Биосинтез, выделение, свойства и применение бактериальной протеазы ЕСР32, ограниченно расщепляющей актин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Морозова, Алевтина Владиславовна

• Морозова, Алевтина Владиславовна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Морозова, Алевтина Владиславовна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Протеиназы микроорганизмов

1.1.1. Номенклатура и классификация протеолитических ферментов

1.1.2. Ингибиторный анализ в исследовании протеиназ

1.1.3. Отдельные представители. Сериновые протеиназы. Цистеиновые протеиназы. Аспарагиновые протеиназы. Металлопротеиназы. Протеолиз в Escherichia coli.

1.2. Бактериальная протеаза ЕСР32 как высокоспецифичный инструмент исследования белков

1.2.1. Ограниченный протеолиз как метод исследования структуры и функции белков

1.2.2. Актин и его протеолиз

1.2.3. Протеолиз актина бактериальной протеазой ЕСР

1.2.4. Специфические воздействия на актин в живой клетке

1.3. Возможные функции протеазы ЕСР

1.3.1. Протеазы в бактериальной агрессии

1.3.2. Возможные субстраты ЕСР32 в организме продуцента

1.4. Биосинтез и выделение бактериальных протеиназ

1.4.1. Влияние условий культивирования на рост бактерий и синтез нейтральных протеаз

Влияние состава питательных сред. Влияние рН и солености среды. Влияние аэрации и перемешивания. Влияние ценообразования и пеногашения

1.4.2. Принципы сравнения систем выращивания микроорганизмов

1.4.3. Стратегия выделения и очистки протеиназ

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Исследование условий биосинтеза протеазы ЕСР32 и масштабирование процесса ферментации продуцента

3.1.1. Состав питательной среды для выращивания продуцента протеазы

3.1.2. Аэрация и перемешивание

3.1.3. Пеногашение

3.1.4. Ферментация в АНКУМе

3.1.5. Ферментация в аппарате АВ

3.1.6. Двухфазное культивирование продуцента. Чувствительность к антибиотикам

3.2. Очистка фермента и получение антител

3.3. Ингибирование и реактивация протеазы ЕСР

3.4. Локализация пептидных связей, гидролизуемых протеазой ЕСР32, в первичной структуре субстратов

3.5.Субстраты протеазы ЕСР32 из экстракта продуцента Протеолиз белка теплового шока БпаК.

3.6. Действие внутриклеточного введения протеазы ЕСР32 на актиновый цитоскелет

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биосинтез, выделение, свойства и применение бактериальной протеазы ЕСР32, ограниченно расщепляющей актин»

Актуальность работы. Постоянно возрастающий в последние годы интерес к протеолитическим ферментам обусловлен их активно расширяющимся медико-технологическим применением, участием в разнообразных формах патогенеза, ролью, которую они играют в процессах жизнедеятельности продуцентов, и использованием в тонких исследованиях структуры и функций различных белков. Особенно широким набором различающихся по субстратной специфичности протеаз обладают бактерии.

Протеиназа ЕСР32, накапливаемая внутриклеточно на постлогарифмической фазе роста штамма бактерий Escherichia coli А2, является уникальным ферментом, который специфически расщепляет один из основных белков мышц и цитоскелета - актин. Поскольку прокариоты не содержат актин, функция протеазы в клетке продуцента остается не ясной, и исследование этой функции актуально в силу фундаментальной роли протеаз во внутриклеточной регуляции и малой изученности ферментов энтеробактерий, синтезируемых на постлогарифмической фазе роста. Кроме того, изучение протеазы ЕСР32 актуально в свете широко развивающихся сегодня исследований внутриклеточной инвазии бактериальных патогенов. Известно, что у болезнетворных энтеробактерий воздействие на эукариотическую клетку проявляется, в частности, в активной перестройке ее актинового цитоскелета. Можно предположить, что ЕСР32 вовлечена в механизмы, обусловливающие патогенность бактерий. Протеаза обладает высокой избирательностью к субстратам и в актине гидролизует лишь одну, не затрагиваемую другими протеазами, связь, которая играет особую роль в функционировании актиновой молекулы. Широкое распространение актина в эукариотических клетках и большое разнообразие и важность выполняемых им функций вызывают огромный интерес исследователей к этому белку, и продукт ЕСР32-протеолиза является уникальной моделью для исследования актина in vitro и in vivo. Таким образом, протеаза ЕСР32 важна и как объект, и как инструмент в исследованиях 5 процессов в про- и эукариотической клетке и механизмов взаимодействия бактерий с эукариотической клеткой при патогенезе.

Количество протеазы ЕСР32 в клетке составляет сотые доли процента от белков экстракта. Escherichia coli являются классическим объектом генной инженерии и широко используются для получения сверхпродуцентов биологически активных веществ, однако эти бактерии по ряду признаков малопригодны для массового культивирования, и в литературе трудно найти описание масштабного синтеза веществ природными штаммами-продуцентами. Поэтому масштабный метод получения протеазы ЕСР32 не только необходим для изучения и применения этого фермента, но и может стать оригинальной разработкой выделения минорного внутриклеточного компонента, синтезируемого на постлогарифмической фазе роста.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлось изучение свойств протеазы ЕСР32 и возможности ее использования для исследования структуры и функции белков. В соответствии с этой целью решались следующие основные задачи: 1 разработка способа выращивания продуцента протеазы с учетом необходимости получения больших количеств биомассы, переход на культивирование в ферментаторе; 2)разработка масштабного метода выделения и очистки протеазы, получение препаративного количества ЕСР32; 3)получение антител и аффинных сорбентов на их основе и разработка быстрого метода очистки протеазы; 4)изучение основных биохимических свойств ЕСР32; 5)поиск внутриклеточных субстратов протеазы; 6)изучение влияния ЕСР32 на цитоскелет при введении в живую клетку.

Научная новизна работы. Впервые определена N-концевая последовательность протеазы ЕСР32 и показано, что протеаза является новым ферментом.

Впервые исследованы ферментативные свойства очищенного препарата ЕСР32. Данные ингибиторного анализа и результаты активации апофермента позволяют считать ЕСР32 металлопротеиназой (КФ 3.4.24), в активном центре которой находится ион цинка. 6

Достигнута высокая степень очистки препарата, что впервые позволило использовать протеазу для исследования актинового цитоскелета in vivo. Микроинъекция ЕСР32 в клетки Amoeba proteus вызывала обратимые нарушения в двигательной активности амеб, обусловленность которых воздействием протеазы была подтверждена специфическим ингибированием активности фермента.

Впервые проведен поиск внутриклеточных субстратов протеазы. Из экстрактов штамма-продуцента выделены три полипептида, гидролизуемые ЕСР32. Два из них предположительно относятся к семейству прокариотических белков, связывающих нуклеиновые кислоты, а один является белком теплового шока прокариот DnaK. Разработан оригинальный метод выделения этих белков, к DnaK получены поликлональные антитела и исследована способность ЕСР32 расщеплять БТШ других организмов. Получены фрагменты протеолиза ЕСР32 гистона Н2А, подтверждена необходимость гидрофобного аминокислотного остатка в сайте расщепления.

Таким образом, в результате работы впервые экспериментально доказана возможность использования протеазы ЕСР32 для изучения структуры и функции белков in vitro и in vivo.

Научно-практическая значимость работы. Впервые определены условия выращивания штамма E.coli А2 и синтеза им протеазы ЕСР32. Наилучший рост продуцента и синтез фермента достигнут на среде комплексного состава, в качестве основного субстрата содержащей пептон. Показано, что лимитирующим рост продуцента и синтез протеазы фактором является количество кислорода, поступающего в среду, особенно существенно оно в период экспоненциального роста. Успешно проведены ферментации в аппаратах рабочим объемом 7 и 40 л. Для лабораторных условий разработан метод двухфазного культивирования продуцента. Урожайность процесса повышена в 10 и более раз, и впервые получено количество биомассы, достаточное для препаративного выделения и исследования свойств протеазы. Так как практически нет описаний применения природных штаммов 7 энтеробактерий для масштабного синтеза внутриклеточных продуктов, данная разработка может быть использована для бактерий этого семейства -продуцентов других веществ.

