Блокада NMDA-каналов пирамидных нейронов гиппокампа крысы местными анестетиками и их производными тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Колесникова, Татьяна Валерьяновна

• Колесникова, Татьяна Валерьяновна
• кандидат физико-математических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Колесникова, Татьяна Валерьяновна

СОДЕРЖАНИЕ.

ОСНОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ЫМЭА-КАНАЛЫ.

СТРУКТУРА.

ПРИНЦИПЫ РАБОТЫ ЫМИА-КАНАЛОВ.

БЛОКА ТОРЫ ЫМЭА-КАНАЛОВ.

МОДУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ЯША-КАНАЛОВ.

БЛОКАТОРЫ КАК ИНСТРУМЕНТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ИОННЫХ

КАНАЛОВ.

МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ДЕЙСТВИЯ БЛОКАТОРОВ

ОТКРЫТЫХ ЫМЭА-КАНАЛОВ.

МЕСТНЫЕ АНЕСТЕТИКИ.

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МА.

ДЕЙСТВИЕ МА НА Ыа-КАНАЛЫ.

ТЕОРИИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МА С Ыа -КАНАЛАМИ.

СВЯЗЬ СТРУКТУРЫ МА И ИХ БЛОКИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ.

ДЕЙСТВИЕ МА НА ИМБА-КАНАЛЫ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

ВЫДЕЛЕНИЕ ПИРАМИДНЫХ НЕЙРОНОВ ГИППОКАМПА.

РАСТВОРЫ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ УСТАНОВКА.

РЕГИСТРАЦИЯ ТОКОВ.

ОБРАБОТКА ДАННЫХ И МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

АКТИВАЦИЯ ЫМРА-КАНАЛОВ.

БЛОКАДА ^ОА-КАНАЛОВ МА.

НОВОКАИН.

НОВОКАИНАМИД.

ТЕТРАКАИН.

БЕНЗОКАИН.

ЛИДОКАИН. дх-314.

ЭТИДОКАИН.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

БЛОКАДА ^ОА-КАНАЛОВ МА.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ БЛОКАДЫ Ыа+- И ЫМЭА-КАНАЛОВ.

ВЫВОДЫ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Блокада NMDA-каналов пирамидных нейронов гиппокампа крысы местными анестетиками и их производными»

Актуальность проблемы. В большинстве синапсов центральной нервной системы млекопитающих и человека передача возбуждающего сигнала осуществляется с помощью медиатора - глутамата. Ионотропные рецепторы глутамата подразделяются на NMDA- (N-метил-Э-аспартат), АМРА- (а-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазол пропионат) и каинатный подтипы. Среди семейства глутаматных рецепторов NMDA-подтип отличается потенциалзависимой блокадой ионами Mg2+ (Mayer et al., 1984; Nowak et. al., 1984; Ascher and Nowak; 1988), медленной кинетикой активации, неполной десенситизацией (Johnson and Ascher, ч I

1987; Lester et al., 1990), относительно высокой проницаемостью для ионов Ca (MacDermott et al., 1986). Эти и другие свойства NMDA-каналов лежат в основе формирования нервной системы на эмбриональной стадии, памяти и способности к обучению (Bliss and Collingridge, 1993; Asztely and Gustafsson, 1996; Kulimann et al., 2000), а также патогенеза болезней Паркинсона, Альцгеймера, ишемической болезни мозга, эпилепсии и др. (Doble, 1999; Arundine and Tymianski, 2004; Hynd et al., 2004; Rho, 2004).

Существенный прогресс, достигнутый за последнее время в развитии методов молекулярной биологии и биохимии, позволил установить субъединичный состав, первичную структуру, трансмембранную топологию полипептидной цепи и.т.д. (см. обзоры Dingledine et al., 1999; Mayer and Armstrong, 2004; Wollmuth and Sobolevsky, 2004). Однако вышеперечисленные методы не позволяют определить трехмерное строение NMDA-каналов и конформационпые перестройки, лежащие в основе изменения их проводимости. На эти вопросы может ответить кристаллография. Однако ионные каналы представляют собой крупные трансмембранные белки со сложной укладкой полипептидной цепи, что на данный момент вызывает трудности при кристаллизации большинства типов ионных каналов.

