Биосинтез эргоалкалоида агроклавина мутантным штаммом микроскопического гриба Claviceps fusiformis ВКМ F-2609 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Бойченко, Лилия Валентиновна

• Бойченко, Лилия Валентиновна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бойченко, Лилия Валентиновна

1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Общее представление об эргоалкалоидах

2.2. Биологическая активность эргоалкалоидов

2.3. Применение эргоалкалоидов в медицине и научных исследованиях

2.4. Продуценты эргоалкалоидов.

2.5. Биосинтез эргоалкалоидов у грибов рода Claviceps '

2.6. Регуляция биосинтеза эргоалкалоидов

2.7. Получение эргоалкалоидов

2.8. Агроклавин

2.8.1. Физико-химические свойства агроклавина

2.8.2. Продуценты агроклавина

2.8.3. Биологическая активность агроклавина

3. Материалы и методы

3.1. Использованные культуры, условия их хранения и выращивания

3.2. Выделение алкалоидов

3.3. Качественный и количественный анализ алкалоидных фракций

3.4. Мутагенез

3.5. Исследование активности агроклавингидроксилазы in vitro

3.6. Молекулярно-биологические методы

3.6.1. Исследование таксономического положенияС/ау/се/>5 sp.

ВКМ F

3.6.2. Скрининг продуцентов эргоалкалоидов

4. Результаты и их обсуждение 50 4.1. Выбор штамма-продуцента агроклавина

4.2. Определение таксономического положения штамма

Claviceps sp. ВКМ F

4.3. Мутагенез штамма C.fusiformis ВКМ F

4.4. Исследование активности агроклавингидроксилазы in vitro

4.5. Характеристика мутантного штамма C.fusiformis с

4.6. Оптимизация условий культивирования штамма C.fusiformis с

4.6.1. Подбор среды культивирования штамма С.fusiformis с

4.6.2. Оптимизация среды культивирования штамма C.fusiformis el

4.6.3. Оптимизация физико-химических условий культивирования штамма C.fusiformis с

4.7. Биосинтез агроклавина при культивировании штамма C.fusiformis с106 отьемно-доливным методом.

4.8. Хранение продуцента

4.9. Выделение агроклавина

4.10.Количественная оценка содержания агроклавина 96 4.11 .Использование полимеразной цепной реакции для поиска микро скопических грибов — продуцентов агроклавина и других эргоалкалоидов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биосинтез эргоалкалоида агроклавина мутантным штаммом микроскопического гриба Claviceps fusiformis ВКМ F-2609»

Актуальность темы. На протяжении столетий биологически активные вещества микробного происхождения имели большое значение для человечества. Одними из широко используемых и перспективных метаболитов терапевтического назначения являются индолсодержащие соединения, выделенные из склероций грибов рода Claviceps (ergot) и поэтому называемые эргоалкалоидами. Разнообразные по структуре, они используются для купирования и профилактики приступов мигрени, остановки послеродовых кровотечений, лечения болезни Паркинсона, шизофрении, опухолей молочной железы и мастопатии, артериальной гипотонии. Одним из направлений фармакологической химии является создание полусинтетических препаратов на базе эргоалкалоидов, обладающих более селективным действием. В настоящее время, внимание исследователей смещается от традиционно использующихся в медицине пептидных эргоалкалоидов к клавиновым, обладающим более простой структурой. К последним относится одно из наиболее перспективных соединений — агроклавин. Этот алкалоид, а также его многочисленные производные способны эффективно связываться с рецепторами нейромедиаторов и влиять на зависимые от них физиологические процессы. В частности, препараты на основе агроклавина являются ингибиторами секреции пролактина и могут быть использованы для лечения мастопатии и некоторых опухолей молочной железы. Этот алкалоид и его полусинтетические производные, взаимодействуя с дофаминовыми рецепторами, обладают анти-паркинсоническим эффектом. Значительный интерес к агроклавину проявляется в связи со способностью блокировать деление опухолевых клеток и усиливать противоопухолевое действие иммунной системы организма. Высокая биологическая активность агроклавина позволяет использовать его в фундаментальных областях науки как биохимический реактив. В этом качестве алкалоид предлагается крупными компаниями ICN Pharmaceuticals, Sigma-Aldrich и др.

В настоящее время в промышленном масштабе производятся в основном пептидные эргоалкалоиды, которые получают из паразитарных или сапрофитных культур грибов рода Claviceps, а также методом полного или частичного химического синтеза. Для выделения агроклавина используют лишь сапрофитные культуры. Несмотря на многочисленность ранее проведенных исследований эффективная технология получения метаболита отсутствует. К настоящему моменту имеется информация о распространении агроклавина, а также известны пути его биосинтеза. Описана зависимость образования алкалоида от состава среды и физико-химических условий выращивания культуры. Однако, анализируя литературные данные можно выделить следующие моменты, затрудняющие разработку метода получения агроклавина:

1. данных о перспективных продуцентах агроклавина недостаточно, а методы поиска новых продуцентов сложны, недостаточно надежны и требуют длительного времени;

2. оптимальные с точки зрения алкалоидообразования физиологические потребности продуцентов пггаммоспецифйчны;

3. уровень накопления агроклавина у известных продуцентов недостаточно высок;

4. агроклавин, как правило, выделяется в составе смеси соединений сходной структуры, для отделения примесей требуется многоэтапная очистка.

Таким образом, имеющиеся данные не могут служить в полной мере базой для разработки биотехнологии получения препарата агроклавина. Использование нового продуцента, как правило, требует проведения всего комплекса "исследований по оптимизации процесса биосинтеза.

Цель и задачи работы. Целью работы являлось создание способа микробиологического получения агроклавина и разработка экспресс-метода поиска его новых продуцентов на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Для достижения этих целей необходимо было решить следующие задачи: получить высокопродуктивную культуру методом мутагенеза коллекционного штамма-продуцента из рода С/т>/серт; исследовать зависимость алкалоидобразования у полученного мутанта от условий культивирования; определить наиболее благоприятные для биосинтеза агроклавина состав среды и условия выращивания продуцента; оптимизировать условия хранения мутантного штамма-продуцента; разработать лабораторный регламент получения агроклавина. подобрать олигонуклеотидные праймеры и условия проведения ПЦР для амплификации гена ДМАТ-синтетазы микроскопических грибов.

Научная новизна работы: на основании проведенного хемотаксономического и филогенетического анализа штамм Claviceps sp. В KM F-2609 идентифицирован как Claviceps fusiformis. получен мутантный штамм С. fusiformis с повышенным содержанием агроклави-на в суммарной смеси эргоалкалоидов. Установлено, что преимущественное накопление данного метаболита обусловлено, в основном, низкой активностью аг-роклавингидроксилазы, катализирующей превращение агроклавина в элимокла-вин. впервые созданы олигонуклеотидные праймеры и подобраны условия проведения ПЦР для выявления гена ДМАТ-синтетазы микромицетов родов Claviceps и Pénicillium. Полученные результаты использованы для создания экспресс-метода поиска продуцентов агроклавина и других алкалоидов с полной тетрациклической эрголиновой структурой.

