у этих больных в дальнейшем развилась хроническая РТПХ.

Для оценки значения ПРА для ранней диагностики РТПХ нами сопоставлены сроки появления ПРА и диагностики острой РТПХ. Сравнительному анализу было подвергнуто 17 больных. В анализ не вошли 6 человек, которым не проводились исследования в 1 мес. после ТКМ (4 больных) и 2 пациента с острой РТПХ, у которых на протяжении первых 3 мес. исследования ПРА не выявлялись. В среднем каждому пациенту было проведено 16 исследований (от 3 до 33). Максимальные сроки исследования составили 50 мес. Наши данные показали, что у всех

13 пациентов с миелоаблативным кондиционированием сроки развития острой РТПХ и обнаружения ПРА практически полностью совпадали, т.е. появление ПРА не предшествовало диагностике острой РТПХ. В то же время у всех 4 пациентов с немиелоаблативным кондиционированием.ПРА были выявлены раньше, чем появились клинические признаки острой РТПХ (результаты статистически достоверны, критерий Манна-Уитни, р<0,05). Следует заметить, что у 3 из этих пациентов наблюдалась острая РТПХ III-IV степени тяжести, в 1 случае с летальным исходом, и у 3 в дальнейшем развилась экстенсивная хроническая РТПХ.

Таким образом, сделан вывод, что наличие ПРА является специфичным для острой РТПХ, а при немиелоаблативном кондиционировании может, видимо, иметь и прогностическое значение, так как у всех таких больных появление ПРА предшествовало развитию острой РТПХ. Обратил на себя внимание тот факт, что после миелоаблативного кондиционирования развитие острой РТПХ при XMJI наблюдалось в более ранние сроки (на +15-47 дни), чем у пациентов с OJI, которым также применялось миелоаблативное кондиционирование (на +49-60 дни); соответственно и ПРА обнаруживались у пациентов с XMJI раньше (на + 21-44 дни), чем у больных с ОЛ (на + 51-60 дни). Хотя средние показатели сроков появления острой РТПХ и ПРА в указанных группах больных отличались почти в 2 раза, различия оказались статистически недостоверными.

При анализе значения ПРА в диагностике хронической РТПХ установлено, что она диагностирована у 16 (57%) пациентов с OJI и МДС (у 5 - локальная и 11 - экстенсивная) и у 14 больных с XMJI (93%), также преимущественно, экстенсивной формы. ПРА были обнаружены у всех 30 исследованных пациентов с локальной формой хронической РТПХ (100%) и у всех пациентов с экстенсивной формой РТПХ за исключением 1 больного с МДС после ТКМ с немиелоаблативным кондиционированием. На основании этих данных мы заключили, что обнаружение плазменнорастворимых HLA является специфичным и для хронической РТПХ.

При анализе больных, у которых развилась только хроническая РТПХ показано, что выявление ПРА значительно опережает клинические проявления хронической РТПХ и только у 1 пациентки сроки выявления ПРА и диагностики РТПХ совпадали (+ 237 и +240 дни соответственно). Так ПРА появлялись в среднем на + 61± 8,12 день, а диагностика хронической РТПХ приходилась на +149 ± 14,8 дни (данные статистически достоверны). Эти данные позволяют судить о том, что появление ПРА не только специфично для хронической РТПХ, но и предшествует ее диагностике, т.е. может иметь прогностическое значение. Можно предположить, что больные с отсутствием острой РТПХ и появлением ПРА представляют группу риска развития хронической формы РТПХ. В таких случаях можно рекомендовать более частое обследование пациентов для своевременной диагностики хронической РТПХ и начала терапии.

В 18 случаях была диагностирована как острая, так и хроническая РТПХ. Выяснилось, что острая РТПХ развивалась в 2 раза чаще у пациентов с OJI и МДС после немиелоаблативного кондиционирования, чем после применения бусульфана в сочетании с циклофосфаном (в 77% и 33% соответственно). Хроническая РТПХ у пациентов с OJI+МДС наблюдалась преимущественно после немиелоаблативного кондиционирования (в 77% против 40% соответственно). Отмечено, что у пациентов с XMJI острая РТПХ III-IV степени тяжести развивалась чаще (в 5 случаях), чем у пациентов с OJI, которым был также применен миелоаблативный режим кондиционирования (у 1 больного).

Мы также попытались ответить на вопрос - соответствует ли степень истощения тест-реагента тяжести проявлений РТПХ. С этой целью нами были изучены в сравнении результаты исследования пациентов с острой РТПХ I-II и III-IV степени тяжести, больных с локальной и экстенсивной хронической РТПХ и пациентов, у которых была как острая, так и хроническая РТПХ. Установлено, что у больных с хронической РТПХ, а также с острой, а в дальнейшем и хронической РТПХ, степень истощения тест-реагента достигала максимального уровня у 60% и 67% соответственно.

Наши данные показали, что при острой РТПХ Ш-1У степени, больных, у которых степень истощения тест-реагента достигала 3-4 ступеней, было в 3 раза больше (89%), чем при острой РТПХ 1-П степени о

29%). Данные статистически достоверны (критерий % Пирсона р<0,05). В целом у пациентов с острой и в дальнейшем хронической РТПХ истощение тест-реагента на 3-4 ступени отмечено более чем в 60% случаев. Степень истощения тест-реагента также была максимальной у всех 7 больных с наиболее тяжелыми клиническими проявлениями экстенсивной хронической РТПХ, включавшей помимо вовлечения печени, поражения легких, глаз, слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта.

На основании полученных данных нами сделан вывод о том, что при острой РТПХ истощение тест-реагента сывороткой больного, отражающее количество ПРА, зависит от степени ее тяжести. Преобладания больных с максимальным уровнем ПРА при поражении печени не выявлено, однако, у всех пациентов с наиболее тяжелыми органными поражениями истощение тест-реагента достигало 3-4 ступеней.

Таким образом, сделано заключение о том, что уровень ПРА ассоциируется с тяжестью клинических проявлений РТПХ, особенно острой РТПХ.

При исследовании сывороток 27 доноров костного мозга (контрольная группа) с целью доказательства специфичности теста ингибиции, ни в одном случае ПРА обнаружены не были. Аналогичные данные получены у 8 больных, которым была выполнена аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток с миелоаблативным режимом кондиционирования.

