Диагностическое значение изменения состава цереброспинальной жидкости по данным МРС высокого разрешения на ядрах #21#1Н при различных неврологических заболеваниях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.13, кандидат медицинских наук Соколов, Константин Владимирович

• Соколов, Константин Владимирович
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Соколов, Константин Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы.

Цель работы.

Задачи исследования.

Научная новизна.

Практическое значение работы.

Основные положения, выносимые на защиту.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Цереброспинальная жидкость. Методы качественного и количественного анализа цереброспинал ьной жидкости.

1.2 Магнитно-резонансная спектроскопия.

1.3 Классификации и клиническая эпидемиология БДН.

1.4 Этиопатогенетические гипотезы о происхождении БДН.

1.4.1 Генетические дефекты белковых систем.

1.4.2 Дефекты антиоксидантной системы.г.

1.4.3 Оксидантный стресс и глутаматная эксайтотоксичность.

1.4.4 Нарушения транспортных систем мотонейрона.

1.4.5 Дисфункции органелл.

1.4.6 Вирусная и прионовая теории.

1.5 Исследования цереброспинальной жидкости при болезни двигательного нейрона.

1.6 Исследование концентрации С-реактивного белка при ишемическом инсульте.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Общая характеристика больных.

2.2 Взятие материала. Люмбальная пункция.'.

2.3 Определение концентрации С-реактивного белка.

2.4 Проведение MP-спектроскопии.

2.4.1 Реактивы.:.

2.4.2 Процедуры.

2.4.3 Приборы и методы измерений.

2.4.4 Обработка данных.

2.5 Статистический анализ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Протокол исследования ЦСЖ. Описание спектров.

3.2 Расшифровка спектров с подсчетом концентраций метаболитов.

3.3 Влияние физических и химических факторов на данные, получаемые с образца ЦСЖ.

3.4 Сравнение полученных концентраций веществ в ЦСЖ при

БДН и в группе сравнения.

3.5 Анализ метаболических профилей ЦСЖ при БДН.

3.6 Сравнительный анализ метаболических профилей ЦСЖ группы сравнения и группы ишемического инсульта.

3.7 Сравнительный анализ метаболических профилей ЦСЖ при БДН и ишемическом инсульте.

3.8 Анализ концентрации С-реактивного белка плазмы крови у пациентов в изучаемых группах.

ГЛАВА 4. МЕТОДИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ОБРАБОТКИ ДАННЫХ

МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ВЫСОКОГО

РАЗРЕШЕНИЯ НА ЯДРАХ 1Я ЦСЖ.

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Диагностическое значение изменения состава цереброспинальной жидкости по данным МРС высокого разрешения на ядрах #21#1Н при различных неврологических заболеваниях»

Большой потенциал в медицинских приложениях, как фундаментальных, так и клинических, имеют методы, основанные на эффекте ядерного магнитного резонанса (ЯМР). Быстрое совершенствование спектрометров ЯМР высокого разрешения в последние годы, приведшее к многократному росту их чувствительности и разрешающей способности [11], открыло возможности количественного анализа с помощью ЯМР большинства биологических жидкостей (моча, плазма крови, слюна, ЦСЖ) in vitro [148]. Метод ЯМР позволяет обнаруживать и количественно определять тысячи компонентов, в том числе важнейшие метаболиты и биомаркеры, выявлять на ранних стадиях развития многие патологические состояния, отслеживать реакции организма на воздействия различных патогенных факторов, токсических веществ и лекарственных препаратов в динамике [116, 138].

Значительным преимуществом использования ЯМР-спектроскопии является неспецифичность этого метода к определенным веществам, в отличие, например, от методов хроматографии или иммунологических методик. На получаемом спектре отражаются химические сдвиги от всех соединений, которые содержат ядра водорода (при спектроскопии 'Н), то есть без использования специфических реактивов и длительных по времени проведения методик, возможно получить значительный объем информации о качественном и количественном составе исследуемого образца [40, 44].

Особенности метода являются важными и полезными при исследовании ЦСЖ, получение которой является весьма инвазивной процедурой и ограничено по объему пробы.

Очень немногочисленные литературные данные о составе ЦСЖ в норме неоднозначны и противоречивы [70, 76, 117], что обусловлено малым количеством наблюдений, использованием различных по своим техническим характеристикам спектрометров [120, 124], а также различных методик приготовления образца для проведения МРС [177, 180].

В связи с вышеизложенными причинами необходимо провести изучение влияния ряда факторов, таких как влияние рН, сроки хранения, условия хранения на получаемые результаты и составление стандартизованного протокола исследования.

В настоящее время отсутствуют работы с подробным качественным и количественным анализом цереброспинальной жидкости, полученном на высокопольных ЯМР-спектрометрах, позволяющих регистрировать широкий спектр низкомолекулярных метаболитов.

Также в литературе практически отсутствуют данные о метаболическом профиле ЦСЖ здоровых людей по данным МРС высокого разрешения на ядрах водорода, а также об изменениях данного профиля при БДН и ишемическом инсульте.

Исходя из вышеизложенного, представляется важным провести исследование ЦСЖ методом МРС высокого разрешения на ядрах водорода при спорадической БДН в сопоставлении с метаболическим профилем ЦСЖ лиц без неврологических, хронических соматических, инфекционно-воспалительных, эндокринных, наследственных и прочих заболеваний потенциально приводящих к изменению состава ЦСЖ.

Представляет интерес также сравнительное исследование состава ЦСЖ при БДН (нейродегенеративном заболевании, поражающем преимущественно серое вещество головного и спинного мозга с интактным гематоэнцефалическим барьером) и ишемическом инсульте, при котором происходит как нарушение целостности гематоэнцефалического барьера, так и вовлечение в процесс белого и серого вещества головного мозга.