Практическое значение результатов исследования: получен стабильный мутантный штамм С. fusiformis с 106 с повышенным уровнем накопления агроклавина, сохраняющий биосинтетическую активность в течение более двух лет. Оптимизированы состав среды и условия его выращивания, позволившие разработать биотехнологию получению алкалоида агроклавина с выходом до 3 г/л. Создан лабораторный регламент получения препарата агроклавина. разработан экспресс-метод поиска новых продуцентов агроклавина и других эргоалкалоидов среди микроскопических грибов родов Claviceps и Pénicillium с использованием ПЦР. На примере анализа зараженного зерна показана возможность использования данного метода для поиска и обнаружения продуцентов эргоалкалоидов в природных объектах.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на VII Молодежной конференции ботаников (Санкт-Петербург, 15-19 мая 2000), на Первом

Съезде микологов России (Москва, 11-13 апреля 2002), на Первом всероссийском конгрессе по медицинской микологии (Москва, 20-21 февраля 2003), на 7-м Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов "Биотехнология-2003" (Пущино, 24-25 ноября 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ: 4 статьи, 5 тезисов докладов, заявка на выдачу патента РФ, лабораторный регламент.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и их обсуждения, списка литературы (204 ссыпки). Работа изложена на 126 стр. машинописного текста, включает 22 таблицы и 36 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Бойченко, Лилия Валентиновна

ВЫВОДЫ

На основании анализа хемотаксономических и филогенетических признаков исследованный штамм Claviceps sp. В KM F-2609 идентифицирован как Claviceps fusiformis.

Методом ультрафиолетового мутагенеза получен стабильный штамм Claviceps fusiformis cl 06, обладающий повышенным в 35 раз уровнем синтеза агроклавина по сравнению с исходной культурой. Установлено, что преимущественное содержание агроклавина в смеси алкалоидов у мутантного штамма обусловлено низкой активностью агроклавингидроксилазы, катализирующей окисление агроклавина в элимоклавин.

Оптимизированы состав среды и условия культивирования продуцента, позволившие повысить содержание агроклавина в культуральной жидкости дополнительно в 2 раза (до 3 г/л). Подобраны условия хранения мутантного штамма, обеспечивающие жизнеспособность и стабильность биосинтетической активности в течение не менее 2 лет. Создан лабораторный регламент получения препарата агроклавина.

Впервые предложен экспресс-метод поиска микроорганизмов - продуцентов алкалоидов с полной тетрациклической эрголиновой структурой с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). Созданы олигонуклеотидные праймеры и подобраны условия проведения ПЦР для детекции гена диметилаллилтриптофансинтетазы микромицетов родов Claviceps и Pénicillium. Показана возможность применения метода для обнаружения продуцентов эргоалкалоидов в природных объектах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В качестве исходной культуры для получения продуцента агроклавина использован штамм С/<п>/с£рт эр. В КМ Р-2609. На основании анализа хемотаксономических и филогенетических признаков этот штамм был отнесен к виду СШгсерэ /^¡/огтгз. Методом ультрафиолетового мутагенеза культуры получено и протестировано более 200 клонов, из которых отобран штамм с 106 с повышенной в 35 раз способностью к синтезу агроклавина и сниженным содержанием побочных продуктов в смеси алкалоидов. Установлено, что причиной преобладающего накопления агроклавина мутантным штаммом С. /ш1/огт1з с 106 является низкая активность фермента агроклавингидроксилазы, осуществляющего окисление агроклавина в элимоклавин.

Изучена зависимость накопления алкалоида от состава среды и условий культивирования продуцента. Установлено, что максимальный уровень агроклавина наблюдался на среде, содержащей сахарозу, лимонную кислоту, дрожжевой экстракт, КН2Р04, М§804х7Н20, Ре804х7Н20, 2п804х7Н20, Ь-триптофан. Наибольшее воздействие на уровень алкалоидообразования оказывали триптофан, дрожжевой экстракт, фосфат калия, сульфат цинка, а также степень аэрации и температура культивирования. Синтез агроклавина стимулировался дефицитом источника азотного питания. При изменениях состава среды относительная доля агроклавина в смеси алкалоидов оставалась практически постоянной. В результате проведенных исследований предложен оптимальный состав среды и условия выращивания культуры, при использовании которых выход агроклавина увеличен до 3 г/л, что в 70 раз выше, чем у исходной культуры.

Показана перспективность отъемно-доливного способа культивирования продуцента, при котором сокращаются сроки ферментации, повышается скорость накопления и суммарный выход целевого продукта.

Установлено, что оптимальными условиями хранения штамма С./ш1/огт15 с 106 являются: температура -70°С, среда Т25, содержащая глицерин в концентрации 7% (об./об.).

На основании полученных результатов, разработаны технология и лабораторный регламент получения препарата агроклавина, отличающегося высокой степенью чистоты (не менее 98%) и низкой стоимостью. Ориентировочная себестоимость полученного по данной технологии препарата агроклавина — 1000 руб/г. Стоимость препарата, предлагаемого компаниями Sigma-Aldrich Corp. и ICN Pharmaceuticals составляет 15000 и 25000 руб/г, соответственно.

Впервые предложен экспресс-метод поиска микроорганизмов - продуцентов агроклавина и других алкалоидов с полной тетрациклической эрголиновой структурой с использованием полимеразной цепной реакции. Разработанный метод впервые применен для поиска и обнаружения продуцентов эргоалкалоидов при анализе зараженного зерна. Данный метод обладает более высокой скоростью исполнения и независимостью результатов от физиологических потребностей микроорганизма по сравнению с известными способами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бойченко, Лилия Валентиновна, 2004 год

1. Амелин А.В., Скоромец А.А., Игнатов ЮД. Роль серотонина и серотониновых рецепторов в патогенезе мигрени и механизмах действия антимигренозных препаратов. // Журнал неврологии и психиатрии. 2000. №7. С.55-58.

2. Арушунян А.В., Веприцкая И.Г., Акименко В.К., Козловский А.Г., Кулаев КС. Изучение полифосфатного обмена и цианрезистентности гриба Pénicillium sizovae в процессе алкалоидообразования. // Биохимия. 1985. Т.50. №11. С.1836-1842.

3. Бойес-Коркис Д.М., Флосс Х.Г. Биосинтез эргоалкалоидов. Некоторые новые результаты по старой проблеме. // Прикл. биохимия и микробиология. 1992. Т.28. № 6. С. 844-857.

4. Большая медицинская энциклопедия. / Под ред. Петровского Б.В. Т.23. Москва. Советская энциклопедия. 1984. 543с.