В последние годы в мировой практике для выявления плазменнорастворимых антигенов применяют метод иммуноферментного анализа. В отечественной практике таких работ не было, в связи с этим нами разработан данный метод с целью определения плазменнорастворимых антигенов после трансплантации костного мозга и сопоставлены полученные результаты с результатами, выявленными методом ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител. С помощью этого метода мы исследовали 74 сыворотки от 15 реципиентов аллогенного костного мозга. Количество изучаемых сывороток одного больного было от 4 до 6. Для сравнения результатов исследования ПРА двумя методами, были выбраны сроки исследований, соответствующие наличию клинических проявлений острой или хронической РТПХ. Результаты исследований выражали в условных единицах (коэффициент реактивности). Отмечено, что только у 1 пациента с РТПХ ПРА не были выявлены на + 190 день, однако это совпало с применением больному в эти дни плазмообменов с целью лечения хронической РТПХ. Еще у 1 больного (Ф.А.Ю) ПРА не были исследованы, так как в его НЬА-фенотипе не содержалось антигенов, специфичных анти-НЬА антителам тест-реагента. Показательным является тот факт, что у этого больного плазменнорастворимые НЬА не определялись до момента развития у него острой РТПХ и были обнаружены с помощью метода ИФА после развития клинических проявлений (поражения кожи и кишечника). Прлазменнорастворимые антигены обнаружены у 7 из 8 пациентов с РТПХ (87,5%) и не найдены у всех 7 пациентов без РТПХ.

Из 13 образцов сывороток крови доноров костного мозга ПРА обнаружены в 1 случае. Плазменнорастворимые антигены также были выявлены у 3 больных после применения немиелоаблативного кондиционирования еще до ТКМ, однако, они выявлялись при малом разведении сыворотки (1:2), что можно объяснить их незначительным уровнем или неспецифическим взаимодействием белков сыворотки с антителом \У6/32.

Необходимо отметить, что помимо упомянутого выше больного, еще 2 больных не были исследованы методом ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител, так как в их НЬА-фенотипе не было антигенов, специфичных анти-НЬА антителам тест-реагента. Сыворотки этих пациентов удалось исследовать методом иммуноферментного анализа, что свидетельствует о возможности использования ИФА в подобных ситуациях.

Результаты определения ПРА в ИФА оказались идентичными тем, которые были получены методом ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител. Другими словами, при использовании метода ингибиции анти-НЬА антител и ИФА не было принципиальных разночтений. Метод ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител дешев, прост в исполнении и интерпретации результатов, однако имеет ограничения. ИФА применим в тех случаях, когда в НЬА-фенотипе пациента не содержатся антигены, специфичные анти-НЬА антителам тест-реагента. Таким образом, можно заключить, что иммуноферментный метод является высокочувствительным и специфичным для определения ПРА, что после соответствующей доработки метода, позволит более широко использовать его для диагностики РТПХ.

В то же время тот факт, что полученные с помощью метода ИФА результаты аналогичны тем, которые были получены методом ингибиции анти-НЬА антител, свидетельствует о специфичности последнего. Однако мы провели дополнительные опыты, подтверждающие высокую специфичность метода ингибиции лимфоцитотоксических анти-НЬА антител. С этой целью мы сравнили результаты реакции ингибиции, выполненной с лимфоцитами стандартных типированных доноров, с результатами реакции ингибиции, проведенной с собственными лимфоцитами реципиентов, так как именно эти лимфоциты были полностью идентичны растворимым НЬА больных. До ТКМ у доноров костного мозга и реципиентов истощение тест-реагента отсутствовало или не превышало 1 ступени. Во всех случаях при исследовании с собственными лимфоцитами ингибиция НЬА антител была более выраженной, чем с лимфоцитами стандартного типированного донора. Это можно объяснить полной идентичностью плазменнорастворимых НЬА реципиента с его собственными лимфоцитами. Аналогичные результаты, доказывающие специфичность метода ингибиции анти-НЬА антител плазменнорастворимыми антигенами реципиентов, были получены с сыворотками 9 доноров костного мозга, содержащих или не содержащих те же комбинации антигенов системы НЬА, против которых имелись антитела в тест-реагенте. Таким образом, эти данные свидетельствуют об отсутствии в сыворотке исследуемых доноров костного мозга плазменнорастворимых НЬА.

Мы попытались также определить, имеется ли взаимосвязь между развитием РТПХ и темпом нарастания донорских эритроцитов по данным метода дифференциальной агглютинации по Эшби. С этой целью были изучены результаты определения эритроцитарного химеризма у 34 наших пациентов, которые имели маркеры, отличающиеся от донорских, на +30, +60 и + 90 дни после миелотрансплантации. Представлялось интересным выяснить, есть ли различия в динамике нарастания донорских эритроцитов у больных с острой и хронической РТПХ и без этих осложнений и при разной степени их тяжести. Зависимости динамики нарастания донорских эритроцитов у пациентов с наличием РТПХ, а также разной степенью тяжести этого осложнения не выявлено. Иными словами, по данным исследования больных с интервалом в 1 мес. не выявлено зависимости развития РТПХ от скорости нарастания эритроцитов донорского фенотипа. Это можно объяснить тем, что на увеличение содержания эритроцитов донора в крови реципиентов может влиять множество факторов, таких как большая» несовместимость пар по АВО-антигенам, режим кондиционирования, присоединение тяжелых инфекций и т.д. В то же время получены интересные, статистически достоверные данные, свидетельствующие о неуклонном нарастании донорских эритроцитов в указанные сроки исследования в пределах каждой из сравниваемых групп (критерий Манна-Уитни, р< 0,05).

Помимо изучения роли ПРА в диагностике РТПХ нами были исследованы другие иммуносерологические показатели. Мы предположили, что они также могут выявляться у больных с РТПХ и иметь диагностическое значение.

В этой связи мы изучали у 29 реципиентов после аллогенной ТКМ образование фиксированных на эритроцитах антител, лимфоцитотоксических антител, следили за динамикой аир естественных изогемагглютининов после ТКМ. При исследовании прямой пробы Кумбса (прямой антиглобулиновый тест) положительная реакция была выявлена у 12 больных, причем у 8 из них однократно, а у 4 - и при повторных исследованиях.

