Биомаркеры воспаления у больных бронхиальной астмой в индуцированной мокроте и выдыхаемом воздухе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.05, кандидат медицинских наук Дулина, Тамара Рамазановна

• Дулина, Тамара Рамазановна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Дулина, Тамара Рамазановна

ВВЕДЕНИЕ.стр.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ПАТОГЕНЕЗЕ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ - ОСНОВА ПОИСКА НЕИНВАЗИВНЫХ БИОМАРКЕРОВ ЗАБОЛЕВАНИЯ.стр.

1.1 Роль воспаления в развитие бронхиальной астмы. стр.

1.1.2 Морфологические аспекты патогенеза бронхиальной астмы.стр.

1.1.3 Ключевые клетки и медиаторы.стр.

1.2 Оксид азота - биомаркер бронхиальной астмы.стр.

1.3 Конденсат выдыхаемого воздуха.стр.

1.4 Метод индуцированной мокроты и возможность его применения для оценки характера и интенсивности воспаления дыхательных путей.стр.

1.5 Резюме.стр.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.стр.

2.1 Пациенты.стр.

2.2 Получение и обработка индуцированной мокроты.стр.

2.3 Изучение соединений, растворимых в индуцированной мокроте.стр.

2.3.1 Определение содержания нитритов.стр.

2.3.2 Определение эозинофильного катионного протеина .стр.

2.4 Забор и исследование бронхоальвеолярного лаважа и биоптатов стенок бронхов.стр.

2.4.1 Техника забора и обработки бронхоальвеолярного лаважа.стр.

2.4.2 Техника забора и анализа биоптатов слизистой оболочки бронхов.стр.

2.4.3 Исследование экзогенного биосинтеза эйкозаноидов.стр.

2.5 Определение содержания оксида азота в выдыхаемом воздухе.стр.

2.6 Статистическая обработка результатов.стр.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.стр.

3.1 Исследование клеточного состава индуцированной мокроты и бронхоальвеолярного лаважа.стр.

3.1.1 Резюме.стр.

3.2 Морфометрический анализ состояния стенки бронхов.стр.

3.2.1 Резюме.стр.

3.3 Изучение экзогенного биосинтеза эйкозаноидов гранулоцитами жидкости бронхоальвеолярного лаважа.стр.

3.3.1 Резюме.стр.

3.4 Взаимосвязь цитологического состава индуцированной мокроты с содержанием оксида азота в выдыхаемом воздухе и показателями спирометрии.стр.

3.4.1 Резюме.стр.

3.5 Сравнение концентрации оксида азота в выдыхаемом воздухе и содержания нитратов в плазме крови и индуцированной мокроте.стр.

3.5.1 Резюме.стр.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.стр.

ВЫВОДЫ.стр.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биомаркеры воспаления у больных бронхиальной астмой в индуцированной мокроте и выдыхаемом воздухе»

Актуальность проблемы

Бронхиальная астма (БА) является одним из самых частых бронхолегочных заболеваний человека во всех возрастных группах [37]. Прогресс в изучении патогенеза БА привел к пониманию значения в развитии заболевания двух факторов — воспаления и гиперреактивности бронхов. Возможность мониторирования указанных составляющих патологического процесса у больных БА неодинакова. О гиперреактивности бронхов можно судить по изменению пиковой скорости выдоха (ПСВ) в течение дня и ото дня ко дню с помощью специального портативного прибора пикфлоуметра. Изменение ПСВ на 20% и более в течение дня характерно для БА. Представление о степени повышения тонуса гладкой мускулатуры бронхов, как и о величине бронхиальной обструкции, дает также исследование функции внешнего дыхания (ФВД) особенно при использовании теста с бронхолитиками. Гораздо меньше возможностей для неинвазивной оценки второго фактора. БА - хронического воспаления дыхательных путей. Воспаление при БА чаще всего имеет иммунную природу, является аллергическим воспалением. Описанию морфологического, прежде всего, клеточного субстрата такого специфического воспаления посвящены многочисленные исследования, проводимые с начала XX века до наших дней. Значительно продвинули наше понимание механизмов развития бронхиальной астмы комплексные бронхоскопические исследования с биопсией слизистой и получением лаважной жидкости [31]. Однако эта техника имеет свои ограничения и не относится к неинвазивной. Поэтому не случайно в опубликованном в 1993 году совместном докладе Национального института сердца, легких, крови (США) и Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) «Бронхиальная астма. Глобальная стратегия» в рекомендациях для дальнейших исследований подчеркивается необходимость развития «.надежных неинвазивных тестов, которые могли бы отражать степень воспаления» [6]. За прошедшие 15 лет положение изменилось. Установлено, что к патогенезу БА имеет отношение оксид азота (NO), содержание которого в выдыхаемом воздухе может быть измерено с помощью хемилюминесцентного анализатора Logan Research 2149. В настоящее время повышение концентрации оксида азота в выдыхаемом воздухе признано маркером БА [5]. Вместе с тем, этот неинвазивный метод пока еще дорог и мало доступен. Кроме того, не вполне ясно в какой степени оксид азота связан с воспалением, как таковым, либо с нейрогенной регуляцией дыхательных путей.