5. Винокурова Н.Г., Баскунов Б.П., Зеленкова Н.Ф., Аринбасаров М.У. Биосинтез алкалоидов грибом Pénicillium aurantiogriseum var. aurantiogriseum Dierckx (1901) BKM F-1298. // Микробиология. 2004. T.73. №4. В печати.

6. Винокурова Н.Г., Озерская С.М., Желифонова В.П., Аданин В.М. Таксономическое положение и азотсодержащие вторичные метаболиты Pénicillium vitale Pidoplichko et BILAI APUD BILAI. // Микробиология. 2000. T.69. №3. C.415-419.

7. Винокурова Н.Г., Решетилова T.A., Аданин B.M., Козловский А.Г. Исследование алкалоидного состава грибов Pénicillium palitans и Pénicillium oxalicum. Il Прикл. биохимия и микробиология. 1991. Т.27. Вып.6. С.850-855.

8. Винокурова Н.Г., Решетилова Т.А., Козловский А.Г. Биосинтез алкалоидов у Pénicillium palitans при различных условиях роста. // Прикл. биохимия микробиология. 1992. Т.28. №6. С.875-879.

9. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М.: Мир, 1991.543с.

10. Дудка И.А., Вассер С.П., Элланская И.А. и др. Методы экспериментальной микологии. 1982. Киев: "Наукова Думка". 550с.

11. Козловский А.Г, Винокурова Н.Г., Озерская С.М. Особенности алкалоидообразования у штаммов Pénicillium chrysogenum, выделенных из почв различных климатических зон //Микробиология. 1998. Т.67. №4. С. 483-487.

12. М.Козловский А.Г., Аринбасаров М.У., Соловьева Т.Ф., Аданин В.М., Григоров К, Ангелов Т.И., Слокоска Л.С., Ангелова М.Б. Алкалоиды гриба Claviceps sp. ИБФМ F-401. II Прикл. биохимия микробиология. 1980. Т.16. №4. С.569-572.

13. Козловский А.Г., Вепрщкая И.Г. Влияние источника углерода на биосинтез эргоалкалоидов и активность ферментов углеродного обмена у Pénicillium sizovae. //Микробиология. 1987. Т.56. №4. С.587-592.

14. А. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Аданин В. М., Седмера П. Вторичные метаболиты штаммов грибов, относящихся к Pénicillium fellutanum. II Прикл. биохимия и микробиология. \991в. Т.37. №4. С.408-414.

15. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Аданин В.М. Дикетопиперазиновые алкалоиды грибов Pénicillium piscarium. II Прикл. биохимия и микробиология. 2000. Т.36. №3. С.271-275.

16. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Желифонова В.П., Аданин В.М. Вторичные метаболиты грибов вида Pénicillium janczewskii. // Прикл. биохимия и микробиология. 1997г. Т.37. №1. С.70-74.

17. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Желифонова В.П., Аданин В.М. Микотоксины грибов Pénicillium vulpinum (Cooke & Massee) Seifert & Samson. Il Микробиология. 2000. T.69. №1. C.45-48.

18. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Желифонова В.П., Озерская С.М. Исследование алкалоидообразования у грибов рода Pénicillium серий Fellutana и Canescentia. //Микробиология. 1997а. Т.66. №4. С.514-519.

19. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Решетшова Т.А., Сахаровский В.Г., Баскунов Б.П., Селезнев С.Г. Новые метаболиты Pénicillium glandicola var. glandicola — гландиколин A и гландиколин В. // Прикл. биохимия и микробиология. 1994. Т.30. №3. С.410-414.

20. Козловский А.Г., Марфенина О.Е., Винокурова Н.Г., Желифонова В.П., Аданин В.М. Микотоксины микроскопических грибов рода Pénicillium, выделенные из почв естественных и антропогенно нарушенных экосистем. //Микробиология. 19976. Т.66. №2. С.206-210.

21. Козловский А.Г., Решетилова Т.А., Медведева Т.Н., Аринбасаров М.У., Сахаровский В.Г., Аданин В.М. Внутри- и внеклеточные алкалоиды Pénicillium roqueforti. //Биохимия. 1979. Т.44. Вып.9. С. 1691-1700.

22. Козловский А.Г., Решетилова Т.А., Сахаровский В.Г., Аданин В. М., Зякун А.М. Продукты метаболизма алкалоидов рокефортина и 3,12-дигидророкефортина у грибов Pénicillium farinosum. II Прикл. биохимия и микробиология. 1988. Т.24. №5. С.642-646.

23. Козловский А.Г., Соловьева Т.Ф. Влияние условий культивирования на биосинтез алкалоидов Pénicillium kapuscinskii. //Микробиология. 1986. Т.55. №1. С.34-38.

24. Козловский А.Г., Соловьева Т.Ф., Сахаровский В.Г., Аданин В.М. Биосинтез «необычных» эргоалкалоидов грибом Pénicillium aurantio-virens. // ДАН СССР. 1981. Т.260. №1. С.230-233.

25. Козловский А.Г., Соловьева Т. Ф., Слокоска Л., Григоров И. Влияние некоторых факторов на биосинтез алкалоидов культурой Claviceps sp. СРП. // Прикл. биохимия и микробиология. 1986. Т.22. №4. С.548-553.

26. Козловский А.Г., Стефанова-Аврамова Л.Н., Решетилова Т.А. Влияние возраста культуры и состава среды на биосинтез алкалоидов Pénicillium gorlenkoanum. И Микробиология. 1981. Т.50. №6. С. 1046-1050.

27. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух частях. Ч. 2. 12-е изд. М.: Медицина. 1998. 688 с.

28. Перт С.Д. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. 1978. М.: "Мир". 331с.

29. Решетилова Т.А. Алкалоиды грибов рода Pénicillium — распространение, биосинтез. // Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук. Пущино, ИБФМ РАН. 1995.403с.

30. Решетилова Т.А., Козловский А.Г. Биосинтез алкалоидов мицелиальными грибами. // Прикл. биохимия и микробиология. 1990. Т.26. №3. С.291-306.

31. Решетилова Т.А., Соловьева ТФ., Баскунов Б.П., Козловский А.Г. Исследование алкалоидообразования у некоторых грибов рода Pénicillium. //Микробиология. 1992. Т.61. №5. С.873-879.

32. Ржехачек 3. Некоторые аспекты регуляции синтеза эргоалкалоидов. // Прикл. биохимия и микробиология. 1992. Т.28. №6. С.828-843.

33. Ржехачек 3. Физиологические аспекты образования алкалоидов спорыньи. // Прикл. биохимия и микробиология. 1983. Т.19. №2. С.267-271.

34. Сидякина Т.М., Санцевич Н.И., Ежов В.А., Калакуцкий JI.B. Оптимизация условий консервации штамма продуцента элимоклавина Claviceps species ВКМ F-2609. // Прикл. биохимия и микробиология. 1990. Т.26. №5. С.709-713.

