Биотрансформация бетулина актинобактериями рода Rhodococcus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Тарасова, Екатерина Владимировна

• Тарасова, Екатерина Владимировна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Тарасова, Екатерина Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Биотрансформация пентациклических тритерпеноидов

1.1. Биотрансформация пентациклических тритерпеноидов 12 олеананового, урсанового и лупанового типа

1.2. Использование актинобактерий рода ШкнЛососст для 48 направленной биоконверсии терпеноидных соединений

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Рабочая коллекция бактериальных культур

2.2. Условия культивирования

2.3. Контрольные эксперименты

2.4. Иммобилизация бактериальных клеток в полимерном 58 носителе

2.5. Подготовка суспензий нерастущих клеток

2.6. Получение клеточных фракций из родококков

2.7. Определение дыхательной активности

2.8. Определение жизнеспособности нерастущих клеток 62 родококков

2.9. Количественный и качественный анализ продуктов 62 биотрансформации бетулина

2.10. Препаративное получение бетулона

2.11. Химическая модификация бетулона, полученного в 64 результате бактериального окисления бетулина

2.12. Атомно-силовая микроскопия

2.13. Математическое моделирование процесса 66 биотрансформации бетулина

2.14. Статистическая обработка результатов

Глава 3. Исследование бетулинтрансформирующей активности 68 коллекционных культур родококков, поиск активных биотрансформаторов бетулина

Глава 4. Подбор оптимальных условий процесса

биотрансформации бетулина

Глава 5. Математическое моделирование процесса

биотрансформации бетулина

Глава 6. Химико-ферментативный синтез фармакологически

перспективных секопроизводиых бетулина

Заключение

Выводы

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биотрансформация бетулина актинобактериями рода Rhodococcus»

введение

Актуальность проблемы. Полициклические тритерпеноиды растительного происхождения представляют интерес в качестве исходных соединений в синтезе новых фармакологически активных веществ. Бетулин (луп-20(29)-ен-3,28-диол, С30Н50О2, CAS: 473-98-3) - пентациклический тритерпеноид лупанового ряда, содержание которого во внешнем слое коры березы достигает 20-35%, активно используется для получения противовоспалительных, гепапротекторных, противоопухолевых, противовирусных, антималярийных, антибактериальных соединений (Tolstikov et al., 2005; Alakurtti et al., 2006; Santos et al., 2009). Помимо химических модификаций предпринимаются попытки биологической трансформации бетулина с помощью микроорганизмов, так как биокатализ открывает возможность получать целевые продукты с высокой степенью регио- и стереоселективности в одну технологическую стадию при обычных температурах и давлении, в неагрессивной реакции среды и экологически безопасных условиях. Примеры биотрансформации бетулина пока немногочисленны (Parra et al., 2009; Muffler et al., 2011) и связаны преимущественно с использованием эукариотов, в частности представителей грибов Armillaria, Aspergillus, Chaetomium, Dothideomycetes, Rhodotorula. Описаны процессы окислительного расщепления бетулина до 4,28-дигидрокси-3,4-секолуп-20(29)-ен-3-овой кислоты при участии Chaetomium longirostre IFO 9873 (Akihisa et al., 2002) и окисления бетулина до бетулиновой кислоты с участием Armillaria luteo-virens Sacc QH, Aspergillus foetidus Zu-Gl, Aspergillus oryzae Sacc QH (Chen et al., 2009; Liu et al., 2010). Недавно появились сведения о региоселективном окислении бетулина до бетулона с использованием Rhodotorula mucilaginosa F10 (Мао et al., 2012) и Dothideomycete sp. HQ 316564 (Liu et al., 2013). В качестве одного из перспективных интермедиатов в синтезе биологически активных соединений особый интерес представляет 3-оксопроизводное бетулина - бетулон (Koohang et al, 2009; Mar et al., 2009; Mar et al., 2010; Orlov et al., 2011). Описаны процессы химического синтеза цитотоксичных циано- и азапроизводных бетулина на основе бетулона (Koohang et al., 2009; Mar et al., 2009; Mar et al., 2010). В отличие

от трехстадийного химического синтеза бетулона использование микроорганизмов позволяет осуществлять одностадийное окисление вторичной гидроксильной группы бетулина в оксогруппу при сохранении нативной С(28) гидроксильной группы. Однако описанные процессы биотрансформации бетулина до бетулона с использованием условно-патогенных дрожжей Rhodotorula mucilaginosa F10 (Мао et al., 2012) и грибов Dothideomycete sp. HQ 316564 (Liu et al., 2013) имеют значительные недостатки, поскольку осуществляются в условиях использования сложных питательных сред, характеризуются высокой продолжительностью, невысоким уровнем биоконверсии субстрата при внесении низких концентраций исходного соединения. Кроме того, использование грибов в качестве биокатализаторов потенциально опасно вследствие характера их посевного материала (споры) и способности к синтезу микотоксинов, обладающих мутагенным и канцерогенным действием. В связи с этим актуальным является поиск непатогенных микроорганизмов, способных эффективно катализировать окислительные трансформации бетулина.

Одной из активно используемых групп микроорганизмов в промышленной биотехнологии являются непатогенные актинобактерии рода Rhodococcus. Не мицелиальный характер роста, политрофность и лабильность метаболических систем, синтез биосурфактантов, способность расти на минимальных средах, высокая каталитическая активность и отсутствие выраженных патогенных свойств (Ившина и др., 1987; Ivshina et al., 1998; Larkin et al2006; Martinkova et al, 2009; Kuyukina, Ivshina, 2010) обусловливают перспективность реализации уникальных метаболических систем родококков для окислительной биотрансформации бетулина.

Цель настоящей работы - исследование возможности использования актинобактерий рода Rhodococcus для селективной биотрансформации пентациклического тритерпеноида лупанового ряда бетулина.

Основные задачи исследования

1. Исследовать каталитическую активность коллекционных культур родококков разных видов в отношении бетулина. Отобрать штаммы — наиболее

активные биотрансформаторы бетулина и определить условия его эффективной биоконверсии.

2. Сравнить бетулинтрансформирующую активность нерастущих и иммобилизованных актинобактериальных клеток. Изучить механизм взаимодействия актинобактериальных клеток с тритерпеновым субстратом и возможные пути его трансформации.

3. Разработать прогнозную модель процесса биотрансформации бетулина в высоких концентрациях с использованием методов математического моделирования.

4. Оценить возможность использования продуктов бактериального окисления бетулина для последующего синтеза биологически активных соединений химическими методами.

Научная новизна. Впервые показана способность актинобактерий рода Якойососсж к биотрансформации пентациклического тритерпеноида лупанового ряда бетулина. В качестве основного метаболита биоконверсии бетулина идентифицирован бетулон - продукт региоселективного окисления вторичной гидроксильной группы бетулина. Установлено, что уровень бетулинтрансформирующей активности родококков зависит от концентрации н-гексадекана в среде культивирования. Подобраны оптимальные условия биоконверсии бетулина с использованием суспензий нерастущих клеток. Биотрансформация бетулина протекает за счет адгезии бактериальных клеток к тритерпеновому субстрату. Экспериментально подтверждено, что нерастущие клетки характеризуются высоким уровнем каталитической активности в отношении бетулина в повышенных (до 3,0 г/л) концентрациях. Определены основные кинетические закономерности процесса биотранформации бетулина нерастущими клетками, предложена математическая модель, адекватно описывающая процесс биотрансформации. В результате сравнительного анализа трансформирующей активности родококков разных видов установлено, что наиболее высокая степень биоконверсии бетулина до бетулона достигается при использовании нерастущих клеток Л. гкосИоскгот и Я. егу1кгороН$. На основе

бетулона, полученного в результате бактериальной трансформации бетулина, путем последующей химической модификации синтезирован 3,4-секобетулин, перспективный в качестве противоопухолевого агента.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные расширяют представление о биотрансформирующих свойствах родококков. Экспериментально обоснована способность родококков разных видов к региоселективному окислению пентациклического тритерпеноида растительного происхождения бетулина в бетулон. Сравнительный анализ каталитической активности растущих и нерастущих клеток выявил высокий биотехнологический потенциал нерастущих клеток, применение которых позволяет существенно сократить (с 240 до 24 ч) продолжительность процесса биотрансформации и получить целевой продукт с высоким (60%) выходом. Использование простых (буферных) растворов в качестве трансформационной среды способствует упрощению выделения бетулона как исходного соединения для синтеза биологически активных соединений. На способ получения бетулона путем бактериальной трансформации бетулина нерастущими клетками Я. гксхЛоскгош ИЭГМ 66, депонированного во Всероссийскую коллекцию промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ АС-1898, составлена Заявка № 2013137269 от 08.08.2013 на выдачу патента на изобретение РФ. Полученные данные могут быть использованы для разработки технологии эффективного получения бетулона с использованием родококков. Результаты диссертационных исследований используются в лекционных курсах "Биоразнообразие и систематика микроорганизмов" для магистрантов Пермского государственного национального исследовательского университета. Информация о наиболее активных штаммах-биотрансформаторах бетулина включена в компьютеризированную базу данных Региональной профилированной коллекции алканотрофных микроорганизмов для использования в сети Интернет (http://www.iegm.ru/iegmcol/strains/index.litml).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Актинобактерии рода Я1ю(1ососсш в присутствии ростовых субстратов н-гексадекана, глюкозы, глицерина катализируют региоселективное окисление

бетулина с образованием бетулона. При использовании растущей культуры родококков максимальный выход целевого продукта (72,2%) достигается в присутствии 3,0 об.% н-гексадекана через 240 ч.

2. Использование суспензий нерастущих клеток родококков позволяет сократить продолжительность процесса биотрансформации бетулина (0,5 г/л) до 24 ч. При этом нерастущие клетки наиболее активно трансформируют бетулин при слабощелочных условиях среды (рН 8,0-9,0) и оптимуме клеточной биомассы в количестве 10 г/л. Биотрансформация бетулина протекает за счет адгезии бактериальных клеток к тритерпеновому субстрату.

