Частота встречаемости и клиническое значение генетических полиморфизмов у пациентов с болезнью Виллебранда тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Чернова Екатерина Владимировна

• Чернова Екатерина Владимировна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Чернова Екатерина Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННОЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ О СТРУКТУРЕ И ФУНКЦИИ ФАКТОРА ВИЛЛЕБРАНДА. КЛИНИЧЕКОМ ЗНАЧЕНИИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ФАКТОРА V, ПРОТРОМБИНА И ТРОМБОЦИТАРНЫХ РЕЦЕПТОРОВ

1.1 Наследственная геморрагическая коагулопатия-болезнь Виллебранда

1.1.1 Структура и функции фактора Виллебранда

1.1.2 Фактор Виллебранда и его роль в механизмах тромбообразования, ангиогенезе и клеточной пролиферации

1.1.3 Болезнь Виллебранда

1.2 Наследственные тромбофилии

1.2.1 Определение понятия и история развития учения о тромбофилии

1.2.2 Фактор свертывания крови V (проакцелерин)

1.2.3 Фактор свертывания крови II (протромбин)

1.2.4 Влияние полиморфизма гена фактора V и гена протромбина на возможные нарушения свертывающей системы крови у беременных

1.3 Полиморфизм генов тромбоцитарных рецепторов

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика пациентов

2.2 Характеристика группы контроля

2.3 Методы статистической обработки результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Сопоставимость индивидуумов основной и контрольной группы по возрасту

3.2. Результаты исследования геморрагического и тромботического анамнеза у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа и здоровых женщин - доноров крови

3.3. Результаты лабораторного исследования количественных и качественных показателей свертывающей системы крови у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа и здоровых женщин - доноров крови

3.4. Изучение частоты встречаемости полиморфизма FV Leiden у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа и у здоровых женщин -доноров крови

3.4. Изучение частоты встречаемости полиморфизма FII (G20210A) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа и у здоровых женщин -доноров крови

3.5. Изучение влияния полиморфизма FV Leiden на активность клоттинговых факторов (vWF:Ag, vWF:RCo и FVIILC) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа

3.6. Изучение влияния полиморфизма FII G20210A на активность клоттинговых факторов (vWF:Ag, vWF:RCo и FVIII:C) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа

3.7. Изучение влияния полиморфизма FV Leiden на клинические проявления геморрагического диатеза у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа

3.8. Изучение влияния полиморфизма FII (G20210A) на клинические проявления геморрагического диатеза у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа

3.9. Изучение частоты встречаемости полиморфизма генов тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), гена интегрина а-2 GPIa (C807T), GPIb (A1/A2) и их возможного влияния на активность клоттинговых факторов (vWF:Ag, vWF:RCo и FVIILC) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа и у здоровых женщин - доноров крови

3.10. Изучение влияния полиморфизма генов тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), гена интегрина а-2 GPIa (C807T) и GPIb (A1/A2) на клинические проявления геморрагического диатеза у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Частота встречаемости и клиническое значение генетических полиморфизмов у пациентов с болезнью Виллебранда»

Актуальность темы исследования

Стратификация тромботических и геморрагических рисков является важной, часто каждодневной, задачей для большинства клиницистов. Широкое внедрение в клиническую практику антикоагулянтной и антиагрегантной терапии позволило, с одной стороны, добиться значительных успехов в лечении и профилактике тромбозов и тромбоэмболических осложнений, но, с другой стороны, создало риск развития спонтанных и/или трудно контролируемых кровотечений.

Наиболее распространенной геморрагической коагулопатией является болезнь Виллебранда - наследственное нарушение гемостаза, обусловленное количественным и/или качественным дефицитом фактора Виллебранда, одного из важнейших белков свертывающей системы крови. Клинической особенностью болезни Виллебранда является «мягкий» и «спонтанный» характер геморрагического диатеза: в определенные моменты времени признаки чрезмерной кровоточивости могут не проявляться даже при инвазивных манипуляциях, а иногда можно столкнуться с развитием спонтанного кровотечения из внешне интактных слизистых. Известен факт развитие геморрагического диатеза, иногда значительного, у пациентов с болезнью Виллебранда в ответ на назначение малых дох ацетилсалициловой кислоты, что хорошо объясняется наличием у пациентов с болезнью Виллебранда дисфункции тромбоцитов. Отсутствие обязательных, часто повторяющихся тяжелых кровотечений у индивидуума с болезнью Виллебранда нередко не позволяет клиницистам своевременно распознать это заболевание. (Колосков А.В., 2017; Чернова Е.В., 2018).

В последние годы большое внимание уделяется изучению полиморфизма генов фактора V G1691A (FV Leiden), протромбина G20210A (FII G20210A), тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), интегрин а-2 GPIa (C807T) и GPIb (A1/A2) с целью стратификации риска тромбоэмболических осложнений и/или репродуктивных проблем у женщин, для объяснения

патогенеза которых предлагается тромботический механизм (Bates S. et al., 2012). В тоже время, описано несколько случаев носительства гетерозиготных мутаций гена фактора V G1691A (FVLeiden) или гена протромбина G20210A (FII G20210A) у пациенток с болезнью Виллебранда и достаточно яркими проявлениями геморрагического диатеза (Колосков А.В. и др., 2013).

В связи с вышеизложенным, представляется актуальным выполнить исследование частоты встречаемости основных генетических полиморфизмов, ассоциируемых с тромбофилией (V G1691A (FV Leiden) и G20210A (FII G20210A)), а также частоту встречаемости полиморфизмов генов тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), интегрин а-2 GPIa (C807T) и GPIb (A1/A2) и изучить их возможное влияние на проявления геморрагического диатеза и лабораторные показатели у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа.

Степень разработанности темы

Отсутствуют исследования частоты встречаемости генетических полиморфизмов гена фактора V G1691A (FV Leiden) и гена протромбина G20210A (FII G20210A) и их влияния на клинические проявления геморрагического диатеза, динамику лабораторных характеристик основных белков свертывающей системы крови, выполненные на большой, нозологически однородной группе пациенток с наиболее часто встречающейся геморрагической коагулопатией - болезнью Виллебранда 1 типа.

Имеются исследованиях полиморфизма генов тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), интегрин а-2 GPIa (C807T) и GPIb (A1/A2) и их возможного влияния на развития острого коронарного синдрома, острого нарушения кровообращения (Tsantes AE et al., 2007; Liu H et al., 2017; Чернова Е.В. и др., 2019), однако отсутствуют данные о возможной

взаимосвязи между указанными полиморфизмами и клинико-лабораторными характеристиками при болезни Виллебранда 1 типа.

Цель исследования

Оценить частоту встречаемости и клиническое значение основных генетических полиморфизмов, ассоциируемых с тромбофилией (FV Leiden и FII G20210A), и полиморфизм генов тромбоцитарных рецепторов GPIb (A1/A2), интегрин а-2 GPIa (C807T), GPIIIa (1a/1b) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа.

Задачи исследования

1. Изучить методом полимеразной цепной реакции и оценить частоту встречаемости полиморфизма G1691A гена фактора V (FVLeiden) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа и сопоставить с частотой встречаемости данного полиморфизма в контрольной группе здоровых доноров крови.

2. Выполнить клинико-лабораторное сопоставление и оценить влияние полиморфизма гена G1691A фактора V (FV Leiden) на степень выраженности клинических проявлений геморрагического диатеза и лабораторные характеристики свертывающей системы крови (vWF:Ag, vWF:RCo, FVIILC) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа.