35. Соловьева Т.Ф., Баскунов Б.П., Бузилова И.Г., Решетпилова Т.А. Экзогенный триптофан как фактор, регулирующий алкалоидообразование у Pénicillium aurantio-virens Biourge ВКМ F-229. // Прикл. биохимия и микробиология. 1999. Т.35. №3. С.313-318.

36. Соловьева Т.Ф., Баскунов Б.П., Киселева О.В., Козловский А.Г. Биосинтез алкалоидов культурой Pénicillium puberulum. II Микробиология. 1992. Т.61. №3. С.З95-403.

37. Соловьева Т.Ф., Баскунов Б.П., Решетилова Т.А. Пуберулин А — новый дикетопиперазиновый алкалоид гриба Pénicillium rugulosum Thom ВКМ F-352. Il Прикл. биохимия и микробиология. 1997. Т.ЗЗ. №1. С. 66-69.

38. Соловьева Т.Ф., Решетилова Т.А., Баскунов Б.П., Григорян КМ., Козловский А.Г. Алкалоиды грибов рода Pénicillium, выделенных из продуктов питания. // Прикл. биохимия и микробиология. 1995. Т.31. №5. С.545-550.

39. Столярова Л.Г., Кадыков А.С. Опыт применения парлодела при лечении больных паркинсонизмом. // Журн. невропатол. и психиатр. 1986. №.2. С.219-222.

40. Шаин С.С. Биологические основы производства сырья спорыньи (Claviceps purpurea (Fr.) Tul.) в биотехнологической системе гриб—растение. // Прикл. биохимия и микробиология. 1996. Т. 32. №3. С. 275-279.

41. Abe М. Researches on ergot fungus. Separation of an active substances and its properties. // J. Agric. Chem. Soc. Japan. 1948. V.22. P.2-11.

42. Abe M., Yamano Т., Kozu, Y., Kusumoto M. Production of alkaloids by ergot from Elymus mollis. И J. Agric. Chem. Soc. Japan. 1955a. V.29. P.364-369.

43. Abe M, Yamano Т., Kozu Y., Kusumoto, M. Qualitative determination of the ergot alkaloids present in the sclerotia and saprophytic cultures of ergot fungi. // J. Agric. Chem. Soc. Japan. 1955b. V.20. P.697-703.

44. Agurell S.L., Ramstad E. Analysis of clavine alkaloids of Pennisetum ergot. //Lloydia.1962. V.25. P.67-77.

45. Agurell S.L., Ramstad E„ Ullstrup A.J. The alkaloids of Maize Ergot. // Planta Medica.1963. V.ll. P.392-399.

46. Arcamone F., Chain E.B., Ferretti A., Minghetti A., Pennella P., Tonolo A., Vero L. Production of a new lysergic acid derivative in submerged culture by a strain of Clavicepspaspali Stevens & Hall. // Proc.R.Soc.Lond. (Biol.). 1961. V.155. P.26-54.

47. Arntz C, Tudzynski P. Identification of genes induced in alkaloid producing cultures of Claviceps sp. // Curr. Genet. 1997. V.31. N.4. P.357-360.

48. Bacon C.W. Toxic endophyte-infected tall fescue and range grasses: historic perspectives. // J. Anim. Sci. 1995. V.73. P. 861-870.

49. Banks G.T., Mantle P.G., Szczyrbak C.A. Large-scale production of clavine alkaloids by Claviceps fusiformis // J. Gen. Microbiology. 1974. V.82. P. 345-361.

50. Bisping В., Rehm H.J. Multistep reactions with immobilized microorganism // Biotechnol. Appl. Biochemistry. 1988. V.10. P.87-98.

51. Brady L.R., Tyler V.E. Jr. A note on biosynthesis of clavine alkaloids in Claviceps purpurea strain 15B. // J. Amer. Pharm. Assoc. Sei. Ed. 1960. V.49. P.332.

52. Brar S.S., Giam C.S., Taber W.A. Patterns of in vitro ergot alkaloid production by Claviceps paspali and their association with different growth rates. // Mycologia. 1968. V.60. P.806-826.

53. Browning R., Schrick F.N., Thompson F.N., Wakefield T. Reproductive hormonal responses to ergotamine and ergonovine in cows during the luteal phase of the estrous cycle. //J. Anim. Sei. 1998. V.76. N.5. P.1448-1454.

54. Casey P.J., Seabra M.C. Protein prenyltransferases. // J. Biol. Chem. 1996. V.271. P.5289-5291.

55. Cenis J.L. Rapid extraction of fungal DNA for PCR amplification. // Nucleic Acids Res. 1992. V.20. P.2380.

56. Chao J.-M., DerMarderosian A.H. Identification of ergoline alkaloids in genus Argyreia and related genera and their chemotaxonomic implications in the Convolvulaceae. //Phytochemistry. 1973. V.12. P. 2435-2440.

57. Chao J.M., DerMarderosian A.H. Ergoline alkaloidal constituents of Hawaiian baby wood rose, Argyreia nervosa (Burm. F.) Bojer. // J. Pharmaceut. Sei. 1973. V.62. N.4. P.588-591.

58. Cheeke P.R. Endogenous toxins and mycotoxins in forage grasses and their effects on livestock. // J. Anim. Sei. 1995. V.73. P. 909-918.

59. Correia T., Grammel N., Ortel I., Keller U., Tudzyns/ci P. Molecular cloning and analysis of the ergopeptine assembly system in the ergot fungus Claviceps purpurea. II Chem. Biol. 2003. N.12. P.1281-1292.

60. Costa A., Bertazzo A., Allegeer G., Curcuruto O., Traldi P. Indole Alkaloids from the Roots of an African Plant Securidaca longipedunculata. Part I. // J.Heter.Chem. 1992. V.29. P. 1641-1647.

61. Crespo M.J., Abarcam M.L., Caban F.J. II J. Clin. Microbiol. 2000. V. 38. P.3872-3875.

62. Cress W.A., Chayet L.I., Railing H.C. Crystallization and partial characterization of dimethylallylpyrophosphate: L-tryptophan dimethylallyltransferase from Claviceps sp. SD58.113. Biol. Chem. 1981. V.256. P.10917-10923.

63. Crider A.M., Robinson J.M., Floss H.G., Cassady J.M., Clemens J.A. Ergot alkaloids. Synthesis of 6-alkyl-8-ergolenes and 6-methyl-8-aminoergolnes as potential prolactin inhibitors. //J. Med. Chem. 1977. V.20. N.ll. P. 1473-1477.

64. Davidson N., Edwardson J.A.,Schwab D.I. Agroclavine antagonized depression indused by noradrenaline in the cerebral cortex of the rat. // Nature. 1969. V.223. N.211.P.1166-1168.

65. Edwardson J.A., Macgregor L.A. The effect of progesteron and some other agents on the failure of pregnancy produced by feeding of agroclavine, an ergot alkaloid, in the rat. //Brit J. Pharmacol. 1969. V.35. N.2. P.367-369.

