Бактерицидные свойства низкотемпературной плазмы in vitro и in vivo тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Сысолятина, Елена Владимировна

• Сысолятина, Елена Владимировна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Сысолятина, Елена Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Бактериальные возбудители хронических инфекционных заболеваний

1.1.2. Основные возбудители раневых инфекций Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus

1.1.3. Chlamydia trachomatis - внутриклеточный паразит, вызывающий хронические инфекционные болезни

1.2. Физико-химические методы воздействия, применяющиеся в медицине

1.3. Низкотемпературная плазма и ее использование в

медицине

1.3.1. Воздействие низкотемпературной плазмы и её компонентов

на биологические объекты

1.3.2. Плазменные источники для медицинского применения

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Бактериальные штаммы и условия культивирования

2.2. Условия выращивания и методы учета бактериальных биопленок

2.3. Условия выращивания и методы учета внутриклеточных бактерий

2.4. Культивирование инфузорий и условия их обработки НТП

2.5. Условия выращивания эукариотических клеток

2.6. Источники НТП, использованные в работе

2.6.1. СВЧ-генератор аргоновой плазмы

2.6.2. Сегнетоэлектрический реактор воздушной плазмы атмосферного давления

л J

2.6.3. Коронный разряд в воздухе атмосферного давления

2.7. Условия обработки НТП биологических объектов

2.7.1. Условия инактивации индивидуальных

микроорганизмов

2.7.2. Условия инактивации НТП биопленок

2.8. Моделирование раневой инфекции и условия обработки НТП раневых поверхностей

2.9. Способы изучения эффекта отдельных компонентов НТП, участвующих в инактивации микроорганизмов

2.9.1. СВЧ-источник аргоновой плазмы

2.9.2. Коронный разряд

2.10. Статистические методы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Определение бактерицидной активности НТП in vitro

3.1.1. Изучение индивидуальной чувствительности патогенных бактерий к НТП

3.1.2. Изучение эффекта НТП на бактерии в биопленках

3.1.3. Оценка активности НТП в отношении внутриклеточных

77

паразитов на примере С. trachomatis

3.1.4. Изучение токсического действия аргоновой плазмы на

81

эукариотические клетки

3.1.5. Эффект НТП на внутриклеточный статус эукариотических клеток

3.2. Изучение бактерицидного и ранозаживляющего эффекта различных источников низкотемпературной плазмы in vivo

3.3. Изучение вклада различных компонентов плазмы в бактерицидный эффект

3.3.1. Определение вклада ультрафиолетового облучения в общий бактерицидный эффект аргоновой плазмы

3.3.2. Определение чувствительности патогенных бактерий к воздействию различных компонентов плазмы положительного и отрицательного коронного разряда в воздухе

3.3.3. Сравнение воздействия положительного и отрицательного коронного разряда на грамположительные и

грамотрицательные бактерии

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Нетермические антимикробные эффекты НТП в отношении патогенных бактерий в условиях in vitro

4.2. Воздействие НТП на эукариотические клетки и бактерицидный эффект НТП в отношении внутриклеточных бактерий

4.3. Применение НТП в терапии инфицированных ран

4.4. Вклад различных компонентов плазмы в бактерицидный эффект

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

НТП - низкотемпературная плазма

СВЧ - сверхвысокочастотное электромагнитное поле

СЭГ - сегнетоэлектрический генератор

УФ - ультрафиолет

УФО - ультрафиолетовое облучение

УВЧ - ультравысокочастотное электромагнитное поле

К - кельвин ( 1 °С = К-273,15)

NOx - оксиды азота

Ох - радикалы кислорода

ROS - реактивные кислородные частицы (reactive oxygen species)

RNS - реактивные азотные частицы (reactive nitrogen species)

FITC - флюоресцинизотиоцианат (fluorescein isothiocyanate)

GFP - зеленый флюоресцирующий белок (green fluorescent protein)