Разработан препаративный способ выделения протеазы, позволяющий обрабатывать биомассу из 10 литров культуральной жидкости E.coli Al для получения 100 мкг препарата ЕСР32. Степень очистки составляла 2,5 тысячи раз, степень чистоты препарата - 80%. Получены поликлональые антитела и аффинные сорбенты на их базе для протеазы ЕСР32 и контаминирующего полипептида 35 кДа. Предложен метод быстрого двухступенчатого выделения протеазы.

В результате очистки получен препарат протеазы, не обладающий АТФазной активностью, что впервые позволило использовать ЕСР32 в экспериментах in vivo и открывает возможности использования ЕСР32 для изучения АТФ-содержащих белков.

Проведенное исследование специфичности ЕСР32 позволяет предложить протеазу как высокоспецифичный инструмент исследования, зарекомендовавший себя при изучении актина, для изучения гистонов и белков теплового шока. Благодаря проведенному ингибиторному анализу и получению антител к протеазе ЕСР32 существует возможность тонкого регулирования активности фермента. 8

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Морозова, Алевтина Владиславовна

ВЫВОДЫ

1. Определены условия культивирования штамма E.coli А2 и синтеза им протеазы ЕСР32. Наилучший рост продуцента и синтез фермента достигнут на среде комплексного состава, в качестве основного субстрата содержащей пептон. Показано, что лимитирующим рост продуцента и синтез протеазы фактором, особенно в период экспоненциального роста, является количество кислорода, поступающего в среду. Учет этого фактора позволил увеличить выход продукта более чем в 10 раз и снизить продолжительность процесса в 1,5 раза.

2. Проведено масштабирование процесса наращивания продуцента ЕСР32. Коэффициент массопереноса кислорода выбран основой для сравнения систем культивирования и перехода на выращивание в ферментаторе, в результате успешно проведены ферментации в аппаратах рабочим объемом 7 и 40 л. Впервые получено количество биомассы, достаточное для препаративного выделения протеазы.

3. Разработан препаративный способ выделения протеазы, позволяющий обрабатывать биомассу из 10 литров культуральной жидкости E.coli А2 для получения 100 мкг препарата ЕСР32. Степень очистки составляла 2,5 тысячи раз, степень чистоты препарата - 80%. Получены поликлональые антитела и аффинные сорбенты на их базе. Предложен метод быстрого двухступенчатого выделения протеазы.

4. Определена N-концевая последовательность протеазы ЕСР32 и показано, что протеаза является новым ферментом. Исследованы ферментативные свойства очищенного препарата ЕСР32. Данные ингибиторного анализа и результаты активации апофермента позволяют отнести ЕСР32 к группе цинксодержащих металлопротеиназ.

168

5. Для исследования возможной функции протеазы из экстрактов штамма-продуцента выделены три полипептида, расщепляемые ЕСР32, один из которых является белком теплового шока прокариот DnaK. Разработан оригинальный метод выделения этих полипептидов, к DnaK получены поликлональные антитела и исследована способность ЕСР32 расщеплять белки теплового шока других организмов. Получены продукты протеолиза ЕСР32 гистона Н2А и определены сайты расщепления, подтверждена необходимость гидрофобного аминокислотного остатка в расщепляемой связи.

6. Достигнута высокая степень очистки препарата, что впервые позволило использовать протеазу для исследования актинового цитоскелета in vivo. Микроинъекция ЕСР32 в клетки Amoeba protens вызывала обратимые нарушения в двигательной активности амеб, обусловленность которых воздействием протеазы была подтверждена специфическим ингибированием активности фермента.

169

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Протеаза ЕСР32 является уникальным ферментом, высокоспецифи-чески расщепляющим один из основных белков мышц и цитоскелета актин, накашиваемым в минорных количествах внутриклеточно на постлогарифмической фазе роста природного штамма бактерий Escherichia coli А2.

Первоочередной задачей данной работы была разработка способа выращивания продуцента протеазы с учетом необходимости получения больших количеств биомассы и переход на культивирование в ферментаторе. Среди микроорганизмов, используемых в качестве продуцентов вторичных метаболитов, бактерии составляют лишь 11%, среди продуцентов вторичных-метаболитов-не-антибиотиков - еще меньше, 9% (91% приходится на грибы и актиномицеты) [Berdy, 1995], если выбрать из них только продуцентов веществ белковой природы, да еще и накапливаемых внутриклеточно, очевидно, что количество станет совсем незначительным. В свою очередь, среди бактерий Escherichia coli считаются малопригодными для массового культивирования организмами в силу особенностей клеточного строения, и используются обычно только генноинженерные штаммы, накапливающие целевой продукт в количестве, составляющем один и более процентов от белков внутриклеточного экстракта. Таким образом, задача осложнялась ограниченностью числа известных разработок биосинтезов на базе этих бактерий.

Нами были определены условия культивирования штамма E.coli А2 и синтеза им протеазы ЕСР32. Наилучший рост продуцента и синтез фермента достигнут на среде комплексного состава, в качестве основного субстрата содержащей пептон: пептон - 20 г, дрожжевой экстракт - 10 мл, NaCl - 10 г, все компоненты отечественного производства, вода водопроводная - до 1 л, рН 7,0. Использование данной среды позволило повысить выход ЕСР32-активной биомассы на 20%, а удельные затраты на получение 1 г биомассы

163

Е.соЫ А2 были снижены на 48% по сравнению с затратами при выращивании на ранее применявшейся среде.

Показано, что лимитирующим рост продуцента и синтез протеазы фактором, особенно в период экспоненциального роста, является количество кислорода, поступающего в среду. Для наилучшего роста продуцента и гарантированного получения ЕСР32-активности к 48 ч ферментации было выбрано количество кислорода, поглощенного средой в течение всего времени или хотя бы первых 24 ч ферментации, соответствующее сульфитному числу не менее 0,174 г/(л-ч) (определенному по воде).

Для процессов, в которых лимитирующим фактором является количество поступающего в среду кислорода, коэффициент переноса кислорода является наиболее адекватным параметром для масштабирования при отсутствии геометрического подобия аппаратуры. Этот показатель и был выбран основой для сравнения систем наращивания при переходе на культивирование в ферментаторе. Правильность выбора была подтверждена успешно проведенными ферментациями в аппаратах АНКУМ-2М и АВ-40; рост культуры и синтез протеазы соответствовали прогнозированным на основе коэффициента переноса кислорода.

Для лабораторных условий в качестве усовершенствования способа наращивания в колбах мы опробовали метод двухфазного (агаризованная фаза - жидкая фаза) культивирования. При этом способе достигается более высокий уровень аэрации и концентрации биомассы в жидкой среде, что было особенно важно при культивировании Е.соИ А2, т.к. выделение биомассы этих бактерий требует высокоскоростных центрифуг, и снижение объема КЖ значительно упрощает и удешевляет процесс. В результате при соотношении объемов агаризованной и жидкой сред 4:1 было получено девятикратное увеличение концентрации биомассы в жидкой среде по сравнению с обычным культивированием, и при трехкратной смене жидкой фазы выигрыш по количеству биомассы при расчете на суммарный объем среды составлял 1,5 раза; количество получаемой на единицу биомассы протеазы ЕСР32 не

164 уменьшилось. Так как разработанный процесс является переходным от периодического к непрерывному культивированию (разновидностью отъемно-доливного способа), для защиты культуры от контаминации в процессе выращивания исследовали влияние на рост E.coli А2 и синтез протеазы различных антибиотиков. Выяснили, что при культивировании продуцента можно добавлять в среду ампициллин и тетрациклин.

В результате на пути оптимизации процесса выращивания штамма-продуцента протеазы ЕСР32 урожайность была повышена более чем в 10 раз. В подобранных условиях синтез протеазы начинался не позднее 48 ч, благодаря чему продолжительность процесса ферментации была сокращена более чем в 1,5 раза. Впервые получено количество биомассы, достаточное для препаративного выделения протеазы.

Разработан препаративный метод выделения протеазы, позволяющий обрабатывать биомассу из 10 литров культуральной жидкости E.coli А2 для получения 100 мкг препарата ЕСР32. Степень очистки составляла 2,5 тысячи раз, степень чистоты препарата - 80%. Способ не требует сложного оборудования, включает традиционно используемые для очистки протеаз стадии ионообменной и распределительной хроматографии и еще две стадии -ультрафильтрацию и препаративный электрофорез в неденатурирующих условиях, - оказавшиеся высокоэффективными для очистки данного продукта. Получены поликлональые антитела и аффинные сорбенты на их базе. Предложен метод быстрого двухступенчатого выделения протеазы.