Болезнь двигательного нейрона (БДН) — заболевание, сопровождающееся гибелью центральных и периферических мотонейронов, прогрессирующим течением и летальным исходом. Согласно современным представлениям, развитие БАС обусловлено взаимодействием наследственных и экзогенных провоцирующих факторов. Наличие множественных патологических изменений в нейронах позволяет предположить многовариантность этиологии данного заболевания [54, 67, 165]. Болезнь двигательного нейрона существует в спорадической (90-95% случаев) и семейной формах (5-10%) [131]. Селективная гибель мотонейронов ствола мозга, спинного мозга и гигантских пирамидных клеток двигательной коры больших полушарий с возможной гибелью волокон кортикоспинального тракта [111] начинает проявляться клинически только после гибели 80% клеток.

Этиология и патогенез БДН остаются столь же загадочными, как и 100 лет назад, когда ее описал J. М. Charcot, и знаний, необходимых для разработки эффективных методов лечения и диагностики данного заболевания на ранних этапах, до настоящего времени накоплено недостаточно [67]. Распространенность БДН в мире составляет в среднем 2— 5 на 100000 человек в год [112], однако, за последние два десятилетия многими авторами отмечена тенденция к росту заболеваемости во всех возрастных группах [56, 114, 130]. Последние эпидемиологические исследования БДН в СССР, установившие средний показатель заболеваемости в 0,5—2,5/100 тыс. чел. в год, проводились О.А.Хондкарианом и Г.А.Максудовым в 1970 году [34]. Несмотря на относительно невысокий показатель заболеваемости, следует отметить, что БДН поражает лиц преимущественно зрелого и трудоспособного возраста, как правило, с высоким интеллектуальным и профессиональным потенциалом, неизбежно приводит к тяжелой инвалидизации и смерти больных, и это, с учетом отсутствия эффективных методов лечения, обосновывает актуальность изучения данного заболевания.

За последнее десятилетие в мире в области фундаментальных нейронаук достигнуты значительные успехи в понимании общих закономерностей развития неврологических заболеваний и, в частности, БДН. Долгое время, в том числе в нашей стране, доминировала инфекционная гипотеза происхождения БДН. Однако, многие предпринятые в дальнейшем попытки подтвердить данную этиологическую гипотезу, как основополагающую, оказались безуспешными [106, 154]. Известно, что в 90% случаев БДН носит спорадический, а в 10% — семейный или наследственный характер как с аутосомно-доминантным типом наследования и вариабельной пенетрантностью, так и с аутосомно-рецессивным типом наследования [39, 112].

Около 20% семейной и 5—7% спорадической БДН связано с мутациями в гене медь-цинк зависимой супероксиддисмутазы — фермента, утилизирующего свободные радикалы. Помимо этого, при БДН было выявлено определенное количество мутаций и полиморфизмов в других генах, относящихся к системам цитоскелета мотонейронов, регуляции нейротрансмиссии, репарации ДНК, нейротрофического обеспечения, регуляции выживания и программированной клеточной гибели [39]. Кроме того, при БДН были обнаружены и субклинические признаки патологии экстрамоторных систем центральной нервной системы (ЦНС) и экстраневральные аномалии, например, кожи [32, 140]. Все это позволило сформулировать более комплексное представление о БДН, как о мультифакториальном, вероятно, первично нейродегенеративном заболевании, в основе которого лежат генетическая предрасположенность и взаимодействие организма с факторами внешней среды, поскольку общность клинических проявлений наследственной и спорадической БДН предполагает общность их этиопатогенетических механизмов [181].

Существующие на сегодняшний день методы медикаментозного лечения не приносят значимых результатов и носят паллиативный характер. Это связано с несколькими причинами — недостаточно изучен патогенез заболевания, и на момент появления клинических симптомов заболевания сохранны лишь 20% мотонейронов.

Множество проведенных молекулярно-генетических, биохимических и других исследований выявили большое многообразие изменений в клетках нервной системы — структурная дезорганизация нейрофиламентов, нарушение работы транспортных мембранных систем мотонейронов, токсическое влияние внутриклеточных белковых агрегатов, изменение метаболизма свободных радикалов, развитие оксидантного стресса, нарушения работы системы энергетического обеспечения клетки и другие.

Столь широкое разнообразие патологических проявлений БДН, преимущественно обнаруженных в условиях эксперимента, не может не находить отражения в метаболических профилях биологических жидкостей. Учитывая, что заболевание поражает клетки нервной системы, наиболее целесообразно исследование цереброспинальной жидкости. Изучение состава ликвора у больных с БДН представляет большой интерес в изучении патогенеза, диагностики и разработки методов прогнозирования характера течения заболевания. Существует достаточное количество литературных данных об изменениях качественного состава (высокомолекулярных соединений) цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) при БДН [69, 91, 92, 104, 167]. Однако, применение описанных в литературе методик для диагностики и прогнозирования течения заболевания для скрининговых целей не представляется возможным по причине высокой стоимости исследования, высоким расходом биологического материала, малым числом идентифицируемых метаболитов, что не позволяет всесторонне оценить метаболический профиль ЦСЖ.

Разработка высокоэффективных инструментальных методов диагностики является актуальной проблемой современной медицины. ЯМР-спектроскопический анализ биологических жидкостей представляется перспективным методом получения важнейшей диагностической информации о низкомолекулярной составляющей метаболического профиля, что недоступно для исследований иными существующими методами.

Работа была выполнена на базе кафедры фундаментальной и клинической неврологии и нейрохирургии ГОУ ВПО РГМУ Росздрава (заведующая кафедрой — член-корр. РАМН, профессор В.И. Скворцова),

НИИ Инсульта ГОУ ВПО РГМУ Росздрава (директор — член-корр. РАМН, профессор В.И. Скворцова), городской клинической больницы №31, учебно-научного межфакультетского и междисциплинарного центра магнитной томографии и спектроскопии (ЦМТС) МГУ (директор — профессор Ю.А. Пирогов )

Цель работы

Изучить значение изменений химического состава цереброспинальной жидкости по данным магнитно-резонансной спектроскопии высокого разрешения на ядрах водорода у больных с различными неврологическими заболеваниями.