ЭТ - элементарные тельца Chlamydia trachomatis

PT - ретикулярные тельца Chlamydia trachomatis MRSA - метициллин-устойчивый стафилококк

Аг - антиген

МОМР - основной белок наружной мембраны (major outer membrane

protein)

АДФ - аденозиндифосфат

НАД - никотинамиддинуклеотид

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Бактерицидные свойства низкотемпературной плазмы in vitro и in vivo»

ВВЕДЕНИЕ

Инфекционные заболевания продолжают играть важнейшую роль в структуре патологических состояний здоровья человека, хотя в инфекционной заболеваемости в последние годы наблюдается сдвиг в сторону увеличения доли хронических инфекционных процессов. С одной стороны, это связано со старением популяции, особенно в развитых странах, высокой распространенностью иммунодефицитов различной этиологии, стертым течением ряда заболеваний и отсутствием своевременного адекватного лечения (Руководство по медицинской микробиологии. Под ред. Лабинской A.C., 2013). С другой стороны, за десятилетия использования антибиотиков многие микроорганизмы приобрели устойчивость к этим препаратам, а способность бактерий образовывать биопленки, в том числе на раневых поверхностях и изделиях медицинского назначения, в которых они намного устойчивее к любым воздействиям, еще более усложняет задачу по их уничтожению (Романова Ю.М. и др., 2011, Пушкарева В.И. и др., 2011). В связи с этим остается актуальным поиск новых методов, обладающих бактерицидным эффектом (Шагинян И.А., Чернуха М.Ю., 2005).

Физико-химические методы воздействия давно и успешно применяются в медицине. Хорошо известные кварцевые лампы, испускающие ультрафиолетовый свет, используются для стерилизации помещений и обработки органов ротоглотки, являются весьма эффективными, однако чрезмерные дозы ультрафиолета опасны для человека, т.к. увеличивают вероятность развития злокачественных опухолей (информационный бюллетень ВОЗ, 2009). Другим широко применяемым методом является использование озона, обладающего высокой бактерицидной активностью, однако в высоких концентрациях озон токсичен для человека. Использование электромагнитных полей стимулирует заживление, снимает воспаление (Kubasova Т. et al., 1995), однако антибактериальным действием не обладает. Таким образом, используемые методы физико-химического воздействия, обладающие микробицидным эффектом, в высоких дозах токсичны для

человека, а неопасные иммуностимулирующие физические методы не обладают антибактериальной активностью (Улащик B.C., 2006).

Одним из сравнительно новых физико-химических методов, объединяющим в себе одновременно и действие УФ, и обработку поверхностей озоном и оксидом азота, и воздействие электромагнитам полем, является неравновесная низкотемпературная плазма (НТП) (Akyshev Y. et al., 2008, Laroussi M. et al., 2012). При этом НТП лишена основного недостатка других методов физического воздействия - высоких концентраций токсических компонентов.

НТП - это поток газа, ионизированного с помощью электромагнитного излучения при атмосферном давлении и температуре окружающей среды. Основ-ной вклад в бактерицидную активность НТП вносят ионы, свободные радикалы и возбужденные молекулы, а также ультрафиолет (Morfill G. et al., 2009). При-менение холодной плазмы в медицине связано с ее нетермическими эффектами, изучение которых в приложении к медицинским мишеням насчитывает порядка десяти лет. До настоящего времени являются предметом изучения эффекты НТП на различные биологические мишени, а также значение компонентов НТП и синергизма между ними в этих эффектах. До конца неясны сферы применимости НТП. Так, был показан микробицидный эффект НТП на ряде условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (Lee et al., 2006; Venencia et al., 2009), однако до начала наших исследований задачи сравнения чувствительности к НТП разных штаммов одного вида микроорганизмов не ставилось. Первая работа, продемонстрировавшая чувствительность к НТП бактерий в составе биопленок, была опубликована в 2009 г. (Joshi et al., 2009), однако детали процесса уничтожения бактерий в биопленках не были изучены. Низкие концентрации токсических компонентов (УФ, озона и свободных радикалов) позволяют предположить возможность применения НТП для непосредственной деконтаминации биологических объектов, в том числе кожных покровов и ран (Isbary et al., 2010), однако информации, дающей

возможность оценить безопасность воздействия НТП в отношении эукариотических клеток и макроорганизма в целом, было недостаточно.