66. Eich E., Becker C., Sieben R., Maidhof A., Muller W.E. Clavines as antitumor agents. 3. Cytostatic activity and structure/activity relationships of 1-alkyl agroclavines and 6-alkyl 6-noragroclavines. // J. Antibiot. (Tokyo). 1986. V.39. N.6. P.804-812.

67. Eich E; Eichberg D., Muller W.E. Clavines. New antibiotics with cytostatic activity. // Biochem. Pharmacol. 1984. V.33. N.4. P.523-526.

68. Eich E., Eichberg D., Schwarz G., Clas F., Loos M. Antimicrobial activity of clavines. // Arzneimittelforschung. 1985. V.35. N.12. P. 1760-1762.

69. Ellis D.H. Zygomycetes. In: Microbiology and Microbial Infections. Topley L., Wilson A. (Eds.). London: Edward Arnold. 1997. P.247-277.

70. El-Refai A.M.H., Sallam L.A.R, Nairn N. The alkaloids of fungi. I. The formation of ergoline alkaloids by representative mold fungi. // Jap. J. Microbiol. 1970. V.14. P.91-97.

71. Erge D., Wenzel A., Groger D. Zur Physiologie der Alkaloid-bildung bei Claviceps-Arten.//Biochem. Physiol. Pflanzen. 1972. V.163. P.288.

72. Fink-Gremmels J., Georgiou N.A. Risk assessment of mycotoxins for the consumers. In: Residues of Veterinary Drugs and Mycotoxins in Animal Products. Ennen G., Kuiper H.A., Valentin A. (Eds.). Wageningen: Wageningen Press. 1996. P. 159-174.

73. Fiserova A, Kovaru H, Hajduova Z, Mares V, Starec M, Kren V, Flieger M, Pospisil M. Neuroimmunomodulation of natural killer (NK) cells by ergot alkaloid derivatives. // Physiol. Res. 1997. V.46. N.2. P.l 19-125.

74. Flieger M., Wurst M., Shelby R. Ergot alkaloids — sources, structures and analytical methods. // Folia microbiol. 1997. V.42. N.l. P. 3-30.

75. Floss H.G. Biosynthesis of ergot alkaloids and related compounds. // Tetrahedron. 1976. V.32. N.8. P.873-879.

76. Frisvad J.C., Filtenbord O. Terverticilate penicillia: chemotaxonomy and mycotoxin production. // Micologia. 1989. V.81. N.6. P. 837-861.

77. Frisvad, J.C. Modifications on media based on creatine for use in Penicillium and Aspergillus taxonomy. //Lett. Appl. Microbiol. 1993. V.16. P.154-157.

78. Gebler J.C., Poulter C.D. Purification and characterization of dimethylallyl tryptophan synthase from Clavicepspurpurea. // Arch Biochem Biophys. 1992. V.296. P.308-313.

79. Geisen R, Holzapfel W.H. Molecular characterization of PR toxin producing Penicillium roqueforti strains. // BlOspectrum. 1995. V.3. P.l01-109.

80. Geisen R. A multiplex PCR reaction for the detection of potential aflatoxin and sterigmatocystin producing fungi. // Systematic and Applied Microbiology. 1996. V.19. P.3 88-392.

81. Geisen R. PCR methods for the detection of mycotoxin-producing fungi. In: Applications of PCR in Mycology. Bridge P.D., Arora D.K., Reddy C.A., Elander R.P. (Eds.). 1998. P. 243-266.

82. Glatt H, Eich E, Pertz H, Becker C, Oesch F. Mutagenicity experiments on agroclavines, new natural antineoplastic compounds. // Cancer Res. 1987. V.47. N.7. P.1811-1814.

83. Glatt H., Pertz H., Kasper R., Eich E. Clavine alkaloids and derivatives as mutagens detected in the Ames test // Anticancer Drugs. 1992. V.3. N.6. P. 609-614.

84. Groger D. Uber die Bildung von Clavin-alkaloiden in Submers-kultur. // Arch. Pharm. 1959. V.292. P.389-392.

85. Groger D. Ergot alkaloids-recent advances in chemistry and biochemistry. In: FEMS Symp. 5. Antibiot. & Other Second. Metab. / Biosynth. Prod. 1978. P.201-205.

86. Groger D., Tyler V.E. Jr. Alkaloid production by Claviceps paspali in submerged culture. // Lloydia. 1963. V.26. N.2. P.174-177.

87. HaladaP., SedmeraP., Havlicek V., Jegorov A., CvakL., RyskaM. Mass spectrometric amino acid structure determination in ergopeptines. // Eur. J. Mass Spectrom. 1998. V.23. N.4. P.385-392.

88. Handbook of experimental pharmacology. V. 49. Ergot alkaloids and related compounds. B.Berde, H.O.Schild (Eds.). Berlin: Springer-Verlag. 1978.1003p.

89. Heinstein P.F. Lee S.L., Floss H.G. Isolation of dimethylallylpyrophoshate: tryptophan dimethylallyl transferase from the ergot fungus (<Claviceps species). // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1971. V.44. P. 1244-1249.

90. Hesse M. Alkaloids. Zurich: Verlag Helv. Chim. Acta. 2002. 414p.

91. Hibasami H, Nakashima K, Pertz H, Kasper R, Eich E. Inhibitory effects of novel festuclavine derivatives on nucleoside uptake and incorporation into DNA and RNA in human lymphoid leukemia Molt 4B cells. // Cancer Lett. 1990. V.50. N. 2. P.161-164.

92. Hohn T.M., McCormick S.P., Desjardirts A.E. Evidence for a gene cluster involving trichothecene-pathway biosynthetic genes in Fusarium sporotrichoides. II Curr. Genet. 1993. V.24. P.291-295.

93. Jacobs W.A., GouldR.G. II J. Biol. Chem. 1937. V.120. P.141-145.

94. Jarvik M.E. Drugs used in the treatment of psychiatric disorders. In: The Pharmacological Basis of Therapeutics. Goodman L.S., Gilman A. (Eds.). London: MacMillan. 1970. P. 151-203.

95. Jellinger K Lisuride in the combination treatment of Parkinson disease II Wien Med. Wochenschr. 1987. V.37. N. 7-8. P. 155-159.

96. Jukes T.H. & Cantor C.R. Evolution of protein molecules. In: Mammalian Protein Metabolism. Munro H.N. (Ed.). New York: Acad. Press. 1969. P. 21-132.

97. Kelkar H.S., Keller N.P., Adams T.H. Aspergillus nidulans stc P encodes an O-methyltransferase that is required for sterigmatocystin biosynthesis. // Appl. Environment. Microbiol. 1996. V.62. N.10. P.4296-4298.

98. Keller N.P., Hohn T.M. Metabolic Pathway Gene Clusters in Filamentous Fungi. // Fungal Genetics and Biology. 1997. V. 21. P. 17-29.