Была определена N-концевая последовательность полипептида 32 кДа, который составляет порядка 80% очищенного препарата протеазы ЕСР32 (AKTSSAGWIRDIFL), и компьютерный анализ банка данных аминокислотных последовательностей белков не выявил значительной гомологии с известными N-концевыми последовательностями. Таким образом была подтверждена уникальность протеазы ЕСР32.

Исследованы ферментативные свойства очищенного препарата ЕСР32. Данные ингибиторного анализа и результаты активации апофермента

165 позволяют отнести ЕСР32 к группе цинксодержащих металлопротеиназ. Изучены ингибирование и активация протеазы при действии различных факторов, таким образом получена возможность тонкого регулирования активности фермента.

Для исследования возможной функции протеазы из экстрактов штамма-продуцента выделены три полипептида, расщепляемые ЕСР32, два из которых предположительно относятся к ДНК(РНК)-связывающим белкам. N-концевая последовательность (XKIIGIXLGTTN) третьего полипептида, его накопление в клетках, подвергнутых тепловому шоку, молекулярная масса и окрашивание антителами к эукариотическим белкам теплового шока семейства БТШ70 свидетельствуют, что он является БТШ прокариот DnaK. Разработан оригинальный метод выделения этих трех полипептидов, включающий хроматографические стадии и нагревание в условиях высокой ионной силы, не описанное ранее для DnaK. К DnaK получены поликлональ-ные антитела и показано, что ЕСР32 способна расщеплять БТШ70 других прокариот. Расщепление ЕСР32 эукариотических БТШ70 не получено.

Отдаленные друг от друга по функции, актин и белки теплового шока семейства БТШ70 чрезвычайно сходны по третичной структуре АТФазной области. Петля, на которой находится расщепляемая ЕСР32 связь в актине, расположена в субдомене, который сильнее других различается у этих белков, и поэтому, вероятнее всего, участвует в их специфическом функционировании. Таким образом, проведенное исследование специфичности ЕСР32 позволяет предположить, что полипептиды ES15 и ES21 и белок теплового шока DnaK являются природными субстратами ЕСР32. Кроме того, мы предлагаем протеазу ЕСР32 как высокоспецифичный инструмент исследования, зарекомендовавший себя при изучении актина, для изучения ДНК(РНК)-связывающих белков и белков теплового шока прокариот и эукариот.

Получены продукты протеолиза ЕСР32 гистона Н2А и определены сайты расщепления. Благодаря этому подтверждены ранее полученные данные о специфичности протеазы к аминокислотным остаткам с гидрофоб

166 ной боковой цепью в позиции Р^ в гидролизуемой пептидной связи, что может быть использовано для поиска низкомолекулярных субстратов протеазы, и то, что ЕСР32 не обладает узкой первичной специфичностью и очевидно является ферментом, чувствительным к конформации субстратов.

Впервые исследовано взаимодействие "протеаза ЕСР32 - цитоскелет in vivo", в качестве объекта выбраны клетки простейших. Использовать фермент in vivo позволила достигнутая нами высокая степень очистки препарата. С другой стороны, только в результате получения нами анти-ЕСР32 антител оказалось возможным целенаправленно и избирательно воздействовать на активность протеазы в препарате для контрольных инъекций. Микроинъекция ЕСР32 в клетки Amoeba proteus вызывала обратимые нарушения в двигательной активности амеб, обусловленность которых воздействием протеазы была подтверждена специфическим ингибированием активности фермента. Наблюдаемые в наших экспериментах эффекты сходны с описанными ранее в литературе воздействиями актин-связывающих белков, препятствующих образованию актиновых филаментов. Так как актин, расщепленный ЕСР32, теряет способность к полимеризации, можно предположить, что таким образом при введении протеазы ингибируется сборка актинового цитоскелета амеб. Поскольку движение амеб обеспечивается цитоскелетом, полученные нами данные о нарушении движения клетки подтверждают возможность применения протеазы ЕСР32 для исследования цитоскелета in vivo.

Таким образом, в результате работы получены масштабные способ выращивания продуцента ЕСР32 и метод выделения и очистки протеазы, получено препаративное количество ЕСР32, которого оказалось достаточно для получения антител и аффинных сорбентов на их основе, изучения основных биохимических свойств ЕСР32, поиска субстратов протеазы в клетке-продуценте и изучения влияния ЕСР32 на цитоскелет при введении в живую клетку.

167

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Морозова, Алевтина Владиславовна, 2000 год

1. Бирюков В.В., Кантере В.М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.: Наука, 1985. - 286 с.

2. Бич Г., Бест Д. Биотехнология. Принципы и применение / Под ред. И. Хиггинса, Д. Беста, Дж. Джонса. М.: Мир, 1988. - 298 с.

3. Ваганова Г.И., Иванова М.Р., Степанов В.М. Выделение и свойства "кислой" металлопротеиназы Aspergillus oryzae // Биохимия. 1988. - N 53 -С. 1344—1351.

4. Протеиназа I из Acremonium chrisogenum сериновая протеиназа нового типа / Л.И.Васильева, Г.Н.Руденская, И.Н.Крестьянова, О.М.Хозова, Ю.Э.Бартошевич, В.М.Степанов // Биохимия. - 1990. - N 50. - С. 355—362.

5. Виестур У.Е. и др. Культивирование микроорганизмов / У.Е.Виестур, М.Ж.Кристапсон, Е.С.Былинкина. М.: Пищ. пром., 1980. - 232 с.

6. Карбоксильные протеиназы микроскопических грибов Trichoderma viride и Trichoderma lignorum / А.В.Гайда, Н.Я.Остерман, Г.И.Рудянская, В.М.Степанов // Биохимия. 1981. - Вып. 46. - С. 181—189.

7. Галаев И.Ю., Матиассон Б. Новые методы аффинной очистки белков. Аффинное осаждение: Обзор //Биохимия. 1997. - Т. 62. - С. 669—676.

8. Галаев И.Ю. Новые методы очистки белков. Хроматография в расширяющемся слое: Обзор // Биохимия. 1998 (1). - Т. 63. - С. 737—743.

9. Галаев И.Ю. Новые методы очистки белков. Вытеснительная хроматография: Обзор // Биохимия. 1998 (2). - Т. 63. - С. 1480—1489.

10. Галаев И.Ю. Новые методы очистки белков. Аффинная ультрафильтрация: Обзор // Биохимия. 1999. - Т. 64. - С. 1013—1021.

11. Галынкин В.А., Яковлев В.И. Исследование структуры потоков в биохимическом реакторе. Определение массообменных характеристик биохимическогог реактора. Методические указания. Л.: Изд-во ЛТИ им Ленсовета, 1983. - 27 с.

12. Методы общей бактериологии. В 3-х т. / Под ред. Ф.Герхардта. М.: Мир, 1984.-678 с.170

13. Громов Б.В. Строение бактерий. М.: Изд-во Московского университета, 1985.-367 с.

14. Давиденко Н.К. Изучение биосистем с помощью метода металлов-зондов // Биологические аспекты координационной химии. Киев, Наукова Думка, 1977.-С. 46—57.

15. Долгих М.С. Протеиназы дрожжеподобных грибов рода Candida II Успехи сов. биол. 1990. - Т. 110, N 1(4). С. 48—60.

16. Секретируемые ферменты мицилиальных грибов: регуляция секреции и очистка внеклеточной протеиназы Trichoderma harziznum / Дунаевский Я.Е., Грубань Т.Н., Белякова Г.А., Белозерский М.А. // Биохимия. 2000. - Вып. 65. -С. 848—853.

17. Двухфазное культивирование Streptomyces levoris. I. Выбор органической фазы и ее влияние на жизнедеятельность культуры. II. Накопление биомассы и протеолитическая активность / Дымшиц В.А., Гильманов В.Г., Дравецкая

18. B.JL, Печерский И.М. // Биотехнология. 1994. -N 5. - С. 20—24.

19. Метаболизм микроорганизмов / Под ред. Н.С.Егорова. М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1986.-278 с.

20. Реорганизация актиновых микрофиламентов в клетках Нер-2 в результате инвазии бактерий Escherichia coli А2 / Ефремова Т.Н., Эндер Н.А., Брудная М.С., Комиссарчик Я.Ю., Хайтлина С.Ю. // Цитология. 1998. - Т. 40, N 1.1. C. 524—528.

