Биотехнологические основы диагностики вирусных и бактериальных инфекций человека и животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, доктор биологических наук Туманов, Юрий Васильевич

• Туманов, Юрий Васильевич
• доктор биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации доктор биологических наук Туманов, Юрий Васильевич

Список принятых сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы. Горизонты современной науки в системе доказательной медицины.

1.1. Проблемы и методы диагностики вирусного гепатита А.

1.2. Проблемы диагностики туберкулеза.

1.2.1. Туберкулинодиагностика.

1.2.2. Иммунохимические методы анализа.

1.2.3. Моноклональные антитела в диагностике туберкулеза. ч/ 1.2.4. Маркеры туберкулезной инфекции, используемые в дифференциальной диагностике туберкулеза.

1.2.4.1. Критерии оценки пригодности антигенов М. tuberculosis для серологической диагностики туберкулезной инфекции.

1.2.5. Методы получения и изучения антигенов М. tuberculosis.

1.2.6. Характеристика белковых антигенов М. tuberculosis.

1.2.7. Цитокиновый статус при туберкулезной инфекции.

1.2.8. Биохимические маркеры, отражающие локальный иммунный ответ к туберкулезу.

1.2.9. Цитокиновые маркеры при активном туберкулезе.

1.2.10. Роль IL-12 при характеристике Т-клеточного иммунитета туберкулезной инфекции.

1.3". Технология иммунного мониторинга туберкулезной инфекции.

1.3.1. Иммунологические маркеры туберкулезной инфекции.

1.3.2. ELISPOT-технология в диагностике микобактериальных инфекций.

1.3.3. Разработка и применение granzyme B-ELISPOT-анализа.

1.4. Антигены в специфической диагностике туберкулеза.

1.4.1. Белки культурального фильтратаМ tuberculosis.

1.4.2. Клеточные (морфологические) тесты в диагностике туберкулеза.

1.5. Коммерческие тесты на выявление туберкулезной инфекции.

1.6. Клеточный иммунитет при туберкулезной инфекции.

1.6.1. Генетические основы различий в резистентности к туберкулезной инфекции.

1.6.2. Клеточные медиаторы иммунного ответа.

1.6.3. Применение цитокиновых костимуляторов.

1.7. Методы структурного анализа. 1.7.1. Модель антиген-специфического тетрамерного комплекса с антиген презентирующими клетками.

1.8! Тёхнология ¡T-SP0T.

1.8;1. .Современные тенденции в диагностике туберкулеза.

1.8;2; Клиническое использование тестов.

1.8:2.1. Новые Т-клеточные тесты при диагностике латентного туберкул еза100 1.8-3. Чувствительность новых тестов при исследовании активного туберкулеза с коинфекцией;.V.109

Глава 2£. Материалы и методы.11Г

Глава 3; Результаты и их обсуждение;.

3 ; 11 Разработка'методов лабораторной диагностики гепатита А. 1'41>.

3.1.1. Диагностическая тест-система для выявления lgM-ангител к вирусу гепатита А.

3.1.2. Разработка тест-системы иммуноферментной для выявления

IgG-антител к вирусу гепатита А-.!.15#

3.1.2.1. Аналитические и диагностические характеристики разработанной тест-системы.

3.2; Роль МКА в диагностике маркеров ВГА.

3.3. Консерванты.

3.4. Разработка методов диагностики туберкулеза с использованием рекомбинантных белков М' tuberculosis.

3.4.1. Выбор высокоспецифичных белков для серологической диагностики туберкулеза;.

3.4.2. Выбор видоспецифичных антигенов М. tuberculosis для тестирования в ИФА и IFN-y-анализе.i.

3.4.3. Выбор экспрессирующего вектора для конструирования рекомбинантной молекулы, несущей ген^ кодирующий аминокислотную последовательность целевогобелка.

3.4.4. Конструирование рекомбинантных молекул, несущих гены, кодирующие видоспецифичные белки М tuberculosis.

3.4.5. Информационный поиск генов esxA, esxB и mpt64, и дизайн праймеров для синтеза ампликонов, включающих эти гены.

3.4.6. Оптимизация условий для наработки рекомбинантных белков.

3.4.7. Оценка рекомбинантных видоспецифичных белков М. tuberculosis в

ИФА, IFN-y-анализе на клинических изолятах.181?

3:47.1 . Описание структуры^гибридных белков ESАТ-6 и GFP10.

3.4:7^2. Оптимизация условий для выделения и очистки рекомбинантных белков.;.„.;.

3.5. Клинико-диагностические исследования рекомбинантных белков

Mí tuberculosis;.:. .v.;.

3.6; Выбор конъюгата.'.'.'.

3.6.1. Синтез биотинилированных конъюгатов.

3:7. Подтверждающие тесты на туберкулезную инфекцию иммуноблот-анализ);.

3:7.1. ПЦР в качестве подтверждающего теста. i. .215г

3.8; Функциональный анализ.;.219i

3.8. И Технология IFN-y-анализа и IFN-y-ELISPOT-анализа в диагностике туберкулеза легких.

3.8:2. Клинические аспекты применения IFN-y-анализа.

3.8.3; IFN-y ответ прихтимуляции периферической крови среди больных туберкулезом легких в процессе антитуберкулезной терапии.

3.9/ EbISPOT-анализ.

3.9.1. Применение технологии ELISPOT для оценки специфического иммунного ответа на^беркулезную инфекцию.:.

3.9:21 Набор компонентов для выявления туберкулеза.

3.9:2; 1. Технологическая схема'проведения IFN-y анализа с применением видоспецифических антигенов М. tuberculosis rESAT-6 и rCFPlOl.

3.9.3. ВИЧ-ассоциированный туберкулез.

ЗЛО. Диагностика ВЛКРС.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биотехнологические основы диагностики вирусных и бактериальных инфекций человека и животных»

Актуальность проблемы. Распространенность инфекционно-воспалительных заболеваний вирусной или бактериальной этиологии, трудности их специфической индикации (диагностики) обусловливают необходимость поиска и разработки новых методов, позволяющих выявить возбудитель и активность процесса. Среди заболеваний инфекционной природы, такие как туберкулез и вирусные гепатиты, устойчиво занимают доминирующее положение (Онищенко Г.Г., 2010). Частота заболеваний вирусным гепатитом А в нашей стране и в мире- составляет в структуре регистрируемых вирусных гепатитов.в последние годы не менее-50 %, а< в 20091 году в России! достигла 55 %. Разработка и* внедрение в- практику здравоохранения методов* диагностики* гепатита А является; одним из актуальных направлений профилактики и лечения этой широко распространенной инфекции.

Около трети населения- в мире инфицировано преимущественно-микобактериями вида М. tuberculosis' (WHO," 2008), в России инфицированность превышает 80 %. По заболеваемости и числу больных туберкулезом Россия, по-прежнему, входит в' число стран с самой, неблагоприятной^ ситуацией по" туберкулезу. По данным ВОЗ за 2007 г., число впервые заболевших туберкулезом в нашей стране составило* 157 тыс. (заболеваемость 110 на 100000 населения). Распространение ВИЧ-инфекции», становится отягощающим- фактором, для активизации туберкулезной инфекции: Особенностью туберкулеза, как одной-из. хронических инфекций, является преобладание случаев'латентной, абациллярной форм и бактерионосительства. Традиционные методы диагностики, такие как рентгенография и бактериоскопия мокроты, туберкулинодиагностика не всегда эффективны. ПЦР; один из самых чувствительных современных методов молекулярной диагностики, не позволяет выявить всех больных. Существенным недостатком ПЦР также является невозможность оценить активность туберкулезного процесса. Наряду с этими методами основная роль принадлежит, несомненно, методам серологической диагностики, направленным на определение антител, а также антигенов возбудителя в крови и других биологических жидкостях организма. Ее основной проблемой остается низкая специфичность и чувствительность применяемых антигенов. Для постановки окончательного диагноза туберкулез требуется сравнение результатов, полученных разными методами; Развитие методов определения клеточного иммунитета напрямую связано с разработкой новых методов идентификации Т-клеточных компонентов крови, имеющих прямое отношение к иммунной системе (Pai М., 2006; Lalvani А. 2007, 2001; Bellete В., 2002; Clark S.A., 2007). Высокая^ разрешающая способность этих методов позволяет оценивать i антигенстимулированную продукцию цитокинов, что очень важно» для; оценки специфического иммунного ответа. Разработка новых технологий, в том. числе на» основе выявления Т-клеточньдх маркеров,- является крайне важной! для: нашей! страны ив настоящее время г входит в разряд наиболее актуальных проблем? современной медицины. ' :

Лейкоз крупного рогатого скота заболевание опухолевой, природы, широко распространенное по всему миру (МигакашкК. et aU, 2011; Acaite Jtet al., 2007; Храмцов B.B. с соавт., 2005; Смирнов П.Н., 2007). В* РФ, согласно* данным Прихватиловой Л.Б. с соавт. (1998); Еулюкина М.И. и соавт. (2003), лейкоз крупного рогатого скота занимает лидирующее место и составляет 57 % от других нозологий. 60 % инфицированных животных, не имеет клинических признаков; инфекции (Keitmann R. et al., 1994), и только выявление специфических антител серологическими методами; или выявление провирусной ДНК с использованием молекулярно-биологических методов позволяет идентифицировать заболевание. Большинство структурных белков BJIKPC проявляет иммуиогенность, . что позволяет с достаточной достоверностью выявлять антитела у инфицированных животных. Образование антител является первоначальным ответом животного на ВЛКРС-инфекцию (Wittmann W., 1993). С середины 70-х, годов активно разрабатывались различные тест-системы для ¡ диагностики ВЛКРС посредством» ферментов с использованием цитопатогенных свойств вируса, а также для непосредственного обнаружения вирусного генома (Graves D.C. et al., 1977); с помощью полимеразной цепношреакции(EechnerHí et'al., .1996; Бусол В;А. и др., 1999; Mullís K.B. et al., 1986; Naif H.M. et al., 1992; Kuckleburg C.J. et al., 2003). В ГНЦ ВБ «Вектор» создание диагностических средств для выявления вирусных и бактериальных инфекций включает фундаментальные исследования вирусных белков и составляет одно из ведущих направлений деятельности центра. Высокая значимость для общественного здравоохранения и ветеринарии создания новых эффективных средств диагностики явилось основанием для проведения данной работы.

Цель исследования: разработка тест-систем, основанных на определении клеточного и гуморального иммунного ответа на антигены вирусного гепатита А, туберкулеза легких и вируса лейкоза крупного рогатого скота. Задачи исследования:

1. Получить и охарактеризовать биоконъюгаты моноклональных антител к нативному антигену вируса гепатита А. Разработать и стандартизовать диагностические иммуноферментные наборы для выявления маркеров вирусного гепатита А.

2. Сконструировать рекомбинантные молекулы, несущие гены, кодирующие видоспецифичные высокоиммуногенные белки М. tuberculosis. Провести предварительную оценку полученных полипептидов на пригодность их для использования в диагностике туберкулеза у человека.

3. Разработать и стандартизовать диагностические тесты с использованием гибридных полипептидов и с применением методов определения способности клеток крови продуцировать IFN-y для выявления туберкулеза человека.

4. На основе использования рекомбинантного белка р24 разработать тест-систему для выявления вируса лейкоза КРС. Сравнить результаты анализа, полученные с использованием разработанной тест-системы, с референс-тест-системами. Научная новизна

Впервые были получены и охарактеризованы биоконъюгаты крысиных моноклональных антител к нативному антигену вируса гепатита А. Разработаны и стандартизованы иммуноферментные тест-системы для выявления и дифференциальной диагностики вирусного гепатита А, обладающие высокой чувствительностью (85-95 %) и специфичностью (90-100 %).

Впервые на основе плазмиды pGEX-2T сконструированы рекомбинантные плазмиды, несущие гены, кодирующие видоспецифичные высокоиммуногенные белки М tuberculosis, такие как rESAT-6, rCFPlO и гДМРТ64. Введение новых плазмид в экспрессирующий штамм Е. coli BL21 позволило получить штаммы-продуценты рекомбинантных белков, несущих в N-концевой части аминокислотную последовательность глутатионтрансферазы (GST) в качестве белка-носителя. Полученные штаммы-продуценты обеспечивали продукцию слитных белков в растворимой форме.