Опыт исследований блокады ионных каналов различными соединениями показал, что результаты таких работ являются ценным источником информации о самих каналах (Hille, 2001). На протяжении ряда лет этот подход используется в работах нашего коллектива для изучения свойств NMDA-каналов (Кошелев и Ходоров, 1992, 1995; Sobolevsky et al, 1999а). Значительным шагом вперед стала разработка критериев, позволяющих расшифровать эффект быстрых блокаторов на работу воротного механизма NMDA-канала (Sobolevsky et al., 1999а, b). Экспериментальное исследование блокады NMDA-каналов тетраалкиламмониевыми соединениями в сочетании с компьютерным моделированием позволило установить, что закрытие и десенситизация связаны с различными структурами в канале. Кроме того, были оценены вероятность открывания канала, его диаметр в открытом состоянии на уровне активациопных ворот и др. (Sobolevsky et al., 1999а).

Настоящая работа является продолжением проводимых в лаборатории исследований. В качестве новых инструментов изучения биофизических свойств и функциональной архитектуры NMDA-каналов в ней использованы местные анестетики и их производные (МА). В отличие от ранее применявшихся блокаторов, большинство МА содержит три функциональные группировки: ароматическое кольцо, третичную аминогруппу и полярную (амидную или эфирную) связь. рКа аминогруппы этих соединений лежит в диапазоне 8.1^-9.4 (Strichartz et al., 1990), поэтому при физиологических pH МА находятся преимущественно в заряженной форме. Такое строение обусловливает амфифильные свойства этих соединений.

МА широко применяются в медицине для местной, спинальной и других видов анестезии. Основной мишенью действия МА считаются потенциалуправляемые №+-каналы. Однако действие МА на другие типы ионных каналов может обусловливать нежелательные побочные эффекты, поэтому изучение действия МА на NMDA-каналы представляет не только теоретический, но и огромный практический интерес. В первую очередь, потенциальную опасность может представлять блокада NMDA-каналов при спинальной анестезии, т.к. этот тип каналов важен для правильной работы центральной нервной системы, а применение антагонистов NMDA-каналов нередко вызывает тяжелые побочные эффекты, такие как нарушение памяти, внимания, двигательной координации и прочее (White and Ryan, 1996; Lees, 1997; Abi-Saab et al., 1998). С другой стороны, NMDA-каналы принимают участие в механизмах потенциации болевой чувствительности, в центральной нервной системе и на периферии (Petrenko et al., 2003, обзор), что может обусловливать преимущества применения в клинической практике МА с блокирующим действием на NMDA-каналы. Таким образом, с блокадой NMDA-каналов при анестезии могут быть сопряжены как отрицательные, так и положительные эффекты, что определяет необходимость исследования действия МА на NMDA-каналы.

Цель работы: экспериментальный и теоретический анализ механизмов действия местных анестетиков и их производных на NMDA-каналы пирамидных нейронов гиппокампа крысы.

Задачи исследования:

1) В опытах па свежеизолированных нейронах зоны CAI гиппокампа крысы с помощью метода "пэтч-кламп" (patch-clamp) в конфигурации "целая клетка" изучить зависимость действия МА от: (а) их концентрации и длительности действия; (б) концентрации агониста; (в) мембранного потенциала, (г) состояния воротного механизма канала.

2) На основании полученных данных выяснить, является ли уменьшение амплитуды тока через NMDA-каналы в присутствии МА результатом закупорки ионной поры канала или следствием аллостерического влияния Fia работу воротного механизма.

3) Оценить в долях мембранного потенциала глубину расположения связывающих участков МА в ЫМОА-канале.

4) Используя математическое моделирование ионных токов через ЫМОА-каналы, определить влияние МА на работу воротного механизма ЫМОА-канала.

5) С помощью сравнительного анализа сродства различных МА к ЫМОА-каналу оценить вклад функциональных группировок этих соединений в связывание.

6) Используя собственные и литературные данные, провести сравнительный анализ блокады и NMDA-кaнaлoв МА.

Научная новизна:

Впервые проведено систематическое изучение действия пяти местных анестетиков (новокаин (НОВ), бензокаин (БЕНЗ), тетракаин (ТЕТР), лидокаин (ЛИД), этидокаин (ЭТ)) и трех их производных (новокаинамид (НОВА), (}Х-314 и ЬЗО) на ионные токи через NMDA-каналы механически изолированных пирамидных нейронов гиппокампа крысы.

