Биодеградируемые частицы на основе амфифильных сополимеров α-аминокислот как потенциальные системы доставки лекарственных веществ различной природы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат наук Зашихина Наталья Николаевна

• Зашихина Наталья Николаевна
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Зашихина Наталья Николаевна

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Системы доставки лекарств на основе полимерных частиц

1.1.1. Типы полимерных частиц

1.1.2. Методы получения полимерных частиц и способы инкапсулирования лекарственных веществ

1.1.3. Методы исследования характеристик полимерных частиц

1.1.3.1. Размер и морфология

1.1.3.2 Свойства поверхности

1.1.4. Способы доставки лекарственных веществ с использованием полимерных частиц

1.2. Биодеградируемые полимеры для получения систем доставки

1.3. Полиаминокислоты

1.3.1. Методы синтеза полиаминокислот

1.3.2. Полимеризация с раскрытием цикла К-карбоксиангидридов а-аминокислот

1.3.2.1. Инициирование с использованием аминов

1.3.2.2. Инициирование с использованием комплексов переходных металлов

1.3.2.3. Инициирование с использованием гексаметилдисилозана

1.3.3. Синтез статистических сополимеров на основе а-аминокислот

1.3.4. Синтез блок-сополимеров на основе а-аминокислот

1.3.4.1. Получение блок-сополимеров путем конденсации гомополимеров

1.3.4.2. Получение блок-сополимеров с использованием макроинициаторов

1.3.5. Функционализация и постмодификация полипептидов

1.3.6. Синтез гликополипептидов

1.4. Заключительные замечания и постановка задач диссертации

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Характеристики исходных веществ, материалов и их подготовка

2.2. Оборудование и статистическая обработка данных

2.3. Методы синтеза

2.3.1. Синтез мономеров

2.3.1.1. Синтез N-карбоксиангидридов а-аминокислот

2.3.1.2. Синтез 2-деокси-2-метакриламидо-0-глюкозы

2.3.2. Синтез гомополимеров

2.3.2.1. Синтез гомополимеров а-аминокислот

2.3.2.2. Синтез поли(2-деокси-2-метакриламидо-0-глюкозы) (PMAG)

2.3.2.3. Получение макроинициатора на основе PMAG

2.3.3. Синтез сополимеров

2.3.3.1. Синтез статистических сополимеров а-аминокислот

2.3.3.2. Синтез блок-сополимеров а-аминокислот

2.3.3.3. Синтез гибридных диблок-сополимеров на основе PMAG

2.3.3.4. Синтез гибридных тройных сополимеров на основе PMAG

2.3.4. Деблокирование сополимеров

2.3.5. Методы исследования мономеров и (со)полимеров

2.4. Получение и исследование характеристик полимерных частиц

2.5. Исследование биодеградации in vitro

2.6. Модификация частиц

2.6.1. Модификация полимерных частиц гепарином

2.6.2. Получение флуоресцентно меченых полимерных частиц

2.6.3. Модификация полимерных частиц пептидами и белками

2.6.4. Получение инкапсулированных форм веществ различной природы

2.6.4.1 Инкапсулирование С-пептида

2.6.4.2. Инкапсулирование амфифильного основания иринотекана

2.6.4.3. Инкапсулирование гидрофобного вещества паклитаксела

2.6.5. Количественный анализ ковалентно связанных и инкапсулированных веществ

2.6.6. Определение активности веществ, связанных с частицами

2.6.6.1 Определение активности рибонуклеазы А

2.6.6.2. Определение активности С-пептида

2.6.7. Исследование кинетики высвобождения лекарственных веществ

2.7. Исследования биологических свойств

2.7.1. Культивирование клеток

2.7.2. Анализ цитотоксичности полимерных частиц

2.7.3. Изучение проникновения частиц в клетку

2.7.4. Анализ цитотоксичности инкапсулированных форм противоопухолевых

веществ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Синтез амфифильных сополимеров на основе а-аминокислот

3.1.1. Блок-сополимеры на основе природных а-аминокислот

3.1.1.1. Синтез гомополимеров а-аминокислот

3.1.1.2. Синтез блок-сополимеров на основе а-аминокислот

3.1.2. Сополимеры с повышенной устойчивостью к биодеградации

3.1.2.1. Синтез блок-сополимеров, содержащих некодируемую а-аминокислоту

3.1.2.2. Синтез статистических сополимеров, содержащих а-О-аминокислоту

3.1.2.3. Гибридные блок-сополимеры

3.1.2.3.1. Синтез макроинициаторов на основе PMAG

3.1.2.3.2. Синтез диблок-сополимеров на основе PMAG и гидрофобных а-аминокислот

3.1.2.3.3. Синтез тройных сополимеров на основе PMAG и статистических сополимеров а-аминокислот

3.2. Получение полимерных частиц и изучение их свойств

3.2.1. Характеристики частиц в зависимости от состава сополимера и условий получения

3.2.1.1. Особенности самоорганизации амфифильных сополимеров различной структуры

3.2.1.2. Влияние рН среды, используемой при формировании полимерных частиц, на их гидродинамический диаметр

3.2.1.3. Влияние состава сополимеров на гидродинамический диаметр полимерных частиц

3.2.1.4. Изучение стабильности частиц

3.2.2. Исследование деградации сополимеров и частиц на их основе

3.2.2.1. Исследование деградации блок-сополимеров на основе а-аминокислот

3.2.2.2. Исследование деградации статистических сополимеров на основе а-аминокислот

3.2.2.3. Исследование деградации частиц на основе гибридных сополимеров

3.2.3. Исследование цитотоксичности полимерных частиц

3.3. Модификация поверхности полимерных частиц

3.3.1. Изучение проникновения частиц в клетки

3.3.2. Ковалентная модификация поверхности частиц белками и пептидами

3.4. Разработка прототипов систем доставки лекарственных веществ

3.4.1. Разработка прототипов систем доставки гидрофильного С-пептида

3.4.1.1. Ковалентная модификация поверхности частиц С-пептидом

3.4.1.2. Инкапсулирование С-пептида

3.4.1.3. Исследование скорости высвобождения С-пептида

3.4.1.4. Биологическая активность пролонгированных форм С-пептида

3.4.2. Разработка прототипов систем доставки амфифильного основания иринотекана

3.4.2.1. Инкапсулирование иринотекана

3.4.2.2. Исследование скорости высвобождения иринотекана

3.4.2.3. Биологическая активность инкапсулированных форм иринотекана

3.4.3. Разработка прототипов систем доставки гидрофобного паклитаксела

3.4.3.1. Инкапсулирование паклитаксела

3.4.3.2. Биологическая активность инкапсулированных форм паклитаксела

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

БЛАГОДАРНОСТИ

Список сокращений

Мономеры и другие низкомолекулярные вещества:

CDV - дансилкадаверин N-КА - N-карбоксиангидрид

CTB - реагент CellTiter-Blue ГМДС - гексаметилдисилозан

Су3 - флуоресцентный краситель индокарбоцианин ДИНИЗ - динитрил азо-бис-изомасляной кислоты

DAPI - 4',6-диамиидно-2-фенилиндол ДТБ - дитиобензоат 4-цианопентановой кислоты

MAG - 2-деокси-2-метакриламидо-О-глюкоза ТНБС - 2,4,6- тринитробензолсульфоновая кислота

NHS - N-гидроксисукцинимид ЭГ - этиленгликоль

Аминокислоты:

Aib - а-аминоизомасляная кислота Lys - L-лизин

Cys - L-цистеин Lys(Z) - е-карбоксибензил-£-лизин

Glu - L-глутаминовая кислота Phe - L-фенилаланин

Glu(OBzl) - у-бензил-^-глутамат DPhe - О-фенилаланин

Leu - L-лейцин

Полимеры:

PAib - поли(а-аминоизомасляная кислота) PMAG - поли(2-деокси-2-метакриламидо-О-глюкоза)

PGlu - поли(^-глутаминовая кислота) PPhe - поли^-фенилаланин)

PGlu(OBzl) - поли(у-бензил-£-глутамат) ПКЛ - поликапролактон

PLeu - поли(£-лейцин) ПЛА - полилактид

PLys - поли(^-лизин) ПЛГА - поли(лактид-со-гликолид)

PLys(Z) - поли(е-карбоксибензил-^-лизин) ПЭГ - полиэтиленгликоль

Группы в составе полимеров и мономеров:

OBzl - у-бензильная группа ДТБ - дитиобензоатная группа

Z - е-карбоксибензильная группа TMC - триметилсилильная группа

Растворители и среды:

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) - Дюльбекко синтетическая среда Игла ТГФ - тетрагидрофуран

MEM (Minimum Essential Medium) -среда Игла ФБP - фосфатный буферный раствор

ДМСО - диметилсульфоксид ЭБС - эмбриональная бычья сыворотка

ДМФА - диметилформамид

Условные обозначения:

EC50 - концентрация, при которой выживает половина клеток macroI - макроинициатор

EE - эффективность инкапсулирования RAFT (Reversible Addition Fragmentation chain Transfer) - обратимая передача цепи по механизму присоединения -фрагментации

Ш - эффективность иммобилизации ROP (Ring-opening polymerization) -полимеризация с раскрытием цикла

ГС - масса иммобилизованного вещества АТФ - аденозинтрифосфат

LC - масса загруженного вещества ИП - индекс полидисперсности

I - инициатор ПАВ - поверхностно-активное вещество

M - мономер

Методы исследования:

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ДРС - динамическое рассеяния света

ГПХ - гель-проникающая хроматография ПЭМ - просвечивающая электронная микроскопия

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биодеградируемые частицы на основе амфифильных сополимеров α-аминокислот как потенциальные системы доставки лекарственных веществ различной природы»

ВВЕДЕНИЕ

Системы доставки лекарственных веществ являются чрезвычайно перспективным инструментом таких терапевтических подходов, как увеличение транспорта веществ через биологические барьеры, адресная доставка лекарств к конкретным органам, а также лечение онкологических заболеваний и генная терапия [1-3]. Хорошо известно, что применение противоопухолевых препаратов связано с высокой токсичностью, отсутствием селективности и низкой биодоступностью, что приводит к ограничению их применения в медицинской практике. В свою очередь, клиническое применение природных биомолекул, таких как белки или пептиды, сопряжено с их низкой устойчивостью и быстрой инактивацией в организме вследствие ферментативной деградации и зачастую высокой иммуногенностью [4, 5].