Впервые полученные рекомбинантные белки - rESAT-6, rCFPlO и гАМРТ64 -можно использовать при разработке тест-систем нового поколения для диагностики туберкулеза.

При проведении иммуноферментного и функционального анализа (IFN-y-анализа, IFN-y-ELISPOT-теста) для выявления туберкулеза и подтверждения (опровержения) диагноза использованы рекомбинантные белки, содержащие, на N-конце аминокислотную последовательность глутатионтрансферазы в качестве-вспомогательного белка:

Сравнение с помощью расчетных программ, предсказывающих В-клеточные эпитопы антигенов, показало хорошее совпадение вторичных структур соответствующих районов в рекомбинантных белках и природными, что позволило прийти к заключению о полноценном взаимодействии последних со специфическими иммуноглобулинами без отщепления GST-последовательности.

Впервые разработана схема диагностики лейкоза крупного рогатого скота, на основе серологических методов - ИФА и РИД - с применением рекомбинантного антигена р24, которые использованы в ветеринарии на завершающих этапах оздоровления животных от лейкоза и в хозяйствах, где регистрируются единичные случаи инфекции ВЛКРС. Практическая значимость работы

Получены и сконструированы опытные и экспериментально-производственные серии тест-систем, которые были аттестованы в отделе биологического и технического контроля НПО «Вектор» и испытаны,в ГИСК им. JI.A. Тарасевича в 1990-1991 гг. На разработанную диагностическую тест-систему была утверждена научно-техническая документация. (ВФС 42-331ВС-92), эксперименально-производственный регламент (ЭПР) 373-92. «Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А «Вектогеп-A-IgM», инструкция по применению тест-системы «Вектогеп-A-IgM».

Разработан двухстадийный вариант экспериментальной коммерческой тест-системы для выявления ВГА, который обладает 100 % чувствительностью и специфичностью и позволяет определять вирусный антиген в природных биологических объектах и лизате инфицированных клеток. Применение крысиных моноклональных антител в диагностике позволяет значительно увеличить специфичность и чувствительность тест-систем.

Разработана и запатентована технология получения рекомбинантных видоспецифических белков rESAT-6, rCFPlO и rAMPT64 М. tuberculosis для диагностики туберкулеза.

Разработанные методы иммунологического мониторинга туберкулезной инфекции, использующие Т-клеточные технологии, позволяют усовершенствовать диагностику туберкулеза.

Создана схема комплексной диагностики ВЛКРС в хозяйствах на завершающих этапах оздоровления животных от лейкоза' и в хозяйствах, где регистрируются единичные случаи, инфекции ВЛКРС на основе иммуноферментного анализа (ИФА) и радиальной иммунодиффузии (РИД). Положения, выносимые на защиту.

1. Разработанные и стандартизованные компоненты диагностических иммуноферментных наборов для выявления маркеров вирусного гепатита А позволили создать высокоэффективные диагностические тест-системы.

2*. Плазмиды pTSE6, рТВ232 и рТВ323 содержат гены, кодирующие рекомбинантные видоспецифичные высокоиммуногенные белки; М. tuberculosis. При введении этих плазмид в клетки Е. coli (BL21) обеспечивается, продукция рекомбинантных белков rESAT-6, rCFPlO и гАМРТ64 в растворимой' форме в количествах, достаточных для проведения диагностики туберкулеза.

3. Разработанная методика получения, выделения и очистки рекомбинантных белков rESAT-6, rCFPlO и гДМРТ64 в растворимой форме из штаммов-продуцентов, а также полученные рекомбинантные генетические конструкции на основе плазмиды pGEX-2T, включающие гены, кодирующие секретируемые белки М. tuberculosis, и экспрессирующий штамм BL21, могут быть представлены в виде технологической схемы для разработки лабораторного регламента по производству этих белков.

4. Рекомбинантные белки rESAT-6, rCFPlO и гАМРТ64 применимы в качестве компонентов в иммуноферментном анализе, у-интерфероновом анализе и в у-интерфероновом ELISPOT-тесте при диагностике туберкулеза без проведения протеолитического отщепления аминокислотной последовательности белка-носителя от аминокислотной последовательности целевого белка. Исследование клинического материала позволило оценить возможности гибридных белков в диагностике туберкулеза.

5. Комплексная диагностика вируса лейкоза крупного рогатого скота с использованием серологических тестов (РИД, ИФА) позволяет с большей эффективностью проводить обследование хозяйств с различной степенью инфицированности^лейкозом крупного рогатого скота. Структура и объем диссертации'

Диссертация изложена на 365 страницах машинописного текста,и состоит из, введения; обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы. «Результаты, m обсуждение», заключения, выводов и списка литературы. Библиография включает 545 работ. Работа иллюстрирована,59 рисунками.и включает 39 таблиц. Апробация работы и публикации

Материалы, изложенные в диссертационной работе, были представлены« на следующих международных и научно-практических конференциях: «Инфекционной службе г. Новосибирска - 90 лет». Научно-практическая конференция Новосибирск, 1994; конференция «Проблемы биологической и экологической безопасности»,. Оболенск, 2000 г.; 8-я.международная конференция «СПИД, рак и родственные проблемы» Санкт-Петербург, 2000 г.; International Conference American Thoracic Society San Francisco; California, 2001; IIth ERS Annual Congress Berlin, Germany, 2001; Всероссийская научно-практическая конференция, г. Иркутск, 2002; «VII Российский съезд фтизиатров», Москва, 2003 г.; Международная' конференция «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний», ГНЦ ВБ «Вектор», 2004 г.; «Актуальные вопросы ветеринарии: Сибирская, международная научно-практическая конференция», Новосибирск, 2004; Keystone Symposia. "Tuberculosis: Integrating Host and Pathogen Biology"; Whistler, British Columbia, Canada, 2005; «Проблемы, инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера»: III Российская научная конференция с международным участием, Новосибирск, 2006 г.; The International Simposium "EU-Russia: Prospects for Cooperation in Biotechnology in the Seventh Framework Programme", St-Petersburg,

Russia, 2006; Четвертый Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2007 г.; II Российско-германская конференция форума Коха - Мечникова. «Туберкулез, спид, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении», Томск, 2007 г.; Vaccine Congress, Amsterdam, the Netherlands, 2007; Международная' научно-практическая конференция «Молекулярная диагностика инфекционных болезней», Минск, 2007; «Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными! инфекционными заболеваниями на юге России», Научно-практическая конференция,' Ставрополь, 2007; "New Technology in medicine and experimental biology", Pattaya - Bangkok, Thailand, 2007.

Работа выполнена в 1989-2009 гг. в рамках научных тем организации' и* международных проектов: грант МНТЦ № 1983р; грант МНТЦ №2019р; грант МНТЦ № 1980р; проект МНТЦ № 2311; проект МНТЦ № 2641.

По теме диссертации опубликовано 18 научных статей, из них 12 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК, 40 тезисов докладов, монография, 1 методическое указание. Получено 2 патента Российской Федерации, один из которых удостоен диплома в номинации «100 лучших изобретений» России».

Личный вклад соискателя

В диссертации обобщены результаты экспериментальных исследований, проведенных в 1989-2009'гг. соискателем в ВНИИ МБ, ГНЦ ВБ «Вектор» и ЗАО «Вектор-Бест». Автор принимал активное участие в развитии и внедрении новых технологий в диагностике социально-значимых вирусных и бактериальных инфекций в СССР и РФ. Автор принимал личное участие в планировании и проведении основного комплекса исследований, результаты которых представлены в диссертационной работе. За помощь, оказанную в проведении диссертационных исследований, автор выражает благодарность Тюнникову Г.И., Майданюку А.Г., Амосову А.Д., Болдыреву А.Н., который под руководством соискателя защитил кандидатскую диссертацию и Смирновой О.Ю. (молекулярно-биологические исследования), Разумову И.А., Локтеву В.Б., Азаеву М.Ш., Носаревой 0:В., Лебедеву Л.Р., а также Двоеглазову Н.Г., Храмцову В.В., Смирнову П.Н. Вклад в работу других авторов отражен в совместных публикациях по теме диссертации.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Туманов, Юрий Васильевич

4. ВЫВОДЫ

1. Разработана диагностическая тест-система «Вектогеп-A-IgM» для выявления антител класса M к вирусу гепатита А методом ИФА. По аналитическим характеристикам (чувствительности - 98-97 %, специфичности - 100 %, времени проведения анализа - 2-2,5 ч); тест-система сопоставима с тест-системами зарубежных- фирм Abbott (США) и La Roche (Швейцария). Тест-система по результатам проведения Госиспытаний, рекомендована Ученым* советом ТИСК. им. JI.A. Тарасевича и Комитетом по производству иммунобиологических препаратов (МИБП) к регистрации.

2. Разработан набор компонентов: «Вектогеп.А-антитела» для выявления IgG-антител к ВГА с чувствительностью^ специфичностью соответственно 98-99 % и 82 %. Аналитическая чувствительность. диагностического набора* «Вектогеп-А-антитела» составила 9,8 ±1,2 мМЕ/мл, принтом? чувствительность референс-тест-системы «ИФА" анти-ВЕА» составила 11,8 ± 1,6 мМЕ/мл.

3. Получены рекомбинантные штаммы Е. coli - продуценты химерных белков-rESAT-6, rCFPIO и гАМРТ64 М. tuberculosis, которые депонированы в коллекции культур-микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ» «Вектор». Предложена технологическая схема» для наработки и; очистки- рекомбинантных белков» rESAT-6, rCFPIO' и гЛМРТ64 в растворимой форме.

4. На примере rESAT-6 и rCFPIO' установлено,- что с использованием рекомбинантных белков возможно выявлять антитела классов G, А и<-М среди разных групп обследуемых, но наиболее высокий показатель выявляемости иммуноглобулинов определен для антител класса G, который составилЛ0 ± 11 % (для IgA - 31,4 %, IgM - 11,8 %).

5. Чувствительность и специфичность выявления IgG антител методом иммуноферментного анализам к рекомбинантным антигенам rESAT-6,. rCFPIO и гАМРТ64, оцененные по образцам сывороток от больных туберкулезом-и здоровых доноров, составила-79 %, 65 %, 81 % и 92-98 %, 95-98 % и 76 % соответственно.

6. Определена корреляция между содержанием1 антител к антигенам микобактерий и активностью процесса. Показаны достоверные различия коэффициента корреляции между активностью процесса (выраженной в баллах) и уровнями антител класса G у больных туберкулезом легких независимо от формы процесса к Е-БЦЖ, к С-БЦЖ (соникат клеток), к E-H37R.v, к C-H37RV (соникат клеток), и только при фиброзно-кавернозном туберкулезе легких отмечалась достоверная корреляция между уровнями антител класса М к E-H37R.v и C-H37Rv и степенью активности процесса.

7. Сравнительный анализ гуморального иммунного ответа больных • на использованные антигены с результатами патолого-гистологического исследования выявил достоверные коэффициенты корреляции между уровнями антител класса G к С-БЦЖ (г=0,476, р<0;04), Е- H37Rv ((г=0,495, р<0,03) и уровнями антител класса М к С-БЦЖ (г=0,448, р<0,04).

7.1. Достоверная» корреляция- между показателями содержания1 антител и» клинико-рентгенологическими признаками- заболевания, и между уровнями антител И' патолого-гистологической картиной заболевания позволили конкретизировать диагностическую значимость уровней антител того или иного класса к определенным антигенам М. tuberculosis.

8. Чувствительность функционального анализа при выявлении маркеров Т-клеточного иммунного ответа (IFN-y), определявшаяся при1 стимуляции мононуклеаров > цельной крови рекомбинантными белками,1 rESAT-6, rCFPlO и гДМРТ64 составила 84-100 %,.80-95 %, 60-78 % соответственно, специфичность -86-100 %, 82-100% и 76-97% соответственно. При использовании пула одновременно трех рекомбинантных белков-- rESAT-6, rCFPlO и гДМРТ64 -специфичность составила! 96,2%, а чувствительность - 89,1%. Разработаны диагностические компоненты^ наборов, позволяющие эффективно оценивать состояние клеточного иммунитета при туберкулезной инфекции.

