Действие экдистероидов растения Serratula Coronata L. на развитие и поведение личинок некоторых видов насекомых-фитофагов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.16, кандидат биологических наук Уфимцев, Кирилл Геннадьевич

• Уфимцев, Кирилл Геннадьевич
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Уфимцев, Кирилл Геннадьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль вторичных метаболитов во взаимоотношениях между растениями и насекомыми.

1.2 Экдистероиды, их химическое строение и биологические функции.

1.3 Гормональная активность экдистероидов у насекомых.

1.4 Фитоэкдистероиды как детерренты насекомых-фитофагов.

1.5 Адаптогенное влияние экдистероидов на насекомых-фитофагов.

1.6 Методы биологического тестирования экдистероидов в системах in vivo и in vitro.

1.7 Серпуха венценосная - S. coronata, как источник экдистероидов.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования.

2.1.1 Описание и биологическая роль тестируемых видов насекомых-фитофагов в природе.

2.2 Подготовка гусениц к началу эксперимента.

2.3 Приготовление экспериментальных питательных сред для метода скармливания.

2.4 Приготовление растворов экдистероидов для тестирования методом погружения.

2.5 Статистическая обработка экспериментальных данных.

ГЛАВА 3. ДЕЙСТВИЕ ЭКДИСТЕРОИДОВ РАСТЕНИЯ СЕРПУХА ВЕНЦЕНОСНАЯ (S. coronata) НА РАЗВИТИЕ И ПОВЕДЕНИЕ ЛИЧИНОК НАСЕКОМЫХ-ФИТОФАГОВ РАЗЛИЧНЫХ ТРОФИЧЕСКИХ ГРУПП В

ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VIVO.

3.1 Антифидантное действие экдистероидов S. coronata на гусениц капустной совки (Mamcstra hrassicac L.) разных возрастов.;.

3.1.1 Антифидантное действие экдистероидов на гусениц капустной совки I возраста.

3.1.2 Антифидантное действие экдистероидов на гусениц капустной совки III возраста.

3.2 Антифидантное действие экдистероидов S. coronata на гусениц кукурузного мотылька (Ostrinia nubilalis Hb.) разных возрастов.

3.3 Детеррентная активность экдистероидов S. coronata по отношению к гусеницам египетской хлопковой совки

Spodoptera littoral is Boisd.) разных возрастов.

3.3.1 Влияние экдистероидсодержащих диет на развитие и поведение гусениц египетской хлопковой совки VI возраста и плодовитость имаго.

3.3.2 Влияние экдистероидсодержащих диет на развитие и поведение гусениц египетской хлопковой совки IV возраста и плодовитость имаго.

3.4 Влияние сред, содержащих 10% сухих частей генеративных растений S. coronata с различным содержанием экдистероидов, на развитие гусениц египетской хлопковой совки IV возраста.

3.5 Гормональное, токсическое и адаптогенное влияние фитоэкдистероидов S. coronata на личинок мельничной огневки

Hphestia kuchniclla Zell.) последнего возраста.

3.5.1 Влияние метанольных и водных растворов 20Е разных концентраций.

3.5.2 Влияние растворов 22-ацетата 20-гидроксиэкдизона разной концентрации.

3.5.3 Влияние растворов минорных экдистероидов разных концентраций.

3.6 Влияние экдистероидов S. coronata на личинок мельничной огневки последнего возраста при погружении в водные и спиртовые растворы экдистероидов с разной временной экспозицией.

3.6.1 Влияние 0,1%-ных метанольных растворов экдистероидов при погружении на 10 сек.

3.6.2 Влияние 0,1%-ного раствора 20Е в метаноле при погружении на различные промежутки времени.

3.6.3 Влияние 0,1%-ного раствора Е в метаноле при погружении на различные промежутки времени.

3.6.4 Влияние 0,1%-ного раствора S3 (In) в метаноле при погружении на различные промежутки времени.

3.6.5 Влияние 0,1%-ного раствора 20Е в этаноле при погружении на различные промежутки времени.

3.6.6 Влияние 0,1%-ного раствора 20Е в воде при погружении на различные промежутки времени.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Действие экдистероидов растения Serratula Coronata L. на развитие и поведение личинок некоторых видов насекомых-фитофагов»

• Актуальность темы. Возникшее на стыке двух биологических наук -экологии и биохимии, новое направление - биохимическая экология, в последние годы развивается высокими темпами, так как позволяет подойти ближе к пониманию глобальных вопросов биохимических взаимоотношений между живой и неживой природой, многообразию взаимоотношений между живыми организмами, пролить свет на сложную взаимосвязь и коэволюционную адаптацию, существующие между растениями и животными (Барбье, 1978; Харборн, 1985).

Одними из основных объектов биохимической экологии являются вещества вторичного (или специализированного) обмена, которые опосредуют взаимодействия между организмами и регулируют широкий спектр экологических взаимодействий, включая трофические взаимосвязи. С этой точки зрения большой интерес представляют экдистероиды, известные как гормоны линьки беспозвоночных, обнаруженные сравнительно недавно и в растениях. Несмотря на определенные успехи в изучении распространения экдистероидов в растительном мире и их структурного многообразия, до настоящего времени нет однозначного ответа на вопрос о том, какова роль экдистероидов в растениях. Выполняют ли они роль аллелохимических токсинов и антифидантов по отношению к неадаптированным видам фитофагов, имеют физиологическое значение для роста и развития самих растений, или взаимоотношения между растениями - продуцентами экдистероидов, и насекомыми-фитофагами носят еще более сложный характер (Jones and Fim, 1978; Bergamasco and Horn, 1983; Jones and Firn, 1991; Дайнен, 1996, 1998)?

В рамках экологической стратегии представляется чрезвычайно важным рассмотреть чувствительность как можно большего количества насекомых-фитофагов к фитоэкдистероидам, полученным с пищей, установить специфику влияния различных по структуре экдистероидов на насекомых-фитофагов, сопоставить активность значительного числа различных экдистероидов в одном и том же биотесте, установить связь между структурой и биологической активностью экдистероидов (Дайнен, 1998; Лафон, 1998).

Цель работы: Оценка вклада фитоэкдистероидов в детеррентную стратегию растения серпухи венценосной (Serratula coronata L.) по отношению к насекомым-фитофагам различной пищевой направленности.

Задачи работы:

- изучение антифидантной активности экдистероидов S. coronata по отношению к личинкам разных возрастов нескольких видов насекомых-полифагов: кукурузного мотылька Ostrinia nubilalis Hb., капустной совки Mamestra brassicae L., египетской хлопковой совки Spodoptera littoralis Boisd. методом скармливания;

- изучение влияния экдистероидов S. coronata на личинок мельничной огневки Hphcstia kuchniclla Zell. последнего возраста методом погружения.

Работа выполнена в лаборатории биохимии и биотехнологии растений в соответствии с планом НИР Института биологии Коми НЦ УрО РАН по теме "Структурно-функциональные исследования продуктов специализированного обмена растений и клеточных культур-продуцентов экдистероидов" (№ гос. per. 01.9.80.004936), международного проекта INTAS "Вторичные метаболиты растений и взаимоотношения между насекомыми и растениями: распространение и идентификация экдистероидных агонистов и антагонистов в двух географически удаленных флорах" (№ 96-1291) и целевой программы поддержки междисциплинарных проектов, выполняемых в содружестве между учеными СО и УрО РАН (проект №151 "Гормональные механизмы адаптации насекомых" (фундаментальные и прикладные исследования).

