Белковосвязывающая активность альгината и пектата кальция тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат медицинских наук Петракова, Марина Юрьевна

• Петракова, Марина Юрьевна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Петракова, Марина Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ

Г лапа 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Сорбшюиные свойства искрах мальник папкахярцда Н

LI Химическая структура н фшнко-хкмшесхис свойства

12 Сшш 4 ванне тяжелых металлов не крахма лышми

1.3. Свпывш полисахаридами тис жед чин* кислот II холестерина не

М Святившие белка нскрахмальиымн полисахаридами

1 5 Применение явфахмалшых полисахаридов к биотехнологии

Глам И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2 1 Обнш члрзкгсрнстшш юучкмнх 1Ч>«ирпто11 , 37 2 2 Общая \ярактерiicniИ1 экспериментальных животных 39 2 3 Фитико-яимическнс и биохимические методы

2 4 Математическая обработка результатов 43 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава III Кинетика связывания белка сорбентами

3.1 Кинетика свяштшшя бепка альгншпоч кальши.

3 2 Кинетика о» штшиибеткапеетатом кальция 45 3 3 Кинетика евюыяани* белка активированным углем 47 3 4. Кннсгака святивши» белки микрокристаллической целлюлозой-.

3 5 Кинетика сыгшкаши белка нолмфепаном

3 б Кинетика связывания белка иолисорбоы 4S

3 7 Кинетика смэывания бслха дмнетаэдрическиы смскпгтом

Глава IV Равновесная сорбция &ли сорбентами

4.1. Равновесная сорбщп белкаапьгшнггом кальция St

4.2. Равновесная сорбит) белка политом кальиня

4.3. Ршшоасспа* сорбит белки активированным углем .76 44 РШМНЯН сорбция бедка микрокристалд^екоП

4 5 Равновесная сорбция белка нодифепаиом

4 6 Рамювссиая сорбция белка полисорбом

4 7 Равновесная сорбит белка яимшричсст емектатом , 92 Слива V Сорбиня белка сорбентами * ЯНКШОСП иг р! i среды

5 1 Сорбция белка алы шшюч кальция в зависимости от рН среды 97 5 2. Сорбцт белка пектвтом колкий* в зависимости от рН среды 99 5.3 Сорбши быка ютояромявнм углем л зависимости от рН среды.

5 4. Сорбция белка микрокристаллической целлюлозой в зависимости от рН среды.

5 5 Сорбции белки ио.шфо шнок в зависимости от рН среды 102 5.6. Сорбция белка полнеорбоч в швиснмости от рН среды

5 7 Сорбши белка ЛИЯЩНМСЯШ смсктитом в зависимости от рН

Глава VI. Влияние отпоила калырн it ипКООТффмЦфОМШМГО пектина на белковый обмен у крыс

ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ m«.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Белковосвязывающая активность альгината и пектата кальция»

Актуальность проблемы. Некрахмалъные полисахариды долгое время неполно вались в шиисвой промышленности в качестве загустителей, стабидизагорок и туяинторт, и фармацевтической промышленности IIX применяли в качестве формеюбрлювателей- стабилизаторов дисперсных систем, святую шлх компонентов таблеток f 12. L12] Однако в последние годы появились многочисленные данные об их лечебных свойствах Выяснилось, ^по они обладаю] гииолипндеммчееким [34, 59, 2 И], «игюгтинсемнчсеким {109, 139], аиитокеиюишонкым (52). пгчосгатнческнм [35. 91]. антнкоагулянтиым [61J н другими видами фар м ако л о гич с ской активное! н |37, 51. 111. 201.217]

В последнее десятилетне мтосиню рашмотся биомелипинские и биокнюмапесте исследования i№ использованию некрахмштьиых полисахаридов для Иммобилизации и инкапсулирования животных и растительных клеток, вирусных чаепш и антигенов, а также ршлнчных биологически активных веществ (гормонов, ферментов) (73, 103. 162) Перспективы ««мдьчовани* иекрахчмьных полнсахаридои « яоЯ области связаны с такими нх свойствами как природное происхождение, низкая токсичность, биос ©вместимость, бнодеградшши. гелеобразование и сорбцноннвя способность [221]

Ппжным свойством полисахаридов я&дяегел их способность взаимодействовать с белками (57, 101 ] Для рапжчгалшого использования полисахаридов необходимо установить ряд пирометров, характеритукнцкх процесс взаимодействия полисахарида с белками В пггературе имеете* ограниченное число работ, посвященных количественной оценке бел КОВОСМГ \ ЦВДВДЦС П &КТИЖНОСТИ №KpaXMIU[btLU4 иолисахаридч.ув. что и определило пели л мшчи настоящей работы

Цель ряФоты- Цель работы состояла в экспериментальной оценке белкодоскязываощей активности алынната кальция и нехтлта кальция imulH рдГиии:

1 Изучить кинетику аипыминя белка альгаиатом колесим и пектаточ кшпциж

2 Оценить таянсимость сорбннониоО емкости ллыинатя кальция и потяга кальция от концентрации белка в растворе с помощью построения |гюгсрм СОрбПНП

3 Установить швпеспсвиые характеристики процесса сорбции белка алыкнлтом калышя н пектотом кальння

4 Исследовать влияние рН среды на сорбиконную емкость мльгннятш Ka.ti.tuu к иекгота катыша при емзымнин белки

5 Провести сравнительную оценку' бслковоемгшвающеП активности алыннлта кальция, пиетета кальция и препаратов "иitеросорбето*

6 Изучить изменения iHVKataTe.Kil белкового обмена при эаггерапыюм введении экспериментальным животным вльгиняга кальции и I пакоттеркфкииро ванного оеетииа

Ня\Ч11ВЯ М0П1ПН4

Установлено, что нютермы сорбюм белка альгшигтом кальция и пекгатом кальция относятся к L- м S-кривым На основании экспериментальных данных определены количественные характтфистики процесса сорбции установлены мню airru сродства и значения максимальной (Орбшншшй емкости Найдено, что наибольшей еорбшюнной емкостью альгинат клльция н пектат кальция обладай" к цепочным белкам Показано, что сорбцнонная емкость полисахаридов но белку гависттт от кислотности среды. В кислой it юйгралыюА среде связывание белка протекает эффективнее Проведена сраяюпелыйя оценка бсдкояоев*зымюи«Л активности вдьпнита кальция, пекгата кальши к нрелирагов энгеросорбентов. Покатано, что максимальная СФрбшюмм емкость альгнната кальция и пеюттв копыли по иммуноглобулину и трипсину превосходит I икону to препаратов ипсросорбсщон. обладающих высокой тропноетью к белку (полнеорб, днонпаэдрнчсскнй емеклгг) Максимальная сорбцнокнш емкость активированного угля, микрокристаллической исллюлочы it полифепана ниже, чем у альпениа калшня. пектатд кальция. 1юлисорба и

ДИОКГЛМфИЧССКОГО СМе|ПЦТ6

Тсорстнчсскос и практическое тиачсике работы

I ]олученные данные могут дополнить существующие представления о механизмах адсорбции белка на ртичных поверхностях

Количественные параметры MOiyi использоваться для сравнительного анаяин эффективности сорбентов при разработке HOMIX лекарственных препаратов

Основные наложении,, ни тки мыс иа твшнту

При сорбини высокомолекулярных белков наблюдаются образование |.-Kpiiftw.v ЧТО ензовяю с поверхностной агрегацисП молекул белке. При сорбции низкомолекуляркых образуются S-крмвые, что евямно с сильным мсжмолскулярныч взаимодействием белковых молекул

Чпробвння работы. Ос поение результаты исследования доложены и обсуждены на 11-Й Тихоокеанской научно-практической конференции студентом и молодых ученых медиков с международным участием «Актуальные проблемы жеперичентадьной, профилактической и клинической медицины» «Владивосток, 200)), 2-м еьеик Российского научного общества фармакологов «Фундамент типе проблемы фармакологии» (Москва, 2003). XI и XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004,2006).

Материалы jwccqmgn были доложены и обсуждены на засеяанни Проблемной комиссии по внутренним болезням, фармакологии и клинической фармакологии Владивостокского государственного мсдииинского университета По результатам обсуждения диссертация была рекомендована к тащите

Публикации, По матср»г&ш.ч диссертации опубликовано 7 печатных робот

OGi-cw ■ структура диссертации. ДиоСфПШЯЯ пиюлмет ив 149 стриашах машинописного ««eta и состоит ю мелели, обюрп mqiRjp, описали* материалов п методов исследовании. 4 глав собсткшшч исследований, обсуждения результатов, выколов, списка литературы

Работа содержит 61 рисунок н 11 таблиц Библиография состоит in 224 огечесгмииых к зару&жных легочников

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Петракова, Марина Юрьевна

123 ВЫВОДЫ

1 При связывании высокомолекулярных белков алыкиаточ кальция к пектин кальции сорбциошое равновесие устанавливается а течение 240 -ЗОО минут, при связывании ниэкомолекулярных белков в течение - 60 минут

2 Изотермы сорбции иммуноглобулина. бычьего сывороточного альбумина, инсулина, гиалуронндагш, рибоиуклеозы и шттохрома альгюштом кадмии имеют вил L-криаых. а изотермы сорбции дезокеирибоиуклеозы, трипсина и химотрипенна имев» вид S-кривых Иютермы сорбции иммуноглобулина, человеческого сывороточного альбумина. бычьего сывороточного альбумина, инсулина и цитохрома псктагом кальция имеют вил 1.-кривых, а интерны сорбинн пгалуронндазы, дсюкеирнбонукяеазы, рибонуктеазы, трипсина и химогрипенна имеют вид S-кривых

3 Значения макснмлзьной сорбцнонной емкости вычисленные но основании линеаризованного уравнения Лзнгмюра, составляют для альпшата кальция от 171 мг/г для инсулина до 1407 ur/r для трипсина Значения макснмдчыюй сорбцнонноВ емкости, йычиелсштые на основании линеаризованного уравнения Лзигмюра, составляют для нектатл кальция от 46 мт/г для человеческого сывороточного альбумина до 1500 мг/г для трипсина.

4 Константы сродства ольгината кальция к белкам, вычисленные на основании люкариювашюго уравнения Лэнгмюра составляют от 0.002 мг/мл для рибонуклсаш до 2,24 иг/ил для цитохроча Константы сродства пектота кальция к белкам, вычисленные на основании линеаризованного уравнения Лэнгмюра, составляют от 0,0005 мг/мд для рибону клещи до 2,12 мг/мд дня инсулина

5 Сорбшюним емкость ольгината кальция и иектвтв кальщй зависит от кислотности среды Максимальная белковосвязываюшля активность азьпшата и пектата кальция проявляется в пределах рН от 4.0 до 7,0.