9. Разработан алгоритм использования серологических тестов* (РИД, ИФА) и молекулярно-биологических методов4 (ПЦР, «nested»-Enj,P) для обследования хозяйств с различной степенью инфицированности по лейкозу крупного рогатого скота (неблагополучные и благополучные):

- иммуноферментные методы определения антител к BJIKPC позволяют дополнительно к РИД выявлять до 15,3 % животных, инфицированных BJIKPC, в зависимости от эпизоотической ситуации по инфекции BJIKPC. Установлено, что 71 % сомнительных в РИД проб по результатам ИФА содержат антитела к BJIKPC. С целью рационального использования иммуноферментного теста рекомендуется применять его при первичном разделении неблагополучного стада и на завершающей стадии оздоровления.

- доля животных, инфицированных ВЛКРС и выявленных разными методами, составила: для РИД - 76,1 %, для ИФА - 83,3 %, для ПЦР - 58,3 %, для «г^ес!»-ПЦР - 72,6 %. Для максимального выявления всех инфицированных ВЛКРС животных необходимо комбинированное использование серологических (РИД, ИФА) и молекулярно-биологических (ПЦР, «пе81е<3»-ПЦР) методов диагностики.

- у гематологически больных лейкозом животных наличие ВЛКРС было подтверждено методами РИД, ИФА и ПЦР в 100 % случаев.

Как видно из приведенных результатов, новые методологии, применяемые в диагностике инфекционных заболеваний, могут эффективно дополнять друг друга, развивая, таким образом, систему доказательной медицины и ветеринарии, в диагностике инфекционных заболеваний человека и животных. 3.11. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мониторинг туберкулезной инфекции с использованием методов функционального анализа

Лабораторная диагностика туберкулеза включает в себя методы- выявления инфекционной этиологии заболевания и методы- определения патологических изменений в органах, вызванных- инфекционным процессом. Диагностическая' ценность каждого из используемых тестов различна и зависит как от особенностей самого' теста, так и- от применения его в» определенные периоды заболевания. Молекулярно-биологические методы позволяют достаточно быстро с высокой специфичностью и чувствительностью проводить выявление и типирование микобактерий в различных клинических образцах. Чувствительность технологии ПЦР составляет 10-100 клеток на пробу. Однако существенным недостатком ПЦР-анализа является невозможность оценить активность туберкулезного процесса. В литературе известно порядка 1500 белков М. tuberculosis комплекса- Функционально исследовано* около 200 белков. Большинство антигенов, проявляющих высокую иммунологическую реактивность, не удовлетворяет диагностическим критериям из-за низкой чувствительности и специфичности. Пулы культуральных фильтратов белков М. tuberculosis содержат посторонние белки с перекрестной реактивностью, что снижает диагностические параметры при диагностике туберкулеза. Исходя из анализа литературных данных, нами были выбраны два белка, проявляющие наиболее высокую специфичность в диагностике туберкулеза - это белки ESAT-6 и CFP10. Мы применяли гибридные белки ESAT-6 и CFP10, содержащие в составе белковый носитель глутатион-S-трансферазу. Данный подход в получении гибридных белков является наиболее доступным в практической реализации, т.к. не требует предварительной работы по очистке и выделению промежуточных фракций, а конечный продую1 выделяется с использованием аффинной хроматографии на колонке. В качестве микобактериальных антигенов для исследований были также использованы? культуральные фильтраты» М. tuberculosis H37Rv, туберкулин (PED). Туберкулин-был открыт в конце XIX, века немецким врачом Робертом* Кохом и» впервые применен для диагностики, в. 1907 г. Пирке. Реакция* Манту (кожная пробам с туберкулином) применяется для- исследования напряженности иммунитета к М. tuberculosis в' реакции на, туберкулин. Развитие новых методов Т-клеточнои иммунологии напрямую связано с разработкой новых методов идентификации Т-клеточных компонентов крови (табл. 39). Некоторые формы туберкулеза (остро прогрессирующие) не могут быть выявлены методом профилактических обследований из-за схожести рентгенологической картины- с неспецифцческими заболеваниями легких. Единственным методом достоверной диагностики в таких случаях является прямая бактериоскопия мокроты или методы Т-ютсточной технологии (IFN-y-анализ, IFN-y-ELISPOT-анализ). Сущность IFN-y анализа заключается« в in vitro - детекции клеточных медиаторов иммунного ответа при стимуляции видоспецифическими антигенами цельной клеточной культуры крови с образованием в плазме крови продукции IFN-y. Выявление уровня секреций IFN-у, но не других цитокинов (а их известно несколько десятков), коррелйрУет со стадией и степенью туберкулезной инфекции, уровнем иммунного ответа и вероятностью прогрессирования активной- формы туберкулеза по схеме, инфицирование - латентная стадия- - активизация процесса. Уровень IFN-Y среди здорового контингента не превышает предельные значения (> 300 пг/мл IFIST-Y или 1,2-1,7 МЕ/мл IFN-y), соответствующие группе риска или больных туберку-*16301*1' Специфичность рекомбинантных белков в IFN-y-анализе туберкулеза оказЫ^ается выше, чем PPD-туберкулина. Около 70 % жизнеспособных клеток способны .давать иммунный ответ при стимуляции видоспецифическими антигенами М. tuberculosis.

Кроме того, они являются значительным жизнеспособным ресурсом ДНК, необходимым для проведения НЬА-типирования и ПЦР-анализа. Культурально подтвержденная чувствительность метода при активном туберкулезе для гЕ8АТ-6 и гСБРЮ - 85-94 %. При этом чувствительность кожной пробы составила 54-71 %. Специфичность исследованных антигенов в функциональном анализе составила^ для гЕБАТ-б - 92-98 %, для гСРР10 - 89-98 %. Другие диагностические тесты -флюорографические, микробиологические, микроскопические способны выявить

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Туманов, Юрий Васильевич, 2011 год

1. Азаренок К.С., Семенов В.М. Способ обнаружения антигенов и антител с помощью белка А стафилококка. // Лабор. дело. 1987. - № 4. - С. 304-307.

2. Акатов А.К. Белок А золотистого стафилококка. // ЖМЭИ. 1977. - № 5. -С. 5-10.

3. Андросова М.В., Владимирский М.А., Алексеева Г.И. Иммунологический метод идентификации Mycobacterium tuberculosis и M.bovis BCG на основе применения моноклональных антител. // Пробл. туберкулеза. 1989 - № 6. - С! 1216.

4. Аутеншлюс А.И., Столярова В.М., ГавриловаЛ.О: Критерии лабораторной-диагностики бактериальных инфекций и токсоплазмоза у новорожденных и детей раннего возраста. Новосибирск, 1994. 132с.

5. Бурба Л.Г. Лейкозы, и злокачественные опухоли животных. // Под ред. Шишкова В.П., Бурбы Л.Г.- М.: Агропромиздат, 1988. -,5971с.

6. Сергеев В. А., Орлянкин Б. Г. Структура и биология вирусов животных. М.: Колос, 1983. 336 с.

7. Бусол В.А., Лиманская О.Ю., Лиманский А.П., Цымбал В.И. Тест-система для выявления ВЛКРС полимеразной цепной реакцией. // Ветеринария. 1999. -№. 6. - С. 27-30.

8. Визель А.А., Гурылева М.Э. Туберкулез. // Под ред. М.И. Перельмана. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. - 208 с.

9. Вирусные гепатиты. Жданов В.М. и др., АМН России М: Медицина, 1986 г.

10. Владимирский М.А. Иммунологические и биотехнологические методы повышения эффективности диагностики и лечения туберкулеза: Автореф. дис. д-ра мед. наук. — М., 1993.

11. Гладкова С.Е., Решетников С.С., Пряхина В.Н. Опыт применения тест-системы "АТ-Туб-Бест" для диагностики туберкулеза. // Новости "Вектор-Бест". -2006. -№ 4(42). С. 3-7.

12. Донченко А.С., Донченко В.Н. Туберкулез крупного рогатого, скота, верблюдов, яков, овец и пантовых оленей. М.: Новосибирск, 1994. 353 с.

13. Жданов В.М. Нерешенные вопросы вирусных гепатитов. Вирусные гепатиты / Под ред. В.М. Жданова и Е.С. Кетиладзе. М., 1984:7-11.

14. Ильницкий Р.И., Сахарчук И.И., Дудка П.Ф. Синдром плеврального выпота: дифференциальная диагностика и лечебная тактика. // Український пульмонологічний журнал. 2004. - №. 3. - С. 64-68.

15. Линникова М.А., Лямда-Геллер Б.А. Получение высокоочищенной фракции очищенного сухого туберкулина, ее химическая и биологическая характеристика. // Пробл. туберкулеза. 1963. - № 89. - С. 67.

16. Карпов A.B., Задубровская Н.Д., Евдокимов В:Н. Возможности иммунохроматографического метода выявления туберкулеза.- //Пробл. туберкулеза. 2000. - №. 4. - С. 8-10.

17. Карпов A.B. Экономическая целесообразность и медицинская эффективность методов активного выявления туберкулеза. // Пробл. туберкулеза. -2000. С. 3-5.

18. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных: учебное пособие. // Пер. и ред. В:Ю.Луговцева,.Д.А.Васильева. Ульяновск, -2002. 268с.

19. Малюченко Н.В., Агапов И.И., Тоневицкий А.Г., Мойсенович М.М., Савватеев М.Н., Тоневицкий Е.А., Быков В.А., Кирпичников М.П. Детекция иммунных комплексов с помощью атомно-силовой микроскопии. // Биофизика. -2004. Т. 49(6). - С. 1008-1014.

20. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. - 480 с.

21. Милькаманович В.К. Диагностика и лечение болезней органов дыхания. Минск: Полифакг-Альфа, 1997. 360 с.

22. Мирлина Е.Д., Ланцов В.А. Диагностические возможности метода ПЦР при генитальном туберкулезе у женщин. // Пробл. туберкулеза. 1998. - №1. - С. 2226.

23. Москалик Р.С Ускоренный метод ликвидации лейкоза крупного рогатого скота на племпредприятиях. Москалик P.C. Прионные и ретровирусные инфекции животных. Бюлл. ВНИИЭВ.- М., 1996. - Вып. 77.

24. Поспелов Л.Е., Серова Л.Д., Маленко А.Ф. и др: Изучение связи распределения, антигенов локуса HLA-DR и туберкулеза в различных популяциях. // Пробл. туб. 1987. - №. 10. - С. 54-56.

25. Поспелов Л.Е., Серова Л.Д., Калинина Н.М. HLA-DR-антигены у больных туберкулезом и. здоровых ревакцинированных БЦЖ лиц. // Проблемы туберкулеза и болезни легких. 2003. - №. 2. - С. 82-83.

26. Прихватилова Л.Б., Ломакин А.И., Колосов С.Н., Дрыгин В.В., Рыбаков С.С., Гусев A.A. Диагностика лейкоза! КРС методом' полимеразно-цепной реакции. // Вестник РАСХН. -1998i №. 5. - С. 65-6S.

27. Решетников С.С., Гладкова С.Е., Офицеров В.И. Новая тест-система для серодиагностики туберкулеза. // Новости «Векгор-Бест». 1998. - №. (9). - С. 3-7.

28. Решетников С.С. Применение набора реагентов «АТ-Туб-Бест» для диагностики туберкулеза (вопросы и ответы). // Новости «Вектор-Бест». 2007. -№. (46). - С. 8-9.

29. Салина Т.Ю., Морозова Т.И. Интерферон g и ИГГ -а\т к М. tuberculosis в сыворотке крови больных активным туберкулезом легких. // Пробл. туб. 2004. -№. 11.-С. 43-45.

30. Стародуб Н.Ф., Стародуб В.Н. Инфекционный лейкоз крупного рогатого скота и его диагностика. // Бюшшмери i клггина. 2003. - Т. 19. - №. 4. - С. 307316.

31. Смирнов П.Н., Смирнова В.В., Левашева А.Т. и др. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота: метод, рекоменд. Новосибирск. 1989. 46с.

32. Смирнов П.Н. Болезнь века лейкоз крупного рогатого скота: Новосибирск, 2007. 302с.

33. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В:, Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней-животных. М.: Агропромиздат, 1991. - С.38-50.38.' Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я, Соловьев B.Bi, Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. М: 1998. 928с.

34. Титаренко О.Т., Дьякова М.Е., Перова Т.Л., Ряснянская Т.Б. Активность аденозиндезаминазы и ее изоферментов у больных с различными формами туберкулеза. // Пробл. туберкулеза. 2002. - №. 3. - С. 43-45.

35. Файзулин Р.З., Чекишев В.М. Универсальные реагенты для диагностики инфекционных болезней- животных в иммуноферментном анализе. // Диагностика инфекционных болезней животных: Сб. науч. тр. РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. Новосибирск, - 1993. - С. 55-63.

36. Харитонов М.В., Гамиров Р.Г., Хамитова С.А. Неспецифические реакции на туберкулин и факторы, обуславливающие их. // Ветеринарный» врач. 2003. - №. 4 (12). -С. 34-37.

37. Хоменко А.Г., Литвинов В.И., Чуканова В.П. и др. Антигены комплекса HLA у больных туберкулезом и здоровых лиц в различных популяциях. // Иммунология. 1985. -№. 1.-С. 22-24.

38. Acaite J:, Tamosiunas V., Lukauskas K., Miliüs» J:, Pieskus Ji. The* eradication* experience of enzootic bovine leukosis from Lithuaniá; // Preventive Veterinary Medicine- 2007. V. 82. - N. 1-2. - P. 83-89.

39. Adjei A.A., Armah H., Duah O.A., Adiku T., Hesse I.F. Evaluation of a rapid serological chromatographic immunoassay for the diagnosis of pulmonary tuberculosis in Accra, Ghana. Jpn. // J. Infect. Dis. 2003. - V. 56. - P. 161-164.

40. Affatato S., Bersaglia G., Emiliani D., Foltran I., Ton A. Sodium-azide versus ProClin 300: influence on the morphology of UHMWPE particles generated in laboratory tests. // Biomaterials. February. 2004. - V. 25. - N 5. - P. 835-842.

41. Alastair Gracie J., Robertson S.E. Mclnnes I.B; Interleukin-18: // J. Leuk. Biol: -2003.-V. 73.-P. 213-224.

42. Al-Attiyah R„ Shaban F.A., Wiker H.G., Oftung F., Mustafa A.S. Synthetic peptides identify promiscuous human Thl cell epitopes of the secreted mycobacterial antigen MPB70. //Infect. Immun. 2003. - V. 71. - P. 1953-1960.

43. Al-Attiyah R., Mustafa A.S. Characterization of human cellular immune responses to novel Mycobacterium-tuberculosis antigens encoded'by genomic regions absent in Mycobacterium bovis BCG. // Infect: Immun: 2008. - V. 76. - P. 4190-4198.

44. Altman J.D., Moss P.A. H1., Guolder P.J: R., Barouch.D.H., McHeyzer-Williams M.G., Bell J.I., McMichael A.J'., Davis M.M. Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes. // Science. 1996. - V. 274. - P. 94-96.

45. Andersen P., Munk M.E., Pollock J.M., Doherty T.M. Specific immune- based diagnosis of tuberculosis. // Lancet. 2000. - V. 356. - P. 1099-1104.

46. Andersen A.B., Hansen E.B. Structure and mapping of antigenic domains of protein antigen b, a 38,000-molecular-weight protein of Mycobacterium tuberculosis. // Infect. Immun. 1989. -V. 57. -N 8. - P. 2481-2488.

47. Anderson B.L., Welch- R.J., Litwin C.M." Assessment of three commercially available serologic assays for detection of antibodies to Mycobacterium tuberculosis and' identification of active tuberculosis. // CVI. -2008. V. 15. - P. 1644-1649:

48. Archna.Sharma, Abhik Saha, Surajit Bhattacharjee, Subrata Majumdar, Sujoy K. Das gupta specific and randomly derived immunoactive peptide mimotopes of mycobacterial antigens. // CVI. 2006. - V. 13. -N. 10. - P. 1143-1154.

49. Arend S.M., Engelhard A.C.F., Groot G., DeBoer K., Anderson P., Ottenhoff T.H.M., van Dissel J.T. Tuberculin skin testing compared to T-cell response to

50. Mycobacterium tuberculosis-specific antigens for detection of latent infection on persons with recent tuberculosis contact. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2001. - V. 8. - P. 10891096.

51. Ballagi-Pordany A., KlintevalLK, Merza M., Klingeborn B., Belak S. Direct detection' of bovine leukemia virus infection: Practical applicability of a double polymerase chain reaction. // J. Vet. Med. 1992. - V. 39B. - P. 69-77.

52. Ballas Z.K., Krieg A.M., Warren T., Rasmussen W., Davis H.L., Waldschmidt M., Weiner G.J. Divergent therapeutic and immunologic effects of oligodeoxynucleotides with distinct CpG motifs. // J. Immunol 2001. - V. 167. - P. 4878-4886.

53. Barnes P.F., WizeliB! Type 1 Cytokines and the pathogenesis of tuberculosis. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. -2000.-V. 161.-Pi 1773-1774.

54. Bause E. Structural requirements of N-glycosylation of proteins. Studies with proline peptides as conformational probes. //Biochem. J. 1983. - V. 209; - PI 331-336.

55. Bayer E.A., Wilchek M. The use of avidin-biotin complex as a tool in molecular biology. // Meths. Biochem.Anal. 1980. - V. 261. - P. 1-45.

56. Beatty W.E., RhoadesiE.E:, Ullrich HJ;, Chatteijee D;, Heuser JiE., Russell :D:G. Trafficking and release of mycobacterial lipids from infected.macrophages. // Traffic. -2000. -V. 1.-P. 235-247.

57. Beck S.T., Leite O.M., Arruda R.S, Ferreira A.W. Combined use of Western blot/ELISA to improve the serological diagnosis of human tuberculosis. // Braz. J. Infect. Dis.-2005. V. 9. - P: 35-43.

58. Behr M.A., Wilson M.A., Gill W.P., Salamon H., Schoolnik G.K., Rane S., Small P.M. Comparative genomics of BCG vaccines by whole-genome DNA microarray. // Science. -1999. -V. 284. 5419. P. 1520-1523.

59. Betts J.C., Dodson P., Quan S., Lewis A.P., Thomas P. J., Duncan K., McAdam R.i

60. A. Comparison- of the proteome of Mycobacterium tuberculosis strain H37Rv with clinical isolate CDC 1551. // Microbiol. 2000. - V. 146. - Pi 3205-3216.

61. Bhattacharyya S., Singla' R., Dey A.B., Prasad H.K. Dichotomy of cytokine profiles in patients and high-risk healthy subjects exposed to tuberculosis. // Infect. Immun. 1999. -V. 67. -N. 11. - P. 5597-5603:

62. Bhaskar S., Khanna S.P., Mukherjee R. Isolation, purification and immunological characterization of novel low molecular weight protein antigen CFP 6 from culture filtrate of M. tuberculosis. I I Vaccine. 2000. - V. 18. - N. 25. - P. 2856-2866.

63. Bloom B.R., Mehra V., Young R.A. Genes for the protein antigens of the tuberculosis and leprosy bacilli. // Bioscience Reports. 1985. - V. 5. - N. 10-11. - P. 839-845.

64. Bock N., Reichman L.B. Tuberculosis and HIV/AIDS: epidemiological and clinical aspects (world perspective). // Semin. Respir. Crit. Care Med. 2004. - V. 25. -P.337-344.

65. Bothamley G.H. Serological diagnosis of tuberculosis. // Eur. Respir. J. 1995. -V. 8 (Suppl. 20). - P. 676-688.

66. Bower W.A., Nainan O.V., Han X., Margolis H.S. Duration of viremia in hepatitis A virus infection. // J.Infect.Dis. 2000. - V. 182 - P. - 12-17.

67. Brock I., Munk M.E., Kok-Jensen A., Andersen P: Performance of whole blood IFN-gamma test for tuberculosis diagnosis based on PPD ou the specific antigens ESAT-6 and CFP-10. // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2001. - V. 5. - P. 462-467.

68. Brock I., Weldingh K., Leyten E. M., Arend S.M., Ravn P, Andersen P. Specific T-cell epitopes, for immunoassay-based diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection. // J. Clin. Microbiol. 2004. - V. 42. - P. 2379-2387.

69. Brown F. The classification and nomenclature of viruses: summary of results of meetings of the International Committee on Taxonomy of Viruses in Edmonton, Canada 1987. // Intervirology. 1989. -V. 30(4). - P. 181-186.

70. Bua A., Molicotti P., Delogu G., Pirina P., Mura M.S., Madeddu G. et al. QuantiFERON TB Gold: a new method for latent tuberculosis infection. // New Microbiol. -2007. V. 30. - P. 477^180.

71. Bukhary Z.A. Evaluation of anti-A60 antigen IgG enzyme-linked immunosorbent assay for serodiagnosis of pulmonary tuberculosis. // Ann. Thorac. Med. 2007. — V. 2. -P. 47-51.

72. Burgess L.J., Maritz F.J., Le Roux I., Taljaard J.J. Use of adenosine deaminase as a diagnostic tool for tuberculous pleurisy. // Thorax 1995. - V. 50. - P. 672-674.

73. Burgess L.J., Maritz F.J., Le Roux I., Taljaard J.J. Combined use of pleural adenosine deaminase with lymphocyte/neutrophil ratio: increased specificity for the diagnosis of tuberculous pleuritis. // Chest 1996. - V. 109. - P. 414-419.

74. Burridge M. Fall in antibody titer to bovine leukemia virus in the periparyturient period. // Can. J. Med. 1982. - V. 46. - P. 270-271.

75. Butler W.R., Guthertz L.S. Mycolic acid analysis by high-performance liquid chromatography for identification of Mycobacterium species. // Clin. Microbiol. Rev. -2001.-V. 14.-P. 704-726.

76. Carli K.T., Batmaz H., Sen A., Minbay A. Comparison of serum, milk and urine as samples in an enzyme-immunoassay for bovine leukemia virus infection. // Res.Vet.Sci. 1993. - V. 55.-N.3.-P. 394-395.

77. Carli K.T., Sen A., Batmaz H., Kennerman E. Detection of IgG antibody to bovine leukaemia virus in urine and serum by two enzyme immunoassays. // Lett. Appl. Microbiolt- 1999. V. 28. -P. 416-418.

78. Cassone A., Chiani PI, Quinti. I., Torosantucci. A.A possible* participation of polymorphonuclear cells stimulated by microbial immunomodulators in cytokine dysregulated patterns of AIDS patients. // J. Leukocyte Biol-. 1997. - V. 62. - P. 60-66.

79. Chackerian A.A., Perera T.V., Behar S.M. Gamma Interferon-Producing CD4+ T lymphocytes in. the lung correlate with resistance to infection with Mycobacterium tuberculosis. II Infect. Immun. 2001. - V. 69. - N. 4. - P. 2666-2674.

80. Chakravorty S., Tyagi J.S. Novel multipurpose methodology for detection of mycobacteria in pulmonary and extrapulmonary specimens by smear microscopy, culture, and PCR. // Ji Clin. Microbiol. 2005. - V. 43. - N 6. - P. 2697-2702.

81. Chan E.D., Reves R., Belisle J.T., Brennan P.J., Hahn W.E. Diagnosis of tuberculosis by a visually detectable immunoassay for lipoarabinomannan. II Am. J. Respir. Crit. Care Med. -2000. -V. 161. P. 1713-1719.

82. Chehimi J., Marshall J.D., Salvucci O., Frank I., Chehimi S., Kawecki S., Bacheller D., Rifat S., Chouaib S. IL-15 enhances immune functions during HIV infection. // J. Immunol. -1997. V. 158. - P. 5978-5987.

83. Chiang EH., Suo J., Bai K.J., Lin T.P. et al. Serodiagnosis of tuberculosis. A study comparing three specific mycobacterial, antigens // Am.J.Respir Crit. Care Med. Sep. -1997.-V. 156(3ptl).-P. 906-911.