Положения, выносимые на защиту:

1.Фитомасса, экстракты из фитомассы серпухи венценосной S. coronata, а также индивидуальные экдистероиды, выделенные из этого растения, добавленные в диету личинок кукурузного мотылька О. nubilalis и капустной совки М. hrassicae оказывают сильное антифидантное действие на гусениц I возраста, вызывая массовую миграцию гусениц с корма и их гибель.

2. Антифидантное действие экдистероидсодержащей диеты на личинок М. hrassicae старших возрастов (III и IV) менее выражено: не вызывая массовой гибели гусениц, приводит к нарушениям в их развитии и поведении, выражающимся во вспышках каннибализма, значительном увеличении стадии куколки и образовании нежизнеспособных куколок с различными аномалиями.

3. Гусеницы египетской хлопковой совки S. littoralis устойчивы к экзогенным экдистероидам, однако добавление 0,01 и 0,1% 20Е в диету гусениц IV и VI возраста приводит к нарушению их развития, а также к значительному снижению плодовитости имаго.

4. Введение в диету гусениц S. littoralis IV возраста разных частей генеративных растений S. coronata в количестве 10% (мае.) с различным содержанием экдистероидов не оказывает выраженного антифидантного действия, однако подавляет развитие гусениц, смещает время начала окукливания, увеличивает стадию куколки и снижает плодовитость имаго по сравнению с контрольной группой.

5. Погружение гусениц li. kuehniella в спиртовые и водные растворы различных экдистероидов приводит к проявлению трех эффектов -токсического, гормонального и адаптогенного, конкурирующее влияние которых зависит от структуры экдистероида, концентрации его в растворе, природы растворителя и длительности погружения.

Научная новизна работы: Осуществлена оценка вклада фитоэкдистероидов S. coronata как детеррентов по отношению к четырем видам насекомых-фитофагов различной пищевой направленности при помощи двух биотестов -метода скармливания и метода погружения.

При помощи метода скармливания экдистероидсодержащей диеты показано сильное антифидантное влияние фитоэкдистероидов S. coronata на гусениц I возраста кукурузного мотылька и капустной совки, токсическое и гормональное действие на гусениц старших возрастов обоих видов, приводящее к различным патологиям в развитии и массовой гибели. В тестах по скармливанию диеты, содержащей различные концентрации 20Е, гусеницам IV и VI возрастов египетской хлопковой совки, устойчивой к высоким концентрациям экдистероидов, впервые обнаружено их гормональное действие, приводящее к увеличению времени развития и периода окукливания, а также к снижению плодовитости имаго по сравнению с контрольной группой. Кроме того, обнаружено, что введение в диету гусениц S. littoralis IV возраста 10% (мае.) разных частей генеративных растений S. coronata с различным содержанием экдистероидов, не оказывая выраженного антифидантного действия, подавляет развитие гусениц, смещает время начала окукливания, увеличивает стадию куколки и снижает плодовитость имаго по сравнению с контрольной группой.

На примере гусениц мельничной огневки в биотесте по погружению показано многообразное влияние экдистероидов, характер которого зависит от структуры экдистероида, его концентрации в растворе, природы растворителя и длительности погружения. Обнаружено проявление трех эффектов - гормонального, токсического и адаптогенного, приводящих к различным отклонениям в развитии личинок.

Полученные нами экспериментальные данные доказывают состоятельность современной научной гипотезы о роли фитоэкдистероидов как соединений, обладающих детеррентной активностью по отношению к насекомым-фитофагам, позволяют ближе подойти к разработке методов количественной оценки вклада фитоэкдистероидов в специфику взаимоотношений между насекомыми и растениями.

Практическая значимость: Полученные результаты позволяют оценить вклад фитоэкдистероидов в детеррентную стратегию растения S. coronata по отношению к четырем видам насекомых-фитофагов с различной широтой пищевой специализации, являющуюся частью защитной стратегии растений от насекомых-вредителей. Вклад данной работы в подтверждение гипотезы о роли фитоэкдистероидов как детеррентов по отношению к насекомым-фитофагам, относящейся к фундаментальным вопросам экологии, может иметь приактическое значение для разработки новых биологических методов регуляции численности насекомых-вредителей, а также дальнейшего развития методов генной инженерии сельскохозяйственных растений, направленных на получение устойчивых сортов.

Апробация работы: Материалы исследований были представлены на IV съезде Общества физиологов растений России (Москва, 1999 г.), на VI Молодежной научной конференции "Актуальные проблемы биологии" (Сыктывкар, 1999 г.), XIV Коми республиканской молодежной научной конференции (Сыктывкар, 2000 г.), Международном симпозиуме "Protecjia integrata a plantelor: Realizari §i probleme" (Кишинев, Республика Молдова, 2000 г.), IX Молодежной научной конференции "Актуальные проблемы биологии и экологии" (Сыктывкар, 2002 г.), заслушаны и обсуждены на Итоговом ученом совете Института биологии Коми НЦ УрО РАН (Сыктывкар, январь 2003 г.).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Структура и объем диссертации: Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 185 страницах, иллюстрирована 42 рисунками и 11 таблицами. Список цитируемой литературы включает 166 наименований, в том числе 96 иностранных источников.

Заключение диссертации по теме «Экология», Уфимцев, Кирилл Геннадьевич

выводы

1. Установлено детеррентное действие фитоэкдистероидов серпухи венценосной S. coronala по отношению к личинкам разных возрастов кукурузного мотылька и капустной совки при выращивании их на экдистероидсодержащих диетах. Наблюдалось сильное антифидантное действие фитоэкдистероидов в составе питательных сред на гусениц I возраста О. nuhilalis и М. brassicae, которое приводило к массовой миграции гусениц с корма и их гибели.

2. Показано отличие в действии экдистероидсодержащих питательных сред на гусениц III и IV возрастов капустной совки по сравнению с гусеницами I возраста. Диета с различным содержанием экдистероидов сначала стимулировала питание личинок старших возрастов, затем происходило отторжение пищи, что приводило к вспышке каннибализма и массовой гибели гусениц. У гусениц, продолжавших питаться, наблюдалась патология развития, значительное замедление процессов окукливания, образование нежизнеспособных куколок с различными аномалиями и выход лишь единичных имаго.

3. Впервые обнаружено детеррентное действие диеты с 0,01 и 0,1% 20Е на гусениц IV и VI возрастов египетской хлопковой совки, ранее считавшейся устойчивой к высоким концентрациям экдистероидов, выразившееся в отклонении от нормального развития, увеличении периода развития до куколки и снижении количества жизнеспособных куколок, а также в значительном снижении плодовитости имаго. У гусениц IV возраста S. littoralis введение 10% (мае.) мелкоизмельченных сухих частей генеративного растения S. coronata с различным содержанием экдистероидов приводило к проявлению сильного гормонального эффекта, выразившегося в нарушении развития, смещении начала времени окукливания, увеличении стадии куколки, а также в снижении плодовитости имаго.

4. Впервые обнаружено действие трех конкурирующих эффектов -токсического, гормонального и адаптогенного, при погружении гусениц мельничной огневки /:. kuchniclla последнего возраста в растворы различных экдистероидов. Механизм действия экдистероидов зависел от химической структуры экдистероида, его концентрации, природы растворителя и длительности погружения личинок в раствор. При погружении в растворы с высокими концентрациями экдистероидов гусениц /;. kuchniclla последнего возраста наиболее сильно выражен токсический эффект, что проявлялось в массовой гибели гусениц. Погружение в растворы с более низкой концентрацией экдистероидов способствовало проявлению адаптогенного и гормонального действия, что выражалось в повышении количества выживших гусениц и ускорении процесса окукливания.