При анализе зависимости результатов АГТ от совместимости донора и реципиента по АВО-антигенам оказалось, что антиэритроцитарные антитела выявлялись, главным образом, после разногруппных ТКМ. Так, при большой несовместимости антитела к эритроцитам выявлены в 70% случаев, что оказалось достоверно более высоким, чем у пациентов после ТКМ от АВО-совместимых доноров. В то же время при сопоставлении результатов исследований антиэритроцитарных антител с наличием у больных РТПХ выяснилось, что она была диагностирована практически в таком же числе случаев, как и у больных без антител. Таким образом, можно думать, что появление антиэритроцитарных антител не ассоциировалось с развитием РТПХ и не имеет диагностического значения. Отмечено, что у 12 реципиентов изменение группы крови на донорскую сопровождалось появлением изогемагглютинирующих антител, специфичных для группы крови донора. У 3 больных после смены группы крови выявлялись собственные изогемагглютинины, а у 9 пациентов групповая принадлежность изменилась на донорскую, а изогемагглютинины не выявлялись вообще. При этом оказалось, что у больных с полной заменой группы крови и естественных изогемагглютининов на донорские, когда можно было ожидать большей частоты РТПХ, она была диагностирована в меньшем числе случаев(67 %), чем у тех, у которых изогемагглютинины донора не появились (в 87%).

Другой раздел исследований был посвящен изучению образования лимфоцитотоксических (ЛЦТ) антител. Если аллоиммунные антитела, выявляются, в основном, после трансфузий эритроцитной массы, то у больных с РТПХ, в основе которой лежит взаимодействие иммунокомпетентных лимфоцитов донора и реципиента, можно было предположить образование аутоиммунных антител. Исследованию подвергли 188 сывороток 22 больных с лимфоцитами 10 доноров до и в разные сроки после ТКМ. Аллоиммунные антилимфоцитарные антитела были выявлены в посттрансплантационном периоде только у 1 пациентки с множественными трансфузиями компонентов крови и повторными беременностями в анамнезе. Следовательно, результаты показали, что образование фиксированных на эритроцитах антител, динамика аир естественных изогемагглютининов, наличие лимфоцитотоксических антител нельзя связать с развитием РТПХ.

Таким образом, изучение значения иммуносерологических показателей в диагностике РТПХ позволило заключить, что для острой и хронической РТПХ специфичным является только наличие ПРА. При этом обращено внимание на то, что появление ПРА предшествовало появлению клинической симптоматики у больных с немиелоаблативным кондиционированием и развитию хронической РТПХ у больных без острой РТПХ независимо от примененного режима. С учетом этих данных больных с отсутствием острой РТПХ и появлением ПРА можно отнести к группе повышенного риска развития хронической формы РТПХ. Эти данные позволяют судить и о прогностическом значении выявления ПРА. Полученные результаты являются важными для практики, так как свидетельствуют о необходимости более частого исследования таких больными для своевременной диагностики хронической РТПХ и, соответственно, начала лечения.

Наши данные позволили охарактеризовать частоту выявления антиэритроцитарных, антилимфоцитарных антител, проследить взаимосвязь между динамикой естественных изогемагглютининов, сопоставить темп нарастания эритроцитов донора с наличием РТПХ, а также степенью ее тяжести. Однако их значения для диагностики РТПХ не выявлено.

Мы полагаем, что результаты наших исследований, посвященных мало изученным вопросам иммуносерологической диагностики РТПХ углубляют наши представления об особенностях изменений, происходящих у реципиентов в посттрансплантационном периоде.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Голубенко, Рамиля Ахметовна, 2006 год

1. Абдулкадыров K.M., Шабалин В.Н: Трансплантация костного мозга. JL: Медицина, 1976.

2. Арион В.Я., Москвина С.Н., Каргина И.Б., Бреусов Ю.Н.: Выделение, очистка и физико-химические свойства трансплантационных антигенов, Проблемы молекулярной и клеточной патологии и фармакологии. М., 1973, с. 27-29.

3. Баррет А.Ж.: Механизмы реакции трансплантат-против-лейкоза. Проблемы гематологии и переливания крови, 1997, 4, стр. 5-16.

4. Бурцев A.A.: Особенности трансплантации аллогенного костного мозга от доноров, отличающихся по антигенам системы ABO и резус, Афтореф. кандид. диссерт., М., 2005г.

5. Виноградова O.A.: Мониторинг химеризма и минимальной остаточной болезни у больных хроническим миелолейкозом после трансплантации стволовых гемопоэтических клеток. Автореф дисс.канд. мед наук. М. 2001, 24 с.

6. Виноградова O.A., Савченко В.Г., Неверова A.JL и др.: Изучение временной динамики смешанного химеризма с помощью гибридизации in situ у больных хроническим миелолейкозом после аллогенной трансплантации костного мозга. Тер. арх. 2001, 7. С. 26-34.

7. Демидова И.А.: Динамика восстановления кроветворения и гемопоэтический химеризм у больных гемобластозами после аллогенной трансплантации костного мозга. Автореф. дисс. канд мед наук, М, 1997. 21с.

8. Донсков С.И.: Специализированная служба иммунологического типирования доноров крови и костного мозга, Афтореф. Диссер.докт. мед. наук, Вестник службы крови России,2003, №1, С. 44-59.

9. Зарецкая Ю.М: Клиническая иммуногенетика, Медицина, 1983, 208с.

10. Зарецкая Ю.М., Донсков С.И.: Принципы обеспечения иммунологической безопасности гемокомпонентной терапии в 21-ом веке, Проблемы гематологии, 1998, №3 с.7-12.

11. Зотиков Е.А: Изосерология гомотрансплантации, М.: Медицина, 1969.

12. Иммуноферментный анализ, под редакцией Т.Т. Нго, Г. Ленхоффа, М: Мир, 1988,с.172.

13. Лимфоциты. Методы. Под редакцией Дж. Клауса. М. Мир, 1990. 400стр.

14. Менделеева Л.П.: Эффективность трансплантации аутологичного и аллогенного костного мозга у больных гемобластозами. Автореф. диссерт.докт. мед. наук, М. 2002. 36с.

15. Москвина С.Н., Арион В.Я.: Трансплантационные антигены (обзор литературы), Медицинский журнал, 1976, раздел 21, №3 , с. 3343.

16. Порешина Л.П.: Эритроцитарный химеризм при аллогенной близкородственной трансплантации костного мозга (особенности проявления, классификация), Афтореф. дисс. докт. биол. наук.- М., 2004г, 34с.