84. Cho S.N. Current issues on molecular and. immunological diagnosis of tuberculosis. // Yonsei Med. J. 2007. - V. 48. -N 3. - P. 347-359. '

85. Chun T., Serbina N.V., NoltD:, Wang B., Chiu N.M., Flynn J.L., Wang C.R. Induction of M3-restricted cytotoxic T lymphocyte responses by N-formylated peptides derived from Mycobacterium tuberculosis. II J. Exp. Med. 2001. - V. 193. - P. 12131220.

86. Clarridge J.E., Shawar R.M., Shinnick T.M., Plikaytis B.B. Large-scale use of polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis in a routine mycobacteriology laboratory. // J-. Clin. Microbiol. 1993. - V. 31. - P. 2049-2056.

87. Clark M.F., Adams A.N. Characteristics of the micro-plate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses. // J. Gen. Virol. 1977. -V. 34:-P. 475-483.

88. Cleveland M:G., Gorham J.D:, Murphy T.L., Tuomanen E., Murphy K.M. Lipoteichoic acid preparations of gram-positive bacteria induce interleukin-12 through a CD 14-dependent pathway. // Infect. Immun. 1996. - V. 64. - P. 1906-1912:

89. Desem N., Jones S.L. Development of a human gamma interferon enzyme immunoassay and comparison with tuberculin skin testing for detection of Mycobacterium tuberculosis infection. // Clin. Diagn. Lab: Immunol. 1998. -V. 5. - N. 4.-P. 531-536.

90. Diagbouga S., Fumoux F., Zoubga A., Sanou P.T., Marchal G. Immunoblot analysis for serodiagnosis of tuberculosis using a, 45/47-kilodalton antigen complex of Mycobacterium tuberculosis. II Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1997. - V. 4. - P. 334-338.

91. Djelouadji Z., Raoult D., Daffé M., Drancourt M.A Single-step sequencing method 3. for the identification of Mycobacterium tuberculosis complex species. // PLoS Negl. Trop. Dis. 2008. - V. 2. - N. 6i e253. - P: 1-8.

92. Dolz G., Moreno E. Comparison of agar gel immunodiffusion test, enzyme-linked immunosorbent assay and western blotting for the detection of BLV antibodies. // Zentralbl. Veterinarmed. 1999. - V. 46B. - P. 551- 558.

93. Dorokhov Y.L., Sheveleva A.A., Frolova O.Y., Komarova T.V., Zvereva A.S., Ivanov P.A., Atabekov J.G. Superexpression of tuberculosis antigens in plant leaves. // Tuberculosis (Edinb). 2007. - V. 87. - N. 3. - P. 218-224.

94. Dosanjh N.S., Rawat M., Chung Ji-Hae, Av-Gay Y. Thiol specific oxidative stress response in Mycobacteria. // FEMS Microbiology Letters. 2005. - V. 249. - P. 87-94

95. Drancourt M., Carrieri P., Gevaudan M.J., Raoult D. Blood agar and: Mycobacterium tuberculosis: the end of a dogmai // J. Clin.' MicrobioL 2003. - V. 41. -N. 4*.-P. 1710-1711.

96. Drancourt M., Raoult D. Cost-effectiveness of blood1 agar for isolation of mycobacteria. // PLoS Negl. Trop. Dis. 2007. - V. 1. -N. 2\ e83. - P. 1-5.

97. Eaves F.W., Molloy B.Y, Dimmock C.K, Eaves L.E. A, field evaluation of the polymerase chain reaction procedure for the detection of bovine leukemia virus proviral DNA in cattle. // Vet. Microbiol. 1994. - V. 39. - P. 313-321.

98. Ekerfelt C., Ermerudh J., Jenmalm M.C. Detection of spontaneous and antigen-induced» human' interleukin-4 responses in vitro: comparison of ELISPOT, a novel'ELISA and real-time RT-PCR. // J. Immunol. Meths. 2002. - V. 260. -N. 1-2. - P. 55-67.

99. Elhay M. J., Oettinger T., Andersen P. Delayed-Type Hypersensitivity Responses to ESAT-6 and MPT64 from Mycobacterium tuberculosis in the guinea pig. // Infect. Immun. -1998. V. 66. - N. 7. - P. 3454-3456.

100. Ellner J.J., Hirsch C.S., Whalen C.C. Correlates of protective immunity to M tuberculosis in humans. // Clin. Infect. Dis. 2000. - V. 30 (Suppl 3). - P. 279-282.

101. Ewer K., Millington K.A., Deeks J.J., Alvarez L., Bryant G., Lalvani A. Dynamic antigen-specific T-cell responses after point-source exposure to Mycobacterium tuberculosis. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 2006. - V. 174. - P. 831-839:

102. Fayolle C., Ladant D., Karimova G., Ullmann A., Leclerc C. Therapy» of murine tumors with recombinant Bordetella pertussis adenylate cyclase carrying a cytotoxic T cell epitope. // J. Immunol. 1999. - V. 162. - P: 4157-4162.

103. Ferrand R.A., Bothamley G.H., Whelan A., Dockrell H.M. Interferon-gamma responses to ESAT-6 in tuberculosis patients early into and after anti-tuberculosis treatment. // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2005. - V. 9(9). - P. 1034-1039.

104. Ferrara G., Losi M., D'Amico R., Roversi P., Piro R., Meacci M., Meccugni B., Dori I.M., Andreani A., Bergamini B.M., Mussini C., Rumpianesi F., Fabbri L.M.,

105. Richeldi L. Use in routine clinical practice of two commercial blood tests for diagnosis of infection with Mycobacterium tuberculosis: a prospective study. // Lancet. 2006. - V. 367.-P. 1328-1334.

106. French G.A., Tech R., Chan C.Y., Humphires M.J., Cheung S.W., O'Mahoney G. Diagnosis of tuberculous meningitis by detection of tuberculostearic acid in cerebrospinal fluid. // Lancet. 1987. - V. II. - P. 117-119.

107. Fridman W.H, Tartour E. Cytokines and cell regulation: // Mol. Aspects. Med. -1997.-V. 18(1).-P. 3-90.

108. Gaines H., Andersson L., Biberfeld G. A new method* for measuring lymphoproliferation at the single-cell level in whole blood cultures by flow cytometry. // J. Immunol. Meths. 1996. -V. 195. - P. 63.

109. Gomez M., Johnson S., Gennaro M.L. Identification of secreted proteins of Mycobacterium tuberculosis by a bioinformatic approach. // Infect. Immun. 2000. — V. 68.-N. 4.-P. 2323-2327.

110. Goto M., Noguchi Y., Koyama H., Hira K., Shimbo T., Fukui T. Diagnostic value of adenosine deaminase in tuberculous pleural effusion: a metaanalysis. // Ann. Clin. Biochem. 2003. - V. 40. - P. 374-381.

111. Graves D.C., Diglio C.A., Eerber. J.F. A reverse transcriptase assay for detection of the bovine leukemia virus. // Ami J. Vet: Res. 1977. - V. 38. - P. 1739-1744.

112. Greco S., Girardi E., Masciangelo R., Capoccetta G.B., Saltini C. Adenosine deaminase and interferon gamma measurements for the diagnosis of tuberculous pleurisy: a meta-analysis. // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2003. - V. 7. - P. 777-786.

113. Guermonprez P., Fayolle C., Karimova G., Ullmann A., Leclerc C., Ladant. D. Bordetella pertussis adenylate cyclase toxin: a vehicle to deliver CD8-positive T-cellepitopes into antigen-presenting cells. // Methods Enzymol. 2000. - V. 326. - P. 527542.

114. Guermonprez P., Fayolle C., Rojas M.J., Rescigno M., Ladant D., Leclerc C. In vivo receptor-mediated delivery of a recombinant invasive bacterial toxoid to CDllc+ CD8alpha-CDllb high dendritic cells. // Eur. J. Immunol. 2002. - V. 32. - P. 30713081.

115. Gutiérrez G., Alvarez I., Fondevila N., Politzki R., Lomónaco M., Rodríguez S., Dus Santos M.J., Trono K. Detection of bovine leukemia virus specific antibodies using recombinant p24-ELISA. // Vet. Microbiol. 2009. - V. 137 - N: 3-4. - P. 224-2341

116. Haley B.E. Mercury toxicity: Genetic susceptibility and synergistic effects. // Medical Veritas. 2005. - V. 2. - P. 535-542.

117. Halpern M.D., Kurlander R.J., Pisetsky D.S. Bacterial DNA induces murine interferon-g production by stimulation« of interleukin-12 and tumor necrosis factor-a. // Cell. Immunol. -1996. -V. 167. P. 72-78.

118. Harboe M., Whelan A.O, Alvund G., Nair M.C., Pollock J.M., Hewinson R.G., Wiker FI: G. Generation of antibodies to the signal peptide of the MPT83 lipoprotein of Mycobacterium tuberculosis. H Scand. J. Immunol. 2002. - V. 55. — P. 82-87.

119. Harboe M., Malin A.S., Dockrell H.S., Wiker H.G., Ulvund G., Holm A., Jorgensen M.C., Andersen P. B-cell epitopes and quantification of the ESAT-6 protein of Mycobacterium tuberculosis. II Infect. Immun. 1998. - V. 66. -N. 2. - P. 717—723.

120. He X.Y., Zhuang Y.H., Zhang X.G., Li G.L. Comparative proteome analysis of culture supernatant proteins of Mycobacterium tuberculosis H37Rv and H37Ra. // Microbes. Infect. -2003. -V. 5. -N. 10. P. 851-856.

121. Hendrickson R.C., Douglass J.F., Reynolds L.D.,. McNeill P.D, Garter D.,. Reed S.G, Houghton R.L. Mass spectrometric identification of Mtb81, a novel, serologiealt marker for tuberculosis. // J. Clin. Microbiol. 2000. - V. 38. - P. 2354-2361.

122. Heym B., Zhang Y., Pulet S., Young D., Cole S.T. Characterization of the katG gene encoding a catalase-peroxidase required for the isoniazid susceptibility of Mycobacterium tuberculosis. // J. Bacteriol. 1993. - V.175. - P. 4255-4259:

123. Hewinson R.G., Michell S.L., Russell W.P., McAdam R.A., Jacobs W.R. Jr. Molecular characterization of MPT83: a seroreactive antigen1 of Mycobacterium tuberculosis with homology to MPT70. // Scand. J. Immunol. 1996. - V. 43. - P. 490499.

124. Hoff-Jorgensen R. An international comparison of different'laboratory tests for the diagnosis of bovine leukosis: suggestion for international* standardization // Vet. Immunol, Immunopathol. 1989. - V. 22. - P. 293-297.

125. Horn C., Pescher P., Romain F., Marchai G. Characterization of murine monoclonal antibodies specific for the 45/47 kDa antigen (APA) of Mycobacterium tuberculosis> M. bovis and BGG. // J. Immunol. Meths . 1996. - V. 197. - P. 151-1591

126. Hortin G.L. The MALDI-TOF mass spectrometric view of the plasma proteome and peptidome. // Clin. Chem. 2006. - V. 52. - P. 1223-1237.

127. Huang S.N., Lorenz D., Gerety R.J. Electron and immunoelectron microscopic study on liver tissues of marmosets infected with' hepatitis A virus. // Lab. Investig. -1979.-V. 41.-P. 63-71.

128. HuntD.F., Henderson R.A., Shabnowitz J.,. Sakaguchi K, Michel H., Selilir N. Cox A., Apella E., Engelhard V. H. Characterization of peptides bound to the class I MHC molecule HLA-A2. 1 by mass spectrometry. // Science. 1992. - V. 255. - P. 1261.

129. Hurni W.M., Laufer D., Miller W.J., Ryan J., Watson B. Anti-hepatitis A in the general population and in hepatitis A vaccinees using saliva and serum as diagnostic media. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1993. - V. 694. - P. 289-292.

130. Ichiyama S., Shimokata K., Tsukamura M. The isolation of Mycobacterium avium complex from soil, water and dusts. // Microbiol. Immunol. 1988. - V. 32. - P. 733739.