5. Замечено, что после погружения как в водный, так и в метанольный раствор 20Е количество нормальных куколок значительно больше, чем после погружения в растворы, содержащие в качестве главного компонента минорный экдистероид 25-5-инокостерон, который, ускоряя процесс окукливания и выхода имаго, способствовал образованию большого количества нежизнеспособных куколок с различными аномалиями.

6. Отмечено, что в большинстве случаев максимальная гибель гусениц наблюдалась во время линьки на следующий возраст, перед окукливанием, а также на стадии куколки.

7. В экспериментах на четырех видах насекомых-фитофагов различной пищевой специализации при помощи двух биотестов - метода скармливания и погружения в растворы экдистероидов, показано, что фитоэкдистсроиды растения S. coronata оказывают детеррентное действие, что свидетельствует о вкладе экдистероидов в защитную стратегию растения S. coronata от неадаптированных видов насекомых-фитофагов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Уфимцев К.Г. Фитоэкдистероиды как детерренты насекомых- фитофагов// Актуальные проблемы биологии и экологии: Тез. докл. VI молодеж. науч. конф. Сыктывкар, 1999. С. 259.

2. Фитоэкдистероиды как детерренты насекомых-фитофагов. IV Съезд общества физиологов растений России / В.В. Володин, Т.И. Ширшова, А.П. Якимчук, К.Г. Уфимцев // Физиология растений - наука III тысячелетия: Тез. докл. междунар. конф. М., 1999. Т. II. С. 548.

3. Уфимцев К.Г. Детеррентная активность фитоэкдистероидов Serratula coronata L. на личинок мельничной огневки Hphestia kuehniella Zell. // Тез. докл. XIV Коми республ. молодеж. науч. конф. Сыктывкар, 2000. Т. 2. С. 238239.

4. Iachimciuc A., Batcu М., Ufimtsev К. Influence of Ecdysteroids in growth an behaviour of ontogenetic stage Mamestra hrassicae L. // Protccpa integrata a plantelor: Realizari §i probleme: Invitap'e - Program la Simpozionul Internationale. Chi§inau (Moldova), 2000. P. 50.

5. Действие экдистероидов Serratula coronata L. на поведение и развитие личинок некоторых видов насекомых-фитофагов / К.Г. Уфимцев, Т.И. Ширшова, А.П. Якимчук, В.В. Володин // Раст. ресурсы, 2001. Т. 37, вып. 3. С. 23-33.

6. Уфимцев К.Г. Исследование вклада экдистероидов в детеррентную стратегию растения Serratula coronata L. в биотесте на личинках насекомых-фитофагов // Актуальные проблемы биологии и экологии: Тез. докл. IX молодеж. науч. конф. Сыктывкар, 2002. С. 165.

7. Гормональное, токсическое и адаптогенное влияние экдистероидов Serratula coronata L. на личинок Hphestia kuehniella Zell. / К.Г. Уфимцев, Т.И. Ширшова, А.П. Якимчук, В.В. Володин. // Раст. ресурсы, 2002. Т. 38, вып. 2. С. 29 - 39.

8. Влияние экдистероидов Serratula coronata L. на личинок последнего возраста liphestia kuchniclla Zell. после погружения в спиртовые и водные растворы на различные промежутки времени / К.Г. Уфимцев, Т.И. Ширшова, А.П. Якимчук, В.В. Володин // Раст. ресурсы, 2002. Т. 38, вып. 3. С.86 - 97.

9. Детеррентная активность экдистероидов Serratula coronata L. по отношению к личинкам египетской хлопковой совки Spodoptera littoralis Boisd. (Lepidoptera: Noctuidae) / К.Г. Уфимцев, Т.И. Ширшова, В.В. Володин // Раст. ресурсы, 2003. Т. 39, вып.4. С. 134 - 143.

10. Уфимцев К.Г., Ширшова Т.И., Володин В.В. Действие фитоэкдистероидов Serratula coronata L. на поведение и развитие личинок некоторых видов насекомых-фитофагов // Фитоэкдистероиды / Отв. ред. В.В. Володин. СПб.: Наука. 2003. С. 160 - 170.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для решения проблемы роли фитоэкдистероидов в растениях и принципах, на которых основано их распространение в растительном мире, разработана экологическая стратегия, предусматривающая изучение чувствительности как можно большего количества насекомых-фитофагов к экдистероидам, специфику влияния различных экдистероидов на насекомых-фитофагов, сопоставление активности значительного числа различных экдистероидов по отношению к одному и тому же биотесту, установление связи между химической структурой и активностью экдистероидов. Способность растений синтезировать соединения, нарушающие нормальную активность гормонов у насекомых-фитофагов, а возможно и у других классов растительноядных беспозвоночных, но не токсичных для млекопитающих, привлекает внимание ученых к разработке новых биологических методов борьбы с вредителями и ставит ряд вопросов о специфике взаимоотношений между насекомыми и растениями. Предположение, что экдистероиды являются аллелохимическими токсинами для неадаптированных видов растительноядных беспозвоночных требует четких доказательств (Дайнен, 1998).

Полученные нами результаты позволяют приблизиться к решению этой проблемы:

1. Установлен вклад фитоэкдистероидов S. coronala в детеррентную стратегию этого растения по отношению к нескольким видам насекомых-фитофагов с использованием различных биотестов.

Одним из основных тестов, позволяющих проследить влияние экдистероидов, поступающих с пищей, на развитие и физиологические параметры, а также отдаленные последствия - жизнеспособность и плодовитость потомства, является метод скармливания. Поступающие с пищей фитоэкдистероиды приводят к нарушению гормонального баланса в организме насекомых, выражающемся в различных патологиях в развитии личинок, образовании большого количества нежизнеспособных куколок. Эти экспериментальные методы позволяют внести ясность в решение проблемы о роли фитоэкдистероидов в растении, эффективности их в целом в качестве соединений, обладающих детеррентной активностью по отношению к насекомым-фитофагам, оценке вклада ФЭ в специфику взаимоотношений между насекомыми и растениями.

В опытах на личинках трех видов насекомых-фитофагов с различным пищевым предпочтением - О. nubilalis, М. brassicac и S. littoralis разных возрастов нами показано детеррентное влияние фитоэкдистероидов S. coronata, включенных в диету насекомых, зависящее от вида насекомых, возраста личинок, количественного содержания экдистероидов в пище, приводящее к различным патологическим последствиям.

2. Экспериментальные питательные среды, содержащие различные количества фитомассы, сухого метанольного экстракта из фитомассы и суммы экдистероидов, включающей 82,7% 20Е и 15,8% In, оказывали сильное антифидантное действие на гусениц I возраста О. nubilalis и М. brassicac. Наблюдалась массовая миграция гусениц с корма и затем их гибель. В тех случаях, когда отдельные особи продолжали питаться на ЭПС с низким содержанием экдистероидов (0,004 - 0,005%), имело место существенное замедление в развитии и образование нежизнеспособных куколок с различными аномалиями.