Для достижения указанной цели решались следующие задачи:

1. Разработать протокол исследования ЦСЖ методом спектроскопии ЯМР на ядрах !Н. Определить влияние ряда физических факторов на получаемые спектры.

2. Оценить метаболический профиль цереброспинальной жидкости у пациентов, не страдающих неврологическими заболеваниями и иными патологическими состояниями, потенциально ведущими к изменению качественного состава ЦСЖ.

3. Провести качественную и количественную оценку полученных метаболических профилей в группах больных с БДН, ишемическим инсультом и контрольной группе.

4. Сопоставить полученные результаты по характеристикам метаболического профиля в группе пациентов с БДН с основными клиническими характеристиками заболевания (возрастом, формой, дебютом и вариантом, скоростью прогрессирования).

5. Провести оценку диагностических возможностей магнитно-резонансной спектроскопии высокого разрешения на ядрах *Н при ишемическом инсульте и болезни двигательного нейрона.

Научная новизна

Разработан протокол исследования ЦСЖ методом спектроскопии ЯМР на ядрах 1Н. Показано, что увеличение срока заморозки ЦСЖ до 11 мес, а также незначительное колебание рН не оказывают значимого влияния на получаемые спектры. Выявлены различия частоты идентификации метаболитов при использовании различных импульсных методик подавления воды. Исследован метаболический профиль ЦСЖ практически здоровых лиц, идентифицировано 29 низкомолекулярных метаболитов. Установлено отсутствие статистически значимых различий качественного состава компонентов метаболического профиля цереброспинальной жидкости в норме и при болезни двигательного нейрона.

Впервые проведено исследование ЦСЖ пациентов с ишемическим инсультом in vitro методом МРС. Выявлено отсутствие корреляционных связей между характеристиками БДН (вариант, форма, скорость прогрессирования) и составом ЦСЖ. Обнаружены значительные 7 количественные изменения состава ЦСЖ у пациентов с ишемическим инсультом. На основании сравнительного анализа метаболических профилей ЦСЖ при ишемическом инсульте, БДН и группы сравнения выявлены маркеры нарушения гематоэнцефалического барьера.

Разработан алгоритм статистической обработки массива диагностической информации, который может лечь в основу методики проведения дифференциальной диагностики патологических состояний по образцам биожидкостей с использованием магнитно-резонансной спектроскопии. Проведены проверка и доказательство эффективности разработанного алгоритма.

Практическая значимость работы

Усовершенствован протокол проведения МРС нативной ЦСЖ на спектрометре высокого разрешения. Показано влияние ряда физических и химических факторов на получаемые спектры, а также выяснены особенности применения различных импульсных последовательностей на спектр. Предложен новый подход к оценке результатов исследования биологических жидкостей in vitro при различных неврологических заболеваниях с использованием магнитно-резонансной спектроскопии высокого разрешения на ядрах 'Н. Оценивая данные по маркерам нарушения гематоэнцефалического барьера, возможно использование их для прогнозирования исходов и течения заболевания. Показана возможность применения метода МРС в качестве универсального диагностического инструмента в клинической практике, в исследовании биологических жидкостей организма.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Длительное хранение образцов ЦСЖ при температуре —20 °С, повторное замораживание-размораживание образцов, а также добавление к ним буферного раствора существенно не влияет на качество получаемого спектра и на количественный состав образца.

2. Метод спектроскопии ЯМР высокого разрешения на ядрах 'Н расширяет спектр идентифицируемых метаболитов в ЦСЖ, выявлены 27 низкомолекулярных соединений с известной химической структурой и 2 соединения с неизвестной химической формулой.

3. Метаболические профили ЦСЖ больных БДН и образцов группы сравнения не имеют качественных и статистически значимых количественных различий.

4. В образцах ЦСЖ пациентов с ишемическим инсультом значимо повышены концентрации изучаемых метаболитов.

5. В ЦСЖ пациентов, страдающих БДН, не выявлено связи между характером метаболического профиля и основными клиническими характеристиками заболевания (возрастом, формой, дебютом и вариантом, скоростью прогрессирования).

6. Алгоритм описания данных МРС !Н ЦСЖ, основанный на МРС высокого разрешения, может быть использован для построения диагностической модели при различных заболеваниях, сопровождающихся изменениями состава ЦСЖ.

Заключение диссертации по теме «Нервные болезни», Соколов, Константин Владимирович

ВЫВОДЫ

1. Разработан протокол исследования ЦСЖ методом спектроскопии ЯМР по ядрам 'Н, в котором отражены: методика подготовки проб, получение спектров на двух режимах с различными импульсными последовательностями подавления сигнала воды, последовательность качественного и количественного анализа спектров и верификации данных.

2. Увеличение срока хранения замороженного образца ЦСЖ (до 11 месяцев, при —20 °С) не влияет на его метаболический профиль. Добавление буферного раствора при подготовке пробы не влияет на концентрации метаболитов в ЦСЖ при проведении MP-спектроскопии высокого разрешения.

3. В проведенном комплексном клинико-инструментальном исследовании выявлено статистически значимое повышение концентраций аланина, лактата, цитрата, пирувата, ацетоацетата, формиата, альфа- и бета-гидроксибутирата, глутамина, креатина и креатинина, фенилаланина и ряда других соединений при ишемическом инсульте, по сравнению с БДН и образцами группы сравнения, что предположительно может быть связано с повышенной проницаемостью гематоэнцефалического барьера.

4. При сопоставлении клинических данных и биохимических показателей выявлено статистически значимое (р<0,001) повышение уровня С-реактивного белка у пациентов группы ишемического инсульта по сравнению с группами БДН и группой сравнения (концентрация СРБ 10,07±1,06, 4,86±0,77 и 5,19±0,74 мг/л соответственно). Выявлена статистически достоверная, прямая, сильная, корреляционная связь между оценкой по шкале NIH и значением концентрации СРБ в плазме крови пациентов с ишемическим инсультом (г = 0,75, р<0,001) .