131. Imaz M.S., Zerbini E. Antibody response to culture filtrate antigens of Mycobacterium tuberculosis during and after treatment of tuberculosis patients. // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. -2000. V. 4(6). - P. 562-569;

132. Jackett'P.S., Bothamley G.H., Batra H.V., Mistry A., Young D.B., Ivanyi J. II Specificity of antibodies to immunodominant' mycobacterial antigens in pulmonary tuberculosis. II J. Clin. Microbiol. 1988. - V. 26. - N. 11. -P. 2313-2318:

133. Jiang J., Shi H.Z., Liang Q.L., QinS.M., Qin X.J. Diagnostic value of interferon-y in tuberculous pleurisy: a metaanalysis. II Chest 2007. - V. 131. - Pi 1133-1141.

134. Jungblut P.R., Müller E.C., Mattow J., Kaufmann' S.H. Proteomics reveals open reading frames in Mycobacterium tuberculosis H37Rv not predicted by genomics. // Infect. Immun. -2001. V 69. - N. 9. - P. 5905-5907. ■

135. Kadival G. V., Telesforo B. M., Mazarelo O S., Chaparas S. D. Sensitivity and specificity of enzyme-linked immunosorbent assay in the detection of antigen in tuberculous meningitis cerebrospinal fluids. // J. Clin. Microbiol. 1986. - P. 901-904.

136. Kaech S.M., Hemby S., Kersh E., Ahmed R. Molecular and functional profiling of memory CD8 T cell differentiation. // Cell. 2002. - V. 111. - P. 837.

137. Katial R. K., Sachanandani D., Pinney G., LiebermanM. M.' Cytokine production, in cell culture by peripheral1 bloodi mononuclear cells from immunocompetent'hosts. // Clin. Diagrn Labor. Immunol. 1998. - V. 5. -N. 1. - P. 78-81.

138. Katial R. K., Hershey J., Purohit-Seth T., Belisle J. T., Brennan P." J., Spencer J. S.,

139. Engler.R'. Ji Mi Cell-mediated.immune response to tuberculosis antigens: comparison of skin testing and measurement of in vitro* gamma interferon production in whole-blood, culture: // Clin.Diagn. Labor. Immunol. 2001. - V. 8. -N. 2: - P. 339^345.

140. Kintevall K A., Ballagi-Pordany A., Naslund K, Belak S. Bovine lcukemia virus: rapid detection of proviral DNA by nested PCR in blood and organs of experimentally infected calves. // Vet. Microbiol. 1994. - V. 42. - P. 191-201.

141. Kobashi Y., Mouri K., Yagi S., Obase Y., Fukuda M., Miyashita N., et al. Usefulness of the QuantiFERON TB-2G test for the differential diagnosis of pulmonary tuberculosis. // Intern. Med. 2008. - V. 47. - P. 237-243.

142. Kochi A., Vareldzis B., Styblo K. Multi-drug-resistant tuberculosis and its control: // Res. Microbiol. 1993. - V. 144. - P. 104-110.

143. Krieg A. M. CPG motifes in bacterial DNA and their immune effects. // Annu. Rev. Immunol. 2002. - V. 20. - P. 709- 760.

144. Krieg A. M. The role of CpG motifs in innate immunity. // Gurr. Opin. Immunol: -2000.-V.12.-P. 35-43.

145. Kubis P., Rulka J:, Kur J., Dabrowski S. PCR in, the. diagnosis of bovine leukaemia virus infection. // Bull. Vet. Inst. Pulawy. 1996. - V. 40. - P: 85- 89:

146. Kuckleburg C. J., Chase C. C., Nelson E.A., Marras S.A., Dämmen M: A.,

147. Christopher-Hennings J'. Detection of bovine leukemia virus in, blood and milk by nestediand real-time polymerase chain reactions. // J. Vet. Diagn. Invest. 2003. - V. 15. - N 1. -P. 72-76.

148. Kutlu A., Bozkanat E., Cift<?i F., Bozkurt B., Gorur R., Ardi? N., Taskapan O. Effect of active tuberculosis on skin prick allergy tests and serum IgE levels. // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol.-2008. V. 18. -N2. -P. 113-118.

149. Laidlaw M. (1989) in Practical Medical Microbiology, eds. Colle, J. G., Duguid, J. P., Fraser, A. G. & Marimon, B, P. (Churchill Livingstone, New York), pp. 399-416.

150. Lalvani A., Brookes R., Hambleton S., Britton W. J:, Hill A. V., McMichaeLA. J. Rapid effector function in CD8+ memory T cells. // J. Exp: Med. 1997a. - V. 186. - P. 859-865.

151. Lalvani A. Diagnosing tuberculosis infection in the 21st century: new tools to tackle an old enemy. // Chest. 2007. - V. 131. - N 6. - P. 1898-1906.

152. Lau DT, Hewlett AT.Screening for hepatitis A and B antibodies in patients with chronic liver disease. II Am. J. Med. 2005. - V. 118 Suppl 10A. - P. :28S-33S.

153. Lee J.Y., Choi H.J, Park I.N., Hong S.B., Oh Y.M., Lim C.M., et al. Comparison of two commercial interferon-gamma assays for diagnosing Mycobacterium tuberculosis infection. II Eur. Respir. J. 2006. - V. 28. - P. 24-30.

154. Lemus D., Martin A., Montoro E., Portaels F., Palomino J.C. Rapid alternative methods for detection of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis. // J. Antimicrob. Chemother. -2004. -V. 54. -N 1. P. 130-133.

155. Leung C.C., Yam W.C., Yew W.W., Ho P.L., Tam C.M., Law W.S., Wong M.Y., Leung M., Tsui D. Comparison of T-Spot.TB and tuberculin skin test among silicotic patients. // Eur. Respir J. 2007. - Oct. 24.

156. Lewinsohn D.M:, Briden A.L., Reed S.G., Grabstein K.H., Alderson' M.R. Mycobacterium tuberculosis-reactive* CD8+ T lymphocytes: the relative contribution of classical versus nonclassical HLA restriction. // J. Immunol. 2000. - V. 165. - P. 925930.

157. Licursi M., Inoshima Y., Wu D., Yokoyama T., Gonzales T., Sentsui H. Genetic heterogeneity bovine leukemia virus genotypes and its relation to humoral responses in hosts. // Virus Research. 2002. - V. 86 - P. 101- lilO.

158. Lim R.L., Tan L.K., Lau W.F., Ming M.C., Dunn R„ Too H.P., Chan L. Cloning and Expression of Immunoreactive Antigens from Mycobacterium tuberculosis. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2000. - V. 7. - N. 4. - P. 600-606.

159. Litwin C.M. // In vitro gamma interferon tests for the detection' of tuberculosis infection: // J: Immunotoxicol: 2007. - V. 4: -N. 3. - P. 219-224.

160. Llames L., Goyache J., Domenech A., de Avila A., Suarez G., Gomez-Lucia E. Rapid» detection of specific polyclonal and monoclonal antibodies, against bovine leukemia,virus. // J. Virol. Meth. 1999. -V. 82. - P. 129-136.

161. Lorenz H.-M., Hieronymus T., Grunke M., Manger B., Kalden J.R. Differential role for IL-2 and IL-15 in the inhibition of apoptosis in short term activated human lymphocytes. // Scand. J. Immunol. 1997. - V. 45. - P. 660.

162. Luca Richeldi An update on the diagnosis of tuberculosis infection. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 2006. - V. 174. - P. 736-742.

163. Lyashchenkof K., Colangeli R'., Houde M., A. Jahdali H., Menzies D., Gennaro M.L. Heterogenous antibody responses in tuberculosis. // Infect. Immun. 1998. - V. 66. -P. 3936-3940.

164. Lyashenko K.P., Pollock J.M., Colangeli R., Gennaro M.L. Diversity of antigen recognition by serum antibodies in experimental bovine tuberculosis. // Infect. Immun. -1998.-V. 66. — N. 11.-P. 5344-5349.

165. Mackiewicz V., Dussaix E., Le Petitcorps M.-F., Roque-Afonso» A.M. Detection of hepatitis A virus RNA in saliva. // J. Clin. Microbiol. 2004. - V.42. - P. 4329-4331.

166. Ma Y., Seiler K.P., Tai K.-F., Yang L., Woods M. Outer surface lipoproteins of Borrelia burgdorferi stimulate nitric oxide production by the cytokine-inducible pathway. // Infect. Immun. 1994. - V. 62. - P. 3663-3671.

167. Mahairas G.G., Sabo P.J., Hickey M.J., Singh D.C., Stover C.K. Molecular analysis of genetic differences between Mycobacterium bovis BCG and virulent M. bovis. //J. Bacteriol. 1996. - V. 178.-N 5.-P. 1274-1282.

168. Manca C., Lyashchenko K., Colangeli R., Gennaro M. L. MTC28; a novel 28-kilodalton proline-rich secreted antigen specific for the Mycobacterium tuberculosis complex. // Infect. Immun. 1997. - V. 65. - P. 4951- 4957.

169. Mannen T., Yamaguchi S., Honda J., Sugimoto S., Kitayama A., Nagamune T. Observation of charge state and- conformational change in immobilized protein using surface plasmon resonance sensor. // Anal Biochem. 2001. - V. 15. - N. 293(2). - P. 185-193.

170. Mashishi T., Gray C.M. The ELISPOT assay: an easily transferable method for measuring cellular responses and identifying T cell epitopes. // Clin. Chem. Lab. Med. -2002.-V. 40.-P. 903-910.

171. Miguel G., Madariaga M.D., Ziba Jalali M.D., Susan Swindells Clinical utility of interferon gamma assay in the diagnosis of tuberculosis: ELISA-IGRA in Patients with Immune dysfunction. // J. Am. Board. Fam. Med. 2007. - V. 20(6). - P. 540-547.

172. Miller J.M., van der Maaten M.J. Serogical detection of bovine leukemia virus infection. // Vet. Microbiol 1976. - V. 1. - P. 195-202.

173. Miller J.M., Van Der Maaten M.J. Use of glycoprotein antigen in the immunodiffusion test for bovine leukemia virus antibodies. // Eur. J. Cancer. — 1977. -13.-P. 1369-1375.

174. Miyahira Y., Murata K., Rodriguez D., Rodriguez J: R., Esteban M., Rodrigues M. Mi, Zavala F. Quantification* of antigen specific CD8+ T cells using an ELISPOT assay. // J. Immunol. Meths. 1995. - V. 181. - P. 45-54.

175. Molloy J., Walker P J., Chris Baldock F., Rodwell'B. J., Cowley J. A. An enzyme-linked immunosorbent assay for detection of bovine leukaemia virus p24 antibody in cattle. // J. Virol Meths. 1990. - V. 28. - N 1. - P. 47-57.

176. Mukamolova G.V., Kaprelyants A.S., Young D.I., Young M., Kell D.B; A bacterial cytokine. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998: - V. 95. - P. 8916-8921.

177. Mullis K., Faloona F., Scharf S., Saiki R., Horn G., Erlich H. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction. // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1986. -V. 51. - P. 263-273.

178. Munk M.E., Arend S.M., Brock I., Ottenhoff T.H., Andersen P. Use of ESAT-6 and CFP-10 antigens for diagnosis of extrapulmonary tuberculosis. // J. Infect. Dis. -2001.-V. 183.-P. 175-176.

179. Murakami K., Kobayashi S., Konishi M., Kameyama Ken-ichiro, Yamamoto T. Tsutsui T. The recent prevalence of bovine leukemia virus (BLV) infection among Japanese cattle. // Veterinary Microbiology. 2011. - V. 148. - N. 1. - P. 84-88

180. Murali-Krishna K., Altman J.D., Suresh M., Sourdive D. J., Zajac A. J., Miller J. D.s Slansky J., Ahmed R. Counting antigen-specific CD8 T cells: a réévaluation of bystander activation during viral infection. // Immunity. 1998: - V. 8. T PI 177-187.

181. Nagai S., Wiker H.G., Harboe M., Kinomoto M. Isolation and partial! characterization' of major protein? antigens in the culture fluid of Mycobacterium tuberculosis. II Infect. Immun. 1991. - V. 59. - N 1. - P. 372-382.

182. Naif H.M., Brandon R.R., Daniel C.W., Lavin M.F. Bovine leukaemia proviral DNA detection in cattle using the polymerase chain reaction. // Vet. Microbiol. 1990. -V. 25.-P. 117-129.