17. Порешина Л.П., Компанеец A.M., Кутьина P.M., Васильева М.Н., Аграненко В.А., Зотиков Е.А.: Аллоиммунизация HLA и рефрактерность к трансфузиям тромбоцитов у гематологических больных. ИммунологияД993, №4,с.26-29.

18. Практическая трансфузиодогия. Под ред. Козинца Г.И., Москва, 2005г, 544с.

19. Рагимов A.A.: Плазменнорастворимые антигены гистосовместимости человека (HLA). Дисс. канд. мед.наук., М. 1980г.

20. Румянцев А.Г., Масчан A.A.: Трансплантация гемопоэтических клеток у детей, Москва, 2003г, 910стр.

21. Савченко В.Г.: Современная стратегия терапии острых миелоидных лейкозов. Дисс. докт. мед. наук, М. 1993.

22. Савченко В.Г.: Трансплантация костного мозга у больных с острыми миелоидными лейкозами в первой ремиссии. Сб. V ежегодная онкологическая конференция, М.2001, с.91-95.

23. Савченко В.Г., Паровичникова E.H.: Лечение острых лейкозов. М. 2004. 224с.

24. Савченко В.Г., Паровичникова E.H., Любимова Л.С., Менделеева Л.П.: Трансплантация костного мозга при острых лейкозах: аргументы за и против, Тер. Архив 1993,7, с.7-18

25. Хамаганова Е.Г.: Главный комплекс гистосовместимости у больных гемобластозами: полиморфизм генов HLA II класса. Автореф. диссер. докт.

26. Ярилин А.А.: Основы иммунологии. М. Медицина .1999.607 с.

27. Adamashvili I, Fraser PA, Milford EL, Sittig К, Gebel H, Zibari G, Pressly T, McDonald JC: Soluble HLA-II expression in African-Americans, Inflamm Res. 2002 Jun;51(6):290-4.

28. Adamashvili I, Minagar A, Gonzalez-Toledo E, Featherston L, Kelley RE.: Soluble HLA measurement in saliva and cerebrospinal fluid in Caucasian patients with multiple sclerosis: ,a preliminary study, J Neuroinflammation. 2005 Jun 2; 2(1): 13.

29. Adamashvili I, Pressly T, Gebel H, Milford E, Wolf R, Mancini M, Sittg K, Ghali GE, Hall V, McDonald JC: Soluble HLA in saliva of patients with autoimmune rheumatic diseases, Rheumatol Int. 2002 Jun; 22(2): 716.

30. Alvarez-Cermeno JC, Casado C, Villar LM: Soluble class I antigens (sHLA) in CSF and serum of patients with HIV infection. Acta Neurol. Scand 82:14, 1990.

31. Alvarez-Cermeno JC, Echevarria JM, Villar LM, I.azaro I, Bootello A, Gonzales-Porque P: Soluble class I antigens in serum and CSF of patient with varicella-zoster virus meningitis. J Neurol Neurosurg 52:1 194, 1989.

32. Ariyama T., Inazawa J., Akiyama Y., et al.: Detection of residual clone after sex-mismatched bone marrow transplantation by fluorescent in situ hybridization.Rinsho Ketsueki. 1993; 34:912-918.

33. Aster R.H., Miskovish B.H., Rodey G.E.: Histocompatibiliti antigens of human plasma. Localization to the HLD-3 lipoprotein fraction. Transplantation, 1973, v. 16, №3, p.205-210.

34. Atkinson K., Horowitz MM., Gale R.P. et al.: Risk factors for chronic graft-versus-host disease after HLA-identical sibling bone marrow transplantation, Blood. 1990. Jim. 15; 75(12): 2459-64.

35. Aultman D, Adamashvili I, Yaturu K, Langford M, Gelder F, Gautreaux M, Ghali GE, McDonald J.: Soluble HLA in human body fluids, Hum Immunol. 1999 Mar; 60(3): 239-244.

36. Bahceci E, Read EJ, Leitman S, et al.: CD34+ cell dose predicts relapse and survival after T-cell-depleted HLA-identical haematopoietic stem cell transplantation (HSCT) for haematological malignancies. Br J Haematol, 2000; 108:408-414.

37. Bar BM, Van Dijk BA, Schattenberg A, de Man AJ, Kunst VA, de Witte T.: Erythrocyte repopulation after major ABO incompatible transplantation with lymphocyte-depleted bone marrow. Bone Marrow Transplant. 1995; 16:793-799.

38. Barret AG, Malkovska N.: The graft versus - leukemia effect. Urr. Opin.Oncol.1996, 8, 89-95.

39. Bensinger WI, Buckner CD, Thomas ED, Gift RA.: ABO incompatible marrow transplants. Transplantation. 1982; 33:427-429.

40. Berg K.: Compositional relatedness between histocompatibility antigens and human serum lipoproteins, Science, 1971, c.172, №3988, P.l 136-1138.

41. Billing R. G., Terasaki P.I: Rabbit antisera to HLA -A9 isolated from normal serum, Transplantation, 1974, v.17, №2, p.231-234.

42. Billing R.G., Terasaki P.I. Purification of HLA antigens from normal serum. Immunol., 1974, v.l 12, №3, p.l 124-1130.

43. Braun R.A., Wolf S.N., Fay J. et al. // Blood 1995 Vol.85 Jfe5 p. 1391-1395.

44. Brok HPM, Heidt PJ, van der Meide PH et.al: Interferon-a prevent graft-versus-host disease after allogeneic bone marrow transplantation in mice. J Immunol 1993, 151:6451.

45. Brzica S.M. Complications of transfusion. Int. Anesth. Clin. 1982. v. 20, №4, P.171-194.

46. Busch H.: Nucleolar and nucleolonemal proteins of cancer cell. J Tumor Marker Oncology 1997, 12:5-68.

47. Charlton R.M, Zmijewski C.M: Soluble HLA -Al antigen: localization in the P-Iipoprotein fraction of human serum. Science, 1970. 170: 636.

48. Cheek R.F., Harmon J.V., Stowell C.P. Red cell alloimmunization after a bone allograft. Transfusion. 1995; 35:507-509.