21. Звенигородский В.И., Емельянова JI.K., Воейкова Т.А. Влияние аминокислот на синтез пептидного антибиотика бацитрацина и получение аналогорезистентных мутантов // Биотехнология. 2000. - № 2. - С. 7—13.

22. Зотина Т.А., Болсуновский А.Я., Калачева Г.С. Влияние солености среды на рост и биохимический состав цианобактерии Spirulina platentis II Биотехнология. 2000. - N. 1. - С. 85—88.171

23. Протеиназа ЕСР 32: Характеристика фермента, исследование специфичности / Г.А.Казанина, О. А. Миргородская, Е.А.Миргородская, С.Ю. Хайтлина // . Биоорганическая химия. 1995. - Т. 21, N 10. - С. 761-766

24. Влияние посевного материала на рост Arthrobacter sp. и Streptomyces viridobrunneus и образование глюкозоизомеразы / Козакевич И.О., Сапунова Л.И., Парахня Е.В., Лобанок А.Г. // Биотехнология. 1998. - N 3. - С. 19—27.

25. Внеклеточная химотрипсиноподобная протеиназа Streptomyces spheroides 35 / Крейер В.Г., Рудянская Г.Н., Ландау Н.С., Смирнов Л.В., Тимохина Е.А., Егоров Н.С., Степанов В.М. //Биохимия. 1984. -Т. 49. - С. 1890—1898.

26. Кулыба Н.П., Пинаев А.Г., Козлов А.В. Метод препаративного выделения ДНК-связывающего белка HU из Escherichia coli // Вестник ЛГУ. 1985. - № 17, Биология, вып. 3. - С. 96—102.

27. Антитела. Методы / Под ред. Д.Кэтти. М.: Мир, 1991. -287 с.

28. Внеклеточная кислая сериновая протеиназа Д Streptomyces rutgersensis / Лавренова Г.И., Гульник С.В., Калугер С.В., Боровикова В.П., Ревина Л.П., Степанов В.М. // Биохимия. 1984. - Т. 49. - С. 1818—1824.

29. Лукнер М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных. М.: Мир, 1979. - 548 с.

30. Мантуленко В.А., Хайтлина С.Ю., Шелудько Н.С. Высокомолекулярный устойчивый к протеолизу фрагмент молекулы актина // Биохимия. 1982. - Т. 48.-С. 61-66.

31. Маргулис Б.А., Гужова И.В. Белки стресса в эукариотической клетке: Обзор // Цитология. 2000. - Т. 42, N 4. - С. 323—342.172

32. Машко C.B. Оптимизация экспрессии чужеродных генов в клетках E.coli: Обзор // Биотехнология. 1998. - N 6. С. 3—23.

33. Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. Пер. с англ. М., Мир, 1967. - 237 с.

34. Изучение условий экстракции глюкоизомеразы, ассоциироанной с клетками бактерий Arthrobacter species В-5 / Парахня Е.В., Сапунова Л.И., Лобанок А.Г., Казакевич И.О. // Биотехнология. 1999. - N 5. - С. 40—46.

35. Перт Д.С. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978.-331 с.

36. Оптимизация состава питательной среды из соевой муки для глубинного культивирования Bacillus subtilis 3 в производстве биоспорина / Поберий И.А., Федорова Н.В., Филин В.А., Сабурова В.И., Пономаренко Н.И. // Биотехнология. 1999. -N 6. - С. 56—61.

37. Ракитин В.Ю. Дезинтеграция микроорганизмов. М.: ОНТИТЭИ Микробиопром, 1979. - 126 с.

38. Серебрякова Е.В., Калининский В.Б., Медведев Н.П. Двухфазное культивирование Serratia marcescens как способ повышения аэрации глубинных культур // Биотехнология. 1999. - N 3. - С. 63—66.

39. Скрябин Г.К., Кощеенко К.А. Иммобилизованные клетки микроорганизмов // Биотехнология / Под ред. А.А.Баева. М.: Наука, 1984. -. С. 70—77.

40. Соловьева Н.И. Матриксные металлопротеиназы и их биологические функции: Обзор // Биоорганическая химия. 1998. - Т. 24 - С. 245—255.

41. Особенности действия внутриклеточной сериновой протеиназы Bacillus myloliguefaciens на нативные и денатурированные субстраты / Степанов В.М., Марарьян А.Н., Стронгин А.Я., Тимохина Е.А. // Биохимия. 1982. - Т. 47. -С. 1427—1430.173

42. Стронгин А.Я., Степанов В.М. Внутриклеточные сериновые протеиназы спорообразующих бацилл // Биохимия. 1981. - Т. 46. - С. 1347—1363.

43. Кристаллическая структура термитазы и стабильность субтилизинов / Тепляков A.B., Куранова И.П. Арутюнян Э.Г., Фраммель К., Хене В. // Биоорг. Химия. 1990. - Т. 16, N 14. - С. 437—447.

44. Туркина М.В., Куликова A.A. Пути изучения актиноподобного белка в тканях высших растений // Физиология растений. 1982. - Т. 29. - С. 837— 845.

45. Уонг Д., Кооней Ч. Ферментация и технология ферментов. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. - 289 с.

46. Усманова A.M., Хайтлина С.Ю. Протеаза из штамма бактерии E.coli А2, специфически расщепляющая актин // Биохимия. 1989. - Т. 54. - С. 1308— 1314.

47. Федорова З.Ф., Хайтлина С.Ю. Обнаружение протеазы, специфически расщепляющей актин, у ревертантов JI-формы Sh.flexneri II Бюллетень эксп. медицины. 1990. - С. 46—48.

48. Фултон А. Цитоскелет. Архитектура и хореография клетки. М.: Мир, 1987. - 84 с.

49. Glu-, Asp-специфичная протеиназа из Streptomyces thermovulgaris / Хайдарова Н.В., Руденская Г.Н., Ревина Л.П., Степанов В.М., Егоров Н.С. // Биохимия. 1989. - Т. 54. - С. 46—53.

50. Тиолзависимая сериновая протеиназа Streptomyces thermovulgaris / Хайдарова Н.В., Руденская Г.Н., Ревина Л.П., Степанов В.М., Егоров Н.С. // Биохимия. 1990. - Т. 55. - С. 1110—1119.

51. Авт. свидет. № 1390241 СССР. Штамм бактерий Escherichia coli -продуцент нейтральной протеиназы / Хайтлина С.Ю., Смирнова Т.Д., Федорова З.Ф., Усманова A.M. (СССР) // Бюлл. изобр. 1988. - N 15. - С. 12.

52. Цаплина И.А. Синтез нейтральных протеаз микроорганизмами // Биосинтез микроорганизмами нуклеаз и протеаз. М.: Наука, 1979. - С. 197— 243.174

53. Шамолина Т.А., Швядас В.К. Ренатурация гетеродимера и индивидуальных субъединиц пенициллинацилазы из E.coli после инактивации в мочевине // Биохимия. 2000. - Т. 65. С. 790—794.

54. Шестопалова О.Е., Абаев Г.Н., Хорушкин В.В. О возможности оперативного контроля направленности процесса аэробной ферментации на основе анализа состава отходящих газов // Биотехнология. 1997. - N 5. С. 58—63.

55. Влияние качества и количества посевного материала на образование внеклеточной глюкозооксидазы Penicillium funiculosum Г-15 и Penicillium adametzii БИМ-90 / Шишко Ж.Ф., Михайлова Р.В., Лобанок А.Г., Ясенко М.И. // Биотехнология. 1999. - N 6. С. 62—67.

56. Яцимирский К.Б. Введение в бионеорганическую химию. Киев, Наукова думка, 1976. - 143 с.

57. Interdomain cleavage of plasma fibronectin by zinc-metalloproteinase from Serratia marcescens / Akhkeruzzman M., Sumio Т., Hong J., Hizoshe M. // Biochem. Biophys. Acta. 1988. - No. 955-1. - Pp. 77—85.

58. Arvidson S., Holme Т., Lindholm B. Studies on extracellular proteolytic enzymes from Staphylococcus aureus // Biochem. Biophys. Acta. 1973. - No. 302. -Pp. 135—148.

59. Primary structure of elongation factor Tu from Escherichia coli / Arai K., Clark B.F.C., Duffey L., Jones M.D., Kaziro J. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. -Vol. 77.-Pp. 1326—1330.