6 Максимальная еорбцноиная емкость исследованных сорбентов по иммуноглобулину снижается в ряду аяынижг кальция > полнеорб > пектат кадмии > днокпг>дрнчсекий смектнт > полифспан > чикрокрислтлическая целлюлоза > активированный уголь По человеческому сывороточному альбумину полисорб > лиоктиэдртмесхий смсктит > псктат кальция > микрокристаллическая целлюлоза > полифена»! > активированный уголь По кнсушну полисорб > лиокгаэдрический смектнт > ильгтпвгг калышя > кш кальщи > иатнфегпш > активированный уголь > микрокристаллическая целлюлоза По трипсину альгннат кальция > псктат кальция > дноктаэдрнчсский смектнт > активировании п уголь > полнеорб > полифспан микрокристаллическая целлюлоза

7 Константа сродства исследованных сорбентов к иммуноглобулину снижается в ряду полифспан > полисорб > дноктаэдрический смектнт > микрокристаллическая целлюлоза > псктат кальция >активированный уголь > альлишт кальция К человеческому сывороточному альбумину микрокристаллическая целлюлоза > полисорб > шижтагарнческий смектнт > активированный уголь > пекпгг калышя > полифспан. К инсулину полифспан полисорб > микрокристаллическая целлюлоза > активированный уголь > псктат кальция > альгинат кальция > диоктаздрический смектнт К трипсину микрокристаллическая оелдюло» > лолифелаи > полисорб > диоктаэдричсский смекпгг > активированный уголь > альгинат кальция > псктат кальция

8 Энгсральное введение шокозтерифшитрованного пектина и альгнната кальция в физиологических долах в течение I и 3 месяцев ие влияет на покаители белкового обмена у крыс

Заключенно

Данные обзора демонстрируют, что нерштшк ющпшрды благодаря своим уникальным физико-химическим свойствам способны святы вать различные вещества, что обусловливает многие нз их лечебных свойств В последние годы особенно широко развиваются бютехмологаческнс исследовании с использованием некрахмальных полисахаридов, где объектом служат белковые вещества < ферменты, гормоны, живые и растительные клггюО В связи с актуальностью исследований взаимодействия полисахаридов с белками, целью нашей работы мнилось изучение Сслкопосвязывйюшсй активности шгыпнага кальция и нектага казызи* in vitro в отношении некоторых модельных белков при помощи метода изотерм, что позволяет получить количественное описание процесса сорбции. Модельные эксперименты т vitro позволяют предположить возможный механизм взвичодейеши данных полисахаридов с быками

Глава EL МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая мракзернсзнк* изучаемы! пренврятов

Физико-химические характеристики исследованных полисахаридов

1 Альгинат кальция (ООО НПФ «Яостокфарч», г Владивосток). Содержание урановых кислот 77,3%, содержание кальция 72,5%, 82,5% карбоксильных групп связаны с ионами кальция, характеристическая ииосп 1270 чиИч молекулярная наоса в среден 4О300О дагалои.

2 Пектвт кальция (ООО НПФ «Вскгтокфарм», г Владивосток). Содержание чистого газоктурононо 60,5%, степень зтернфнкяцни около 1,5%, характеристическая вязкость 160 мл/г газдктуронана, 86% карбоксильных групп связаны с нонами кальция.

3 Инэкозтерифниироваштый пектин (ООО НПФ «Востокфарм», г Владивосток) Содержание чистого галактурондна 67,1% степень зтернфикацин около 2,5%. Свободные и метилированные карбоксильные фуппы расположен в случайном порядке Характеристическая вязкость препарата составила 201 мл/г голактуронаиа Молекулярный вес. вычисленный с помощью уравнения Маркэ-Куна-Хаузшка составлял в среднем 20500 До.

4 Низксотерифннироамшый пектин ю морской травы Zarrera таг/па (ООО НПФ *Вост«жфарм». г Владивосток) Содержание галактуроновой кислоты - 74,8%, степень зтернфнкацнн - 5,7%, характеристическая вязкость - 340 мд'г [ адактуронона, молекулярная масса около 62000 Да

Образны апгимаге кальция и пеетага кальция по.зучеиы и «ухлрмгкртованы в лаборатории фармакологии института бмояогни моря ДВО РАН Образцы представляли собой мелкий однородный порошок кремового ивега с наличием частиц более светлого и более темного цвета Массовая доля влаги в исследуемых образцах составляла ж более 10%

Дм сравнительных исследований были испытаны следующие лекарственные препараты и биологически активные добавки Активированный уголь таблетки {ОАО «Ирбитский химфармзавол". г Ирбит)

2 Анкир-Б таблетки микрокристаллической иеллюлспы (ЗАО «Эниар» и ЗАО «Подиэкс», г Бнйск)

3 Полифспвн грану ляг (ТОО «Стн-Меднха» н Институт молекулярной генетики РАН, г Москва)

4 Диогтамртсский смолит порошок {«Beaufcnir Ipsen», Франция)

5 Нолткорб МП (гюлисорб медицинский) порошок (ЗАО «Полнсорб», г Челябинск)

В качестве модельных белков были выбраны

1 Раствор альбумина 10% (ФГУП НПО «Мнкроген* МЗ РФ, г Пермь) Препарат содержит человеческий сывороточный альбумин

2 Бычий сывороточный атьбумин («Sigma»)

3 Иммуноглобулин человека нормальный (ФГУП НПО -'Мнкрогсн» МЗ РФ, г Уфа) Препарат представляет собой иммумологичеемг активную белковую фракцию, выделенную иг плазмы здоровых доноров, очищенную и концентрированную метолом фракшюннроввння этиловым спиртом Концентрация белка в препарате составляет около 10% i Цмшммсуямн говяжий кристаллический (Завод медицинских препаратов, г Санкт-Петербург) Стерильный порошок Содержание нннкл около 0,5%.

5 Лидам (ФГУП НПО «Микрогсн* МЗ РФ, г Томск) Ферментный препарат, в состав которого «ходит гиалуронидаи- Ампулы содержат по 20 мг стерильного лнофнлиэирмамиого порошка

6 Трилсии кристаллический (ФГУП НПО «Мнкроген» Nf3 РФ, г Томск) Протеолитический фермент, Полученный из поджелудочной желеты крупного рогатого скота Ампулы содержат по 10 мг стернлыюго порошка

7 Хнмотрютснн кристаллический (ООО иСамсон-Медъ. г Санкт-Петербург/ ПротеолитическиЙ фермент. полученный id поджелудочной железы крупного рогатого CKota Ампулы содержа! по 10 чг белого стерильного порошка

S Рнбокуклсяза аморфная i.OOO иСамсон-Мед», г Санкт-Петербург) Ферментный препарат, получаемый из поджелудочной железы крупного рогатого скота. Ампулы содержат по [О мг белого лиофилизированного порошка.

9 Деижсирнбонуклеаза (ООО «Сямсои-Мсль. г, Санкт-Петербург) Ферментный препарат, получаемый in поджелудочной железы крупного рогатого скота Ампулы содержат по 25 чг белого порошка

10 1 (итохром С бычий («Sigma»)

2.2. Общая характернонкя жепери метальных животных

Работа проводилась на 60 белых нелинейных крысах-самцах. Исходная масса тела животных составляли S4.7+3.95 г Животных содержали я яииарин 8ГМУ Во время экспериментальных исследований животных содержали в специальных пластмассовых клетках со стружечной подстилкой по 5 животных я каждой Все животине помимо сбалансированного рациона получали овес, хлеб, свежие а вощи и фрукты, мед, a а пмнсс время дополнительно комплексные поливитаминные препараты

Основные требования к содержшшю, выбору к подготовке жквотиых для жснерннстгтов осуществляли с принятыми в настоящее время рекомендациями 115} При разделении животных на группы проводили их ранжирование по массе тела с целыо обеспечения идентичности указанных групп по данному показателю Эвтаназия животных осуществлялась в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите эксаерниелтадышх животных 86,'609 EEC [105]

1J. Физико-химические м вшиичичкиис «полы исследования к'пне1йч«кае мкпримелш, Дяя определения времени установления сорбнионною равновесия изучали кинетику процесса сорбции белка тестируемыми сорбентами Адсорбцию белка проводили в герметично закрывающихся центрифужных пробирках объемом 10 мл К 0.1 г сорбента добавляли 10 мл 0,1% юдлого растяора белка Смеа. непрерывно перемешивали на электрической ротационной чешалке при 120±10 обмин Через определенные промежутки времени (1, 15,30.60, 120, LB0, 240. 300, 360 и 420 мнн) пробы отбирали и цешрнфугнровади при 10000 оСь'мин в течение 10 мин В нааосалочиой жидкости определяли концентрацию белка

Shimodzu" UV-2550 (Япония). Сорбинокную емкость рлссчшывалн по формуле q-V(CrCfiS, где q • сорбцнонная емкость (количество белка в мг, сорбированнойо на 1 г сорбсита). чг/г, Г. объем раствора белка, л, S- навеска сорбента, г. С, и С/ - начальная и конечная концентрация белка в растворе, соответственно, гУл.

При расчете сорбщшютоИ емкости учитывали свстопоглощсние водорастворимых компонентов самих сорбентов при аналитической длине волны (280 им) Для этого иепользоиит раствор сравнения, содержащий водное извлечение из анализируемого сорбента, приготовленный параллельно в идентичных условиях Полученные данные представляли графически, где на оси абсцисс откладывали время контакта, а на оси ординат - количество связанного белка а процентах от максимальной сорбщюнной емкости Каждая точка на графике представлена средним значением результатов трех измерений.