5. При анализе данных 'Н ЯМР-спектроскопии ЦСЖ и концентрации СРБ плазмы крови выявлена прямая корреляционная связь концентраций СРБ и ряда компонентов метаболического' профиля ЦСЖ, что позволяет утверждать о том, что изменения концентраций метаболитов ЦСЖ отражают активность воспалительного процесса в мозге и степень повреждения гематоэнцефалического барьера.

6. Результаты проведенного комплексного сопоставительного клинического и МРС-исследований не позволяют предполагать наличия диагностического значения спектроскопии ЯМР !Н ЦСЖ у больных БДН. Не выявлено связи биохимических показателей- ЦСЖ с возрастом пациентов, характеристиками течения, вариантами и формами БДН.

7. Предложенный алгоритм анализа данных, включающий стадию количественного анализа концентраций метаболитов, стадии редукции, классификации и проверки, данных, определяет структуру и стратегию разработки диагностической модели, основанной на МРС ЦСЖ на ядрах !Н при сомато-обусловленных заболеваниях и системных поражениях ЦНС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При необходимости хранения образов ЦСЖ, в том числе длительного — до 11 месяцев, и получения в последующем достоверных результатов, возможна их заморозка.

2. Температура хранения образца до регистрации спектра ЯМР должна быть не выше -20°С.

3. Учитывая имеющиеся различия в частотах определения метаболитов ЦСЖ в MP-спектре, при подсчете концентрации метаболитов МР-спектроскопию ЦСЖ необходимо проводить с использованием разных методик подавления сигнала воды.

4. Выявленные маркеры нарушения гематоэнцефалического барьера, возможно, могут быть использованы для прогнозирования исхода и течения ишемического инсульта, а также для изучения патогенеза заболеваний, сопровождающихся повреждением гематоэнцефалического барьера.

5. Оценка метаболического профиля ЦСЖ описанными методами статистического многофакторного анализа может служить универсальным диагностическим.инструментом в клинической практике.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Соколов, Константин Владимирович, 2008 год

1. Боровиков В. Statistica. Искусство анализа данных на компьютере: для профессионалов. 2-е изд. — СПб.: Питер, 2003.— 668 с.

2. Бредбери М. Концепция гематоэнцефалического бавьера: Пер. с англ. — М.: Медицина, 1983, 480 с.

3. Бельков В.В. С-реактивный белок структура, функция, методы определения, клиническая значимость. Лабораторная медицина. 2006;8:1-7.

4. Верещагин Н.В., Варакин Ю.Я. Регистры инсульта в России: результаты и методологические аспекты проблемы. Инсульт, приложение к Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2001;1:34-41

5. Гайнутдинов Х.Л., Штарк М.Б. // Моноклональные антитела в нейробиологии. Под ред. М.Б.Штарка.—Новосибирск, 1995. С. 121— 143

6. Гусев Е.И., Мясоедов Н.Ф., Насонов Е.Л., Журавлева Е.Ю., Гривенников И.А. Цитокины и С-реактивный белок в ликворе пациентов с острым ишемическим инсультом. Всероссийская конференция "Нейроиммунопатология", 1999, с.24-25

7. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина, 2001.—328 с.

8. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Коваленко А.В., Соколов М.А. Механизмы повреждения ткани мозга на фне острой фокальной церебральной ишемии. Журн неврол и психиатр 1999;2:65—70

9. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Насонов Е.Л. Сосудистые заболевания головного мозга (Одинак М.М., Кузнецова А.Н. ред.).—СПб, 1998; 187—189.

10. Ю.Гусев Е.И., Скворцова В.И., Стаховская JI.B., Кликовский В.В., Айриян Н.Ю. Эпидемиология инсульта в России. Consilium medicum, специальный выпуск 2003. с. 5—8

11. П.Дероум Э. Современные методы ЯМР для химических исследований: пер. с англ.—М.: Мир, 1992.—403 с.

12. Егоров Б. А., Бодров М.А., Евзельман М.А., Золотарев Ю.В. Современные математические методы в биомедицинских исследованиях. Орел.: ОрелГТУ, 2006.— 100 с.

13. Карабань Н.В., Рожкова 3.3. Структурные и метаболические особенности головного мозга при болезни Паркинсона по результатам магнито-резонансной томографии и магнитно-резонансной спектроскопии in vivo II Укр. мед.часопис, №1-2, 2007 г.

14. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы. Руководство. — М.:Медицина, 1997.—352 с.

15. Лапач С.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статистика в науке и бизнесе. — К. МОРИОН, 2002. —640 с.

16. Левин Д.М., Стефан Д., Кребиль Т.С., Беренсон М.Л. Статистика для менеджеров с использованием Microsoft Excel, 4-е изд.:Пер.с англ.— М.:Издательский дом «Вильяме», 2004. —1312 с.

17. Неронов Ю.И., Гарайбех 3. ЯМР в томографии и спектральных исследованиях ткани головного мозга. СПб, 2003 г.

18. Николлс Д., Роберт М., Брюс В., Пол Ф. Отнейрона к мозгу./Пер с англ. — М.:Едиториал УРСС, 2003. — 672 с.22,Окользин А.В. Ммагнитно-резонансная спектроскопия по водороду в характеристике опухолей головного мозга. Онкология, т. 8, 2207;3;27— 32

19. Подопригора А.Е. Протонная магнитно-резонансная спектроскопия в нейрорентгенологии.// Медицинская визуализация, №4, 2000 г. С. 86— 91

20. Поздняков А.В. Протонная магнитно-резонансная спектроскопия при ремиттиругощем и вторично-прогрессирующем рассеянном склерозе // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова, №4, 2001 г.

21. Ринк П.А. Магнитный резонанс в медицине. Blackwell Scientific Publications. 1993.—228 с.

22. Свиридов Н.К. Магнитно-резонансная спектроскопия и ее роль в диагностике. // Медицинская визуализация, №1, 2000 г. С. 41—43

23. Страйер Л. Биохимия. ВЗТ.т.1, М.:Мир, 1984.—232 с.