Для оценки состояния больных БА может быть исследован конденсат выдыхаемого воздуха, в котором содержатся Н2О2, гистамин, лейкотриены, 8-изопростан, нитротирозин и другие компоненты. Однако все эти вещества находятся в конденсате в чрезвычайно низких концентрациях. Для их определения требуются дорогие высокочувствительные приборы типа атомно-адсорбционного спектрометра. Поэтому соотношение «цена — информация» при исследовании конденсата выдыхаемого воздуха даже более неблагоприятное, чем при определении оксида азота в выдыхаемом воздухе.

Наиболее оптимально это соотношение при использовании метода индуцированной мокроты (ИМ), который заключается в стимуляции усиления выделения мокроты путем ингаляции 3-5 % гипертонического раствора хлорида натрия. К достоинствам метода ИМ относятся: неинвазивность, доступность, возможность оценить как клеточные элементы, так и растворимые вещества, участвующие в воспалении, отсутствие противопоказаний и сколько-нибудь выраженных побочных эффектов. В настоящее время метод применяется главным образом для диагностики рака легких и получения информации о возбудителях инфекции органов дыхания. Однако изучение цитологического состава индуцированной мокроты, по-видимому, может дать возможность оперативно и достоверно судить об активности воспаления дыхательных путей, а исследование цитокинов, содержащихся в супернатанте индуцированной мокроты, способно пролить дополнительный свет на патогенез бронхиальной астмы. Ценность метода ИМ возрастает в последнее время в связи с активными попытками использовать для лечения бронхиальной астмы препараты, альтернативные кортикостероидной терапии, например ингаляции алкилирующего цитостатика мелфалана [32].

Цель исследования

Изучить биомаркеры воспаления в индуцированной мокроте и выдыхаемом воздухе у взрослых и детей с бронхиальной астмой.

Задачи исследования

1. Оценить безопасность и информативность метода индуцированной мокроты для оценки интенсивности воспаления дыхательных путей у больных БА различной степени тяжести.

2. Провести сравнительное изучение цитологических и биохимических показателей ИМ и БАЛ.

3. Дать патогистологическое описание бронхобиоптатов и провести морфометрический анализ стенки бронха в норме и при бронхиальной астме.

4. Изучить содержание NO в выдыхаемом воздухе, концентрацию нитратов в ИМ и плазме крови.

5. Провести корреляционный анализ цитологических, морфометрических показателей, концентрации метаболитов арахидоновой кислоты, а также показателей NO и нитратов при бронхиальной астме у детей и взрослых.

Научная новизна

Доказано, что характеристика клеточного состава ИМ одинаково информативна у больных БА взрослого и детского возраста. Выявлена корреляционная зависимость цитологических показателей ИМ от степени тяжести БА и проводимой терапии. При сравнительном изучении у больных БА цитологических и биохимических показателей индуцированной мокроты и бронхоальвеолярного лаважа установлено, что они дополняют друг друга, так как дают адекватную оценку воспалительных изменений в различных отделах респираторного тракта. Найдена взаимосвязь между клеточным составом ИМ и содержанием оксида азота в выдыхаемом воздухе, что свидетельствует об их взаимном участии в воспалении дыхательных путей. Наличие в ИМ клеточных элементов острого воспаления, повышенное содержание NO в выдыхаемом воздухе, выявленные патоморфологические признаки воспаления в биоптатах стенки бронха и увеличение синтеза эйкозаноидов у больных БА в стадии ремиссии заболевания указывают на персистенцию аллергического воспаления дыхательных путей. Показана возможность определения концентрации эозинофильного катионного протеина в индуцированной мокроте и выявлена положительная корреляционная взаимосвязь этого показателя с содержанием оксида азота в выдыхаемом воздухе. Установлено, что процесс усиленного эндогенного синтеза NO повышает уровень нитратов в ИМ, не повышая их концентрацию в плазме крови. Обнаружена прямая корреляционная зависимость между концентрацией оксида азота в выдыхаемом воздухе и содержанием нитратов в ИМ, что позволяет рекомендовать использование метода изучения содержания нитратов в индуцированной мокроте при отсутствии возможности определения оксида азота в выдыхаемом воздухе.

Практическая значимость

Внедрение в широкую клиническую практику неинвазивного, безопасного и информативного метода индуцированной мокроты совместно с изучением выдыхаемого оксида азота поможет объективно оценить состояние больных БА во время обострения заболевания и в период ремиссии. Данные методы могут применяться на базе поликлиник, клинико-диагностических центров, использоваться в стационарах для диагностики бронхиальной астмы, при проведении дифференциальной диагностики, при изучении наличия и степени выраженности воспалительных изменений в бронхиальном дереве, при подборе противовоспалительной терапии и оценке ее эффективности. Использование изученных неинвазивныех методов особенно оправдано при обследовании детей, страдающих бронхиальной астмой, так как большинство стандартных методов исследования оказываются неинформативнымн, особенно в период ремиссии заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При сравнительном изучении у больных БА цитологических и биохимических показателей индуцированной мокроты и бронхоальвеолярного лаважа установлено, что они дополняют друг друга, так как дают адекватную оценку воспалительных изменений в различных отделах респираторного тракта.