Зкепсрнчмпы по рмьиовссиоА сорбции. Сорбцию белка проводили в г) сорбенте» помешали в герметичные пробирки, в которые наливали по 10 мл волною раствора белка различной концентрации Для эксперимента были методом при ),-2&0 им на спектрофотометре условиях При комиятиой температуре одинаковые навески (0,1 выбраны следующие концентрации белка 0.25. 0.5. I, 2, 3. 5. 7. 9. 10 и 12 мг/мл {для альбумина к иммуноглобулина) Пробирки с раствором непрерывно встряхивали при 1204т] 0 об/чин Через время, установленное в эксперименте по определению кинетики сорбции, пробы центрифугировали при 1<ХЮ0 ой'мнн в течение 10 Mini В ншюсадочной жидкости определяли равновесные концентратам белка и дня каждой концентрации рассчитывали сорбцнонную емкость сорбента Затем строили графики изотерм сорбции где на оси абсцисс откладывали значения равновесных концентраций белка (С«,). л на оси ординат соответствующие им значения сорбимошмА емкости. Каждая точка иа графике представлена средним результатом не менее трех параллельных измерений Для описания изотерм сорбции применяли уравнение Лзнпяора q -?>*> ft С^О+ЬС^. уравнение Фрсймлпнха q к Си их линейные формы Pacter основных показателей, характеризующих процесс сорбции, описываемый уравнениями Л лнгмюра и Фрейналнхл, арОНЗВОДНЯМ путем аппроксимации экспериментальных зависимостей метолом наименьших квадратов, методом Чсбышсва и методом квадратичных отклонений Д,1я анализа характера отличий хонцеггграцноиной зависимости сорбиионной емкости от уравнения /Ьнгмюра использовали преобразование Скзтчврда. И случаях отклонений экспериментальных точек от прямой в координатах Сютчарда данные обрабатывали в полулогарифмических координагах и координатах X иллв для получения количественных характеристик. кслгр»чситм по П.ТННИИЮ pli ерелы ня сорбцию, j'Lth исследования зависимости сорбционной емкости сорбентов от рН кислотность среды изменяли я пределах рН 4.0 - 9.0 Ддя поддержания нужного значения рН среды применяли буферные растворы Дтя диапазона рН 4,0 5,0 использовали 0,2 М аиепптшй буфер (тритдрат ацегата натрия/уксусная кислота), хтя рН 6.0 - буфер, содержащий 2-(ГМ-морфолнно) зтансульфоновую кислоту и КаОН, для диапазона рН 7.0 - 9,0 использовали тр не-буфер {трис/НСП Измерения рН растворов проводили с помощью рНмэтра pi I* ISO M (Беларусь) К 0,1 г сорбента добавляли 10 мл 0,1% pdcmopa белка в соответствующем буфере Смесь встряхивали нужное для установления равновесия время и центрифугировали при условиях, описанных выше В начале н в конце эксперимента контролировали значения рН в опытных цр^ирках Равновесные течения сорФвзошюй емкости определяли для каждого значения pi L после чего строили график зависимости сорбшюнной емкости от рН среды На оси абсцисс откладывали значение рН. а на оси ординат - количество связанного белка в процентах от максимальной сорбшнмшой емкости каждого сорбента Каждая точка на графике представлена средним результатом трех измерений

При определении связывающей способности низхоэтернфнцированзюго пехпизп с ртутью с помощью атомно-адсорбционного метода в экспериментах т varo ювсстное количество металла <0,2«г/мя) и пкзкоэтерифнинровашпго пектина (100 мг) смешивали в пробирке После иикубашш в течение 24 часов, образовавшийся гель отфильтровывали, и в остаточной жидкости определяли количество металла на отомно-ллсорбшюнном спектрофотометре фирмы 'Nippon Jarrel Ash' модель АА-855 Количество сыпавшегося с пектином металла определяли как раицу между няншыпт количеством металла в растворе и полученным после фильтрации пектинового геля [26)

Ьнохимичсскнс методы. Общий белок сыворотки крови оценивали унифицированным методом но биурстояой реакции [24J К 0.1 мл сыворотки кроам добавляли 5 мл рабочего раствора бяуретамго реактнаа и смяпимлн, юбегая образования пеиы Через 30 мни (и не позднее чем через I ч) измерили на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя I см при длине водны 560 нм против холостой пробы Мочевину сыворотки крови определяли с помощью набора реактивов Бнолахемп-гсет" 0.01 мл сыворотки крови смешивали с 2 «я раствора, содержащего жшелиммюмюим, тноеемикарбазнд. серную кислоту и соль железа трехвалентного Пробирки помешали на 10 мин на водяную баню, затем быстро охлмдалн н измеряли оптическую плотность пробы при длине волны

510 iim Для измерения количество остаточного ззота к I.S мл дистиллированной волы приливали 0,2 мл сыворотки крови и I ил Е0% тркхлоруксусной кислоты, смесь центрифу гировази К I мл падосадочиой иомкости прибавляли 3 капли иаяцилрцммнноЙ серной кислоты н 3 капли перекиси водорода, упаривали до по луче гатя бесцветного минералита, к которому добавляли 10 мл воды, 6 капель 50% раствора гндрокенда натрия. 0,5 мл реактива Несслера и определяли оптическую плотность {7] Креатнннн сыворотки крови измеряли е помощью набора реактивов "Биолахема-тесГ Экскрецию креатин га га с мочой определял и па биохимическом анализаторе "Cobac Миа plus" (Hoffman La Rosbc, Швейцария)

2,4, Ми ■ типически и обработка результатов

Для статистическою анализа и обработки результатов исследования рассчитывали средние арифметические величины и ошибки средних лрнфметнчссык Графический матернлд подготовлен в Microsoft Excel 2003 (Microsoft Corporation, USA, 2002). Анализ зависимостей проводили с помощью регрессионного анализа путем аппроксимации экслеркменталышх данных методом Нйменызгих квадратов, методом Чсбыпгева и методом среднеквадратичных отклонений, используя специальную программу для расчета параметров изотермы ("Лзнгмюр", версия 1,03). Оценку достоверности рааднчпя результатов экспериментальных наб,1ЮЛС1ШЙ производили а еравнещщ с контролем с применением (-критерия Стьюлснта для малых величии (п * 30) Уровень значимости считали достоверным при р <0,05 [И].

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Глава III. Кинетика гни ч,пинии белка сорбентами

Для юученкя белкоаосаяымюшеП активности штата ялион н пектога каиина выбршю несколько молельных белков, отличающиеся межлу собой но химическому строению и физическим свойствам Поскольку, кинетика связывания прн постоянной температуре и концентрации зависит от природы реагирующих всщеста (в чаетноетн, от молекулярной массы) белки, которые мы выбрали для изучения бслковосвяэываюшсй активности, были разделены на 2 группы высокомолекулярные к ннзкомалскудярные. К первым отнесли иммуноглобулин человека, бычий сывороточный альбумин, человеческий сывороточный альбумин, гналуронидету и демжеирибоиукдеаэу К нюкомолскулирным белкам отнесли инсулин, трипсин, лнмотриненн, рмбонуклеазу и цнточром По заряду белки рлэлел или на кислые и щелочные Разделение белков но заряду имеет практическое значешк, так как эффективность взаимодействия между полисахаридами и белками определяется их зарядами К кислым белкам, в составе которых преобладают «русодержашие и дикарбоноеые аминокислоты, отнесли человеческий сывороточный альбумин, бычий сывороточный альбумин, инсулин, дезокстфнбонуклеазу н гиолуронидазу. Эти белки имеют отрицательный суммарный заряд молекул К щелочным белкам, в составе которых свободные аминогруппы преобладают над свободными карбоксильными, отнесли иммуноглобулин, рнбоиуклеезу. трипсин, химотрипенн и шгтохром В отличии от кислых белков щелочные имеют положительный суммарный заряд

Дзя сравнительного исследования были выбраны препараты мпсросорбситов вктияиродянкий утоян. чик^лкуиктал тнескли целлюлоза, нолифепан, а также препараты, Облмнош» высокой сорбнионпоА емкостью в отношении белка но.зисорб и дшмопдонканй смектнт Белковосв*зы»аюшук> активность данных препарате» оценивали в отношении iimмузpw лобулика, человеческого сывороточного альбумина, инсулина н трипсина

Для определения времени установления сорбпионного равновесия юуннк кинетику процесса серб пин белка сорбеитамм К 0,1 г сорбента добавляли 10 мл 0.1% водного раствора белка Смесь непрерывно перемешивали для ускорения достижения равновесия и через определенные промежутки времени (от 9 Mini до 420 мни) центрифугировали Концентрацию белка определяли епскгрофотометрнчсскнч методом По полученным данным аронии кинетические кривые, при этом максимальную сорбшюнную емкость, зарегистрированную в ходе исследования, принимали за 100%, а количество связанного бедка в течение определенного времени инкубации выражали в процентах от макснмалэ>ноП сорбциониой емкости,

3 I Кинетика связывания белка алыинвточ казьпня Исследование кинетики сорбции белка альтинатом калыдая покололо, что время, необходимое для достижения сорбшюиного равновесия в случае иммуноглобулина составляет ЗОЮ мни, а в случае бычьего сывороточного альбумина, дооненрибонукпеаш и тиалуроншииы - 240 мни (рис I). Кинетическая кривая связывания дезоксирнбонуклеозы имеет точки перегиба, что при налнчтш дополнительных данных может указывать на определенный механизм сорбции Сорбцнониое равновесие ддя трипсина, хнмо1рн пенил, рибоиуклеам и шпихромп устанавливаете* в течение 60 минут, за исключением иксу,тина (240 мни) (рис 2). Человеческий сывороточный альбумин не связывается альгинатом кальция при данных условиях.

3.2. Kidicthkb связывания белка пектатом МЯЛЫВШ Иммуноглобулин и дек1««рнбоиукяе»1а свям*мао«к мкппм кальция в течение 300 мин (рис 3). Кинетическая кривая связывания деиженрибонукзеазы имеет волнообразный характер Бычий сывороточный

О 100 200 300 400 600 вр«мй контйсти, much

Рис 1 Кинетика связывания высокомолеку дярны.ч белков алыннатом калыия

D t» 200 300 400 ИО

Время контакта, ыш»

Рис 2 Кинетика связывания нюкомолскулярных белков адьгннатом альбумин, человеческий сывороточный альбумин, гналуронидача максимально сорбируются в течение 240 чин Кннсгическмс крипые связывания трипсина, хнмотрнпенна, рибонуклеазы и шттохрома пектатом кальция выходят на илаю и течение первого часа, а кривая связывании инсулина - в течение 240 «ни | рис 4)

Рис 3 Кинетика связывания высокомолекулярных белков пошлом кальция si h о 100 200 зоо

Рис 4 Кинетика связывания нткокомолекулярных белков пектатом

3 3 Кинетика связывания белка ВКЛВНромишыы углем Нв рис. 5 представлены кинетические кривые сорбции иммуноглобулина, человеческого сывороточного альбумина, шкулина и трипсина Сорбиионнос равновесие для иммуноглобулина и человеческого сывороточного альбумина устанавливается в течение 60 мин Инсулин сорбируется несколько дольше - ISO мни Кинетическая кривая сорбщш трипсина перестает возрастать через 300 мин

О 100 200 300 400 600 Вр«ыя контакта, ими

Рнс S Кинетики связывания белка активированным углем

3 4. Кннепска связывания бедке мпфоорктшлнчесюй целлюлозой Трипсин и человеческий сывороточный альбумин связываются микрокристаллической целлюлозой относительно быстро - в течение первых 60 мнн (рнс 6) Кинетические кривые связывания иммуноглобулина и инсулина выхолят на плато несколько позднее - через 120 мин

3 5 Кинетика связывания белка гюлнфепаиом Сорбцнонное равновесие для иммуноглобулина, человеческого сывороточного альбумина и инсулина устанавливается в течение 120 мин (рис 7), а для трипсина через 240 мин

3 6. Кинетика связывания белка полнеорбом Относительно быстро сорбцнонное равновесие устанавливаете* для трипсина - за 40 мни Для инсулина несколько медленнее - в течение 120 мин Доя иммуноглобулина и человеческого сывороточного альбумина сорбционное равновесие устанавливается в течение 240 мни (рис 8). о--.---.-,-.