3. В условиях использования повышенных концентраций бетулина (от 1,0 до 3,0 г/л) нерастущие клетки в течение 24 ч катализируют образование бетулона с выходом от 40 до 57% соответственно. Наиболее высокой бетулинтрансформирующей активностью характеризуются представители R. erythropolis и R. rhodochrous.

4. На основе бетулона, полученного в результате актинобактериальной трансформации бетулина, путем химической модификации синтезирован 3,4-секобетулин, перспективный в качестве противоопухолевого агента.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на IV Всероссийском с международным участием конгрессе студентов и аспирантов-биологов "Симбиоз Россия 2011", Воронеж, 2011; VII Молодежной школе-конференции с международным участием "Актуальные аспекты современной микробиологии", Москва, 2011; 4th Annual Russian-Korean Conference "Current Issues of Natural Products Chemistry and Biotechnology", Новосибирск, 2012; XVII Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых "Биология - наука XXI века", Пущино, 2013; Региональной конференции "Конкурс РФФИ - Пермский край. 10 лет: итоги и перспективы", Пермь, 2013; 5th Congress of European Microbiologists (FEMS), Leipzig, 2013.

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе в изданиях, входящих в утвержденный ВАК перечень рецензируемых научных

изданий ("Вестник Уральской медицинской академической науки", "Российский журнал биомеханики") и изданиях, входящих в международную систему научного цитирования Scopus ("Process Biochemistry"). Подана заявка № 2013137269 "Способ получения бетулона" от 08.08.2013 на выдачу патента на изобретение РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц и 26 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав экспериментальных исследований, обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 208 наименований работ, в том числе 18 отечественных и 190 зарубежных авторов.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора. Работа выполнена в соответствии с планом НИР Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН и является частью исследований, проводимых по теме "Изучение функционального и видового разнообразия микроорганизмов, полезных для экоценозов и практической деятельности человека" (номер госрегистрации 01201353247). Работа поддержана ФЦП "Научные и научно-педагогические кадры инновационной России" (Соглашение № 8793), а также грантами Президента РФ "Ведущие научные школы" (НШ-5589.2012.4), Программы фундаментальных исследований Президиума РАН (проект № 12-П-4-1044, номер госрегистрации 01201256869), Российского фонда фундаментальных исследований и Министерства промышленности, инноваций и науки Пермского края (проект № 11-04-96012-р_урал_а).

Научные положения и выводы диссертации базируются на результатах собственных исследований автора. Химическую модификацию бетулона, полученного в результате актинобактериальной трансформации бетулина, проводили на базе Института технической химии УрО РАН, Пермь (лаборатория биологически активных соединений, зав. лабораторией — к.х.н. Гришко В.В.). Математическое моделирование процесса биотрансформации бетулина выполнено на базе кафедры теоретической механики Пермского национального

исследовательского политехнического университета (зав. кафедрой — д.т.н., профессор Няшин Ю.И.).

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность своим научным руководителям и учителям чл.-корр. РАН Ирине Борисовне Ившиной, к.х.н. Виктории Викторовне Гришко, а также коллективу лаборатории алканотрофных микроорганизмов ИЭГМ УрО РАН за помощь на всех этапах диссертационной работы.

Глава 1. БИОТРАНСФОРМАЦИЯ ПЕНТАЦИКЛИЧЕСКИХ

ТРИТЕРПЕНОИДОВ

1.1. Биотрансформация пентациклических тритерпеноидов олеананового,

урсанового и луианового типа

Пентациклические тритерпеноиды - метаболиты растений и животных, представлены более чем двумя десятками структурных типов, среди которых наиболее распространены тритерпеноиды типа лупана, гопана, фриделана, урсана и олеанана (рис. 1). Данные соединения построены из пяти одинаково сочлененных колец и различаются положением метальных групп. Тритерпеноиды в свободном состоянии - это нелетучие липофильные вещества, растворимые в органических растворителях и нерастворимые в воде (Семенов, Карцев, 2000).

а б

в г

Д е

Рис. 1. Основные структурные типы пентациклических тритерпеноидов: лупан (а), олеанан (б), урсан (в), гопан (г), тараксеран (д), бауран (е), фриделан (ж).

Типичными представителями тритерпеноидов лупанового ряда является бетулин (1, луп-20(29)-ен-3р,28-диол) и бетулиновая кислота (2, 3ß-rnflpokcmiyn-20(29)-ен-28-овая кислота), обнаруживаемые во многих видах листопадных деревьев рода Betula (Береза). В тонкой внешней коре (бересте) Betula alba (Береза белая) содержание бетулина достигает 10—35%, при этом большая часть его находится в микрокристаллической форме, что обусловливает белый цвет березовой коры. Бетулин активно используется для получения противовирусных, противовоспалительных, противоопухолевых соединений (Tolstikov et al., 2005). Бетулиновая кислота и ее производные проявляют высокую противораковую, анти-ВИЧ, противовирусную, противовоспалительную, антисептическую, антимикробную, противомалярийную, антилейшманиозную, антигельминтную, фунгицидную активность (Yogeeswari, Sriram, 2005; Moghaddam et al., 2012). Вследствие селективной цитотоксичности против раковых клеток и удовлетворительного терапевтического индекса, бетулиновая кислота рассматривается как перспективный химиотерапевтический агент против рака

(СЛсЬешюг, К01Ш, 2004). З-Оксопроизводное бетулиновой кислоты — бетулоновая кислота (3) также встречается во многих растениях и обладает выраженным противовоспалительным, антимеланомным и противовирусным действием (Yogeeswari, Бпгат, 2005).

НО

СН2ОН

СООН

СООН

НО

Наряду с химическими методами модификации предпринимаются попытки биологической трансформации лупановых тритерпеноидов (бетулина, 1; бетулиновой кислоты, 2; бетулоновой кислоты, 3; лупеола, 4), а также их структурных аналогов - олеанановых (олеаноловой кислоты, 5; глицирретовой кислоты, 7; глицирризиновой кислоты, 8; эхиноцистовой кислоты, 9; лантадена, 10) и урсановых (урсоловой кислота, 6; азиатиковой кислоты, 11; Р-босвеллиевой кислоты, 12) тритерпеновых спиртов и кислот. Биокатализ позволяет проводить селективные трансформации в позициях молекулы, труднодоступных для химических агентов. При этом используются мягкие условия, нет необходимости в введении защитных групп, а проводимые в одну технологическую стадию реакции биопревращений характеризуются высокой степенью хемо-, регио- и стереосе лективности.

10

Биотрансформация олеанановых тритерпеноидов. Анализ литературных данных свидетельствует о том, что наиболее исследованным субстратом среди тритерпеновых кислот является глицирретовая кислота (7). Глицирретовая кислота (7) и ее гликозид (глицирризин) (8) обнаружены в различных видах Glycyrrhíza (Солодка). Данные соединения, как и их многочисленные производные, обладают выраженной фармакологической активностью, в том числе противоязвенной, противовоспалительной (Tolstikov et al., 1997; Tolstikov et al., 1998; Chung et al., 2001) и противоопухолевой (Ryu et al., 1994; Luo et al., 2004). Показано (Mahato et al., 1992), что глицирретовая кислота индуцирует выработку интерферона и обладает противовирусным действием в отношении вируса гепатита, ее активно используют при лечении больных с острым и хроническим гепатитом для предотвращения злокачественного перерождения гепацитов и возникновения гепатоцеллюлярной карциномы (Arase et al., 1997; van Rossum et al., 1998). Установлено, что глицерретовая кислота способствует снижению множественной лекарственной резистентности раковых клеток при совместном использовании с хемотерапевтическими агентами (Nabekura et al., 2008).

Описаны многочисленные примеры биоконверсии глицирретовой кислоты (7) с использованием культур грибов. Как правило, первым этапом биотрансформации соединения 7 является гидроксилирование, при этом гидроксильные группы могут вводиться в различные положения молекулы. Так, показана способность культур Curvularia lunata АТСС 13432 (Canónica et al., 1966), Curvularia lunata KA-91 (He et al., 2011), Mucor spinosus AS 3.3450 (Ma et

al., 2008), Cunninghamella elegans TSY-0865 (Choudhary et al., 2009) к селективному 7|3-гидроксилированию кислоты 7 с образованием соединения 13. При использовании представителей аскомицетов Trichotecium roseum АТСС 8685 (Canónica et al., 1967) и Absidia pseudocylinderospora АТСС 24169 (Maatooq et al., 2010) достигается возможность гидроксилирования в положения С(7) и/или С(15) с образованием соответствующих моногидрокси- (13, 14) и дигидроксипроизводных (15). При этом показано, что 7р,15а-глицирретовая кислота (15) проявляет выраженные гепатопротекторные свойства (Maatooq et al., 2010). Среди основных продуктов биотрансформации с использованием бактерий Streptomyces sp. G-20 зарегистрированы 22а-гидроксиглицирретовая кислота (16), а также минорные метаболиты - 22а,23-дигидрокси- (17) и 22а,24-дигидроксиглицирретовая (18) кислоты (Sakano, Ohshima, 1986а). Наряду с реакциями гидроксилирования многие микроорганизмы катализируют реакцию окисления Зр-гидроксигруппы. Так, среди продуктов биотрансформации кислоты 7 грибами Mucor polymorphosporus AS 3.3443 наряду с основными (7р~гидрокси-(13) и 15а-гидрокси- (14)) и минорными (7а-, 6(3- и 24-гидроксипроизводные (19—21)) метаболитами зарегистрированы 3-оксо-7р-гидрокси- (1,1%) (22) и 3-оксо-15а-гидроксиглицерретовая (0,9%) (23) кислоты (Xin et al., 2006). Позже показана способность Mucor polymorphosporus AS 3.3443 к гидроксилированию глицирретовой кислоты (7) в 6|3,7р- (26) и 27-положения (27) (Xin et al., 2010). В процессе биотрансформации глицирретовой кислоты (7, 0,3 г/л) культурой грибов Cunninghamella blakesleeana AS 3.970 регистрируется образование двух основных кислот - 3-оксо-7|3-гидрокси- (22, 30%) и 7р-гидроксиглицерретовой (13, 25%), а также минорных метаболитов (3-оксо-7а-гидрокси- (24), 7а-гидрокси- (19) и предположительно 3-оксо-7(3,15а-дигидроксипроизводное (25)). При этом начальный этап трансформации кислоты 7 при использовании штамма Cunninghamella blakesleeana AS 3.970 - гидроксилирование в положение С(7) (в течение первых 24 ч) и через 48 ч окисление 3|3-гидроксигруппы до карбонильной (Qin et al., 2010). Культура Cunninghamella echinulata АТСС 8688a трансформирует кислоту 7 с образованием уникальных 1а-гидрокси- (28), 15а-