Для получения более полной картины воздействия НТП на биологические объекты было необходимо провести комплексные исследования, сравнивающие эффекты различных источников на одни и те же модели, поскольку НТП, генерируемая разными источниками, сильно отличается по своим характеристикам. В целом, можно выделить два типа источников НТП: прямого и непрямого действия, отличающихся по наличию/отсутствию УФ, концентрации незаряженных активных частиц, концентрации заряженных атомов и ионов, воздействию электромагнитными полями (Friedman et al., 2009). Биологические эффекты для источников прямого и непрямого действия значительно разнятся, однако механизмы, лежащие в основе такой разницы, до конца не поняты.

В связи с вышеизложенным, в данной работе была поставлена следующая цель: оценить бактерицидные свойства низкотемпературной плазмы прямого и непрямого действия в условиях in vitro, а также на моделях бактериальных биопленок и инфицированных ран.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• определить в условиях in vitro бактерицидную активность низкотемпературной плазмы (НТП) прямого и непрямого действия в отношении спектра патогенных микроорганизмов, вызывающих хронические инфекционные заболевания;

•определить бактерицидный эффект НТП на бактерии, находящиеся в биопленках;

• определить возможность использования НТП для воздействия на внутриклеточных инфекционных агентов на модели Chlamydia trachomatis;

•оценить токсичность плазменного воздействия на эукариотические клетки, а также оценить изменения в физиологии эукариотических клеток;

• в эксперименте на лабораторных животных определить эффективность применения НТП как средства терапевтического воздействия на инфицированные раны;

• установить вклад отдельных компонентов плазмы и их комбинаций в бактерицидный эффект.

Научная новизна:

В представленной работе впервые:

• Установлены различия в чувствительности к низкотемпературной плазме для микроорганизмов, относящихся к разным систематическим группам, и выявлены различия в чувствительности к НТП между различными штаммами, принадлежащими к одному виду;

• Показано, что бактерицидный эффект НТП на бактерий, находящихся в составе биопленок, зависит от толщины биопленки и уменьшается по мере глубины залегания бактерий;

• Установлено, что НТП обладает бактерицидным действием в отношении внутриклеточного паразита С. trachomatis на разных этапах его жизненного цикла, воздействуя как на метаболически неактивные элементарные тельца, так и делящиеся ретикулярные тельца внутри хламидийных включений, при этом НТП не оказывает выраженного токсического эффекта на эукариотические клетки-хозяева;

• Показано на модели инфицированных ран лабораторных мышей, что однократная обработка низкотемпературной плазмой снижает обсемененность раневых поверхностей в 10-100 раз, а курс из 2-3 обработок ускоряет заживление ран;

• Разделены компоненты плазменного факела и экспериментально доказан синергизм их действия.

Практическое значение работы:

На основании полученных в ходе выполнения диссертационной работы результатов написаны и одобрены на Совете по внедрению научных достижений в практику ФГБУ «НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи» методические рекомендации:

1 - «Оценка физических воздействий (электромагнитного излучения, низкотемпературной плазмы) на жизнеспособность внутриклеточных паразитов и клетки-хозяина» (протокол №15 от 14 июля 2011 г).

2 - «Применение неизотермической «холодной» плазмы атмосферного давления в отношении патогенных бактерий» (протокол №17 от 27 октября 2011 г).