10 О 100 200 УЮ 400 500

Е5ри UH «ОПТ»ГЦ, инк

Рис 6 Кинетика СМЭЫМННЯ белка микрокристаллической целлюлозой

О 100 200 300 400 500 Время контакта, ыян

Рис 7 Кииеткка саотинми белка иолнфепаном

3 7 Кинетика связывания белка диоктаэлрическнм смсктнтом Исследование кинетики сорбиик белка диоетаэдрнчсскнм смектитом показало, что сорбцнонное равноассис да* иимуиот лобу дмил и человеческого сывороточного альбумина устанавливается »а 300 мин Инсулин н трипсин сорбируются сше долине - а течение 360 нш (рис 9) иш^язг notyrw

Pitt 9. Кинетика сшиывшии белкл джжттдричсского счиггнта.

Г7мшя IV. PiiHORKimi сорбции белка сорбентачи

Сорбционная емкость сорбентов ко многом зависит oi концентрации еорбата ■ растворе Вили пройдена серна опию* но определимо сорбцнонноЛ емкости исследуемых сорбентов при различных равновесных концентрациях сорбита (белка) с последующим построением изотерм сорбции Дтя этого, в пробирки, содержащие одинаковые навески сорбента разливали растворы белка различной концентрации Пробирки с раствором непрерывно перемешивали в течение, необходимого для достижения равновесия, времени, которое предварительно было установлено в кинетических экспериментах Далее пробирки центрифугировали н определяли равновесные концентрации спектрофотомегрнческим методом Затем строили графики нютерм сорбции, где из оси абсцисс откладывали значения равновесных концентраций белка (Сч), а на оси ординат -соответствующие им значения сорбинонной смкосш <q> Для получения количественных характеристик процесса сорбции щотермы представляли в различных коердзнютах и обрабатывали црн помощи математических приемов

4 1 Равновесная сорбция белка альгшитом капыщя Изотермы сорбпии иммуноглобулина (рж 10А), бычьего сывороточного альбумина (рис IIA). инсулина (рис I2A) и гнадурошиязы (рис ]ЗА) выпуклые относительно оси абсцисс на начальном участке и имеют пологий характер вотрастання При дальнейшем увеличении концентрации наблюдается выход кривых на плато Форма полученных кривых позволяет отнести их к классу L Это так называемая нормальной кривая или изотерма Лзнгмюра [194), В координатах Склчарда кютермы сорбции иммуноглобулина (рис. 10Б), бычьего сывороточного альбумина (рис И Б), инсулина (рис 12Б) и гиштуронндазы (рис 13Б) образузот прямые линий, описаны в уравнения Лзнгмшра

Рис i J Изотерма сорбими бычьего сывороточного альбумина альлшпточ кальция (А), представленная в координатах Скэтчарда (Б)

Рис 13. Изотерма сорбции гналурокилнзы алызешттом кальция (А), прсдстаяленная ш координатах Сглчарла (Б)

Изотерма сорбции рибонуклсазы имеет вид Ыпотермы с наличием плато в области малых концентраций (рис I4A) При повышении концентрации сорбщи продолжает расти Изотерма СОрбини В координатах Сютчарда isueer воямообриный вил, что говорит о сложном характере взаимодействия между альтинатом и рнбонушихюИ 4 рис МБ) Экспериментальные данные представленные в координатах Хнлла не предполагают наличие положительной коонервтюност* (рис, 14В) График в координатах Бъеррума 1К позволяет достоверно говорить о существовании более чем одною типа мест связывания (рис ИГ)

А Б

Рис 14 Изотерма сорбции рнбонуклеозы альтинатом кальции (А), представленная в координатах Скзтчарда (Б). Хнлла (В) и Бьсррума (Г)

Изотерма сорбции шгтохрома также относится к классу L (рис. ISA). Она отличается от вышеописанных L-изатерм тем, 'по ее начальный участок проход]и близко к оси ординат, что укатывает на сильное сродство алыината кхтмои к шп ох рому В координатах Сюпцщш (рис 15Б} имтерш образует вогнутую линию, что укатывает ил наличие ток называемой отрицательной кооператив ностн или ikckojckkhx мест связывания с различными константами диссоциации JIB7J Эти два случая вккрюшнирут с помощью полулогарифмических коордмат или координат Бьеррума. Количество точек перегибов в этих KOOpJitiiatax соответствует количеству типов мест связывания [5| Исходя in вида графика изотермы сорбции цнтохрома и полулогарифмических координатах, нельзя предположить существование более чем одною типа мест связывания (рис 15В)

А Б

Рис 15 Изотерма сорбции иигочрома алыннвтом кальция (А), представленная в координатах Сютчарди (Б). Бьеррума (В)

Количественные характеристики, изученные на основании шмршпша кривич иммуноглобулина, бычьего сывороточного дльбумшзв. инсулина, гиалуронидпзы, рибонуклеош и шгтохрома прицелены в таблице I

Значения коэффициентов регрессии линеаризованных уравнений L-нзотерм указывают на то, что данные изотермы хорошо описываются уравнением Лнимюра, за исключением изотермы сорбции рнбонукдеаты Данная изотерма нсдостроена и продолжает расти, поэтому она лупис описывается уравнением ФреПнддиха При вычислений консгазтт лннеаризовазрюго уравнения Лэнгчюря метол подбора по квадратам отклонений лучше аппроксчмцхмиш экспериментальные данные Дня вычисления констант линеаризованного уравнения Фрсйнлднхо был использован истод наименьших квадратов

Значения максимальной сорбцноиной емкости и констант лшшаони, вычисленных методом Сютчарда также приведены в таблице I Сравнивая константы сродства, вычисленные тпеми методами видно, что сродство альпшата кальция к данным бедкам снижается а следующей последовательности шпохром > инсулин > бычий сывороточный альбумин > ГНЩРОИКЛСИ > иммуноглобулин > рибоиукдеаза, Максимальная сорбцнонная емкость альтнната кальция снижается в раду рибонухлеаза > иммуноглобулин > шпохром > бы 41 ей сывороточный альбумин > гиалуронидаза > инсулин. Изотерма сорбции рибонуклеазы является неполной, вследствие чего количественные показатели сорбции вычислены с большой 1иирсшностью и носят недостоверный характер

Изотерма сорбции деюксирмбонукдеазы носит сигмоидный характер (S-образиая кривая) (рис 16) В области нпгенх концентраций сорбция отсутствует, начальный участок кривой лежит на оси абсцисс При увеличении концентрации сорбинонная емкость в узком интервале резко увеличивается, и продолжает расти Такая кривая может говорить о

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Петракова, Марина Юрьевна, 2006 год

1. Аминоглюканы в качестве биологически активных компонентов лекарственных средств (обзор за период 2000-2004 г.) / А.Г. Сливкин, В.Л Лапенко, А.П. Арзамасцев и др // Вестник ВГУ Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2005. - № 2. - С 73-87

2. Аймухомедова, Г.Б. Свойства и применение пектиновых сорбентов / Г.Б Аймухомедова, Д.Э Алиева, Н.П. Шелухина - Фрунзе: Илим, 1984. - 131с.

3. Аминина, Н.М. Альгинаты: состав, свойства, применение / Н.М. Аминина, А.В Подкорытова // Известия ТИНРО - 1995. - Т. 118. - 130- 137.

4. Беляков, Н. А. Энтеросорбция / НА Беляков - Л.: Центр сорбционных технологий, 1991.-336 с.

5. Березин, ИВ Биокинетика / ИВ Березин, С Д Варфоломеев - М.: Медицина, 1979.

6. Богданов, В.Д. Эмульсионные системы, содержащие хитозан / В.Д. Богданов // Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования. - М.: ВНИРО. 1992 - С . 76-83.

7. Бородин, Е.А. Биохимический диагноз (физиологическая роль и значение биохимических компонентов крови и мочи) / Е.А. Бородин. - М.: Медицина, 1989. - Ч. I. - 143 с.

8. Брицке. М.Э. Атомно-абсорбционный спектрохимический анализ / М.Э Брицке.-М.: Химия, 1982 -223 с.

9. Влияние степени сульфирования полисорба на соотношение сорбции инсулина и рибонуклеазы / А.А. Демин, К П. Папукова, Е С Никифорова и др //Журн. физической химии. -2000. - Т . 74, №4. - С . 689-693.

10. Гальбрайх, Л.С. Хитин и хитозаи: строение, свойства, применение / Л.С Гальбрайх//Соросовский образовательный журн. -2001. -Т. 7, № 1, —С. 51-56

11. Гублер, ЕВ. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов/ЕВ. Гублер -Л.: Медицина, 1978 -296 с.

12. Дильбарханов, Р. Д., Альгинаты и их возможности применения в фармацевтической практике / Р.Д Дильбаоханов, Е.Б. Ярошенко, Б.В. Унербаев //Мед журн Казахстана. - 1978 - № 1— 40-43.

13. Динамика биохимических показателей крови при проведении энтеросорбции / НА Беляков. А В Соломенников. М Я Малахова и др. // Физиология человека. - 1989 - Т . 15,№ 1.—С. 143-147.

14. Дудкин. М.С Об использовании термина "пищевые волокна" и их классификация / М.С Дудкин, Л.Ф Щелкунов // Вопросы питания. - 1997. - №3.-С.42-43

15. Западнюк, И.П. Лабораторные животные Разведение, содержание, использование в эксперименте / И.П. Западнюк, В.И. Западнюк, Е.А Захария. - 2-е изд. - Киев: Вища школа, 1974. - 303 с.

16. Иванищев, В.В. О связывании ряда веществ сывороточным альбумином человека / В.В. Иванищев, А.В. Юдаев // Вестн. новых мед технологий. - 2002. - Т. 9,№ 1. - С 34-36.

17. Измайлова, В Н. Поверхностные явления в белковых системах / В.Н. Измайлова, ГМ. Ямпольская, Б.Д. Сумм. - М : Химия, 1988. -240 с.