49. Clift RA, Buckner CD, Appelbaum FR et al. Allogeneic marrow transplantation in patients with acute myeloid leukemia in first remission. A randomized trial of two irradiation regimens. Blood, 1990, 76, 1867-1871

50. Cooke K.R., Hil G.R., Crawford J.M. et al. Tumor necrosis factor-production to lipopolysaccharide stimulation by donor cells predicts the severity of experimental acute graft- versus- host disease. J. Clin. Invest. 1998.102: 1882-1891.

51. Cotteret S., Belloc F., Boiron J. et al.: Fluorescent in sutu hybridization on flow-sorter cells as a tool for evaluating minimal residual disease or chimerism after allogenic bone marrow transplantation. Cytometry. 1998; 15:35(5)216-222.

52. Dausseet J.: Leuco-agglutinins. IV. Leuco-agglutinins and blood transfusion. Vox Sang. 1954. v4. №2. P190-198.

53. Davies HffS, Pollard SG, Calnc RY: Soluble HLA antigens in thecirculation of liver graft recipients. Transplantation 1989, 47:524.

54. De Vito-Haynes LD, Jankowska-Gan E, Sollinger HW, Knechtle SJ, Burlingham WJ: Monitoring of kidney and simultaneous pancreas-kidney transplantation rejection by release of donor-specific, soluble HLA class I. Hum Immunol, 1994, 40:191.

55. De Lage R, Siiffer RJ, Dear K, Ritz J. Clinical sagnificance of bcr-abl gene rearrangement detected by polymerase chain reaction after allogeneic bone marrow transplantation in chronic myelogenious leukemia. Blood 1991;78:2759-2767.

56. Den Haan J, Sherman NE, Blokland E et.al: Identification of a graft-versus-host disease associated human minor histocompatibility antigen. Science 1995,268:1476-1480.

57. Dickinson AM, Sviland L, Dunn J et.al: Demonstration of direct involvement of cytokines in graft-versus-host reactions using an in vitro skin explant model. Bone Marrow Transplant 1991, 7:209.

58. Durman D.M., Anders K.R., Fisher L., et al.: Analysis of the origin of marrow cells in bone marrow transplantat recipients using a Y-chromosome-specific in sutu hybridization assay. Blood. 198, p. 22202226.

59. Easaw SJ, Lake DE, Beer M et.al: Graft-versus-host disease. Possible higher risk for African American patients. Cancer 1996, 78:14921497.

60. Ferrara A., Guillen PF, van Dijken PJ et.al: Evidence that large granular lymphocytes of donor origin mediate acute graft-versus-host disease. Transplantation 1989, 47:50.

61. Ferreira A, Villar LM, Alvarez-Cermeno JC: Quantification of soluble serum HLA class I antigens in healthy volunteers and AIDS patients. Clin Chim Acta, 1988, 174:207.

62. Ferrone S., Mital K.K., Pellegrino M.A., Allison J. P., Reisfeeld R.A.: Immunogenecity of HLA antigens purified from serum. Transplantation, 1977, v. 23, №1. p.7-15.

63. Filaci G, Contini P, Brenci S, Gazzola P, Lanza L, Scudeletti M, Iniveri F, Mancardi LG, Puppo F: Soluble HLA Class I and Class II molecule levels in serum and cerebrospinal fluid of multiple sclerosis patients. Hum Immunol, 1997. 54:54.

64. Frans H. J. Claas and Jon J. van Rood: Soluble HLA Antigens and Their Peptides as Immuneregulators and Monitoring Devices, Hum Immunol, 1999 May; 60(5): 398-400.

65. Frei E, Holden SA, Gonin R, et al.: Antitumor alkylating agents: In vitro cross-resistance and collateral sensitivity studies. Cancer Chemother Pharmacol 1993; 33: 113-120.

66. Gale R.P., Horowitz M.M., Rees J.K.H. et al: Leukemia, 1996, Vol. 10, P. 13-19.

67. Gilliam A, Whitaker-Menezes D, Korngold R et.al: Apoptosis is the predominant form of epithelial target cell injury in acute experimental graft-versus-host disease. J Invest Dermatol 1996, 107:377-383.

68. Gmur JP, Burger J, Schafmer A, et al. Pure red cell aplasia of long duration complicating major ABO-incompatible bone marrow transplantation. Blood. 1990; 75; 290-295.

69. Gorin NC, Aegerter P., Auvert B. et al.: Autologous bone marrow transplantation for acute myelocytic leukemia in first remission: a European survey of the role of marrow purging. Blood, 1990, 75, 1606 1614.

70. Greinix H.T., Volc-Platzer B., Knobler R.: Criteria for assessing chronic GVHD, Bone Marrow Transplant, 2000, Mar.; 25 (5): 575.

71. Grompe M. & al-Dhalimy M.: Nucleotide sequence of a c DNA encoding murine fumarylacetoacetate hydrolase. Biochem. Med. Metabl. Biol. 1992; 48:26-31.

72. Harrold J.L., Holler E., Hromadnikova I., Sedlacek P., Rocha V., Middleton P.G., Dickinson AM.: Non-HLA polymorphism risk-factor analysis in unrelated haematopoietic stem cell transplants. EBMT. 2006; P 440: 82

73. Hasek M., Chutna G., Holen V., Sladeceh M.- Induction of transplantation tolerance using serum as antigen sourse- Nature, 1976, v. 262, N 5566, p 295-296.

74. Haynes LD, Waldman WJ, Bushkin Y, Love RB, Burlingham WJ: CMV-infected allogeneic endothelial cells initiate responder and bystander donor HLA class I release via the metalloproteinase cleavage pathway, Hum Immunol. 2005 Mar; 66(3): 211-221.

75. Hematopoietic Cell Transplantation. Second Edition. Edited by E. Thomas D, Blume KG, Forman S J. 1999, 560-583.

76. Hess AD, Fischer AC: Immune mechanisms in cyclosporine- induced syngeneic graft-versus-host disease. Transplantation 1989, 48:895-900.

77. Hirata A.A., Terasaki P.J.: Masking: of human transplantation antigens by diverse substances. J. Immunol., 1972, v.108, №6, p. 15421550.

78. Hollo- Allen R.T.G., Scharli A.F., Maggs P.R., Busch G.G., Simonian S.C. and Wilson R.E.: Active enhancement of canine renal allografts using solubilized lymphocyte antigens, Transplantation, 1970, v. 10, №6, p. 472-483.