Доработана программа тематического цикла усовершенствования врачей "Молекулярно-генетические методы в диагностике инфекционных заболеваний" путем включения пяти дополнительных лекций по темам: глобальные сигнальные и метаболические пути, активизирующиеся в процессе хронической инфекции: новые находки и принципы контроля; новые подходы к элиминации биопленок: новые физические и химические методы и их сочетание; контролируемые свободно-радикальные механизмы и их применение для деконтаминации биологических тканей; принципы воздействия низкотемпературной газовой плазмы на биологические структуры; использование физических подходов в терапии инфекционных заболеваний и контроле распространения инфекционных агентов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Низкотемпературная плазма обладает неспецифическим бактерицидным действием в отношении патогенных бактерий, в том числе, в отношении бактерий, входящих в состав биопленок.

2. Воздействие низкотемпературной плазмы на внеклеточные и внутриклеточные формы С. trachomatis нарушает способность облигатного паразита инфицировать эукариотические клетки и прерывает нормальное течение цикла внутриклеточного размножения.

3. Низкотемпературная плазма не вызывает некроза эукариотических клеток in vitro

4. Низкотемпературная плазма позволяет деконтаминировать раневые поверхности и ускоряет заживление ран на модели инфицированных ран лабораторных мышей.

5. Бактерицидный эффект плазмы обусловлен синергизмом действия её компонентов (УФ, заряженных и нейтральных частиц, электрических полей).

Апробация работы:

Результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на международных конференциях: 3d International Conference for Plasma Medicine (ICPM-3, Грайсвальд, Германия, 2010), NATO Science Advanced Research Workshop on Plasma for Bio-Decontamination, Medicine and Food security (Ясно, Словакия, 2011), 39th International Conference on Plasma Science (Эдинбург, Великобритания, 2012), 1st and 2nd Young Professional Workshops on Plasma Medicine (Германия, 2012, 2013), Plasma Medicine Workshop (Ринберг, Германия, 2010,2011, 2012).

Апробация работы состоялась 17.10.2013 на научной конференции отдела природноочаговых инфекций и отдела медицинской микробиологии ФГБУ «НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи» Минздрава России.

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 4 статьи, 2 из них в зарубежных изданиях, рекомендованных ВАК, а также 4 тезисов. Результаты использовались для написания главы в книге Plasma Decontamination, Medicine and Food Security (Springer, 2012).

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, главу результатов исследований, обсуждение результатов, выводы и список литературы, включающий 22 работы отечественных и 76 зарубежных авторов. Работа содержит 30 рисунков и 6 таблиц.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

За последние 30-40 лет структура инфекционной патологии человека претерпела значительные изменения, выражающиеся в увеличении доли хронических процессов в общей заболеваемости. Это изменение связано с ростом численности населения с различными видами иммунодефицита, у которого даже условно-патогенные микроорганизмы могут вызывать тяжело протекающие заболевания. Приобретенные нарушения иммунного ответа связаны с пожилым возрастом, что с учетом старения населения является серьезной проблемой для развитых стран; с сопутствующими заболеваниями (злокачественными новообразованиями, лейкозами, ВИЧ-инфекцией); применением иммуносупрессивной терапии. Протекание некоторых инфекционных процессов без ярко выраженных клинических признаков, как, например, при урогенитальном хламидиозе у женщин, приводит к тому, что пациент остается без адекватного антимикробного лечения на ранних сроках инфекции, что также способствует переходу острой формы в хроническую.

Факторами, уменьшающими эффективность антимикробной терапии являются:

- образование микроорганизмами биопленок, внутри которых бактерии устойчивы к высоким дозам антибиотиков. Прекрасной средой для колонизации являются используемые в медицинской практике искусственные протезы, клапаны, сосуды, катетеры;

- повсеместное использование антибиотиков широкого спектра действия, что способствует распространению антибиотикоустойчивых штаммов среди различных патогенов;

- внутриклеточный паразитизм, при котором паразит защищен от различных воздействий, находясь внутри клетки-хозяина.