99. Keller U., Zocher R., Kleinkauf H. Biosynthesis of ergotamine in protoplasts of Clavicepspurpurea. II J.Gen. Microbiol. 1980. V. 118. Part2. P.485-494.

100. Kim I.-S., Kim S.-U., Anderson J.A. Microsomal agroclavine hydroxylase of Claviceps species. II Phytochemistry. 1981. V.20. N. 10. P.2311 -2314.

101. Kozlovsky A.G. Producers of ergot alkaloids out of Claviceps genus. In: Ergot the genus Claviceps. Kren V., Cvak L. (Eds.). Harwood Academic publishers. 1998. P.479-499.

102. Kren V., Mehta P., Rylko V., Flieger M„ Kozova J„ Sajdl P., Rehacek Z. Substrate regulation of elymoclavine formation by some saccharides. // Zentralbl. Mikrobiol. 1987. V.142. P.71-85.

103. Krepelka J., Berar M., Semonski M. Some 2-substitution derivatives of D-6-methylergoline-I. // Coll. Chech. Chem. Comm. 1977. V.42. N.10. P. 2953-2956.

104. Krupinski V., Robbers J.E., Floss H. Physiological study of ergot: induction of alkaloid synthesis by tryptophan at the enzymatic level. // J. Bacteriol. 1976. V.125. N.l. P.158-165.

105. Lange K W. Clinical pharmacology of dopamine agonists in Parkinson's desease. // Drugs Aging. 1998. V.13.N.5. P.381-389.

106. Larena I, Salazar O., Gonzalez V., Julian M. C., Rubio V. Design of a primer for ribosomal DNA internal transcribed spacer with enhanced specificity for ascomycetes. //Journal of Biotechnology. 1999. V.75. P.187-194.

107. Loveless A.R. Claviceps fusiformis sp. nov., the casual agent of an agalactia of sows. //Brit. Mycol. Soc. 1967. V.50. N.l. P. 15-18.

108. Lyons P.C., Plattner R.D., Bacon C.W. Occurrence of peptide and clavine ergot alkaloids in tall fescue grass. // Science. 1986. V.232. N.4749. P.487-489.

109. Madras B.K., Fahey M.A., Canfield D.R., Spealman R.D. D1 and D2 dopamine receptors in caudate-putamen of nonhuman primates (Macaca fascicularis). II J.Neurochem. 1988. V.51. N.8. P.934-943.

110. Makarieva T.N., Ilyin S.G., Stonik V.A., Lyssenko K.A., Denisenko V.A. Pibocin, the first ergoline marine alkaloid from the far-eastern ascidian Eudistoma sp. // Tetrahedron Letter. 1999. V.40. P.1591-1594.

111. Mantegani S., Brambilla E., Varasi M. Ergoline derivatives: receptor affinity and selectivity. // Farmaco. 1999. V.54. N.5. P.288-296.

112. Mantle P.G. Studies on Sphacelia sorghi McRae, an ergot of Sorghum vulgare Pers. //Annals Appl. Biol. 1968. V.62. N.4. P.443-446.

113. Mantle P.G. Interruption of early pregnancy in mice by oral administration of agroclavine and sclerotia of Claviceps fusiformis. II J. Reprod. Fertil. 1969. V. 18. N.l. P.81-88.

114. Marahiel M.A., Stachelhaus T., Mootz H.D. Modular peptide synthetases involved in nonribosomal peptide synthesis. //Chem. Rev. 1997. V.97: P.2651-2673.

115. Mary N.Y., Kelleher W.J., Schwarting A.E. Production of lysergic acid derivatives in submerged culture. III. Strain selection on defined media. // Lloydia. 1965. V.28. P.218-225.

116. McCormick S.P., Hohn T.M., Desjardins A.E. Isolation and characterization of Tri3, a gene encoding 15-O-acetyltransferase from Fusarium sporotrichoides. II Appl. Environment. Microbiol. 1996. V.62. P. 353-359.

117. Menge M., Mukherjee J., Scheper T. Application of oxygen vectors to Claviceps purpurea cultivation. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001. V.55. N.4. P.411-416.

118. Montastruc J.L., Rascol O., SenardJ. M. Treatment of Parkinson's disease should begin with a dopamine agonist. // Mov. Disord. 1999. V. 14. N. 5. P.725-730.

119. Mothes K. Weygang F., Groger D., Grisebach H. Untersuchunger zur Biosynthese der Mutterkorn-alkaloide. // Z. Naturforsch. 1958. V. 13b. P.41-46.

120. Muehlbacher M., Poulter C.D. Isopentenyl-diphosphate isomerase: inactivation of the enzyme with active-site-directed irreversible inhibitors and transition-state analogues. II Biochemistry. 1988. V.27. N.19. P. 7315-7528.

121. Murphy J.C., Bultman T.L. Effect of natural and artificial herbivory on endophyte-infected tall fescue, Festuca arundinacea and response by the aphid, Rhopalosiphum padi. //Neotyphodium/grass interactions. 1997. P. 187-189.

122. Nairn N. Alkaloid production by some local fungi. // Zbl. Bakteriol. II. Abt. 1980. V.135. N.8. P.715-720.

123. Neethling D.C., McGrath R.M. Metabolic development and mitochondrial changes during cyclopiazonic acid production in Penicillium cyclopium. II Can. J. Microbiol. 1977. V.23. P.856-872.

124. O'Donell JC, Cigelnic E., Casper H.H. Molecular phylogenetic, morphological and mycotoxin data support reidentification of the Quora mycoprotein fungus as Fusarium venenatum. II Fung. Genet. Biol. 1998. V.23. N. 1. P.57-67.

125. Ogunlana E.O., Ramstad E., Tyler V.E. Effects of some substances on ergot alkaloid production. //J. Pharmac. Sei. 1969. V.58. N.l. P. 143-145.

126. Ohkanda J., Knowles D.B., Blaskovich M.A., Sebti S.M., Hamilton A.D. Inhibitors of protein farnesyltransferase as novel anticancer agents. // Current Topics in Medicinal Chemistry. 2002. V.2. N.3. P.303-323.

127. Otsuka H., Quigley F.R., Groger D., Anderson J.A., Floss H.G. In vivo and in vitro evidence for N-methylation as the second pathway-specific step in ergoline biosynthesis. // Planta Medica. 1980. V.40. P. 109-114.

128. Pachlatko P., Tabacik C., Acklin W., Arigoni D. Naturliche und unnaturliche Vorlaufer in der Biosynthese der Ergotalkaloide. II Chimia. V.29. P. 526-530.

129. Panaccione D.G. Multiple families of peptide synthetase gene from ergopeptine-producing fungi. // Mycol. Res. 1996. V.100. N.4. P.429-436.