183. Nainan O.V., Xia G., Vaughan G., Margolis H.S. Diagnosis of hepatitis A virus infection: a molecular approach. II Clin: Microbiol: Rev. 2006. - V. 19. - P. 63-79.

184. Nakamura R.M., Einck L., Velmonte M.A., Kawajiri K., Ang C.F., Delasllagas C.E., Nacy C.A. Detection of active tuberculosis by an MPB64 transdermal'patch: a field-study. // Scandi J. Infect. Dis. 200F. - V. 33. -N. 6. - P. 405^*07.

185. Narain J. P., Raviglione M. C., Kochi A. HIV-associated tuberculosis in developing countries: epidemiology and strategies for prevention. // Tubercle. Lung. Dis. 1992. -V. 73.-P. 311-321.

186. Neonakis I.K., Gitti Z., Krambovitis E., Spandidos D.A. Molecular diagnostic tools in mycobacteriology. // J. Microbiol. Meths. 2008. - V. 75. - P. 1-11.

187. Nepom G. T., Lewinsohn D. M. et al. Characterization of a Mycobacterium tuberculosis peptide that is recognized by human CD4+ and CD8+ T cells in the context of multiple HLA alleles. // J. Immunol. 2004. - V. 173(3). - P.' 1966- 1977.

188. News M.D. ESAT-6 in ELISpot-assay tuberculosis. New assay more accurately identification individuals at high risk for tuberculosis infection. // Practice Medicine. -2001.-V. 22.

189. Nguyen V.K., Maes R.F. Evaluation» of am enzyme-linked immunosorbent' assay for detection! of antibodies to bovine leukemia'virusi in serum and milk. // Clin: Microbiol. -1993.-V. 31.-P.1979 — 981.

190. NollA., Autenrieth. I.BI Immunity against Yersinia enterocolitica by vaccination with Yersinia HSP60 immunostimulating complexes or Yersinia'HSP60 plus interleukin-12. // Infect. Immun. - 1996. - V. 64. - P. 2955-2961.

191. Ogg G.S., Jin X., Bonhoeffer S. Quantitation* of HIV-1-specific cytotoxic T lymphocytes and plasma load of viral RNA. // Science. 1998. - V. 279. — P. 21032106.

192. Olsen A.W., van Pinxteren L.A. H., Okkels L.M., Rasmussen P.B., Andersen Pi Protection of mice with a tuberculosis subunit vaccine based on a fusion protein of antigen 85B and ESAT-6. // Infect. Immun. 2001. - V. 69.-N. 5. - P. 2773-2778.

193. Pai M., Kalantri S., Dheda K. New tools and emerging technologies for the diagnosis of tuberculosis: Part II. Active tuberculosis and drug resistance: // Expert Rev. Mol. Diagn. -2006. V. 6. -N 3.-P. 423-432.

194. Pai Mi, Dheda K., Cunningham Ji, Scano F., O'Brien R. T-celli assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection: moving the research agenda forward. // Lancet Infect. Dis. — 2007^ — V. 7. — Pi 428M38.

195. Piessens W.F., Nardell' E.A. Pathogenesis of tuberculosis. In: Hershfield E., Delker M. Eds. Tuberculosis. Lung Biology Series. New York. Marcel Dekker Inc. -2000.-P. 241-260.

196. Pina-Vaz C., Costa-de-Oliveira S., Rodrigues A.G. Safe susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by flow cytometry with the fluorescent nucleic acid stain SYTO 16. // J. Med. Microbiol. 2005. - V. 54. - N 1. - P. 77-81.

197. Pitarque S., Larrouy-Maumus G., Payre B., Jackson M., Puzo G., Nigou J. The immunomodulatory lipoglycans, lipoarabinomannan and' lipomannan, are exposed at the mycobacterial cell surface. // Tuberculosis. 2008. - P. 1-6.

198. Platzer C., Siakkou H., Kraus G., Grobel C., Rosenthal S. Use of monoclonal antibody against major internal protein p24 of bovine leukemia virus in capture ELISA. // Arch. Exper. Vet. Med. 1990. - V. 44. - P. 917-923.

199. Pollock J.M., Andersen P. The potential of the ESAT-6 antigen secreted by virulent mycobacteria for specific diagnosis of tuberculosis. // J. Infect. Dis. 1997. - V. 175.-P. 1251- 1254.

200. Pollock J.M., Andersen. P. Predominant recognition of the ESAT-6 protein in the first phase of infection with Mycobacterium bovis in cattle. // Infect. Immun. 1997. - V. 5.-P. 2587-2592.

201. Pottumarthy S., Wells V.C., Morris A.J. Comparison of seven tests for serological diagnosis of tuberculosis. // J. Clin. Microbiol. 2000. - V. 38. - P. 2227-2231.

202. Purcell* A.W/., Gorman J.J. Immunoproteomics. Mass spectrometry-based methods to study the targets of the immune response. // Mol.Cell: Proteomics. 2004. - V. 3. - P.* 193-208:

203. Pramoolsinsap C. Acute hepatitis A superinfection* in HBV carriers, or chronic liver disease related to HBV or HCV. //Ann. Trop. Med. Parasitol. 1999. - V.93 (7). -P.1745-751.

204. Rattam A., Gupta S. K., Singh S., et all Detection of antigens of mycobacterium tuberculosis in patients of infertility by monoclonal antibody based sandwiched enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). II Tuber Lung Dis 1993. - V. 74. - P. 200-203.

205. Raz E. Immunostimulatory DNA sequences. // Springer-Verlag. Heidelberg. Germany. 2000.

206. Reisner B.S., Gatson A.M., Woods G.L. Evaluation of mycobacteria) growth indicator, tubes for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to isoniazid andf rifampin. // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 1995. - V. 22. - N. 4. - PI 325-3291

207. Reuter H., Burgess L., van Vuuren W., Doubell A. Diagnosing tuberculous pericarditis. // Quarterly journal of medicine (QJM). 2006. - V. 99. - №. 12. - P.827-839.

208. Rezwan M., Laneelle M.A., Sander P., Daffe M. Breaking down the wall: fractionation of mycobacteria. // J. Microbiol. Meth. 2007. - V. 68. - P. 32-39.

209. Riantawan P., Chaowalit Pi, Wongsangiem M., Rojanaraweewong P. Diagnostic value of pleural fluid adenosine deaminase in tuberculous pleuritis with reference to HIV coinfection and a Bayesian analysis. // Chest. 1999. - V. 116. - P. 97-103.

210. Ribeiro S., Dooley K., Hackman J., Loredo C., Efron A., Chaisson R.E., Conde M.B., Boechat N., Dorman S.E. T-SPOT. TB responses during treatment of pulmonary tuberculosis. // BMC Infectious Diseases. 2009. - V. 9. - P. 23-28.

211. Richeldi L. An update on the diagnosis of tuberculosis infection. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2006. - V. 174. - N. 7. - P. 736-742.

212. Richeldi L., Ewer K., Losi M., Bergamini B. M., Roversi P., Deeks J., Fabbri L.M., Lalvani A. T cell-based tracking of multidrug resistant tuberculosis infection after brief exposure. // Am J Respir Grit Care Med. 2004. - V. 170(3). - P. 288-295.

213. Richeldi L, Ewer K, Losi M, Hansell DM, Roversi P, Fabbri LM, Lalvani A. Early diagnosis of subclinical multidrug-resistant tuberculosis. // Ann. Intern. Med. 2004. -V. 140(9).-P. 709-713.

214. Richeldi L.s Losi M., D'Amico R., Luppi M., Ferrari A., Mussini C., Codeluppi M., Cocchi S., Prati F., Paci V., Meacci M., Meccugni B., Rumpianesi F., Roversi P.,

215. Cerri S., Luppi F., Ferrara G., Latorre I., Gerunda G. E., Torelli G., Esposito R., Fabbri L.M. Performance of tests for latent tuberculosis in different groups of immunocompromised patients. // Chest. 2009. - V. 136. - P. 198-204.

216. Rininsland F.H., Helms T., Asaad R.J., Boehm B.O., Tary-Lehmann M. Granzyme B ELISPOT assay for ex vivo measurements of T cell immunity. // J Immunol Meths. -2000 V. 240(1-2). - P. 143-55.

217. Roche P.W1., Feng' G.G., Britton« W.J. Human T-cell epitopes on the Mycobacterium tuberculosis secreted protein MPT64. // Scand: J. Immunol. 1996; - V. 43.-N6.-P. 662-670.

218. Rhodes S.G., Gavier-Widen D., Buddle B.M., Whelan A.O., Singh M., Hewinson R.G., Vordermeier HIM; Antigen specificity in experimental, bovine tuberculosis. // Infect. Immun. 2000: - V. 68. - N. 5. - P: 2573-2578:

219. Romani.L., Puccetti P.', Bistoni F. Interleukin-12 in infectious diseases. // Clinical. Microbiol. Rev. 1997. - V. 10(4). - P. 611-636.

220. Romani N., Gruner S., Brang D., Kampgen E., Lenz A., Trockenbacher B., Konwalinka G., Fritsch P.O., Steinman.R.M., Schuler G. 1994. Proliferating dendritic cell progenitors in human blood. // J. Exp. Med. 1994. - V. 180. - P. 83-93.

221. Rothel J., Andersen P. Diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection: is the demise of the Mantoux test imminent? // Expert Rev Anti Infect Ther. 2005. - V. 3.-N. 6.-P. 981-993.

222. Sada E., Ruiz-Palacios G.M>.*, Lopezvidal Y., Ponce De Leon S. Detection of mycobacterial antigens in CSF of patients with tuberculous meningitis by EEISA. // Lancet 1984.-P. 651-652.

223. Sánchez F.O, Rodriguez J.I., Agudelo G., Garcia L.F. Immune responsiveness and lymphokine production in patients with tuberculosis and healthy controls. // Infect. Immun. 1994. - V. 62. - P. 5673-5678.

224. Sanchez G., Populaire S., Butot S., Putallaz T., Joosten H. Detection and differentiation of human hepatitis A strains by commercial quantitative real-time RT-PCR tests. II J. Virol. Methods. 2006. - V. 132. - P. 160-165.

225. Scarpellini P., Tasca S., Galli L., Beretta A., Lazzarin A., Fortis G. Selected pool of peptides from ESAT-6 and CFP-10 proteins for detection of Mycobacterium tuberculosis infection. // J1 Clin: Microbiol., 2004: - V. 42(8)1 - P: 3469-3474.

226. Schluger N.W., Rom W.N. The host immune response to tuberculosis. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1998. - V. 157. - P. 679-691.

227. Senol G., Erer O. F., Yalcin Y. A., Coskun M., Gunduz A.T., Bicmen C., Ertas M., Ozkan S.A. Humoral immune response against 38-kDa and 16-kDa mycobacterial antigens in tuberculosis. // Eur. Respir. J. 2007. - V. 29. - P. 143-148.

228. Shafer-Weaver K., Sayers T., Strobl S., Derby E., Ulderich T., Baseler M., Malyguine A. The Granzyme B EEISPOT assay: an*alternative to the 51Cr-release.assay for monitoring cell-mediated cytotoxicity. // J. Transit Med. 2003; - V. 1. - P. 1-14

229. Sharma A., Saha A., Bhattacharjee S., Majumdar S., Das Gupta S.K. Specific and randomly derived immunoactive peptide mimotopes of mycobacterial antigens. // Clin. Vaccine Immunol.- 2006. -V. 13.-№. 10.-P. 1143-1154.

230. Shirota H., Sano K., Hirasawa N. Terui T., Ohuchi K., Hattori T., Tamura G. B cells capturing antigen conjugated with GpG Oligodeoxynucleotides induce Thl cells by elaborating IL-12. // J. Immunol. 2002. - V. 169. - P. 787-794.

231. Shresta S., Pham C.T.M., Thomas D:A., Graubert T.A. Ley T. How do cytotoxic lymphocytes kill their targets? // Curr. Opin. Immunol. 1998. - V. 10. - P. 581.

232. Silva V.M.C., Kanaujia G., Gennaro M.L., Menzies D. Factors associated with humoral response to ESAT-6, 38 kDa and 14 kDa in patients with a spectrum of tuberculosis. // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2003. - V. 7. - P. 478- 484.