3. Изучить методом полимеразной цепной реакции и оценить частоту встречаемости полиморфизма G20210A гена протромбина у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа и сопоставить с частотой встречаемости данного полиморфизма в контрольной группе здоровых доноров крови.

4. Выполнить клинико-лабораторное сопоставление и оценить влияние полиморфизма G20210A гена протромбина на степень выраженности геморрагического диатеза и лабораторные характеристики свертывающей системы крови (vWF:Ag, vWF:RCo, FVIILC) у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа.

5. Изучить методом полимеразной цепной реакции и оценить частоту встречаемости полиморфизмов генов тромбоцитарных рецепторов GPIb (A1/A2), интегрин а-2 GPIa (C807T), GPIIIa (1a/1b) и сопоставить с частотой встречаемости данного полиморфизма в контрольной группе здоровых доноров крови. Провести сопоставление клинических и лабораторных данных в зависимости от генетических полиморфизмов тромбоцитарных рецепторов у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа.

Научная новизна исследования

Установлено, что у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа, гомозиготная мутация гена фактора V G1691A (FV Leiden) генотип А/А встречается с частотой 2,2%, гетерозиготная мутация гена фактора V G1691A (FV Leiden) генотип A/G-8,8%, гетерозиготная мутация гена протромбина G20210A, генотип A/G встречается с частотой 13,9%, что достоверно выше по сравнению с группой контроля. При этом достоверной разницы в степени геморрагических проявлений, уровня активности фактора Виллебранда (vWF:RCo), антигена фактора Виллебранда (vWF:Ag) и прокоагулянтной активности фактора VIII (FVIII:C) у пациенток с болезнью Виллебранда нет.

Как показали результаты нашего исследования, частота встречаемости наиболее широко обсуждаемых в научной литературе полиморфизмов генов тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), интегрин а-2 GPIa (C807T) и GPIb (A1/A2) у пациенток с диагностированной болезнью Виллебранда 1 типа не имела статистически значимых различий с таковой у здоровых женщин - доноров крови. При этом генотип 1a-1b гена тромбоцитарного рецептора GPIIIa, частота встречаемости которого у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа составила 23,5%, что оказалась достоверно выше по сравнению с частотой встречаемости данного генотипа у здоровых женщин. Статистически значимых различий в клинических и лабораторных показателях (vWF:Ag, vWF:RCo и FVIII:C), у женщин с болезнью

Вилебранда 1 типа в зависимости от полиморфизма генов, кодирующих тромбоцитарные рецепторы GPIIIa, GPIa и GPIb не выявлены.

Практическая значимость исследования

Впервые на большой и нозологически однородной группе пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа, продемонстрирована высокая частота встречаемости гомозиготной мутация гена фактора V G1691A (FV Leiden) (генотип А/А) и гетерозиготной мутации (генотип А/G) - 2,2% и 8,8% (соответственно), а также высокая частота встречаемости гетерозиготной мутации гена протромбина (G20210A) (генотип A/G) - 13,9%. Данные показатели были достоверно выше по сравнению с аналогичными, исследованными в группе здоровых женщин - доноров крови.

Впервые при выполнении клинико-лабораторного сопоставления продемонстрировано, что носительство гомозиготной или гетерозиготной мутации FV Leiden, а также гетерозиготной мутации FII G20210A не уменьшало выраженность клинических проявлений геморрагического диатеза у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа, а также не оказывало какого-либо влияния на лабораторные характеристики основных свертывающих факторов, такие как антиген фактора Виллебранда (vWF:Ag), ристоцетин ко-факторная активность фактора Виллебранда (vWF:RCo) и прокоагулянтную активность фактора VIII (FVIILC).

Впервые продемонстрировано, что частота встречаемости полиморфизмов генов тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), интегрин а-2 GPIa (C807T) и GPIb (A1/A2) у пациенток с диагностированной болезнью Виллебранда 1 типа не имела статистически значимых различий с таковой у здоровых женщин - доноров крови и является широко распространенным явлением, не оказывающим какого-либо видимого влияния на степень выраженности геморрагического диатеза и лабораторные характеристики основных свертывающих факторов, такие как антиген фактора Виллебранда (vWF:Ag), ристоцетин ко-факторная активность фактора Виллебранда

(vWF:RCo) и прокоагулянтную активность фактора VIII (FVIILC). При этом генотип 1a-1b гена тромбоцитарного рецептора GPIIIa, частота встречаемости которого у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа составила 23,5%, что было достоверно выше по сравнению с частотой встречаемости данного генотипа у здоровых женщин-доноров крови, но также не оказывало какого-либо влияния на клинические проявления геморрагического диатеза и лабораторные показатели.

Теоретическая значимость исследования

Результаты исследования значительно дополняют современные представления о роли полиморфизма генов клоттинговых факторов и генов тромбоцитарных рецепторов в реализации гемостатического потенциала свертывающей системы крови и значительной роли функциональной активности фактора Виллебранда в реализации геморрагического фенотипа у человека.

Методология и методы исследования

В работе использованы клинико-лабораторные, молекулярно-генетические и статистические методы исследования.

Положения, выносимые на защиту

1. Установлено, что полиморфизм G1691A гена фактора V (FV Leiden) встречается у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа с частотой 8,8% для гетерозиготного варианта и частотой 2,2% для гомозиготного варианта, что превышает частоту встречаемости данного полиморфизма в контрольной группе здоровых доноров крови (1,8% для гетерозиготного варианта, гомозиготной мутации в контрольной группе здоровых доноров крови не выявлено).

2. Носительство как гетерозиготного, так и гомозиготного варианта мутации Лейден не оказывает видимого протромботического эффекта у

пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа, не уменьшает степень выраженности геморрагического диатеза и не влияет на такие показатели свертывающей системы крови, как vWF:Ag, vWF:RCo, FVIILC.

3. Установлено, что полиморфизм G20210A гена протромбина встречается у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа в гетерозиготном варианте с частотой 13,9%, что значительно превышает частоту встречаемости данного полиморфизма в контрольной группе здоровых доноров крови (2,7%).

4. Носительство гетерозиготной мутации G20210A гена протромбина не оказывает видимого протромботического эффекта у пациенток с болезнью Виллебранда1 типа, не уменьшает степень выраженности геморрагического диатеза и не влияет на такие показатели свертывающей системы крови, как vWF:Ag, vWF:RCo, FVIILC.

5. Полиморфизм генов тромбоцитарных рецепторов GPIIIa (1a/1b), гена интегрина а-2 GPIa (C807T), GPIb (A1/A2) широко представлен как у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа, так и у лиц контрольной группы здоровых доноров. Не выявлено корреляционной связи между исследованными полиморфизмами, лабораторными характеристиками гемостаза и выраженностью клинических проявлений геморрагического диатеза у пациенток с болезнью Виллебранда 1 типа.

Степень достоверности, публикации и апробация результатов

Степень достоверности результатов выполненного исследования подтверждается объемом исследований, набором и характером оцениваемых показателей, использованием статистических программ для обработки полученных данных.

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, из них 4 в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для опубликования научных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата и доктора медицинских наук.

Результаты, полученные в процессе выполнения работы, были представлены на 91 Всероссийской научно-практической конференции с международным участием Мечниковские чтения (Санкт-Петербург, 2018), объединенном Конгрессе «Congress on Open Issues in Thrombosis and Hemostasis» совместно с 9-й Всероссийской конференцией по клинической гемостазиологии и гемореологии (Санкт-Петербург, 2018).