3. У гусениц III и IV возрастов М. brassicac экдистероидсодержащая диета сначала стимулировала питание, затем происходило отторжение пищи, что приводило к вспышке каннибализма и массовой гибели гусениц. У личинок, продолжавших питаться, наблюдались различные патологии в развитии, значительное увеличение периода развития куколок, образование в основном нежизнеспособных куколок с различными аномалиями.

4. На гусениц О. nuhilalis всех возрастов экдистероидсодержащая диета оказывала ярко выраженное антифидантное действие, вызывая их массовую гибель.

Полученные нами результаты вполне согласуются с данными ряда авторов о чрезвычайной чувствительности личинок О. nuhilalis и М. hrassicae к 20Е, Е, понастерону и другим ФЭ (Marion-Poll et al., 1998; Darazy et al., 1998). В опытах на вкусовых рецепторах этих насекомых было обнаружено сенсорное восприятие экдистероидов, которое, согласно мнению авторов, обеспечивается "детеррентной клеткой", т.е. клеткой, специализированной на распознавании вредных химических веществ и инициирующей отторжение пищи. Особенно чувствительными оказались клетки - вкусовые рецепторы О. nuhilalis, которые распознавали отталкивающие компоненты и отторгали их. Селективность этих рецепторов была изучена при помощи электрофизиологических записей из ротовых вкусовых волосков, стимулируемых различными экдистероидами и агонистами нестероидной природы.

5. Личинки египетской хлопковой совки S. littoralis устойчивы к очень высоким концентрациям фитоэкдистероидов. Ранее было показано, что диета, содержащая до 100 ррш 20Е, не оказывала неблагоприятного действия на их рост и развитие (Blackford et al., 1996; Blackford et al., 1997). В работах по изучению реакции вкусовых рецепторов S. littoralis была подтверждена их нечувствительность к экдистероидам (Marion-Poll et al., 1998).

В наших экспериментах было обнаружено влияние диеты с 0,1 и 0,01% 20Е на развитие, рост гусениц и плодовитость имаго. Высокое содержание 20Е (0,1%) в диете гусениц IV возраста привело к увеличению времени развития и периода окукливания по сравнению с контролем и диетой с более низким содержанием 20Е (0,01%) почти в два раза. На обеих диетах наблюдалось значительное снижение плодовитости самок. Для гусениц VI возраста гормональный эффект 20Е проявился в снижении плодовитости самок на обеих экспериментальных средах по сравнению с контролем почти в два раза. Кроме того, нами обнаружено, что введение в диету гусениц S. littoralis IV возраста различных частей генеративных растений S. coronata в концентрации 10% (мае.), содержащих различное количество экдистероидов, не оказывая выраженного антифидантного действия, подавляло рост и развитие гусениц, смещало время начала окукливания и значительно снижало плодовитость имаго по сравнению с контрольной группой. Однако между выраженностью эффектов и количественным содержанием экдистероидов в различных органах растений отсутствуют четкие корреляции, что требует продолжения экспериментов с другими видами полифагов, а также изучения химического состава отдельных органов растений и его изменения, происходящего с возрастом в тканях и органах растений, с целью установления возможного синергизма (или антагонизма) антифидантного и гормонального действия экдистероидов с другими биологически активными соединениями.

Таким образом, нами получены новые данные о действии фитоэкдистероидов на личинок S. littoralis, устойчивых к высоким концентрациям экзогенных экдистероидов. Несмотря на то, что антифидантное действие 20Е в случае S. littoralis было значительно слабее, чем в случае О. nuhilalis и М. brassicae, нами обнаружен довольно сильный гормональный эффект для гусениц обоих возрастов египетской хлопковой совки. У гусениц IV возраста он проявлялся в увеличении периода развития до окукливания, снижении количества жизнеспособных куколок и значительном снижении плодовитости имаго. Для самок, полученных из личинок VI возраста, выращенных на экдистероидсодержащей диете, также наблюдалось значительное снижение плодовитости по сравнению с контролем. Это свидетельствует в пользу гипотезы, согласно которой фитоэкдистероиды в природе могут играть роль экорегуляторов на различных стадиях развития насекомых или оказывать отдаленное влияние на их потомство. Кроме того, полученные данные могут иметь практическое значение для развития методов интегрированной защиты растений, позволяющих контролировать численность насекомых-вредителей путем снижения их плодовитости.

6. Метод погружения, применяемый в С/н/отесте для определения гормональной активности экдистероидов, заключается в погружении гусениц рисовой огневки С. supprcssalis последнего возраста в метанольные растворы экдистероидов на пять секунд. О гормональной активности экдистероидов судят по степени потемнения кутикулы. Этот тест дает не очень корректные результаты, но прост в исполнении и не требует больших материальных затрат. Погружение личинок в растворы разных экдистероидов и наблюдение за их развитием позволяют составить представление об отдаленных последствиях, связанных с попаданием экдистероидов в организм насекомых.

Нами на примере гусениц мельничной огневки /:. kuchniclla показано многообразие действия экдистероидов, зависящее от их химической структуры, концентрации, природы растворителя и длительности погружения. Было обнаружено, что растворы экдистероидов, попадая в организм личинок, проявляли три конкурирующих эффекта - токсический, адаптогенный и гормональный.

Токсический эффект проявлялся в увеличении количества погибших гусениц по сравнению с контролем - растворителем. В нашем случае метанольные растворы 20Е оказались менее токсичными, чем их водные растворы и сам метанол. 20Е в метанольном растворе проявлял более высокую адаптогенную активность, результатом чего было значительное повышение количества выживших гусениц по сравнению с метанолом, погружение в который приводило к тотальной гибели гусениц в течение семи суток. Таким образом, нами показано, что в присутствии повреждающих агентов экдистероиды выполняли не только гормональные функции, но и роль адаптогенов.

Метанольные растворы 22-ацетата-20Е и 25-5-инокостерона по своему токсическому действию сравнимы с токсичностью чистого метанола. Высокий процент гибели гусениц говорит о слабом адаптогенном влиянии этих экдистероидов. В этих случаях наиболее ярко проявился гормональный эффект, о котором можно судить по количеству образовавшихся куколок и выходу имаго. Следует отметить, что хотя после погружения в метанольные и водные растворы 20Е окукливание шло медленней, чем после погружения в растворы 22А и In, количество аномальных куколок было значительно меньше.

7. Различие в механизме действия экдистероидов при попадании в организм гусениц при погружении, проявляющееся в конкурировании трех эффектов -токсического, адаптогенного и гормонального, приводит к тому, что не во всех случаях наблюдается прямая зависимость эффектов от длительности погружения. При погружении в 0,1%-ный раствор 20Е в этаноле на 10 секунд гибель гусениц достигла на восьмые сутки 85%, а после погружения на 40 секунд на четвертые сутки 75% гусениц окуклилось, и затем наблюдался выход имаго.

Прямая зависимость количества выживших гусениц, образовавшихся куколок и имаго от длительности погружения наблюдалась для метанольных растворов Е и S3 (In). Увеличение времени погружения повышало смертность гусениц и уменьшало количество образовавшихся куколок и имаго.

8. Полученные нами данные имеют важное значение для понимания роли экдистероидов в растениях и взаимоотношений между растениямипродуцентами экдистероидов, и насекомыми-фитофагами. Понимание механизмов, включающихся при попадании фитоэкдистероидов в организм насекомых-фитофагов, позволит ближе подойти к решению проблемы создания методов регуляции численности насекомых-вредителей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Уфимцев, Кирилл Геннадьевич, 2004 год

1. Абубакиров Н.К. Экдистероиды цветковых растений (Angiospermae). // Химия природных соединений. 1981. № 6. С. 685-701.