Разработка биодеградируемых полимерных носителей для доставки лекарственных веществ позволяет преодолеть имеющиеся недостатки. В частности, инкапсулирование лекарственных веществ внутрь полимерных частиц предохраняет бимолекулы от действия ферментов и защитных систем организма, а также позволяет доставить их в нужные ткани с возможностью поддержания желаемой концентрации за счет регулируемого высвобождения. Применение полимерных систем для доставки лекарственных веществ резко повышает эффективность терапии вследствие увеличения их биодоступности и снижения общей токсичности для организма [6, 7]. По этим причинам использование инкапсулированных форм лекарственных веществ представляет собой перспективную стратегию лечения различных заболеваний.

Особый интерес представляют собой частицы, полученные в результате самоорганизации амфифильных полимеров. Выбор природы и структуры амфифильного полимера позволяет управлять физико-химическими и биологическими свойствами формируемых частиц, такими как размер, морфология (мицеллы, полимеросомы или наносферы), стабильность, биосовместимость, способность к биодеградации, способность включать в себя те или иные вещества, наличие реакционноспособных групп, позволяющих проводить функционализацию поверхности, чувствительность к изменениям среды и т.д. [8, 9]

Среди разнообразных амфифильных сополимеров биосовместимые и биодеградируемые сополимеры являются наиболее перспективными для создания систем доставки лекарств [4, 5]. В качестве макромолекулярной основы для получения таких систем значительный интерес представляет использование биодеградируемых полимеров на основе а-аминокислот [10, 11] и их сополимеров с поливинилсахаридами (гликополимерами). Аминокислоты, являясь продуктами биодеградации соответствующих полимеров, усваиваются организмом или выводятся из него естественными метаболическими путями. В свою очередь, комбинирование полиаминокислот и поливинилсахаридов позволяет повысить устойчивость полимерных систем к биодеградации, а следовательно, обеспечить пролонгированное действие лекарственных форм [12]. Кроме того, использование гликополимеров в качестве одного из блоков сополимера обеспечит возможность создания систем, способных к молекулярному распознаванию лектинов клеточной мембраны [13]. Наличие реакционноспособных групп в полимерных блоках дает возможность проведения ковалентного связывания различных веществ с поверхностью носителей. Присутствие заряженных групп в боковых цепях аминокислот, содержащихся в структуре гидрофильного фрагмента, позволяет получать полимерные системы, чувствительные к рН, что, в свою очередь, важно для повышения специфичности доставки и достижения контролируемого высвобождения лекарственного вещества [5].

Принимая во внимание высокий потенциал полимерных биодеградируемых частиц на основе амфифильных сополимеров аминокислот для применения в качестве систем доставки лекарств, разработка полимерных носителей и исследование влияния химического строения, молекулярно-массовых характеристик, гидрофобно-гидрофильного баланса полимера на размер формирующихся частиц, их стабильность к агрегации, скорость деградации и способность связывать биологически активные молекулы различной химической природы является актуальной проблемой, решение которой позволит приблизиться к получению новых лекарственных форм для лечения онкологических заболеваний и осложнений сахарного диабета.

Цель настоящей работы - разработка методов синтеза амфифильных сополимеров а-аминокислот и получение на их основе частиц, обладающих

комплексом свойств, необходимых для их использования в качестве систем доставки лекарственных веществ различной природы.

Достижение поставленной цели включало в себя решение следующих задач:

• синтез катионных и анионных биодеградируемых блок- и статистических сополимеров на основе а-аминокислот, содержащих в своей структуре реакционноспособные функциональные группы;

• разработка метода получения нового макроинициатора на основе синтетического гликополимера поли(2-деокси-2-метакриламидо-0-глюкозы) и синтез на его основе сополимеров с а-аминокислотами;

• оптимизация состава и структуры исходных полимеров с целью получения узкодисперсных частиц с необходимым набором характеристик и свойств (контролируемый размер, способность к биодеградации, способность связывать биологически активные вещества, стабильность в физиологических средах, отсутствие цитотоксичности);

• разработка методов модификации полимерных частиц за счет ковалентного связывания различных веществ с их поверхностью;

• изучение особенностей инкапсулирования веществ различной природы и исследование профилей их высвобождения из полимерных частиц;

• изучение скорости деградации полимерных материалов и частиц на их основе в модельных ферментативных средах, цитотоксичности полимерных частиц, скорости их накопления в клетках и биологической активности; оценка возможности применения формируемых частиц в качестве систем доставки лекарственных веществ.

Методы исследования:

• для синтеза и модификации полимеров использовались методы полимеризации с раскрытием цикла К-карбоксиангидридов а-аминокислот, контролируемой радикальной полимеризации с обратимой передачей цепи по механизму присоединения-фрагментации и полимераналогичных превращений;

• для определения структуры, состава и молекулярно-массовых характеристик синтезированных полимеров применялись методы ЯМР-спектроскопии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и гель-проникающей хроматографии (ГПХ);

• для определения физико-химических характеристик полученных полимерных частиц и изучения кинетики деградации полимерного материала использовались методы динамического рассеяния света (ДРС), просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) и ВЭЖХ;

• определение количеств инкапсулированных веществ проводили методами ВЭЖХ и/или УФ-спектроскопии;

• для определения биологических свойств исследуемых материалов использовались методы анализа цитотоксичности частиц, флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии.

Научная новизна работы состоит в том, что впервые:

• разработаны методы синтеза новых катионных и анионных статистических сополимеров на основе полиаминокислот с частичной заменой ¿-аминокислот на О-изомеры;

• предложен способ синтеза макроинициатора на основе поли(2-деокси-2-метакриламидо-О-глюкозы) для полимеризации с раскрытием цикла N карбоксиангидридов а-аминокислот и синтезирован ряд новых амфифильных блок-сополимеров поли(2-деокси-2-метакриламидо-О-глюкозы) с полиаминокислотами;

• получены углубленные научные представления о влиянии состава и гидрофильно-гидрофобного баланса сополимера на физико-химические свойства получаемых частиц, устойчивость к агрегации, скорость деградации, эффективность инкапсулирования различных веществ, цитотоксичность, способность проникать в клетки;

• проведена оценка эффективности инкапсулирования лекарственных субстанций различной природы, а также скорости их высвобождения из полимерных систем на основе а-аминокислот. Получены доказательства принципиальной возможности использования полученных полимерных частиц в качестве систем доставки биологически активных веществ различной природы (гидрофобных и амфифильных противоопухолевых веществ, пептидов).

Практическая значимость работы:

• полученные новые биодеградируемые частицы на основе амфифильных сополимеров а-аминокислот, а также сополимеров полиаминокислот с поли(2-деокси-2-метакриламидо-О-глюкозой) перспективны для разработки систем

доставки биологически активных веществ различной природы (амфифильное основание иринотекан, гидрофобный паклитаксел и анионный С-пептид), что позволяет расширить их применение в медицинской практике;

• установлена высокая цитотоксичность частиц на основе полиаминокислот с инкапсулированным паклитакселом на клетках рака легких и молочной железы, сопоставимая или превышающая таковую для коммерчески доступного лекарственного препарата - «паклитаксел-ЛЭНС», что обуславливает перспективность использования таких систем для лечения онкологических заболеваний;

и и /-Ч

• инкапсулированный и ковалентно связанный с поверхностью частиц С-пептид, обладающий биологической активностью, превышающей в два раза активность нативной формы молекулы, представляет практический интерес для разработки пролонгированных форм С-пептида при лечении осложнений сахарного диабета;

• полимерные частицы, модифицированные флуоресцентными красителями, для биовизуализации частиц в клетках могут быть использованы в целях диагностики и мониторинга течения онкологических заболеваний.

Обоснованность и достоверность результатов и выводов настоящей работы обеспечивается использованием современных методов синтеза и исследования полимеров и частиц на их основе, подтверждается хорошей воспроизводимостью всех полученных результатов, их согласованностью при использовании независимых методов исследования и соответствием полученных результатов с имеющимися литературными данными. Положения, выносимые на защиту:

• использование комбинации методов контролируемой радикальной полимеризации с обратимой передачи цепи по механизму присоединения-фрагментации винилсахарида 2-деокси-2-метакриламидо-0-глюкозы и полимеризации с раскрытием цикла К-карбоксиангидридов а-аминокислот позволяет получать узкодисперсные сополимеры гликополимеров и полиаминокислот различного состава;

• способность к самоорганизации в водных средах амфифильных сополимеров на основе полипептидов позволяет получать частицы различной структуры.

Варьирование химической структуры полимеров (длина гидрофильного и гидрофобного блоков в случае блок-сополимеров или гидрофильно-гидрофобного баланса для статистических сополимеров), а также условий формирования (pH раствора) дает возможность регулирования гидродинамических размеров самоорганизованных структур;

• использование метода активированных эфиров для модификации поверхности частиц, содержащих карбоксильные группы, биологически активными веществами (белками и пептидами) обеспечивает сохранение активности нативной молекулы и позволяет получать системы доставки, способные к молекулярному распознаванию;

• структура и свойства поверхности частиц на основе полипептидов определяют склонность частиц к агрегации (или ее отсутствие) в присутствии белков, цитотоксичность полимерных систем, скорость биодеградации, скорость проникновения в клетки и скорость захвата макрофагами;

• перспективность использования полученных полимерных частиц в качестве систем доставки веществ различной природы определяется отсутствием цитотоксичности, варьируемой скоростью биодеградации полимерных частиц на основе полипептидов и их конъюгатов с поли(2-деокси-2-метакриламидо-0-глюкозой), а также высокими степенями загрузки инкапсулируемых в них веществ.