Личный вклад автора

Автором лично выполнено: изучение источников литературы, планирование научно-исследовательской работы, обследование пациенток с болезнью Виллебранда, обследование здоровых женщин - доноров крови контрольной группы, апробация опросника для изучения геморрагического и тромботического диатеза, забор образцов крови для молекулярно-генетического исследования. Соискателем создана база данных пациенток с болезнью Виллебранда, выполнен сбор и анализ полученных в ходе диссертационного исследования результатов, проведена статистическая обработка и интерпретация результатов. Диссертант лично докладывала результаты научно-исследовательской работы в выступлениях на научно -практических конференциях и участвовала в написании научных публикаций.

Структура и объем работы

Диссертационная работа изложена на 106 страницах машинописного текста и состоит из введения, глав обзора литературы, описания методов исследования, результатов исследования, заключения, практических рекомендаций и библиографии. Список литературы включает 120 источников литературы, из них 22 отечественных и 98 иностранных. Работа содержит 1 рисунок и 13 таблиц.

Внедрение результатов исследования

Основные положения научно-исследовательской работы внедрены в учебный процесс кафедры гематологии и трансфузиологии ФГБОУ ВО «Северо-Западный Государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» МЗ РФ. Результаты исследования применяются в лечебно-диагностической работе СПб ГБУЗ «Городская больница №26».

ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННОЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ О СТРУКТУРЕ И ФУНКЦИИ ФАКТОРА ВИЛЛЕБРАНДА. КЛИНИЧЕКОМ ЗНАЧЕНИИ

ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ФАКТОРА V, ПРОТРОМБИНА И ТРОМБОЦИТАРНЫХ РЕЦЕПТОРОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Наследственная геморрагическая коагулопатия-болезнь

Виллебранда.

1.1.1 Структура и функции фактора Виллебранда

Фактор Виллебранда - большой мультимерный гликопротеин, является

одним из важнейших факторов свертывания крови, обеспечивающий реализацию механизма остановки кровотечения. Этот адгезивный гемостатический белок представляет собой многофункциональную молекулу, которая реализует свои физиологические функции, принимая активное участие в запуске механизма адгезии тромбоцитов в зоне повреждения эндотелиальной выстилки сосуда. Кроме того, фактор Виллебранда связывается с коллагеном, обнажающимся при повреждении стенки кровеносного сосуда. Важным свойством этого гемостатического белка является его ко-факторная активность по отношении к клоттинговому фактору УШ ^УШ), проявляющаяся в стабилизации последнего, обеспечении его физиологического клиренса и доставку к месту повреждения эндотелия сосуда. Генетически детерминированный количественный и/или качественный дефицит фактора Виллебранда приводит к развитию самого частого заболевания системы гемостаза - болезни Виллебранда. Уникальной характеристикой фактора Виллебранда является волнообразность в реализации его функциональной активности (Колосков А.В., 2017; Чернова Е.В., 2018).

Ген фактора Виллебранда локализуется на 12 хромосоме (короткое плечо). Ген фактора Виллебранда является одним из самых крупных генов человека. Его многочисленные точечные мутации являются первопричиной

полиморфизма в реализации функциональных качеств фактора Виллебранда. При этом, если в случаях развития у человека гемофилии в основе реализации геморрагического фенотипа лежат, как правило, достаточно крупные единичные мутации соответствующего гена FVIII или гена фактора IX (FIX), то при болезни Виллебранда подобных повторяющихся с высокой частотой крупных мутаций нет. Однако, выявлена существенная корреляционная связь между локализацией точечной мутации/мутаций в гене фактора Виллебранда и реализующимся фенотипом болезни Виллебранда. Сообщается о нескольких сотнях наиболее часто встречающихся одиночных нуклеотидных заменах в различных локусах гена фактора Виллебранда. Таким образом, чрезвычайная изменчивость структуры гена предопределяет мозаичную природу белка фактора Виллебранда и широкую вариабельность в реализации его функции, что непосредственно определяет частоту и степень выраженности геморрагических проявлений (Колосков А.В. и др., 2013; Ng C et al., 2015; Чернова Е.В., 2018).

Изучение гена фактора Виллебранда связано с известными сложностями, обусловленными наличием в геноме человека молчащего псевдогена. Псевдоген фактора Виллебранда расположен на длинном плече 22 хромосомы. Гомология (схожесть в структуре аминокислотных последовательностей) псевдогена и гена фактора Виллебранда составляет около 97%. Псевдоген может иногда служить источником мутаций, которые встраиваются в локус гена фактора Виллебранда. Например, некоторые молчащие мутации и некоторые потенциально клинически значимые мутации выявляются в экзонах 27 и 28 гена фактора Виллебранда у лиц с болезнью Виллебранда. Варианты этих последовательностей в псевдогене фактора Виллебранда могли быть конвертированы в ген фактора Виллебранда. Частота межхромосомных обменов на сегодняшний день неизвестна (Patracchini P еt al., 1989; Eikenboom JC et al., 1994; Колосков А.В. и др., 2013; Чернова Е.В., 2018).

Синтез фактор Виллебранда происходит в клетках эндотелия и мегакариоцитах костного мозга. Синтезированный фактор хранится в тельцах Вейбеля-Палада эндотелиальных клеток и а-гранулах тромбоцитов. Фактор Виллебранда состоит из структурных доменов, расположенных в следующем порядке: D1-D2-D'-D3-A1-A2-A3-D4-C1-C2-C3-C4-C5-C6-CK и соответствующих связующих участков (Springer T 2014; Чернова Е.В., 2018).

Первые четыре домена (D1, D2, D и D3) служат для регуляции сборки мультимеров (множественные мономеры, удерживаемые вместе через нековалентные связи). Домены D и D3 также позволяют фактору Виллебранда связываться с другим коагуляционным фактором - FVIII.

FVIII переносится фактором Виллебранда по кровотоку в неактивной форме. В случае повреждения сосуда и возникновении пускового момента (триггера) для активации процесса свертывания крови, FVIII отделяется от фактора Виллебранда в зоне повреждения и образует комплекс с коагуляционным FIX. Домен A1 фактора Виллебранда позволяет образовывать связь с гликопротеином GpIb находящимся на поверхности тромбоцитарной мембраны. Это взаимодействие стабилизирует тромбоциты и, в свою очередь, способствует взаимодействию между рецепторами тромбоцитов и их лигандами. Домен A3 отвечает за образование связи с коллагеном, что позволяет фактору Виллебранда фиксироваться к стенкам кровеносных сосудов при нарушении целостности эндотелиальной выстилки и обнажении коллагеновых волокон. В целом, функциональные особенности доменов, образующих структуру фактора Виллебранда, определяют реализацию специфических свойств этого белка свертывающей системы крови: позволяют ему доставлять FVIII к месту повреждения стенки сосуда, фиксироваться к коллагену в месте нарушения целостности эндотелия и способствовать агрегации тромбоцитов (Springer T, 2014; Колосков А.В., 2017; Чернова Е.В., 2018).