24. Хауссер К.Х., Кальбитцер Х.Р. ЯМР в медицине и биологии: структура молекул, томография, спектроскопия in vivo. II Пер. с нем. Рожковой 3.3., под ред. Рябченко С.М., Киев, «Наукова думка», 1993, 261 с.

25. Хондкариан О.А. Боковой амиотрофический склероз (гистопатологическое исследование). Автореф. дисс д-ра мед. наук. — М., 1954, 20 с.

26. Хондкариан О. А., Бунина Т. Л., Завалишин И. А. Боковой амиотрофический склероз. М., 1978

27. Хондкариан О.А., Максудов Г.А. К эпидемиологии бокового амиотрофического склероза. Вестник АМН СССР, 1970; 1: 83—84

28. Яхно Н.Н. Общая неврология. М.: Медицинское информационное агентство, 2006, 200 с.

29. Яхно Н.Н., Штульман Д.Р. Болезни нервной системы: руководство для врачей. — М. Медицина, 2003. —744 с.

30. A1-Chalabi A., Andersen P.M., Nilsson P., Chioza В., Andersson J.L., Russ C., Shaw C.E., Powell J.F., Leigh P.N. Deletions of the heavy neurofilament subunit tail in amyotrophic lateral sclerosis Hum Mol Genet. 1999 Feb;8(2): 157— 164

31. Andersen P.M. Amyotrophic lateral sclerosis and Cu/Zn-superoxide dismutase. A clinical, genetic and enzymatic study. Doctoral thesis Umea University: Umea, Sweden, 1997

32. Anthony M.L., Beddell C.R., Lindon J.C., Nicholson, J.K. // Arch Toxicol 1994, 69, 99—110

33. Arakawa Y., Sendtner M., Thoenen H. Survival effect of ciliary neurotrophic factor (CNTF) on chick embryonic motoneurons in culture: comparison with other neurotrophic factors and cytokines. J Neurosci. 1990 Nov; 10(11):3507—3515

34. Aran F.A. Researches sur une maladie non encore decrite du systeme musculaire (atrophie musculaire progressive). Arch Gen Med 1850; 24: 535; 172—214

35. Bales J.R., Bell J.D., Nicholson J.K., Sadler P.J., Timbrell J.A., Hughes R.D., Bennet P.N., Williams R., Mugn. Reson. Med., 1988; 6, 301—309

36. Beamer N.B., Coull B.M., Clark W.M., Hazel J.S., Silberger J.R. Interleukin-6 and interleukin-1 receptor antagonist in acute stroke. Ann Neurol 1995; 37: 800—805.

37. Beauchamp N., Barker P. et al; Imaging of Acute Cerebral Ischemia, Radiology. 1999;212:307-324

38. Bell J.D. MRS in body fluids. Magnetic resonance spectroscopy in biology and medicine. Vol 27, Pergamon, Oxford, 1992, p.529—555

39. Bell J.D., Brown J.C.C., Sadler P.J., MacLeod A.F., Sonlsen P.H., Hughes R.D., Williams R. High resolution proton magnetic resonance studies of human cererbospinal fluid. ClinSci 1987;72:563—570

40. Berger M.M., Kopp N., Vital С., Redl В., Aymard M., Lina B. Detection and cellular localization of enterovirus RNA sequences in spinal cord of patients with ALS Neurology. 2000 Jan 11;54(1):20—25

41. Bloch F., Hanson W.W., and Packard M. Nuclear Induction. // Phys.Rev.69 (1946)

42. Boman K., Meurman T. Prognosis of amyotrophic lateral sclerosis. Acta Beurol Scand 1967; 43: 489—498

43. Bowling A.C., Barkowski E.E., McKenna-Yasek D. et al. Superoxide dismutase concentration and activity in familial amyotrophic lateral sclerosis. J Neurochem 1995; 64: 2366—2369

44. Bradley W.G., Good P., Rasool C.G., Adelman L.S. Morphometric and biochemical studies of peripheral nerves in amyotrophic lateral sclerosis.Ann Neurol. 1983 Sep;14(3):267—277

45. Brain W.R. Diseases of nervous system, 6th ed.Oxford, 1962; p. 531

46. Briani C., Marcon M., Dam., Beghi., Pegoraro E., Angelini C. Motor neuron disease in Padua district of Italy: An epidemiological study. Neuroepidemiology 1996; 15: 173—179

47. Brand A., Richter-Landsberg C., Leibfritz D. Multinuclear NMR studies on the energy metabolism of glial and neuronal cells. Dev Neurosci 1993;15:289-298

48. Brooks B.R., Miller R.G., Swash M., Munsat T.L., House A. "Current Issues in ALS Therapeutic Trials" Workshop Contributors (1998). El Escorial Revisted: Revised Criteria for the Diagnosis of Amyotrophic Lateral Sclerosis.

49. Bush A.I. Is ALS caused by an altered oxidative activity of mutant superoxide dismutase? Nat Neurosci. 2002 0ct;5(10):919—923

50. Castillo M., Kwock L., Mukherji S.K. Clinical applications of proton MR spectroscopy. AJNR Am J Neuroradiol. 1996 Jan;17(l):l—15.

51. Caroscio J.T., Calhoun W.F., Yahr M.D. Prognostic factors in motor neuron disease — a prospective study of longevity. In: Rose FC (ed) Research progress in motor neuron disease. Pitman, London, 1994, p.34—43

52. Cid C., Alvarez-Cermeno J.C., Regidor I., Salinas M., Alcazar A. Low concentrations of glutamate induce apoptosis in cultured neurons: implications for amyotrophic lateral sclerosis. J Neurol Sci. 2003 Jan 15;206(1):91—95

53. Cieslak D., Szulc-Kuberska J., Stepien H., Klimek A. Epidermal growth factor in human cerebrospinal fluid: reduced levels in amyotrophic lateral sclerosis. J Neurol. 1986 Nov;233(6):376—377

54. Cleveland D.W. From Charcot to SOD1: mechnisms of selective motor neuron death in ALS. Neuron 1999; 24: 515—520

55. Cleveland D.W., Rothstein J.D. From Charcot to Lou Gehrig: deciphering selective motor neuron death in ALS.// Nature Reviews Neuroscience 2000.