гидрокси-18аН- (29) и 13Р-гидрокси-7а,27-окси-12,13-дигидроглицирретовой кислот (30) (последний метаболит является перспективным гепапротектором). Следует особо отметить, что Cunninghamella echinulata АТСС 8688а - первый из описанных микроорганизмов, изменяющий стереохимию глицирретовой кислоты. Предполагается, что стереоинверсия атома H в положении С(18) происходит за счет образования и последующего восстановления двойной связи С(18)-С(19). Промежуточными продуктами в процессе образования кислоты 30, вероятнее всего, являются С(7) и С(27) гидроксипроизводные, однако в среде ферментации они не были обнаружены (Maatooq et al., 2010). Способность к селективному окислению гидроксильной группы кислоты 7 с образованием соответствующего

3-оксопроизводного (31) обнаружена у представителей аскомицетов Gliocladium _ $

viride АТСС 10097 (Maatooq et al., 2010) и 'Fusarium lini' (Fusarium oxysporum) NRRL-68751 (Choudhary et al., 2009). Показано, что 3-оксоглицирретовая кислота (31) оказывает ингибирующее действие на липоксигеназу, что может быть использовано при лечении бронхиальной астмы, воспаления, рака и аутоиммунных заболеваний.

Высказано предположение (Para et al., 2009), что окисление 3ß-гидроксильной группы - начальный этап окислительного расщепления кольца А (аналогично химической реакции Байера-Виллигера) и образования тритерпеновых секопроизводных. Способность к трансформации кислоты 7 с образованием секопроизводных обнаружена у некоторых представителей микроорганизмов. Так, бактерии Chainia antibiotica (Streptomyces sclerotialus) IFO 12246 катализируют реакцию окислительного расщепления кольца А глицирретовой кислоты (7) с образованием 4-гидрокси-11-оксо-3,4-секо-18р-олеан-12-ен-3,30-диовой (32) и 4,7Р-дигидрокси-11-оксо-3,4-секо-18р-олеан-12-ен-3,30-диовой кислот (33).

*В обзоре инвалидные виды или устаревшие названия таксонов бактерий и грибов (согласно существующим правилам) приведены без курсива и в кавычках. В скобках приведены современные названия таксонов или синонимы к существующим (если таковые имеются).

соон

соон

но

13: r, = он, r2 = r3 = h, r4 = сн3 14: r! = h, r2 = oh, r3 = h, r4 = ch3 15: ri = r2 = oh, r3 = h, r4 = ch3 16: ri = r2 = h, r3 = oh, r4 = ch3 17: r, = r2 = h, r3 = oh, r4 = ch2oh

ч COOH

22: ri =h, r2 = ßoh, r3 - h 23: ri = r2 = h, r3 = oh 24: r, = h, r2 = aoh, r3 = h 25: ri = h, r2 = ßoh, r3 = oh

ч COOH

HO

18: ri = r2 = h, r3 = oh, r4 = ch2oh 19: r! = h, r2 = oh, r3 = h, r4 = ch3 20: ri - oh, r2 = r3 = h, r4 = ch3 21: ri = r2 = r3 = h, r4 = ch2oh

COOH

HO

26: ri = h, r2 = r3 = oh, r4 = ch3 27: ri = r2 = r3 = h, r4 = ch2oh 28: ri = oh, r2 = r3 = h, r4 = ch3

COOH

HO

COOH

COOH

31

HOOC Q

COOH

COOH

35

COOH

HO

39: ri = r2 = h, r3 = ßh 40: rj = r2=h, r3 = ah 41:r1 = oh,r2=h,r3 = ßh 42: r, = h, r2 = oh, r3 = ßh 43: ri = r2 = oh, r3 = ßh 44: rj = oh, r2 = h, r3 = ah 45: r, = r2=oh,r3 = ah

HOOC

32: ri = r2= h 33: r! = oh, r2 = h 34: r, = h, r2 = oh

X30COOR4

RJO ^... R3*24 .....

36: r, = r2 = h, r3 = cooh, r4 = h

37: rj = r2 = h, r3 = r4 = ch3

38: rx = coch3, r2 = oh, r3 = ch3, r4

h

-30COOH

HO

46: ri = r2 = h 47: rj = oh, r2 = h 48: r, = h, r2 = oh 49: r, = r2 = oh

Аналогичную активность проявляет Chainia antibiotica (Streptomyces sclerotialus) IFO 12246 в отношении кислоты 16, при этом в качестве метаболита регистрируется соединение 34 (Sakano, Ohshima, 1986b). Способность к окислительному расщеплению кольца А глицирретовой кислоты (7) обнаружена у бактериального штамма Sphingomonas paucimobilis G5, катализирующего образование преимущественно 11-оксо-3,4-секо-4,23,24-тринор-олеан-12-ен-3,28,30-триовой кислоты (35) (Yoshida et al., 2001а), а в присутствии ингибиторов оксигеназ (1-аминобензотриазола и метирапона) промежуточный продукт -3(3-гидрокси-11-оксоолеан-12-ен-24,30-диовую кислоту (36) (Yoshida et al., 2001b). Это свидетельствует об активном участии в расщеплении кольца А глицирретовой кислоты (7) оксигеназных ферментов.

Описаны единичные примеры образования эфиров глицирретовой кислоты (7) с использованием микроорганизмов. Показана способность актинобактерий Nocardia sp. NRRL 5646 к этерификации кислоты 7 с образованием ее 28-метилового эфира (37) (Zhang et al., 2005). Среди продуктов биотрансформации глицирретовой кислоты (7) с участием грибов Mucor polymorphosporus AS 3.3443 обнаружена 3-0-ацетил-7(3-гидроксиглицирретовая кислота (38) (Xin et al., 2006). Исследована возможность биотрансформации эпимеров 18(ЗН-кислоты 7: 18аН-глицирретовой (46), 18(ЗН-ликвиритовой (39) и 18аН-ликвиритовой (40) кислот представителями грибов Curvularia, Trichothecium, Cunninghamella, Mucor и Helicostylum. Показано, что культуры Curvularia lunata АТСС 13432, Trichothecium roseum АТСС 8685, Cunninghcimella sp. АТСС 3229, Mucor griseocyanus ATCC 1207-a, Helicostylum piriforme ATCC 8992 трансформируют кислоты 39 и 46 в соответствующие 7(3-гидрокси-(41, 47), 15а-гидрокси-(42, 48) и 7|3,15а-дигидроксипроизводные (43, 49). В процессе биотрансформации 18аН-кислоты (40) с использованием культур Helicostylum piriforme АТСС 8992 и Cunninghamella sp. АТСС 3229 в качестве основного метаболита регистрируется 7(3-гидроксипроизводное (44), в то время как Trichothecium roseum АТСС 8685 катализирует 7(3,15а-дигидроксилирование кислоты 40 с образованием кислоты 45 (Ferrari et al., 1969).

30coor2

он

о

50: rj =

он

r2 = h

r,0

з

гон о

51: ri =

он ,r2=nh3

В связи с тем, что кислота 7 в растениях чаще всего встречается в растениях в виде гликозида (сапонина) — глицирризиновой кислоты, или глицирризина (8), актуален поиск микроорганизмов, способных катализировать гидролиз гликозидных связей с образованием соответствующих моногликозида или агликона. Так, описан процесс биотрансформации глицирризина (8) дрожжами Cryptococcus magnus MG-27 с образованием до 95% З-О-моно-Р-О-глюкуронида (50) (Kuramoto et al., 1994). Описаны многочисленные примеры биоконверсии глицирризина (8) с использованием грибов рода Aspergillus. Так, в оптимальных условиях представители Aspergillus terreus, продуцирующие внеклеточные формы ß-D-глюкоронидазы, катализирует образование З-О-моно-р-Б-глюкуронида (50) и кислоты 7 с выходом 51,5 и 26,8% соответственно (Amin et al., 2010). В процессе инкубирования Aspergillus parasiticus Speare BGB в присутствии глицирризина (8) через 96 ч выход глицирретовой кислоты (7) составлял 95% (Wang et al., 2010). Культуры грибов видов Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus sojae, Aspergillus tamari трансформируют глицирризин (8) в 3-оксоглицирретовую кислоту (31), при этом в качестве промежуточного продукта регистрируется кислота 7 (Yamada et al., 1994). Использование иммобилизованных клеток Aspergillus terreus в процессе биотрансформации глицирризината аммония (51) позволяет получать глицирретовую (7) и 3-оксоглицирретовую (31) кислоты с выходами 21,7 и 4,1% соответственно (El-Minofi, 2005). Среди метаболитов биоконверсии глицирризина (8) с использованием Aspergillus niger

зарегистрированы 15а-гидрокси-ЗД 1-диоксо-олеан-12-ен-30-овая (23) и 7ß,15a-дигидрокси-3,11-диоксо-олеан-12-ен-30-овая (25) кислоты - продукты последовательного гидролиза глицирризина (8) до агликона глицирретовой кислоты (7) и ее последующего окисления путем дегидрирования и гидроксилирования (Kang et al., 2008; Huang et al., 2009).