2. Повышенное содержание оксида азота в выдыхаемом воздухе и увеличение в 11 раз доли эозинофилов в индуцированной мокроте по сравнению со здоровыми, подтверждают персистенцию аллергического воспаления дыхательных путей в стадии ремиссии заболевания.

3. Установлено, что процесс усиленного эндогенного синтеза оксида азота повышает уровень нитратов в ИМ у больных БА по сравнению со здоровыми добровольцами, что отражает выраженность воспаления. Концентрация нитратов в плазме крови больных БА практически не отличается от группы сравнения и не зависит от тяжести БА.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 4 глав: обзора литературы, описания методов, собственных исследований и обсуждения результатов исследования, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя. Работа выполнена в ГОУ ВПО «Московский медико-стоматологический университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (ректор - профессор О.О. Янушевич).

Заключение диссертации по теме «Внутренние болезни», Дулина, Тамара Рамазановна

ВЫВОДЫ

1. Исследование биомаркеров воспаления у больных БА с помощью неинвазивного метода индуцированной мокроты доказало его полную безопасность и высокую информативность как при оценке состояния больных различного возраста и степени тяжести, так и при определении эффективности проводимой противовоспалительной терапии.

2. При сравнительном изучении у больных Б А цитологических и биохимических показателей индуцированной мокроты и бронхоальвеолярного лаважа установлено, что они дополняют друг друга, так как дают адекватную оценку воспалительных изменений в различных отделах респираторного тракта.

3. Анализ морфометрических изменений в биоптатах стенки бронха выявил утолщение базальной мембраны и 2-3-х кратное преобладание числа бокаловидных клеток над реснитчатыми у больных БА в сравнении со здоровыми лицами.

4. Повышенное содержание оксида азота в выдыхаемом воздухе и увеличение в 11 раз доли эозинофилов в индуцированной мокроте по сравнению со здоровыми, подтверждают персистенцию аллергического воспаления дыхательных путей в стадии ремиссии заболевания.

5. Установлено, что процесс усиленного эндогенного синтеза оксида азота повышает уровень нитратов в ИМ у больных БА по сравнению со здоровыми добровольцами, что отражает выраженность воспаления. Концентрация нитратов в плазме крови больных БА практически не отличается от группы сравнения и не зависит от тяжести БА.

6. Обнаружена положительная корреляционная взаимосвязь между концентрацией эозинофильного катионного протеина (ЭКП) в супернатанте ИМ и уровнем оксида азота в выдыхаемом воздухе, что указывает на возможность их использования в качестве биомаркеров воспаления при БА.

Практические рекомендации

Внедрение в широкую клиническую практику неинвазивного, безопасного и информативного метода индуцированной мокроты совместно с изучением выдыхаемого оксида азота поможет объективно оценить состояние больных БА во время обострения заболевания и в период ремиссии. Данные методы могут применяться на базе поликлиник, клинико-диагностических центров, использоваться в стационарах для диагностики бронхиальной астмы, при проведении дифференциальной диагностики, при изучении наличия и степени выраженности воспалительных изменений в бронхиальном дереве, при подборе противовоспалительной терапии и оценке ее эффективности. Использование изученных неинвазивных методов особенно оправдано при обследовании детей, страдающих бронхиальной астмой, так как большинство стандартных методов исследования оказываются неинформативными, особенно в период ремиссии заболевания.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Дулина, Тамара Рамазановна, 2009 год

1. Авдеев С.Н., Анаев Э.Х., Чучалин А.Г. Применение метода индуцированной мокроты для оценки интенсивности воспаления дыхательных путей // Пульмонология. 1998. № 2. С. 81-87.

2. Адо В.А., Мокроносова М.А., Перламутров Ю.Н. Аллергия и лейкотриены // Клин. мед. 1995. Т. 73. № 2. С. 9-12.

3. Анаев Э.Х., Черняев А.Л., Черняк А.В., Чучалин А.Г. Оценка обострения бронхиальной астмы и эффективности проведенного лечения с помощью корреляционного анализа // Тер. арх. 1996. № 3. С. 55-58.

4. Беклемишев Н.Д. Лейкотриены // Иммунология. 1986. № 5. С. 11-17.

5. Биличенко Т.Н., Балдуева М.Ф. Значимость измерения оксида азота выдыхаемого воздуха при болезнях органов дыхания // Пульмонология. 2006. №6. С. 118-122.

6. Бронхиальная астма. Глобальная стратегия. Совместный доклад Национального института Сердце, Легкие, Кровь и ВОЗ//Пульмонология. 1996. Приложение. С. 1-165.