56. Devos D., Moreau C., Lassalle P., Perez Т., De Seze J., Brunaud-Danel V., Destee A., Tonnel A.B., Just N. Low levels of the vascular endothelial growth factor in CSF from early ALS patients. Neurology. 2004 Jun 8;62(11):2127—2129

57. Diem K., Lentner C. Scientific Tables, 7th edition, Ciba-Geigy, Basle 1970:635—640

58. Di Napoli M., Di Gianfilippo G., Bocola V. C-reactive protein after first-ever ischemic stroke. Circulation. 1999;100:e66

59. Di Napoli M., Di Gianfilippo G., Paciucci A., Villani S., Bocola V. C-reactive protein (CRP) as outcome predictor after first-ever ischemic stroke. Neurology. 1999;52:A151—A152

60. Frahm J., Hanefeld F. Localized proton magnetic resonance spectroscopy of cerebral metabolites. Neuropediatrics 1996;27:64—69

61. Giess R., Holtmann В., Braga M., Grimm Т., Muller-Myhsok В., Toyka K.V., Sendtner M. Early Onset of Severe Familial Amyotrophic Lateral

62. Sclerosis with а СОД-1 Mutation: Potential Impact of CNTF as a Candidate Modifier Gene Am. J. Hum. Genet., 2002;70:1277-1286

63. Gonatas N.K., Stieber A., Mourelatos Z., Chen Y., Gonatas J.O., Appel S.H., Hays A.P., Hickey W.F., Hauw J.J. Fragmentation of the Golgi apparatus of motor neurons in amyotrophic lateral sclerosis. Am J Pathol. 1992 Mar; 140(3):731—737

64. Green S.L., Tolwani R.J., Varma S., Quignon P., Galibert F., Cork L.C. Structure, chromosomal location, and analysis of the canine Cu/Zn superoxide dismutase (SOD1) gene. J Hered. 2002 Mar-Apr;93(2):119—24

65. Greiner A., Schmausser В., Petzold K., Kruger H., Marx A. Neuronal targets of serum and cerebrospinal fluid autoantibodies in amyotrophic lateral sclerosis. Acta Neuropathol (Berl). 1996;91(1):67—71

66. Griffin, J.L., Williams, H.J, Sang, E. and Nicholson, J.K. // Magn. Res. Med.,2001; 46, 249—255

67. Grossman R. Brain imaging, American Journal of Neuroradiology №1, 1998;21:9-18

68. Grundstrom E., Lindholm D., Johansson A., Blennow K., Askmark H. GDNF but not BDNF is increased in cerebrospinal fluid in amyotrophic lateral sclerosis. J Neurol Sci. 1999 Jan 15; 162(2): 169—173

69. Gubbay S.S., Kahana E., Zilber N., Cooper G., Pintov S., Leibowitz Y. Amyotrophic lateral sclerosis. A study of its presentation and prognosis. J Neurol 1985; 232: 295—300

70. Heath P.R., Shaw P.J. Update on the glutamatergic neurotransmitter system and the role of excitotoxicity in amyotrophic lateral sclerosis. Muscle Nerve. 2002 Oct;26(4):43 8—45 8

71. Hoffmann G.F., Meier-Augenstein W., Stockier S., Surtees R., Rating D., Nyhan W.L. Physiology and pathophysiology of organic acids in cerebrospinal fluid. J Inherit Metab Dis 1993; 16:648—669

72. Jacobs L., Bozian D., Heffner R.R., Barron S.A. An eye movement disorder in amyotrophic lateral sclerosis. Neurology 1981;31:1282—1287

73. Johansson A., Larsson A., Nygren I., Blennow K., Askmark H. Increased serum and cerebrospinal fluid FGF-2 levels in amyotrophic lateral sclerosis. Neuroreport. 2003 Oct 6; 14(14): 1867—1869

74. Jokelainen M. Amyotrophic lateral sclerosis in Finland: Clinical characteristics. Acta Neurol Scand 1977; 56: 194—204

75. Jordan J, Cena V, Prehn JH. Mitochondrial control of neuron death and its role in neurodegenerative disorders. J Physiol Biochem. 2003 Jun;59(2): 129—141

76. Julien J.P. Amyotrophic lateral sclerosis: unfolding the toxicity of the misfolded. Cell Vol. 104, February 23, 2001, 581—591

77. Jung C., Higgins C.M., Xu Z. Mitochondrial electron transport chain complex dysfunction in a transgenic mouse model for amyotrophic lateral sclerosis. J Neurochem. 2002 Nov;83(3):535—545

78. Keeler J. Understanding NMR spectroscopy. «Wiley», 2006, 476 c.

79. Kennedy P.G.E. One of the possible role of viruses in the aetiology of motor neuron disease: a review. J Royal Soc Med 1990; 83:784—787

80. Klimek A., Cieslak D., Szulc-Kuberska J., Stepien H. Reduced lumbar cerebrospinal fluid corticotropin releasing factor (CRF) levels' in amyotrophic lateral sclerosis. Acta Neurol Scand. 1986 Jul;74(l):72—74

81. Kriat M., Nicoli F., Vion-Dury J., Confort-Gouny S., Dano P., Grisoli F., Gastaut J.L., Cozzone P.J. // Ann. Biol. Clin. (Paris). 1991; 49(9):461—467

82. Lauterbur P. Image formation by induced local interactions: Examples employing nuclear magnetic resonance. Nature. 1973, Vol. 242, P. 190— 191.