2. Алексеева Л.И. Экдистероиды Serratula coronata L. и Ajuga rcptans L. // Автореф. канд. хим. наук. Уфа. 1999. 21 с.

3. Ануфриева Э.Н., Володин В.В., Носов А.Н., М. Гарсиа, Р. Лафон. Состав и содержание экдистероидов в растениях и культуре ткани Serratula coronata L. //Физиология растений. 1998. Т. 45,№ 3. С. 378-381.

4. Ануфриева Э.Н., Ковлер Л.А., Колегова Н.А., Володин В.В. Serratula coronata L. и Ajuga rcptans L. продуценты экдистероидов в культуре in vitro. II Научные доклады / Коми научный центр УрО РАН. Сыктывкар, 1995. Вып. 372. 25 с.

5. Ахрем А.А., Левина И.С., Титов Ю.А. Экдизоны стероидные гормоны насекомых. Минск: Наука и техника, 1973. 232 с.

6. Ахрем А.А., Ковганко Н.В. Экдистероиды: Химия и биологическая активность. Минск: Наука и техника, 1989. 327 с.

7. Бакл Дж. Гормоны животных. М.: Мир, 1986. 85 с.

8. Барбье М. Введение в химическую экологию. М.: Мир, 1978. 229 с.

9. Биологический энциклопедический словарь. М.: Советская энциклопедия, 1989. 864 с.

10. Ю.Буров В.Н., Сазонов А.П. Биологически активные вещества в защите растений. М.: Агропромиздат, 1987. 198 с.

11. П.Вилкова Н.А. Особенности развития стеблевого мотылька при разведении его на ИПС // Бюл. ВНИИЗАРА. 1985. № 60. С. 61-65.

12. Володин В.В. Экдистероиды в интактных растениях и клеточных культурах: Автореферат докт. дисс. М., 1999.

13. Володин В.В., Володина С.О. Способ получения экдистероидов. Патент № 2153346, Россия, МКИ3 7А61 К35/78 // Институт биологии Коми Научного центра УрО РАН; № 99106351/14, заявл. 29.03.99; опубл. 27.07.2000 а. Бюл. №21.

14. Володин В.В., Лукша В.Г., Пунегов В.В., Тюкавин Ю.А. Способ получения а- и Р-экдизонов. Патент № 2063763, Россия, МКИ3 Ф 61 К 35/78 // Коми научный центр УрО РАН; № 93037260/14; заявл. 19.07.93; опубл. 20.07.96. Б.И. № 20.

15. Володин В.В., Лукша В.Г., Дайнен Л., Пунегов В.В., Алексеева Л.И., Колегова Н.А., Тюкавин Ю.А., Ребров А.И. Инокостерон и макистерон А из Scrratula coronata L. // Физиология растений. 1998. Т. 45, №3.С.378-382.

16. Володин В.В., Мишуров В.П., Колегова Н.А., Тюкавин Ю.А., Портнягина Н.В., Постников Б.А. Экдистероиды растений семейства Asteraceae. // Научные доклады / Коми научный центр УрО РАН. Сыктывкар, 1993. Вып. 319. 20 с.

17. Володин В.В., Ширшова Т.И., Бурцева С.А., Мельник М.В. Биологическая активность 20-гидроксиэкдизона и его ацетатов.// Раст. ресурсы. 1999. Т. 35„ вып. 2. С. 76-81.

18. Вредители и болезни полевых культур. Справочник. Под ред. Н.Н. Архангельского. Ростовское книжное издательство. 1964. 408 с.

19. Гилберт С. Клеточные взаимодействия на расстоянии. Гормоны как медиаторы развития. В кн.: Биология развития, 1995. Т. 3. С. 174-183.21 .Гормональная регуляция развития насекомых. // Труды Всесоюзного энтомологического общества. Наука, 1983. 181 с.

20. Горовиц М.Б., Зацны И.Л., Абубакиров Н.К. Экдизоны в растительном мире // Раст. ресурсы. 1974. Т. 10, вып. 2. С. 261-274.

21. Дайнен Л. Стратегия для скрининга растений на содержание фитоэкдистероидов и подходы к объяснению функций экдистероидов у растений. // Тезисы Международного совещания по фитоэкдистероидам. Сыктывкар. 1996. С. 23-27.

22. Дайнен Л. Стратегия оценки роли фитоэкдистероидов как детеррентов по отношению к беспозвоночным-фитофагам. // Физиол. растений, 1998. Т. 45, №3. С. 347-359.25.3ахваткин Ю.А. Курс общей энтомологии. М.: Колос, 2001. 371 с.

23. Ивантер Э.В. Основы практической биометрии. Петрозаводск, 1979. 94 с.

24. Ковганко Н.В., Ахрем А.А. Стероиды. Экологические функции. Минск. 1990. 221 с.

25. Колегова Н.А., Володин В.В. Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография экдистероидов в системах, содержащих электронодонорные добавки.//Ж., анал. химии. 1999. Т. 54, № 12. С. 1 -4.

26. Лазарев Н.В., Розин М.А. О неспецифических приспособительных реакциях. В сб.: Вопросы цитологии и общей физиологии. М.-Л. 1960. С. 137142.

27. ЗГЛакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. 352 с.

28. Лафон Р. Фитоэкдистероиды в мировой флоре: разнообразие, распределение, биосинтез и эволюция. Междунар. совещание по фитоэкдистероидам. Сыктывкар, 1996. С. 20-22.

29. Лафон Р. Фитоэкдистероиды и мировая флора: разнообразие, распределение, биосинтез и эволюция. // Физиол. растений, 1998. Т. 45, №3. С. 326-346.

30. Масленникова В.А., Черныш С.И. Суточные колебания титра экдизона у куколок Pieris brassicac и Barathra brassicac. II Вестник Ленингр. ун-та. 1978. № 15. С.

31. Методические указания по массовому лабораторному разведению озимой и капустной совок на искусственных питательных средах. Всесоюзный научно-исследовательский институт биологических методов защиты растений. Кишинев, 1976. 16 с.

32. Монастырский А.Л., Горбатовский В.В. Массовое разведение насекомых для биологической защиты растений. Справочник. М.:, 1991.

33. Новосельская И.Л., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Фитоэкдистероиды Serratula coronata // Химия природных соедин. 1981. №5. С. 668-669.

34. Осмоловский Г.Е., Бондаренко Н.В. Энтомология. Л., 1980.

35. Остроумов С.А. Введение в биохимическую экологию. 1986. 176 с.

36. Политова Н.К., Игнатов А.В., Попова Е.И., Лукша В.Г., Володин В.В. Получение конъюгатов 20-гидроксиэкдизона. Международное совещание по фитоэкдистероидам. Сыктывкар, 1996. С. 112-113.

37. Политова Н.К., Пшунетлева Е.А., Лукша В.Г., Игнатов А.В., Володин В.В. Синтез неполярных конъюгатов экдистероидов. Новые научные методики. Сыктывкар, 2000. Вып. 58. 17 с.

38. Растительные ресурсы СССР. Т. 6. Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейство Asteraceae. Санкт-Петербург: Наука, 1993. С. 181-183.

39. Раушенбах И.Ю. Нейроэндокринная регуляция развития насекомых в условиях стресса. Новосибирск. Наука. 1990. 157 с.