Изучена зависимость блокады ЫМОА-каналов этими соединениями от их концентрации, концентрации агониста и мембранного потенциала.

Показано, что подавление ионных токов через ЫМОА-каналы протонируемыми МА и постоянно заряженным (}Х-314 является результатом закупорки ионной поры канала. Оценена глубина проникновения в канал протонируемой аминогруппы третичных МА и постоянно заряженной аммониевой группы четвертичного (}Х-314. Наряду с этим показано существование потенциал-независимого механизма блокады у МА ксилидинового ряда.

Изучена кинетика взаимодействия МА с ЫМОА-каналами и проанализированы структурные факторы, определяющие ее.

Проанализировано влияние блокады ионной поры ЫМОА-канала МА на работу воротного механизма.

Проведен систематический анализ связи эффективности блокады NMDA-кaнaлoв МА с их структурой. Оценен вклад заряженных, полярных и гидрофобных группировок во взаимодействие МА с ЫМОА-каналами.

Научно-практическая ценность. Блокаторы ЫМОА-каналов считаются перспективными терапевтическими агентами для лечения нейродегенеративных заболеваний, однако введение этих средств в медицинскую практику на текущий момент существенно ограничивается серьезными осложнениями, которые вызывают многие из них. Анализ этих явлений показывает, что безопасность применения блокаторов ЫМОА-каналов зависит от их аффинности, кинетики блокады и взаимодействия с воротным механизмом канала (Кода\Уз1а, 2000). Поэтому выявленные в данной работе закономерности блокирующего действия МА на

NMDA-кaнaлы и их связь со структурой этих соединений могут быть использованы в дальнейшем для направленного синтеза новых лекарственных препаратов, мишенью действия которых являются NMDA-кaнaлы.

Практическая значимость исследования действия МА на ЫМОА-каналы определяется широким применением этих соединений в медицине для местной, спинальной и других видов анестезии. При этом с побочным действием МА на NMDA-кaнaлы могут быть ассоциированы как положительные (предотвращение сенситизации болевой чувствительности), так и отрицательные (характерные для многих блокаторов ЫМОА-каналов) эффекты применения анестетиков. Полученная информация о действии МА на NMDA-кaнaлы может быть использована в дальнейшем для анализа этих явлений и создания усовершенствованных средств для контроля над болевой чувствительностью.

Диссертационная работа состоит из введения и пяти глав, включая литературный обзор. В первой из них дан обзор данных о строении и принципах работы ЫМОА-каналов, действии МА на №+-каналы и исследований ионных каналов, в которых в качестве инструментов были применены блокаторы. Кроме того, описано математическое моделирование действия блокаторов открытых ЫМОА-каналов. Во втором разделе даны материалы и методы, применявшиеся в работе. Третий раздел содержит результаты исследования действия МА на ионные токи через NMDA-кaнaлы. В четвертом разделе проводится обсуждение полученных результатов. Сделанные по результатам работы выводы приведены в пятом разделе. Работа завершается библиографическим списком, состоящим из 291 источника. Диссертационная работа содержит 6 таблиц и 64 рисунка.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Колесникова, Татьяна Валерьяновна

выводы

1. Методом "пэтч-кламп" в конфигурации "целая клетка" установлено, что при наружном воздействии на пирамидные нейроны гиппокампа крысы местные анестетики и их структурные производные (бензокаин, тетракаин, новокаин, этидокаин, лидокаин, новокаинамид, ЬЗО и (}Х-314) блокируют ионные токи через ЫМОА-каналы в диапазоне концентраций 10 мкМ - 10 мМ.

2. Механизмом блокады протонируемыми МА и постоянно заряженным (}Х-314 является закупорка ионной поры канала. При этом протонируемая (или постоянно заряженная в случае (2Х-314) группировка большинства МА проникает глубоко в ионную пору канала и располагается вблизи селективного фильтра. Исключение составляет ТЕТР, протонируемая аминогруппа которого при блокаде ЫМОА-каналов остается близко к наружному краю мембранного поля.

3. Закупорка ионной поры ЫМОА-каналов МА не нарушает нормальной работы воротного механизма канала и диссоциации комплекса канал-агонист. Исключение составляют (2Х-314 и ЛИД, которые в некоторой степени препятствуют десенситизации канала и/или распаду комплекса канал-агонист.