18. Изучение взаимодействия пектинов с металлами с целью исследования их детоксицирующих свойств / Н Ш Кайшева, В.А Компанцев, Н. Щербак и др //Фармация. - 1992. - № 2 . - 45-49.

19. Изучение действия хитозана на контактное взаимодействие макрофагов с лимфоцитами in vitro I В.Г. Галактионов, Б.А. Мищенко, Л.В. Хромых и др. //Иммунология - 1984. - №2. - С . 35-38.

20. Иммуносорбция на активных углях / В.Д. Горчаков, Д.Д. Петрунин, Рябова В.Л и др. //Вопросы мед. химии. - 1981.-Т. 27, № 4 . - С . 544-547.

21. Исследование реологических свойств водных растворов фукоиданов / Ю.А. Шипунов, О.Г. Муханева, Т.Н. Звягинцева и др. // Высокомолекулярные соединения -2000.-Т. 42. - С . 93-101.

22. Исследование сорбции биологически активных веществ активированными углеродными сорбентами / О.А. Портной, В.Г. Николаев, ЛИ. Фридман и др // Химико-фармацевт журн. — 1984. - № 3. - 360-364

23. Комисарова, А.Л. Изучение механизма образования и стабильности комплексов а-химотрипсина с альгиновой кислотой / АЛ. Комисарова, ММ. Фельдштейн. ВС Якубович // Химико-фармацевт журн. - 1981. - Т . 5, № 1. - 56-60.

24. Лабораторные методы исследования в клинике / ВВ. Меньшиков, Л.Н. Делекторская, Р.П. Золотницкая и др.: справочник / под ред. ВВ. Меньшикова -М.: Медицина, 1987. -368

25. Медико-биологические свойства полисорбов / Н.Б. Луцюк, А.А. Чуйко, В И Богомаз и др. // Кремнеземы в медицине и биологии / под ред. А.А. Чуйко. - Киев - Ставрополь, 1993. - С 89.

26. Никаноров, A.M. Биомониторинг металлов в пресноводных экосистемах/A.M. Никаноров, А.В. Жулидов -Л.: Гидрометеоиздат, 1991 - 312 с.

27. Николаев, В.Г. Метод гемокарбоперфузии в эксперименте и клинике / ВТ. Николаев. - Киев: Наук. Думка, 1984. - 360 с

28. Новая отрасль биотехнологии - ранозаживляющие препараты на основе полнашшосахарндов / ЕII Феофилова, В.М. Терешина, АС. Меморская идр. //Микробиология - 1999- - Т . 68, № 6. - С . 834-837.

29. Оценка детоксикационных свойств "полифепана" на основе модельных экспериментов / А.П Подтероб, Ю.В. Богданович, ЕВ Нижникова идр. //Химико-фармацевт. журн. -2004 - Т . 38,№ 8. - С . 49-54.

30. Перспективы использования растительных полисахаридов в качестве лечебных и лечебно-профилактических средств / Н.А. Криштанова, М.Ю. Сафонова, ВЦ. Болотова и др // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2005. - J 6 1.-С. 212-221.

31. Получение пористого материала на основе альгиновой кислоты, содержащей иммобилизированный террилитин / АЛ Комиссарова, B.C. Якубович, ПИ. Толстых и др. // Антибиотики и химиотерапия. - 1988 - Т. 33, №10.-С. 735-738.

32. Разработка микрокапсулированной формы живой коревой вакцины / Е.А. Нечаева, Т.Г. Рябичева, НА Вараксин и др. // Вестн. Рос. академии мед. наук. - 2004. - № 11. - 46-49

33. Решетников, В.И. Оценка адсорбционной способности энтеросорбентов и их лекарственных форм / В.И. Решетников // Химико- фармацевт жури. - 2003. - Т. 37, № 5. - 28-32.

34. Рыженков, BE. Пищевые волокна и синтетические неспецифические энтеросорбенгы: гиполипидемическое и антиатеросклеротическое действие / BE Рыженков, О.В. Ремезова, НА. Беляков // Вопросы питания. - 1991. - № 11. - С . 11-19.

35. Савицкая, ИМ. Механизм гемостатического действия альгинатных материалов / И.М. Савицкая, Ю.А. Фурманов // Клиническая хирургия. - 1989.- № 1 - С 17-19

36. Сливкин, А.Г. Полиурониды. Структура, свойства, применение (обзор) / А Г. Сливкин // Вестник ВГУ Серия химия, биология. - 2000. - 30-46

37. Соболев, М.Б Энтеросорбция не крахмальным и полисахаридами как метод лечения детей с меркуриализмом / МБ. Соболев, Б Хацкель. А.Ю Мурадов // Вопросы питания. - 1999. - Т. 68, № 1. - 28-30.

38. Сорбция холевой кислоты пектинами т vitro I М.Ю Петракова Е.А. Коленченко, В В Ковалев, Ю.С Хотимченко // Сб. тез. 2-го съезда Российского научного общества фармакологов - М, 2003. - 73.

39. Сравнительная активность некоторых природных и синтетических энтеросорбентов при экспериментальной гиперлипидемии / О.В. Ремезова, НА. Беляков, В.Ф. Трюфанов и др // Вопросы питания. - 1992. - № 5/6. - 52-55.

40. Сравнительная оценка металл связывающей активности низкоэтерифициро ванн ого пектина из морской травы Zostera marina и других сорбентов / И.С. Сергушенко, В.В. Ковалев, BE Бедняк и др. // Биология моря. - 2004 - Т. 30, Ш 1. - С 83-85.

41. Сравнительная оценка эффективности энтеросорбентов полифепана и ваулена в лечении острого экспериментального панкреатита / А.И. Шугаев, НА. Беляков. Х.Е. Мусащайхов и др // Патолог, физиология и эксперимент терапия. - 1987. - № 2. - 52-54.

42. Сульфатированные производные хитозана как ингибиторы ВИЧ- инфекции / Г.В. Корнилаева, ТВ. Макарова, А.И. Гамзадзе и др. // Иммунология.-1995.- № 1.-С. 13-14.

43. Усиление с помощью хитозана реакции контактного взаимодействия макрофага с тимоцитами т vitro I В.Г. Галактионов, Б.А. Мищенко, Л.В. Хромых и др // Иммунология- - 1983. - № 3. - 66-69.

44. Усов, А.И. Полисахариды морских водорослей: Проблемы изучения и использования / А.И. Усов // Биологически активные вещества морских организмов - М.: ИО АН СССР. 1990.-С. 97-111

45. Усов, А.И. Алъгиновые кислоты и альгинаты: методы анализа, определения состава и установления строения / А.И. Усов // Успехи Химии. - 1999.-Т 68, №11.-С. 1051-1061.

46. Усов, А.И. Проблемы и достижения в структурном анализе сульфатированных полисахаридов красных водорослей / А И. Усов // Химия растительного сырья. - 2001. - № 2. - 7-20.

47. Фармакология некрахмальных полисахаридов / ЮС. Хотимченко, ИМ. Ермак, А.Е. Бедняк и др //Вестник ДВО РАН. - 2005. - № 1. -С. 72-81.

48. Физико-химические свойства, физиологическая активность и применение альгинатов - полисахаридов бурых водорослей / Ю.С. Хотимченко, ВВ. Ковалев. О В. Савченко и др //Биология моря. -2001. —Т. 27, № 3 . - С . 151-162.

49. Хотимченко, Ю.С. Фармакологические свойства пектинов / А.В. Кропотов. М.Ю. Хотимченко//Эфферентная терапия. -2001.-Т. 7, № 4. - С . 22-36

50. Эффективность пищевых некрахмальных полисахаридов при экспериментальном токсическом гепатите / Ю.С Хотимченко, Э.И. Хасина, В В. Ковалев и др. // Вопросы питания. - 2000. - Т. 69, № 1/2. - 22-26.

51. Adsorption / desorption of human serum albumin on hydroxy apatite: A critical analysis of the Langmuir model / M.J. Mura-Galelli, J.C. Voegel, S. Behr et al. //Proc. Natl. Acad. Sci. - 1991 - Vol 88. - P. 5557-5561.

52. Adsorption of bile acid by chitos an-orotic acid salt and its application as an oral preparation / Y Murata, S Kudo. K. Kofuji et al // Chem. Pharm. Bull (Tokyo).-2004.-Vol. 52 - p . 1183-1185.

53. Adsorption studies on a new immobilized charcoal powder for hemoperfusion / A. Ozdural, H Mann. H Brunner et al // Hemoperfusion and artificial organs / eds E. Piskin, T.M.S. Chang -Ankara, 1982. - P . 172-174.

54. Alginate microspheres prepared by internal gelation development and effects on insulin stability / CM. Siiva, A.J. Ribeiro, IV Figueiredo et al. // Int. J. Pharm. -2006. -Vol. 311. - P . 1-10

55. An antivirally active sulfated polysaccharides from Sargassum horneri (Turner) / T. Noshmo, T. Hayashi, K. Hayashi et al. // С Agardh Biol. Pharm. Bull. - 1998. - Vol. 21. - P. 730-734.

56. Anderson, J.W Impact of nondigestible carbohydrates on serum lipoproteins and nsk for cardiovascular disease / J.W Anderson, T.J. Hanna // J. Nutr. - 1999 - Vol. 129. - Suppl. 7. - P . 1457S-1466S.

57. Anthonsen. T. Chitin and chitosan sources, chemistry, biochemistry, physical properties and application / T. Anderson. - N Y : Elsevier, 1990.

58. Antitrombin activity of an alga! polysaccharide / F Trento, F. Cattaneo, R. Pescador et al.//Tromb Res. -2001. -Vol. 102.-P. 457-465.

59. A protein delivery system: biodegradable algmate-chitosan-polyflactic- co-glycohc acid) composite microspheres / C.H. Zheng, J.Q. Gao. Y.P. Zhang et al. //Biochem. Biophys Res. Commun -2004.-Vol. 323-P. 1321-1327.

60. Azizian, S Kinetic models of sorption: a theorelical analysis/ S. Azizian // J. Colloid Interface Sci. - 2004. - Vol. 276 - P. 47-52.

61. Babel, S Low-cost adsorbents for heavy metals uptake from contaminated water: a review / S. Babel, ТА Kumiawan // J Hazard Mater - 2003.-VoI.97.-P. 219-243.

62. Bang, S.S Physical properties and heavy metal uptake of encapsulated Escherichia cob ezpressmg a metal binding gene (NCP) / S.S. Bang. M Pazirandeh // J. Microencapsul. - 1999. - Vol. 16 - P 489-499

63. Baysal, S.H. Preparation and characterization of kappa-carrageenan immobilized urease / S.H. Baysal, R. KaragOz // Prep Biochem. Biotechnol. - 2005.-Vol.35 - P . 135-143.