40. Ревина Т.А., Карначук Р.А., Тайлашева Т.Я. Динамика содержания экдистерона в надземной части Serratula coronata L. и влияние на него света разного спектрального состава // Растит, ресурсы. 1986. Т. 22, № 1. С. 70-72.

41. Рихтер П. Порог проявления каннибализма у гусениц капустной совки (Mamcstra brassicac L.) Массовое разведение насекомых. Кишинев, 1984. С. 30-34.

42. Розенталь Д.А. Химические средства защиты у высших растений // В мире науки. 1986. №3. С. 56-62.

43. Росс Г., Росс Ч., Росс Д. Энтомология. М.: Мир. 1985. 570 с.

44. Саад М.Л. Серпуха венценосная {Serratula coronata L.) как перспективный источник фитоэкдистероидов: Автореф. канд. биол. наук. Киев, 1993. 25 с.

45. Сакаи М., Сато Я., Имаи С. Инсектициды. 1971: Яп. патент, кл. 30 F 352 (AOln), № 24264; РЖ Хим. 1972. 6Н № 587.

46. Селье Г. Очерки об общем адаптационном синдроме. М.:, Медицина, 1960.

47. Сикура Н.М., Почтарь С.И., Холодова Ю.Д., Вендт В.П. Изучение гормональной активности фитоэкдизонов на личинках комнатной мухи и гусеницах яблонной плодожорки. // Укр. биохим. журнал. 1978. Т. 50, № 1. С. 105-107.

48. Старец В.А. Методические указания по массовому лабораторному разведению совки С-черное на искусственных питательных средах. Кишинев, 1979. 13 с.

49. Старец В.А., Прант Н.Я., Штырбу М.Я. Групповое разведение капустной совки на искусственных питательных средах. В кн.: Вредители растений и их энтамофаги. Кишинев, 1978. С. 47-55.

50. Телитченко М.М., Остроумов С.Д. Введение в проблемы биохимической экологии. М.: Наука. 1990. 285 с.

51. Харборн Дж. Введение в экологическую биохимию. М.: Мир. 1985. 311 с.

52. Харина Т.Г. Эколого-биологические особенности серпухи венценосной в связи с интродукцией в Западной Сибири. Автореф. канд. биол. наук. Новосибирск, 1990. 16 с.

53. Холодова Ю.Д. Фитоэкдистероиды // Биохимия животных и человека. 1987. Т. 11. С. 27-41.

54. Черныш С.И. Способ определения активности адаптогенов: А.с. 637673

55. СССР, кп. G 01 п 33/16. Заявл. 21.03.776; опубл. 15.12.78.

56. Черныш С.И. Изменение секреции экдизона у Calliphora erythrocephala

57. Mg. и Barthra brassicae F. // Биол. науки. 1980. № 5. С. 51.

58. Черныш С.И. Реакция нейроэндокринной системы насекомых наповреждающие воздействия // Гормональная регуляция развития насекомых.1. Л.: 1983а. С. 118-128.

59. Яцюк К., Сегель Г.М. О выделении экдистерона. // Химия природн. соедин. 1970. 26. С. 281.

60. AdeIung D., Karlson P. Bine verbesserte. sehr empfindliche Methode zur biologischen Auswertung des Insecten hormones Ecdison. IIS. Insect Physiol. 1969. V. 15. P. 1301.

61. AdIer J.H., Grebenok R.J. Biosynthesis and distribution of insect-moulting hormones in plants a review // Lipids. 1995. V. 30. P. 257-262.

62. A1ison В., Witing P., Sarker S. Dinan L., Underwood E. Sik V., Rees H. 20-hydroxiecdisone-2-p-D-gIukopiranoside from the seeds Xcrophyllum ten ax II Biochem. system, ecol. 1997. V. 25. № 3. P. 225-261.

63. Arnault C., Slama K. Dietary effects of phytoecdysones in the Leek-Moth, Acrolepiopsis assectella Zell. (Lepidoptera: Ascrolepiidae). // J. Chem. Ecol. 1986. V. 12. P. 1979-1986.

64. BarbuIescu A. Tehnica de create in masa pe dieta artificiale a sfredelitornlui pommbului (Ostrinia nubilalis Hb.). Institutul de cercetarii pentru cereale §i plante tehnice fundulea. Probleme de protec{ia plantelor. Bucure§ti. 1986. V. VIII. P. 2528.

65. Behens W., Hoffman K.H. Function of ecdisteroids in adul insects // Acta endocrinol. 1982. Suppl. 246. P. 231-232.

66. Bergamasco R., Horn D.H.S. The biological activities of ecdysteroids and ecdysteroid analogues. // Progress in Ecdysone Research / Developments in Endocrinology: Ed. Hoffman J. Elsevier. Amsterdam. 1980. V. 7. P. 299-324.

67. Bergamasco R., Horn D.H.S. Distribution and role of Insect hormones in plants. // Invertebrate endocrinology. V. 1.: Endocrinology of Insects / Eds Downer R.G.H., Laufer H.New-York: A.R. Liss, 1983. P. 627-654.

68. Blackford M., Clarcke В., Dinan L. Tolerance of Egyptian cotton Ieafworm Spodoptcra littoralis (Lepidoptera: Noctuidae) to ingested phytoecdysteroids. // J Insect Physiol. 1996. V. 42. P. 931-936.

69. Blackford M., Clarcke В., Dinan L. Distribution and metabolism of exogenous phytoecdysteroids in the Egyptian cotton Ieafworm, Spodoptcra littoralis (Lepidoptera: Noctuidae). // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1997. V. 34. P. 329346.

70. Blackford M.I.P., Dinan L. The effects of ingested 20-hydroxyecdysone on the larvae of Aglais urticac, Inachis io, Cynthia cardui (Lepidoptera: Aretiidae) and Tyria jacobaca //J. Insect. Physiol. 1997. V. 43. P. 315-327.

71. Butenandt A., Karlson P. Uber die isolierung eines metamorphose hormone der insecten in kristallisierter form. // Z. Naturforschung. 1954. Bd. 9B. № 6. S. 389391.

72. Camps F. Plant ecdysteroids and their interaction with insects. In:Ecological chemistiy and biochemistiy of plant terpenoids (Eds. Harborne J.B. and Tomas-Barberan F.A.). Clarendon Press, Oxford. 1991. P. 331-376.

73. Camps F., Coll J. Insect allelochemicals from Ajuga plants // Phytochemistry. 1993. V. 32. P. 1361-1370.

74. C!ement C., Dinan L. Development of an bioassay for ecdysteroid-like and antiecdysteroid activites in plants. // Insect chemistry ecology. // Ed. Hrdy I. Prague: Academia. 1991. P. 221-226.

75. Darazy D., Dinan L., Maurer P., Marion-Poll F. Ecdysteroid perception by taste receptors of the European corn borer. // XIH-th Ecdysone Workshop. Programme and Abstracts. Jena. 1998. P. 38.

76. Descoins C., Marion-Poll F. Gustatory responses of caterpillars to different kinds of ecdysteroids. // Presentation at the XHth Ecdysone Workshop. Barcelona. 1996.

77. Devarenne T.P., Banalata S.-M., Adler J.H. Biosinthesis of ecdysteroids in Zea mays. // Phytochemistry. 1995. V. 40, №4. P. 1125-1131.