79. Horowitz M.M.,Gale R.P., Sondel P.M. et al.: Graft-versus-leukemia reaction after bone marrow transplantation. Blood, 1990, 75. P. 555-562.

80. Immunogenecity of HLA antigens purified from serum. Ferrone S., Mitai K.K., Pellegrino M.A., Allison J. P., Reisfeeld R.A. Transplantation, 1977, v. 23, №1. p. 7-15.

81. Ivasaki M., Kobayashi K., Susuki H. et al.: The genotyping of the ABO-blood group by PCR-RELP method. Jpn. J. Transfiis. Med. 1993; 39:575-580.

82. Jqbal N, Salzman D, Lazendy AJ et.al: Diagnosis of Gastrointestinal Graft-Versus-Host Disease. Clinical reviews. The American J of Gastroenterology 2000, 95; 11:3034-3038.

83. Kernan H, Collins N, Luliano L et.al: Clonable T lymphocytes in T cell depleted bone marrow transplants correlate with development of graft-versus -host disease. Blood, 1986, 68:770-773.

84. Kernan NA, Bartsch G, Ash RC et.al: Analysis of 462 transplantations from unrelated donors facilitated by the National Marrow Donor Program. N Engl J Med 1993, 328:593- 602.

85. Klumpp TR: Immunohematologic complications of bone marrow transplantation.Bone Marrow Transplant. 1991; 8:159-170.

86. Koelman CA, Ensink W, Mulder A, Tanke J, Doxiadis II, Claas FH: Anti-HLA antibodies interfere in the detection of soluble HLA class I molecules, Hum Immunol. 1999 May; 60(5): 414-23.

87. Koelman CA, Vaessen LM, Balk AH, Weimar W, Doxiadis II, Claas FH: Donor-derived soluble HLA plasma levels can not be used to monitor graft rejection in heart transplant recipients, Transpl Immunol. 2000 Mar; 8(1): 57-64.

88. Krenger W, Falzarano G, Delmonte J et.al: Interferon-g suppresses T-cell proliferation to mitogen via the nitric oxide pathway during experimental acute graft-versus-host disease. Blood 1996, 88:1113.

89. Krenger W., Ferrara J.L. Dysregulation of cytokines during graft-versus-host disease, J. Hematother. 1996. Feb; 5(1): 3-14.

90. Krensky AM, Weiss A, Crabtree G et.al: T-lymphocyte- antigen interactions in transplant rejection. N Engl J Med 1990, 322:510-517.

91. Krishnamurti L, Blazar BR, Wagner JE.: Bone marrow transplantation without myeloablation for sickle cell disease letter. N Engl J Med. 2001; 344:68

92. Kubens BS, Papier M, Grosse-Wilde H: Segregation study of the soluble 39-kD HLA class I heavy chain. Hum Immunol, 1994, 40:247.

93. Lamont AG, Adorini L. IL-12: a key cytokine in immune regulation. Immunol. Today, 1996, 17, 214-217.

94. Langley RG, Wealsh N, Nevill T et.al: Apoptosis is the mode of keratinocyte death in cutaneous graft-versus-host disease. J Am Acad Dtrmatol 1996,35:187-190.

95. Laster SM, Wood JG,Gooding JR et.al: Tumor necrosis factor can inuce both apoptotic andnecrotic forms of cell lysis. J Immunol 1988,141, 2629-2634.

96. Liem LM, Koelman CA, Doxiadis I, van Houwelingen JC, Goulmy E, Claas FHJ: Elevated serum HLA class I levels coincide with acute and chronic graft-versus-host disease. Bone Marrow Transplant 1997, 20:227.

97. Lindner H, Holler E, Ertl B et.al: Peripheral blood mononuclear cells induce programmed cell death in human endothelial cells and may prevent repair: Role of cytokines. Blood 1997, 89:1931-1938.

98. Little G., Myburgh G.A., Austoker G.L. and Smit G.A., Detergent solubilisation of baboon histocompatibility antigens and their use in prolonging liver allograft survival. Transplantation, 1975, v. 19, №1, p. 5359.

99. Marin PJ. How much benefic can be expected from matching for minor antigens in allogeneic marrow transplantation? Bone Marrow Transplant 1997, 20:97-100.

100. Medawar P.B. The use antigenic tissue extracts to weaken the immunological reaction against skin homograft in mice. Transplantation, 1983, v. 1, №1, p. 21-37.

101. Morishima Y, Kodera Y, Hirabayashi N et.al: Low incidence of acute GVHD in patients transplanted with marrow from HLA-A, B, and DR-compatible unrelated donors among Japanese. Bone Marrow Transplant. 1995,15:235-239.

102. Mosmann TR, Cherwinski H, Bond MW, et al. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activités and secreted proteins. J Immunol 1986, 136:2348-2357.

103. Mowat A: Antibodies to IFN gamma prevent immunological mediated intestinal damage in murine graft-versus-host reaction. Immunology 1989, 68:18.

104. Murthy W.J., Kumar V., Cjhe J.C., Bennet M. An absence of T-cells in murine bone marrow allografts leads to increased susceptibility to rejection by natural killer cells and T-cells. J. Immunol. 1990; 144: 33053309.

105. Nagler A, Aker M, Or R. et al. Low intensity conditioning is sufficient to ensure engraftment in matched unrelated bone marrow transplantation. Exp. Hematol. 2001, 29, 362-370.

106. Nash R.A., Sullivan P.M., Storb. et al. Blood. 1992. Vol. 80 p.l838-1845.

107. Naume B, Gately M, Espevic T.: A cjmparative study of IL-12, IL-2' h IL-7 induced effectors on immunomagnetically purified CD56 NK cells. J. Immunol., 1992, 148, 2429 2436.

108. Nishizuka Y.: Studies and perspectives of protein kinase C. Science 1986, 233:305-312.

109. Nossal GJ.V: Cellular mechanisms of immunological tolerance. Annuals Review of Immunology. 1983; 133.

110. Ochs L.A., Blazar B.R., Roy J., Rest E.B., Weisdorf DJ.: Cytokine expres sion in human cutaneous chronic graft-versus-host disease // Bone Marrow Transplant. 1996. Jun.; 17(6): 1085-92.

111. Pederson T.: The plurifiinctional nucleolus. Nucleic Acids Res 1998, 26:3871-3876.

112. Peters W, Henner W, Grochow L, et al.: Clinical and pharmacologic effects of high dose single agent busulfan with autologous bone marrow support in the treatment solid tumors. Cancer Res 1987; 47: 6402-6406.