64. Berteau, О Sulfated tucans. fresh perspectives: structures, functions and biological properties of sulfated means and overview of enzymes active toward this class of polysaccharide//О Berteau, В Mulloy / Glycobiology -2003. -Vol. 13. - P. R29-R40

65. Bioadhesive interaction and hypoglycemic effects of insulin-loaded lectin-microparticle conjugates in oral insulin delivery system / BY. Kim, J.H. Jeong, K. Park et al. // J. Control. Release. - 2005. - Vol. 102. - P. 525-538.

66. Biosorption of Hg2+, Cd2+, and Zn2+ by Ca-algmate and immobilized wood-rotting fungus Funalia trogu I MY. Arica, G Bayramoglu, M. Yilmar et al. // J. Hazard Mater. - 2004. - Vol. 109. - P. 191-199.

67. Bodansky, S // Biodegradable polymers as drug delivery systems. Chasin M. and Langer R (eds), NY : Marcel Dekker, 1990. - p 275.

68. Bramwell, V W. Particulate delivery systems for vaccines / V.W. Bramwell, Y. Perrie // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. - 2005. - Vol. - 22. - P. 151-214.

69. Cadmium biosorption by cells of Sptrutma platensis TISTR 8217 immobilized in alginate and silica gel / N Rangsayatorn, P. Pokethitiyook, E.S. Upatham et al. //Environ. Int - 2004. -Vol. 30. - P . 57-63.

70. Calcium alginate immobilized marine microalgae Experiments on growth and short-term heavy metal accumulation /1. Moreno-Garrido, О Campana, L.M. 1.ubianetal. //Mar. Pollut. Bull. -2005. -Vol. 51. - P . 823-829.

71. Chang. J.S. Selective adsorption/recovery of Pb. Си and Cd with multiple fixed beds containing immobilized bactenal biomass / J.S Chang, J С Huang // Biotechnol. Prog. - 1998. - Vol 14. - P. 735-741.

72. Chang, Y.C. Preparation and adsorption properties of monodisperse chitosan-bound Fe£), magnetic nanoparticles for removalof Cu(II) ions / Y.C. Chang. DH. Chen//J. Colloid Interface. Sci.-2005. -Vol. 283 - P . 446^51.

73. Chemico-physical property and bile acid binding capacity of several antacids / G Salvioli, E. Tambara, E. Gaetti et al. // Minerva. Dietol. Gastroenterol. -1989.-Vol 35.-P. 79-83.

74. Cheng, K. Insulin-loaded calcium pectinate nanoparticles effects of pectin molecular weight and formulation Ph / K. Cheng. L.Y. Lim // Drug Dev. Ind. Pharm. - 2004. - Vol. 30 - P. 359-367

75. Chitosan-algmate multilayer beads for gastric passage and controlled intestinal release of protein/ A K. Anal, D Bhopatkar, S. Tokuraetal. //Drug Dev. Ind. Pharm. - 2003. - Vol. 29. - P . 713-724.

76. Chitosan beads as molecuiarly imprinted polymer matrix for selective separation of protein / T.Y Guo, Y.Q. Xia, J. Wang et al. // Biomaterials. - 2005. - Vol. 26.-P. 5737-5745

77. Chitosan-c hole sterol and chitosan-stearic acid interactions at the air-water interface / H Parra-Barraza, M.G Burboa, M. Sanchez-Vazquez et al // Biomacromolecules. - 2005 - Vol 6. - P . 2416-2426.

78. ChUOsan-RGDSGGC conjugate as a scaffold material for musculoskeletal tissue engineering / T. Masuko, N. Iwasaki, S. Yamane et al. // Biomaterials - 2005 - Vol. 26 - P. 5339-5347.

79. Ciardelli, G Materials for penpheral nerve regeneration / G. Ciardelli, V Chiono // Macromol. Biosci. - 2006. - Vol. 6. - P. 13-26.

80. Colwell, R.R. Marine polysaccharides for pharmaceutical and microbiological applications / R.R. Colwell // Biotechnology of marine polysaccharides / ed. R.R. Colwell Washington, New York. London, 1985. - P. 363-376.

81. Comparative studies on polyelectrolyte complexes and mixtures of chitosan-alginate and chitosan-carrageenan as prolonged dilliazem chlorhydrate release systems/C. Tapia, Z. Escobar, E. Costaetal. //Eur. J Pharm. Biopharm. - 2004.-Vol. 57.-P. 65-75.

82. Complexation of whey proteins with carrageenan / F Weinbreck, H. Nieuwenhuijse. G.W. Robijn et al. // J. Agric- Food Chem. - 2004. - Vol. 52. - P. 3550-3555.

83. Contact angle, protein adsorption and osteoblast precursor ceil attachment to chilosan coatings bonded to titanium / J.D. Bumgardner, R. Wiser, S.H. Elder et al. //J.Biomater.Sci.Po!ym.Ed.-20Q3.-Vol. 14.-P. 1401-1409.

84. Crosslinked collagen/chitosan matrix for artificial livers / X.H. Wang, D.P. Li, W.J. Wang et al. // Biomatenals. - 2003. - Vol. 24. - P . 3213-3220.

85. Davies. M.S. Calcium alginate as haemostatic swabs in hip fracture surgery /MS Davies, M.C. Flannery. C.N. McCollum // J. R. Coll. Surg Edinb - 1997.-Vol 42 - P 31-32

86. Davis, T.A. A review of the biochemistry of heavy metal biosorpiion by brown algae / T.A. Davis, B. Volesky, A. Mucci // Water Rec - 2003. - Vol. 37. - P. 4311-4330.

87. Deans. J.R. Uptake ofPb2* and Си2* by novel biopolymers /JR. Deans, B.G. Dixon // Water Res. - 1992 - Vol 26. - P 469^172.

88. DerMarderosian, A. Facts and comparisons: the review of natural products / A DerMarderosian, J.A Beutler. - St. Louis: Wolters Kluwer, 2002

89. Development of a varicella virus vaccine stabilizer containing no animal- derived component / В H Chun, Y.K. Lee, ВС Lee et al // Biotechnol. Lett. - 2004.-Vol.26.-P.807-8!2

90. Dhoot, NO. Microencapsulated liposomes in controlled drug delivery: strategies to modulate drug release and eliminate the burst effect / NO Dhoot, M.A. Wheatley // J. Pharm. Sci. - 2003. - Vol. 92. - P . 679-689.

91. Dielary fibre, physicochemical properties and their relationship to health / AD. Blackwood, J. Salter, P.W. Dettmar et al. // J. R. Soc. Health. - 2000. - Vol. 120. - P . 242-247.

92. Dongowski, G Influence of pectin structure on the nteractmn with bile acid under in vitro condition/G. Dongowski IIЪ. Lebensm. Unters Forsch. - 1995 - Bd. 201, N 4.-S. 390-398.

93. Duxbury, D.D Dietary fiber / D.D. Duxbury // Foos process (USA). - 1991.-Vol. 52 . - P . 136-140.

94. Effect of degree of esterification of peciin and calcium amount on drug release from pectin-based matrix tablets / S Sunglhongieen, P Sriamomsak, T. Pitaksuteepong et al. // AAPS Pharm. Sci. Tech. - 2004. - Vol. 5. - E9.

95. Effects of different levels of gum Arabic, low methylated pectin and xylanon in vitro digestibility of beta-lactoglobulm /J Mouecoucou, С Sanchez, C. Villaume et.al. // J. Dairy. Sci. - 2003. -Vol. 86. - P. 3857-3865.

96. Effect of fucoidan on fibroblast growth factor-2-mdiJced angiogenesis in vitro/S. Matou, D. Helley, D. Chabutetal. //Thromb. Res.-2002. -Vol. 106. - P. 213-221.

97. Emulsion strategies in the microencapsulation of cells: pathways to thin coherent membranes / A Leung, Y. Ramaswamy, P Munro et al. // Biotechnol. Bioeng. - 2005. - Vol. 92. - P. 45-53.

98. Endotoxm removal in some medicines and human serum albumin solution by affinity membranes / G.L. Wei, X.L. Liu, J.H. Li et al. // Se. Pu. - 2002. -Vol.20.-P. 108-114.

99. European convention for the protection of vertebrate animals used for experimental and other scientific purposes - Strasburg: Council of Europe, 1986 - 51 p

100. Evaluation of new small barium alginate microcapsules / A. Cappai, P. Petruzzo, G. Ruiu et al. II Int. J. Aruf. Organs. - 1995. - Vol. IS.-P. 96-102.

101. Falk, J.D. Exploratory studies of lipid-pectin interactions / J.D. Falk, J.J. Nagyvary //J.Nutr.-1982.-Vol. 112 - P 182-188

102. Feldman, HA. Mathematical theory of complex ligand-binding systems at equilibrium - some methods for parameter fitting / H.A. Feldman // Anal. Biochem. - 1972. - Vol. 48. - P . 317-338.

103. Findon, A. Transport studies for the sorption of copper ions by chitosan / A. Findon, G. McKay, H.S.Blair III. Environ. Sci. Health,- 1993. - Vol. A28. - P. 173-185.

104. Fucoidans from the brown seaweed Adenocysus urticulans extraction methods, antiviral activity and structural studies / N MA Ponce, C.A. Pujol, E.B. Damonte et al. // Carbohydr. Res. - 20O3 - Vol. 338 - P. 153-165.

105. Glicksman, M. Utilization of seaweed hydrocolloids / M Glicksman // Hydrobiology. - 1987. -Vol. 152. - P . 31-47

106. Gold and silver uptake and nanoprecipitation on calcium alginate beads / E. Torres, Y.N. Mata, M.L. Biazquez et al. // Langmuir. - 2005. - Vol. 21. -P. 7951-7958.

107. Gong, J P Theoretical analysis of the crosslirtkmg effect on the polyelectrolyte-surfactani interaction / J P Gong, Y. Osada // J. Phys Chem. - 1995 - Vol. 99. -P. 10971-10975.

108. Gonzalez, ME. Polysaccharides as antiviral agents Antiviral activity of carrageenan / ME Gonzales. В Alarcon, L. Carrasco // Antimicrob. Agents Chemother. - 1987. -Vol. 31. - P . 1388-1393

109. Gotoh, T, Adsorption of Си and Mn on covalently cross-linked alginate gel beads / T. Gotoh, K. Matsushima, К Kikuchi // Chemosphere. - 2004. - Vol. 55.-P. 57-64

110. Gupta, MN Immobilized metal affinity chromatography without chelating hgands purification of soybean trypsin inhibitor on zinc alginate beads / M.N Gupta, S.Jain, I. Roy //Biotechnol. Prog. - 2002. - Vol. 18.-P. 78-81

111. Harel, P. Sugar beet Ca-pectate gel as a cost-effective immobiltzed-cell matrix for metal biosorption / P Harel. L Mignot. G A. Junter // Meded. Rijksuniv Gent. Fak. Landbouwkd. Toegep. Biol. Wet. -2001. -Vol. 66. - P . 291-294.