Апробация результатов. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на международных и российских конференциях и симпозиумах: 3rd International Research and Practice Conference «Nanotechnology and nanomaterials», Nano-2015 (2015, Lviv, Ukraine); 2nd Russian Conference on Medicinal Chemistry «MedChem-2015» (Новосибирск, 2015); Второй междисциплинарный симпозиум и молодежный форум по медицинской, органической и биологической химии - 2015, (Новый Свет, Крым, 2015); 11th, 12th, 13th, 14th International Saint-Petersburg Conference of Young Scientists «Modern рrоblеms of polymer science» (Saint-Petersburg, 2015, 2016, 2017, 2018); XI, XIII Международная научно-техническая конференция «Актуальные вопросы биологической физики и химии» (Севастополь, 2016, 2018), VI Всероссийская научная конференция студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 2016); X

Международная конференция молодых ученых по химии «Менделеев-2017» (Санкт-Петербург, 2017); 9th International Symposium «Molecular Mobility and Order in Polymer Systems» (St. Petersburg, 2017); Baltic Polymer Symposium 2017 (Tallinn, Estonia, 2017); III, IV Междисциплинарный Симпозиум по Медицинской, Органической, Биологической Химии и Фармацевтике МОБИ-ХимФарма, (Севастополь, 2017, Новый Свет, Крым 2018).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей в зарубежных журналах и тезисы 19 докладов.

Личный вклад автора состоял в непосредственном участии на всех этапах работы: постановке задач, выполнении всех экспериментальных исследований, анализе, интерпретации и обобщении полученных результатов, а также подготовке докладов и публикаций.

Работа выполнена в лаборатории «Полимерных сорбентов и носителей для биотехнологии» ИВС РАН в соответствии с планом научно-исследовательских работ по темам: «Биологически активные полимеры и материалы на их основе для биомедицинских целей» (2014-2016 гг.), «Материалы на основе природных и синтетических полимеров для медицины, биоинженерии и биотехнологии» (20172019 гг.) и была поддержана грантами РФФИ (№ 18-33-01018), грантом СПбГУ на проведение фундаментальных НИР (№12.38.220.2015), грантом «УМНИК» Фонда содействия развитию малых предприятий в научно-технической сфере (11726ГУ/2017), грантами для студентов, аспирантов вузов, отраслевых и академических институтов, расположенных на территории Санкт-Петербурга (2017 и 2018 гг.).

Проведение экспериментов с культурами клеток осуществлялось во время стажировок в Институте технической химии университета Лейбница (Ганновер, Германия) и в Университете Перуджи (Перуджа, Италия).

Структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, трёх глав (обзор литературы, экспериментальная часть, результаты и их обсуждение), заключения, выводов, списка используемой литературы (157 наименований). Работа изложена на 151 странице и включает 32 таблицы и 61 рисунок.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Системы доставки лекарств на основе полимерных частиц

За последнее десятилетие опубликовано большое количество работ, посвященных применению нано- и микрочастиц для контролируемой доставки лекарств. Повышенный интерес исследователей к этой проблеме обусловлен тем, что использование систем доставки дает множество преимуществ, таких как повышение растворимости и биодоступности лекарственных веществ, увеличение концентрации в целевом органе [14], повышение стабильности биомолекул к химический или ферментативной деградации, увеличение эффективности вещества и снижение побочных эффектов и системной токсичности [6, 7]. Кроме того, за счет контролируемого высвобождения лекарства системы доставки позволяют продлить время циркуляции вещества в кровотоке и обеспечить поддержание желаемой концентрации для достижения необходимого терапевтического эффекта.

Одними из наиболее перспективных форм носителей являются полимерные частицы, такие как наносферы, нанокапсулы, мицеллы, липосомы и полимерсомы [2, 15, 16].

1.1.1. Типы полимерных частиц

Различные типы как природных, так и синтетических материалов выступают в качестве строительных блоков для получения систем доставки. Неорганические наночастицы на основе золота и оксида железа используются для биовизуализации и диагностики [17, 18], однако имеют значительные ограничения, связанные с низкой загрузкой и плохо контролируемым высвобождением лекарственного вещества [19]. Липосомы, полые частицы, состоящие из природных фосфолипидов, представляют собой наиболее изученный класс наночастиц, и выведение на фармацевтический рынок липосомальных форм лекарственных препаратов (Daune-Home, Lipodox, Onivyde и др.) показывает реальную эффективность разрабатываемых носителей.

Использование синтетических полимеров (в отличие от липосом) для получения полимерных частиц имеет ряд преимуществ. Выбор природы и структуры амфифильного сополимера позволяет управлять физико-химическими и

биологическими свойствами формируемых частиц, такими как размер, морфология, стабильность, биосовместимость, скорость биодеградации, способность включать в себя те или иные вещества, наличие реакционноспособных групп, позволяющих проводить функционализацию поверхности, чувствительность к изменениям среды и т.д. [8, 9, 20].

Полимерные частицы могут иметь различный состав и морфологию: полимерные мицеллы, наносферы, полимеросомы и полиплексы (Рисунок 1). Структура и способ получения частиц зависят от свойств выбранного полимера и вещества, загружаемого в частицы.

(а) (б) (в) (г)

Рисунок 1 - Схематичное изображение полимерных частиц: наносферы (а), полимеросомы (б), мицеллы (в) и полиплексы (г) [5].

Формирование частиц может быть обусловлено как межмолекулярными взаимодействиями между полимером и загружаемым веществом (например, комплексообразование катионных полимеров с анионными нуклеиновыми кислотами с образованием полиплекса), так и внутримолекулярными взаимодействиями между цепями полимера (например, самоорганизация амфифильных сополимеров за счет гидрофобных взаимодействий) [5].

Обычно мицеллы имеют диаметр от 10 до 100 нм и структуру, состоящую из внешней гидрофильной оболочки и гидрофобного ядра, служащего областью для инкапсулирования гидрофобных соединений [21]. Гидрофильная полимерная оболочка взаимодействует с водной средой и способна принимать различные конформации, которые стерически препятствует взаимодействию с компонентами плазмы (опсонизации), тем самым подавляя фагоцитоз частиц макрофагами (захват клетками иммунной системы), что увеличивает время циркуляции частиц в кровотоке [22].

Полимерную наносферу можно рассматривать как жесткую коллоидную частицу, в которой распределено лекарственное вещество, инкапсулированное, химически связанное или адсорбированное на полимерной матрице. Эти частицы по размерам обычно больше, чем мицеллы и имеют диаметр 100-200 нм, а также обладают значительно большей дисперсностью [21]. Гидрофобная поверхность этих частиц весьма чувствительна к опсонизации, и они быстро захватываются макрофагами и выводятся из организма. Для увеличения времени циркуляция полимерных частиц в кровотоке описаны различные способы модификации их поверхности, в частности, адсорбция различных ПАВ на поверхности частиц или введение в структуру поверхности ковалентно связанного полиэтиленгликоля (ПЭГ) [23, 24]. Четкое различие между мицеллами и наносферами, образованными диблок-сополимерами, не всегда возможно. В исследовании серии сополимеров полиэтиленгликоль-б-полилактид (ПЭГ-б-ПЛА) было установлено [25], что поведение сополимера ПЭГ-б-ПЛА при формировании частиц сильно зависит от его состава. В случае высоких молекулярных масс блока ПЛА ядро частиц было более жестким, и частицы имели морфологию наносфер, тогда как при меньшей длине блока ПЛА образовывались мицеллы [25].

Полимеросомы по своей структуре аналогичны липосомам и находят применение в доставке как водорастворимых лекарственных веществ, которые локализуются в водном ядре, так и гидрофобных веществ, инкапсулируемых в гидрофобную мембрану. Отличие полимеросом от липосом состоит в природе гидрофобной оболочки, которая у липосом построена из природных фосфолипидов, а в случае полимеросом образована амфифильными сополимерами. Преимуществами полимеросом по сравнению с липосомами являются возможность инкапсулирования как гидрофобных, так и гидрофильных веществ, возможность модификации поверхности желаемыми лигандами, высокая механическая и химическая стабильность и контролируемое высвобождение лекарства. Вариация химической структуры и длины блоков сополимеров позволяет регулировать физико-химические свойства получаемых полимеросом, такие как размер, толщина и проницаемость мембраны [26, 27].

Определяющим фактором формирования частиц той или иной морфологии является так называемый параметр упаковки полимерных цепей р [28]:

р =

а-1

(1)

где и - объем гидрофобных цепей, а - площадь 1 молекулы на поверхности, I длина гидрофобной цепи.

Как правило, сферические мицеллы образуются при р<1/3, цилиндрические мицеллы при 1/3<р<1/2, полимеросомы при 1/2<р<1 (Рисунок 2).

Рисунок 2 - Формирование различных типов структур в зависимости от параметра упаковки р и массовой доли гидрофильной фракции в блок-сополимере f [28,29].

Также было показано [29], что в случае амфифильных диблок-сополимеров морфология полученных частиц определяется массовой долей гидрофильной фракции f. В частности, в водной среде блок-сополимеры полиэтиленгликоль-б-полилактид (ПЭГ-б-ПЛА) при ^ЭГ>42% формировали цилиндрические (до ^ЭГ=50%) и сферические мицеллы, при ^ЭГ=20-42% - везикулярные структуры (полимеросомы) [29].

Морфология образующихся структур зависит как от химической структуры сополимера, так и от выбранного метода и условий приготовления частиц. Так, морфология частиц на основе блок-сополимеров поли(£-лизин)-б-поли(£-фенилаланин) (PLys-b-PPhe) полностью определялась величиной f [30], в то время как для блок-сополипептидов поли(£-лизин)-б-поли(£-лейцин) (P(L-Lys)-b-P(L-Leu)) наблюдались сильные отклонения от представленной зависимости (Рисунок 2): при ^=68-77% образовывались как цилиндрические мицеллы, так и везикулярные структуры, при ^=90% - сферические мицеллы. Для P(DL-Lys)-b-P(Leu) наблюдалось образование как сферических мицелл при у=85%, так и

полимеросом при у=66-75% [31]

1.1.2. Методы получения полимерных частиц и способы инкапсулирования

лекарственных веществ

Полимерные частицы могут быть получены различными методами в зависимости от области применения и физико-химических характеристик, как полимера, так и лекарственного вещества. Выбор подходящего метода играет существенную роль для создания частиц с желаемыми свойствами. Разработанные методы получения частиц могут быть разделены на две группы: 1) на основе полимеризации мономеров и 2) использующие готовые полимеры [32].