После отщепления сигнального пептида субединицы фактора Виллебранда димеризуются в эндоплазматическом ретикулуме. Когда

димеры фактора Виллебранда поступают в аппарат Гольджи, кислая среда и высокая концентрация ионов Са2+ стимулирует образование мультимеров фактора Виллебранда посредством образования дисульфидных связей между D3 доменами. Увеличивающийся мультимер фактора Виллебранда выстраивается в правостороннюю спираль, сворачиваясь в трубчатую конформацию для хранения в тельцах Вейбеля-Паладе. При контакте и слиянии телец Вейбеля-Паладе с эндотелиальной мембраной, рН среды поднимается до 7,4 и мультимеры фактора Виллебранда теряют трубчатую конформацию, распускаются в длинные нити. Протеаза ADAMTS13, расщепляет связь Y1605-M1606 в домене А2, что приводит к быстрой трансформации мультимеров высокой молекулярной массы в более мелкие структуры (содержащие около 40 мономеров) с молекулярной массой менее 10000 кДа. В результате регулирующего действия протеазы ADAMTS13, в сосудистом русле циркулируют молекулы фактора Виллебранда различной молекулярной массы (от единичных димеров низкой молекулярной массы, до полимеров высокой молекулярной массы, состоящих из 20 и более димеров) (Springer T, 2014; Чернова Е.В., 2018; Колосков А.В. и др., 2019).

В последовательность фактора Виллебранда включено 234 остатка цистеина (8,3%), что в четыре раза выше среднего показателя для белков человека. Цистеин способствует организации доменов, которые формируют структуру фактора Виллебранда. Некоторые остатки цистеина образуют дисульфидные мостики во время синтеза, но подвержены редукции во время секреции (позиции 889, 898, 2448, 2451, 2453, 2490, 2491, 2528, и 2533). Учитывая важность цистеина для структуры фактора Виллебранда, неудивительно, что мутации цистеина могут влиять на различные этапы жизненного цикла фактора Виллебранда (Shapiro et al., 2014; Чернова Е.В., 2018).

Исследования, основанные на методе микроскопии с высоким разрешением, показали, что фактор Виллебранда циркулирует в глобулярной форме в условиях низкого напряжения силы сдвига жидкости, но переходит в

удлиненную форму под действием повышенных гидродинамической силы сдвига жидкости. Эти структурные изменения имеют решающее значение для реализации функций фактора Виллебранда, и наиболее ярко проявляются во взаимодействии с тромбоцитами и протеолитическим ферментом ADAMTS13 (Springer TA, 2011). Также было продемонстрировано, что напряжение силы сдвига жидкости оказывает ряд других важных воздействий на фактор Виллебранда. Во-первых, при усилении воздействия силы сдвига жидкости на фактор Виллебранда производится перегруппировка дисульфидных мостиков в С-концевой части белка, что способствует включению новых молекул фактора Виллебранда в собранные на поверхности сосудов полимерные нити фактора Виллебранда. Следует отметить, что эта дисульфидная реконфигурация, образующаяся, в том числе, под воздействием силы сдвига жидкости, может регулироваться при помощи ранее неизвестной функции ADAMTS13, а именно, под воздействием тиолредуктазы, расположенной в С-концевой области ADAMTS13 (Yeh HC, et al.,2010). Во-вторых, вытянутая нить фактора Виллебранда гораздо более восприимчива к окислению метионина в доменах A в присутствии активных форм кислорода (Чернова Е.В., 2018; Колосков А.В. и др., 2019).

После окисления метионина функциональные свойства фактора Виллебранда существенно изменяются. Он становится более эффективным при взаимодействии с тромбоцитами и более устойчивым к протеолитическому воздействию ADAMTS13 (Колосков А.В., 2019). Наконец, две группы ученых одновременно сообщали о влиянии силы сдвига жидкости на клиренс фактора Виллебранда. Воздействие силы сдвига жидкости превращает фактор Виллебранда в лиганд для рецепторов макрофагов, что приводит к увеличению поглощения фактора Виллебранда макрофагами. Тем не менее, механизм утилизация фактора Виллебранда на сегодняшний день до конца не ясен (Rastegarlari G et al., 2012; Castro-Nunez L et al., 2012; Чернова Е.В., 2018).

Фактор Виллебранда циркулирует как глобулярный протеин, большая часть гликановых структур которого сиалированна. В этой форме фактор Виллебранда распознается двумя различными рецепторами, которые могут выступать посредниками при его удалении из кровообращения: CLEC4M на эндотелиальных клетках и Siglec-5 на макрофагах (van Schooten CJ et al., 2008) Воздействие силы сдвига жидкости разворачивает фактор Виллебранда сайтом связывания с LRP1-рецептором макрофагов. Эксперименты in vitro и in vivo подтвердили участие LRPl-рецептора в поглощении фактора Виллебранда в макрофагах. Некоторые мутации в гене фактора Виллебрнда (мутация p.R1205H (болезнь Виллебранда 1 типа, подтип Виченца) или мутации p.R1306Q и p.V1316M (болезнь Виллебранда 2В типа)) обуславливают взаимодействие специфических участков фактора Виллебранда с LRP1-рецепторами макрофагов в отсутствии напряжения сдвига, что может приводить к ускоренному выведению фактора Виллебранда из циркуляции (Casari C et al., 2013). Неизвестно, ограниченна ли связь мутированного фактора Виллебранда с LRP1-рецепторами макрофагов или свой вклад в его элиминацию могут вносить и другие типы клеток, имеющие LRP1-рецепторы, такие, например, как гепатоциты. При десиализации гликановых структур фактора Виллебранда раскрывает терминальный остаток галактозы, что позволяет эффективно взаимодействовать с ASGPR-рецептором на макрофагах и гепатоцитах, реализуя еще один путь элиминации. Следует отметить, что рецепторы, ответственные за дискордантный клиренс фактора Виллебранда у лиц с группами крови 0 и не-0, пока не идентифицированы (Casari C et al., 2013; Чернова Е.В., 2018).

Фактор Виллебранда играет важную роль в агрегации тромбоцитов и их адгезии к эндотелию, а в случае повреждения, к субэндотелиальным структурам кровеносных сосудов в условиях высоких скоростей сдвига жидкости. Как уже отмечалось, адгезия обеспечивается за счет взаимодействия специфического локуса домена А1 фактора Виллебранда с

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Чернова Екатерина Владимировна, 2020 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Андрияшкин А.В. Российские клинические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике венозных тромбоэмболических осложнений / А.В. Андрияшкин, В.В. Андрияшкин, Г.П. Арутюнов и др. // Флебология. - 2015. - № 3. - С. 2-52.

2. Воробьев А. И. Руководство по гематологии: В 2-х т. Т 2 / под ред. А. И. Воробьева. -2-е изд. -М.: Медицина, 1985.-368 с.

3. Зозуля Н.И., Кумскова М.А. Протокол диагностики и лечения болезни Виллебранда. Алгоритмы диагностики и протоколы лечения заболеваний системы крови / под ред. Савченко В.Г. -М.: Практика, 2018.- 1006 с.

4. Колосков А.В Тромботические и геморрагические риски у беременных женщин / А.В. Колосков, О.А. Батурина, А.А. Лыщев, и др. // Medline.ru. Российский биомедицинский журнал. - 2013. - Т. 14. - № 4. - С. 880-890.

5. Колосков А.В. Активность фактора V у женщин в Санкт-Петербурге / А.В. Колосков, О.И. Филиппова // Тромбоз гемостаз и реология. -2016. - № 3. - С. 207-208.

6. Колосков А.В. Болезнь Виллебранда / А.В. Колосков // Журнал научных статей Здоровье и образование в XXI веке. - 2017. - Т. 19. - № 11. -С. 43-48.