В настоящее время накоплен сравнительно большой объем экспериментальных данных по биотрансформации олеаноловой кислоты (5) и ее производных. Олеаноловая кислота (5) - один из наиболее распространенных пентациклических тритерпеноидов, который продуцируется кормовыми и лекарственными растениями в свободном виде или в форме тритерпеноидных гликозидов. Олеаноловая кислота и ее производные обладают противоопухолевой (Huang et al., 2006), противовоспалительной (Dharmappa et al., 2009), противовирусной (Horiuchi et al., 2007), гепатопротекторной (Kinjo et al., 1999), анти-ВИЧ (Mengoni et al., 2002), антимикробной (Horiuchi et al., 2007) и др. активностью (Sultana, Ata, 2008).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тарасова, Екатерина Владимировна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Белицкий, Г.А. Метаболизм канцерогенных углеводородов системой многоцелевых оксидаз клетки / Г.А. Белицкий // Успехи современной биологии. — 1969.-Т. 68, № 1.-С. 19-34.

2. Донова, М.В. Биоконверсия стероидных соединений актинобактериями / М.В. Донова. - Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 2010.- 196 с.

3. Ившина, И.Б. Пропанокисляющие родококки / И.Б. Ившина, P.A. Пшеничнов, A.A. Оборин. - Свердловск: УНЦ АН СССР, 1987. - 128 с.

4. Кинетическая модель процесса иммобилизации бактериальных клеток на твердом носителе // М.С. Куюкина, И.Б. Ившина, М.А. Осипенко, Ю.И. Няшин, А.Н. Тюленёва, М.К. Серебренникова, A.B. Криворучко // Российский журнал биомеханики. - 2007. - Т. 11, № 2 (52). - С. 79-87.

5. Коронелли, Т.В. Липиды R- и S-вариантов Rhodococcus erythropolis / T.B. Коронелли, Т.И. Комарова, О.В. Поршнева // Микробиология. - 1995. - Т. 64, N. 6. - С. 769-777.

6. Лакин, Г.Ф. Биометрия: учебное пособие для вузов / Г.Ф. Лакин. - М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

7. Линник, Ю.В. Метод наименьших квадратов и основы математико-статистической теории обработки наблюдений / Ю.В. Линник. — М.: Физматгиз, 1962.-336 с.

8. Микробиологическая трансформация природных изопреноидов. Биотрансформация изопимаровой и дегидроабиетиновой кислот с использованием бактерий рода Rhodococcus / B.B. Гришко, A.B. Воробьев, Э.Н. Шмидт, Л.М. Покровский, Г.А. Толстиков, И.Б. Ившина, М.С. Куюкина // Химия в интересах устойчивого развития. - 2000. - № 5. - С. 693-698.

9. Милько, Е.С. Гетерогенность популяции бактерий и процесс диссоциации: (Корине- и нокардиоподобные бактерии) / Е.С. Милько, Н.С. Егоров. - М.: МГУ, 1991. - 141 с.

10. Мулюкин, А.Л. Покоящиеся формы неспорообразующих бактерий: дис. ... док. биол. наук: 03.02.03 / Мулюкин Андрей Львович. - М., 2010. - 349 с.

11. Племенков, В.В. Введение в химию природных соединений / В.В. Племенков. - Казань, 2001 - 376 с.

12. Разработка метода получения бетулиновой кислоты региоселективным окислением бетулина растущими культурами микроорганизмов / Д.В. Митрофанов [и др.] // Башкирский химический журнал. -2006.-Т. 13, № 1.-С. 89-91.

13. Романенко, В.И. Экология микроорганизмов пресных вод. Лабораторное руководство / В.И. Романенко, С.И. Кузнецов. - М.: Наука, 1974. -194 с.

14. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / Под. Ред. Н.С. Егорова. - 2 изд. - М.: Моск. ун-т, 1983. - 215 с.

15. Семенов, А.А. Основы химии природных соединений: в 2 т. / А.А. Семенов, В.Г. Карцев - М.: Научное партнерство, 2009. - 624 с.

16. Скрябин, Г.К. Использование микроорганизмов в органическом синтезе / Г.К. Скрябин, JI.A. Головлева - М.: Наука, 1976. - 336 с.

17. Справочник биохимика: пер. с англ. / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс. - М.: Мир, 1991.-544 с.

18. Эль-Регистан, Г.И. Покой как форма адаптации микроорганизмов / Г.И. Эль-Регистан // Механизмы выживания бактерий / О.В. Бухарин, A.JI. Гинцбург, Ю.М. Романова, Г.И. Эль-Регистан. - М.: Медицина, 2005. - С. 11-129.

19. 18P-glycyrrhetinic acid-induced apoptosis and relation with intracellular Ca2+ release in human breast carcinoma cells / H. Luo [et al] II The Chinese-German Journal of Clinical Oncology. - 2004. - V. 3. - P. 137-140.

20. A new Bacillus megaterium whole-cell catalyst for the hydroxylation of the pentacyclic triterpene 11 -keto-(3-boswellic acid (KBA) based on a recombinant cytochrome P450 system / S. Bleif [et al.] II Applied Microbiology and Biotechnology. - 2012. - V. 93, N. 3. - P. 1135-1146.

21. A novel one-step microbial transformation of betulin to betulinic acid catalysed by Cunninghamella blakesleeana / Y. Feng [et al.] II Molecular Pharmacology.-2013.-V. 136, N. l.-P. 73-79.

\

22. Akao, T. Effect of pH on metabolism of glycyrrhizin, glycyrrhetic acid and glycyrrhetic acid monoglucuronide by collected human intestinal flora / T. Akao // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2001. - V. 24, N. 10. - P. 108-112.

23. Alakurtti, S. Pharmacological properties of the ubiquitous natural product betulin / S. Alakurtti, T. Mäkelä, S. Koskimies // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2006. - V. 29, N. l.-P. 1-13.

24. Anabolic activity of ursolic acid in bone: stimulating osteoblast differentiation in vitro and inducing new bone formation in vivo / S.U. Lee [et al.] // Pharmaceutical Research. - 2008b. - V. 58, N. 5-6. - P. 290-296.

25. Anti-AIDS agents, 21. Triterpenoid saponins as anti-HIV principles from fruits of Gleditsia japonica and Gymnocladus chinensis, and a structure-activity correlation / T. Konoshma [et al.] II Journal of Natural Products. - 1995. - V. 58, N. 9. -P. 1372-1377.

26. Antihyperlipidemic effects of red ginseng, Crataegii Fructus and their main constituents ginsenoside Rg3 and ursolic acid in mice / S.W. Min [et al.] // Biomolecules & Therapeutics. - 2008. - V. 16, N. 4. - P. 364-369.

27. Anti-inflammatory activity of oleanolic acid by inhibition of secretory phospholipase A2 / K.K. Dharmappa [et al.] // Planta Medica. - 2009. - V. 75, N. 3. -P. 211-215.

28. Antimicrobial activity of oleanolic acid from Salvia officinalis and related compounds on vancomycin-resistant enterococci (VRE) / K. Horiuchi [et al.] II Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2007. - V. 30, N. 6. - P. 1147-1149.

29. Antimicrobial activity of the methanolic extract and of the chemical constituents isolated from Newbouldia laevis / V. Kuete [et al.] II Pharmazie. - 2007. -V. 62, N. 7. - P. 552-556.

30. Antimutagenicity of ursolic acid and oleanolic acid against doxorubicin-induced clastogenesis in balb/c mice / F. Aparecida Resende [et al.] II Life Sciences. -2006. - V. 79, N. 13. - P. 1268-1273.

31. Antiproliferative triterpene saponins from Entada africana / G. Cioffi [et al.] // Journal of Natural Products. - 2006. - V. 69, N. 9. - P. 1323-1329.

32. Antitumor promoting activities of lantadenes on mouse skin tumors and mouse hepatic tumors / A. Inada [et al.] Il Planta Medica. - 1997. - V. 63, N. 6. -P. 272-274.

33. Antitumor triterpenes from medicinal plants / S. Ryu [et al.] II Archives of Pharmacal Research. - 1994. - V. 17,N. 5. - P. 375-377.

34. Antitumoractivity of a 3-oxo derivative of oleanolic acid / D. Huang [et al] II Cancer Letters. - 2006. - V. 233, N. 2. - P. 289-296.

35. Asiatic acid, a pentacyclic triterpene from Centella asiatica, is neuroprotective in a mouse model of focal cerebral ischemia / R.G. Krishnamurthy [et al] 11 Journal of Neuroscience Research. - 2009. - V. 87, N. 11. - P. 2541-2550.

36. Babu, T.D. Cytotoxic and anti-tumour properties of certain taxa of Umbelliferae with special reference to Centella asiatica (L.) Urban / T.D. Babu, G. Kuttan, J. Padikkala // Journal of Ethnopharmacology. - 1995. — V. 48, N. 1. — P. 53-57.

37. Betulin and its derivatives. Chemistry and biological activity / G.A. Tolstikov [et al.] II Chemistry for Sustainable Development. - 2005. - V. 13. - P. 1-29.

38. Bioactive microbial metabolites from glycyrrhetinic acid / G. Maatooq [et al.] II Phytochemistry. - 2010. - V. 71, N. 2-3. - P. 262-270.

39. Bioconversion of glycyrrhizinic acid in liquorice into 18-beta-glycyrrhetinic acid by Aspergillus parasiticus speare BGB / J. Wang [et al.] II Applied Biochemistry and Microbiology. - 2010. - V. 46, N. 4. - P. 462-466.

40. Biodégradation of lantadene A, the pentacyclic triterpenoid hepatotoxin by Pseudomonas pickettii / O.P. Sharma [et al] II Letters in Applied Microbiology. -1997. - V. 24, N. 4. - P. 229-232.

41. Biodégradation potential of the genus Rhodococcus / L. Martinkovâ, [et al.] II Environment International. - 2009. - V. 35, N. 5. - P. 162-177.