233. Skeen M.J., Miller M.A., Shinnick T.M., Ziegler H.K. Regulation of murine macrophage IL-12 production. Activation of macrophages in vivo, restimulation in vitro, and modulation by other cytokines. // J. Immunol. 1996. - V. 156. - P.* 1196-1206.

234. Sopp P, Kwong L.S, Howard C.J. Cross-reactivity with bovine cells of monoclonal antibodies, submitted to the 6th International Workshop on Human Leukocyte Differentiation Antigens. // Vet. Immunol. Immunopathol. 2001. - V. 78. -P. 197-206.

235. Sorensen A.L., Nagai S., Houen G., Andersen P., Andersen A.B. Purification and characterization of a low-molecular-mass T-cell antigen secreted" by Mycobacterium tuberculosis. // Infect. Immun. 1995. - V. 63. -N 5. - P. 1710-1717.

236. Soysal A., Torun T., Efe S., Gencer H., Tahaoglu K., Bakir M. Evaluation of cutoff values of interferon-gamma-based assays in the diagnosis of M. tuberculosis infection. // Int. J. Tuberc. Lung: Dis. 2008. - V. 12. - P. 50-56.

237. Srivastava N., Manaktala. U., Baveja C.P. Role of ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) in genital tuberculosis. // Intern. J. Gynecol. Obstetrics. 1997. -V. 57. -N. 2.-P. 205-206.

238. Stapleton J.T. Host Immune Response to Hepatitis A Virus. // J. Infect. Diseases. -1995.-V. 171.-P. 9-14.

239. Steingart K, Ramsay A, Pai M. Optimizing sputum smear microscopy for the diagnosis of pulmonary tuberculosis. // Exp Rev Anti Infect Ther. 2007. - V. 5(3). - P. 327-331.

240. Streeton. J.A, Desem N., Jones S.L. Sensitivity and specificity of a gamma interferon blood test for tuberculosis infection. // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 1998. -V. 2. -P. 443-449.

241. Supelco Bulletin 903'. ProClin® 300 Preservative for» diagnostic reagents. USA . Sigma-Aldrich. P. 1-8.

242. Swaminathan S., Umadevi P., Shantha S., Radhakrishnan A., Datta 0. Serodiagnosis of tuberculosis in children using two ELISA kits. // Indian J Pediatr. -1999:-V. 66.-P. 837-884.

243. Sznol M., Marineóla F.M. Principles of immune monitoring in cancer vaccine trials. S.A. Rosenberg, ed. Principles and Practice of the Biologic Therapy of Cancer 3rd Ed.617. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia. 2000.

244. Taha R.A., Kotsimbos J.C., Song Y.L., Menzies D., Hamid Q. IFN-gamma and IL-12 are increased in active compared with inactive tuberculosis. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1997. - V. 155. - P. 1135-1139.

245. Tobias HJ., Schafer M.P., Pitesky M., Fergenson D.P., Horn J., Frank M., Gard E.E. Bioaerosol mass spectrometry for rapid detection of individual airborne

246. Mycobacterium tuberculosis H37Ra particles. // Appl. Environ. Microbiol. 2005. - V. 71.-P. 6086-6095.

247. Tortoli E., Cichero P., Piersimoni C., Simonetti M.T., Gesu G., Nista D. Use of BACTEC MGIT 960 for recovery of mycobacteria from».clinical specimens: multicenter study. //J. Clin. Microbiol. 1999. -V. 37. -Nil. -P. 3578-35821 '

248. Tost J., Gut I.G. Genotyping single nucleotide polymorphisms by MALDI massispectrometry in clinical applications. // Clin. Biochem. 2005. - V. 38. - P. 335-350»

249. Trajman A'., Pai Mi, Dheda K., van Zyl Smit R., Zwerling A.A., Joshi R., Kalantri 1 S., Daleye P., Menzies D. Novel tests for diagnosing tuberculous- pleural effusion: what works and what does not? // Eur. Respir. J: 2008. - V. 31. - Pi 10981106.

250. Trinchieri G., Scott: P. The role of interleukin' 12 in the immune response, disease and therapy. // Immunol. Today. 1994. - V. 15. - P. 460^163.

251. Van Pinxteren L.A.H., Ravn P:, Agger E.M., Pollock J., Anderson P: Diagnosis of tuberculosis based on the two specific antigens ESAT-6 and CFP-10. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2000. - V. 7. - P. 155-160.

252. Veenstra H., Crous I., Brahmbhatt S., Lukey P., Beyers N., van Helden P.D.,. Walzl G. Changes in the kinetics of intracellular IFN-gamma production in TB patients during treatment. // Clin. Immunol. 2007. - V. 124: - №. 3. - P. 336-344.

253. Vento S., Garofano T., Renzini C. et al. Fulminant hepatitis associated with hepatitis A virus superinfection in patients with chronic hepatitis C. // N. Engl. J. Med. -1998. V. 338 (5). - P. 286-290.

254. Verbon A., Weverling G.J., Kuijper S., Speelman P., Jansen H.M., Kolk A.H.J. Evaluation of different tests for the serodiagnosis of tuberculosis and the use of likelihood ratios in serology. II Am. Rev. Respir. Dis. 1993. - V. 148. - P. 378-384.

255. Verthelyi D., Ishii K. J., Gursel M., Takeshita F., Klinman D.M. Human peripheral blood cells differentially recognize and respond to two distinct CpG motifs. // J. Immunol. 2001. - V. 166. - P. 2372-2377.

256. Vignali DA. Multiplexed particle-based flow cytometric assays. Ill Immunol Meths. 2000: - V. 243(1-2). P. 243-255.

257. Villegas M.V., Labroda L.A., Seravia N.G., Evoluation of polymerase chain* reaction, adenosine, deaminase and-interferon-gamma in pleural fluid, for the diferantial. diagnosis of pleural' tub erculosis. // Chest. 2000. - V. 118(5). - P. 1355-1364.

258. Vordermeier H.M., Whelan A., Cockle P.J:, Farrant L., Palmer N., Hewinson R.G. Use of synthetic peptides derived from the antigens ESAT-6 and CFP-10 for differential diagnosis of bovine tuberculosis in cattle. // CVI. 2001. - V.8. - P: 571- 578.

259. Wagner H. Immunology of bacterial CpG-DNA. II Springer-Verlag- Heidelberg. Germany. 2000.

260. Wallis R.S., Aide S.L., Havlir D.V., Amir-Tahmasseb M;H., Daniel T.M., Ellner J:J. Identification' of antigens of Mycobacterium tuberculosis using human monoclonal antibodies. IIJ. Clin. Invest. 1989. -V. 84. - N. 1. - P. 214-219.

261. Wang B.L., Xu Y., Wu C.Q., Xu Y.M., Wang H.H. Cloning, expression, and refolding of a secretory protein ESAT-6 of Mycobacterium tuberculosis. II Protein Expr. Purif. -2005. V. 39. -N. 2. - P. 184-188.

262. Wang A., Clapper J., Guderian J.A., Foy T.M., Fanger G.R., Retter M.W., Skeiky Y.A. A novel method for increasing the expression level of recombinant proteins. // Protein Expr. Purif. 2003. - V. 30. -N. 1. - P. 124-133.

263. Wang C.H., Tschen S.Y., Heinricy U., Weber M., Flehmig B. Immune response to hepatitis A virus capsid proteins after infection. // J. Clin. Microbiol. 1996. - V. 34. - P. 707-713.

264. Weldingh K., Dodson P., Quan S., Lewis A.P., Thomas P.J., Duncan K., McAdam R.A. Comparison of the proteome of Mycobacterium tuberculosis strain H37Rv with clinical isolate CDC 1551. // Microbiology. 2000. - V. 146. - N. 12. - P. 3205-3216.

265. Weinberg A., Zhang L., Brown D., Erice A., Polsky B., Hirsch M.S., Owens S., Lamb K. Viability and functional activity of cryopreserved mononuclear cells. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2000. - V 7. - P: 714- 716.

266. West N.P., Wozniak T.M., Valenzuela J., Feng C.G., Sher A., Ribeiro J.M., Britton W.J. Immunological diversity within a family of cutinase-like proteins of Mycobacterium tuberculosis. //Vaccine. -2008. -V. 26. -N. 31. -P. 3853-3859.

267. Wilkins E.G.L., Ivanyi J; Potential! value of serology for diagnosis of extrapulmonary tuberculosis. // Lancet. 1990. - V. 336. - P.' 641-644.

268. Wittmann; 1993 In: W. Wittmann; Editors* Leukosen der Wiederkäuer, Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1993. P. 173-180.

269. Williams-Bouyer N., Yorke R., Lee H.I., Woods G.L. Comparison of the BACTEC MGIT 960 and ESP culture system II for growth and detection ofmycobacteria. // Diagnostic microbiology and infectious disease. 2000. - V. 38. - N. 11.-P. 4167-4170.

270. Wongtim S. Interferon gamma for diagnosing tuberculous effusions. // Thorax. -1999. - V. 54(10). - P. 921-924.

271. Wu X., Yang Y., Zhang J., Li B., Liang Y., Zhang C., Dong M., Cheng HI, He J. Humoral immune responses against the Mycobacterium tuberculosis 38-kilodalton, MTB48, and CFP-10/ESAT-6»antigens in tuberculosis. // CVI. 2010. -V. 17. -N. 3. -P: 372-375.

272. Wu X, Yang Y, Zhang J, Li B; Liang Y, Zhang C, Dong' M. Comparison of antibody responses to seventeen antigens from * Mycobacterium tuberculosis. // Clin. Chim. Acta. 2010 - V. 9. -N. 411(19-20). - P. 1520-1528.

273. Wu.M! C, Shanks R. D., Lewin H. A. Milk and fat production in dairly cattle influenced by advanced subclinical bovine leukemia virus infection. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1989. - V. 86. - P. 993- 996.

274. Yamada G., Shijubo N., Shigehara K., Okamura H., Kurimoto M., Abe S. Increased levels of circulating Interleukin-18 in patients with advanced tuberculosis Am. II J. Respir. Crit. Care Med. 2000. - V. 161. - №. 6. - P. 1786-1789.

275. Yamaguchi S., Mannen T., Nagamune T. Evaluation of surface hydrophobicity of immobilized protein with a surface plasmon resonance sensor. // Biotechnol. Lett. -2004.-V. 26(13).-P. 1081-1086.

276. Yang Z., Barnes P.F., Chaves F., Eisenach K.D., Weis S.E., Bates J.H., Cave MID. Diversity of DNA fingerprints of Mycobacterium tuberculosis isolates in the United States. //J. Clin. Microbiol. 1998. -V. 36. -N. 4. - P. 1003-1007.

277. Yang J., Lemas V. M., Flinn I. W., Krone C., Ambinder R. F. Application of the ELISPOT assay to the characterization of CD8+ responses to Epstein-Barr virus antigens. //Blood.-2000.-V. 95.-N. l.-P. 241-248.

278. Yen-Peng Ho, Reddy P.M. Identification of pathogens by mass spectrometry. // Clin. Ghem. 2010. - V. 56. - P. 525- 536.

279. Yu.D., Kandimalla E.R., Zhao Q., Cong Y., Agrawal S. Immunostimulatory properties of phosphorothioate CpG DNA containing both 3-5 and 2'-5'-internucleotide linkages. // Nucleic Acids Research. - 2002. - V. 30. - N. 7. - P. 1613-1619.

280. Yuce A., Yiicesoy M., Gen? S., Sayan M., U9an E.S. Serodiagnosis of tuberculosis by enzyme immunoassay using A60 antigen. // Clin. Microbiol. Infect. -2001. V. 7. - №. 7. - P. 372-376.

281. Zhang M., Gately M.K., Wang E„ Gong J., WolfS. F., Lu S., Modlin R. L., Barnes P.F. Interleukin 12 at the site of disease in tuberculosis. // J. Clin. Invest. 1994. - V. 93. -P. 1733-1739.

282. Zhong W., Reche P.A., Lai C.C., Reinhold B., Reinherz E.L. Geno№e"wlde characterization of a viral cytotoxic T lymphocyte epitope repertoire. // J. Biol- Chem. 2003. -V. 278. -N. 46. P. 45135-45144.