7. Бронхиальная астма // Под ред. Чучалин А.Г. М. Агар. 1997. Т. 1. С. 12.

8. Бронхиальная астма. Руководство для врачей России (Формулярная система)//Пульмонология. 1999. Приложение. С. 5-15.

9. Булатов П.К., Федосеев Г.Б. Бронхиальная астма. В «Руководство по пульмонологии // (Путов Н.В., Федосеев Г.Б. ред.) Л. Медицина. 1978. С. 411 -449.

10. Ю.Величковский Б.Т. Экологическая пульмонология. Роль свободнорадикальных процессов // Екатеринбург. МНЦПОЗР. 2003. 141 с.11. «Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы. Пересмотр 2002 г.».

11. Григоренко А. А., Макаров И.Ю. Корреляционный анализ морфофункционального состояния семенников и бронхов у больных бронхиальной астмой // 5 Национальный конгресс по болезням органов дыхания. М. 1995. № 1473.

12. Емельянов А.В., Черняк Б.А., Княжеская Н.П., Потапова М.О., Белевский А.С. Бронхиальная астма // Респираторная медицина. М. Геотар Медиа. 2007. Т. 1. С. 665 - 692.

13. Ильченко В.А. Бронхиальная астма. Руководство «Болезни органов дыхания» //М. Медицина. 1990. т. 3. С. 5 109.

14. Каганов С.Ю., Мизерницкая О.Н., Чистяков Г.М. Бронхиальная астма. «Хронические заболевания легких у детей и критерии их диагностики» // М. Медицина. 1979. С. 160 180.

15. Каминская Г.О. Оксид азота его биологическая роль и участие в патологии органов дыхания // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2004. №6. С. 3-11.

16. Клинические рекомендации. Бронхиальная астма у взрослых. Атопический дерматит // М. Атмосфера. 2002. 272 с.

17. Коновалова Е.Н., Невзорова В.А., Чикаловец И.В. Биохимическое тестирование индуцированной мокроты у больных бронхиальной астмой и хроническим обструктивным бронхитом // Пульмонология. 2003. № 3. С. 43-47.

18. Ксензова Л. Д. Биосинтез эйкозаноидов гранулоцитами периферической крови у детей с атопическими заболеваниями: Дис. канд. мед. наук. М. 1997. С. 134-135.

19. Курицина (Пуганова) Е.А., Корнеева Л.Х., Карякина Е.Е. и др. Электроды, модифицированные наноструктурированной Берлинской лазурью высокоэффективные сенсоры для определения пероксида водорода//Сенсор. 2005. 2. С. 2 - 8.

20. КурицинаЕ.А., Анаев Э.Х., Карякин А.А., Чучалин А.Г. Сенсорное определение пероксида водорода в конденсате выдыхаемого воздуха

21. Национальный конгресс по болезням органов дыхания. М. 2005. С. 55.

22. Курицина Е.А. Высокоэффективные электрохимические сенсоры на основе наноразмерных пленок и наноструктур электрокатализатора. Автореферат дисс. канд. хим. наук. МГУ. М. 2006

23. Лукомский Г.И., М.Л. Шулутко, М.Г. Виннер, А.С. Сметнев Бронхология // Медицина. Москва. 1973. 359 с.

24. Лютина Е.И., Курилова Т.Н., Федосова И.А. Распространенность бронхиальной астмы // Здравоохранение Российской Федерации. 2004. № 2. С. 35-37.

25. Масуев К.А. Эйкозаноиды и бронхиальная астма // Пульмонология. 1993. № 1.С. 78-83.

26. Национальная программа «Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика» // 2-е изд. Москва. 2006. С. 11-21.

27. Неинвазивные методы диагностики // Симпозиум. Тезисы докладов. М. МЗ РФ. 1994. С. 44.

28. Неинвазивные методы в оценке здоровья населения». М.: НИИЭЧГОС. 2006. 316 с.

29. Непомнящих Г.И. Патологическая анатомия и ультраструктура бронхов при хроническом воспалении легких.- Новосибирск: Наука.-1979.-296 с.

30. Петровский Ф.И. Цитокины и оксид азота при бронхиальной астме. // Бюл. эксперим. биол. 2002. № 1. С. 70-73.

31. Пуганова Е.А., Комаров А.В., Вагин М.Ю. и др. Использование микроэлектродов, модифицированных Берлинской лазурью, для определения пероксида водорода в физиологических жидкостях // Микросистемная техника. 2004. т. 12.

32. Соколов Е.И., Зыков К.А., Пухальский А.Л., Цыпленкова В.Г., Шевелев В.И. Ингаляции ультрамалых доз алкилирующихпрепаратов в лечении бронхиальной астмы // Пульмонология, 2002, №3, с. 82-88

33. ЗЗ.Цибулькина В.Н. Бронхиальная астма: распространенность,механизмы развития, факторы, определяющие тяжесть заболевания, общие принципы специфической и неспецифической терапии // Казанский медицинский журнал. 2005. Т. 86. №5. С. 355-360.