83. Leigh P.N. Pathogenic mechanisms in amyotrophic lateral sclerosis and other motor neuron disorders. In: Calne DB, ed Neurodegenerative Diseases Philadelphia: Saunders; 1993:473—488

84. Leigh P.N., Swash M. Motor neuron disease. Springier-Verlag, 1995. London, p. 467

85. Lilienfeld D.E., Chan E., Ehland J., Godbold J., Landrigan P.J., Marsch P., Perl D.P. Rising mortality for motor neuron-disease in the USA, 1962-1984. Lancet, 1989; 710—712

86. Lindon J.C., Holmes E., Nicholson J.K. Pattern recognition methods and application in biomedical magnetic resonance. Prog. NMR Spectrosc. 2001. V. 39. P. 1—40

87. Lindon J.C., Nicholson J.K., Holmes E., Everett J.R. Metabonomics: Metabolic processes studied by NMR spectroscopy of biofluids. Concepts Magn. Reson. 12 (2000) 289—320

88. Lynch J., Peeling J., Auty A., Sutherland G.R. Nuclear Magnetic Resonance Study of Cerebrospinal Fluid From Patients With Multiple Sclerosis. Can J. neurol. Sci. 1993; 20:194—198

89. Mackay R.P. Course and prognosis in amyotrophic lateral sclerosis. Arch Neurol 1963; 8:117—127

90. Masu Y., Wolf E., Holtmann В., Sendtner M., Brem G., Thoenen H. Disruption of the CNTF gene results in motor neuron degeneration. Nature. 1993 Sep 2;365(6441):27—32

91. Matsumoto K., Graf R., Rosner G., Taguchi J., Heiss W.D. Elevation of neuroactive substances in the cortex of cats during prolonged focal ischemia. J Cerebr Blood Flow Metab 1993;13:586-594

92. McGale E.H., Pye I.F., Stonier C., Hutchinson E.C., Aber G.M. Studies of the inter-relationship between cerebrospinal fluid and plasma amino acid concentrations in normal individuals. JNeurochem 1977; 29:291—297

93. McGeer P.L., Schwab С., McGeer E.G., Haddock R.L., Steele J.C. Familial nature and continuing morbidity of the amyotrophic lateral sclerosis-parkinsonism-dementia complex of Guam. Neurology 1997;49: 400—409

94. Muir K.W., Weir C.J., Alwan W., Squire I.B., Lees K.R. C-reactive protein and outcome after ischemic stroke. Stroke. 1999;30:981—985

95. Mulder D.W. Clinical limits of amyotrophic lateral sclerosis. In: Human Motor Neuron Diseases. Rowland LP ed. Raven Press, New York 1982

96. Neary D., Snowden J.S., Mann D.M. Frontal lobe dementia and motor neuron disease. J Neurol Neurosurg Psychiatry 1990; 53: 23—32

97. Neilson S., Robinson I., Nymoen E.H. Longitudinal analysis of amyotrophic lateral sclerosis mortality in Norway, 1966-1989: evidence for a susceptible subpopulation. J Neurol Sci 1994.—122:148—154

98. Nelson L.M. Epidemiology of ALS. ClinNeurosci 1996;3:327-331

99. Niebroj-Dobosz I., Domitrz I., Mickielewicz A. Cytotoxic activity of serum and cerebrospinal fluid of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) patients against acetylcholinesterase. Folia Neuropathol. 1999;37(2):107— 112

100. Niebroj-Dobosz I., Jamrozik Z., Janik P., Hausmanowa-Petrusewicz I., Kwiecinski H. Anti-neural antibodies in serum and cerebrospinal fluid of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) patients. Acta Neurol Scand. 1999 0ct;100(4):238—243

101. Niebroj-Dobosz I., Janik P., Jamrozik Z., Kwiecinski H. Immunochemical quantification of glycoconjugates in serum and cerebrospinal fluid ofamyotrophic lateral sclerosis patients. Eur J Neurol. 1999 May;6(3):335— 340

102. Nicholson J.K., Connelly J., Lindon J.C., Holmes E. Metabonomics: a platform for studying drug toxicity and gene function. Nature Reviews Drug Discovery 2002; 1(2): 153—161

103. Nicholson J.K., Foxall P.J., Spraul M., Farrant R.D., Lindon J.C. 750 MHz 1H and 1H-13C NMR spectroscopy of human blood plasma. Anal. Chem. 1995, 67, 793—811

104. Nicholson J.K., Wilson I.D. High resolution proton magnetic resonance spectroscopy of biological fluids.Progress in NMR Spectroscopy, Vol. 21, 1989, pp. 449—501

105. Norris F.H. Onset, natural hystory and prognosis of adult mitir neuron disease. J Neurol Sci 1993, 118: 48—55

106. Ono S., Takashi I., Nasue S., Koichi N. Increased expression of laminin 1 in the skin of amyotrophic lateral sclerosis. Eur Neurol 2000; 43: 215—220

107. Pantoni L., Sarti K., Inytari D. Cytokines and cell adhesion molecules in cerebral ischemia: experimental bases and therapeutic perspectives. Arterioscler Thromb Vase Biol 1998; 18: 503—513

108. Pardo C.A., Xu Z., Borchelt D.R. et al. Superoxide dismutase is an abundant component in cell bodies, dendrites, and axons of motor neurons and in a subset of other neurons. Proc Natl Acad Sci USA 1995; 92: 954—958

109. Petroff O.A.C., Yu R.S.K. and Ogino T. // J. Neurochem., 1986; 47, 1270—1276

110. Puis I., Jonnakuty C., LaMonte B.H., Holzbaur E.L., Tokito M., Mann E., Floeter M.K., Bidus K., Drayna D., Oh S.J., Brown R.H. Jr., Ludlow C.L., Fischbeck K.H. Mutant dynactin in motor neuron disease. Nat Genet. 2003 Apr;33(4):455—456

111. Purcell E.M., Torrey H.C., Pound R.V. Resonance Absorption by Nuclear Magnetic Moments in a Solid. Phys. Rev. 1946;69;37—38

112. Rao J.S., Hantai D., Festoff B.W. Thrombospondin, a platelet alpha-granule and matrix glycoprotein, is increased in muscle basement membrane of patients with amyotrophic lateral sclerosis. J Neurol Sci. 1992 Nov;113(l):99—107