42. Biosynthesis of ursolic acid derivatives by microbial metabolism of ursolic acid with Nocardia sp. strains - Proposal of new biosynthetic pathways / D. Leipold [et al.] II Process Biochemistry. - 2010. - V. 45, N. 7. - P. 1043-1051.

43. Biotransformation of 1,8-cineole, the main product of Eucalyptus oils / P. Rodriguez [et al.] II Electronic Journal of Biotechnology. - 2006. - V. 9, N. 3. -P. 232-236.

44. Biotransformation of beta-amyrin acetate by Rhodobacter sphaeroides / G.E. Yang [et al.] II Journal of Bioscience and Bioengineering. - 2008. - V. 105, N. 5. -P. 558-561.

45. Biotransformation of betulinic and betulonic acids by fungi / D. Bastos, [et al.] // Phytochemistry. - 2007. - V. 68, N. 6. - P. 834-839.

46. Biotransformation of D-limonene to (+) trans-carveol by toluene-grown Rhodococcus opacus PWD4 cells / W.A. Duetz [et al.] II Applied and Environmental Microbiology. - 2001. - V. 67, N. 6. - P. 2829-2832.

47. Biotransformation of glycyrrhetinic acid by Cunninghamella blakesleeana / J. Qin [et al.] II Agricultural Biology and Chemistry. - 2010. - V. 8, N. 5. - P. 373-381.

48. Biotransformation of glycyrrhizin by Aspergillus niger / H. Huang [et al.] II Biocatalysis and Biotransformation. - 2009.- V. 27, N. 2. - P. 90-95.

49. Biotransformation of lantadene A (22ß-angeloyloxy-3-oxoolean-12-en-28-oic acid), the pentacyclic triterpenoid, by Alcaligenes faecalis / A. Singh [et al.] II Biodegradation. - 1999. - V. 10, N. 5. - P. 373-381.

50. Biotransformation of lupeol by Pénicillium roqueforti / M.E. Severiano [et al.] Il Planta Medica. - 2008. - V. 74, N. 9. - Congress abstracts of 7th Joint Meeting of GA, AFERP, ASP, PSE & S1F, Athens, Greece, August 3-8, 2008.

51. Biotransformation of oleanolic acid by Alternaria longipes and Pénicillium adametzi / D. Liu [et al.] II Journal of Asian Natural Products Research. - 2011. -V. 13, N. 2.-P. 160-167.

52. Biotransformation of oleanolic acid by Pénicillium melinii / T. Ai [et al.] II Latin American Journal of Pharmacy. - 2012. - V. 31, N. 3. - P. 437-441.

53. Biotransformation of oleanolic and maslinic acids by Rhizomucor miehei / A. Martinez [et al.] II Phytochemistry. - 2013. - V. 94. - P. 229-237.

54. Biotransformation of phytosterol to produce androsta-diene-dione by resting cells of Mycobacterium in cloud point system / Z. Wang [et al.] II Process Biochemistry. - 2006. - V. 41, N. 3. - P. 557-561.

55. Biotransformation of quinovic acid glycosides by microbes: direct conversion of the ursane to the oleanane triterpene skeleton by Nocardia sp. NRRL 5646 / Z.H. Cheng [et al.] II Organic Letters. - 2004. - V. 6, N. 18. - P. 3163-3165.

56. Biotransformation of the antimelanoma agent betulinic acid by Bacillus megaterium ATCC 13368 / P. Chatterjee [et al] II Applied and Environmental Microbiology. - 2000. - V. 66, N. 9. - P. 3850-3855.

57. Biotransformation of triterpenes / K. Muffler [et al.] II Process Biochemistry. - 2011. - V. 46, N. 7. - P. 1-15.

58. Biotransformation of ursolic acid by an endophytic fungus from medicinal plant Huperzia serrata / S.B. Fu [et al.] II Chemical and Pharmaceutical Bulletin. -201 la.-V. 59, N. 9.-P. 1180-1182.

59. Biotransformation of ursolic acid by Syncephalastrum racemosum CGMCC 3.2500 and anti-HCV activity / S.B. Fu [et al.] II Fitoterapia. - 2013. - V. 86. -P. 123-128.

60. Biotransformation of ß-myrcene to geraniol by a strain of Rhodococcus erythropolis isolated by selective enrichment from hop plants / M.L. Thompson [et al.] II Applied Microbiology and Biotechnology. - 2010. - V. 85, N. 3. - P. 721-730.

61. Biotransformation using Mucor rouxii for the production of oleanolic acid derivatives and their antimicrobial activity against oral pathogens / C. Capel [et al.] II Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology. - 2011. - V. 38, N. 9. -P. 1493-1498.

62. Boswellic acid acetate induces differentiation and apoptosis in leukemia cell lines / Y. Jing [et al.] // Leukemia Research. - 1999. - V. 23, N. 1. - P. 43-50.

63. Bunch, A.W. Biotransformation of nitriles by rhodococci // Antonie van Leeuwenhoek. - 1998. - V. 74, N. 1-3. - P. 89-97.

64. Cardiovascular, antihyperlipidemic and antioxidant effects of oleanolic and ursolic acids in experimental hypertension / L.O. Somova [et al.] // Phytomedicine. -2003.-V. 10, N. 2-3.-P. 115-121.

65. Chatterjee, P. Glucosidation of betulinic acid by Cunninghamella sp. / P. Chatterjee, J. Pezzuto, S. Kouzi // Journal of Natural Products. - 1999. - V. 62, N. 5. -P. 761-763.

66. Chatterjee, T. Biotransformation of geraniol by Rhodococcus sp. strain GR3 / T. Chatterjee // Biotechnology and Applied Biochemistry. - 2004. - V. 39, N. 3. - P. 303-306.

67. Chemical modifications of natural triterpenes - glycyrrhetinic and boswellic acids: evaluation of their biological activity / G.S. Subba Rao [et al.] // Tetrahedron. - 2008. - V. 64, N. 51. - P. 11541-11548.

68. Chen, J. Biotransformation of p-methoxyphenylacetonitrile into p-methoxyphenylacetic acid by resting cells of Bacillus subtilis / J. Chen, Y-G. Zheng, Y-C. Shen // Biotechnology and Applied Biochemistry. - 2008. - V. 50, N. 3. - P. 147153.

69. Choudhary, M. Microbial transformation of 18(3-glycyrrhetinic acid by Cunninghamella elegans and Fusarium lini, and lipoxygenase inhibitory activity of transformed products / M. Choudhary, S. Zafar, S. Nawaz // Natural Product Research: Formerly Natural Product Letters. - 2009. - V. 23, N. 6. - P. 507-513.

70. Cichewicz, R.H. Chemistry, biological activity, and chemotherapeutic potential of betulinic acid for the prevention and treatment of cancer and HIV infection / R.H. Cichewicz, S.A. Kouzi // Medicinal Research Reviews. - 2004. - V. 24, N. 1. -P. 90-114.

71. Cotter, J.L. Ethanol and acetate production by Clostridium ljungdahlii and Clostridium autoethanogenum using resting cells / J.L. Cotter, M.S. Chinn, A.M. Grunden // Bioprocess and Biosystems Engineering. - 2009. - V. 32, N. 3. -P. 369-380.

72. Coupled oxidation-reduction of butanol-hexanal by resting Rhodococcus erythropolis NCIMB 13064 cells in liquid and gas phases / P. Marchand [et al.] Il Enzyme and Microbial Technology. - 2008. - V. 43, N. 6. - P. 423-430.

73. de Carvalho, C.C.C.R. Biotransformation of limonene-1,2-epoxide to limonene-l,2-diol by Rhodococcus erythropolis cells an introductory approach to selective hydrolysis and product separation / C.C.C.R. de Carvalho, F. van Keulen, M.M.R. da Fonseca // Food Technology and Biotechnology. - 2000. - V. 38, N. 3. -P. 181-185.

74. de Carvalho, C.C.C.R. Biotransformation of terpenes / C.C.C.R. de Carvalho, M.M.R. da Fonseca // Biotechnology Advances. - 2006. - V. 24, N. 2. - P. 134-142.

75. de Carvalho, C.C.C.R. Cell adaptation to solvent, substrate and product: a successful strategy to overcome product inhibition in a bioconversion system / de C.C.C.R. Carvalho, A. Poretti, M.M.R. da Fonseca // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2005. - V. 69, N. 3. - P. 268-275.

76. de Carvalho, C.C.C.R. Influence of reactor configuration on the production of carvone from carveol by whole cells of Rhodococcus erythropolis DCL14 / C.C.C.R. de Carvalho, M.M.R. da Fonseca // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. -2002b. - V. 19-20. - P. 377-387.

77. de Carvalho, C.C.C.R. Maintenance of cell viability in the biotransformation of (-)-carveol with whole cells of Rhodococcus erythropolis / C.C.C.R. de Carvalho, M.M.R. da Fonseca // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. - 2002a. - V. 19-20. - P. 389-398.

78. Direct microbial-catalyzed asymmetric a-hydroxylation of betulonic acid by Nocardia sp. NRRL 5646 / L-W. Qian [et al.] II Tetrahedron Letters. - 2009. - V. 50, N. 19.-P. 2193-2195.

79. Eaton, R.W. Biotransformations of (+/-)-geosmin by terpene-degrading bacteria / R.W. Eaton, P.Sandusky // Biodégradation. - 2010. - V. 21, N. 1. - P. 71-79.

80. Eaton, R.W. Biotransformations of 2-methylisoborneol by camphor-degrading bacteria / R.W. Eaton, P. Sandusky // Applied and Environmental Microbiology. - 2009. - V. 75, N. 3. - P. 583-588.

81. Echinocystic acid induces apoptosis in HL-60 cells through mitochondria-mediated death pathway / X. Tong [et al.] II Cancer Letters. - 2004b. - V. 212, N. 1. -P. 21-32.

82. Effect of the extracts from Glycyrrhiza uralensis Fisch, on the growth characteristics of human cell lines: antitumor and immune activation activities / W. Chung [et al] II Cytotechnology. - 2001. - V. 37, N. 1. - P. 55-64.