113. Petz L.D, Branch RD, Stock AD, et al.: Endogenous stem cell repopulation after high-dose pretransplant radiochemotherapy. Transplantation Proceeding. 1985; 27:432-433.

114. Petz L.D., Yam P., Wallace R.B. et al.: Mixed hematopoietic chimerism: following bone marrow transplantation for hematological malignances. Blood.1987; 70: 1331-1337.

115. Petz L.D.: Hemolysis associated with transplantation. Transfusion. 1998; 38:224-228.

116. Petz L.D.: The use of the therm chimera in bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplantation. 1989; 4:139-140 (reply).

117. Piazza A, Torlone N, Valeri M, Poggi E, Monaco PI, Provenzani L, Tisone G, Adorno D, Casciani CU: Anti donor-HLA antibodies and soluble HLA antigens after kidney transplantation. Transplant Proc, 1993, 25:3279.

118. Pierce G E.: Allogeneic versus semiallogeneic Fl bone marrow transplantation into sublethally irradiated adult hosts. Transplantation 1990, 49:138-146.

119. Pollard SG, Davies HffS, Calne RY.: Peroperative appearance of serum class I antigen during liver transplantation. Transplantation, 1990, 49:659.

120. Potthoff K., Kreisel W., Harder J., Thimme R., Bertz H., Sellmitt-Graff A., Finke J.: Objective diagnosis and grading of intestinal acute graft-versus-host disease following allogeneic stem cell transplantation by colonoscopy, EBMT, 2006, P 460, 90.

121. Przepiorka D, Thomas ED, Durnam DM et al.: Use of a probe to repeat sequence of the Y chromosome for detection of host cells in peripheral blood of bone marrow recipients. American Journal of Clinical Medicine 1991;95:201-206.

122. Puente M., Bermudez A., Yanez L., Insunza A., Gonzalez-Mesones B., Uresandi A., Baro J., Hermana S., Gomez J., Lopez M., Iriondo A.: The usefulness of intestinal biopsies in allogeneic haemoporetic stem cell transplantation, EBMT, 2006, P 459, 90.

123. Puppo F, Brenci S, Lanza L, Bosco O, Imro MA, Scudeletti M, Indiveri F, Ferrone S: Increased level of serum HLA class I antigens in HIVinfection. Correlation with disease progression. Hum Immunol, 1994, 40:259.

124. Puppo F, Pellicci R, Brenci S, Nocera A, Morelli N, Dardano G, Bertocchi M, Antonucci A, Ghio M, Scudeletti M, et al: HLA class-I-soluble antigen serum levels in liver transplantation. A predicror marker of acute rejection. Hum Immunol, 1994, 40:166.

125. Puppo F, Scudeletri M, Indiveri F, Ferronc S: Serum HLA class I antigens: markers and modulators of an immune response? Immunol Today 1995, 16 (3): 124.

126. Ratanatharathom V., Ayash L., Lazarus H.M., Fu J., Uberti J.P.: Chronic graft-versus-host disease: clinical manifestation and therapy, Bone Marrow Transplant. 2001. Jul.; 28(2): 121-9.

127. Reed EF, Hong B, Ho E, Harris PE, Weinberger J, Suciu Foca N: Monitoring of soluble HLA alloantigens and anti-HLA antibodies identifies heart allograft recipients at risk of transplant-associated coronary artery disease. Transplantation, 1996, 61:566.

128. Reisfeld R.A., Pellegrino M.A., Ferrone S. The immunologic and molecular profiles of HLA antigens isolated from urine. J. Immunol., 1977, v.118, №1, p. 264-269.

129. Rittner C. H., Tauberecht I. Zum nachweis von HLA-inhibitor-substanzen in menschlichen serum. I. Bestehteine assziation swischen HLA und serum-lipoproteinen? Z. Immun-Forsch., v. 146, №2, P. 123-135.

130. Rizzoli V, Mangoni L, Carlo-Stella C. Biological aspects and clinical results of autologous bone marrow transplantation for acute myeloid leukemia. Int J Clin Lab Res 1992; 22(4): 185-9.

131. Rosenfeld C., Chadduck RK, Przepiorka D. et al.: Autologous bone marrow transplantation with 4- hydroperoxycyclophosphamide purget marrow for acute nonlymphocytic leukemia in late remission or early relapse/. Blood, 1989, 74, 1159-1164.

132. Sanly H., Akay N., Soydan E., Kocyigit P., Arat M., Lihan O.: Clinical aspects of sclerodermoid type graft-versus-host disease after allogeneic haematopoietic cell transplantation, EBMT, 2006, P477, 96.

133. Santos GW, Tutschka PJ, Brookmeyer R. et al.: Marrow transplantation for acute non- lymphocytic leukemia after treatment with busulfan and cyclophosphamide .N. Engl. J. Med. 1983, 309, 1347-1353.

134. Saririan K, Wali A, Almeida RP, Russo C: Increased serum HLA class I molecule levels in elderly human responders to influenza vaccination. Tissue Antigens, 1993, 42:9.

135. Sediva A, Staiy J, Hromadnikova I, Skalicka A, Ghio M.: Determination of soluble HLA class I molecules in children in bone marrow transplantation, Cas Lek Cesk. 2000 Oct 11; 139(20): 630-4.

136. Shimura T, Hagihara M, Yamamoto K, Takebe K, Munkhbat B, Ogoshi K, Mitomi T, Nagamachi Y, Tsuji K: Quanification of serum-soluble HLA class I antigens in patients with gastric cancer. Hum Imfnunol, 1994, 40:183.

137. Shimura T, Tsutsumi S, Hosouchi Y, Kojima T, Kon Y, Yonezu M, Kuwano H.: Clinical significance of soluble form of HLA class I molecule in Japanese patients with pancreatic cancer, Hum Immunol. 2001 Jun; 62(6): 615-9.

138. Singal D.P., Berry R.: Soluble HLA antigens. Localization in the human seminal plasma fraction. Transplantation, 1972, v. 13, №4, p.441-442.

139. Sparkes RS: Cytogenetic analysis in human bone marrow transplantation. Cancer Genetics and Cytogenetics. 1981,4:345-352.