130. Pazoutova S. The phylogeny and evolution of the genus Claviceps. H Mycol. Res. 2001. V. 105. N.3. P.275-283.

131. Pazoutova S., Flieger M., Sajdl P., Rehacek Z. The relationship between intensity of oxidation metabolism and predominance of agroclavine or elymoclavine in submerged Claviceps purpurea cultures. // J. Nat. Prod. 1981. V.44. N.2. P.225-235.

132. Pazoutova S., Рокоту V., Rehacek Z. The relationship between conidiation and alkaloid production in saprophytic strains of Claviceps purpurea. II Can. J. Microbiol. 1977. V.23.N.9. P.l 182-1187.

133. Peleg Y., Metzenberg R.L. Analysis of the DNA-binding and dimerization activities of Neurospora crassa transcription factor NUC-1. // Mol. Cell. Biol. 1994. V.14. N.9. P.7816-7826.

134. Pertz H. Naturally occurring clavines: antagonism / partial agonism at 5-HT2A receptors and antagonism at alpha 1-adrenoreceptors in blood vessels. // Planta Med. 1996. V.62. N.5. P.387-392.

135. Porter J.K., Bacon C.W., Robbins J.D. Lysergic acid amide derivatives from Balansia epichloe and Balansia claviceps (Clavicipitaceae). // J. Nat. Prod. 1979. V.42. N.3. P.309-314.

136. Porter J.K., Bacon C. W., Robbins J.D., Be tow ski D. Ergot alkaloid identification in Clavicipitaceae systemic fungi of pasture grasses. // J. Agric. Food Chem. 1981. V.29. N.3. P.653-659.

137. Proctor R.H., Hohn T.M. Aristololochen synthase: isolation, characterization, and bacterial expression of a sesquiterpenoid biosynthetic gene (Aril) from Penicillium roquefortii. //J. Biol. Chem. 1993. V.268. P.4543-4548.

138. Puc A., Socic H. Carbohydrate nutrition of Claviceps purpurea for alkaloid production, related to the osmolality of media. // Europ. J. Appl. Microbiol. 1972. V.4. P.283-290.

139. Rao K.K., Patel V.P. Effect of tryptophan and related compounds on alkaloid formation in Aspergillus fumigatus. I I Lloydia. 1974. V.37. N.4. P.608-610.

140. Rehacek Z, Sajdl P., Kozova J., Ricicova A. Physiological activities of ergoline alkaloids in submerged cultures of Claviceps paspali and Claviceps purpurea. II Folia Microbiol. 1972. V.17. P.306-313.

141. Rehacek Z. Physiological controls and regulation of ergot alkaloid. formation. I I Folia Microbiol. 1991. V.36. N.4. P.323-342.

142. Rehacek Z, Sajdl P. Ergot alkaloids. Chemistry, biological effect, biotechnology. Praha: Academia. 1990. 383p.

143. Ricicova A., Flieger M., Rehacek Z. Quantitative changes of the alkaloid complex in a submerged culture of Claviceps paspali. II Folia Microbiol. 1982. V.27. P.433-445.

144. Rieder B, Han M, Keller U. D-Lysergyl peptide synthetase from the ergot fungus Claviceps purpurea. II J. Biol. Chem. 1996. V. 271. N.44. P. 27524-27530.

145. Saitou N„ Nei M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees. // Mol. Biol. Evol. 1987. N.4. P.406-425.

146. SambrookJ, Fritsch E.F, Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1989.1200p.

147. Sallam L., El-Refai A.M., Nairn N. Detection of indole alkaloids in representative fungi. //Jap. J. Microbiol. 1969. V.13. P.218-219.

148. Schmauder H.P., Groger D. Selection of ergot alkaloid producers by induced mutagenesis. // Acta Biotechnol. 1983. V.3. P. 379-382.

149. Scandola M. Structural Study of Alkaloids from Securidaca longipedunculata Roots. Part n. // J.Heter.Chem. 1994. V.31. P.219-224.

150. Schardl C.L. , Wang J. Dimethylallyltryptophan synthase genes associated with endophyte ergot alkaloids. // XXI Fungal Genetics Conference. Asilomar. California. March 2001. P.482.

151. Schwarz G., Eich E. Influence of ergot alkaloids on growth of Streptomyces purpurescens and production of its secondary metabolites. // Planta Med. 1983. V.47. P.212-214.

152. Seeman P., Niznik H.B. Dopamine D1 receptor pharmacology. // ISI Atlas of Sci. Pharmacol. 1988. V.2. P.161-170.

153. Shapira R., Paster N. Eyal O., Menasherov M., Mett A., Salomon R. Detection of aflatoxigenic molds in grains by PCR. // Appl. Environ. Microbiol. 1996. V.62. N.9. P.3270-3273.

154. Shu Y.Z. Recent natural products based drug development: a pharmaceutical industry perspective. //J. Nat. Prod. 1998. V.61. N.8. P.1053-1071.

155. Sibley D.R., Creese I. Interactions of ergot alkaloids with anterior pituitary D-2 dopamine receptors. // Mol. Pharmacol. 1983. V.23. N.6. P.585-593,

156. Smedsgaard J., Frisvad J. C. Terverticillate penicillia studied by direct electrospray mass spectrometric profiling of crude extracts. I. Chemosystematics. // Biochem. Syst. Ecol. 1997. V.25. P.51-64.

157. Spilsbury J.F., Wilkinson S. The isolation of festuclavine and two new clavine alkaloids from Aspergillus fumigatus Fres. // J. Chem. Soc. 1961. V.5. N.10. P.2085-2091.

158. Starec M., FiserovaA., RosinaJ., MalekJ., KrsiakM. Effect of agroclavine onNK activity in vivo under normal and stress conditions in rats. // Physiol. Res. 2001. V.50. N.5. P.513-519.

159. Stoll A. 1918. Swiss patent. N.79879.

160. Stone T. W. Further evidence for a dopamine receptor stimulating action of an ergot alkaloid. // Brain Res. 1974. V.72. P. 177-180.

161. Strickland J.R, Oliver J. W., Cross D.L. Fescue toxicosis and its impact on animal agriculture. // Veterinary and Human Toxicology. 1993. V. 35. No. 5. P. 454-464.

162. Sweeney M.J., Dobson A.D.W. Molecular biology of mycotoxin biosynthesis. // FEMS Microbiology letters. 1999. V.175. P.149-163.

163. Taber W.A., Vining L.C. The influence of certain factors on the in vitro production of ergot alkaloids by Claviceps purpurea (Fr.) Tul. // Can. J. Microbiol. 1958. V.45. P.611-620.

164. Tanda S. Mycological studies on the ergot in Japan (XXIII): Taxonomic reexamination of ergots on eulalia (Miscanthus sinensis) and it allies. // J. Agric. Sei. of the Tokyo University Agriculture. 1991. V.35. P.213-229.

165. Tanda S., Kawatani T. A new species of Claviceps parasitic on Imperata cylindrica Beauv. var hoenigii Durand et Schinz. // Trans. Mycol. Soc. Jap. 1976. V.17. N.3. P.289-294.