78. Dinan L. Ecdysteroid structure and hormonal activity. In: Koohnan J.(ed). Ecdysone: from chemistry to mode of action. New York:Thieme Medical Publisher Inc. 1989. P. 345-354.

79. Dinan L. The association of phytoecdysteroids with flowering in fat hen, Chenopodium album, and other members of the Chenopodiaceae. // Experientia. 1992. V. 48. P. 305-308.

80. Dinan L., Savchenko Т., Whiting P., Sarker S.D. Plant natural products as insect steroid receptor agonists and antagonists.// Pestic. Sci. 1999. V. 55. P. 331-335.

81. EhrIich P., Raven P.H. Butterflies and plants: A stady in coevolution. // Evolution. 1984. V. 18. P. 586-608.

82. Feyereisen R., Lagueux M., Hoffman J.A. Dynamics of ecdisone metabolism after ingestion in Locusta migratoria II Gen. and Сотр. Endocrinol. 1976. V. 29. P. 319-327.

83. Fox L.R. Cannibalism in natural populations. // Ann. Rev. Ecol. System. 1975. V. 6. P. 87-106.

84. Fraenkel G. Hormone causing pupation in the blowfly Calliphora erythrocephala. II Proc. Roy. Soc. London. B. Biol. Sci. 1935. V. 118. P. 1-12.

85. Gade G., Hoffmann K.H., Spring J.H. Hormonal regulation in insects: facts, gaps, and future directions// Physiological Reviews. 1997. У.11. P. 963-1032.

86. Galbraith M.N., Horn D.H.S. An Insect-moulting hormone from a plant. // J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1966. V. 24. P. 905-906.

87. Grieneisen M.L. Recent advances in our knowledge of ecdysteroid biosinthesis in insects and crustaceans.// Insect Biochemistry and Molecular Biology. 1994. V. 24. P. 115-132.

88. Hagedorn H.H. Physiological roles of hemolimph ecdysteroids in the adult insect. In: J. Koolman (ed.). Ecdysone from Chemistry to Mode of Action. Georg Thieme Verlag, Stuttgart. 1989. P. 279-289.

89. Harborne J.B. Introduction to ecological biochemistry. L.: Acad, press, 1982. 278 p.; Third edition: 1988. 356 p.

90. ЮЗ.НагЬогпе J.B. Recent advances in chemical ecology // Natur. Products. Rep. 1986. V. 3, № 4. P. 323-344.

91. Harborne J.B. Chemical signals in the ecosystems // Ann. Bot. 1987. V. 60, suppl. 4. P. 39-57.

92. Hikino H., Takemoto Т. Ecdysones of plant origin. // Invertebrate endocrinology and hormonal heterophylly // Ed. Burdette W. 1. N.Y.: Springerverlag. 1974. P. 185-203.

93. Hirn M.N., Delaage М.Л. Radioimrnunological approaches to the quantification of ecdysteroids. // Progress in Ecdysone Research / Ed. Hoffman J. A. -Amsterdam: Elsevier N. -Holl. Biomed. Press. 1980. P. 69-82.

94. Hoffman J.A., Lagneux M., Hirn M., De Reggi M., Goltzene F., Feyereisen R. Evolution du taux des ecdysteroides chez les imagos males et femelles de Locusta migratoria L. //Coll. Intr. CNRS Lille. 1975. V. 251. P. 359-365.

95. Hoffmeister H., Gmtzmacher H.F., Dunnebeil K. Studies on the structure and biochemical action of ecdysterone. // Z. Naturforschung. 1967. Bd. 22B, № 1. S. 66-70.

96. Jizba J., Herout V., Sonn F. Isolation of ecdysterone (cmstecdysone) from Polipodium vulgare L. Rhizomes.//Tetrahedron Lett. 1967. V. 18. P. 1689-1691.

97. O.Jones C.G., Firn R.D. The role of phytoecdysteroids in bracken fern, Plcridium aquilinum L. against phytophagous insect attack. //J. Chem. Ecol. 1978. № 4. P. 117-138.

98. I Jones C.G., Firn R.D. On the evolution of plant secondary chemical diversity. // Philosoph. Trans R. Soc. London, B. 1991. V. 333. P. 273-280.

99. Kaplanis J.N., Tabor L.A, Thompson M.J., Robbins W.E., Shortine T.J. Assay for ecdysone (moulting hormone) activity using the housefly, Musca domcslica L. // Steroids, 1966a. V. 8, № 2. P. 625-631.

100. Kaplanis J.N.,Thompson M.J., Yamamoto R.T., Robbins W.E. and Louloudes S.J. Ecdysones from the pupa of the tobacco hornworm, Manduca sexta (Johansson)//Steroids, 1966b. Vol. 8. P. 605.

101. Kaplanis J.N., Weirich G.F., Svoboda J.A., Thompson M.I., Robbins W.E. In: Progress in ecdysone research. Ed. J.A. Hoffman; Elsevier North-Holland Biomedical Press. Amsterdam; New York; Oxford. 1980. P. 163-186.

102. Karlson P. Biochemical studies on insect hormones. // Vitamins and hormones, 1956. V. 14. P. 227-265.

103. Karlson P. New concepts on the mode of action of steroid hormones // Perspectives in Biology and Medicine. 1963. V.6. P. 203 214.

104. Karlson P., Shaaya E. Der Ecdysontiter wahrend der Insektetwicklung. 1. Eine Methode lur Bestimmung des Ecdysongehalts. //J. Insect. Physiol. 1964. V. 10. P. 797-804.

105. Kholodova Yu.D. Phytoecdysteroids: biological effects, application in agriculture and complementary medicine. // Укр.бкшм. журн. 2001. Т. 73, № 3.1. C. 21-29.

106. Kobayashi М., Nakanishi К., Koreeda М. The moulting hormone activity of ponasterones on Musca domestica (Diptera) // Steroids. 1967. V. 9. P. 529-536

107. Koelle M.R., Talbot W.S., Segraves W.A., Bender M.T., Cherbas P., Hogness

108. D.S. The Drosophila EcR gene encodes an ecdysone receptor , a new member of the steroid receptor superfamily // Cell. 1991. V. 67. P. 59-77.

109. Koolman J. In: Regulation of insect development and behavior, Sehnal F (ed), Zabza A., Menn 1.1., Cymborowsky B. Techinical Univ. Wroclaw, 1981. V. 7, № 22. P. 93-106.

110. Koolman J. Ecdysteroides. // Zool. Sci. 1990. № 7. P. 563-580.

111. Koreeda M., Nakanishi K., Goto M. Ajugalactone, an insect-moulting inhibitor as tested by the Chilo dipping method. // J. Amer. Chem. Soc. 1970. V. 92. P. 75127513.

112. Kubo I., Klocke J.A., Asano S. Effects of ingested phytoecdysteroids on the growth and development of two Lepidopterous larvae. //J. Insect Physiol. 1983. V. 29. P. 307-316.

113. Kubo I., Komatsu S., Asaka Y., de Boer G. Isolation and identification of apolar metabolites of ingested 20-hydroxyecdysone in frass of Heliothis vircsccns larvae. //J. Chem. Ecol. 1987. V. 13. P. 785-795.

114. Lafont R. Ecdysteroids and related molecules in animals and plants. // Archives oflnsect Biochem. and Physiol. 1997. V. 35. № 1/2. P. 3-20.

115. Lafont R. Understanding insect endocrine systems: molecular approaches. // Entomologia Experimental is et Applicata. 2000. V. 97. P. 123-136.