Для первой группы проводят полимеризацию мономеров с образованием инкапсулирующего полимера с использованием методов эмульсионной или межфазной полимеризации [32]. К недостаткам данных методов можно отнести присутствие в продукте токсичных побочных веществ, мономеров и инициатора. Другим недостатком данных методов является необходимость проведения свободнорадикальной полимеризации под действием инициаторов или ультрафиолетового света, что ограничивает возможность инкапсулирования белков или пептидов на стадии получения частиц [33].

В современной литературе основное внимание уделяется методам, где используются уже готовые полимеры, что позволяет избежать описанных выше недостатков. Для предварительно сформированных полимеров, таких как биодеградируемые полиэфиры и их сополимеры с ПЭГ, наносферы с инкапсулированным внутрь веществом могут быть получены эмульсионными методами с последующим удалением растворителя [21, 32]. Как правило, полимер, растворенный в органической фазе, смешивают с ПАВ и обрабатывают ультразвуком в водной среде при интенсивном перемешивании. Эмульсию перемешивают до тех пор, пока весь растворитель не переходит в раствор, при этом образуются «жесткие» полимерные частицы. Эти частицы также могут быть покрыты другим полимером для образования частиц со структурой «ядро-оболочка» с необходимыми поверхностными свойствами [34].

Способ формирования частиц на основе амфифильных блок-сополимеров (мицеллы, полимеросомы, наносферы) зависит от растворимости используемого сополимера. Если сополимер является водорастворимым, могут быть использованы

методы «прямого растворения» и «регидратации пленок». Первый метод заключается в непосредственном добавлении полимера к водному раствору (например, буферному) при концентрации выше критической концентрации ассоциирования, а лекарство распределяется в гидрофобной оболочке. Второй способ включает растворение сополимера и лекарственного вещества в легколетучем растворителе, после удаления которого образуется тонкая пленка на поверхности реактора, затем добавляют теплый водный раствор при перемешивании, что приводит к формированию частиц. Если сополимер нерастворим в воде, используют метод инверсии фаз (наноосаждение) или метод одинарной эмульсии. В первом случае сополимер и лекарство растворяют в смешивающемся с водой органическом растворителе, затем добавляют другой растворитель (обычно воду), который не сольватирует гидрофобный блок полимера. Это приводит к самоорганизации полимера и формированию частиц с одновременным включением лекарственного вещества в гидрофобный слой. Последующая очистка полученных систем методом диализа против водных сред позволяет удалить растворитель и несвязавшиеся вещества. Метод одинарной эмульсии («масло в воде») включает добавление раствора, состоящего из сополимера, лекарственного вещества и летучего, не смешиваемого с водой органического растворителя, к быстро перемешивающейся водной среде (с/без ПАВ), и испарение растворителя [21, 32].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Зашихина Наталья Николаевна, 2019 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Dehaini, D. Biomimetic strategies for targeted nanoparticle delivery / D. Dehaini, R.H. Fang, L. Zhang // Bioengineering & translational medicine. - 2016. - V. 1 - № 1 - P. 30-46.

2. Kono, K. Multifunctional liposomes having target specificity, temperature-triggered release, and near-infrared fluorescence imaging for tumor-specific chemotherapy / K. Kono, M. Takashima, E. Yuba, A. Harada, Y. Hiramatsu, H. Kitagawa, T. Otani, K. Maruyama, S. Aoshima // Journal of Controlled Release. - 2015. - V. 216 - P. 69-77.

3. Tamura, A. Efficient siRNA delivery based on PEGylated and partially quaternized polyamine nanogels: Enhanced gene silencing activity by the cooperative effect of tertiary and quaternary amino groups in the core / A. Tamura, M. Oishi, Y. Nagasaki // Journal of Controlled Release. - 2010. - V. 146 - № 3 - P. 378-387.

4. Kamaly, N. Degradable controlled-release polymers and polymeric nanoparticles: Mechanisms of controlling drug release / N. Kamaly, B. Yameen, J. Wu, O.C. Farokhzad // Chemical Reviews. - 2016. - V. 116 - № 4 - P. 2602-2663.

5. Karlsson, J. Biodegradable Polymeric Nanoparticles for Therapeutic Cancer Treatments / J. Karlsson, H.J. Vaughan, J.J. Green // Annual Review of Chemical and Biomolecular Engineering. - 2018. - V. 9 - № 1 - P. 105-127.

6. Alexis, F. Factors Affecting the Clearance and Biodistribution of Polymeric Nanoparticles / F. Alexis, E. Pridgen, L.K. Molnar, O.C. Farokhzad // Molecular Pharmaceutics. - 2008. - V. 5 - № 4 - P. 505-515.

7. Muller, P.Y. The determination and interpretation of the therapeutic index in drug development / P.Y. Muller, M.N. Milton // Nature Reviews Drug Discovery. - 2012. - V. 11 - № 10 - P. 751-761.

8. Bermudez, H. Molecular Weight Dependence of Polymersome Membrane Structure, Elasticity, and Stability / H. Bermudez, A.K. Brannan, D.A. Hammer, F.S. Bates, D.E. Discher // Macromolecules. - 2002. - V. 35 - № 21 - P. 8203-8208.

9. Lee, J.S. Polymersomes for drug delivery: Design, formation and characterization / J.S. Lee, J. Feijen // Journal of Controlled Release - 2012. - V. 161 - № 2 - P. 473-483.

10. Deng, C. Functional polypeptide and hybrid materials: Precision synthesis via a-amino acid N-carboxyanhydride polymerization and emerging biomedical applications / C. Deng, J. Wu, R. Cheng, F. Meng, H.A. Klok, Z. Zhong // Progress in Polymer

Science. - 2014. - V. 39 - № 2 - P. 330-364.

11. Cheng, J. Synthesis of Polypeptides by Ring-Opening Polymerization of a-Amino Acid N-Carboxyanhydrides / J. Cheng, T.J. Deming // Topics in current chemistry. -2012. - V. 310 - P. 1-26.

12. Kramer, J.R. Glycopolypeptides via Living Polymerization of Glycosylated- l -lysine N -Carboxyanhydrides / J.R. Kramer, T.J. Deming // Journal of the American Chemical Society. - 2010. - V. 132 - № 42 - P. 15068-15071.

13. Becer, C.R. The Glycopolymer Code: Synthesis of Glycopolymers and Multivalent Carbohydrate-Lectin Interactions / C.R. Becer // Macromolecular Rapid Communications - 2012. - V. 33 - № 9 - P. 742-752.

14. Petros, R.A. Strategies in the design of nanoparticles for therapeutic applications / R.A. Petros, J.M. DeSimone // Nature Reviews Drug Discovery. - 2010. - V. 9 - № 8 -P. 615-627.

15. Liarou, E. Smart polymersomes and hydrogels from polypeptide-based polymer systems through a-amino acid N-carboxyanhydride ring-opening polymerization. From chemistry to biomedical applications / E. Liarou, S. Varlas, D. Skoulas, C. Tsimblouli, E. Sereti, K. Dimas, H. Iatrou // Progress in Polymer Science/ - 2018. - V. 83 - P. 28-78.

16. Venditti, I. Morphologies and functionalities of polymeric nanocarriers as chemical tools for drug delivery: A review / I. Venditti // Journal of King Saud University -Science. - 2017.

17. Iv, M. Clinical applications of iron oxide nanoparticles for magnetic resonance imaging of brain tumors / M. Iv, N. Telischak, D. Feng, S.J. Holdsworth, K.W. Yeom, H.E. Daldrup-Link // Nanomedicine. - 2015. - V. 10 - № 6 - P. 993-1018.

18. Zhu, J. Targeted cancer theranostics using alpha-tocopheryl succinate-conjugated multifunctional dendrimer-entrapped gold nanoparticles / J. Zhu, L. Zheng, S. Wen, Y. Tang, M. Shen, G. Zhang, X. Shi // Biomaterials. - 2014. - V. 35 - № 26 - P. 76357646.

19. Gilleron, J. Image-based analysis of lipid nanoparticle-mediated siRNA delivery, intracellular trafficking and endosomal escape / J. Gilleron, W. Querbes, A. Zeigerer, A. Borodovsky, G. Marsico, U. Schubert, K. Manygoats, S. Seifert, C. Andree, M. Stoter, H. Epstein-Barash, L. Zhang, V. Koteliansky, K. Fitzgerald, E. Fava, M. Bickle, Y. Kalaidzidis, A. Akinc, M. Maier, M. Zerial // Nature Biotechnology. - 2013. - V. 31 - №

7 - P. 638-646.

20. Kita-Tokarczyk, K. Block copolymer vesicles—using concepts from polymer chemistry to mimic biomembranes / K. Kita-Tokarczyk, J. Grumelard, T. Haefele, W. Meier // Polymer. - 2005. - V. 46 - № 11 - P. 3540-3563.

21. Letchford, K. A review of the formation and classification of amphiphilic block copolymer nanoparticulate structures: micelles, nanospheres, nanocapsules and polymersomes / K. Letchford, H. Burt // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics - 2007. - V. 65 - № 3 - P. 259-269.

22. Vonarbourg, A. Parameters influencing the stealthiness of colloidal drug delivery systems / A. Vonarbourg, C. Passirani, P. Saulnier, J.-P. Benoit // Biomaterials. - 2006. -V. 27 - № 24 - P. 4356-4373.

23. Müller, R.H. Surface modification of i.v. injectable biodegradable nanoparticles with poloxamer polymers and poloxamine 908 / R.H. Müller, K.H. Wallis // International Journal of Pharmaceutics. - 1993. - V. 89 - № 1 - P. 25-31.

24. Gref, R. Biodegradable long-circulating polymeric nanospheres / R. Gref, Y. Minamitake, M.T. Peracchia, V. Trubetskoy, V. Torchilin, R. Langer // Science. - 1994. - V. 263 - № 5153 - P. 1600-1603.

