Биологическая ремедиация черноземных почв Поволжья, загрязненных пестицидом тетраметилтиурамдисульфидом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Тугаева, Татьяна Александровна

• Тугаева, Татьяна Александровна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тугаева, Татьяна Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Загрязнение почв пестицидами

1.2. Классификация пестицидов

1.2.1. Классификация пестицидов по объектам применения

1.2.2. Классификация пестицидов по воздействию на организмы

1.2.3. Классификация пестицидов по химическому составу

1.3. Влияние пестицидов на почвенную биоту

1.4. Микробиологическая деградация пестицидов

1.5. Разложение пестицидов в почвах

1.6. Характеристика пестицида тетраметилтиурамдисульфида и его биодеструкция

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Характеристика объекта исследований

2.2. Материалы исследований

2.3. Методики проведения исследований

2.3.1. Методика подготовки почв к исследованиям

2.3.2. Методика внесения пестицида в пробы почв и метод последовательных разведений почвенной суспензии

2.3.3. Методика выделения и определения численности почвенных микроорганизмов

2.3.4. Методы выделения доминирующих видов микроорганизмов из почв

2.3.5. Методика определения способности использования почвенными микроорганизмами углерода и энергии

из органического ксенобиотика

2.3.6. Методика изучения деструктивной активности микроорганизмов. Идентификация штаммов деструкторов

2.3.7. Методика определения токсичности водных вытяжек из почв по смертности дафний

2.3.8. Методика определения фитотоксичности загрязненных

почв на проростках пшеницы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Микробиологическая активность черноземных почв

3.2. Влияние пестицида тетраметилтиурамдисульфида на численность основных групп почвенных микроорганизмов

3.3. Получение микроорганизмов - деструкторов пестицида ТМТД

3.4. Идентификация штамма деструктора пестицида ТМТД

3.5. Получение опытных образцов суспензии деструктора ТМТД

3.6. Оценка эффективности ремедиации чернозема обыкновенного, загрязненного пестицидом ТМТД, методами биотестирования

3.6.1. Оценка эффективности ремедиации по экотоксикологическому исследованию на гидробионтах

3.6.2. Исследование фитотоксического эффекта загрязненной почвы на проростках пшеницы

3.7. Теоретические аспекты эколого-экономической эффективности исследуемого метода биоремедиации

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Список сокращений и условных обозначений

Список использованной литературы

Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологическая ремедиация черноземных почв Поволжья, загрязненных пестицидом тетраметилтиурамдисульфидом»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Одной из серьезных современных экологических проблем является загрязнение природных объектов органическими пестицидами, обладающими высокой токсичностью и персистентностью. Интенсивное применение химических средств защиты растений привело к тому, что они рассматриваются в числе самых опасных синтетических поллютантов (Ермаков и др., 2001; Ананьева, 2003; Попов и др., 2003). По многочисленным данным их применение приводит к подавлению не только вредных организмов, но и большинства других видов. Пестициды ухудшают качество почв, так как убивают живые организмы, которые участвуют в почвообразовательных процессах и поддерживают плодородие почв.

Установлена огромная роль микроорганизмов в поддержании экологического равновесия. Многочисленные формы микроорганизмов обладают способностью включать в обмен веществ ксенобиотики, то есть использовать их в конструктивном и энергетическом метаболизме клетки (Квеситадзе, 2002).

В результате использования микроорганизмов-деструкторов происходит не только очистка почвы от ксенобиотиков, но и повышение плодородия почвы, восстановление ее основных функций, так как именно микроорганизмы осуществляют в почве разложение растительных и животных остатков, превращая их в новые органические вещества, которые при взаимодействии с минеральными компонентами придают почве все ее специфические свойства (Мотузова, Безуглова, 2007).

Следовательно, изучение микробиологического способа очистки почвы от пестицидов чрезвычайно актуально. В связи с этим ведутся поиски штаммов микроорганизмов-деструкторов для различных видов пестицидов. Микробная деградация токсикантов, осуществляемая за счет ферментных систем, является обнадеживающим подходом для деструкции органических токсикантов. По

многочисленным данным биологические методы восстановления загрязненных почв требуют намного меньше затрат для своего применения, чем известные небиологические технологии, что объясняет актуальность проводимых исследований по разработке и применению на практике биотехнологических способов очистки почв, загрязненных пестицидами.

Пестицид тетраметилтиурамдисульфид (ТМТД) нашел широкое применение на всей территории Российской Федерации, в том числе и в Саратовской области в связи с низкой стоимостью и эффективностью использования. Поэтому, проведенные исследования по определению влияния пестицида ТМТД на почвенные микроорганизмы на примере чернозема обыкновенного, а также определение способности микроорганизмов из этих почв к биодеструкции пестицида ТМТД имеет важное научно-теоретическое и практическое значение.

Степень разработанности проблемы. Вопросы влияния пестицидов на почвенные микроорганизмы и их микробная деструкция составляют значительную часть зарубежных исследований в области почвенной микробиологии, отечественными авторами им отводится меньшее внимание.

В основном работы проводились по определению влияния различных пестицидов на общую численность, видовой состав и структуру почвенных организмов и их чувствительность к пестициду. Имеются данные ряда зарубежных авторов, таких как F.W. Breazeale (1970), A.C. Guar (1977), К.Н. Domsh (1984), Р.Н. Don и J.M. Pemberton (1985), J.S. Bridges и C.R. Dempsey (1988), A. Brokamp и В. Happe (1997), F.R.J. Schmidt (1997), L.B. Taiwo и В.A. Oso (1997), M. Biziuk (2001), D. Fournier, A. Halasz, J. Spain, P. Fiurasek и J. Hawari (2002), A. Fließbach и P. Mäder (2004), A.B. Caracciolo (2005), M. Cycoñ и Z. Piotrowska-Seget (2009) и др.

Среди отечественных авторов 20 века следует отметить H.H. Мельникова (1980), A.B. Полякову (1985), М.Ф. Овчинникову (1987), А.Б. Азаматову (1988), И.М. Габрилович (1988), Д.Г. Звягинцева (1989), Г.Ф. Лебедеву, В.И. Агапова, Ю.Н. Благовещенского и В.П. Самсонову (1990), Ю.В. Круглова (1991), O.E.

Марфенину (1991), М.А. Анисимову (1997), H.A. Куликову (1999), Л.А. Федорова (1999), A.B. Яблокова (1999) и др.

Воздействие различных пестицидов на почвенные микроорганизмы и их микробная деструкция исследованы в трудах современных отечественных ученых, таких как Н.Д. Ананьева (2001), П.А.Чиров (2002), О.Ю. Ксенофонтова (2004), О.П. Бурхан (2010). Исследования по поиску микроорганизмов-биодеструкторов пестицида ТМТД ранее были проведены и отражены в работе A.B. Колупаева (2010). Однако объектом исследования служила дерново-подзолистая почва, которая по своим характеристикам значительно отличается от чернозема обыкновенного.

Учитывая количество вносимых и уже имеющихся в биосфере пестицидов, следует отметить необходимость детального изучения существующей проблемы. Актуальность, теоретическая и практическая значимость обусловили выбор темы, определили цель, задачи и структуру исследования.

Цель работы - изучение влияния пестицида тетраметилтиурамдисульфида на численность основных групп микроорганизмов чернозема обыкновенного и поиск штаммов микроорганизмов-деструкторов этого пестицида.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести экспериментальные лабораторные исследования по изучению влияния различных доз пестицида ТМТД на численность актиномицетов, гетеротрофных бактерий и плесневых грибов.

2. Выделить устойчивые и доминирующие виды микроорганизмов из чернозема обыкновенного, загрязненного пестицидом ТМТД.

3. Выявить штаммы деструкторов пестицида ТМТД и произвести их идентификацию.

4. Изучить деструктивную активность выделенных штаммов микроорганизмов.

5. Определить эффективность микробиологической ремедиации чернозема обыкновенного методами биотестирования.