60. Barrett, A.J. Introduction: the classification of proteinases // Ciba Found. Symp. 1980.-Vol. 75.-Pp. 1—13.

61. Barrett, A.J. An introduction to the proteinases // In: Barrett A.J. and Salvesen G. (Ed.) Proteinase inhibitors. Research monographs in cell and tissue physiology. -Vol. 12. Elsevier Science Publishers, 1986. - Pp. 3—22.

62. Handbook of Proteolytic Enzymes / Barrett, A.J., Rawlings, N.D., Woessner, J.F. (eds) Academic press, NY, 1998. - 476 p.

63. Bates G.W., Billups C., and Saltman P. The Kinetics and Mechanism of Iron (III) Exchange between Chelates and Transferrin // J. Biol. Chem. 1967. - No. 242.-Pp. 2810—2821.

64. Beck B.D., Arscoff P.G., Jacobson A. Novel properties of bacterial elongation factor Tu // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978. - Vol. 75. - Pp. 1250—1254.

65. Belozersky, M.A., Dunaevsky, Ya.E., and Voskoboynikova, N.E. Isolation and properties of metalloproteinase from buckwheat (Fagopyrum esculentum) seeds // Biochem. J. 1990. - Vol. 272. Pp. 677-682.

66. Bérdy, J. Are Actiomycetes Exhausted as a Source of Secondary Metabolites? // Биотехнология. 1995. - N 7—8. - С. 13—34.

67. Bergmann, M. and Ross, W.F. On proteolytic enzymes. X. The enzymes of papain and their activation // J. Biol. Chem. 1936. - Vol. 114. - Pp. 717—726.

68. Billo, E.J. Kinetics of Dissociation of Zinc Ion from Carboxypeptidase A: Catalysis and Inhibition by Amino Acids // J. of Inorganic Biochemistry. 1979. -No. 11.-Pp. 339—347.

69. Bjerrum, J., Schwarzenbach, G., and Sillen, L.G. Stability Constants of Metal-ion Complexes, with Solubility Products of Inorganic Substances. Part I: Organic Ligands. London: The Chemical Society, Burlington House, 1957. - 120 pages.

70. Bork, P., Sander, Ch., and Valencia, A. An ATPase domain common to prokaryotic cell cycle proteins, sugar kinases, actin and hsp70 heat shock proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 89. - Pp. 7290—7294.

71. Broyles, S.S. and Pettijohn, D.E. Interaction of the Escherichia coli HU-protein with DNA. Evidence for formation of nucleosome-like structures with altered DNA helical pitch // J.Mol. Biol. 1986. - Vol. 187. - Pp. 47—60.

72. Burtnick, L.D., Chan, K.W. Protection of actin aganinst proteolysis by complex formation with deoxyribonuclease I // Canad. J. Biochem. 1980. -Vol. 58, No.12. -Pp. 1348—1354.

73. Busby, S., Kolb, A., and Bue, H. Isolation of plasmid-protein complexes from Escherichia coli //Eur. J. Biochem. 1979. - Vol. 99. - Pp. 105--111.

74. Partial purification and characterization of an Escherichia coli toxic factor that induces morphological cell alterations / Caprioli, A., Falbo, V., Roda, L.G., Ruggeri, F.M., and Zona, C. // Infect. Lmmun. 1983. - Vol. 39 - Pp. 1300—1306.

75. Czapek, F. Biochemie der Pflanzen. Jena: Fisher Verlag, 1920/21. - 397 p.

76. Cheng, J.S.E., Aronson, A.I. Alteration of spore coat procesing and protein turnover in a Bacillus cereus mutant with a defective postexponential intercellular protease // Proc. Natl. Acad. USA. Vol. 74. - Pp. 1254—1258.

77. Christiani, A., Hugelmeyer, P., and Stockem, W. Struchture and function of the cortical filament layer in Amoeba proteus // Cell Tissue Res. 1986. - Vol. 246. -Pp. 163—168.

78. Chung, C.H., Goldberg, A.L. Purification and characterization of protease So, a cytoplasmic serine protease in Escherichia coli // J. Bacteriol. 1983. - Vol. 154. -Pp. 231—238.

79. Chung, C.H. Proteases in Escherichia coli // Science. 1993. - Vol. 262. - Pp. 372—374.

80. Corman, J., Tsuchiya, H. V., Koepsell, H. J., Benedict, R. G., Kelley, S. E., Feger, V. H., Dworschak, R. G., and Jackson, R. W. // Appl. Microbiol. 1957-Vol. 5.-Pp. 313—318.

81. Creighton, T.E., Darby, N.J., Kemmink, J. The role of partly folded intermediates in protein folding // FASEB J. 1996. - Vol. 10. Pp. 110—118.

82. DasGupta, B.R., and Tepp, W. Protease activity of botulinum neurotoxin type E and its light chain: cleavage of actin // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. -Vol. 190.-Pp. 470-474.

83. Dayhoff, M.O., Barker, M.C. and Hunt, L.T. Establishing homologies in protein sequences // Methods Enzymol. 1983. - Vol. 91, Pp. 524—545.

84. Dooley, S., Radike, J., Blin, N., and Unteregger, G. Rapid detection of DNA-binding factors using protein-blotting and digoxygenine-dUTP marked probes // Nucleic Acids Res. 1988. - Vol. 16. - P. 11839.

85. Drlica, K. And Rouviere-Yaniv, J. Histonelike proteins of bacteria // Microbiol. Rev. 1987. - Vol. 51, No. 3. - Pp. 301-319.177

86. Drucker, H. and Borchers, S.L. The Role of Calcium in Thermolysin: Effect on Kinetic Properties and Autodigestion // Arch, of Bioch. and Biophys. 1971. - Vol. 147.-Pp. 242—248.

87. Elliott, B.W., Cohen, J., Cohen, C. Isolation and characterization of a lysine-specific potease from Pseudononas aureginosa // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264, Pp. 11259—11265.

88. Elliot, S.D., Ten, Y.L. Streptococcal proteinase // Methods in Enzymol. Vol. 19.-Pp. 252—261.

89. Elzinga, M., Collins, J.M., Kuche, W.M., Adelstein, R.C. Complete amino acid sequence of actin of rabbit skeletal muscle // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1973. -Vol. 70, No. 9. - Pp. 2687—2691.

90. Isolation and Nucleotide Sequence of the Gene Encoding Cytotoxic Necrotizing Factor 1 of Escherichia coli / Falbo, V., Pace, T., Picci, L., Pizzi, E., and Caprioli, A. // Infection and Immunity. 1993. - Vol. 61. - Pp. 4909—4914.

91. Fassina, G., Vita, C., Dalzoppo, D., and Zambonin, P. Autolysis of thermolysin. Isolation and characterization of a folded three-fragment complex // Eur. J. Biochem. 1986. - Vol. 156. - Pp. 221—228.

92. Fiorentini, C., Arancia, G., Caprioli, A., Falbo, V., Rugger, F.M., and Donelli, G. Cytoskeletal changes induced on Hep-2 cells by the cytotoxic necrotizing factor of Escherichia coli//Toxicon. 1988. - Vol. 26. - Pp. 1047-1056.

93. Flaherty, K.M., McKay, D.B., Kabsch, W., and Holmes, K.C. Similarity of the three-dimensional structures of actin and the ATPase fragment of a 70-kDa heat shock cognate protein // Proc Natl Acad Sci USA.- 1991. Vol. 88. - Pp. 50415045.

94. Fontana, A., Vita, C., Dalzoppo, D. Hierarchic organization of globular proteins: Experimental studies on thermolysin // J. Biosci. 1985. - Vol. 8. ~ Pp. 57—66.

95. Fontana, A. Fassina, G., Vita, C., Dalzoppo, D., Zamai, M., Zambonin, M. Correlation between sites of limited proteolysis and segmental mobility in thermolysin//Biochemistry. 1986. - Vol. 25. -Pp. 1847—1851.

96. Gawlitta, W. and Stockem, W. Visualization of Actin Polymerization and Depolymerization Cycles During Polyamine-induced Cytokinesis in Living Amoeba Proteus II Cell Tissue Res. 1981. - Vol. 215. - Pp. 249—261.178

97. Gilles, A.M., Imnoff, J.M., Keil, B. a-Clostripain. Chemical characteization, activity and thiol content of the highly active form of clostripain // J.Biol. Chem. -1979.-254, 1462—1468.