116. Lafont R., Bouthier A., Wilson I.D. Phytoecdysteroids: structure, occurence, biosynthesis and possible ecological significance. // Insect Chemical Ecology / Ed. Hrdy I. The Hague: Academia Praha and SPB Academic Publ. 1991. P. 197-214.

117. Magai R.N., Decker W.L., Keasler A.J. Simulation models for European corn borer postdiapause morphogenesis and early infestation of maize in Missouri, USA. Int. I. Biometeorol. 1997. V. 40. P. 128-134.

118. Marion-PoII F., Maurer P., Darazy D., Descoins C.L., Dinan L. Gustatory perception of ecdysteroids in larvae of four Lepidoptera // XIII Ecdysone Workshop. Programma and Abstracts. Jena. 1998. P. 37.

119. Matsuoka Т., Imai S., Sakai M., Kamada M. Studies on phytoecdysones a Review of Our Works. // Annu. Rep. Takeda Res. Lab. 1969. V. 28. P. 221-271.

120. Nakanishi K., Koreeda M., Dasaki S., Chang M.L., Hsu H.Y. Insect hormones. 1. The structure of Ponasteron A, an Insect-moulting hormone from the leaves of Podocarpus nakaii Haj. //J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1966. V. 24. P. 915-917.

121. Porcheron P., Moriniere M., Grassi J., Pradelles P. Development of an enzyme immunoassay for ecdysteroids using acetylcholinesterase as label // Insect Biochem. 1989. V. 19, №2. P. 117-122

122. Rees H.H. Ecdysteroid biosynthesis and inactivation in relation to function.// European Jornal of Entomology. 1995. V. 92. P. 9-39.

123. Reum L., Koolman J. Radioimmunoassay of ecdysteroids // Ecdysone. From Chemistry to mode of action / Ed. Koolman J. Stuttgart New York: Georg Thieme Verlag. 1989. P. 131-143.

124. Robbins W.E., Kaplanis J.N., Thompson M.J., Shortino T.J., Joyner S.C. Ecdysones and synthetic analogs: moulting hormone activity and inhibitive effects on insect growth, metamorphosis and reproduction. // Steroids. 1970. V. 16. № 1. P. 105-125.

125. Robinson P.D., Morgan E.D., Wilson I.D., Lafont R. The metabolism of ingested and injected 3H.-ecdysone by final instar larvae of Heliothis armigera. II Physiol. Entomol. 1987. V. 12. P. 321-330.

126. Sato Y., Sakai M., Imai S., Fujioka S. Ecdysone activity of plant-originated moulting hormones applied on the body surface of Lepidopterous larvae. // Appl. Entomol. Zoo I. 1968. V. 3, № 1. P. 49-51.

127. SchmeIz E.A., Grebenok R.J., Ohnmeiss J.E., Bowers W.S. Interaction between Spinacia olcracea and Bradysia impaticns: A role for phytoecdysteroids. // Arch. Insect Biochem. and Physiol. 2002. V. 51. P. 204-221.

128. Shimizu I., Adachi S., Kato M. Acceleration of the time of mounting and larval ecdysis by electroshoks in the silkworm, Bombix mori L. // J. Sericult. Sci. Jap. 1978. V. 47. №3. P. 226.

129. Singh H., Pandey P.N. Experimental assessment of effects of larval crowding on development and reproduction in Diacrisia obliquac Wlk. (Lep., Arctiidae). // Biochem. and Exp. Biol. 1980. V. 16,№ 2. P. 157-164.

130. Slama K. Illusive functions of the prothoracic gland in Galleria. // Acta Entomol. Bohemoslov. 1983. V. 80. P. 161-176.

131. Slama K., Abubakirov N.K., Gorovits M.B., Baltaev U.A., Saatov Z. Honnonal activity of ecdysteroids from certain Asiatic plants. // Insect Biochem. Molec. Biol. 1993. V. 23. № l.P. 181-185.

132. SIama K, Lafont R. Insect hormones ecdysteroids: their presence and actions in vertebrates // Eur. J. Enthomol. 1995. V. 92. P. 355-377.

133. Spindler K.D. Honnonal role of ecdysteroids in Crustacea, Chelicerata and other Arthropods // Ecdysone: From Chemistry to mode of action. Ed. Koolman J. Stuttgart-New York. 1989. P. 290-293.

134. Takemoto Т., Ogawa S., Nishimoto N. Isolation of the moulting hormones of insects from Achyranthes radix II Yakugaku Zasshi. 1967. V. 87. P. 325-327.

135. Tanaka Y. The different effects of ecdysone and 20-hydroxyecdysone on the induction of larval ecdysis in the silkworm, Bombix mori (Lepidoptera: Bombycidae). // Eur. J. Entomol. 1995. V. 92. P. 155-160.

136. Tanaka Y., Asaoka K., Takeda S. Different feeding and gustatory responses to ecdysone and 20-hydroxyecdysone by larvae of the silkworm Bombix mori II J. Chemical ecology. 1994. V. 20. P. 125-133.

137. Tanaka Y., Naya S. -I. Dietary effect of ecdysone and 20-hydroxyecdysone on larval development of two Lepidopteran species. // Appl. Entomol. Zool. 1995. V. 30. P. 285-294.

138. Tanaka Y., Takeda S. Ecdysone and 20-hydroxyecdysone supplements to the diet affect larval development in the Silkworm Bombix mori, differently. // J. Insect Physiol. 1993. V. 39. P. 805-809.

139. Thomson J.A., Imray F.P., Horn D.H.S. An improved Calliphora bioassay for insect-moulting hormones. // Austral. J. Exp. Biol, and Med. Sci. 1970. V. 48. № 3. P. 321-328.

140. Tomashko K.H. Ecdysteroids from Pycnogonum litoralc (Arthropoda, Panthopoda) act as a chemical defence against Carcinus mamas (Crustacea, Decapoda). //J. Chemical Ecology. 1994. V. 20. P. 1445-1455.

141. Van Dyk J. How corn is damaged by the European corn borer. http://www.ent.iastate.edu/cornborer/howdamage/damage 1 .html

142. VoIodin V.V., Alexeeva L.I., Kolegova N.A. Further ecdysteroids from Serratula coronata L. (Asteraceae) // Biochemical systematics and ecology. 1998. V. 26. P. 459-461.

143. VoIodin V., Dinan L., Chadin I. Screening Results of European North-East Russia for Ecdysteroids // 14th Ecdysone Workshop: Abstracts. Rapperswill, 2000. P. 55.

144. Williams C.M. Ecdysone and Ecdysone-Analogues: their assay and action on Diapausing pupae of the Cynthia silkworm. II Biol. Bull. 1968. V. 134. № 2. P. 344355.

145. Zhang M., Kubo I. Possible function of ecdysteroid-22-O-acyItransferase in the larval gut of Tobacco Budworm, Heliothis vircsccns II Chem. Ecol. 1992. V. 18. P. 1139-1149.

146. Zhang M., Kubo I. Metabolic fate of ecdysteroids in larval Bombix mori and Heliothis vircsccns. И Insect Biochem. Mol. Biol. 1993. V. 23. P. 831-843.

147. Zitnan D., Kingan T.G., Hennesman J.L., Adams M.E. Identification of ecdysis triggering honnone from an epitracheal endocrine system. // Science. 1996. V. 271. P. 88-91.