Научная новизна. Впервые изучено влияние различных концентраций пестицида ТМТД, широко используемого в настоящее время в сельскохозяйственной области, на рост и размножение микроорганизмов в обыкновенных черноземах. Выделен штамм микроорганизма-деструктора пестицида ТМТД из аборигенной микрофлоры чернозема обыкновенного, который способен использовать пестицид в процессе жизнедеятельности. Проведена его идентификация на основании изучения фенотипических признаков. Изучена деструктивная активность штамма бактерий, выделенного из чернозема обыкновенного.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость исследования заключается в том, что основные ее результаты способствуют расширению знаний в области ремедиации черноземных почв, загрязненных пестицидом тетраметилтиурамдисульфидом, определяя специфику влияния данного пестицида на почвенные микроорганизмы, способности выделения из аборигенной микрофлоры штамма-деструктора.

В работе впервые даны характеристики воздействия различных доз пестицида ТМТД на численность актиномицетов, плесневых грибов и гетеротрофных бактерий чернозема обыкновенного. Вид гетеротрофных бактерий Pseudomonas putida выделен из аборигенной микрофлоры почвы как наиболее устойчивый к пестицидному загрязнению. Штамм Pseudomonas putida Тм4 рекомендован как деструктор пестицида ТМТД для использования в целях очистки чернозема обыкновенного от его загрязнения.

Основные положения и научные выводы, разработанные и обоснованные автором, приняты к использованию в Федеральной целевой программе «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации на 2009-2013 годы».

Результаты диссертационного исследования используются в производственной деятельности предприятия ООО «ЭкоХим» для

осуществления рекультивации территорий, загрязненных пестицидами (в том числе ТМТД), что подтверждается актом о внедрении.

Методология и методы исследования. Методологической базой послужили труды отечественных и зарубежных ученых по вопросам влияния пестицидов на почвенные микроорганизмы и их микробной деструкции. Основу данного исследования составляют комплексный анализ и системный подход в изучении рассматриваемой темы.

При проведении исследования и изложения материала автором были применены общенаучные методы: теоретико-методологический анализ литературных источников, эмпирические методы исследования в форме наблюдения, эксперимента, описания, измерения и сравнительно-сопоставительного анализа.

Применение указанных методов, а также анализ фактического материала позволил обеспечить объективность полученных выводов и результатов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Снижение численности актиномицетов, плесневых грибов и увеличение численности гетеротрофных бактерий зависит от загрязнения чернозема обыкновенного различными концентрациями пестицида ТМТД.

2. Различные штаммы микроорганизмов-деструкторов ТМТД, используют пестицид как косубстрат или как единственный источник углерода. Ряд штаммов бактерий Pseudomonas putida обладают наивысшим деструкционным потенциалом.

3. Степень токсичности чернозема обыкновенного, загрязненного пестицидом ТМТД устанавливается по смертности дафний в почвенной вытяжке и по изменению всхожести семян и длины корней проростков пшеницы.

Апробация результатов исследований. Материалы исследований, изложенные в диссертации, были представлены на: Международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию со дня рождения академика Н.И. Вавилова (Саратов, 2012); Международной заочной научно-

практической конференции «Инновационное развитие в экономике, социологии, образовании, юриспруденции, управлении проектами, медицине, экологии» (Санкт-Петербург, 2012); V Международной научно-практической конференции «Научная дискуссия: вопросы физики, химии, биологии» (Москва, 2012); конференции «Модернизация экономики и общества России в условиях кризиса мирохозяйственных отношений» по итогам научно-исследовательской работы Саратовского государственного социально-экономического университета (Саратов, 2012); конференции «Экология и общество в условиях глобальной конкуренции: инновационные пути развития» по итогам научно-исследовательской работы Саратовского государственного социально-экономического университета (Саратов, 2013); V региональной научной конференции «Исследования молодых ученых в биологии и экологии» в СГУ имени Н.Г. Чернышевского (Саратов, 2013).

Публикации. Результаты исследований изложены в 9 печатных работах, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Личный вклад автора. Соискателем проведен анализ полученных данных, сформулированы основные положения диссертации, составляющие ее новизну и практическую значимость.

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный социально-экономический университет» на кафедре экологии и безопасности жизнедеятельности.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, двух глав экспериментальной части, включающих объекты и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов, списка использованной литературы и приложения. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, включает 16 рисунков и 19 таблиц. Список литературы включает в себя 178 источников.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Тугаева, Татьяна Александровна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что наиболее устойчивыми к загрязнению различными концентрациями пестицида ТМТД (10, 100 и 1000 ПДК) являются гетеротрофные бактерии, обитающие в черноземе обыкновенном. Присутствие пестицида ТМТД в почве стимулирует рост бактерий, численность которых к 30 дню эксперимента, превышает контроль в 1,5 раза. Наиболее чувствительными к загрязнению почвы пестицидом ТМТД являются актиномицеты, в меньшей степени плесневые грибы. Различные концентрации пестицида ТМТД (10, 100 и 1000 ПДК) оказывают токсичное действие на популяцию актиномицетов и почвенных грибов и снижают их рост и развитие на протяжении всего эксперимента.

2. Из аборигенной микрофлоры чернозема обыкновенного выделены три доминирующих штамма бактерий, использующие пестицид ТМТД в качестве единственного источника углерода (Тм4, Тм9 и ТмЮ) и один штамм бактерий, использующий пестицид как косубстрат (ТмЗ). При культивировании штамма Тм4 в жидкой минеральной безуглеродной среде, содержащей 300 мг/л пестицида в качестве единственного источника углерода, получены четкие изменения в спектральной характеристике, что говорит о трансформации пестицида. Также установлен видимый рост численности выделенного штамма микроорганизмов в течение 7 суток.

3. Анализ полученных результатов позволил выделить один штамм бактерий, который обладает наиболее активным деструкционным потенциалом. Идентификация выделенного штамма деструктора пестицида ТМТД, проведенная на основании изучения фенотипических признаков, позволила отнести его к виду Pseudomonas putida. Штамм Pseudomonas putida Тм4 может быть рекомендован как деструктор пестицида ТМТД.

4. Химико-аналитические исследования образцов почвы, содержащие пестицид ТМТД в концентрации 100 ПДК, показали, что применение агротехнических приемов (полив, рыхление, перемешивание), а также внесение штамма биодеструктора Pseudomonas putida Тм4 способствуют быстрой деградации ксенобиотика.

5. Результаты оценки токсичности экспериментальных проб чернозема обыкновенного методами биотестирования с использованием биотест-объектов дафний (Daphnia magna Straus) показали высокую токсичность проб почвы, зараженной пестицидом ТМТД, до 30 суток исследования. Результаты исследования проб почвы, зараженной пестицидом ТМТД и внесенным биодеструктором, показали низкую степень токсичности на 7 и 30 сутки исследования. Это говорит об отсутствии острой токсичности в исследуемых пробах, но дополнительно указывает, что эти пробы нельзя признать безвредными по показателю токсичности. Однако, на основании данных результатов, можно отметить эффективность действия биодеструктора в разрушении пестицида ТМТД.

6. Исследование фитотоксического эффекта чернозема обыкновенного показало, что присутствие в почве пестицида ТМТД оказывает отрицательное воздействие на прорастание семян, рост и развитие корней пшеницы. Добавление в почву биодеструктора пестицида ТМТД (Pseudomonas putida) привело снижению степени фитотоксичности чернозема обыкновенного. Это указывает на эффективность применения микроорганизмов-биодеструкторов для очистки чернозема обыкновенного от загрязнения пестицидом ТМТД.