98. Goldberg, A.L., Swamy, K.H.S., Chung, C.H. and Larimore, F.S. Proteases in Escherichia coli // Methods in Enzymology. 1981. - 80, 680—702.

99. Goldberg, A.L., St.John, A.C. Intracellular protein degradation in mammalian and bacterial cells: part 2 // A.Rev.Biochem. 1976. - 45, 747—803.

100. Gossart, P., and Leguit, M. Interaction of Listeria monocytogenes with mammalian cells during entry and actin-based movement: bacterial factors, cellular ligands and signaling // EMBO J. 1998. - 17, 3797-3806

101. Grassmann, W. and Dyckerhoff, H. Uber die Proteinase und die Polypeptidase der Hefe // Hoppe-Seyler's ZJ Physiol. Chem. 1928. - 179,41—78.

102. Structural and functional domains on actin / Hambly, B.D., Barden, J.A., Miki, M., Remedios, C.G. // BioEssays. 1987. - Vol. 4, No. 3. - Pp. 124—128.

103. Hartley, B.S. Proteolytic enzymes // Annu. Rev. Biochem. 1960. - Vol. 29, 45—72.

104. Haumard, J., Drapeu, G.R. Staphylococcal protease: A proteolytic enzyme specific for glutamoyl bonds // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1972. - Vol. 69, No. 12.-Pp. 3506—3509.

105. Hedrick, J.L. and Smith, A.J. Protein molecular weight determination by polyacrylamide gel electrophoresis in non-denaturing conditions // J. Arch.Biochem.Biophys. 1968. - 126, 155—164.

106. Heinrikson, P. Application of thermolysin in protein structural analysis // Methods in Enzymol. 1977. - 47(E), 175—189.

107. Higley, S., and Way, M. Actin and cell pathogenesis // Current Opinion Cell Biology. 1997. - 9, 62-69.179

108. Hiroto, M., Tanoka, R., Watanabe, J. Tetrachimena actin: copolymerization with skeletal muscle actin and interaction with actin-binding proteins // J. Biochem. 1990. - Vol. 107, No. I. - Pp. 32—38.

109. Hirschbein, L. and Guillen, N. Characterization, assay, and use of isolated bacterial nucleoids // Methods of Bioch. Analysis.- 1982. 28, 297-328.

110. Holmes K.C., Popp, D., Gebhard, W., Kabsch, W. Atomic model of the actin filament // Nature. 1990. - 374,44—49.

111. Holmes, M.A., Matthews, B.W. Structure of thermolysin refined at 1/6<A resolution // J. Mol. Biol. 1982. - 160, 623—639.

112. Hooper, N.M. Purification of proteases // In: Proteolytic Enzymes. NY, Academic Press, 1999.-Pp. 109—123.

113. Hooper, N.M., Turner A.J. Isolation of two differentially glycosylated forms of peptildyl-dipeptidase A (angiotensin converting enzyme) from pig brain: a reevaluation of their role in neuropeptide metabolism // Biochem. J. 1987. - 241. -Pp. 625—633.

114. Hubbard, S.J. The structural aspects of limited proteolysis of native proteins // Biochem. Biophys. Acta. 1998. - 1382,191—206.

115. Hubscher, U., Lutz, H., and Kornberg, A. Novel histone H2A-like protein of Escherichia coli // PNAS. 1980. - Vol. 77, No. 9. - Pp. 5097-5101.

116. Imoto, T., Yamada, H., Ueda, T. Unfolding rates of globular proteins determined by kinetics of proteolysis / J. Mol. Biol. 1986. - 190,647—649.

117. Itzhaki, R.F., Gill, D.M. A microbiuret method for estimating proteins // Anal.Biochem. ~ 1964. Vol. 9, No.2. - Pp. 401-407

118. Jacobson, G.R., Rosenbusch, J.P. ATP binding to a protese-resistant core of actin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1976. - Vol. 73, No. 8. - Pp. 2742—2746.

119. Jany, K.D., Mayer, B. Proteinase K from Tritirachium album limber. I. Molecular mass and sequence around the active serine residue // Hoppe Seyler. -1985.-366, 485—492.

120. Johns, E.W. Studies of histones. Preparative methods for histone fractions from calf thymus / Biochem. J. 1964. - 92, 55-59.

121. Johnson, P., Wester, P.J., Hinida, R.S. Protein-protein interaction of proteolytic fragments of actin // Biochim. Biophys. Acta. 1979. - 578, 253—257.

122. Atomic structure of the actin: DNAse I complex / Kabsch, W., Mannherz, H.G., Suck, D., Pai, E.F., Holmes, K. C. // Nature. 1990. - Vol. 347. - Pp. 37— 44.

123. Kenny, A J. Introduction: Nomenclature and Classes of Peptidases // In: Proteolytic Enzymes. NY, Academic Press, 1999. - Pp. 1—8.

124. Khaitlina S. Yu. and Hinssen, H. Conformational changes in actin induced by its interaction with gelsolin // Biophys. J. -1997. 73: 929-937.

125. Khaitlina, S. Yu., J. Moraczewska, and H. Strzelecka-Golaszewska. The actin-actin interactions involving the N-terminal portion of the DNase I-binding loop are crucial for stabilization of the actin filament // Eur. J. Biochem. 1993. - 218, 911—920.

126. Khaitlina, S., Smirnova, T., and Usmanova, A. Limited proteolysis of actin by a specific bacterial protease // FEBS Lett. 1988. - 228, 172-174.

127. Correlation between polymerizability and conformation in scallop ß-like actin and rabbit skeletal muscle a-actin / Khaitlina, S.Yu., Antropova, O.Yu., Kuznetsova, I.M., Turoverov, K.K. and Collins, H.J. // Arch. Biochem. Biophys. -1999.-368, 105-111

128. Physico-chemical properties of actin cleaved with bacterial protease from Escherichia coli A2 strain / S.Yu.Khaitlina, J.H.Collins, I.M.Kusnetsova, V.P.Pershina, I.G.Synakevich, K.K. Turoverov and A.M.Usmanova // FEBS Lett. -1991.-279,49—51.

129. Kidani, Yo. and Hirose, J. Coordination Chemical Studies on Metalloenzymes. II. Kinetic Behavior of Various Types of Chelating Agents towards Bovine Carbonic Anhydrase // J. Biochem. 1977. - 81, 1383—1391.181

130. Kidani, Yo., Hirose, J., and Koike, H. Coordination Chemical Studies on Metalloenzymes. I. Kinetics and Mechanism of the Zn(II) Exchange Reaction between Chelating Agent and Apo-Bovine Carbonic Anhydrase // J. Biochem. -1976.-79, 43—51.

131. Kim, E., Miller, C.J., and Reisler., E. Polymerization and in vitro motility properties of yeast actin: a comparison with rabbit skeletal alpha-actin // Biochemistry. 1996. - 35:16566-16572.

132. Kishi, F., Ebina, Yo., Miki, T., Nakazawa, T., and Nakazawa, A. Purification and characterization of a protein from Escherichia coli which forms complexes with superhelical and single-stranded DNAs // J. Biochem. 1982. - 92,1059-1068.

133. Kleiner, D.E., Stetler-Stevenson, W.G. Quantative Zymography: Detection of Picogram Quantities of Gelatinases // Analytical Biochemistry. 1994. - 218, 325—329.

134. Kollman, P.A. Theory of enzyme mechanisms // Current Opinion in Structural Biology. 1992. - 2, 765—771.

135. Konno, K. Functional, chimotryptically split actin and its interaction with myosin subfragment I // Biochemistry. 1987. - 26, 3582—3589.

136. Konno, K. G-Actin structure revealed by chymotryptic digestion // J. Biochem. 1988.-103,386—392.

137. Korn, E.D. Actin polymerization and its regulation by proteins from nonmuscle cells // Physiol. Rev. ~ 1982. 62, 672—737.

138. Kropf, D. L., Bisgrove, S. R. and Hable, W. E. Cytoskeletal control of polar growth in plant cells // Curr. Opin. Cell Biol. 1998. - 10, 117-122.

139. Kurotsu, T., Marahiel, M.A., Muller, K.D., Kleinkauf, H. Characterization of an intracellular serine protease from spotulating cells of Bacillus brevis // J. Bacteriol. 1982. - 151, 3,1466—1472.182

140. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. - 227, 680-685.