34. Черняев A.JI. Бронхиальная астма. «Клеточная биология легких в норме и при патологии. (Ерохин В.В., Романова Л.К. ред.) // М. Медицина. 2000. С. 371 -377.

35. Черняев А.Л. Некоторые вопросы патогенеза и патологической анатомии бронхиальной астмы //Архив патологии. 1998. №2. С. 6369.

36. Черняховская Н.Е, Федченко Г.Г., Андреев В.Г., Поваляев А.В. Рентгено-эндоскопическая диагностика заболеваний органов дыхания// МЕДпресс-информ. Москва. 2007. 239 с.

37. Чучалин А.Г. Респираторная медицина, Москва, Гэотар, 2007, т.1, 797 с.

38. Шевелев В.И., Андросов В.В. Особенности эндоскопических признаков воспаления слизистой оболочки бронхов у больных неспецифическими заболеваниями легких// Бронхологические методы в диагностике и лечении заболеваний легких. Л. 1984. С. 5053.

39. Шилов В.Н., Яковенко В.А., Сергиенко В.И. Диагностическая ценность газохроматографического исследования выдыхаемого воздуха // Неинвазивные методы диагностики. М. НИИФХМ. 1994. С. 38-40.

40. Antczak A., Kharitonov S.A., Montuschi P. et al. Inflammatory response to sputum induction measured by exhaled markers // Respiration. 2005. V. 72 (6). P. 594-599.

41. Adcock I.M., Brown C.R., Kwon О J., Barnes P.J. Oxidative stress induces NF-kappaB DNA binding and inducible NOS mRNA in human epithelial cells // Biochem Biophys Res Commun. 2003. 199. P. 15181524.

42. Alving K., Baraldi E., Barnes P.J. et al. NO in clinical practice// Aerocrine. 2003. V. l.P. 1-52.

43. Alving K., Weitzberg E., Lundberg J.M. Increased amount of nitric oxide in exhaled air of asthmatics // Eur. Respir. J. 1993. №. 6. P. 1368-1370.

44. Barnes P.J. Mode of action of steroids in asthma//Corticosteroid therapy in asthma & rhinitis // Ann. Int. Symp. Australia. 2004. P. 7-10.

45. Barnes P.J. Asthma as an axon reflex // Lancet. 1986. 1. P. 242-245.

46. Beckman J.S., Beckman T.W., Chen J., Marshall P.A., Freeman B.A. Apparent hydroxy 1 radical production by peroxynitrite: implications for endothelial injury from nitric oxide and superoxide // Proc Natl Acad Sci USA. 2004. 87. P. 1620-1624.

47. Beck-Ripp J., Griese M., Arenz S. Changes of exhaled nitric oxide during steroid treatment of childhood asthma.// Eur. Resp. J. 2003. V. 19 (6). P. 1015-1019.

48. Belda J., Giner J., Casan P., Sanchis J.A. Induced sputum in asthma: study of validity and repeatability // Arch. Broncopneumol. 1997. V. 33. № 7. P. 325-330.

49. Belvisi M.G., Ward J.K., Mitchell J.A., Barnes P.J. Nitric oxide as a neurotransmitter in human airways // Arch. Int. Pharmacodyn. 1995. V. 2 P. 329.

50. Berlyne G.S., Parameswaran К., Kamada D., Efthimiadis A., Hargreave F. A comparison of exhaled nitric oxide and induced sputum as marker of airway inflammation // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. V. 106. № 4. P. 638-644.

51. Bojic M., Rascovic S., Peruc-Poradic A. et al. Leycotrienes in allergic inflammatory reactions // Srp. Arh. Celok Lek. 1998 Sep-Oct. Vol. 126. № 9- 10. P. 382-387.

52. Bousquet J., Chanes P., Lacoste J. et al Eosinophilic inflammation in asthma// N. Engl. J. Med. 1990. Vol. 323. P. 1033-1040.

53. Brighting C.E., Green R.H., Pavord I.D. Biomarkers predicting response to corticosteroid therapy in asthma // Treat. Respir. Med. 2005. V. 4(5). P. 309-316.

54. Busse W.W., Sedwick J.B. Eosinophils in asthma // Ann. Allergy. 2004. V. 68. № 3. P. 286-290.

55. Cantini AM, North SL, Hubbard RC, Crystal RG. Normal alveolar epithelial lining fluid contains high levels of glutathione // J Appl Physiol. 1987. 6. P. 152-157.

56. Chavis C., Chanez P., Vachier I. et al. 5-15diHETE and lipoxins generated by neutrophils from endogenous arachidonic acid as asthma biomarkers // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005 Feb. Vol. 207. № 1. P.273-279.

57. Coceani F., Olley P.M. Eicosanoids in the fetal and transitional pulmonary circulation//Chest. 1988. Vol. 93. P. 112-117.

58. Contini C., Romani R., Mango S., et al. Diagnosis of toxoplasma gondii infection in AIDS patients by a tissue-culture technique // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2004. V. 14. № 5. P. 434-440.