83. Effect of ionic liquid-containing system on betulinic acid production from betulin biotransformation by cultured Armillaria luteo-virens Sacc cells / M-L. Fu [et al.] II European Food Research and Technology. - 2011. - V. 233, N. 3. - P. 507-515.

84. El-Minofi, H.A. Biotransformation of ammonium glycyrrhizinate by immobilized Aspergillus terreus / H.A. El-Minofi // African Journal of Mycology and Biotechnology. - 2005. - V. 13, N. 1. - P. 49-58.

85. Enhanced bioproduction of carvone in a two-liquid-phase partitioning bioreactor with a highly hydrophobic biocatalyst / J.L. Morrish [et al.] II Biotechnology and Bioengineering. - 2008. - V. 101, N. 4. - P. 768-775.

86. Extracellular cholesterol oxidase from Rhodococcus sp.: isolation and molecular characterization / H. Lashkarian [et al.] II Iranian Biomedical Journal. -2010. - V. 14, N. 1-2. - P. 49-57.

87. Feng, X.Z. A new triterpenoidal saponin from Ixeris sonchifolia and its cytotoxic activity / X.Z. Feng, M. Dong, S.X. Xu // Die Pharmazie. - 2001. - V. 56, N. 8.-P. 663-664.

88. Fungal degradation of lantadene A, the pentacyclic triterpenoid hepatotoxin of lantana plant / A. Singh [et al.] II International Biodeterioration & Biodegradation. - 2001. - V. 47, N. 4. - P. 239-242.

89. Gene expression changes in the human fibroblast induced by Centella asiatica triterpenoids / C.D. Coldren [et al.] Il Planta Medica. - 2003. - V. 69, N. 8. -P. 725-732.

90. Gill, P.E. Practical optimization / P.E. Gill, W. Murray, M.H. Wright. -London: Academic Press, 1981. - 509 p.

91. Glycyrrizinic acid / G.A. Tolstikov [et al.] // Russian Journal of Bioorganic Chemicals. - 1997. - V. 23, N. 9. - P. 691-709.

92. Glycyrrizinic acid / G.A. Tolstikov [et al.] II Pharmaceutical Chemistry Journal. - 1998. - V. 23. - P. 5-14.

93. Grogan, G. Microbial conversion of beta-myrcene to geraniol by a strain of Rhodococcus / G.Grogan, M. Thompson // Practical Methods for Biocatalysis and Biotransformation 2. - 2012.- V. 2. - P. 159-162.

94. Guo, J.S. Inhibitory effects of Centella asiatica water extract and asiaticoside on inducible nitric oxide synthase during gastric ulcer healing in rats /J.S. Guo, C.L. Cheng, M.W. Koo // Planta Medica. - 2004. - V. 70, N. 12. - P. 1150-1154.

95. Guo, N. Biotransformation of 3-oxo-oleanolic acid by Absidia glauca / N. Guo, Y. Zhao, W. Fang // Planta Medica. - 2010. - V. 76, N. 16. - P. 1904-1907.

96. Gurtovenko, A.A. Modulating the structure and properties of cell membranes: the molecular mechanism of action of dimethyl sulfoxide / A.A. Gurtovenko, J. Anwar // The Journal of Physical Chemistry B. - 2007. — V. 111, N. 35. -P. 10453-10460.

97. Hanson, R.L. Enzymatic C-4 deacetylation of 10-deacetylbaccatin III / R.L. Hanson, W.L. Parker, R.N. Patel // Biotechnology and Applied Biochemistry. -2006. - V. 45, N. 2. - P. 81-85.

98. Goswami, P. Hydrocarbon pseudosolubilizing and emulsifying proteins produced by Pseudomonas cepacia N1 / P. Goswami, A.K. Hazarika, H.D. Singh // Journal of Fermentation and Bioengineering. - 1994. — V. 77, N. 1. - P. 28-31.

99. Hata, K. Differentiation- and apoptosis-inducing activities by pentacyclic triterpenes on a mouse melanoma cell line / K. Hata, K. Hori, S. Takahashi // Journal of Natural Products. - 2002. - V. 65, N. 5. - P. 645-648.

100. Hepatoprotective and hepatotoxic actions of oleanolicacid-type triterpenoidal glucuronides on rat primary hepatocytecultures / J. Kinjo [et al.] II Chemical and Pharmaceutical Bulletin. - 1999. - V. 47, N. 2. - P. 290-292.

101. Hikino H. Microbial transformation of oleanolic acid / H. Hikino, S. Nabetani, T. Takemoto // Yakugaku Zasshi. - 1971. - V. 91. - P. 637-640.

102. Hikino H. Microbial transformation of oleanolic acid / H. Hikino, S. Nabetani, T. Takemoto // Yakugaku Zasshi. - 1972a. - V. 92. - P. 1528-1533.

103. Hikino H. Microbial transformation of oleanolic acid / H. Hikino, S. Nabetani, T. Takemoto // Yakugaku Zasshi. - 1972b. - V. 92. - P. 891-895.

104. Hikino, H. Biochemical synthesis. III. Microbial transformation of oleanolic acid // H. Hikino, S. Nabetani, T. Takemoto // Yakugaku Zasshi. - 1969. - V. 89.-P. 809-813.

105. Hopmann, K.H. Catalytic mechanism of limonene epoxide hydrolase, a theoretical study / K.H. Hopmann, B.M. Hallberg, F. Himo // Journal of the American Chemical Society. - 2005. - V. 127, N. 41. - P. 14339-14447.

106. Hsu, Y.L. Proliferative inhibition, cell-cycle dysregulation, and induction of apoptosis by ursolic acid in human non-small cell lung cancer A549 cells / Y.L. Hsu, P.L. Kuo, C.C. Lin //Life Sciences. - 2004. - V. 75, N. 19. - P. 2303-2316.

107. Hydroxylation of oleanolic acid to queretaroic acid by cytochrome P450 from Nonomuraea recticatena / Y. Fujii [et al.] // Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. - 2006. - V. 70, N. 9. - P. 2299-2302.

108. Immobilization of hydrocarbon-oxidizing bacteria in poly(vinyl alcohol) cryogels hydrophobized using a biosurfactant / M.S. Kuyukina, I.B. Ivshina, A.Y. Gavrin, E.A. Podorozhko, V.I. Lozinsky, C.E. Jeffree, J.C. Philp // Journal of Microbiological Methods. - 2006. - V. 65, N. 3. - P. 596-603.

109. Immunomodulatory effects of two sapogenins 1 and 2 isolated from Luffa cylindrica in Balb/C mice / Khajuria A. [et al.] II Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. - 2007. - V. 17. - P. 1608-1612.

110. In vitro anti-HIV activity of oleanolic acid on infected human mononuclear cells / F. Mengoni [et al.] II Planta Medica. - 2002. - V. 68, N. 2. - P. 111-114.

111. In vitro antioxidant activity potential of lantadene A, a pentacyclic triterpenoid of Lantana plants / C. Grace-Lynn [et al.] II Molecules. - 2012. - V. 17, N. 9.-P. 11185-11198.

112. Inhibition of p-glycoprotein and multidrug resistance protein 1 by dietary phytochemicals / T. Nabekura [et al.] II Cancer Chemotherapy and Pharmacology. -2008. - V. 62, N. 5. - P. 867-873.

113. Inhibitory activity of boswellic acids from Boswellia serrata against human leukemia HL-60 cells in culture / Y. Shao [et al.] Il Planta Medica. - 1998. - V. 64, N. 4.-P. 328-331.

114. Inhibitory effect of some triterpenes from cacti on 32Pi-incorporation into phospholipids of HeLa cells promoted by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate / K. Kinoshita [et al.] II Phytomedicine. - 1999. - V. 6, N. 2. - P. 73-77.

115. Inhibitory effects of lantadenes and related triterpenoids on Epstein-Barr virus activation / A. Inada [et al.] Il Planta Medica. - 1995. - V. 61, N. 6. - P. 558-559.

116. Interactions of Mycobacterium fortuitum with solid sterol substrate particles / P. Atrat [et al.] II Journal of Basic Microbiology. - 1991. - V. 31, N. 6. -P. 413^122.

117. Khan, I.A. Antifungal activity of a new triterpenoid glycoside from Pithecellobium racemosum (M.) / I.A. Khan, A.M. Clark, J.D. McChesney // Pharmaceutical Research. - 1997. - V. 14, N. 3. - P. 358-361.

118. Kuyukina, M.S. Rhodococcus biosurfactants: biosynthesis, properties and potential applications / M.S. Kuyukina, I.B. Ivshina // Biology of Rhodococcus / Ed H.M. Alvarez // Microbiology Monography. - V. 16. - Berlin: Springer; 2010. -P. 291-313.

119. Larkin, M.J. Biodégradation by members of the genus Rhodococcus: biochemistry, physiology and genetic adaptation / M.J. Larkin, L.A. Kulakov, C.R. Allen // Advances in Applied Microbiology. - 2006. - V. 59. - P. 1-29.

120. Liu, H. Highly regioselective synthesis of betulone from betulin by growing cultures of marine fungus Dothideomycete sp. HQ 316564 / H. Liu, X-L. Lei, N. Li II Journal of Molecular Catalysis B:Enzymatic. - 2013. - V. 88. - P. 32-35.

121. Liu, J. Biotransformation optimization of betulin into betulinic acid production catalysed by cultured Armilaria luteo-virens Sacc ZJUQH100-6 cells / J.

Liu, M.L. Fu, Q.H. Chen // Journal of Applied Microbiology. - 2010. - V. 110, N. 1. -P. 90-97.

122. Localization of the steroid 1-dehydrogenase in Rhodococcus erythropolis IMET 7030 by immunoelectron microscopy / B. Wagner [et al.] II Journal of Basic Microbiology. - 1992. - V. 32, N. 1. - P. 65-71.

123. Lupane triterpenoids of Salacia cordata / W.F. Tinto [et al.] II Journal of Natural Products. - 1992. - V. 55, N. 3. - P. 395-398.