141. Laine, B., Kmiecik, D., Sautiere, P., Biserte, G., and Cohen-Solal, M. Complete amino-acid sequences of DNA-binding proteins HU-1 and HU-2 from Escherichia coli//Eur. J. Biochem. 1980. - 103,447-461.

142. Laine, B., Sautiere, P. A DNA-binding protein from Escherichia coli. Isolation, characterization and its relationship with proteins HI and B1 // Bioch. and Bioph. Res. Commun. 1984. - Vol. 119, No. 3 - Pp. 1147—1153.

143. Lasa, I., Dehoux, P. and P. Gossart. Actin polymerization and bacterial movement // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - 1402, 217-228.

144. Lathe, R.H., Buc, H., Lecocq, J., and Bautz, E. Prokaryotic histone-like protein interacting with RNA polymerase // PNAS. 1980. - 77, 3548-3552.

145. Lazarides, E., Lindberg, U. Actin is the naturally occuring inhibitor of deoxyribonuclease I // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1974. - 71, 4742—4746.

146. Lecomte, J.T.J. NMR/X-ray: An overview. // In: Villafranca, J.J. (ed.) Techniques in protein chemistry. San Diego, CA (USA), Academic Press, - 1991. -Pp. 337—345.

147. Lederberg, J. and Lederberg, E.M. Replica plating and indirect selection of bacterial mutants // J. Bacteriol. 1952. - Vol. 63. - Pp. 399—406.

148. Lin, X., Tang, J. Purification, characterization, and gene cloning of thermopsin, a thermostable acid protease from Sulfolobus acidocaldarius II J.Biol.Chem. 265,1490—1496.

149. MacArthur, M.W., Driscoll, P.C., Thornton, J.M. NMR and crystallography: Complementary approaches to structure determination // Trends Biotechnol. 1994. -12,149—153.

150. Magri, E., Laccarini, M., Grazi, E. Versability of G-actin as the building block of biological structures // FEBS Lett. 1978. - Vol. 89, No. 2. - Pp. 276—278.

151. Malik, Vedpal Singh. Genetics and biochemistry of secondary metabolism: Review // Molecular Biology. 1986. - Pp. 27—115.

152. Mannherz, H.G., Kabsch, W., Lebertnan, R. Crystals of skeletal muscle actin: pancreatic DNAse I complex // FEBS Lett. 1977. - Vol. 73, No.2. - Pp. 141— 143.

153. Structure of thermolysin / Matthews, B.W., Colman, P.M., Jansonius, J.N., Titani, K., Walsh, K.A., and Neurath, H. //Nature (London). 1972. - 328,41—43.

154. Purification and characterization of the proteinase ECP-32 from Escherichia coli A2 strain / Matveyev V.V., Usmanova, A.M. Morozova, A.V., Collins, J. H. and Khaitlina, S. Yu. // Biochim. Biophys. Acta. 1996. - Vol. 1296. - Pp. 56—62.

155. Maurizi, M.R. Proteases and protein degradation in Escherichia coli H Experentia. -1992.-48, 178—201.

156. McLauglhlin, P.J., Gooch, J.T., Mannherz, H.-G., Weeds, A.G. Structure of gelsolin segment I actin complex and the mechanism of filament severing // Nature. - 1993. - 364, 685—692.

157. Meagher, R.B. Divergence and differential expression of actin gene families in higher plants // Int. Rev. Cytol. 1991. - 125, 139-163.

158. Meyer, M.L. and Kauzmann, W. Binding of Sodium Dodecyl Sulphate to proteins // Archs. Biochem. Biophys. 1962. - 99, 348.

159. Minkoff, L., Damadian, R. Actin-like proteins from Escherichia coli: concept of cytotonus as the missing link between cell metabolism and the biological ionexchange resin // J. Bacteriol. 1979. - 125, 353—365.

160. Proteolytic cleavage of melittin with the actin-digesting protease / Mirgorodskaya, O., Kazanina, G., Mirgorodskaya, E., Matveyev, V., Thiede, B. and Khaitlina, S. // Protein and Peptide Letters. 1996. - 3, 81- 88.

161. Mornet, D., Ue, K. Proteolysis and structure of skeletal muscle actin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - 81, 3680—3684.

162. Mossakowska, M., J. Moraczewska, S.Yu.Khaitlina and H.Strzelecka-Golaszewska. Proteolytic removal of three C-terminal amino acid residues of actin alters the monomer interaction // Biochem. J. 1993. - 289, 897-902.

163. Muzbek, L., Hauck., M. Fragmentation of actin by thrombinlike snake venom proteases // Biochem. Biophys. Acta. 1979. - 577, 34—43.

164. Nakai, T., Sawata, M., Tsuji, M., and Kume, K. Intracellular locations of dermonecrotic toxins in Bordetella bronchistica and Pasteurella multocida II Am. J. Vet. Res. 1985. - 46, 869—874.

165. Naryzhny, S.N. Upside-down stopped-flow electr©fractionation of complex protein mixtures //Anal. Biochem. 1996. - Vol. 238, No. 1. - Pp. 50-53.

166. Neurath, H., Walsh, K.A., Winter, W.P. Evolution of Structure and Function of Proteases // Science. 1967. - 158, 1638—1644.

167. Novotny, J., Bruccoleri, R.E. Correlation among sites of limited proteolysis, enzyme accessibility and segmental mobility // FEBS Lett. 1987. - 211, 185— 189.

168. North, M.J. Comparative biochemistry of the proteinases of eucaryotic microorganisms //Microb. Rev. 1982. - Vol. 46, No. 3. - Pp. 308—340.

169. Orlova, A., and Egelman, E.H. Structural dynamics of F-actin. I. Changes in the C-terminus // J. Mol. Biol. 1995. - 245, 582—597.

170. Ottesen, M., Svendsen, I. The subtitlisins // Meth. Enzymol. 1970. - 19, 199—215.185

171. Pacaud, M. Sibilli, L., LeBras, G. Protease I from Escherichia coli. Some physicochemical properties and substrate specificity // Eur. J. Biochem. 1976. -69, 141—151.

172. Pacaud, M. Purification and characterization of two novel proteolytic enzymes in membranes of Escherichia coli II J. Biol. Chem. 1982. - 257, 4333—4339.

173. Paech, K. Biochemie und Physiologie der sekundären Pflanzenstoffe. Berlin: Springer Verlag,, 1950.

174. Paech, C., Christianson, T., Blasig, S. Enhanced zymograms of proteases // Anal. Biochem. 1993. - 213, 440—441.

175. Pardee, D., Spudich, J. A. Purification of muscle actin // Methods Cell Biol. -1982.-24,271—290.

176. Pettijohn, D.E. Structure and properties of the bacterial nucleoid // Cell. -1982.-30, 667-669.

177. Poglazov, B.F. Actin and coordination of metabolic proteases // Biochemistry Internat. 1983. - 6, 757—766.

178. Polgar, L. Common Feature of the Four Types of Protease Mechanism // In: Fritz, H., Schmidt, I., and Turk, V. (Eds.) Proteinase Inhibitors and Biological Control. Biological Chemistry Hoppe-Seyler, 371 (Suppl. Issue), 1990. - Pp. 321—326.

179. Pollak, M.R. In: the Bacteria. I.C.Gunsalus, RJ.Statier (Eds). NY: Acad. Press, Vol. 14, 1962.-Pp. 121—122.

180. Pollard, T. D, Cooper, J. A. Actin and actin-binding proteins. A critical evaluation of mechanisms and functions // Annu. Rev. Biochem. 1976. - 55, 9871035.

181. Puck, T.T., Krystosek, A., Chan D.C. Genome regulation in mammalian cells // Somatic Cell and Molecular Genetics. 1990. - 16, 257—265.186

182. Randolph L.R., Oosterhof, D.K. Staphylocoocus aureus protease. A probe of exposed nonbasic histone sequences in nucleosomes // J. Biol. Chem. 1981. - 256, 24, 12687—12692.

183. Raser, K.J., Posner, A., Wang, K.K.W. Casein zymography: a method to study l>calpain, m-calpain and their inhibitory agents // Arch. Biochem. Biophys. 1995. -319,211—216.