59. Dahlem S.E., Hedquist A., Hammarstrom S. Contractile activities of several cystein-containing in the guinea-pig lung strip // Eur. J. Pharmacol. 2006. Vol. 86. P. 207-215.

60. Das U.N. Possible role of prostaglandins of pulmonary hypertensions// Prostaglandins. 1980. Vol. 4. P. 163-170.

61. De Monchy J.G.R., Kauffman H.F., Venge P. et al. Bronchoalveolar eosinophilia during allergen-induced late asthmatic reaction // Am. Rev. Respir. Dis. 2005. Vol. 131. P. 373-376.

62. Dillon W.C., Hampl V., Shultz P.J., Rubins J.B., Archer S.L. Origins of breath nitric oxide in humans // Chest. 1996. V. 1. P. 930-938.

63. Dpotsch J., DemirakccaS., TerbrackH.G. et al. Airway nitric oxide in asthmatic children and patients with cystic fibrosis // Eur. Respir. J. 1996. V. l.P. 2537-2540.

64. Efthimiadis A., Pizzichini M.M., Pizzichini E. et al. Induced sputum cells and fluid-phase undiced of inflammation: comparison of treatment with dithiothreitol vs phosphate-buffered saline // Eur. Respir. J. 1997. V. 10. P.1335-1340.

65. Fahy J.V., Wong H., Liu J., Boushey H.A. Comparison of samples collected by sputum induction and bronchoscopy from asthmatic and healthy subjects // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. V. 152, № 1. P. 53-58.

66. Fisher A.J., Gabbay E., Small Т., et al. Cross sectional study of exhaled nitric oxide levels following lung transplantation // Thorax. 1998. V. 131. P. 454-458.

67. Fishman J.A., Roth R.S., Zanzot E., et al. Use of induced sputum specimens for microbiologic diagnosis of infections due to organisms other Pneumocystis carinii // J. Clin. Microbiol. 2005. V. 32, № l.P. 131134.

68. Floreani A.A., Buchalter S., Thompson A.B. et al. In vivo assessment of airway inflammation // Monaldi Arch.Chest Dis. 2005. V. 49. № 3. Suppl.l. P. 17-26.

69. Foot A.B., Caul E.O., Roome A.P. et al. Sputum induction as an aid to diagnosis of active cytomegalovirirus infection following bone marrow transplantation // Bone Marrow Transplant. 2006 .V. 5 № 4. P. 283-284.

70. Ford-Hutchinson A.W. Leukotriene involvement in pathologic process // J.Allergy Clin. Immunol. 1984. Vol. 74. № 2. P.437-440.

71. Fujimoto K., Kubo K., Matsuzawa Y., Sekiguchi M.A. Eosinophil cationic protein levels in induced sputum correlate with severity of bronchial asthma//Chest. 1997. V. 112. № 5. P. 1241-1247.

72. Gabazza E.C., Taguchi O. Role of nitric oxide in airway remodeling // Clin. Sci. 2002. V. 98. P. 291-294.

73. Global strategy for asthma management and prevention // Nathional Institutes of Health Nathional Heart, Lung and Blood Institute. Revised 2002.

74. Green R.H., Brighting C.E., McKenna S. Asthma exacerbation and sputum eosinophil counts: a randomized controlled trial // Lancet. 2002. V. 30(360). P. 1715-1721.

75. Guo F.H., De-Raeve H.R., Rice T.W., et al. Continuous nitric oxide synthesis by inducible nitric oxide synthase in normal human airway epithelium in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 78097813.

76. Haley K.J. Inflammation & airway function in asthma // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2003. Vol. 157. P. 1-3.

77. Hamid Q., Springall D.R., Riveros-Moreno V., Chanez P., Howarth P., Redington A. et al. Induction of nitric oxide synthase in asthma // Lancet 1993. 342. P. 1510-1513.

78. Hargreave F.E. Induced sputum and response to glucocorticoids // J. Allergy Clin. Immunol. 1998. V. 102. № 5. P. 102-105.

79. Heinen V., Claeys M., Louis R. Exhaled nitric oxide: a new biomarker for resparatory pathologies.// Rev. Med. Liege. 2006. V. 62 (1). P. 37-42.

80. Holtzman M.J. Arachidonic acid metabolism // Am. Rev. Respir. Dis. 1991. Vol. 143. P. 188-203.

81. Hudon C., Turcotte H., Laviolette M. et al. Characteristics of bronchial asthma with incomplete reversibility of airflow obstruction // Ann. Alergy Asthma Immunol. 2006 Feb. Vol. 78. № 2. P. 195-202.

82. Ingarro L.J. Nitric oxide // Curr. Top Med. Chem. 2005. V. 5. P. 595.

83. Kanazawa H., Shoji S., Yamada M., Fujii Т., et al. Increased levels of nitric oxide derivatives in induced sputum in patients with asthma // J. Allergy Clin. Immunol. 1997. V. 99. №5.