25. Riley, T. Physicochemical Evaluation of Nanoparticles Assembled from Poly(lactic acid)-Poly(ethylene glycol) (PLA-PEG) Block Copolymers as Drug Delivery Vehicles / T. Riley, S. Stolnik , C. R. Heald, C. D. Xiong, M. C. Garnett, L. Illum, S.S. Davis // Langmuir. - 2001. - V. 17 - № 11 - P. 3168-3174.

26. Das, S. Bioactive polymersomes self-assembled from amphiphilic PPO-glycopolypeptides: Synthesis, characterization, and dual-dye encapsulation / S. Das, D.K. Sharma, S. Chakrabarty, A. Chowdhury, S. Sen Gupta // Langmuir. - 2015. - V. 31 - № 11 - P. 3402-3412.

27. Dhawan, S. Polymersomes from hybrid peptide-based bottlebrush homopolymers / S. Dhawan, M.B. Bijesh, V. Haridas // Polymer. - 2018. - V. 138 - P. 218-228.

28. Blanazs, A. Self-Assembled Block Copolymer Aggregates: From Micelles to Vesicles and their Biological Applications / A. Blanazs, S.P. Armes, A.J. Ryan // Macromolecular Rapid Communications. - 2009. - V. 30 - № 4-5 - P. 267-277.

29. Ahmed, F. Polymersomes as viral capsid mimics / F. Ahmed, P.J. Photos, D.E. Discher // Drug Development Research. - 2006. - V. 67 - № 1 - P. 4-14.

30. Zhou, X. Preparation of diblock amphiphilic polypeptide nanoparticles for medical applications / X. Zhou, X. Su, C. Zhou // European Polymer Journal. - 2018. - V. 100 -P. 132-136.

31. Holowka, E.P. Charged Polypeptide Vesicles with Controllable Diameter / E.P. Holowka, D.J. Pochan, T.J. Deming // Journal of the American Chemical Society. -2005. - V. 127 - № 35 - P. 12423-12428.

32. Crucho, C.I.C. Polymeric nanoparticles: A study on the preparation variables and characterization methods / C.I.C. Crucho, M.T. Barros // Materials Science and Engineering: C. - 2017. - V. 80 - P. 771-784.

33. Lockman, P.R. Nanoparticle Technology for Drug Delivery Across the Blood-Brain Barrier / P.R. Lockman, R.J. Mumper, M.A. Khan, D.D. Allen // Drug Development and Industrial Pharmacy. - 2002. - V. 28 - № 1 - P. 1-13.

34. Chan, J.M. PLGA-lecithin-PEG core-shell nanoparticles for controlled drug delivery / J.M. Chan, L. Zhang, K.P. Yuet, G. Liao, J.-W. Rhee, R. Langer, O.C. Farokhzad // Biomaterials. - 2009. - V. 30 - № 8 - P. 1627-1634.

35. Riess, G. Micellization of block copolymers / G. Riess // Progress in Polymer Science. - 2003. - V. 28 - № 7 - P. 1107-1170.

36. Mora-Huertas, C.E. Influence of process and formulation parameters on the formation of submicron particles by solvent displacement and emulsification-diffusion methods / C.E. Mora-Huertas, H. Fessi, A. Elaissari // Advances in Colloid and Interface Science. -2011. - V. 163 - № 2 - P. 90-122.

37. Lin, P.-C. Techniques for physicochemical characterization of nanomaterials / P.-C. Lin, S. Lin, P.C. Wang, R. Sridhar // Biotechnology Advances. - 2014. - V. 32 - № 4 -P. 711-726.

38. Hall, J.B. Characterization of nanoparticles for therapeutics / J.B. Hall, M.A. Dobrovolskaia, A.K. Patri, S.E. McNeil // Nanomedicine. - 2007. - V. 2 - № 6 - P. 789803.

39. Zhao, Z. Self-assembled micelles of amphiphilic poly(L-phenylalanine)-b-poly(L-serine) polypeptides for tumor-targeted delivery / Z. Zhao, Y. Wang, J. Han, K. Wang, D. Yang, Y. Yang, Q. Du, Y. Song, X. Yin // International Journal of Nanomedicine. -2014. - V. 9 - P. 5849.

40. Liu, D. Cancer targeted therapeutics: From molecules to drug delivery vehicles. / D.

Liu, D.T. Auguste // Journal of controlled release: official journal of the Controlled Release Society. - 2015. - V. 219 - P. 632-643.

41. Kumar, B. Recent advances in nanoparticle-mediated drug delivery / B. Kumar, K. Jalodia, P. Kumar, H.K. Gautam // Journal of Drug Delivery Science and Technology. -2017. - V. 41 - P. 260-268.

42. Reisch, A. Charge-Controlled Nanoprecipitation as a Modular Approach to Ultrasmall Polymer Nanocarriers: Making Bright and Stable Nanoparticles / A. Reisch,

A. Runser, Y. Arntz, Y. Mely, A.S. Klymchenko // ACS Nano. - 2015. - V. 9 - № 5 - P. 5104-5116.

43. Sapsford, K.E. Analyzing Nanomaterial Bioconjugates: A Review of Current and Emerging Purification and Characterization Techniques / K.E. Sapsford, K.M. Tyner,

B.J. Dair, J.R. Deschamps, I.L. Medintz // Analytical Chemistry. - 2011. - V. 83 - № 12 - P.4453-4488.

44. Elsabahy, M. Design of polymeric nanoparticles for biomedical delivery applications. / M. Elsabahy, K.L. Wooley // Chemical Society reviews. - 2012. - V. 41 - № 7 - P. 2545-61.

45. Mitragotri, S. Physical approaches to biomaterial design / S. Mitragotri, J. Lahann // Nature Materials. - 2009. - V. 8 - № 1 - P. 15-23.

46. Bertrand, N. Cancer nanotechnology: The impact of passive and active targeting in the era of modern cancer biology / N. Bertrand, J. Wu, X. Xu, N. Kamaly, O.C. Farokhzad // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2014. - V. 66 - P. 2-25.

47. Danhier, F. To exploit the tumor microenvironment: Passive and active tumor targeting of nanocarriers for anti-cancer drug delivery / F. Danhier, O. Feron, V. Preat // Journal of Controlled Release. - 2010. - V. 148 - № 2 - P. 135-146.

48. He, C. Effects of particle size and surface charge on cellular uptake and biodistribution of polymeric nanoparticles / C. He, Y. Hu, L. Yin, C. Tang, C. Yin // Biomaterials. - 2010. - V. 31 - № 13 - P. 3657-3666.

49. Torchilin, V.P. Multifunctional, stimuli-sensitive nanoparticulate systems for drug delivery / V.P. Torchilin // Nature Reviews Drug Discovery. - 2014. - V. 13 - № 11 - P. 813-827.

50. Hong, S.-C. Chitosan-Based Multifunctional Platforms for Local Delivery of Therapeutics / S.-C. Hong, S.-Y. Yoo, H. Kim, J. Lee // Marine Drugs. - 2017. - V. 15 -

№ 3 - P. 60.

51. Banerjee, A. Use of dextran nanoparticle: A paradigm shift in bacterial exopolysaccharide based biomedical applications / A. Banerjee, R. Bandopadhyay // International Journal of Biological Macromolecules. - 2016. - V. 87 - P. 295-301.

52. Jana, S. Alginate Based Nanocarriers for Drug Delivery Applications / S. Jana, K.K. Sen, A. Gandhi // Current Pharmaceutical Design. - 2016. - V. 22 - № 22 - P. 33993410.

53. Santoro, M. Gelatin carriers for drug and cell delivery in tissue engineering / M. Santoro, A.M. Tatara, A.G. Mikos // Journal of Controlled Release. - 2014. - V. 190 - P. 210-218.

54. Sun, H. Development of low molecular weight heparin based nanoparticles for metastatic breast cancer therapy / H. Sun, D. Cao, H. Wu, H. Liu, X. Ke, T. Ci // International Journal of Biological Macromolecules. - 2018. - V. 112 - P. 343-355.

55. Luo, H. A Nanoscale Polymeric Penetration Enhancer Based on Polylysine for Topical Delivery of Proteins and Peptides / H. Luo, H. Li, X. Yang, J. Li, X. Zhang, Z. Wu // Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2016. - V. 105 - № 12 - P. 3585-3593.

56. Nair, L.S. Biodegradable polymers as biomaterials / L.S. Nair, C.T. Laurencin // Progress in Polymer Science. - 2007. - V. 32 - № 8-9 - P. 762-798.

57. Zhang, Y. Trigger-responsive chain-shattering polymers / Y. Zhang, L. Ma, X. Deng, J. Cheng // Polymer Chemistry. - 2013. - V. 4 - № 2 - P. 224-228.

58. Duro-Castano, A. Peptide-Based Polymer Therapeutics / A. Duro-Castano, I. Conejos-Sánchez, M. Vicent // Polymers - 2014. - V. 6 - № 2 - P. 515-551.

59. Cai, K. Redox-responsive self-assembled chain-shattering polymeric therapeutics / K. Cai, J. Yen, Q. Yin, Y. Liu, Z. Song, S. Lezmi, Y. Zhang, X. Yang, W.G. Helferich, J. Cheng // Biomaterials Science. - 2015. - V. 3 - № 7 - P. 1061-1065.

60. Sigel, R. pH Responsiveness of Block Copolymer Vesicles with a Polypeptide Corona / R. Sigel, M. Losik, H. Schlaad // Langmuir. - 2007. - V. 23 - № 13 - P. 71967199.

61. Zhang, Y. Chain-Shattering Polymeric Therapeutics with On-Demand Drug-Release Capability / Y. Zhang, Q. Yin, L. Yin, L. Ma, L. Tang, J. Cheng // Angewandte Chemie International Edition. - 2013. - V. 52 - № 25 - P. 6435-6439.

62. Gao, H. Synthesis of amphiphilic polyethylene-b-poly(L-glutamate) block

copolymers with vastly different solubilities and their stimuli-responsive polymeric micelles in aqueous solution / Gao H., Li G., Hu Z., Xiao Z., Liang G., Wu Q. // Polymer

- 2014. - V. 55 - № 18 - P. 4593-4600.