124. Maatooq, G.T. Microbiological and chemical transformations of argentatin B / G.T. Maatooq // Zeitschrift fur Naturforschung C. - 2003. - V. 58, N. 3-4. -P. 249-255.

125. Mahato, S. Triterpenoids / S. Mahato, A. Nandy, G. Roy // Phytochemistry. - 1992. - V. 31, N. 7.-P. 2199-2249.

126. Manufacture of CI a-hydroxyoleanolic acid by hydroxylase from Aspergillus ochraceus NG1203 / J. Wang [et al.] II Shengwu jiagong guocheng. - 2006. -V. 4.-P. 51-55.

127. Martins, L.R. Rearrangement and oxidation of ß-amyrin promoted by growing cells of Lecanicillium muscarinium / L.R. Martins, J.A. Takahashi // Natural Product Research: Formerly Natural Product Letters. - 2010. - V. 24, N. 8. -P. 767-777.

128. Mechanism of antiinflammatory actions of curcumine and boswellic acids. H.P. Ammon [et al.] II Journal of Ethnopharmacology. - 1993. - V. 38, N. 2-3. -P. 113-119.

129. Metabolism of 18ß-glycyrrhetinic acid in Sphingomonas paucimobilis strain G5 / K. Yoshida [et al.] II Biotechnology Letters. - 2001a. - V. 23, N. 19. -P. 253-258.

130. Microbial hydroxylation of quinovic acid glycoside by Streptomyces griseus ACCT 13273 / Z-H. Cheng [et al.] II Chinese Journal of Chemistry. - 2006. -V. 24, N. 1.-P. 95-98.

131. Microbial metabolism of biologically active secondary metabolites from Nerium oleander L. / A. Ibrahim [et al.] II Chemical and Pharmaceutical Bulletin. -2008. - V. 56, N. 9. - P. 1253-1258.

132. Microbial oxidation and glucosidation of echinocystic acid by Nocardia coralline / X. Feng [et al] II Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. - 2010. — V. 66.-P. 219-223.

133. Microbial production of glycyrrhetic acid 3-O-mono-b-D-glucuronide from glycyrrhizin by Aspergillus terreus / H.A. Amin [et al.] II Malaysian Journal of Microbiology. - 2010. - V. 6, N. 2. - P. 209-216.

134. Microbial production of glycyrrhetic acid 3-O-mono-p-D-glucuronide from glycyrrhizin by Cryptococcus magnus Mg-27 / T. Kuramoto [et al.] II Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. - 1994. - V. 58, N. 3. - P. 455-458.

135. Microbial transformation of 18(3-glycyrrhetinic acid by Sphingomonas paucimobilis strain G5 / K. Yoshida [et al.] II Biotechnology Letters. - 2001b. — V. 23, N. 9.-P. 1619-1624.

136. Microbial transformation of asiatic acid / F-F. Guo [et al.] II Natural Product Reports.-2013.-V. 15, N. l.-P. 15-21.

137. Microbial transformation of asiatic acid by Alternaria longipes / W-N. He [et al.] II Journal of Asian Natural Products Research. - 2010. - V. 12, N. 9. -P. 760-764.

138. Microbial transformation of cadina-4,10(15)-dien-3-one, aromadendr-l(10)-en-9-one and methyl ursolate by Mucor plumbeus ATCC 4740 / D. Collins [et al.] 11 Phytochemistry. - 2002. - V. 59, N. 5. - P. 479-488.

139. Microbial transformation of glycyrrhetinic acid by Curvularia lunata KA-91 / C-J. He [et al.] II Pharmaceutical Biotechnology. - 2011. - V. 18, N. 3.

140. Microbial transformation of glycyrrhetinic acid by Mucor polymorphosporus / X. Xin [et al.] II Planta Medica. - 2006. - V. 72, N. 2. - P. 156-161.

141. Microbial transformation of glycyrrhetinic acid by Mucor spinous / J. Ma [et al.] / Journal of Beijing University of Chemical Technology (Natural Science Edition). - 2008. - V. 1.

142. Microbial transformation of oleanolic acid by Fusarium lini and alpha-glucosidase inhibitory activity of its transformed products / M. Choudhary [et al.] II Journal of Asian Natural Products Research. - 2008. - V. 22, N. 6. - P. 489-494.

143. Microbial transformation of triterpenoids / A. Parra [et al.] II Mini-Reviews in Organic Chemistry. - 2009. - V. 6, N. 4. - P. 307-320.

144. Microbial transformation of ursolic acid by Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroter AS 3.264 / F. Huang [et al.] II Phytochemistry. - 2012a. - V. 82. -P. 56-60.

145. Microbial transformations of diterpene acids / A.V. Vorob'ev, V.V. Grishko, I.B. Ivshina, E.N. Shmidt, L.M. Pokrovskii, M.S. Kuyukina, G.A. Tolstikov // Mendeleev Communications. - 2001. - V. 11, N. 2. - P. 72-73.

146. Microbial transformations of the antimelanoma agent betulinic acid / S. Kouzi [et al] II Journal of Natural Products. - 2000. - V. 63, N. 12. - P. 1653-1657.

147. Microbial transformations of two lupane-type triterpenes and anti-tumor-promoting effects of the transformation products / T. Akihisa [et al] II Journal of Natural Products. - 2002. - V. 65, N. 3. - P. 278-282.

148. Microbiological oxidation of triterpenoids. I. 7|3-Hydroxyglycyrrhetic acid // L. Canonica [et al] II Gazzetta Chimica Italiana. - 1966. - V. 96. - P. 820-831.

149. Microbiological oxidation of triterpenoids. II. 15a-Hydroxyglycyrrhetic and 7(3,15a-dihydroxyglycyrrhetic acids / L. Canonica [et al] II Gazzetta Chimica Italiana. - 1967.-V. 97,-P. 1032-1051.

150. Microbiological oxidation of triterpenoids. III. Behavior of 18a-glycyrrhetic, liquiritic, and 18a-liquiritic acids / M. Ferrari [et al] 11 Gazzetta Chimica Italiana. - 1969. - V. 99. - P. 848-862.

151. Mode of uptake of insoluble solid substrates by microorganisms. I. Sterol uptake by an Arthrobacter species / P.C. Goshwami [et al] II Biotechnology and Bioengineering. - 1983. - V. 25, N. 12. - P. 2929 - 2943.

152. Mode of uptake of insoluble solid substrates by microorganisms. Uptake of solid n-alkanes by yeast and bacterial species // S.S. Cameotra [et al] II Biotechnology and Bioengineering. - 1983. - V. 25, N. 12. - P. 2945-2956.

153. Moghaddam, M.G. Biological activity of betulinic acid: a review / M.G. Moghaddam, F.B.H. Ahmad, A. Samzadeh-Kermani // Pharmacology & Pharmacy. - 2012. - V. 3. - P. 119-123.

154. Molecular cloning and identification of a novel oxygenase gene specifically induced during the growth of Rhodococcus sp. strain T104 on limonene / K.Y. Choi [et al.] II The Journal of Microbiology. - 2004. - V. 42, N. 2. - P. 160-162.

155. Molecular mechanisms of echinocystic acid-induced apoptosis in HepG2 cells / X. Tong [et al.] II Biochemical and Biophysical Research Communications. -2004a. - V. 321, N. 3. - P. 539-546.

156. Multihydroxylation of ursolic acid by Pestalotiopsis microspora isolated from the medicinal plant Huperzia serrata / S.B. Fu [et al.] II Fitoterapia. - 2011b. -V. 82, N. 7.-P. 1057-1061.

157. New approaches to the structural modification of olean-type pentacylic triterpenes via microbial oxidation and glycosylation / Y-Y. Zhu [et al.] II Tetrahedron. -2011.-V. 67, N. 23.-P. 4206-4211.

158. New triterpenoids of Lantana camara. A comparative study of the constituents of several taxa / N.K. Hart [et al.] II Australian Journal of Chemistry. -1976.-V. 29.-P. 655-671.

159. Novel biotransformation of betulin to produce betulone by Rhodotorula mucilaginosa / D-B. Mao [et al.] II Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers. - 2012. - V. 43, N. 6. - P. 825-829.

160. Novel biotransformation of pentacyclic triterpenoid acids by Nocardia sp. NRRL 5646 / J. Zhang [et al] II Tetrahedron Letters. - 2005. - V. 46. - P. 2337-2340.

161. Nucleotide sequence of a portion of the camphor-degrading gene cluster from Rhodococcus sp. NCIMB 9784 / G.A. Roberts [et al] 11DNA Sequence. - 2004. -V. 15, N. 2.-P. 96-103.

162. Oil desorption from mineral and organic materials using biosurfactant complexes produced by Rhodococcus species / I.B. Ivshina, M.S. Kuyukina, J.C. Philp, N. Christofi // World Journal of Microbiology and Biotechnology. - 1998. -V. 14,N. 5.-P. 711-717.

163. One new triterpenoid from biotransformation product of glycyrrhizic acid / L. Kang [et al.] // Journal of Asian Natural Products Research. - 2008. - V. 10, N. 5. -P. 463-466.

164. Optimization of biotransformation of ursolic acid by Alternaria longipes / H. Yan [et al.] II Zhongguo Zhongyao Zazhi. - 2012. - V. 37, N. 15. - P. 2280-2285.

165. P450(camr), a cytochrome P450 catalysing the stereospecific 6-endo-hydroxylation of (li?)-(+)-camphor / G. Grogan [et al.] II Applied Microbiology and Biotechnology. - 2002. - V. 59, N. 4-5. - P. 449-454.

166. Plohmann, B. Immunomodulatory and antitumoral effects of triterpenoid saponins / B. Plohmann, G. Bader, K. Hiller // Pharmazie. - 1997. - V. 52, N. 12. -P. 953-957.

167. Production of ectoine through a combined process that uses both growing and resting cells of Halomonas salina DSM 5928T / Y-J. Lang, [et al.] II Extremophiles. - 2011. - V. 15, N. 5.-P. 303-310.