84. Kay A. Asthma & inflammation // J. Allergy Clin. Immunol. 1991. Vol. 87. P. 893-910.

85. Keating J.J., Barnes P.J. Granulocyte activation markers in induced sputum: comparison between chronic obstructive pulmonary disease or asthma // Ibid. 1997. V. 155. P. 449-453.

86. Keating J.J., Rogers Т., Petrou M. et al. Management of pulmonary aspergillosis in AIDS: an emerging clinical problem // J. Clin. Pathol. 2004. V. 47. № 9. P. 805-809.

87. Keatings V.M., Evans D.J., O'Connor B.J., Barnes P.J. Cellular profiles in asthmatic airways: a comparison of induced sputum, bronchial washings, and bronchoalveolar lavage fluid // Thorax. 1997. V. 52. P. 372-374.

88. Kharitonov S.A., O'Connor B.J., Evans D.J., Barnes P.J. Allergen-induced late asthmatic reactions are associated with elevation of exhaled nitric oxide // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. 151. 1894-1849.

89. Kharitonov S.A., Yates D., Robbins R.A., Logan-Sinclair R., Shinebourne E., Barnes P.J. Increased nitric oxide in exhaled air of asthmatic patient // Lancet. 1994. 343. 133-135.

90. Kuitert L.M., Newton R., Barnes N.C. et al. Eicasonoid mediator expression in mononuclear and polymorphonuclear cells in normal subjects and patients with atopic asthma and cystic fibrosis // Thorax. 1996. Dec. Vol. 51. 12. P. 1223-1228.

91. Laitinen L.A., Heino M., Laitinen A., Kara Т., Haahtela T. Damage of the airway epithelium and bronchial reactivity in patients with asthma // Am. Rev. Respir. Dis. 2004. 131. P. 599-606.

92. Lewis R.A., Austen K.F. Molecular determinants for functional responses to the sulfidopeptide leukotrienes: metabolism and receptor subclasses // J. Allergy Clin. Immunol. 2003. Vol. 74. P. 369-373.

93. Marom Z., Sheihamer J.H., Bach M.K. et al. Slow reacting substances, LTC4 and D4 increase the release of mucus from human airways in vitro // Am. Rev. Resp. Dis. 1982. Vol. 126. P. 449-451.

94. Martin T.R., Ranji G., Merrit T.L. et al. Relactive contribution of LTB4 to the neutrophil chemotactic activity produced by the resident human alveolar macrophages // J. Clin. Invest. 2003. Vol.80. P. 1114-1129.

95. Martos A., Mascaro J., Santin M. et al. Cryptococosis pulmonary en el SIDA // Enferm. Infec. Microbiol. Clin. 2004. V. 10. № 10. P.607-610.

96. MasGlashan D., Shleimer R.P., Peters S.P. Generation of leykotrienes by purified human lung mast cells // J. Clin. Invest. 1982. Vol. 70. P. 747751.

97. McGowan S.E., Parenti C.M., Hoidal J.R., Niewoehner D.E. Ascorbic acid content and accumulation by alveolar macrophages from cigarette smokers and nonsmokers // J Lab. Clin. Med . 1984. 104. P. 127-34.

98. Mita H., Yui Y., Taniguchi N. et al. Increased activity of 5-lipoxygenase in PMN leycocytes from asthmatic patients // Life Sci. 2005. Vol. 37. P. 907-914.

99. Mitsunobu F., Mifune Т., Hosaki Y. et al. Different roles of histamine and leukotriene C4 in the airways between patients with atopic and nonatopic asthma // J. Asthma. 2006. Vol. 35. № 4. P. 367-372.

100. Mulligan M.S., Hevel J.M., Marietta M.A., Ward P.A. Tissue injury caused by deposition of immune complexes is L-arginine dependent //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. 88. P. 6338-6342.

101. Nasser S.M., Pfister R., Christie P.E. et al. Inflammatory cell population in bronchial biopsies from aspirin-sensitive asthmatic subjects // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1996 Jan. Vol. 153. № 1. P. 90-96.

102. Nijkamp F.P., Folkerts G. Nitric oxide and bronchial reactivity // Clin. Exp. Allergy. 1994. V. 24. № 10. P. 905-14.

103. O' Sullivan S. On the role of PGD2 metabolites as markers of mast cell activation in asthma // Acta PHYSIOL. Scand. Suppl. 2005 Apr. Vol. 644. P.1-74.

104. Pacht E.R., Kaseki H., Mohammed J.R., Cornwell D.G., Davis W.B. Deficiency of vitamin E in the alveolar fluid of cigarette smokers:influence on alveolar macrophage cytotoxicity // J Clin Invest. 2004. 77. P. 789-96.

105. Pavia D., Thompson M.L., Clarke S.W. Enhanced clearance of selections from the human lung after the administration of the hypertonic saline aerosol // Am. Rev. Respir. Dis. 1978. V.l 17. P. 199-203.

106. Persson M.G., Zetterstrom O., Agrenuis V., Ihre E., Gustafsson L.E. Single-breath nitric oxide measurements in asthmatic patients and smokers //Lancet. 1994. 343. P. 146-147.