166. Tanner J.R. St. Anthony's fire, then and now: a case report and historical review. // Can. J. Surg. 1987. V.30. N.4. P.291-293.

167. Teuscher E. Uber die Zusammenhange zwischen aktiver Aufnahme von Tryptophan und Alkaloidbiogenese bei Claviceps purpurea (Fries) Tulasne. // Flora. 1964. V.155. P.80-89.

168. Tonollo A., Udvardy-Nagy E. Production of clavine-alkaloids by Claviceps fusiformis (Loveles) in submerged culture. // Acta Microbiol. Acad. Sei. Hung. 1968. V.15. P.29-33.

169. Tsai H.F., Wang H., Gebler J.C., Poulter C.D., Schardl C.L. The Claviceps purpurea gene encoding dimethylallyltryptophan synthase, the committed step forergot alkaloid biosynthesis. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. V. 216. N.l. P.l 19-125.

170. Tudzynski B., Holter K. The gibberellin biosynthetic pathway in Gibberella fujikuroi: evidence for a gene cluster. // Fungal Genet. Biol. 1998. V.25. P. 157-170.

171. Tudzynski P, Holter K, Correia T, Arntz C, Grammel N, Keller U. Evidence for an ergot alkaloid gene cluster in Claviceps purpurea. I I Mol. Gen. Genet. 1999. V.261. N.l. P.133-141.

172. Tupper D.E., Pullar I.A., Clemens J.A., Fairhurst J., Risius F.C., Timms G.H., Wedley S. Synthesis and dopamine antagonists activity of 2-thioether derivatives of the ergoline ring system. II J. Med. Chem. 1993. V.36. N.7. P.912-918.

173. Tyler V.E. Jr. Some factors influencing the saprophytic production of clavine alkaloids by Claviceps purpurea. //J.Am.Pharm. Assoc.Sci.Ed. 1958. V.47. P.787-791.

174. Vaidya H.C., Desai J.D. Alkaloid production in Claviceps sp. strain SD-58: physiology of phosphate effect. // Indian J. Biochem. Biophys. 1983. V.20. P. 222-225.

175. Van de Peer Y., de Wachter R. TREECON for Windows: a software package for the construction and drawing of evolutionary trees for the Microsoft Windows environment. // Comput. Appl. Biosci. 1994. V. 10. P. 569-570.

176. Van Dongen P.W., de Groot A.N. History of ergot alkaloids from ergotism to ergometrine. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1995. V.60. N.2. P.109-116.

177. Vining L. C. Effect of tryptophan on alkaloid biosynthesis in cultures of a Claviceps spesies. // Can. J. Microbiol. 1970. V.16. P.473-480.

178. Vining L.C., Taber W.A. Studies on biosynthesis of ergot alkaloids. // Can. J. Microbiol. 1963. V.9. P. 291-295.

179. Walzel B., Riederer B., Keller U. Mechanism of alkaloid cyclopeptide synthesis in the ergot fungus Claviceps purpurea. II Chem. Biol. 1997. V.4. N.3. P.223-230.

180. Wang L.K., Reeves C., Gaucher G.M. Isolation and sequencing of genomic DNA clone containing the 3 terminus of the 6-methysalicylic acid polyketide synthetase gene of Penicillium urticae J I Can. J. Microbiol. V.37. P.86-95.

181. Wang K., Ohnuma S.-I. Chain-length determination mechanism of isoprenyl diphosphate synthases and implications for molecular evolution. // TIBS. 1999. N.24. P. 445-451.

182. Wang J., Machado C., Schardl C.L. The determinant step in ergot alkaloid biosynthesis by a grass endophyte. // Fungal Genet. Biol. 2004. In press.

183. Yamano T., Kishino K., Yamantodani S., Abe M. Investigation on ergot alkaloids found in cultures of Aspergillus fumigatus. II Takeda Kenkyusho Nempo (Annual Report Takeda Research Laboratories). 1962. V.21. P.95-96.

184. Yamatodani S., Yamamoto I. Peptide-type ergot alkaloids produced by Hypomyces aurantius. //Nippon Nogeikagaku. Kaishi. 1983. V. 57. P.453-456.

185. Yates S.G., Fenster J.C., Bartelt R.J. Assay of tall fescue seed extracts, fractions, and alkaloids using the large milkweed bug // J. Agric. Food Chem. 1989. V. 37. P.354-357.

186. Yu J., Chang P.K., Cary J.W., Wright M.,Bhatnagar D., Clevend T., Payne G.A., Linz J. Comparative mapping of aflatoxin pathway gene clasters in Aspergillus parasiticus and Aspergillus flavus. I I Appl. Environ. Microbiology. 1995. V.61. P.2365-2371.

187. Российская академия наук Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина

188. УТВЕРЖДАЮ Зам .директора ИБФМ РАН Докт.биол.наук

189. М.Б.Вайнштейн «30 » марта 2004 г.1. Лабораторный регламентполучения препарата агроклавина1. Авторы: Л.В. Бойченко

190. Д.М. Бойченко Н.Ф.Зеленкова Т.А.Решетилова М.У.Аринбасаров1. Пущино, 2004 г.1. СОДЕРЖАНИЕстр.1. Введение 3

191. Раздел I. Характеристика конечного продукта производства 4

192. Раздел И. Биохимическая и химическая схема производства 6

193. Раздел П1. Технологическая схема производства 6

194. Раздел IV. Промежуточные продукты, сырье и материалы 8

195. Раздел V. Перечень необходимого оборудования 10

196. Раздел VI. Изложение технологического процесса 10 Раздел VII. Отходы производства, их использованиеи обеззараживание 17

197. Раздел VIII. Контроль производства 18 Раздел IX. Техника безопасности и производственная санитария. Токсикологическая характеристика сырья и материалов, первая помощь, мерыпрофилактики и средства индивидуальной защиты 19

198. Раздел X. Перечень производственных инструкций 23

199. Раздел XI. Технико-экономические нормативы 23

200. Раздел XII. Информационные материалы 241. Введение

201. Настоящий регламент является результатом оптимизации основных технологических параметров (состав среды, аэрация, температура, рН и др.) выращивания культуры продуцента С/оу/се/ю/ш1/огтп1б с 106, выделения и очистки агроклавина.

202. Раздел 1. Характеристика конечного продукта производствао л

203. Содержание основного вещества в продукте не менее 95%

204. Удельное вращение в пиридине =-182° (С=0,5),в хлороформе Wo =-155° (С=0,9) Масс-спектр, m/z: 238 (М+); 237 (М-Н, 100%), 223,222, 221, 207,196, 180,167 и

205. Посторонних примесей при просматривании ТСХ пластин в УФ-свете (в виде поглощающих зон при других значениях Rf или светящихся пятен при близких Rf) и при опрыскивании раствором Эрлиха практически не обнаруживается.