112. Haug. A. Uronic acid sequence in alginate from different sources / A. Haug, В Larsen, О Smidsrod // Carbohydr Res. - 1974 - Vol. 32. - P. 217-225.

113. Heavy metal biosorption by gellan gum gel beads / N. Lazaro, AL Sevilla, S. Morales et al. // Water Res. -2003. -Vol. 37. - P. 2118-2126.

114. Heyraud, A. Physical and chemical properties of phycocolloids / A. Heyraud, M Rinaudo, C. Rochas // Introduction to applied phycology / ed. I. Akatsuka. The Hague: SPB Academic Publishing bv The Netherlands, 1990. - P. 151-176

115. Hipsley, EH Dietary fiber and pregnancy toxaemia/EH. Hipsley//Br. Med. J.-1953.-P. 420-422.

116. Inhibitory effects of Cladosiphon fucoidan on the adhesion of Helicobacter pylori to human gastric cells /H Shibata, I. Yakagi, M Nagaokaet al. // J. Nutr. Sci. Vitaminol. - 1999. -Vol. 45 - P 525-536.

117. Interaction of fucoidan with the proteins of the complement classical pathway / B. Tissot, B. Montdargenl. L. Chevolot et al. // Biochim. Biophys. Acta. -2003-VoI. I65I.-P.5-16.

118. Interaction study between the copper II ion and constitutive elements of chitosan structure by DFT calculation / R. Terreux, M. Domard, С Viton, A. Domard // Biomacromolecules. - 2006. - Vol. 7. - P. 31-37.

119. Intranasal delivery of chitosan-DNA vaccine generates mucosal SIgA and anti-CVB3 protection / W. Xu, Y. Shen, Z. Jiang et al. // Vaccine. - 2004. - Vol. 22.-P 3603-3612

120. In vitro study of alginate-chitosan microcapsules: an alternative to liver cell transplants for the treatment of liver failure / T. Haque, H Chen. W Ouyang et al. //Biotechnol- Lett. - 2005 - Vol. 27. - P . 317-322.

121. Jacyna, MR. Comparative study of four antacids / MR. Jacyna, E.J. Boyd, K.G. Wormsley // Postgrad. Med. J - !984. - Vol. 60. - P . 592-596

122. Jain, S. A smart bioconjugate of trypsin with alginate / S. Jain, I. Roy, M.N Gupta //Artif. Cells Blood Substit. Immobil Biotechnol.-2004.-Vol. 32.- P. 325-337.

123. Jalili, T. Nutraceulical roles of dietary fiber / T. Jalili, R.E.C. Wildman, P M Medeiros // J. Nutraceuticals Functional. Med. Foods. - 2000. - Vol. 2. - P. 19-34.

124. Jodra, Y Ion exchange selectivities of calcium alginate gels for heavy metals / Y. Jodra, F Mijangos // Water Sci. Technology. - 2001. - Vol. 43. - P. 237-244.

125. Jose, M.V Alternative interpretation of unusual Scatchard plots: contribution of interactions and heterogeneity / M.V Jose, С Larralde // Math. Biosci- 1982.-Vol. 58. - P . 159-170.

126. K(+) and Na (+) effects on the gelation properties of kappa-carrageenan / MR. Mangione, D Giaeomazza, D Bulone et al // Biophys. Chem. - 2005. - Vol. 113.-P. 129-135.

127. Kaminski, W Application of chitosan membranes in separation of heavy metal ions / W Kaminski, Z. Modrzejewska // Sep. Sci. Technol - 1997. - Vol. 32. - P . 2659-2666

128. Kimura, Y. Effects of soluble sodium alginate on cholesterol excretion and glucose-tolerance in rats / Y. Kimura, K. Watanabe, H Okuda // J. Ethnopharmacol. -1996. -Vol. 54 - P. 47-54

129. Kinetics and mechanism of drag-release from calcium alginate membrane coated tablets / H.R. Bhagat, R N. Mendes, E. Nathiowitz et al // Drag Devel. Ind. Phann. - 1994. - Vol. 20. - P. 387-394.

130. Klotz, J.M. Numbers of receptor sites from Scatchard graphs facts and fantasies / J.M. Klotz // Science - 1982. - Vol 217. - P . 1247-1249.

131. Kofuji, K. Sustained insulin release with biodegradation of chitosan gel beads prepared by copper ions /K. Kofuji, Y. Murata, S Kawashima // Int. J. Pharai- 2005. -Vol 303 - P . 95-103.

132. Kritchevsky, D In vitro binding properties of dietary fibre / D. Kntchevsky//Eur. J. Clin nutrition- 1995,- Vol. 49, Suppl 3.-P. 113-115.

133. Lairon, D Review: Dietary fiber: effects on lipid metabolism and mechanisms of action / D. Lairon // Eur J Clin Nutrition. - 1996. - Vol. 50. - P. 125-133.

134. Lattner, D. 13C-NMR study of the interaction of bacterial algmate with bivalent cations / D. Lattner. H.C. Fiemmmg, С Mayer // Int. J. Biol Macromol. - 2003.-Vol.33.-P 81-88

135. Lee, K.Y. Survival of Bifidobacterium longum immobilezedin calcium alginate beads in simulated gastric juices and bile salt solution / K.Y Lee, T.R. Heo // Appl Environ. Microbiol. - 2000. - Vol. 66- - P. 869-873

136. Lewinska, D A new pectin-based material for selective LDL-cholesterol removal / D Lewinska, S Rosinski, W Piatkiewicz // Artif. Organs. - 1994. - Vol. 18.-P. 217-222.

137. Li, N. Enhanced and selective adsorption of mercury ions on chitosan beads grafted with poly aery I amide via surface-initiated atom transfer radical polymerization / N. Li, R. Bai, С Liu // Langmuir. - 2005. - Vol 21. - P. 11780- 11787

138. Light, K.E Analyzing nonlinear Scatchard plots / K.E. Light // Science. -1984.-Vol. 223.-P. 76-77.

139. Lipid-alginate interactions render changes in phospholipids bilayer permeability / S. Cohen, M.C. Bano, M. Chow et al. // Biochim. Biophys Acta. - 1991. -Vol. 1063.-P. 95-102.

140. Lofgren, С Microstructure and Theological behavior of pure and mixed pectin gels / С Lofgren, P Walkenstrom, AM Hermansson // Biomacromolecules. -2002.-VOI.3 - P . 1144-1153

141. Mass spectrometry analysis of the oligomeric Clq protein reveals the В chain as the target of trypsin cleavage and interaction with rucoidan / В Tissot, F Gonnet, A Iborra et al // Biochemistry. - 2005. - Vol. 44. - P. 2602-2609.

142. McClure, MO investigations into the mechanism by which sulfated polysaccharides inhibit HIV infection in vitro / MO. McClure, J.P. Moore, D.F. Blanc // AIDS Res. Hum. Retrovir. - 1992. - Vol. 8 - P. 19-26.

143. McKay, G. Equilibrium studies for the sorption of metal ions onto chitosan /G. McKay, H.S. Blair, A. Findon // tod. J. Chem. - 1989. - Vol. 28A. - P. 356-360

144. Medina, MB Binding interaction studies of the immobilized Salmonella lyphimunu with extracellular matrix and muscle proteins, and polysaccharides / MB Medina // Int. J. Food Microbiol. - 2004. - Vol. 93. - P. 63-72.

145. Metal selectivity of Sargassum spp- and their alginates in relation to theu alpha-L-guluronic acid content and conformation / Т.Д. Davis, F Llanes. В Volesky et al. // Environ. Sci. Technol. - 2003. - Vol. 37. - P. 261-267.

146. Мешпег, V Structure of aggregating kappa-carrageenan fractions studied by light scattering / V Meunier, T. Nicolai. D. Durand // Int. J. Biol. Macromol.-2001.-Vol.28.-P. 157-165.

147. Mulloy, В The specificity of interactions between proteins and sulfated polysaccharides / B. Mulloy//An. Acad. Bras. Cienc.-2005. - Vol 77. - P . 651- 664

148. Multilayer-assembled microchip for enzyme immobilization as reactor toward low-level protein identification / Y Liu, H. Lu, W. Zhong et al. // Anal Chem. - 2006. -Vol. 78. - P. 801-808.

149. Nauss, J.L The binding of micellar lipids to chitosan / J.L Nauss, JX. Thompson. J. Nagyvary //Lipids - 1983 -Vol. 18. - P . 714-719.

150. New loading process and release properties of insulin from polysaccharide microcapsules fabricated through layer-by-layer assembly / S Ye, С Wang, X. Liu et al. //J. Control. Release. - 2006. - Vol. 112. - P 79-87.

151. Okuzaki, H. Effect of hydrophobic interaction on the cooperative binding of a surfactant to a polymer network / H. Okuzaki. Y. Osada // Macromolecules. - 1994. - Vol. 27. - P. 502-506.

152. Onal. S. Encapsulation of insulin in chitosan-coated alginate beads: oral therapeutic peptide delivery / S. Onal. F Zihnioglu // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. Biotechnol. - 2002. - Vol. 30. - P. 229-237.

153. Onseyen, E. Metal recovery using chitosan /E. Onsayen, 0. Scaugrud // J Chem Technol Biotechnol. - 1990. - Vol. 49. - P. 395-404

154. Oversulfation of fucoidan enhances its anti-angiogenic and antitumor activities / S. Koyanagi, N Tanigawa, H. Nakagawa et al. // Biochem. Pharmacol -2003-Vol. 65 - P . 173-179

156. Palkama, Т. Induction of interleukin-1 production by ligands bmding to the scavenger receptor in human monocytes and the Thp-I cell-ime / T Palkama // Immynology. - 1991. -Vol. 74 - P . 432-438

157. Park, J.K. Reusable biosorbents in capsules from zoogloea ramigera cells for cadmium removal / J.K. Park, Y.B Jm. H.N. Chang // Biotechnol. Bioeng. -1999.-Vol. 63.-P. 116-121.

158. Pereira, MS Structure and anticoagulant activity of sulfated fucans / M.S. Pereira, B. Mallow, P. A.S. Mourao // J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274. - P 7656-7667.