7. Учитывая результаты проведенного исследования, а также экологическую эффективность и экономическую выгодность применения биологических методов восстановления загрязненных почв, штамм Pseudomonas putida Тм4 может быть рекомендован как деструктор пестицида ТМТД для практического применения. Внесение оптимальных доз бактерий-деструкторов может оказать существенное влияние на уровень концентрации пестицидов в столь важной природной среде, как почва.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ: г - грамм га - гектар

ДДТ - дихлордифенилтрихлорэтан дм - дециметр ед - единиц

ИТФ - интегральный показатель токсичности среды кг - килограмм

КОЕ - количество колониеобразующих единиц л - литр м.к. - микробные колонии

М9 - минеральная безуглеродная среда мг - миллиграмм мин - минута мкг - микрограмм мкм - микрометр мл - миллилитр млн. - миллион млрд. - миллиард мм — миллиметр

МПА - мясопептонный агар

МПБ - мясопептонный бульон нм - нанометр об/мин - оборотов в минут

ОДК - ориентировочно допустимая концентрация

ОП - оптическая плотность

С - градус Цельсия

ПВ - полная влагоемкость почв

ПДК - предельно допустимая концентрация

ПДК р.з. - концентрация вредного вещества в воздухе рабочей зоны в мгр/м3 рН - водородный показатель среды см - сантиметр т - тонна

ТМТД - тетраметилтиурамдисульфид

ТТФ - трифенилформазан

ТТХ - 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида ч -час

1Л350 - средняя доза вещества, вызывающая гибель половины членов испытуемой группы

I - температура

X - длина волны

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование влияния пестицида тетраметилтиурамдисульфида на почвенные микроорганизмы чернозема обыкновенного, а также выявление способности природных изолятов микроорганизмов из этих почв к биодеструкции пестицида ТМТД несомненно имеет важное научно-теоретическое и практическое значение.

В ходе настоящего исследования нами установлено, что наиболее устойчивыми к загрязнению различными концентрациями пестицида ТМТД (10, 100 и 1000 ПДК) оказались гетеротрофные бактерии, обитающие в черноземе обыкновенном. Присутствие пестицида ТМТД в почве стимулировало рост бактерий, численность которых к 30 дню эксперимента, превышала контроль в 1,2-1,5 раза. Наиболее чувствительными к загрязнению почвы пестицидом ТМТД оказались актиномицеты, в меньшей степени плесневые грибы. Концентрации пестицида 100 и 1000 ПДК оказывали токсичное действие на популяцию актиномицетов и снижали их рост и развитие на протяжении всего эксперимента. Установлено, что ТМТД подавлял почвенные грибы, так же как и актиномицеты, в течение первых дней эксперимента. Однако затем наблюдалось медленное восстановление численности грибов, но исходного уровня популяция так и не достигла.

Проведенные нами исследования показали, что гетеротрофные бактерии проявили высокую устойчивость к повышенным концентрациям пестицида тетраметилтиурамдисульфида. В почве, содержащей различные дозы пестицида, было отмечено существенное увеличение количества бактерий. По нашему предположению это указывало на способность бактерий использовать препарат в процессах метаболизма, а соответственно участвовать в деструкции пестицида ТМТД.

В ходе настоящего эксперимента нами были выявлены три доминирующих штамма бактерий, использующие пестицид ТМТД в качестве единственного источника углерода (Тм4, Тм9 и ТмЮ) и один штамм бактерий, использующий пестицид как косубстрат (ТмЗ). Полученные результаты показали, что пестицид ТМТД наиболее активно стимулировал рост трех штаммов гетеротрофных бактерий, которые образовывали крупные колонии с зонами просветления, что позволило предположить способность данных культур использовать пестицид как единственный источник углерода, а, следовательно, и разрушать его. Нами были отобраны данные штаммы для исследования деструкционного потенциала путем установления изменения концентрации ксенобиотика с помощью спектрофотометра.

Проведенные исследования показали, что наиболее четкие изменения в спектральной характеристике были получены при культивировании только одного штамма (Тм4). Установленные изменения в спектральной характеристике ТМТД при культивировании со штаммом деструктором говорят о трансформации пестицида. Анализ полученных результатов позволил выделить один штамм бактерий, который обладает наиболее активным деструкционным потенциалом.

На основании изучения совокупности фенотипических и биохимических признаков исследуемого штамма, проведенная идентификация позволила отнести его к виду Pseudomonas putida. Результаты нашего исследования дополнили представления о том, что представители данного рода бактерий являются одними из самых устойчивых и перспективных агентов в биодеструкции высоко персистентных органических пестицидов. Штамм Pseudomonas putida Тм4 может быть рекомендован как деструктор пестицида ТМТД.

Для оценки эффективности ремедиации чернозема обыкновенного с использованием микроорганизмов биодеструкторов были использованы два тест-объекта: гидробионт Daphnia magna Straus и представитель высших растений - пшеница.

Результаты экотоксикологического исследования показали острое токсическое действие водных вытяжек проб почвы, загрязненных пестицидом

ТМТД, на тест-объект Daphnia magna за все время исследования. Процент погибших в тестируемых пробах дафний превышает 50 по сравнению с контролем, что подтверждает токсичные свойства пестицида ТМТД.

Введение биодеструктора в загрязненные почвы дало положительный результат: на 7 сутки исследования смертность дафний составила 27%, что показывает на отсутствие острой токсичности в исследуемой пробе; на 30 сутки исследования смертность дафний составила 10% - тестируемая водная вытяжка не оказывает острого токсического действия. Результаты оценки токсичности экспериментальных проб чернозема обыкновенного методами биотестирования с использованием биотест-объектов дафний (Daphnia magna Straus) показали высокую токсичность проб почвы, зараженной пестицидом ТМТД, до 30 суток исследования. Результаты исследований проб почвы, зараженной пестицидом ТМТД и внесенным биодеструктором, показали низкую степень токсичности на 7 и 30 сутки исследований. Это говорит об отсутствии острой токсичности в исследуемых пробах, но дополнительно указывает, что эти пробы нельзя признать безвредными по показателю токсичности. Однако, на основании данных результатов, можно отметить эффективность действия биодеструктора в разрушении пестицида ТМТД.

Анализ проведенных исследований показал, что пестицид ТМТД оказывает негативное влияние на тест-культуру пшеницу, проявляющееся в снижении всхожести семян и ингибировании корневого прироста.

Всхожесть семян пшеницы на всех этапах эксперимента не достигла контрольных показателей. На 7 и 14 сутки эксперимента почва была охарактеризована как «умеренно токсичная». Это объясняется тем, что ТМТД является контактным фунгицидом защитного действия, подавляющий прорастание спор или начальный рост мицелия патогена. Поэтому он обладает слабой токсичностью по отношению к проросткам. Наилучший результат был отмечен на 30 сутки эксперимента. Применение биодеструктора способствовало разрушению пестицида ТМТД в черноземе обыкновенном, что сказалось на увеличении всхожести семян пшеницы по сравнению с показателями, полученными на 7 и 14 сутки. Почва была отнесена к пятой степени токсичности - практически не токсичная.

Пестицид ТМТД оказывал негативное воздействие на корни пшеницы, проявляющееся в угнетении их роста на всех сроках исследования. Почва, загрязненная пестицидом, была отнесена ко II степени - опасно токсичная. Положительный результат применения биодеструктора также был отмечен и на 30 сутки эксперимента. Внесение биодеструктора в почву способствовало снижению фитотоксичности чернозема обыкновенного, загрязненного пестицидом ТМТД. В результате чего почва была отнесена к четвертой степени токсичности и охарактеризована как «мало токсичная». Как и в случае со всхожестью семян пшеницы, показатели роста и развития корней при применении биодеструктора не достигли контрольных, что говорит нам о высокой токсичности пестицида ТМТД по отношению к сельскохозяйственным культурам. Однако нами отмечена тенденция к снижению фитотоксичности чернозема обыкновенного, загрязненного пестицидом ТМТД, при применении микроорганизмов-биодеструкторов (штамм Pseudomonas putida Тм4).