63. Chen, C. Synthesis and solubility of polylactide-co-poly(amino acid) random copolymer / C. Chen, L. Chen, H. Chen, H. Li, M. Yuan // Polymer Bulletin. - 2013. - V. 70 - № 6 - P. 1739-1751.

64. Huang, Y.-C. Lysine-block-tyrosine block copolypeptides: Self-assembly, cross-linking, and conjugation of targeted ligand for drug encapsulation / Y.-C. Huang, Y.-S. Yang, T.-Y. Lai, J.-S. Jan // Polymer. - 2012. - V. 53 - № 4 - P. 913-922.

65. Gaspard, J. Supramolecular assembly of lysine-b-glycine block copolypeptides at different solution conditions / J. Gaspard, J.A. Silas, D.F. Shantz, J.-S. Jan // Supramolecular Chemistry. - 2010. - V. 22 - № 3 - P. 178-185.

66. Iatrou, H. Architecturally Induced Multiresponsive Vesicles from Well-Defined Polypeptides. Formation of Gene Vehicles / H. Iatrou, H. Frielinghaus, S. Hanski, N. Ferderigos, J. Ruokolainen, O. Ikkala, D. Richter, J. Mays, N. Hadjichristidis // Biomacromolecules. - 2007. - V. 8 - № 7 - P. 2173-2181.

67. Tang, J. Synthesis, characterization, drug-loading capacity and safety of novel pH-independent amphiphilic amino acid copolymer micelles / J. Tang, J. Yao, J. Shi, Q. Xiao, J. Zhou, F. Chen // Pharmazie. - 2012. - V. 67 - P. 756-764.

68. Wamsley, A. Synthesis of random terpolymers and determination of reactivity ratios of N-carboxyanhydrides of leucine, P-benzyl aspartate, and valine / A. Wamsley, B. Jasti, P. Phiasivongsa, X. Li // Journal of Polymer Science, Part A: Polymer Chemistry. - 2004.

- V. 42 - № 2 - P. 317-325.

69. Dmitrovic, V. Random Poly(Amino Acid)s Synthesized by Ring Opening Polymerization as Additives in the Biomimetic Mineralization of CaCO3 / V. Dmitrovic, G.J.M. Habraken, M.M.R.M. Hendrix, W.J.E.M. Habraken, A. Heise, G. de With, N.A.J.M. Sommerdijk // Polymers. - 2012. - V. 4 - № 2 - P. 1195-1210.

70. Lai, J. Fibril Aggregates Formed by a Glatiramer-Mimicking Random Copolymer of Amino Acids / J. Lai, W. Fu, L. Zhu, R. Guo, D. Liang, Z. Li, Y. Huang // Langmuir. -2014. - V. 30 - № 24 - P. 7221-7226.

71. Grumezescu, A. Design of nanostructures for theranostics applications / A. Grumezescu. - Elsevier, 2018.- 692 p.

72. Klok, H.-A. Peptide/Protein-Synthetic Polymer Conjugates: Quo Vadis / H.-A. Klok // Macromolecules. - 2009. - V. 42 - № 21 - P. 7990-8000.

73. Bacsa, B. Solid-Phase Synthesis of Difficult Peptide Sequences at Elevated Temperatures: A Critical Comparison of Microwave and Conventional Heating Technologies / B. Bacsa, K. Horvati, S. Bösze, F. Andreae, C.O. Kappe // The Journal of Organic Chemistry. - 2008. - V. 73 - № 19 - P. 7532-7542.

74. Tao, X. a-Amino acid N-thiocarboxyanhydrides: A novel synthetic approach toward poly(a-amino acid)s / X. Tao, M.-H. Li, J. Ling // European Polymer Journal. - 2018. -V. 109 - P. 26-42.

75. Hadjichristidis, N. Synthesis of Well-Defined Polypeptide-Based Materials via the Ring-Opening Polymerization of a-Amino Acid N-Carboxyanhydrides / N. Hadjichristidis, H. Iatrou, M. Pitsikalis, G. Sakellariou // Chemical Reviews. - 2009. - V. 109 - № 11 - P. 5528-5578.

76. Tian, H. Biodegradable synthetic polymers: Preparation, functionalization and biomedical application / H. Tian, Z. Tang, X. Zhuang, X. Chen, X. Jing // Progress in Polymer Science. - 2012. - V. 37 - № 2 - P. 237-280.

77. Su, X. Highly efficient antibacterial diblock copolypeptides based on lysine and phenylalanine / X. Su, X. Zhou, Z. Tan, C. Zhou // Biopolymers. - 2017. - V. 107 - № 11 - P. e23041.

78. Kricheldorf, H.R. Polypeptides and 100 Years of Chemistry of a-Amino Acid N-Carboxyanhydrides / H.R. Kricheldorf // Angewandte Chemie International Edition. -2006. - V. 45 - № 35 - P. 5752-5784.

79. Semple, J.E. Large-scale synthesis of a-amino acid-N-carboxyanhydrides / J.E. Semple, B. Sullivan, K.N. Sill // Synthetic Communications. - 2017. - V. 47 - № 1 - P. 53-61.

80. Daly, W.H. The preparation of N-carboxyanhydrides of a-amino acids using bis(trichloromethyl)carbonate / W.H. Daly, D. Poché // Tetrahedron Letters. - 1988. - V. 29 - № 46 - P. 5859-5862.

81. Smeets, N.M.B. A Scalable Synthesis of l -Leucine- N -carboxyanhydride / N.M.B. Smeets, P.L.J. van der Weide, J. Meuldijk, J.A.J.M. Vekemans, L.A. Hulshof // Organic Process Research & Development. - 2005. - V. 9 - № 6 - P. 757-763.

82. Imanishi, Y. Polymerization of N-carboxyanhydrides of various a-amino acids using

secondary amines as initiator / Y. Imanishi, A. Aoyama, Y. Hashimoto, T. Higashimura // Biopolymers. - 1977. - V. 16 - № 1 - P. 187-197.

83. Aliferis T. Living Polypeptides / T. Aliferis, H. Iatrou, N. Hadjichristidis // Biomacromolecules. - 2004. - V. 5 - № 5 - P. 1653-1656.

84. Vayaboury, W. Living Polymerization ofa-Amino Acid N-Carboxyanhydrides (NCA) upon Decreasing the Reaction Temperature / W. Vayaboury, O. Giani, H. Cottet, A. Deratani, F. Schue // Macromolecular Rapid Communications. - 2004. - V. 25 - № 13 - P. 1221-1224.

85. Dimitrov, I. Synthesis of nearly monodisperse polystyrene-polypeptide block copolymers via polymerisation of N-carboxyanhydrides / I. Dimitrov, H. Schlaad // Chemical Communications. - 2003. - № 23 - P. 2944-2945.

86. Penczek, S. Models of biopolymers by ring opening polymerization / S. Penczek. -Boca Raton, Fla.: CRC Press, 1990.- 388p.

87. Deming, T.J. Cobalt and Iron Initiators for the Controlled Polymerization of a-Amino Acid- N -Carboxyanhydrides / T.J. Deming // Macromolecules. - 1999. - V. 32 - № 13 -P. 4500-4502.

88. Deming, T.J. Facile synthesis of block copolypeptides of defined architecture / T.J. Deming // Nature - 1997. - V. 390 - № 6658 - P. 386-389.

89. Deming, T.J. Chain Initiation Efficiency in Cobalt- and Nickel-Mediated Polypeptide Synthesis / T.J. Deming, S.A. Curtin // Journal of the American Chemical Society. -2000. - V. 122 - № 24 - P. 5710-5717.

90. Brzezinska, K. R. Polypeptide End-Capping Using Functionalized Isocyanates: Preparation of Pentablock Copolymers / K. R. Brzezinska, S. A. Curtin, T.J. Deming // Macromolecules. - 2002. - V. 35 - № 8 - P. 2970-2976.

91. Lu, H. Hexamethyldisilazane-Mediated Controlled Polymerization of a-Amino Acid N-Carboxyanhydrides / H. Lu, J. Cheng // Journal of the American Chemical Society. -2007. - V. 129 - P. 14114-14115.

92. Lu, H. One-Pot Synthesis of Brush-Like Polymers via Integrated Ring-Opening Metathesis Polymerization and Polymerization of Amino Acid N -Carboxyanhydrides / H. Lu, J. Wang, Y. Lin, J. Cheng // Journal of the American Chemical Society. - 2009. -V. 131 - № 38 - P. 13582-13583.

93. Deming, T.J. Amino Acid Derived Nickelacycles: Intermediates in Nickel-Mediated

Polypeptide Synthesis / T.J. Deming // Journal of the American Chemical Society.- 1998. - V. 120 - № 17 - P. 4240-4241.

94. Liu, X. Construction of nanoparticles based on amphiphilic copolymers of poly(y-glutamic acid co-L-lactide)-1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine as a potential drug delivery carrier / X. Liu, S. Su, F. Wei, X. Rong, Z. Yang, J. Liu, M. Li, Y. Wu // Journal of Colloid and Interface Science. - 2014. - V. 413 - P. 54-64.

95. Upadhyay, K.K. Biomimetic Doxorubicin Loaded Polymersomes from Hyaluronan-block -Poly(y-benzyl glutamate) Copolymers / K.K. Upadhyay, J.-F. Le Meins, A. Misra, P. Voisin, V. Bouchaud, E. Ibarboure, C. Schatz, S. Lecommandoux // Biomacromolecules. - 2009. - V. 10 - № 10 - P. 2802-2808.

96. Agut, W. pH and Temperature Responsive Polymeric Micelles and Polymersomes by Self-Assembly of Poly[2-(dimethylamino)ethyl methacrylate]-b-Poly(glutamic acid) Double Hydrophilic Block Copolymers / W. Agut, A. Brálet, C. Schatz, D. Taton, S. Lecommandoux // Langmuir. - 2010. - V. 26 - № 13 - P. 10546-10554.