107. Pin I., Gibson P.G., Kolendovicz R. et al. Use of induced sputum cell counts to investigate airway inflammation in asthma // Thorax. 1992. V. 47. P.25-29.

108. Pizzichini M.M., Popov T.A., Efthimiadis A. Spontaneous and induced sputum to measure indices of airway inflammation in asthma // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1996. V. 154. P. 866-869.

109. Popov T.A., Pizzichini E., Efthimiadis A. et al. Some technical factors influencing the induction of sputum for cell analysis // Ibid. 1995. V. 8. P. 559-565.

110. Prieto L., Gutierrez V., Morales C., Torres V. Non-invasive methods for diagnosing asthma. Study of induced sputum //J. Invest. Allergol. Clin. Immunol. 1997. V. 7. P. 348-350.

111. Rajah R., Nachajon R.V., Collins M.H. et al. Elevated levels of the IGF-bilding protein protease MMP-1 in asthmatic airway smooth muscle // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2003 Feb. Vol. 20. № 2. P. 199-208.

112. Redowski M.W., Palmer R.M., Moncada S. Glucocorticoids inhibit the expression of an inducible, but not the constitutive nitric oxide synthase in vascular endothelial cells // Proc Natl Acad Sci USA. 2004. 87. P. 10431049.

113. Robinson M., King M., Tomkiewkz P.R. et al. Effects of hypertonic saline, amiloride and cough on mucociliary clearance in patients with cystic fibrosis //Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1994. V. 149. P. 669.

114. Rolla G., Brussino L., Bertero M.T. et al. Increased nitric oxide in exhaled air of patients with systemic lupus erythematosus // J. Rheumatol. 2005. V. 24. №6. P. 1066-71.

115. Samhoun M.N., Piper P.J. Actions and interactions of lipoxygenase and cyclooxygenase producte in respiratory and vascular tissue // Prostagland. Leukotr. Med. 1984. Vol. 13. № 1. P. 79-87.

116. Serhan C.N., Hamberg M., Manuelsson B. Lipoxins: A novel series of compounds formed from arachidonic acid in human leukocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. Vol. 91. P. 5335-5339.

117. Shindo K., Koide K., Fukumura V. Platelet-activiting factor increases Leykotriene B4 release in stimulated alveolar macrophages from asthmatic patients // Eur. Respir. J. 1998 May. Vol. 11. № 5. P. 1098-1104.

118. Silkoff P.E. Exhaled nitric oxide and asthma // N.Engl. J. Med. 2005. V. 353. P. 732-733.

119. Spanevello A., Migliori G.B., Sharara A., Ballardini L., Bridge P., Pisati P., Neri M, Induced sputum to assess airway inflammation: a study of reproducibility // Clin. Exp. Allergy. 1997. V. 27. № 10. P. 1138-1144.

120. Sterk P.J. Non-invasive monitoring of bronchial inflammation in asthma // Schweiz. Med. Wochenschr. 2005. Bd 127. № 41. P. 1686-1692.

121. Taylor-Robinson A.W., Liew F.Y., Severin A. Regulation of the immune response by nitric oxide differentially produced by Thl and Th2 cells. // Eur J Immunol. 1994. 24. P. 980-984.

122. Umento E., McDonald D.M., Nadel J.A. Hypertonic saline increases vascular permeability in the rat trachea by producing neurogenic inflammation// J. Clin. Invest. 2005. V. 85. P. 1905-1908.

123. Untersee P., Gil J., Weibel E.R. Visualization of extracellular lining layer of lung alveoli by freeze-etching // Respir Physiol. 1971. 13. P. 17185.

124. Van-Hal P.T., Overbeek S.E., Hoogstenden H.C. et al. Eicosanoids and lipocortin-1 in BAL fluid in asthma; effects of smoking and inhaled glucocorticoids // J. Appl. Physiol. 2003 Aug. Vol. 81. № 2. P. 548-555.

125. Virchow J.C., Holscher U., Virchow C. Sputum ECP levels correlate with parameters of airflow obstruction // Am. Rev. Respir. Dis. 1992. V. 146. P. 604-606.

126. White C.W., Repine J.E. Pulmonary antioxidant defense mechanisms // Exp Lung Res. 2005. 8. P. 81-96.

127. Wielders P.L., Dekhuijzen P.N.R. Disease monitoring in chronic obstructive pulmonary disease: is there a role for biomarkers? // Eur. Respir. J. 1997. V.10. P.2443-2445.

128. Yang В., Schlosser R.J., McCaffrey T.V. Signal transduction pathways in modulation of ciliary beat frequency by methacholine // Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 2006. V. 106. P. 230-236.

129. Yates D.H., Kharitonov S.A., Robbins R.A., Thomas P.S., Barnes P.J. Effect of a nitric oxide synthase inhibitor and a glucocorticosteroid on exhaled nitric oxide // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. V. 152. № 3. P. 892-896.