Результаты проведенного исследования дают нам основание предполагать, что наиболее перспективными агентами в биотехнологии ремедиации природных сред от пестицидов являются бактерии: они обладают высокой скоростью деструкции и меньшим фитототоксическим эффектом. Присутствие в почве пестицида ТМТД оказывает отрицательное воздействие на тест-объект Daphnia magna, а также на прорастание семян, рост и развитие корней пшеницы. Добавление в почву биодеструктора пестицида ТМТД (штамм Pseudomonas putida Тм4) привело к снижению степени фитотоксичности чернозема обыкновенного и уменьшению смертности Daphnia magna. Это указывает на эффективность применения микроорганизмов-биодеструкторов для очистки чернозема обыкновенного от загрязнения пестицидом ТМТД.

В качестве практических рекомендаций можно предложить следующее:

1. В случаях загрязнения чернозема обыкновенного, возникшего при внесении завышенных доз пестицида ТМТД, длительном применении на одном и том же участке, нарушении сроков и технологии внесения, при аварийных ситуациях, рекомендуется вносить в почву биодеструктор пестицида ТМТД (штамм Pseudomonas putida Тм4).

2. Для устранения загрязнений почв пестицидом ТМТД рекомендуется с помощью агротехнических приемов (увлажнение, аэрация, внесение удобрений) активизировать деятельность аборигенной микрофлоры с целью повышения детоксикационного потенциала почвы.

3. Для повышения самоочищающей способности почв от загрязнения пестицидом ТМТД, рекомендуется проводить мероприятия по восстановлению плодородия и повышению биоэнергетического потенциала почв с целью активизации роста и размножения микроорганизмов и усиления их минерализационной деятельности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Тугаева, Татьяна Александровна, 2013 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Агрономическая микробиология / Под ред. Г.С. Муромцева. - JI.: Колос, 1976.-231 с.

2. Ананьева Н.Д. Микробиологическая оценка почв в связи с самоочищением от пестицидов и устойчивостью к антропогенным воздействиям: Автореф. дис. доктора биол. наук. - М.: 2001. - 49 с.

3. Ананьева Н.Д. Микробиологические аспекты самоочищения и устойчивости почв / Н.Д. Ананьева. - М.: Наука, 2003. - 223 с.

4. Анисимова М А. Детоксицирующая способность почв и выделенных из них гуминовых кислот по отношению к гербицидам.: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 1997.-24 с.

5. Аристовская Т.В., Чугунова М.В. Экспресс-метод определения биологической активности почвы / Т.В. Аристовская, М.В. Чугунова // Почвоведение. - 1989. -№ 11. - С. 142-147.

6. Безуглова О.С. Гумусное состояние почв юга России. -Ростов-на-Дону: Издательство СКНЦ ВШ, 2001. - 228 с.

7. Божукова Е.Е. Пестициды и особенности их взаимодействия с окружающей средой / Е.Е. Божукова // Природоохранное образование в университетах. - М., 1985. - С.48-68.

8. Бурхан О.П. Влияние пестицидов на биологическую активность чернозема типичного центральной зоны Северо-Западного Предкавказья: Автореф. дис. канд. биол. наук. - Краснодар, 2010. - 25 с.

9. Вредные вещества в промышленности: справочник для химиков, инженеров и врачей. - Изд. 7-е, пер. и доп. В трех томах. Том II. Органические вещества / Под ред. засл. деят. науки проф. Н. В. Лазарева и докт мед. наук Э. Н. Левиной. - Л.: «Химия», 1976. - 624 с.

10. Галиулин Р.В., Пачепский Я.А., Сухопарова В.П., Соколов М.С., Шуюоров Т.Х. Самоочищение сельскохозяйственных территорий от

остаточного количества стойких пестицидов в зависимости от свойств почв / Р.В. Галиулин и др. // Агрохимия. - 1990. - № 1. - С. 97-114.

11. Ганжара Н.Ф. Практикум по почвоведению / Ганжара Н.Ф., Борисов Б.А., Байбеков Р.Ф. - под ред. доктора биол. наук, профессора Н.Ф. Ганжары. - М.: Агроконсалт, 2002. - 280 с.

12. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик, Дж. Пастернак. - Пер. с англ. - М.: Мир, 2002. - 589 с.

13. Гогуадзе В.Д. Воздействие некоторых гербицидов и их смесей на микрофлору красноземов / В.Д. Гогуадзе // Бюлл. ВНИИ с.-х. микробиология. -1983.-Т.6.- №39.-С. 48-51.

14. Головлева JI.A., Головлев E.J1. Микробиологическая деградация пестицидов / J1.A. Головлева, E.J1. Головлев // В кн.: Успехи микробиологии. -М.: Наука, 1980.-№ 15.-С. 137-179.

15. Головлева Л.А., Головлев Е.Л., Зякун A.M. Метаболизм ордрама -гербицида тиокарбамата микроорганизмами / Л.А. Головлева, Е.Л. Головлев, A.M. Зякун и др. // Известник АН СССР. Серия биол. - 1978. - № 1. - С. 44-51

16. ГОСТ 17.4.1.02-83. Охрана природы. Почвы. Классификация химических веществ для контроля за загрязнения. - М.: Стандартинформ, 2008 - 5 с.

17. ГОСТ 28168-89. Почвы. Отбор проб. - М.: Стандартинформ, 2008 - 6 с.

18. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. - М.: Минсельхоз России, 2012.-575 с.

19. Добровольский Г.В. Почва, микробы и азот в биосфере / Г.В. Добровольский, М.М. Умаров // Природа. - 2004. - № 6. - С. 15-22.

20. Добровольский Г.В., Гришина Л.А. Охрана почв / Г.В. Добровольский, Л.А. Гришина. - М.: Изд-во МГУ, 1985. - 224 с.

21. Добровольский Г.В., Никитин Е.Д. Сохранение почв как незаменимого компонента биосферы / Г.В. Добровольский, Е.Д. Никитин. - М.: Наука, МАИК «Наука/Интерпериодика», 2000. - 185 с.

22. Драган H.A. Мониторинг и охрана почв: учебное пособие / H.A. Драган. -Симферополь: Изд-во ТНУ, 2008. - 172 с.

23. Егоров Н.С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии: учеб. пособие / Под ред. Н.С. Егорова. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Изд-во МГУ, 1995.-224 с.

24. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) (в редакциях Решений Комиссии Таможенного союза от 17.08.2010 №341; от 18.11.2010 №456; от02.03.2011 №571; от07.04.2011 №622; от 18.10.2011 №829) Раздел 15. Требования к пестицидам и агрохимикатам.

25. Ермаков Н.М., Корнеев Г.А., Якавлев С.А., Колнобрицкая O.A., Попов Н.В., Толоконникова С.И. Неспецифическая профилактика зооантропонозных инфекций (дезинсекция), пути ее развития / Н.М. Ермаков и др. // Энтомологические и паразитологические исследования в Поволжье. - Саратов: Изд-во Сарат. Ун-та, 2001. - Вып. 1. - С. 66-69.

26. Захаренко В.А. Гербициды / В.А. Захаренко. - М.: Агропромиздат, 1990. -240 с.

27. Звягинцев Д.Г. Микроорганизмы и охрана почв / Д.Г. Звягинцев. - М.: Наука, 1989.-157 с.

28. Звягинцев Д.Г. Почва и микроорганизмы / Д.Г. Звягинцев. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1987. - 256 с.

29. Зименко Т.Г., Самсонова A.C., Мисник А.Г., Гаврилкина Н.В., Филипшанова Л.И. Микробные ценозы торфяных почв и их функционирование / Т.Г. Зименко и др. - Мн.: Наука и техника, 1983. -181 с.

30. Карасевич Ю.Н. Основы селекции микроорганизмов, утилизирующих синтетические органические соединения / Ю.Н. Карасевич. - М., 1982. - 142 с.

31. Кауричев И.С. Практикум по почвоведению / И.С. Кауричев- М.: Колос, 1980.-272 с.