159. Porous chitosan-gelatin scaffold containing plasmid DNA encoding transforming growth facior-betal for chondrocytes proliferation / T. Guo. J. Zhao, J. Chang et al. // Biomaterials. - 2006. - Vol. 27. - P. 1095-1103.

160. Preparation and improvement of release behavior of chitosan microspheres containing insulin / L Y Wang, Y.H. Gu, Z.G Su et al // Int. J. Pharm.-2006.-Vol. 311.-P. 187-195.

161. Procion Green H-4G immobilized poly{hydroxyethylmelhacrylate/chitosan) composite membranes for heavy metal removal / О Gene, L. Soysal. G Bayramoglu et al // J. Hazard Mater. - 2003. - Vol. 97 - P . 111-125.

162. Properties of an alginate gel bead containing a chitosan-drug salt / Y Murata, D. Hrrai, K. Kofuji et al. // Biol. Pharm. Bull. - 2004. - Vol. 27 - P. 440- 442.

163. Rae, LB. Removal of metals from aqueous solutions using natural chitinous materials / LB Rae, S.W Gibb // Water Sci. Technol. -2003. - Vol. 47. - P 189-196 45

164. Rasmussen, MR. Numerical modeling of insulin and amyloglucostdase release from swelling Ca-alginate beads / M.R. Rasmussen, T Snabe, L.H. Pedersen // J. Cortrol. Release. - 2003. - Vol. 91. - P. 395-405.

165. Reduction of Cr(Vl) by immobilized cells of Desulfovtbrto vulgaris NCIMB 8303 and Micobactenum sp NCIMB 13776 / A.C. Humphries, K.P. Nott, 1..D. Hall et al. // Biotechnol. Bioeng. - 2005. - Vol. 90. - P. 589-596.

166. Removal and recovery of copper (II). chromium (III), and nickel (II) from solutions using crude shnmp chitin packed in small columns / V.W.D. Chui, K.W Мок, C.Y. Ng et al. //Environ. Int. -1996 - Vol. 22 - P 463-468

167. Removal of hexavalent chromium from wastewater using a new composite chitosan biosorbent / V.M. Boddu, K. Abbun, J.L. Talbott et al. // Environ. Sci. Technol. - 2003. - Vol. 37. - P. 4449-4456

168. Retention and release behavior of insulin in chitosan gel beads /K. Kofiiji, H. Akamine. H. Oshirabe et al. // J. Biomater. Sci. Polym. Ed. - 2003. - Vol-14. - P 1243-1253.

169. Rose, HE. Dietary fibres and heavy metal retention in the rat / H.E. Rose, J. Quarterman // Environ. Res. - 1987. - Vol. 42. - P. 166-175.

170. Sahin, F A novel matrix for the immobilization of acetylcholinesterase / F. Sahin, G Demirel, H. Tumturk // Int. J. Biol. Macromol. - 2005. - Vol. 37. - P. 148-153

171. Salgado, L.T Localization of specific monosaccharides in cells of the brown alga Padina gymnospora and the relation to heavy-metal accumulation / L T Salgado, L.R. Andrade, G.M. Filho // Protoplasma. - 2005 - Vol. 225. - P. 123- 128.

172. Scathard, G. The attraction of protein for small molecules and ions / G. Scathard // Ann- N. Y. Acad Sci. -1949. - Vol. 51. - P. 660-672

173. Schmuhl. R Adsorption of Си (И) and Cr (II) ions by chitosan: Kinetics and equilibrium studies / R. Schmuhl, H.M. Krieg, K. Keizer / Water S. A. - 2001. -Vol.27.-P 1-7

174. Son, H.S. A new in vitro assay of cholesterol adsorption by food and microbial polysaccharides / H.S. Soh, C.S. Kim, S.P. Lee // J. Med. Food. - 2003. - Vol. 6.-P. 225-230.

175. Sol-Gel transition behavior of pure iota-carrageenan m both salt-free and added salt states / K.S. Hossain. К Miyanaga, H. Maeda et al. // Biomacromolecules. -2001.-Vol. 2. - P 442-449

176. Solvent effects on the molecular properties of pectin / ML Fishman, H.K. Chau, F Kolpak, J. Brady // J. Agric Food Chem. - 2001. - Vol. 49 - P. 4494-4501.

177. Steigman, A. All Dietary Fiber is fundamentally functional / A. Steigman // Cereal foods world - 2003 - Vol- -48. - P. 128-132.

178. Story, J.A. Bile salt: in vitro studies with fibre components /J.A. Story, S.L. Lord //Scand J. Gastroenterol.-1987.-Vol. 22, Suppl. 129.-P. 174-180.

179. Sublingual delivery of insulin effects of enhancers on the mucosal lipid fluidity protein conformation, transport and m vivo hypoglycemic activity / C.Y. Cui, W.L. Lu, L. Xiao et al. // Biol. Pharm. Bull. - 2005. - Vol. 28. - P. 2279- 2288

180. Sulphated glycoconjugates are powerful inhibitors of spermatozoa binding to the vitelline envelope in amphibian eggs / M. Caputo, S Riccio, P Paglierucci et al. // Biol. Cell. - 2005 - Vol. 97. - P . 435-444.

181. Synowiecki, J. Production, properties, and new applications of chitin and its denvatives / J. Synowiecki, N.A. Al-Khateeb // Crit. Rev. Food Sci. Nutr. - 2003.-Vol.43.-P. 145-171

182. Takagi, 1. Application of alginate gel as a vehicle for liposomes. I. Factors affecting the loading of drag-containing liposomes and drag release / I. Takagi. H. Shimizu, T. Yoisuyanagi II Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). - 1996. - Vol. 44.-P. 1941-1947

183. Talukder, R Gastroretentive delivery systems: hollow beads /R. Talukder, R. Fassihi // Drug Dev. lnd. Pharm. - 2004. - Vol. 30. - P. 405-412.

184. Tang, M. Bioadhesive oesophageal bandages: protection against acid and pepsin injury / M Tang, P. Dettmar, H Batchelor // Int. J. Pharm. - 2005. - Vol.292 - P . 169-177.

185. Taqieddin. E Enzyme immobilization in novel algmate-chitosan core- shell microcapsules / E Taqieddin, M Amiji//BLomaterials. -2004 -Vol. 25. - P . 1937-1945.

186. Thakur. BR. Chemistry and uses of pectin / BR. Thakur, R.K. Singh, A.K. Handa // Food science and nutrition. -1997. - Vol. 37. - P . 47-73.

187. Thibault, J F Pectins: their origin, structure and fuction / J F. Thibault, M.C Ralet // McCleary D.V. and Prosky L. (eds.) Advanced dietary fibre technology -Oxford: Blackwell Sci.Ltd. UK. 2001. - P . 369-378.

188. Tissot. B. Interaction of the CI complex of complement with sulfated polysaccharide and DNA probed by single molecule fluorescence microscopy / B. Tissot, R. Daniel, С Place // Eur J. Biochem. - 2003. - Vol. 270. - P. 4714-4720.

189. Tsuchiya, T. New-plot showing the existence of cooperahvity, anticooperativity and an arbitrary value of the neighborexclusion parameter tn systems of ligand-binding to linear biopolymers / T Tsuchiya // Biopolymers. - 1983.-Vol 22.-P. 1967-1978.

190. Tveter-Gallagher, E. Biological properties of carrageenans / T. Tveter- Gallagher, AC Mathieson // Biotechnology of marine polysaccharides Washongton, New York, London: Hemisphere publishing corp, 1985 - P . 413-428.

191. Use of chitosan for selective removal of beta-lactoglobulin from whey / T. Casal, A. Montilla, F.J. Moreno et al. // J. Dairy. Sci. - 2006. - Vol. 89. - P. 1384-1389.

192. Usov. A.I. Sulfated polysaccharides of the red seaweeds / A.I. Usov // Food Hydrocolloids - 1992 - Vol. 6 - P. 9-23.

193. Velings. N.M. Protein adsorption in calcium alginate gel beads / N.M. Veling. MM. Mestdagh // J. Bioactive Comp Polymers. - 1994. - Vol. 9. - P. 133- 141

194. Voragen, A.G.J. Chemistry and enzymology of pectins / A.G.J. Voragen, G Beidman, H. Schols // McCleary В V . Prosky L. (eds.) Advanced dietary fibre technology -Oxford: Blackwel! Sci. Ltd..UK, 2001. - P . 379-398.

195. Wang. С Comparison of effects of two kinds of soluble algae polysaccharide on blood lipid, liver lipid, platelet aggregation and growth in rats / CI Wang, G. Yang //ChungHua. YuFang I. Hsueh. Tsa. Chin.- 1997. - Vol. 31. - P . 342-345.

196. Wang, K. Algtnate-konjac glucomannan-chitosan beads as controlled release matrix / K/ Wang, Z. He // Int. J. Pharm. - 2002. - Vol. 244. - P. 117-126.

197. Wang, YC Micropatteming of protein and mammalian cells on biomatenals/ YC. Wang, C.C. Ho //FASEB J. -2004.-Vol. 18. -P.525-527.

198. Wasser. S P. Medicinal mushrooms as a source of antitumor and lmmunomodulating polysaccharides / S.P. Wasser // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2002. - Vol. 60. - P. 258-274.

199. Wu, J.M. Immobilized chitosan as a selective adsorbent for the nickel removal in water sample / J.M. Wu, Y.Y. Wang // J. Environ. Sci. - 2003. - Vol. 15 - P . 633-638.

200. Xi, F. Macroporous chitosan layer coated on non-porous silica gel as a support for metal chelate affinity cliromatographic adsorbent / F. Xi, J. Wu // J. Chromatogr. - 2004. - Vol. 1057 - P 41-47

201. Yaniz, J.L. In vitro development of bovine embryos encapsulated in sodium alginate / J.L. Yaniz, P Santolaria, F Lopez-Gatius // J Vet. Med. A. Physiol. Palhol. Clin. Med. - 2002. - Vol. 49. - P. 393-395.

202. Yihua, Y.U. A new low density lipoprotein (LDL) adsorbent / Y.U. Yihua, HE. Binglin // Artif. Cells Blood Substit Immobil Biotechnol. - 1997. - Vol. 25.-P. 445-450.

203. Zhang, G. Effects of sulfated polysaccharides on heat-induced structural changes in beta-lactoglobulin / G Zhang, E.A. Foegeding, CC Hardin // J. Agric. Food Chem -2004.-Vol. 52. - P . 3975-3981.

204. Zhang, Y. Factors affecting the removal of selected heavy metal using a polymer immobilized Sphagnum moss as a biosorbent / Y. Zhang. С Banks // Environ. Technol. - 2005. - Vol 26. - P. 733-743.