7. Колосков А.В. Болезнь Виллебранда у женщин / А.В. Колосков, А.А. Столица, О.И. Филиппова // Российский биомедицинский журнал. - 2013. -Т. 14. - № 10. - С. 113-134.

8. Колосков А.В. Диагностика болезни Виллебранда / А.В. Колосков -СПб.: Коста, 2014. - 40 с.

9. Колосков А.В. Клиническое значение полиморфизма генов фактора V и протромбина / А.В. Колосков, Е.В. Чернова // Гематология и трансфузиология. -2018. - Т. 63. - № 3. - С. 250-257.

10. Колосков А.В. Металлопротеаза ADAMTS-13 / А.В. Колосков, А.А. Мангушло // Гематология и трансфузиология. - 2019. - Т. 64. - № 4. - С. 471482.

11. Колосков А.В. Распространенность мутации гена фактора V (Лейден) и гена протромбина G20210A у женщин с болезнью Виллебранда 1-го типа / А.В. Колосков, Е.В. Чернова // Гематология и трансфузиология. - 2019. - Т. 64. - № 1. - С. 60-65.

12. Колосков А.В. Частота встречаемости полиморфизмов гена фактора V (A506G), гена протромбина (G20210A) и гена MTHFR (С677Т И А1298С) у здоровых доноров крови Санкт-Петербурга / А.В. Колосков, О.И. Филиппова, А.А. Лыщев и др. // Medline.ru. Российский биомедицинский журнал. - 2015. - Т. 16. - № 62. - С. 682—689.

13. Колосков А.В. Частота встречаемости полиморфизмов гена фактора Виллебранда (T2385C), гена синтаксин связывающего белка STXBP5 (ASN436SER), гена синтаксина STX2 (G787A) и их влияние на уровень активности фактора Виллебранда и фактора VIII у здоровых женщин в Санкт-Петербурге / А.В. Колосков, О.И. Филиппова, А.А. Лыщев, и др. // Medline.ru. Российский биомедицинский журнал. -2015. -Т. 16. -№ 3. -С. 690-699.

14. Колосков А.В. Этиология и патогенез синдрома Виллебранда / А.В. Колосков// Журнал научных статей Здоровье и образование в XXI веке. -2017. -Т. 19. -№. 5. - С. 16-19.

15. Лихачева Е.А. Клинические рекомендации по диагностике и лечению болезни Виллебранда. / Е.А. Лихачева, Т.Ю. Полянская, В.Ю. Зоренко - М.: 2014. - С. 6-7.

16. Минеева Н.В. Антигены и антитела к тромбоцитам / Н.В. Минеева, И.И. Кробинец, М.Н. Блинов и др. // Онкогематология. - 2013.- № 3. - С. 6068.

17. Руковицын О.А. Гематология. Национальное руководство / О.А. Руковицын- M.: ГЕОТАР-Медиа, 2015. - 776 с.

18. Сапаркина М.В. Нарушение функции тромбоцитов, как причина геморрагического диатеза у женщин / М.В. Сапаркина, А.В. Колосков, О.И.

Филиппова, А.А. Столица // Medline.ru. Российский биомедицинский журнал. -2012. -Т. 13. -№ 3. -С. 841-852.

19. Струкова С. М. Основы физиологии гемостаза / С.М. Струкова- М.: МГУ, 2013. - 186 с.

20. Филиппова О.И. Методы исследования функциональной активности тромбоцитов (обзор литературы) / О.И. Филиппова, А.В. Колосков, А.А. Столица // Medline.ru. Российский биомедицинский журнал. - 2012. - Т. 13. -№ 2. - С. 493-514.

21. Чернова Е.В. Полиморфизм генов тромбоцитарных рецепторов GPIA, GPIB и GPIIIA у женщин с болезнью Виллебранда 1 типа / Е.В. Чернова, А.В. Колосков // Тромбоз, гемостаз и реология. -2019. - Т. 2. - № 78. -С. 63-67.

22. Чернова Е.В. Фактор Виллебранда / Е.В. Чернова // Вестник СевероЗападного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. - 2018. - Т. 10. - № 4. - С. 73-80.

23. Ahmad F. Impact of thrombogenic mutations on clinical phenotypes of von Willebrand disease / F. Ahmad, M. Kannan, V. Yadav, et al // J. Thromb. Haemost.

- 2010. - Vol. 3. - P. 281-287.

24. Asselta R. Inherited defects of coagulation factor V: the hemorrhagic side / R. Asselta, M.L. Tenchini, S. Duga // J. Thromb. Haemost. - 2006. - Vol. 4, № 1.

- Р. 26-34.

25. Bates S. VTE, Thrombophilia, Antithrombotic Therapy, and Pregnancy Antithrombotic Therapy and Prevention of Thrombosis, 9th ed: American College of Chest Physicians Evidence-Based Clinical Practice Guidelines / S. Bates, I.A. Greer, S. Middeldorp, et al. // Chest. - 2012. - Vol. 141(Suppl. 2). - Р. e691S-e736S.

26. Bernardo A. Platelets adhered to endothelial cell-bound ultra-large von Willebrand factor strings support leukocyte tethering and rolling under high shear stress / A. Bernardo, C. Ball, L. Nolasco, et al. // J. Thromb. Haemost. - 2005. -Vol. 3, № 3. - Р. 562-570.

27. Bertina R. Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C / R. Bertina, B. Koeleman, T. Koster, et al. // Nature. - 1994. - Vol. 369, № 6475. - P. 64-67.

28. Bezemer I.D. The value of family history as a risk indicator for venous thrombosis / I.D. Bezemer, F.J. van der Meer, J.C. Eikenboom, et al. // Arch. Intern. Med. - 2009. - Vol. 169, № 6. - P. 610-615.

29. Biron C. Preoperative screening for von Willebrand disease type 1: low yield and limited ability to predict bleeding / C. Biron, B. Mahieu, A. Rochette, et al // J. Lab. Clin. Med. - 1999. - Vol. 134. - P. 605-609.

30. Bryckaert M. Of von Willebrand factor and platelets / M. Bryckaert, J.P. Rosa, C.V. Denis, et al. // Cell. Mol. Life Sci. - 2015. - Vol. 72. - P. 307-326.

31. Buchanan G.S. The inherited thrombophilias: genetics, epidemiology, and laboratory evaluation / G.S. Buchanan, G.M. Rodgersm, D.W. Branch // Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. - 2003. - Vol. 17, № 3. - P. 397-411.

32. Butenas S. "Normal" thrombin generation / S. Butenas, C. van't Veer, K.G. Mann // Blood. - 1999. - Vol. 94, № 7. - P. 2169-2178.

33. Campos M. Influence of single nucleotide polymorphisms in factor VIII and von Willebrand factor genes on plasma factor VIII activity: the ARIC Study / M. Campos, A. Buchanan, F.Yu, et al. // Blood. - 2012. - Vol. 119, № 8. - P. 19291934.

34. Casari C. Accelerated uptake of VWF/platelet complexes in macrophages contributes to VWD type 2B-associated thrombocytopenia / C. Casari, V. Du, Y.P. Wu, et al. // Blood. - 2013. - Vol. 122, № 16. - P. 2893-2902.

35. Casari C. Clearance of von Willebrand factor / C. Casari, P.J. Lenting, N. Wohner, et al. // J Thromb Haemost. - 2013. - Vol. 11(Suppl.1). - P. 202-211.