32. Квеситадзе Г.И. Введение в биотехнологию / Г.И. Квеситадзе, A.M. Безбородое. - Ин-т биохимии им. А.Н. Бахай. - М.: Наука, 2002. - 284 с.

33. Керни П., Кауфман Д. Разложение гербицидов / П. Керни, Д. Кауфман. -М.: Мир, 1971 -358 с.

34. Ковда В.А. Основы учения о почвах. Общая теория почвообразовательного процесса/В.А. Ковда. -М.: Наука, 1973. -Кн.1. -448 с.

35. Ковда В.А. Основы учения о почвах. Общая теория почвообразовательного процесса /В.А. Ковда. -М.: Наука, 1973. -Кн.2. - 468 с.

36. Ковда В.А. Проблемы защиты почвенного покрова и биосферы планеты / В.А. Ковда. - Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР, 1989. - 156 с.

37. Колупаев A.B. Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов: Автореф. дис.канд.биол.наук. - Москва, 2010. -28 с.

38. Колупаев A.B., Ашихмина Т.Я., Широких И.Г. Реакция почвенных микромицетов на пестицидное загрязнение / A.B. Колупаев, Т.Я. Ашихмина, И.Г. Широких // Иммунология, аллергология, инфектология. - 2009. - № 2. - С. 50-51

39. Круглов Ю.В. Микробиологические аспекты применения гербицидов в сельском хозяйстве: Автореф. дис. доктора биол. наук. - Москва, 1984 - 46с.

40. Круглов Ю.В. Микрофлора почвы и пестициды / Ю.В. Круглов. - М.: Агропромиздат, 1991. - 128 с.

41. Крупнова Т.Т., Сухарев Ю.И. Химия окружающей среды: Учебное пособие / Т.Т. Крупнова, Ю.И. Сухарев. - Челябинск: Изд. ЮУрГУ, 2005. - Ч. 2.-36 с.

42. Ксенофонтова О.Ю. Взаимодействие пестицидов и микроорганизмов почвы: Автореф. дис. канд. биол.наук. - Саратов, 2004. - 28 с.

43. Кузнецов А.Е., Градова Н.Б. Научные основы экобиотехнологии / А.Е. Кузнецов, Н.Б. Градова. -М.: Мир, 2006. -504 с.

44. Куликова H.A. Связывающая способность и детоксицирующие свойства гумусовых кислот по отношению к атразину.: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 1999.-29 с.

45. Лебедева Г.Ф., Агапов В.И., Благовещенский Ю.Н., Самсонова В.П. Гербициды и почва / Г.Ф. Лебедева и др. - М.: МГУ, 1990. - 208 с.

46. Либерштейн И.И. Взаимодействие пестицидов с микроорганизмами / И.И. Либерштейн. - Кишинев: Штииница, 1984. - 140 с.

47. Литвинов В.Ф. Прикладная экология: Учеб. пособие / В.Ф. Литвинов, Э.А. Десятскова, И. А. Елистратова. - НовГУ им. Ярослава Мудрого, 2002. - 58 с.

48. Лунев М.И. Пестициды и охрана агрофитоценозов / М.И. Лунев. - М.: Колос, 1992.-270 с.

49. Марфенина O.E. Антропогенная экология почвенных грибов / O.E. Марферина. - М. : Медицина для всех, 2005. - 196 с.

50. Марфенина O.E. Микробиологические аспекты охраны почв / O.E. Марферина. -М.: Изд-во МГУ, 1991. - 118 с.

51. Мельников H.H. Пестициды. Химия, технология и применение / H.H. Мельников. -М.: Химия, 1987 - 712 с.

52. Мельников H.H., Новожилов К.В., Пылова Т.Н. Химические средства защиты растений (пестициды): справочник / H.H. Мельников и др. - М.: Химия, 1980.-288 с.

53. Методика выполнения измерений всхожести семян и длины корней проростков высших растений для определения токсичности техногенно-загрязненных почв / М-П-2006. Федеральный реестр (ФР) ФР. 1.39.2006.02264. -Санкт-Петербург, 2006. - 19 с.

54. Методика определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод, отходов по смертности и изменению плодовитости дафний. ФР.1.39.2007.03222. - М.: Акварос, 2007.-41 с.

55. Методические указания к лабораторному практикуму и СРС для студентов специальности «Биотехнология» / Составители C.B. Гомбоева, Е.Г. Инешина. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2006. - 61 е.;

56. Мишустин E.H., Емцев В.Т. Микробиология / E.H. Мишустин, В.Т. Емцев. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Агропромиздат, 1987. - 368 с.

57. Мипгустин E.H., Перцовская М.И. Микроорганизмы и самоочищение почвы / E.H. Мишустин, М.И.Перцовская. - М.: Изд-во Академии Наук СССР, 1954.-651 с.

58. Молекулярные основы взаимоотношений ассоциативных микроорганизмов с растениями / Под ред. В.В. Игнатова. - М.: Наука, 2005. -262 е.;

59. Мотузова Г.В., Безуглова О.С. Экологический мониторинг почв: учебное пособие / Г.В. Мотузова, О.С., Безуглова. - М.: Академический Проект Гаудеамус, 2007. - 237 с.

60. Нетрусов А.И. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А.Егорова, Л.М.Захарчук и др. - Под ред. А.И. Нетрусова. - М.: Издательский центр «Академия», 2005. - 608 с.

61. Нетрусов А.И. Экология микроорганизмов: учебное пособие для студентов ВУЗов. / А.И. Нетрусов, Е.А. Бонч-Осмоловская, В.М. Горленко и др. / под ред. Нетрусова А.И. - М.: Издательский цент «Академия», 2004. - 272с.

62. Общая микробиология: учебное пособие / под ред. А.И. Нетрусова, И.Б. Котовой - М.: Издательский центр «Академия», 2007. - 288 с.

63. Определитель бактерий Берджи: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крита, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса. - М.: Мир, 1997. - Т. 2. - 368 с.

64. Охрана природы (химическая экология): учебное пособие / Т.К. Балина, Ю.Г. Папулов, P.A. Зимин. - Твер.гос. ун-т. - Тверь, 1993. - 72 с.

65. Оценка и регулирование качества окружающей природной среды: учебное пособие для инженера-эколога / Под ред. А.Ф. Порядина и А.Д. Хованского. - М.: НУМЦ Минприроды России, Изд. дом «Прибой», 1996. - 350 с.

66. Патент 2051961 Российская Федерация, МКП7 C12N1/00, C12N1/14, C12N1/20, C12Q1/00, C12Q1/32. Способ выявления микроорганизмов деструкторов ксенобиотиков / Гранатская Т.А., Плацында В.А., Дворникова Т.П., Сирецану Л.Ф., заявитель и патентообладатель Ин-т микробиологии АН Республики. - № 5046125/13. заявл. 04.06.1992, опубл. 10.01.1996.

67. Перечень разрешенных к применению пестицидов. Защита растений. -М.: Минсельхоз России, 1992. -№4. - С. 20-34.

68. Попов С.Я., Дорожкина JI.A., Калинин В.А. Основы химической защиты растений / С.Я. Попов, Л.А. Дорожкина, В.А. Калинин. - Под ред. С.Я. Попова. -М.: Арт-Лион, 2003. - 208 с.

69. Решетов Г.Г., Денисов К.Е., Корчаков A.B. Пути восстановления энергетического потенциала в агросистемах Поволжья / Г.Г. Решетов, К.Е. Денисов, A.B. Корчаков // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2010. - №1. - С.9-14.

70. Решетов Г.Г., Тугаева Т.А. Влияние пестицида ТМТД на численность микроорганизмов в черноземных почвах / Г.Г. Решетов, Т.А. Тугаева // Вестник Саратовского госагроуниверситета. - 2013. - №4 (в печати).