4. Ведущую роль непосредственно во взаимодействии МА с их участком связывания внутри ЫМЭА-канала играет ароматический радикал этих соединений. Кроме того, существует более слабое гидрофобное взаимодействие между алкильными цепями алифатической аминогруппы МА и участком связывания этих соединений в канале. Заряд аминогруппы способствует диффузии молекул МА к их участку связывания внутри канала при отрицательных мембранных потенциалах, однако его вклад непосредственно во взаимодействие МА с участком связывания мал. И, наконец, в отличие от того, что имеет место при блокаде Ыа+-каналов, взаимодействие МА с ЫМОА-каналами слабо зависит от типа полярной (амидной или эфирной) связи промежуточной цепи.

5. Зависимость блокады ЫМОА-каналов протонируемыми МА и постоянно заряженным (}Х-314 от мембранного потенциала является результатом непосредственного взаимодействия между зарядом блокатора и электрическим полем мембраны, а не связана с изменением свойств канала при сдвиге мембранного потенциала.

6. Наряду с блокирующим участком внутри ионной поры канала, МА ксилидинового ряда (ЛИД, ЭТ, ОХ-314 и ЬЗО) имеют второй блокирующий участок, расположенный вне мембранного поля.

7. Сравнение величин 1С50 МА при блокаде Ыа+- и ЫМОА-каналов показывает, что в условиях клинического применения некоторых МА (НОВ, БЕНЗ и НОВА) следует учитывать возможность побочной блокады ЫМОА-каналов.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает сердечную благодарность своему научному руководителю профессору, доктору медицинских наук Борису Израилевичу Ходорову, без грамотного руководства и чуткого отношения которого выполнение работы было бы невозможно.

Также хотелось бы поблагодарить Сергея Геннадьевича Кошелева за ценные дискуссии, в ходе которых выкристаллизовывались основные идеи работы; а также ценные методические рекомендации и любезно предоставленные компьютерные программы для регистрации ионных токов через каналы, обработки экспериментальных данных и кинетического моделирования.

Отдельная благодарность Марии Елшанской и Евгению Резнику за терпение и помощь в освоении автором методики локальной фиксации потенциала.

Кроме того, хочу поблагодарить всех сотрудников лаборатории патологии ионного транспорта и внутриклеточной сигнализации НИИ ОПП РАМН за теплый климат в коллективе и постоянную поддержку.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Колесникова, Татьяна Валерьяновна, 2005 год

1. Кошелев С.Г., Ходоров Б.И. (1992) Тетраэтиламмоний и тетрабутиламмоний как инструменты исследования NMDA-каналов нейрональной мембраны. Биологические мембраны 6(10-11):1365-1369.

2. Кошелев С.Г. (1995) Блокада NMDA-каналов пирамидных нейронов гиппокампа органическими катионами. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва.

3. Кошелев С.Г., Ходоров Б.И. (1995) Тетрабутиламмоний, такрин и 9-аминоакридин, блокируя открытые каналы NMDA-каналы, препятствуют их закрыванию и десенситизации. Биологические мембраны 12(1):89-104.

4. Магазаник Л.Г., Антонов С.М., Лукомская Н., Потапьева H.H., Гмиро В.Е., Джонсон И.В. (1994). Блокада глутаминэргических и холинэргических ионных каналов производными адамантана. Физиологический Журнал им. И.М. Сеченова 80(7):99-112.

5. Негуляев, И. А., Носырева, Е. Д., 1979. Сравнительное исследование действия новокаина и бенззокаина на нормальные и модифицированные аконитином натриевые каналы. Цитология 21 (6):697-702.

6. Резник Е.В. Полиамины как инструменты исследования биофизических и хеморецептивных свойств НМДА рецепторов. Дипломная работа. Москва: Московский физико-технический институт (Государственный университет), 2003.

7. Соболевский А.И. Блокаторы как инструменты исследования биофизических свойств НМДА каналов: Дис. . к-та физико-математических наук. Москва: Московский физико-технический институт (Государственный университет), 1999. С. 122.

8. Соболевский А.И., Ходоров Б.И. (2000) Исследование функциональной архитектуры NMDA-канал рецепторного комплекса с помощью блокаторов. Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова 86(9): 1118-1137.

9. Ходоров Б.И., Шишкова Л.Д., Пегаиов Э.М. (1974) Эффект новокаина и ионов Са2+на медленную иннактивацию натриевых каналов перехвата Ранвье нервного волокна лягушки. Бюл. Экспер. Биол. №3:10-14.