36. Castoldi E. Impaired APC cofactor activity of factor V plays a major role in the APC resistance associated with the factor V Leiden (R506Q) and R2 (H1299R) mutations / E. Castoldi, J. Brugge, G. Nicolaes, et al. // J. Blood. - 2004. - Vol. 103, № 11. - P. 4173-4179.

37. Chauhan A.K. Von Willebrand factor and factor VIII are independently required to form stable occlusive thrombi in injured veins / A.K. Chauhan, J. Kisucka, C.B. Lamb, et al. // Blood. - 2007. - Vol. 109, № 6. - P. 2424-2429.

38. Cripe L.D. Structure of the gene for human coagulation factor V / L.D. Cripe, K.D. Moore, W.H. Kane // Biochemistry. - 1992. - Vol. 31, № 15. - P. 3777-3785.

39. Dahlback B. Familial thrombophilia due to a previously unrecognized mechanism characterized by poor anticoagulant response to activated protein C: prediction of a cofactor to activated protein C / B. Dahlback, M. Carlsson, P.J. Svensson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1993. - Vol. 90, № 3. - P. 1004-1008.

40. Dahlback B. The anticoagulant protein C pathway / B. Dahlback, B.O. Villoutreix // FEBS Lett. - 2005. - Vol. 579, № 15. - P. 3310-3316.

41. De Visser M.C. A reduced sensitivity for activated protein C in the absence of factor V Leiden increases the risk of venous thrombosis / M.C. de Visser, F.R. Rosendaal, R.M. Bertina // Blood. - 1999. - Vol. 93, № 4. - P. 1271-1276.

42. Degen S.J. Nucleotide sequence of the gene for human prothrombin / S.J. Degen, E.W. Davie // Biochemistry. - 1987. - Vol. 26, № 19. - P. 6165-6177.

43. Ekim M. The prevalence of Factor V Leiden, prothrombin G20210A, MTHFR C677T and MTHFR A1298C mutations in healthy Turkish population / M. Ekim, H. Ekim, Y.K. Yilmaz // Hippokratia. - 2015. - Vol. 19, № 4. - P. 309313.

44. Emmerich J. Combined effect of factor V Leiden and prothrombin 20210A on the risk of venous thromboembolism - Pooled analysis of 8 case-control studies including 2310 cases and 3204 controls. Study Group for Pooled-Analysis in Venous Thromboembolism / J. Emmerich, F. Rosendaal, M. Cattaneo, et al. // Thromb. Haemost. - 2001. - Vol. 86, № 3. - P. 809-816.

45. Floyd C. N. PlA1/A2 Polymorphism of Glycoprotein Ilia as a Risk Factor for Stroke: A Systematic Review and Meta-Analysis / C.N. Floyd, B.H. Ellis, A. Ferro // PLoS ONE. - 2014. - Vol. 9, № 7. - P. e100239.

46. Franchini M. High prevalence of inherited prothrombotic risk factors in 134 consecutive patients with von Willebrand disease / M. Franchini, D. Veneri, G. Poli et al. // Am. J. Hematol. - 2006. - Vol. 81. - P. 465-467.

47. Franchini M. Thrombotic complications in von Willebrand disease / M. Franchini. // Hematology. - 2006. - Vol. 11. - P. 49-52.

48. Franco R., Elion J., Tavella M., Santos S.E., Zago M.A. The prevalence of factor V Arg306->Thr (factor V Cambridge) and factor V Arg306->Gly mutations in different human populations / R. Franco, J. Elion, M. Tavella, et al. // Thromb. Haemost. - 1999. - Vol. 81, № 2. - P. 312-313.

49. Fuchs T.A. Extracellular DNA traps promote thrombosis / T.A. Fuchs, A. Brill, D. Duerschmied, et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2010. - Vol. 107, № 36. - P. 15880-15885.

50. Fuchs T.A. Neutrophil extracellular trap (NET) impact on deep vein thrombosis / T.A. Fuchs, A. Brill, D.D. Wagner // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2012. - Vol. 32, № 8. - P. 1777-1783.

51. Gallinaro L. A Shorter von Willebrand factor survival in 0 blood group subjects explains how AB0 determinants influence plasma von Willebrand factor / L. Gallinaro, M.G. Cattini, M. Sztukowska, et al. // Blood. - 2008. - Vol. 111. - P. 3540-3545.

52. Ginsburg D. Consortium on von Willebrand Factor mutations and polymorphisms, subcommittee on von Willebrand Factor of the scientific and standardization committee of the international society on thrombosis and haemostasis. Von Willebrand disease: a database of point mutations, insertions, and deletions / D. Ginsburg, J.E. Sadler // Thromb. Haemost. - 1993. - Vol. 69. -P. 177-184.

53. Greengard J. Activated protein C resistance caused by Arg506Gln mutation in factor Va / J. Greengard, X. Sun, X. Xu, et al. // Lancet. - 1994. - Vol. 343, № 8909. - P. 1361-1362.

54. Griffin J.H. Anticoagulant protein C pathway defective in majority of thrombophilic patients / J.H. Griffin, B. Evatt, C. Wideman, et al. // Blood. - 1993.

- Vol. 82, № 7. - P. 1989-1993.

55. Haynes L.M. Prothrombin activation by platelet-associated prothrombinase proceeds through the prethrombin-2 pathway via a concerted mechanism / L.M. Haynes, B.A. Bouchard, P.B.Tracy, et al. // J. Biol. Chem. - 2012. - Vol. 287, № 46. - P. 38647-38655.

56. Jenny R.J. Complete cDNA and derived amino acid sequence of human factor V / R.J. Jenny, D.D. Pittman, J.J. Toole, et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.

- 1987. - Vol. 84, № 14. - P. 4846-4850.

57. Keesler D.A. Current issues in diagnosis and treatment of von Willebrand disease / D.A. Keesler, V.H. Flood // Res. Pract. Thromb. Haemost. - 2018. - Vol. 2. - P. 34-41.

58. Khor B. Laboratory evaluation of hypercoagulability. / B. Khor, E.M.van Cott // Clin. Lab. Med. - 2009. - Vol. 29, № 2. - P. 339-366.

59. Kleinschnitz C. Deficiency of von Willebrand factor protects mice from ischemic stroke / C. Kleinschnitz, S.F. De Meyer, T. Schwarz, et al. // Blood. -2009. - Vol. 113, № 15. - P. 3600-3603.

60. Koster T. Role of clotting factor VIII in effect of von Willebrand factor on occurrence of deep-vein thrombosis / T. Koster, A.D. Blann, E. Briet, et al. // Lancet. - 1995. - Vol. 345, № 8943. - P. 152-155.

61. Koster T. Venous thrombosis due to poor anticoagulant response to activated protein C: Leiden Thrombophilia Study / T. Koster, F.R. Rosendaal, H. de Ronde, et al. // Lancet. - 1993. - Vol. 342, № 8886-8887. - P. 1503-1506.

62. Lenting P.J. The life cycle of coagulation factor VIII in view of its structure and function / P.J. Lenting, J.A. van Mourik, K. Mertens // Blood. - 1998. - Vol. 92, № 11. - P. 3983-3996.

63. Lijfering W.M. Risk factors for venous thrombosis - current understanding from an epidemiological point of view / W.M. Lijfering, F.R. Rosendaal, S.C. Cannegieter // Br. J. Haematol. - 2010. - Vol. 149, № 6. - P. 824-833.