71. Решетов Г.Г., Тугаева Т.А. Выделение микроорганизмов-деструкторов пестицида ТМТД из черноземных почв / Г.Г. Решетов, Т.А. Тугаева // Вестник Саратовского госагроуниверситета. - 2013. - №3 (в печати).

72. Решетов Г.Г., Тугаева Т.А. Определение фитотоксичности чернозема обыкновенного, загрязненного пестицидом тетраметилтиурамдисульфидом / Г.Г. Решетов, Т.А. Тугаева // Научная жизнь. - Саратов, 2012. - №4. - С. 139146.

73. Руссель С. Микроорганизмы и жизнь почвы: Пер. с польского Г.Н. Мирошниченко. -М.: «Колос», 1977. - 224 с.

74. Саловарова В.П., Трифонова Т.М. Биотехнология и окружающая среда: Учебное пособие / В.П. Саловарова, Т.М. Трифонова. - Иркутск: Изд-во ИГУ, 1996.-84с.

75. Синицына Н.Е., Гришин П.Н., Варюхин В.В., Кравченко В.В., Павлова Т.И. Почвенный покров Саратовской области и его агроэкологическая характеристика / Н.Е. Синицына и др. - ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ». -Саратов, 2009. - 124 с.

76. Скрябин Г.К., Головлева Л.А. Использование микроорганизмов в органическом синтезе / Г.К. Скрябин, Л.А. Головлева. - М.: Наука, 1976. -336 с.

77. Скрябин Г.К., Головлева JI.A. Микробиологическая трансформация и деградация пестицидов / Г.К. Скрябин, JI.A. Головлева // Изв. АН СССР, сер. биол. и хим. - 1975. - № 6. - С. 805-819.

78. Современная микробиология: Прокариоты / Под ред. Й. Ленгелер, Г. Древе, Г. Шлегель. -М.: Мир, 2005. - Т. 2. - 496 с.

79. Соколов М.С., Эчкалов А.П. Методологические принципы экотоксикологии пестицидов / М.С. Соколов, А.П. Эчкалов // Химия в сел. хоз-ве.-1977.-№6.-С. 67-73.

80. Ступин Д.Ю. Загрязнение почв и новейшие технологии их восстановления: Учебное пособие / Д.Ю. Ступин. - СПб.: Издательство «Лань», 2009.-432 с.

81. Теппер Е.З. и др. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева. - Изд. 2-е, перераб. и доп. - М.: Колос, 1979. -216 с.

82. ТМТД [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.agrohimiya.ru/ article/31/8/.

83. ТМТД. Контактный фунгицидный протравитель семян многих сельскохозяйственных культур [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http: //www. avgust. com/product/?country=rf&drug_type=70&drug_id=1046.

84. Усов Н.И. Почвы Саратовской области / Н.И. Усов. - Саратов: Облгиз, 1948.-Ч. 1.-288 с.

85. Федоров Л.А., Яблоков A.B. Пестициды - токсический удар по биосфере и человеку / Л.А. Федоров, A.B. Яблоков. - М.: Наука, 1999. - 462 с.

86. Фелленберг Г. Загрязнение природной среды. Введение в экологическую химию: Пер. с нем / Г.Фелленберг. -М.: Мир, 1997. - 232 с.

87. Филипчук, О.Д. Использование супрессивности почвы в защите растений от возбудителей инфекций / О.Д. Филипчук, М.С. Соколов, Т.В. Павлова // Агрохимия. 1997. -№ 8.-С. 81-92.

88. Хайниш Э. и др. Агрохимикаты в окружающей среде / Э. Хайниш. - М., 1979.-357 с.

89. Чиров П.А., Ксенофоитова О.Ю. Изучение влияния пестицидов на микроорганизмы почвы: Метод, реком. для студ. биол. фак-та / П.А. Чиров, О.Ю. Ксенофоитова. - Саратов: СГУ, 2002. - 16с.

90. Чкаников Д.И. Поведение 2,4-Д и других хлорфеноксикислот в почве / Д.И. Чкаников //Агрохимия. - 1983. -№ 12. - С. 111-121.

91. Чулкина В.А. Агротехнический метод защиты растений / В.А. Чулкина, Е.Ю. Торопова, Ю.И. Чулкин, Г.Я. Стецов. -М.: Маркетинг, 2000. - 336 с.

92. Шорманов В.К., Ким А.В., Дурицын Е.П., Баранов Ю.Н. Особенности определения пестицида ТМТД в биологическом материале / В.К. Шорманов, А.В. Ким, Е.П. Дурицын, Ю.Н. Баранов // Судебно-медицинская экспертиза. -2010. - №2. - С.45-49.

93. Alexander M. Microbial ecology. New York: J. Wiley a Sons Inc, 1971. - 458 P-

94. Bellinaso M., Greer C.W., Peralba M. Biodégradation of the herbicide trifluralin by bacteria isolated from soil // Microbiol. Ecol. - 2003. - Vol. 43. - P. 191-194.

95. Biology of prokaryotes / Ed. by J.W. Lengeler, G. Drews, H.G. Schlegel. -Georg Thieme Verlag, 1999. - 955 p.

96. Biziuk M. Pestycydy, wystepowanie, oznaczanie I unieszkodliwianie. -Warszawa: Naukowo-Techiczne, 2001. - 275 p.

97. Breazeale F.W., Camper N.D. Bacterial, fungal and actinomycete populations in soils receiving repeated applications of 2,4-dichloro-phenoxy acetic acid and trifluralin // Appl. Microbiol. - 1970. -№ 19. - P. 369-380.

98. Bridges J.S., Dempsey C.R. Pesticide waste disposal technology. - William Andrew. - 1988.-331 p.

99. Brokamp A., Happe В., Schmidt F.R.J. Cloning and Nucleotide Sequence of a D,L-Haloalkanoic Acid Dehalogenase Encoding Gene from Alcaligenes xylosoxidans ssp. denitrificans ABIV // Biodégradation. - 1997. - № 7. - P. 383-396.

100. Caracciolo A.B., Giuliano G., Grenni P., Guzzella L., Pozzoni F., Bottom P., et al. Degradation and leaching of the herbicides metolachlor and diuron: a case study in an area of Northern Italy // Environm. Pollution. - 2005. - Vol. 134. - P.525-534.

101. Caracciolo A.B., Giuliano G., Grenni P., Guzzella L., Pozzoni F., Bottom P. et al. Degradation and leaching of the herbicides metolachlor and diuron: a case study in an area of Northern Italy // Environm. Pollution. - 2005. - Vol. 134. - P. 525-534.

102. Carvalho D.D.C., Oliveira D.F., Correa R.S.B., Campos V.P., Guimaraes R.M., Coimbra J.L. Rhizobacteria able to produce phytotoxic metabolites // Brazilian J. of Microbiol. - 2007. - Vol. 38. - P. 759-765.

103. Cassidy M.B., Trevors J.T., Zablotowicz R.M. Chlorophenol and nitrophenol metabolism by Sphinogomonas sp. UG30 // J. Ind. Microbiol. Biotechol. - 1999. - № 23.-P. 351-368.

104. Cycon M., Piotrowska-Seget Z. Changes in bacterial diversity and community structure following pesticides addition to soil estimated by cultivation technique // Ecotoxicology. - 2009. - Vol. 18. - P. 632-642.

105. Cycon M., Piotrowska-Seget Z. Changes in bacterial diversity and community structure following pesticides addition to soil estimated by cultivation technique // Ecotoxicology. - 2009. - Vol. 18. - P. 632-642.

106. Dieguez-Carbonell D., Rodriguez Pascual C. Adsorption of the herbicide "2,4-D" by montmorillonite // Environ. Qual. Safety. - 1975 suppl. - Vol. III. - 237 p.

107. Domsh K.H. Principles of pesticide microbe interactions in soil // Soil Biol, and ConservBiosphere. - Vol. 1,- Budapest, 1984.-P.179-184.