10. Ходоров Б.И. (1990) Аллостерическое взаимодействие между ВТХ-рецептором и другими рецепторами №+-каналов. В «Природные нейротоксины активаторы натриевых каналов возбудимых мембран нервных и мышечных клеток», Итоги науки и техники, том 44, стр. 123-133.

11. Ходоров Б.И. (1992) Медленная инактивация и блокада натриевых каналов возбудимой мембраны химическими соединениями. Пат. Физиол. и эксперим. терапия. № 4, стр. 24-30.

12. Abi-Saab W.M., D'Souza B.C., Moghaddam В., Krystal J.H. (1998) The NMDA antagonist model for schizophrenia: promise and pitfalls. Pharmacopsychiatry 31. Suppl 2.:104-109.

13. Amato A, Ballerini L and Attwell D (1994) Intracellular pH changes produced by glutamate uptake in rat hippocampal slices. J Neurophysiol 72:1686-1696.

14. Anis NA, Berry SC, Burton NR, Lodge D. (1983). The dissociative anaesthetics, ketamine and phencyclidine, selectively reduce excitation of central mammalian neurones by N-methyl-aspartate. Br J Pharmacol 79(2):565-575.

15. Anson LC, Chen PE, Wyllie DJA, Colquhoun D and Schoepfer R. (1998) Identification of amino acid residues of the NR2A subunit that control glutamate potency in recombinant NR1/NR2A NMDA receptors. J Neurosci 18:581-589.

16. Antonov SM, Johnson JW, Lukomskaya NY, Potapyeva NN, Gmiro VE, Magazanik LG. (1995). Novel adamantane derivatives act as blockers of open ligand-gated channels and as anticonvulsants. Mol Pharmacol. 47(3):558-67.

17. Antonov, S.M., Johnson, J.W. 1996. Voltage-dependent interaction of open-channel blocking molecules with gating of NMDA receptors in rat cortical neurons. J. Physiol. 493.2:425-445.

18. Antonov, S. M., Gmiro, V. E., Johnson, J. W. 1998. Binding sites for permeant ions in the channel ofNMDA receptors and their effects on channel block. Nat. Neuroscie. 1(6): 451-461.

19. Antonov, S.M, Johnson, J.W. 1999. Permeant ion regulation of N-methyl-D-aspartate receptor channel block by Mg2+. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96(25):14571-14576.

20. Araneda RC, Zukin RS, Bennett MV. (1993) Effects of polyamines on NMDA-induced currents in rat hippocampal neurons: a whole-cell and single-channel study. Neurosci Lett. 152(1-2):107-112.

21. Araneda RC, Lan JY, Zheng X, Zukin RS, Bennett MV. (1999) Spermine and arcaine block and permeate N-methyl-D-aspartate receptor channels. Biophys J. 76(6):2899-911.

22. Armstrong CM. (1966) Time course of TEA(+)-induced anomalous rectification in squid giant axons. J Gen Physiol. 50(2):491-503.

23. Armstrong CM (1969) Inactivation of the potassium conductance and related phenomena caused by quaternary ammonium ion injection in squid axons. J Gen Physiol. 54(5):553-75.

24. Armstrong CM (1971) Interaction of tetraethylammonium ion derivatives with the potassium channels of giant axons. J Gen Physiol. 58(4):413-37.

25. Armstrong CM, Bezanilla F, Rojas E. (1973) Destruction of sodium conductance inactivation in squid axons perfused with pronase. J Gen Physiol. 62(4):375-91.

26. Armstrong N, Sun Y, Chen GQ, Gouaux E. (1998). Structure of a glutamate-receptor ligand-binding core in complex with kainate. Nature 395:913-17.

27. Armstrong N and Gouaux E (2000) Mechanisms for Activation and Antagonism of an AMPA-Sensitive Glutamate Receptor: Crystal Structures of the GluR2 Ligand Binding Core1. Neuron 28: 165-181.

28. Arundine M, Tymianski M. (2004) Molecular mechanisms of glutamate-dependent neurodegeneration in ischemia and traumatic brain injury. Cell Mol Life Sci. 61(6):657-68.

29. Ascher P, Bregestovski P, Nowak L. (1988) N-methyl-D-aspartate-activated channels of mouse central neurones in magnesium-free solutions. J Physiol. 399:207-26.