64. Lijfering W.M. Risk of recurrent venous thrombosis in homozygous carriers and double heterozygous carriers of factor V Leiden and Prothrombin G20210A / W.M. Lijfering, S. Middeldorp, N.J.G.M. Veeger, et al. // Circulation. - 2010. -Vol. 121, № 15. - P. 1706-1712.

65. Lippi G. Arterial thrombus formation in cardiovascular disease / G. Lippi, M. Franchini, G. Targher // Nat. Rev. Cardiol. - 2011. - Vol. 8, № 9. - P. 502-512.

66. Liu H. Platelet glycoprotein gene Ia C807T, HPA-3, and Iba VNTR polymorphisms are associated with increased ischemic stroke risk: Evidence from a comprehensive meta-analysis / H. Liu, Y. Wang, J. Zheng, et al. // Int. J. Stroke. - 2017. - Vol. 2, № 1. - P. 46-70.

67. Martinelli I. Inherited risk factors for venous thromboembolism / I. Martinelli, V. De Stefano, P.M Mannucci. //Nat. Rev. Cardiol. - 2014. - Vol. 11, № 3. - P. 140-156.

68. Methia N. Localized reduction of atherosclerosis in von Willebrand factor-deficient mice / N. Methia, P. Andre, C.V. Denis, et al. // Blood. - 2001. - Vol. 98, № 5. - P. 1424-1428.

69. Miranda-Vilela A.L. Role of Polymorphisms in Factor V (FV Leiden), Prothrombin, Plasminogen Activator Inhibitor Type-1 (PAI-1), Methylenetetrahydrofolate Reductase (MTHFR) and Cystathionine P-Synthase (CBS) Genes as Risk Factors for Thrombophilias / A.L. Miranda-Vilela // Mini Rev. Med. Chem. - 2012. - Vol. 12, № 10. - P. 997-1006.

70. Nesheim M. Thrombin, thrombomodulin and TAFI in the molecular link between coagulation and fibrinolysis / M. Nesheim, W. Wang, M. Boffa, et al. // Thromb. Haemost. - 1997. - Vol. 78, № 1. - P. 386-391.

71. Ni W. Association of Platelet Membrane Glycoprotein HPA-2a/b, GP VI T13254C, and GP Iba VNTR Polymorphisms with Risk of Coronary Artery Disease: A Meta-Analysis / W. Ni, J. Hi, H. Wang, et al. // Biomed. Res. Int. -2017. - Vol. 2017. - P. 1-8.

72. Norstrom E. Functional characterization of recombinant FV Hong Kong and FV Cambridge / E. Norstrom, E. Thorelli, B. Dahlback // Blood. - 2002. - Vol. 100, № 2. - P. 524-530.

73. Noubade R. Von-Willebrand factor influences blood brain barrier permeability and brain inflammation in experimental allergic encephalomyelitis / R. Noubade, R. del Rio, B. McElvany, et al. // Am. J. Pathol. - 2008. - Vol. 173, № 3. - P. 892-900.

74. Nygaard K.K. Essential thrombophilia: report of five cases / K.K. Nygaard, G.E Brown // Arch. Intern. Med. - 1937. - Vol. 59, №1. - P. 82-106.

75. O'Donnell J. Amount of H antigen expressed on circulating von Willebrand factor is modified by AB0 blood group genotype and is a major determinant of plasma von Willebrand factor antigen levels / J. O'Donnell, F.E. Boulton, R.A. Manning, et al // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2002. - Vol. 22. - P. 335341.

76. Pendu R. P-selectin glycoprotein ligand 1 and beta2-integrins cooperate in the adhesion of leukocytes to von Willebrand factor / R. Pendu, V. Terraube, O.D. Christophe, et al. // Blood. - 2006. - Vol. 108, № 12. - P. 3746-3752.

77. Pi L. CCN2/CTGF regulates neovessel formation via targeting structurally conserved cystine knot motifs in multiple angiogenic regulators / L. Pi, A.K. Shenoy, J. Liu, et al. // FASEB J. - 2012. - Vol. 26, № 8. - P. 3365-3379.

78. Poort S.R. A common genetic variation in the 3'-untranslated region of the prothrombin gene is associated with elevated plasma prothrombin levels and an increase in venous thrombosis / S.R. Poort, F.R. Rosendaal, P.H. Reitsma, et al. // Blood. - 1996. - Vol. 88, № 10. - P. 3698-3703.

79. Pozzi N. Crystal structure of prothrombin reveals conformational flexibility and mechanism of activation / N. Pozzi, Z. Chen, D.W. Gohara, et al. // J. Biol. Chem. - 2013. - Vol. 288, № 31. - P. 22734-22744.

80. Pozzi N. Prothrombin structure: unanticipated features and opportunities. Expert. Rev / N. Pozzi, E. Di Cera // Proteomics. - 2014. - Vol. 11, № 6. - P. 653655.

81. Pozzi N. The linker connecting the two kringles plays a key role in prothrombin activation / N. Pozzi, Z. Chen, L.A. Pelc, et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2014. - Vol. 111, № 21. - P. 7630-7635.

82. Pritchard A.M. Hereditary Thrombophilia and Recurrent Pregnancy Loss / A.M. Pritchard, P.W. Hendrix, M.J. Paidas // Clin. Obstet. Gynecol. - 2016. - Vol. 59, № 3. - P. 487-497.

83. Rai R. Recurrent miscarriage / R. Rai, L. Regan // Lancet. - 2006. - Vol. 368, № 9535. - P. 601-611.

84. Rees D.C. The population genetics of factor V Leiden (Arg506Gln) / D.C. Rees // Br. J. Haematol. - 1996. - Vol. 95, № 4. - P. 579-586.

85. Rees D.C. World distribution of factor V Leiden / D.C. Rees, M. Cox, J.B. Clegg // Lancet. - 1995. - Vol. 346, № 8983. - P. 1133-1134.

86. Rey E. Thrombophilic disorders and fetal loss: a meta-analysis / E. Rey, S.R. Kahn, M. David, et al. // Lancet. - 2003. - Vol. 361, № 9361. - P. 901-908.

87. Robertson L. Thrombophilia in pregnancy: a systematic review / L. Robertson, O. Wu, P. Langhorne, et al. // Br. J. Haematol. - 2005. - Vol. 132, № 2. - P. 171-196.

88. Rodeghiero F. Epidemiological investigation of the prevalence of von Willebrand disease / F. Rodeghiero, G. Castaman, E. Dini // Blood. - 1987. - Vol. 69. - P. 454-459.

89. Rodeghiero F. The discriminant power of bleeding history for the diagnosis of type 1 von Willebrand disease: an international, multicenter study / F. Rodeghiero, et al. // J. Tthromb. Haemost. - 2005. - Vol. 3, №12. - P. 2619-2626.

90. Rodger M.A. The association of factor V Leiden and prothrombin gene mutation and placenta-mediated pregnancy complications: a systematic review and meta-analysis of prospective cohort studies / M.A. Rodger, M.T. Betancourt, P. Clark, et al. // PLoS Med. - 2010. - Vol. 7, № 6. - P. e1000292.

91. Roemisch J. Antithrombin: a new look at the actions of a serine protease inhibitor / J. Roemisch, E. Gray, J.N. Hoffmann, et al. // Blood Coagul. Fibrinolysis. - 2002. - Vol. 13, № 8. - P. 657-670.