168. Purification and characterization of extra-cellular cholesterol oxidase from Rhodococcus sp. PTCC 1633 / M.T. Yazdi [et al.] II Biotechnology. - 2008. - V. 7, N. 4.-P. 751-756.

169. Qazi, M.S. Biotransformation of pentacyclic terpene isolated from Alstonia scholaris (R.BR.) / M.S. Qazi, N. Sultana, M. Kamal // Biocatalysis and Biotransformation. - 2013. - V. 31, N. 4. - P. 148-152.

170. Ramachandran, S. Effect of ursolic acid, a triterpenoid antioxidant, on ultraviolet-B radiation-induced cytotoxicity, lipid peroxidation and DNA damage in human lymphocytes / S. Ramachandran, N.R. Prasad // Chemico-Biological Interactions. - 2008. - V. 176, N. 2-3. - P. 99-107.

171. Raphael, T.J. Effect of naturally occurring triterpenoids glycyrrhizic acid, ursolic acid, oleanolic acid and nomilin on the immune system / T.J. Raphael, G. Kuttan // Phytomedicine. - 2003. - V. 10, N. 6-7. - P. 483-489.

172. Review article: glycyrrhizin as potential treatment for chronic hepatitis C / T. van Rossum [et al.] II Alimentary Pharmacology & Therapeutics. - 1998. - V. 12, N. 3.-P. 199-205.

173. Ring-A cleavage of 3-oxoolean-12-en-28-oic acid by the fungus Chaetomium longirostre / N. Shirane [et al.] II Phytochemistry. - 1996. - V. 43, N. 1. -P. 99-104.

174. Rvll06c from Mycobacterium tuberculosis is a 3beta-hydroxysteroid dehydrogenase / X. Yang [et al.] II Biochemistry. - 2007. - V. 46, N. 31. -P. 9058-9067.

175. Sakano, K. Structures of conversion products formed from 18|3-glycyrrhetinic acid by Streptomyces sp. G-20 / K. Sakano, M. Ohshima // Agricultural Biology and Chemistry. - 1986a. - V. 50, N. 3. - P. 763-766.

176. Sakano, K. Microbial conversion of |3-glycyrrhetinic acid and 22a-hydroxy-18[3-glycyrrhetinic acid by Chainia antibiotica / K. Sakano, M. Ohshima // Agricultural Biology and Chemistry. - 1986b. - V. 50, N. 5. - P. 1239-1245.

177. Saleem, M. Lupeol, a novel anti-inflammatory and anti-cancer dietary triterpene / M. Saleem // Cancer Letters. - 2009. - V. 285, N. 2. - P. 109-115.

178. Santos, R.C. Novel semisynthetic derivatives of betulin and betulinic acid with cytotoxic activity / R.C. Santos, J.A.R. Salvador, S. Marin // Bioorganic and Medical Chemistry. - 2009. -V. 17, N. 17. - P. 6241-6250.

179. Saraswat, B. Ursolic acid isolated from Eucalyptus tereticornis protects against ethanol toxicity in isolated rat hepatocytes / B. Saraswat, P.K.S. Visen, D.P. Agarwal // Phytotherapy Research. - 2000. - V. 14, N. 3. - P. 163-166.

180. Screening of filamentous fungi to identify biocatalysts for lupeol biotransformation / T. Carvalho [et al.] II Molecules. - 2010. - V. 15, N. 9. -P. 6140-6151.

181. Sharma, O.P. A review of the noxious plant Lantana camara / O.P. Sharma, H.P.S. Makkar, R.K. Dawra // Toxicon. - 1988. - V. 26, N. 11. - P. 975-987.

182. Sharma, O.P. Natural products of the lantana plant - the present and prospects / O.P. Sharma, P.D. Sharma // Journal of Scientific & Industrial Research. -1989.-V. 48.-P. 471^178.

183. Stereoselective carveol dehydrogenase from Rhodococcus erythropolis DCL14. A novel nicotinoprotein belonging to the short chain dehydrogenase/reductase superfamily / M.J. van der Werf [et al] II The Journal of Biological Chemistry. -1999b. - V. 274, N. 37. - P. 26296-26304.

184. Steroid 9a-hydroxylation during testosterone degradation by resting Rhodococcus equi cells // Y.-u. Kim [et al.] / Archiv der Pharmazie - Chemistry in Life Sciences. - 2007. - V. 340. - P. 209-214.

185. Structural determination of two new triterpenoids biotransformed from glycyrrhetinic acid by Mucor polymorphosporus / X.L. Xin [et al.] II Magnetic Resonance in Chemistry. - 2010. - V. 48, N. 2. - P. 164-167.

186. Structure of Rhodococcus erythropolis limonene-l,2-epoxide hydrolase reveals a novel active site / M. Arand [et al] II The EMBO Journal. - 2003. - V. 22, N. 11.-P. 2583-2592.

187. Sultana, N. Oleanolic acid and related derivatives as medicinally important compounds / N. Sultana, A. Ata // Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. - 2008. - V. 23, N. 6. - P. 739-756.

188. Synthesis and cytotoxicity of 28-carboxymethoxy lupane triterpenoids. Preference of 28-O-acylation over 28-O-alkylation of betulin by ethyl bromoacetate / A.A. Mar [et al.] II Chinese Chemical Letters. - 2009. - V. 20, N. 10. - P. 1141-1144.

189. Synthesis and cytotoxicity of 2-cyano-28-hydroxy-lup-l-en-3-ones / A. Koohang [et al.] II Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. - 2009. - V. 19, N. 8. -P. 2168-2171.

190. Synthesis, proapoptotic screening, and structure-activity relationships of novel aza-lupane triterpenoids / A.A. Mar [et al.] II Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. - 2010. - V. 20, N. 18. - P. 5389-5393.

191. The betulinic acid production from betulin through biotransformation by fungi / Q-H. Chen [et al.] // Enzyme and Microbial Technology. - 2009. - V. 45, N. 3. -P. 175-180.

192. The cytotoxic activity of ursolic acid derivatives / C.M. Ma [et al.] // European Journal of Medicinal Chemistry. - 2005. - V. 40, N. 6. - P. 582-589.

193. The long term efficacy of glycyrrhizin in chronic hepatitis C patients / Y. Arase [et al.] II Cancer. - 1997. - V. 79, N. 8. - P. 1494-1500.

194. Transformation of glycyrrhezic acid by Aspergillus sp. / Y. Yamada [et al.] II Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. - 1994. - V. 58, N. 2. - P. 436-437.

195. Trofimov synthesis of betulin derivatives with 2,3-annelated pyrrole / A.V. Orlov [et al.] II Chemistry of Natural Compounds. - 2011. - V. 46, N. 6. - P. 906909.

196. Two new oxidation products obtained from the biotransformation of asiatic acid by the fungus Fusarium avenaceum AS 3.4594 / F-X. Huang [et al.] II Journal of Asian Natural Products Research. - 2012b. - V. 14, N. 11. - P. 1039-1045.

197. Two new triterpenes from the rhizome of Dryopteris crassirhizoma and inhibitory activities of its constituents on human immunodeficiency virus-1 protease / J.S. Lee [et al.] II Chemical and Pharmaceutical Bulletin. - 2008a. - V. 56, N. 5. -P. 711-714.

198. Ursolic acid enhances the cellular immune system and pancreatic b-cell function in streptozotocin-induced diabetic mice fed a high-fat diet / S.M. Jang, [et al.] II International Immunopharmacology. - 2009. - V. 9, N. 1. - P. 113-119.

199. Ursolic, oleanolic and betulinic acids: antibacterial spectra and selectivity indexes / S. Fonranay [et al.] II Journal of Ethnopharmacology. - 2008. - V. 120. - P. 272-276.

200. van der Waerden, B.L. Mathematische statistik / B.L. van der Waerden. -Berlin, Heidelberg: Springer-Verlag, 1957. - 435 pp.

201. van der Werf, M.J. Limonene-1,2-epoxide hydrolase from Rhodococcus erythropolis DCL14 belongs to a novel class of epoxide hydrolases // M.J. van der

Werf, K.M. Overkamp, J.A. de Bont // Journal of Bacteriology. - 1998. - V. 180, N. 19.-P. 5052-5057.

202. van der Werf, M.J. Metabolism of carveol and dihydrocarveol in Rhodococcus erythropolis DCL14 / M.J. van der Werf, A.M. Boot // Microbiology. -2000.-V. 146, Pt. 5.-P. 1129-1141.

203. van der Werf, M.J. Purification and characterization of a Baeyer-Villiger mono-oxygenase from Rhodococcus erythropolis DCL14 involved in three different monocyclic monoterpene degradation pathways / M.J. van Der Werf // Biochemical Journal. - 2000. - V. 347. - P. 693-701.

204. van der Werf, M.J. Rhodococcus erythropolis DCL14 contains a novel degradation pathway for limonene // M.J. van der Werf, H.J. Swarts, J.A. de Bont // Applied and Environmental Microbiology. - 1999a. - V. 65, N. 5. - P. 2092-2102.

205. Warhurst, A.M. Biotransformations catalyzed by the genus Rhodococcus / A.M. Warhurst, C.A. Fewson / Critical Reviews in Biotechnology. - 1994. - V. 14, N. l.-P. 29-73.

206. Williams, D.R. Metabolism of 1,8-cineole by a Rhodococcus species: ring cleavage reactions / D.R. Williams, P.W. Trudgill, D.G. Taylor // Microbiology. -1989. - V. 135, N. 7. - P. 1957-1967.

207. Yang, S. Optimization of cholesterol oxidase production by Brevibacterium sp. employing response surface methodology / S.Yang, H. Zhang // African Journal of Biotechnology.-2012.-V. 11,N. 32.-P. 8316-8322.

208. Yogeeswari, P. Betulinic acid and its derivatives: a review on their biological properties / P. Yogeeswari, D. Sriram // Current Medicinal Chemistry. -2005. - V. 12, N. 6. - P. 657-666.