140. Spellberg B, Schiller GJ.: Autologous bone marrow trasplantation in acute leukemia. Hematol Oncol Clin North Am 1999 Oct; 13(5): 919-38.

141. Storb R, Buckner CD, Dillingham LA, et al.: Cyclophosphamide regimens in rhesus monkey with or without marrow infusion. Cancer Res 1970; 30: 2195-2203.

142. Stuart RK. Autologous bone marrow transplantation for leukemia. Semin Oncol 1993 Oct; 20 (5 Suppl 6): 40-54.

143. Sueli D. Borelli, Euripedes Ferreira, Aparecido M. Oliveira, Shalini Krishnaswamy, Debra D. Hiraki, and F. Carl Grumet: Specific sHLA in Healthy Donors and Donor-Specific sHLA in Renal Transplant Patients, Hum Immunol 60:430, 1999.

144. Terada N. Et al.: Bone marrow cells adopt the phenotype of other cells by spontaneous cell fusion. Nature. 2002; 416:542-545.

145. Thomas ED, Lochte HL, Lu WC.et al.: Intravenous infusion of bone marrow in patients reseiving radiation and chemotherapy. N. Engl. J. Med. 1957, 257, 491-496.

146. Tilg H, Westhoff U, Vogel W, Aulitzky WE, Herold M, Margreker R, Huber C, Grosse-Wild H: Soluble HLA class I serum concentrations increase with transplantrelated complications after liver transplantation. J Hepatol 14:417, 1992.

147. Truitt RL, Atasoylu A.A.: Impact of pretransplant conditioning and donor T-cells on chimerism, graft-versus-host disease, graft-versus-leukemia reactivity, and tolerance after bone marrow transplantation. Blood. 1991; 77(11): 2515-2523.

148. Tsuji K, Kussama M, Nakatsuji T, Kato S.: Biological significance of Ss (serum soluble) HLA-class I antigens in bone marrow transplantation.

149. Tokai J Exp Clin Med, 1985, 10:169.

150. Tutschka PJ, Copelan E.A, Klein J.: Bone marrow transplantation for leulemia following a new busulfan cyclophosphamide regimen. Blood, 1987, 70, 1382- 1388.

151. Vales-Gomez M, Reyburn HT, Erskine RA, Strominger J: Differential binding to HLA-C of p50-activating and p58-inhibitory natural killer cell receptors. Proc Natl Acad Sci USA, 1998, 95:14326.

152. Van Rood J.J, V. Leeuwen A., V. van Santen M.C.T: Anti-HLA-A2 inhibitor in normal human serum. -Nature, 1970, v.226, №5243, p. 366367.

153. Van Rood J.J., van Leeuwen A.: Soluble HLA Antigens: How It All Started, Hum Immunol 1999, 60:412.

154. Via CS, Nguyen P, Shustov A et.al: A major role for the Fas pathway in acute graft-versus-host disease. J Immunol 1996, 157:5387-5393.

155. Vogelsang G.B., Lee L., Bensen-Kennedy D.M. Pathogenesis and treatment of graft- versus- host disease after bone marrow transplant // Ann. Rev. Med. 2002. Sep. 25.

156. Vossen J.M., Heidt P.J., van den Berg H. et al. Europ. J. clin. Microbiol. Infect. Dis. 1990. Vol. 9. P 14-23.

157. Wachtler F, Stahl A. The nucleolus: A structural and functional expression. Micron 1993, 24: 473-505.

158. Weigle W.O.: Immunological unresponsiveness. Advances of Immunology. 1973, 16:61-67.

159. Wess A.: T-lymphocyte activation. In: Paul W. ed. Fundamental immunology. New York:Raven, 1989,359-384.

160. Westhoff U, Doxiadis I, Bcelen DW, Schaefer U, GrosseWilde H: Soluble HLA class I concentrations and GVHD after allogeneic marrow transplantation. Transplantation, 1989, 48:890.

161. Wolf RE, Adamashvili IM, Gelder FB, Hall VC, Fraser PA, ' McDonald JC : Soluble HLA-I in rheumatic diseases, Hum Immunol. 1998 Oct; 59(10): 644-9.

162. Wrobel D.M., McDonald I., Race C, et al.: True genotype of chimeric twins revealed by blood-group gene products in plasma. Vox Sang. 1974. 27. 395-402.

163. Yam PY, Petz LD, Knowlton RG, et al.: Use of DNA restriction fragment length polymorphisms to document engraftment and mixed hematopoietic chimerism following bone marrow transplantation. Transplantation 1987, 43:399-407.

164. Yeager AM. Autologous bone marrow transplantation for acute myeloid leukemia. In: Forman S J, Blume KG, Thomas ED, eds: Bone marrow transplantation. Oxford: Blackwell Scientific Publications, 1994, 709-730.

165. Ymamoto F.,McNeill P.D. Hakomori S.: Genomic organization of human histoblood group ABO gens. Glicobiology. 1995; 5:51-58.

166. Yu JC, Webster M, Fox IJ.: Clonal deletion: a mechanism of tolerance in mixed bone marrow chimeras. Journal of Surgical Research 1990,48:517-522. .

167. Zavazava N, Bottcher II, Mueller-Ruchholtz W: Soluble MHC class I antigens (sHLA) and anti-HLA antibodies in heart and kidney allograftrecipients. Tissue Antigens, 1993, 42:20.

168. Zavazava N, Hausmann R, Kraatz E, Muller-Ruchholtz W: Clinical relevance of soluble HLA and interaction of papain derived class I molecules with alloreactive CTL, Transpl Int. 1992;5 Suppl l:S606-8.

169. Zavazava N, Kraatz E, Gassei AM, Muller-Ruchholtz W: Plasma MHC class I expression in cardiac graft patients. Donor-specific soluble antigen in a presensitised graft patient. Transplant Proc, 1991, 23:2258.

170. Zavazava N, Leirncnsroll G, Muller-Ruchholtz W: Measurement of soluble MHC class I molecules in renal graft patients: a noninvasive allograft monitor. J Clin Lab Anal, 1990, 4:426.

171. Zavazava N: Soluble HLA class I molecules: biological significance and clinical implications. Mol Med Today, 1998, 4(3): 116.

172. Zecca M, Prette A., Rondelli R. et al.: Chronic graft-versus-host disease in children; incidence, risk factors and impact on outcome // Blood. 2002.1000,4:1192-2000.