184. Regnier Ph., Thang M.N. Subcellular distribution and characterization of endo- and exo- cellular proteases in E.coli // Biochimie. 1972. - 54. - Pp. 1227— 1236.

185. Rich, S.A. and Estes, J.E. Detection of conformational changes in actin by proteolytic digestion: evidence for a new monomeric species // J. Mol. Biol. 1976. -104, 777-792.

186. Rouviere-Yaniv, J. and Gros, F. Characterization of a novel, low-molecular-weight DNA-binding protein form Escherichia coli // PNAS. 1975. - 72, No. 9. -Pp. 3428-3432.

187. Rouviere-Yaniv, J. and Kjeldhaard, N.O. Native Escherichia coli HU protein is a hetertypic dimer // FEBS Letters. 1979. - 106, 297-300.

188. Schagger, H. and von Jagow, G. Tricine-Sodium Dodecyl-Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis for the Separation of Proteins in the range from 1 to 100 kDa // Analyt. Biochem. 1987. - 166, 368—379.

189. Schmid, M.B. More than just "histone-like" proteins // Cell. 1990. - 63, 451--453.

190. Schultz, J.S. and Gerhardt, P. Dialysis culture of microorganisms: design, theory and results // Bacteriol. Rev. 1969. - 33, 1—47.

191. Schwyter, D., Kron, S.J. Toyoshima, Y.Y., Spudich, J.A., Reisler, E. // J.Cell Biol.-1990.-Ill, 465—470.

192. Seifter, S., Gallop, P.M., Klein, Z., Mailman, E. Studies on collagen. II. Properties of purified collagenase and its inhibition // J. Biol. Chem. 1959. - 234, 285—294.

193. Seifter, S., Harper, E. Collagenases //Methods Enzymol. 1970. - 19, 1613— 1635.

194. Shoeman, R.L., Sachse, C., Honer, B., Mothes, E., Kaufmann, M., and Traub, P. // Am. J. Pathol. 1993. - 142,221—230.

195. Sonobe, S., Takahashi, S., Hatano, S., and Kuroda, K. Phosphorylation of Amoeba G-actin and its effect on actin polymerization // J. Biol. Chem. 1986. -261, No.31.- 14837-14843.

196. Spassky, A., Rimsky, S., Garreau, H., and Buc, H. HI a, an Escherichia coli DNA-binding protein which accumulates in stationary phase, strongly compacts DNA in vitro //NAR. 1984. - Vol. 12, No. 13. - Pp. 5321—5340.

197. Spudich, J.A. and Watt, S. The regulation of rabbit skeletal muscle contraction. I. Biochemical studies on the interaction of the tropomyosin-troponin complex with actin and proteolytic fragments of myosin // J. Biol. Chem. 1991. -246,4866-4871.

198. Stockem W. and Klopocka, W. Ameboid Movement and Related Phenomena // Int.Rev.of Cytology. 1988. - 112, 137-183.

199. Stockem, W., Gawlitta, W., Weber, K., Wehland, J. Morphology and function of the cortical filament layer in Amoeba proteus // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 1979. - 360,1375—1376.

200. Stoeva, S., Klunschmidt, T., Mesrob, B., Braunitzer, G. Primary structure of a zinc protease from Bacillus mesentericus strain 76 // Biochem. 1990. - 29, 2, 527—534.

201. Strzelecka-Golaszewska, H., Prochiewica, E., Drabikowski, W. Interaction of actin with divalent cations. I. The effect of various cations on the physical state of actin // Eur. J. Biochem. 1978. - 88, 219—227.

202. Long-range conformational effects of proteolytic removal of the last three residues of actin / Strzelecka-Golaszewska, H., Mossakowska, M., Wozniak, A., Moraczewska, J., andNakayama, H. I I Biochem. J. 1995.-307, 527-534.

203. Suzuki, H. and Terada, T. Removal of dodecyl sulfate from protein solutions // Anal. Biochem. 1988. - 172, 259—263.

204. Szybalski, W. Microbial selection. Gradient plate technique for study of bacterial resistance // Science. 1952. - 116, 46—48.

205. Takai, M., Imanaka, T., Alba, S. Nucleotide sequence and promoter region for the neutral protease gene from Bacillus stearothermohilus II J. Bacteriol. 1985. -163, 824—831.

206. Tilney, L. G., DeRosier, D. J., and Tilney, M. S. How Listeria exploits host cell actin to form its own cytoskeleton. I. Formation of a tail and how this tail might be involved in movement // J. Cell Biol. 1992(a) - 118, 71-81

207. Tilney, L.G., Connelly, P.S., and Portnoy, D.A. Actin filament nuclteation by the bacterial pathogen, Listeria monocytogenes I I J. Cell Biol. 1990. - 111, No. 6, 2979-2988.

208. Towbin, H., Staehelin, Th., and Gordon, J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. - 76, No. 9, 4350—4354.

209. Coevolution of actin and associated proteins: an alpha-actinin-like protein in a cyanobacterium (Spirulina platensis) / Usmanova A, Astier C, Mejean C, Hubert F, Feinberg J, Benyamin Y, Roustan C. // 1998. Pp. 379—383.189

210. Vallee, B.L. Zinc and Metalloenzymes / In: Advances in Protein Chemistry. Ed. by M.L.Anson, K.Bailey, J.T.Edsall. Vol. X. - NY: Acad. Press Inc., Publishers, 1955. - Pp. 317—384.

211. Vallee, B.L. and Wacker, E.C. Metalloproteins / In: The Proteins. Composition, Structure, and Function (Ed. By H.Neurath). Vol.V. - NY and London: Acad. Press, 1970. - Pp. 273—298.

212. Vanderkerhove, J., Weber, R. Actin amino-acid sequences // Eur. J. Biochem.- 1978. Vol. 90. - Pp. 451—462.

213. Histone-like proteins in the purified E.coli doxyribonucleoprotein / Varshavsky, A.J., Nedospasov, S.A., Bakayev, V.V., Bakayeva, T.G., and Georgia, G.P. // NAR. 1977. - 4, No. 8. - Pp. 2725—2745.

214. Vining, L.C. Global Regulation of Secondary Metabolism. Proceedings of the Ninth Symposium on the Actinomycetes, 1995 // Биотехнология. 1995. - N 7/8. -С. 183—190.

215. Vita, С., Dalzoppo, D., Fontana, A. Limited proteolysis of themolysin: Isolation and characterization of a partially active enzyme derivative // Biochemistry. 1985. - Vol. 24. -- Pp. 1798—1806.

216. Vitale, L., Renko, M., Lenarcic, В., Turk, V., Pokorney, M. Isolation and characteization of Streptomyces rimosus proteases // Sympos. Biolog. Hungarica. -1984. Vol. 25. - Pp. 413—424.

217. Waehneldt, T.V. Sodium Dodecyl Sulfate in Protein Chemistry // BioSystems.- 1975. Vol.6. - Pp. 176—187.

218. Myosin subfragment I induced polymerization of proteolytically modified actin / Wawro, В., Khaitlina, S.Yu., Pliszka, В., Strzelecka-Golaszewska, H. // J. Muscle Res. Cell Motility. - 1996. - Vol. 17. - Pp. 125—127.

219. Weber, K., Osborn, M. Some aspects of SDS-PAAGE usage // J.Biol.Chem. -1969. Vol. 244. - Pp. 4406—4412.

220. Effects of the actin-binding protein DNAse I on cytoplasmic streaming and ultrastructure of Amoeba proteus / Wehland, J., Weber, K., Gawlitta, W., Stockem, W. // Cell Tissue Res. 1979. - Vol.199. - Pp. 353—372.190

221. Weltman, J., Dawben, R.M. Relatedness among contractile and membrane proteins: evidence for evolution from common ancestral genes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1973. - Vol. 70. - Pp. 3230—3234.

222. WetLaufer, D.B. Folding of protein fragments // Adv. Protein Chem. 1981. -Vol. 34.-Pp. 61— 92.

223. Wilkins R.G. Kinetics of Formation and Dissociation of Manganese-Bovine Carbonic Anhydrase B // J. of the American Chemical Society. 1974. - Vol. 96. -Pp. 2241—2243.

224. Isolation and characterization of nucleoid proteins from Escherichia coli / K.Yamazaki, A.Nagata, Ya.Kano, F.Imamoto I I Mol. Gen. Genet. 1984. -Vol. 196.-Pp. 217—224.