113. Robertson D.C., Lindon J.C, Nicholson J.K., Holmes E. Metabonomics in Toxicity Assessment. Boca Raton (USA): CRC Press, 2005. 522 p

114. Rosen D.R., Siddique Т., Patterson D. et al. Mutations in CuZn superopxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis. Nature 1993; 362: 59—62

115. Rosengren L.E., Karlsson J.E., Karlsson J.O., Persson L.I., Wikkelso C. Patients with amyotrophic lateral sclerosis and other neurodegenerative diseases have increased levels of neurofilament protein in CSF. J Neurochem. 1996 Nov;67(5):2013—2018

116. Ross В., Kreis R., Ernst T. Clinical tools for the 90s: magnetic resonance spectroscopy and metabolite imaging. Eur. J. Radiol. 1992, Vol. 14, P. 128—140

117. Rothstein J.D. Excitotoxicity and neurodegeneration in amyotrophic lateral sclerosis. ClinNeurosci 1996;3:348-359

118. Rothstein J.D., Tsai G., Kuncl R.W. и соавт. Abnormal excitatory amino acid metabolism in amyotrophic lateral sclerosis. Ann Neurol 1990;28:18— 25

119. Salazar A.M., Masters C.L., Gajdusek C. et al. Syndromes of ALS and dementia: Relation to transmissible Creutzfeld-Jacob disease. Ann Neurol 1983; 14: 17—28

120. Sasaki S., Maruyama S., Yamane K., Sakuma H., Takeishi M. Ultrastructure of swollen proximal axons of anterior horn neurons in motor neuron disease. J Neurol Sci. 1990 Jul;97(2-3):233—240

121. Schaefer P., Grant E. et al. Diffusion-weighted MR Imaging of the Brain, Radiology. 2000;217:331-345

122. Shadrina M.I., Levitsky G.N., Kondratyeva E.A., Slominsky P.A., Skvortsova V.I., Limborska S.A. SOD1 mutation screening in sporadic ALS patients from Russia. Am О Hum Genet 1999 Oct 65(4): A490

123. Shaw C.E., Al-Chalabi A., Leigh N. Progress in the pathogenesis of amyotrophic lateral sclerosis. Curr Neurol Neurosci Rep. 2001 Jan;l(l):69—76

124. Shaw P.J., Thagesen H., Tomkins J. и coaBT.Kennedy's disease: unusual molecular pathologic and clinical features. Neurology 1998; 1: 252—255

125. Spiller W.G. Primary degeneration of the pyramidal tracts: a study of eight cases with necrophy. Univ Pa Med Bull. 1904;17:390-395

126. Strong M.J., Rosenfeld J. Amyotrophic lateral sclerosis: a review of current concepts. // Amyotroph Lateral Scler Other Motor Neuron Disord. 2003 Sep;4(3): 136—143

127. Subramaniam J.R., Lyons W.E., Liu J., Bartnikas T.B., Rothstein J., Price D.L., Cleveland D.W., Gitlin J.D., Wong P.C. Mutant SOD1 causes motor neuron disease independent of copper chaperone-mediated copper loading NatNeurosci. 2002 Apr;5(4):301—307

128. Sussmuth S.D., Tumani H., Ecker D., Ludolph A.C. Amyotrophic lateral sclerosis: disease stage related changes of tau protein and SI00 beta in cerebrospinal fluid and creatine kinase in serum. Neurosci Lett. 2003 Dec 15;353(1):57—60

129. Swanson N.R., Fox S.A., Mastaglia F.L. Search for persistent infection with poliovirus or other enteroviruses in amyotrophic lateral sclerosis-motor neurone disease. Neuromuscul Disord. 1995 Nov;5(6):457—465

130. Swash M., Ingram D. Preclinical and subclinical events in motor neuron disease. J Neurol Neurosurg Psychiatry 1988; 51: 785—789

131. Tillet W., Francis T. Serological reaction in pneumonia with a nonprotein somatic fraction of Pneumococcus// J Exp Med; 1930; 52: 561-571

132. Toyoshima I., Sugawara M., Kato K., Wada C., Hirota K., Hasegawa K., Kowa H., Sheetz M.P., Masamune O. Kinesin and cytoplasmic dynein inspinal spheroids with motor neuron disease. // J Neurol Sci. 1998 Jul 15;159(1):38—44

133. Urushitani M., Kurisu J., Tsukita K., Takahashi R. Proteasomal inhibition by misfolded mutant superoxide dismutase 1 induces selective motor neuron death in familial amyotrophic lateral sclerosis. J Neurochem. 2002 Dec;83(5):1030—1042

134. Wardlaw J. Radiology of stroke, J Neurol Neurosurg Psychiatry 2001;70(Suppl l):i7—ill

135. Wetsel W.C., Eraly S.A., Whyte D.B., Mellon P.L. Regulation of gonadotropin-releasing hormone by protein kinase-A and -C in immortalized hypothalamic neurons. Endocrinology 1993; 132: 2360—2370

136. Wevers R.A., Engelke U., Wendel U., de Jong J.G.H., Gabreels F.J.M-. Heerschap A. Standartized method for high-resolution 'Н-NMR of cerebrospinal fluid. ClinChem, 1995. 41:744—751

137. White L.R., Garseth M., Aasly J., Sonnewald U. Cerebrospinal Fluid From Patients with Dementia Contains Increased Amounts of an unknown factor. J.Neurosci. Res. 2004, 78:297—301

138. Woodall C.J., Riding M.H., Graham D.I., Clements G.B. Sequences specific for enterovirus detected in spinal cord from patients with motor neurone disease. BMJ. 1994 Jun 11;308(6943):1541—1543

139. Youmans J.R. Cerebrospinal Fluid. In: Neurological Surgery, vol.1, 2nd edition, Toronto: W.B.Saunders Co. 1982:423—486

140. Younger D.S., Chou S., Hay S.A.P. et al. Primary lateral sclerosis: a clinical diagnosis re-emerging. Arch Neurol 1988; 45: 1304—1307