97. Agut, W. Synthesis of Block Copolypeptides by Click Chemistry / W. Agut, R. Agnaou, S. Lecommandoux, D. Taton // Macromolecular Rapid Communications. -2008. - V. 29 - № 12-13 - P. 1147-1155.

98. Yang, Y. pH-dependent self-assembly of amphiphilic poly(L-glutamic acid)-block-poly(lactic-co-glycolic acid) copolymers / Y. Yang, J. Cai, X. Zhuang, Z. Guo, X. Jing, X. Chen // Polymer. - 2010. - V. 51 - № 12 - P. 2676-2682.

99. Cammas, S. Functional poly[(ethylene oxide)-co-(P-benzyl-L-aspartate)] polymeric micelles: block copolymer synthesis and micelles formation / S. Cammas, K. Kataoka // Macromolecular Chemistry and Physics. - 1995. - V. 196 - № 6 - P. 1899-1905.

100. Lin, J. Drug releasing behavior of hybrid micelles containing polypeptide triblock copolymer / J. Lin, J. Zhu, T. Chen, S. Lin, C. Cai, L. Zhang, Y. Zhuang, X.-S. Wang // Biomaterials. - 2009. - V. 30 - № 1 - P. 108-117.

101. Deng, M. Synthesis of a novel structural triblock copolymer of poly(y -benzyl-L-glutamic acid)-b-poly(ethylene oxide)-b-poly(e-caprolactone) / M. Deng, R. Wang, G. Rong, J. Sun, X. Zhang, X. Chen, X. Jing // Biomaterials. - 2004. - V. 25 - № 17 - P. 3553-3558.

102. Rodríguez-Hernández, J. Highly Branched Poly(L-lysine) / J. Rodríguez-Hernández, M. Gatti, H.-A. Klok // Biomacromolecules. - 2003. - V. 4 - № 2 - P. 249-258.

103. Deming, T.J. Polypeptide and Polypeptide Hybrid Copolymer Synthesis via NCA Polymerization / T.J. Deming // Advances in polymer sciences. - 2006. - V. 202 - P. 118.

104. Klok, H.-A. Solid-State Structure, Organizationand Properties of Peptide - Synthetic Hybrid Block Copolymers / H.-A. Klok, S. Lecommandoux // Advances in polymer sciences. - 2006. - V. 202 - P. 75-111.

105. Lee, E.S. A Virus-Mimetic Nanogel Vehicle / E.S. Lee, D. Kim, Y.S. Youn, K.T. Oh, Y.H. Bae // Angewandte Chemie International Edition. - 2008. - V. 47 - № 13 - P. 2418-2421.

106. Xing, T. Disulfide Core Cross-Linked PEGylated Polypeptide Nanogel Prepared by a One-Step Ring Opening Copolymerization of N-Carboxyanhydrides for Drug Delivery / T. Xing, B. Lai, X. Ye, L. Yan // Macromolecular Bioscience. - 2011. - V. 11 - № 7 -P. 962-969.

107. Ding, J. One-step preparation of reduction-responsive poly(ethylene glycol)-poly(amino acid)s nanogels as efficient intracellular drug delivery platforms / J. Ding, F. Shi, C. Xiao, L. Lin, L. Chen, C. He, X. Zhuang, X. Chen // Polymer Chemistry. - 2011. - V. 2 - № 12 - P. 2857-2864.

108. Deming, T.J. Methodologies for preparation of synthetic block copolypeptides: materials with future promise in drug delivery / T.J. Deming // Advanced drug delivery reviews. - 2002. - V. 54 - № 8 - P. 1145-1155.

109. Kwon, G.S. Block copolymer micelles as vehicles for hydrophobic drugs / G.S. Kwon, M. Naito, K. Kataoka, M. Yokoyama, Y. Sakurai, T. Okano // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. - 1994. - V. 2 - № 4 - P. 429-434.

110. Yu, M. Methylated Mono- and Diethyleneglycol Functionalized Polylysines: Nonionic, a-Helical, Water-Soluble Polypeptides / M. Yu, A. P. Nowak, T.J. Deming, D.J. Pochan // Journal of the American Chemical Society.- 1999. - V. 121 - № 51 - P. 12210-12211.

111. Deming, T.J. Living polymerization of a-amino acid-N-carboxyanhydrides / T.J. Deming // Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. - 2000. - V. 38 - № 17 - P. 3011-3018.

112. Tian, J. Biomimetic pegylated polypeptoids with thermoresponsive properties / J. Tian, J. Sun, Z. Li // Polymer. - 2018. - V. 138 - P. 132-138.

113. Gauthier, M.A. Synthesis of Functional Polymers by Post-Polymerization Modification / M.A. Gauthier, M.I. Gibson, H.-A. Klok // Angewandte Chemie International Edition. - 2009. - V. 48 - № 1 - P. 48-58.

114. Deng, C. Synthesis and Characterization of RGD Peptide Grafted Poly(ethylene glycol)-6-Poly(L-lactide)-6-Poly(L-glutamic acid) Triblock Copolymer / C. Deng, H. Tian, P. Zhang, J. Sun, X. Chen, X. Jing // Biomacromolecules. - 2006. - V. 7 - № 2 - P. 590-596.

115. Lu, T. The immobilization of proteins on biodegradable fibers via biotin-streptavidin bridges / T. Lu, X. Chen, Q. Shi, Y. Wang, P. Zhang, X. Jing // Acta Biomaterialia. - 2008. - V. 4 - № 6 - P. 1770-1777.

116. Lu, T. Folate-Conjugated Micelles and Their Folate-Receptor-Mediated Endocytosis / T. Lu, J. Sun, X. Chen, P. Zhang, X. Jing // Macromolecular Bioscience. - 2009. - V. 9

- № 11 - P. 1059-1068.

117. Deng, C. RGD peptide grafted biodegradable amphiphilic triblock copolymer poly(glutamic acid)-b-poly(L-lactide)-b-poly(glutamic acid): Synthesis and self-assembly / C. Deng, X. Chen, J. Sun, T. Lu, W. Wang, X. Jing // Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. - 2007. - V. 45 - № 15 - P. 3218-3230.

118. Sun, V.Z. Intracellular Fates of Cell-Penetrating Block Copolypeptide Vesicles / V.Z. Sun, Z. Li, T.J. Deming, D.T. Kamei // Biomacromolecules. - 2011. - V. 12 - № 1

- P. 10-13.

119. Habraken, G.J.M. Thiol chemistry on well-defined synthetic polypeptides / G.J.M. Habraken, C.E. Koning, J.P.A. Heuts, A. Heise // Chemical Communications. - 2009. -№ 24 - P. 3612-3614.

120. Nakanishi, M. Study of the quantitative aminolysis reaction of poly(P-benzyl L-aspartate) (PBLA) as a platform polymer for functionality materials / M. Nakanishi, J.-S. Park, W.-D. Jang, M. Oba // Reactive and Functional Polymers. - 2007. - V. 67 - № 11 -P. 1361-1372.

121. Guo, J. Synthesis and characterization of functional poly(y-benzyl-L-glutamate) (PBLG) as a hydrophobic precursor / J. Guo, Y. Huang, X. Jing, X. Chen // Polymer. -2009. - V. 50 - № 13 - P. 2847-2855.

122. Dong, C.-M. Synthesis and properties of biomimetic poly(L-glutamate)-6-poly(2-acryloyloxyethyllactoside)-6-poly(L-glutamate) triblock copolymers / C.-M. Dong, K.M.

Faucher, E.L. Chaikof // Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. - 2004. - V. 42 - № 22 - P. 5754-5765.

123. Schatz, C. Polysaccharide-è/oc£-polypeptide Copolymer Vesicles: Towards Synthetic Viral Capsids / C. Schatz, S. Louguet, J.-F. Le Meins, S. Lecommandoux // Angewandte Chemie International Edition. - 2009. - V. 48 - № 14 - P. 2572-2575.

124. Upadhyay, K.K. The intracellular drug delivery and anti tumor activity of doxorubicin loaded poly(y-benzyl L-glutamate)-b-hyaluronan polymersomes / K.K. Upadhyay, A.N. Bhatt, A.K. Mishra, B.S. Dwarakanath, S. Jain, C. Schatz, J.-F. Le Meins, A. Farooque, G. Chandraiah, A.K. Jain, A. Misra, S. Lecommandoux // Biomaterials. - 2010. - V. 31 - № 10 - P. 2882-2892.

125. Kramer, J.R. Glycopolypeptides with a Redox-Triggered Helix-to-Coil Transition / J.R. Kramer, T.J. Deming // Journal of the American Chemical Society. - 2012. - V. 134 - № 9 - P. 4112-4115.

126. Pati, D. Synthesis of glycopolypeptides by the ring opening polymerization of O-glycosylated-a-amino acid N-carboxyanhydride (NCA) / D. Pati, A.Y. Shaikh, S. Hotha, S. Sen Gupta // Polymer Chemistry. - 2011. - V. 2 - № 4 - P. 805-811.

127. Tang, H. General Route toward Side-Chain-Functionalized a-Helical Polypeptides / H. Tang, D. Zhang // Biomacromolecules. - 2010. - V. 11 - № 6 - P. 1585-1592.

128. Huang, J. Hydrolytically Stable Bioactive Synthetic Glycopeptide Homo- and Copolymers by Combination of NCA Polymerization and Click Reaction / J. Huang, G. Habraken, F. Audouin, A. Heise // Macromolecules. - 2010. - V. 43 - № 14 - P. 60506057.

129. Sun, J. Thiol-Ene Clickable Polypeptides / J. Sun, H. Schlaad // Macromolecules. -2010. - V. 43 - № 10 - P. 4445-4448.

130. Hamaguchi, T. NK105, a paclitaxel-incorporating micellar nanoparticle formulation, can extend in vivo antitumour activity and reduce the neurotoxicity of paclitaxel / T. Hamaguchi, Y. Matsumura, M. Suzuki, K. Shimizu, R. Goda, I. Nakamura, I. Nakatomi, M. Yokoyama, K. Kataoka, T. Kakizoe // British Journal of Cancer. - 2005. - V. 92 - № 7 - P. 1240-1246.