30. Ascher P, Nowak L. (1988) The role of divalent cations in the N-methyl-D-aspartate responses of mouse central neurones in culture. J Physiol. 399:247-66.

31. Asztely F, Gustafsson B. (1996) Ionotropic glutamate receptors. Their possible role in the expression of hippocampal synaptic plasticity. Mol Neurobiol. 12(1): 1-11.

32. Ayalon G, Stern-Bach Y. 2001. Functional assembly of AMPA and kainate receptors is mediated by several discrete proteinprotein interactions. Neuron 31:103-13.

33. Banke T.G., Traynelis S.F. (2003) Activation of NR1/NR2B NMDA receptors. Nature Neuroscience 6, 144- 152.

34. Banke TG, Dravid SM, Traynelis SF. (2005) Protons trap NR1/NR2B NMDA receptors in a nonconducting state. J Neurosci. 25(1):42-51.

35. Beck C, Wollmuth LP, Seeburg PH, Sakmann B, Kuner T. (1999) NMDAR channel segments forming the extracellular vestibule inferred from the accessibility of substituted cysteines. Neuron. 22(3):559-70.

36. Behe P, Stern P, Wylli D, Nassar M, Schoepfer R and Colquhoun D. (1995) Determination of NMDA NR1 subunit copy number in recombinant NMDA receptors. Proc R Soc Lond 262: 104106.

37. Benveniste M, Mienville J-M, Sernagor E and Mayer ML (1990a) Concentration-jump experiments with NMDA antagonists in mouse cultured hippocampal neurons. J Neurophysiol 63:1373-1384.

38. Benveniste M., Clements J., Vyklicky L. J., Mayer M.L. (1990b) A kinetic analysis of the modulation of N-methyl-D-aspartic acid receptors by glycine in mouse cultured hippocampal neurones. J Physiol. 428:333-57.

39. Benveniste M., Mayer M.L. (1991) Kinetic analysis of antagonist action at N-methyl-D-aspartic acid receptors. Two binding sites each for glutamate and glycine. Biophys J. 59(3):560-73.

40. Benveniste, M. and Mayer, M. L. (1993) Multiple effects of spermine on N-methyl-D-aspartic acid receptor responses of rat cultured hippocampal neurones. J. Physiol. (London) 464, 131-163

41. Benveniste M, Mayer ML. (1995) Trapping of glutamate and glycine during open channel block of rat hippocampal neuron NMDA receptors by 9-aminoacridine. J Physiol. 483 (2):367-84.

42. Blanpied TA, Boeckman FA, Aizenman E and Johnson JW (1997) Trapping channel block of NMDA-activated responses by amantadine and memantine. J Neurophys 77:309-323.

43. Blanpied TA, Clarke RJ, Johnson JW. (2005) Amantadine inhibits NMDA receptors by accelerating channel closure during channel block. J Neurosci. 25(13):3312-22.

44. Bliss TV, Collingridge GL. (1993) A synaptic model of memory: long-term potentiation in the hippocampus. Nature. 361(6407):31-9.

45. Bokesch PM and Strichartz GR (1983) Temperature modulation of local anesthetic block in mammalian nerve. Reg. Anaesth. 8:49.

46. Bokesch PM, Post C and Strichartz GR (1986) Structure-activity relationship of lidocaine homologues on tonic and frequency-dependent impulse blocked in nerve. J. Pharmacol Exp Ther 237: 773-781.

47. K. V. Bolshakov, V. E. Gmiro, D. B. Tikhonov and L. G. Magazanik (2003) Determinants of trapping block of N-methyl-D-aspartate receptor channels. Journal of Neurochemistry1. V. 87(1): 56 -65.

48. Bormann J (1989) Memantine is a potent blocker of N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor channels. Eur J Pharmacol 166:591-592.

49. Brau ME, Vogel W, Hempelmann G. (1998) Fundamental properties of local anesthetics: halfmaximal blocking concentrations for tonic block of Na+ and K+ channels in peripheral nerve. Anesth Analg 87(4):885-9

50. Brose N, Gasik GP, Vetter DE, Sullivan JM and Heinemann SF (1993) Protein chemical characterisatioon and immunocytochemical localization of the NMDA receptor subunit NMDA Rl. J. Biol. Chem. 268:22663-22671.54