108. Don P.H., Pemberton J.M. Genetic and physical map of 2,4-dichlorphenoxyacetic acid - degradative plasmid pJP 4 // J. Bacterid. - 1985. - Vol. 161. -№1. -P.466-468.

109. Duah-Yentumi S., Johnson D.B. Changes in soil microflora in response to repeated applications of some pesticides // Soil Biol. Biochem. - 1986. - Vol. 18. - P. 629-635.

110. Dumontet S., Perucci P. The effect of acifluorfen and trifluralin on the size of microbial biomass in soil // The Sci. of the Total Environm. - 1992. - Vol. 123- 124. -P. 261-266.

111. Fliefibach A., Mâder P. Short- and long-term effects on soil microorganisms of two potato pesticide spraying sequences with either glufosinate or dinoseb as defoliants // Biology and Fertility of Soils. - 2004. - Vol. 40. - № 4. - P. 268-276.

112. Fournier D., Halasz A., Spain J., Fiurasek P., Hawaii J. Determination of key metabolites during biodégradation of hexahydro-l,3,5-trinitro-l,3,5-triazine with Rhodococcus sp. strain DN22 // Appl. and Environm. Microbiol. - 2002. - Vol. 68. -№1.-P. 166-172.

113. Foye W.O., Van De Workeen I.B., Matthes J.D. Copper complexes of aromatic dithiocarbamates and their antifungal activity // J. of the American Pharmaceutical Association. - 1958. - Vol 47. - P. 556-558.

114. Frear D.S., Mansager E.R., Swanson H.R. Picloram metabolism in leafy spurge: isolation and identification of glucose gentiobiose conjugates // J. Agric. Food Chem. - 1989. -№ 37. - P. 1408-1412.

115. Gaynor J.D. Microbial hydrolysis of diclofop-methyl in soil // Soil Biol. Biochem. - 1992. - № 24. - P. 29-32.

116. Gennari M., Vincenti M., Negre M., Ambosoli R. Microbial metabolism of fenoxaprop-ethyl //Pestic. Sci. - 1989. -№ 44. - P. 299-303.

117. Getzin L.W. Degradation of chlorpyrifos in soil: influence of autoclaving, soil moisture, and temperature // J. Econ. Entomol. - 1981. - Vol. 74. - P. 158-162.

118. Gomez F., Martinez-Toledo M.V., Salmeron V., Rodelas В., Gonzalez- Lopez J. Influence of the insecticides profenofos and diazinon on the microbial activities of Azospirillum brasilense //Chemosphere. - 1999. - Vol 39. - P. 945-957.

119. Gougoulias N., Vagelas I., Vasilakoglou I., Gravanis F., Louka A., Wogiatzi E., Chouliaras N. Comparison of neem or oregano with thiram on organic matter decomposition of a sand loam soil amended with compost, and on soil biological activity // J. of the Sci. of Food and Agric. - 2010. - Vol. 90. - № 2. - P. 286-290.

120. Graham P.H., Ocambo G., Ruiz L.D., Duque A. Survival of Rhizobium phaseoli in contact with chemical seed protectants // Agron J. - 1980. - Vol. 72. - P. 625-627.

121. Guar A.C., Mistra K.C. Effect of simazine, lindane and resan on soil respiration and nitrification rates // Plant and soil. - 1977. - Vol. 46. - P. 782-786.

122. Hamaker J.W., Tompson J.M. Organic chemicals in the soil environment / Ed. by C.A.J. Goring, J.W. Hamaker - N.Y.: Marcel Dekker Inc., 1972. - Vol. 1. - 49 p.

123. Hart M.R., Brookes P.C. Soil microbial biomass and mineralization of soil organic matter after 19 years of cumulative application of pesticides // Soil Biol. Biochem. - 1996. - Vol. 28. - P. 1641-1649.

124. Heilling C.S., Dennison D.G., Kaufman D.D. Fungicides movement in soils // Phytopatology. - 1974. - Vol. 64. - P. 1091-1100.

125. Helvi H.-T., Rosenberg C„ Sitanen H., Kilpi S., Simojoki P. The effect of annual use of pesticide on soil reduces in the soil and barley yields // Pesticide Sci. -1985. - Vol. 16. - № 4. - P. 341-348.

126. Hoagland R.E., Zablotowicz R.M. The role of plant and microbial hydrolytic enzymes in pesticides metabolism pesticides biotransformation in plants and microorganisms: similarities and divergence / ACS Symposium Series 777. Washington, D.C.: American Chemical Society, 2001. - P. 58-88.

127. Howard P.H. Handbook of environmental fate and exposure data for organic chemicals. - CRC Press Tylor & Francis Group. - Vol. 3. - 1991. - 712 p.

128. Janke D., Fritsche W. Nature and significance of microbial cometabolism //Experimentia, V.39, № 11. - 1983. - P. 1236-1246.

129. Jayant S., Chowdhary A., Chaudhari S., SahaJ., Chowhary A., Chaudri S. Stimulation of herterotrophic dinitrogen fixation in barley root associations by the herbicide pendimethalin and its metabolic transformation by Azotobacter spp. // Soil Biol. Biochem. - 1991. - Vol. 23. - P. 569-573.

130. Kamanavalli CM., Ninnekar H.Z. Biodégradation of propoxur by Pseudomonas species // World J. of Microbiol, and Biotech. - 2000. - Vol. 16. - № 4. P. 329-331.

131. Kaufman D.D. Accelerated biodégradation of pesticides in soil and its effect on pesticide efficacy / Proc. Br. Crop Prot. Conf. - 1987. - Vol. 2. - P. 515-522.

132. Kôcher H., Kellner H.M., Lôtzsch K, Dorn E., Wink O. Mode of action and metabolic fate of the herbicide fenoxaprop-ethyl // Br. Crop Prot. Conf. Weeds. -1985. -№1.-P. 341-347.

133. Kuwatsura C., Igarashi M. Degradation of PCP on soil // Soil Sci. and Plant Nutrition. - 1975. - № 4. - P. 21

134. Lai R., Saxena D.M. Accumulation, metabolism and effect of organochlorine insects on microorganisms // Microbiol. Rev. - 1982. - Vol. 46. - № 1. - P. 95-127.

135. Linch J.M., Hobbie J.E. Microorganisms in action: concepts and application in microbial ecology. Blackwell scientific publications. Oxford, London, Edinburg, Boston, 1988.-363 p.

136. Lo C.-C. Effect of pesticides on soil microbial community // J. of Evironm. Sci. and Health. - 2010. - Vol. 45. - № 5. - P. 348-359.

137. Loos M.A., Schoresse I.F., Mapham W.R. Phenoxy herbicide degradation in soil: Quantative studies of 2,4-D and MCDA degradating microbial populations // Soil Biol. Biochem. - 1979. -№ 11. - P. 377-385.

138. Maeda K., Tonomura K. Microbial degradation of tetramethylthiuram disulfide (In Japanese) // Kogyo Gijutsuin Hakke Kenkyusho Kenkyu Hokoku. - 1971. - №33. -P. 1-8.

139. Mârtensson A.M.. Effects of agrochemicals and heavy metals on fast-growing rhizobia and their symbiosis with small-seeded legumes // Soil Biol. Biochem. -1992.-Vol. 24.-P. 435-445.

140. Martinez-Toledo M.V., Salmeron V., Gonzalez-Lopez J. Effect of simazine on the biological activity of Azotobacter chrodococcum II Soil Sci. - 1991. - Vol. 151. -P. 459-467.

141. Martinez-Toledo M.V., SalmeronV., Gonzalez-Lopez J. Effect of the insecticides methylpyrimifos and chlorpyrifos on soil microflora in an agricultural loam // Plant and soil. - 1992. - Vol. 147. - P. 25-30.

142. Megharaj M. Heavy pesticide use lowers soil health // Kondinin Landcare Group Magazine, Farming Ahead, 2002. - Vol. 121. -P.37-38.