131. Suo, A. Comb-like amphiphilic polypeptide-based copolymer nanomicelles for co-delivery of doxorubicin and P-gp siRNA into MCF-7 cells / A. Suo, A. Qian, Y. Zhang, R. Liu, W. Xu, H. Wang // Materials Science and Engineering: C. - 2016. - V. 62 - P.

564-573.

132. Кейл Б. Лабораторная техника органической химии / Б. Кейл - М.: Мир, 1966. - 727c.

133. Беккер Г. Органикум: Практикум по органической химии в 2-х т. / Г. Беккер, В. Бергер, Г. Домшке Э.Фангхенель, Ю. Фауст, М. Фишер, Ф.Гентц, К. Гевальд, Р. Глух, Р. Майер, К. Мюллер, Д. Павель, Г. Шмидт, К. Шольберг, К. Шветлик, Э. Зейлер, Г. Цеппенфельд. - М.: Мир, 1979.- Т.2. - 442c.

134. Досон, Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс -М.: Мир, 1991.- 544c.

135. Bruschi, M. L. Strategies to Modify the Drug Release from Pharmaceutical Systems / M. L. Bruschi. - CRC Press, 2015.- 199p.

136. Kricheldorf, H.R. a-Aminoacid-N-Carboxy-Anhydrides and Related Heterocycles : Syntheses, Properties, Peptide Synthesis, Polymerization / H. R. Kricheldorf - SpringerVerlag Berlin Heidelberg, 1987 - 214p.

137. Kim, M.S. Synthesis and characterization of poly(L-glutamic acid)-block-poly(L-phenylalanine) / M.S. Kim, K. Dayananda, E.K. Choi, H.J. Park, J.S. Kim, D.S. Lee // Polymer. - 2009. - V. 50 - № 10 - P. 2252-2257.

138. Venanzi, M. The importance of being Aib. Aggregation and self-assembly studies on conformationally constrained oligopeptides / M. Venanzi, E. Gatto, F. Formaggio, C. Toniolo // Journal of Peptide Science. - 2017. - V. 23 - № 2 - P. 104-116.

139. Zikou, S. Design and synthesis of cationic Aib-containing antimicrobial peptides: conformational and biological studies / S. Zikou, A.-I. Koukkou, P. Mastora, M. Sakarellos-Daitsiotis, C. Sakarellos, C. Drainas, E. Panou-Pomonis // Journal of Peptide Science. - 2007. - V. 13 - № 7 - P. 481-486.

140. Tarasenko, I. Amphiphilic polypeptides with prolonged enzymatic stability for the preparation of self-assembled nanobiomaterials / I. Tarasenko, N. Zashikhina, I. Guryanov, M. Volokitina, B. Biondi, S. Fiorucci, F. Formaggio, T. Tennikova, E. Korzhikova-Vlakh // RSC Advances. - 2018. - V. 8 - № 60 - P. 34603-34613.

141. Zashikhina, N.N. Novel formulations of C-peptide with long-acting therapeutic potential for treatment of diabetic complications / N. Zashikhina, V. Sharoyko, M. Antipchik, I. Tarasenko, Y. Anufrikov, A. Lavrentieva, T. Tennikova, E. Korzhikova-Vlakh // Pharmaceutics. - 2019. - V. 11 - № 1- P. 27.

142. Moad, G. Advances in RAFT polymerization: the synthesis of polymers with defined end-groups / G. Moad, Y.K. Chong, A. Postma, E. Rizzardo, S.H. Tang // Polymer. - 2005. - V. 46 - № 19 - P. 8458-8468.

143. Tasdelen, M.A. Telechelic polymers by living and controlled/living polymerization methods / M.A. Tasdelen, M.U. Kahveci, Y. Yagci // Progress in Polymer Science. -2011. - V. 36 - № 4 - P. 455-567.

144. Levit, M. Synthesis and characterization of well-defined poly(2-deoxy-2-methacrylamido-d-glucose) and its biopotential block copolymers via RAFT and ROP polymerization / M. Levit, N. Zashikhina, A. Dobrodumov, A. Kashina, I. Tarasenko, E. Panarin, S. Fiorucci, E. Korzhikova-Vlakh, T. Tennikova // European Polymer Journal. -2018. - V. 105 - P. 26-37.

145. Vlakh, E. Preparation, Characterization, and Biological Evaluation of Poly(Glutamic Acid)-b-Polyphenylalanine Polymersomes / E. Vlakh, A. Ananyan, N. Zashikhina, A. Hubina, A. Pogodaev, M. Volokitina, V. Sharoyko, T. Tennikova // Polymers. - 2016. -V. 8 - № 6 - P. 212.

146. Zashikhina, N.N. Self-assembled polypeptide nanoparticles for intracellular irinotecan delivery / N.N. Zashikhina, M.V. Volokitina, V.A. Korzhikov-Vlakh, I.I. Tarasenko, A. Lavrentieva, T. Scheper, E. Rühl, R.V. Orlova, T.B. Tennikova, E.G. Korzhikova-Vlakh // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2017. - V. 109 - P. 1 -12.

147. Kumari, A. Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems / A. Kumari, S.K. Yadav, S.C. Yadav // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. - 2010. - V. 75 - № 1 - P. 1-18.

148. Reis, R. Biodegradible Systems in Tissue Engineering and Regenerative Medicine / R. Reis, J.S. Roman. - CRC Press, 2004. - 592p.

149. Blanco, E. Principles of nanoparticle design for overcoming biological barriers to drug delivery / E. Blanco, H. Shen, M. Ferrari // Nature biotechnology. - 2015. - V. 33 -№ 9 - P. 941-951.

150. Rodriguez, P.L. Minimal "Self" peptides that inhibit phagocytic clearance and enhance delivery of nanoparticle / P.L. Rodriguez, T. Harada, D.A. Christian, D.A. Pantano, R.K. Tsai, D.E. Discher // Science. - 2013. - V. 339 - № 6122 - P. 971-975.

151. Mughal, R.S. Cellular mechanisms by which proinsulin C-peptide prevents insulin-

induced neointima formation in human saphenous vein / R.S. Mughal, J.L. Scragg, P. Lister, P. Warburton, K. Riches, D.J. O'Regan, S.G. Ball, N.A. Turner, K.E. Porter // Diabetologia. - 2010. - V. 53 - № 8 - P. 1761-1771.

152. Haidet, J. C-peptide reduces pro-inflammatory cytokine secretion in LPS-stimulated U937 monocytes in condition of hyperglycemia / J. Haidet, V. Cifarelli, M. Trucco, P. Luppi // Inflammation Research. - 2012. - V. 61 - № 1 - P. 27-35.

153. Handelsman, Y. American association of clinical endocrinologists and american college of endocrinology - clinical practice guidelines for developing a diabetes mellitus comprehensive care plan - 2015 / Y. Handelsman, Z.T. Bloomgarden, G. Grunberger, G. Umpierrez, R.S. Zimmerman, T.S. Bailey, L. Blonde, G.A. Bray, A.J. Cohen, S. Dagogo-Jack, J.A. Davidson, D. Einhorn, O.P. Ganda, A.J. Garber, W.T. Garvey, R.R. Henry, I.B. Hirsch, E.S. Horton, D.L. Hurley, P.S. Jellinger, L. Jovanovic, H.E. Lebovitz, D. LeRoith, P. Levy, J.B. McGill, J.I. Mechanick, J.H. Mestman, E.S. Moghissi, E.A. Orzeck, R. Pessah-Pollack, P.D. Rosenblit, A.I. Vinik, K. Wyne, F. Zangeneh // Endocrine Practice. - 2015. - V. 21 - № 4 - P. 413-437.

154. Marx, N. C-Peptide Colocalizes with Macrophages in Early Arteriosclerotic Lesions of Diabetic Subjects and Induces Monocyte Chemotaxis In Vitro / N. Marx, D. Walcher, C. Raichle, M. Aleksic, H. Bach, M. Grub, V. Hombach, P. Libby, A. Zieske, S. Homma, J. Strong // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. - 2004. - V. 24 - № 3 -P. 540-545.

155. Zhong, Z. C-peptide stimulates Na+, K+-ATPase via activation of ERK1/2 MAP kinases in human renal tubular cells / Z. Zhong, O. Kotova, A. Davidescu, I. Ehren, K. Ekberg, H. Jornvall, J. Wahren, A.V. Chibalin // Cellular and Molecular Life Sciences. -2004. - V. 61 - № 21 - P. 2782-2790.

156. Djemli-Shipkolye, A. The effects ex vivo and in vitro of insulin and C-peptide on Na/K adenosine triphosphatase activity in red blood cell membranes of type 1 diabetic patients / A. Djemli-Shipkolye, P. Gallice, T. Coste, M.F. Jannot, M. Tsimaratos, D. Raccah, P. Vague // Metabolism. - 2000. - V. 49 - № 7 - P. 868-872.

157. Cunningham, D. Colorectal cancer / D. Cunningham, W. Atkin, H.-J. Lenz, H.T. Lynch, B. Minsky, B. Nordlinger, N. Starling // The Lancet - 2010. - V. 375 - № 9719 -P. 1030-1047.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает огромную благодарность научному руководителю - вед.н.с. ИВС РАН, к.х.н., доценту Е.Г. Коржиковой-Влах за общее руководство работой на всех ее этапах, неоценимую помощь при планировании экспериментов и обсуждении результатов.

Автор благодарит коллектив лаборатории полимерных сорбентов и носителей для биотехнологии ИВС РАН за консультации в области синтеза полимеров, помощь в разарботке методик хроматографического анализа и проведении экспериментов по биодеградации, проведение анализов ГПХ.

Автор благодарит сотрудников ИВС РАН и межкафедральной лаборатории биомедицинской химии СПбГУ за помощь на различных этапах работы и консультационном участии при интерпретации результатов.

Автор также выражает признательность доктору А. Лаврентьевой (Институт технической химии университета Лейбница) за обучение работе с культурами клеток и Prof. Stefano Fiorucci (Университет Перуджи) и Prof. Thomas Scheper (Институт технической химии университета Лейбница) за предоставленную возможность проведения клеточных экспериментов.