92. Roquer H. Maternal thrombophilias are not associated with early pregnancy loss / H. Roquer, M.J. Paidas, E.F. Funai, et al. // Thromb. Haemost. - 2004. - Vol. 91, № 2. - P. 290-295

93. Rydz N. The Evolution and Value of Bleeding Assessment Tools / N. Rydz, P.D. James // J. Tthromb. Haemost. - 2012. - Vol. 10, №11. - P. 2223-2229.

94. Sadler J.E. Consortium on von Willebrand factor mutations and polymorphisms, subcommittee on von Willebrand factor of the scientific and standardization committee of the international society on thrombosis and haemostasis. A database of polymorphisms in the von Willebrand factor gene and pseudogene / J.E. Sadler, D. Ginsburg, // Thromb. Haemost. - 1993. - Vol. 69. - P. 185-191.

95. Sadler J.E. Impact, diagnosis and treatment of von Willebrand disease / J.E. Sadler, P.M. Mannucci, E. Berntorp, et al. // Thromb. Haemost. - 2000. - Vol. 84.

- P. 160-174.

96. Sadler J.E. Update on the pathophysiology and classification of von Willebrand disease: a report of the Subcommittee on von Willebrand Factor / J.E. Sadler, U. Budde, J.C. Eikenboom, et al. // J. of Thrombosis and Haemostasis. -2006. - Vol. 4. - P. 2103-2014.

97. Seaman C.D. Does deficiency of von Willebrand factor protect against cardiovascular disease? Analysis of a national discharge register / C.D. Seaman, J. Yabes, D.M. Comer, et al. // J. Thromb. Haemost. - 2015. - Vol. 13, № 11. - P. 1999-2003.

98. Segers K. Coagulation factor V and thrombophilia: Background and mechanisms / K. Segers, B. Dahlbäck, G.A. Nicolaes // Thromb. Haemost. - 2007.

- Vol. 98, № 3. - P. 530-542.

99. Slaughter M.S. Hematologic effects of continuous flow left ventricular assist devices / M.S. Slaughter // J. Cardiovasc. Transl. Res. - 2010. - Vol. 3, № 6. - P. 618-624.

100. Starke R.D. Endothelial von Willebrand factor regulates angiogenesis / R.D. Starke, F. Ferraro, K.E. Paschalaki, et al. // Blood. - 2011. - Vol. 117, № 3. - P. 1071-1080.

101. Steen M. Functional characterization of factor V-Ile359Thr: A novel mutation associated with thrombosis / M. Steen, E. Norstrom, A.Tholander, et al. // Blood. - 2004. - Vol. 103, № 9. - P. 3381-3387.

102. Suehiro Y. Endocytosis and storage of plasma factor V by human megakaryocytes / Y. Suehiro, D.K. Veljkovic, N. Fuller, et al. // Thromb. Haemost.

- 2005. - Vol. 94, № 3. - P. 585-592.

103. Svensson P. Resistance to activated protein C as a basis for venous thrombosis / P. Svensson, B. Dahlback // N. Engl. J. Med. - 1994. - Vol. 330, № 8.

- P. 517-522.

104. Tans G. Meizothrombin formation during factor Xa-catalyzed prothrombin activation. Formation in a purified system and in plasma / G. Tans, T. Janssen-Claessen, H.C. Hemker, et al. // J. Biol. Chem. - 1991. - Vol. 266, № 32. - P. 21864-21873.

105. Tracy P.B. Radioimmunoassay of factor V in human plasma and platelets / P.B. Tracy, L.L. Eide, E.J. Bowie, et al. // Blood. - 1982. - Vol. 60, № 1. - P. 5963.

106. Tsai A.W. Coagulation factors, inflammation markers, and venous thromboembolism: the longitudinal investigation of thromboembolism etiology (LITE) / A.W. Tsai, M. Cushman, W.D. Rosamond, et al. // Am. J. Med. - 2002. -Vol. 113, № 8. - P. 636-642.

107. Tsantes A.E. Lack of association between the platelet glycoprotein Ia C807T gene polymorphism and coronary artery disease: a meta-analysis / A.E. Tsantes, G.K. Nikolopoulos, P.G. Bagos, et al. // Int. J. Cardiol. - 2007. - Vol. 118, № 2. -P. 189-196.

108. Van Cott E.M. Factor V Leiden / E.M. Van Cott, B. Khor, J.L. Zehnder // Am. J. Hematol. - 2016. - Vol. 91, № 1. - P. 46-49.

109. Van Schie M.C. Genetic determinants of von Willebrand factor levels and activity in relation to the risk of cardiovascular disease: a review / M.C. van Schie, J.E. van Loon, M.P de Maat, et al. // J. Thromb. Haemost. - 2011. - Vol. 9, № 5. -P. 899-908.

110. Van Schooten C.J. Macrophages contribute to the cellular uptake of von Willebrand factor and factor VIII in vivo / C.J. Van Schooten, S. Shahbazi, E. Groot, et al. // Blood. - 2008. - Vol. 112, № 5. - P. 1704-1712.

111. Virchow R. Phlogose und Thrombose im Gefäßsystem. Gesammelte Abhandlungen zur wissenschaftlichen Medicin / R Virchow- Berlin.: von Meininger III, 1856. - P. 458-635

112. Von Willebrand E.A. Hereditary pseudohaemophilia / Von Willebrand E.A. // Haemophilia. - 1999. - Vol. 5. - P. 223-231.

113. Vos H.L. Inherited defects of coagulation factor V: the thrombotic side / H.L. Vos // J. Thromb. Haemost. - 2006. - Vol. 4, № 1. - P. 35-40.

114. Werner E.J. Prevalence of von Willebrand disease in children: a multiethnic study / E.J. Werner, E.H. Broxson, E.L. Tucker, et al // J. Pediatr. - 1993. - Vol. 123. - P. 893-898.

115. Yeh H.C. Disulfide bond reduction of von Willebrand factor by ADAMTS-13 / H.C. Yeh, Z. Zhou, H. Choi et al. // J. Thromb. Haemost. - 2010. - Vol. 8, № 12. - P. 2778-2788.

116. Zhang J. Association between polymorphisms of platelet membrane glycoprotein Iba and risk of coronary heart disease in Han Chinese, Henan, China / J. Zhang, L. Zhao, P. Lv, et al. // Int. J. Clin. Exp. Pathol. - 2015. - Vol. 8, № 5. -P. 6005-6011

117. Zhang X. Von Willebrand factor permeates small vessels in ADASIL and inhibits smooth muscle gene expression / X. Zhang, H. Meng, M. Blaivas, et al. // Transl. Stroke. Res. - 2012. - Vol. 3, № 1. - P. 138-145.

118. Zhao B.Q. Von Willebrand factor-cleaving proteaseADAMTS13 reduces ischemic brain injury in experimental stroke / B.Q. Zhao, A.K. Chauhan, M. Canault, et al. // Blood. - 2009. - Vol. 114, № 15. - P. 3329-3334.

119. Zivelin A. Prothrombin 20210G>A is an ancestral prothrombotic mutation that occurred in whites approximately 24,000 years ago / A. Zivelin, R. Mor-Cohen, V. Kovalsky, et al. // Blood. - 2006. - Vol. 107, № 12. - P. 4666-4668.

120. Zoller B., Dahlback B. Linkage between inherited resistance to activated protein C and factor V gene mutation in venous thrombosis / B. Zoller, B. Dahlback // Lancet. - 1994. - Vol. 343, № 8912. - P. 1536-1538.