143. Miller T.G. Living in the environment / T.G. Miller. - Belmont, California, 1988.-579 p.

144. Modern soil microbiology. 2nd edn. / Ed. by J.D. van Elsas, J.K. Jansson, J.T. Trevors. - Wellington: CRC Press, 2007. - 646 p.

145. Nelson M.J., Montgomery S.O., Pritchard P.H. Trichloroethylene metabolism by mircroorganisms that degradate aromatic compounds // Appl. Evironm. Microbiol - 1988. - Vol. 54. - № 2. - P. 604-606.

146. Nicholson P.S., Hirsch P.R. The effects of pesticides on diversity of culturable soil bacteria// J. of Appl. Microbiol. - 1998. - Vol. 84. - P. 551-558.

147. Niewadomska A., Sawicka A. Effect of carbendasim, imazetapir and thiram on nitrogenase activity, number of microorganisms in soil and yield of hybrid lucerne (Medicago media L.) // Polish J. of Environm. Studies. - 2002. - Vol. 6. - P. 737744.

148. Oliver D.P., Kookana R.S., Salama R., Correll R.L. Land use effects on sorption of pesticides and their metabolites in sandy soils. Atrazine and two metabolites, deethylatrazine and deisopropylatrazine, and prometryne // Australian J. of Soil Research. - 2003. - Vol. 41. - №5. - P. 861-874.

149. Pesticide effects on soil microflora. Eds.L. Somerville, M.P. Greaves. London-New-York-Philadelphia, 1987. - 360 p.

150. Pesticide risk assessment in rice paddies: theory and practice / Ed. by E. Carpi, D.G. Karpouzas - Elsevier, 2008. - 255 p.

151. Practical environmental bioremediation / Ed. by R.B. King, G.M. Long, J.K. Sheldon. - Lewis Publishers, 1998. - 184 p.

152. Providenti M.A., Lee H., Trevors J.T. Selected factors limiting the microbial degradation of recalcitrant compound // J. Ind. Microbiol. - 1993. - Vol. 12. - P. 379-395.

153. Rai J.P.N. Effect of long-term 2,4-D application on soil microbial populations //Biol. Fertil. Soils. - 1992. - Vol. 13. - P. 427-431.

154. Ramanand R., Balba M.T., Duffy J. Reductive deholagenation of chlorinated benzenez and toluenes under metonogenic conditions // Appl. Eviron. Microbiol -1993. - Vol. 59. -№ 10. - P. 3266-3272.

155. Richardson L.T. The persistence of thiram in soil and its relationship to the microbiological balance and damping-off control // Canad. J. Bot. - 1954. - Vol. 32. -P. 335-346.

156. Sabdono A., Radjasa O.K. Phylogenetic diversity of organophosphorous pesticide-degradation coral bacteria from mid-west coast of Indonesia // Biothechnology. - 2008. - № 7. - P. 694-701.

157. Sahina N., Tamer Ù. Isolation, characterization and identification of thiramdegrading microorganisms from soil enrichment cultures // Turk. J. Biol. -2000.-Vol.24.-P. 353-363.

158. Saikia N., Gopal M. Biodégradation of b-cyfluthrin by fungi // J. Agr. Food Chem. - 2004. - Vol. 52. - P. 1220-1223.

159. Sandmann E.R.L.C., Loos M.A. Enumeration of 2,4-D-degrading microorganisms in soils and crop plant rhizospheres using indicator media high populations associated with sugarcane // Chemosphere. - 1984. - Vol. 13. - P. 10731084.

160. Sawicka A., Selwet M. Effect of active ingredients on Rhizobium and Bradyrhizobium legume dinitrogen fixation // Polish J. of Environm.l Studies. -1998. - Vol. 7. -№. 5. - P. 317-320.

161. Sharma V.K., Aulakh J.S., Malik A.K. Thiram: degradation, applications and analytical methods // J. Environ. Monit. - 2003. -Vol. 5. - P. 717-723.

162. Shimabukuro R.H. Detoxication of herbicides // Weed Physiology. - 1985. -№2.-P. 215-240.

163. Smith A.E., Phatak S.C., Emmatty D.A. Metribuzin metabolism by tomato cultivars with low, medium, and high levels of tolerance to metribuzin // Pestic. Biochem. Physiol. - 1989. -№ 35. - P. 284-290.

164. Soil ecotoxicology / Ed. by J. Tarradellas, G. Bitton, D. Rossel - Wellington: CRC Lewis Publishers, 1997. - 360 p.

165. Sparling G., Schipper L.A., Yeates G.W., Aislabie J., Vojvodic-Vukovic M.,Ryburn J., Di H.J., Hewitt A.E. Soil characteristics, belowground diversity and rates of simazine mineralization of a New Zealand Gley soil in a chronosequence under horticultural use // Biology and Fertility of Soils. - 2008. - Vol. 44. - P. 633640.

166. Stenersen J. Chemical Pesticides: Mode of action and toxicology - Wellington: CRC Press, 2004. - 276 p.

167. Taiwo L.B., Oso B.A. The Influence of some pesticides on soil microbial flora in relation to changes in nutrient level, rock phosphate solubilization and Prelease under laboratory conditions // Agric. Ecosystem & Environm. - 1997. - Vol. 65. - P. 59-68.

168. Taiwo L.B., Oso B.A. The Influence of some pesticides on soil microbial flora in relation to changes in nutrient level, rock phosphate solubilization and Prelease under laboratory conditions // Agric. Ecosystem & Environm. - 1997. - Vol. 65. - P. 59-68.

169. Thomas J.C., Berger F., Jacquier M., Bernillon D., Baud-Grasset F., Truffault N., Normand P., Vogel P.M., Simonet P. Isolation and characterization of Novel y-hexachlorocyclohexane-degradation bacterium // J. of Bacteriology. - 1996. - Vol. 178.-№20.-P. 6049-6055.

170. Tu C.M. Utilization and degradation of lindane by soil microorganisms // Arch. Microbiol. - 1976. - Vol. 108. -№ 3. - P. 259-263.

171. Urakami T., Komagata K. Cellular fatty acid composition and coenzyme Q system in Gram-negative methanol-utilizing bacteria // J. Gen. Appl. Microbiol -1979.-Vol. 25.-P. 343-360.

172. Valenzula J., Buman U., Cespedes R., Padilla L., Gonzales B. Degradation of chlorophenols by Alcaligenes eutrophus JMP 132 (pJP 4) in bleached Kraft Mill Effluent // Appl. Environm. Microbiol. - 1997. - Vol. 63. - № 1. - P. 227-232.

173. Van Eerd L.I., Hoagland R.E., Hall J.C. Pesticides metabolism in plants and microorganisms // Weed Science. - 2003. - № 51. - P. 472-495.

174. Virag D., Kiss A. Comparative study of accessibility of distinctive pesticides // J. Environ. Sci. Health B. - 2009. - Vol. 44. - P. 69-75.

175. Walker A., Parekh N.R., Roberts S.J., Welch S.J. Evidence for the enhanced biodégradation of napomide in soil // Pesticide Sci. - 1993. - № 39. - P. 55-60.

176. Wauchope R.D., Buttler T.M., Hornsby A.G., Augustijn-Beckers P.W.M., Burt J.P. The SCS/ARS/CES pesticide properties database for environmental decisionmaking Rev//Environ. Contam. Toxicol. - 1992. - Vol. 123. - P. 1-155.

177. Wyszkowska J. Microbiological properties of soil contaminated with the herbicide Treflan 480 EC // Polish J. Natur. Sci. - 2002. - Vol. 10. - № 1. - S. 71 -77.

178. Zablotowicz R.M., Hoagland R.E., Staddon W.J., Locke M.A. Effects of pH on chemical stability and de-esterification of fenoxaprop-ethyl by purified enzymes, bacterial extracts, and soils // J. Agric. Food Chem. - 2000. - № 48. - P. 4711-4716.