К микроорганизмам часто вызывающим хронические инфекционные заболевания, относятся такие возбудители раневых инфекций, как Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa, а также внутриклеточный паразит, вызывающий хламидиозы человека, Chlamydia trachomatis.

1.1. Бактериальные возбудители хронических инфекционных заболеваний.

1.1.2. Основные возбудители раневых инфекций Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus.

Род Pseudomonas объединяет около 200 видов, все представители -прямые или изогнутые грамотрицательные палочки, средние размеры которых колеблются в пределах 0,5-1,0 х 1,5-5,0мкм. (Kiska D.L., 2003). Аэробы, подвижны, спор не образуют. Клинические изоляты являются оксидазоположительными (за исключением P.luteola, P.oryzihabitans) и каталазоположительными, а также растут на агаре МакКонки как лактозонегативные колонии. Большинство видов разлагают глюкозу окислением и переводят нитраты в нитриты или в нитрогенный газ. Отдельные виды имеют характерную морфологию колоний или пигментацию. Что касается источников питания, то псевдомонады -универсалы, различные виды псевдомонад способны утилизировать различные простые и сложные карбонгидраты, спирты и аминокислоты, как источники углерода. Определённые виды могут делиться при 4°С, но большинство являются мезофильными с оптимальной температурой выращивания между 30 -37° С.

Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) - основной возбудитель инфекционных поражений человека, вызываемых псевдомонадами. Распространена повсеместно, в воде может выживать до года при температуре 37°С. Иногда входит в состав нормальной микрофлоры человека. Риск развития инфекции, вызванной синегнойной палочкой,

существенно возрастает у больных с нарушениями барьерных систем и факторов резистентности. Инфицирование P.aeruginosa вызывает до 15-20% всех внутрибольничных инфекций, считается причиной 20-25% гнойных хирургических инфекций и первичных грамотрицательных бактериемий. Часто синегнойную инфекцию наблюдают у больных с ожогами, заболеваниями мочевого пузыря, особенно у пациентов, длительно получающих антибиотики, что обусловлено выраженной устойчивостью возбудителя.

Патогенное действие Р .aeruginosa обусловлено образованием веществ, проявляющих свойства экзотоксинов, и высвобождением эндотоксинов при гибели и распаде бактериальных клеток.

К эпителию слизистых P. aeruginosa прикрепляется благодаря фимбриям и полисахариду альгинату, из которого состоит слизистая капсулоподобная оболочка бактерий. Рецепторы к этим адгезинам найдены, в частности, на эпителиальных клетках трахеи и на муцине, секретируемом трахеей и бронхами. Поверхностные компоненты синегнойной палочки, в том числе альгинат и липополисахарид, защищают бактерию от опосредованного антителами и комплементом лизиса, опсонизации и фагоцитоза (Breidenstein, E.B. et al., 2011)

P. aeruginosa выделяет во внешнюю среду ряд ферментов, в том числе щелочную протеазу, эластазу, фосфолипазу, цитотоксин, экзотоксин А и экзотоксин S. Эти ферменты разрушают ткани макроорганизма и создают условия, способствующие дальнейшему размножению бактерий и их внедрению. На фоне ослабленного иммунитета, особенно при глубокой нейтропении, высок риск проникновения микроорганизма в кровоток и его гематогенной диссеминации.

Большинство выделенных у больных штаммов Р. aeruginosa вырабатывают экзотоксин А, подобный дифтерийному токсину. Он

подавляет синтез белка в клетках млекопитающих, катализируя перенос АДФ-рибозильной группы с НАД на фактор элонгации 2 . В результате происходит инактивация фактора элонгации 2, без которого невозможно наращивание полипептидной цепи. Экзотоксин А обладает как местным, так и системным действием. In vitro он проявляет цитотоксическое действие, in vivo - некротизирующее (Wolf, P. et al., 2009).

Основными антигенами P. aeruginosa являются соматический антиген, О-Аг, и жгутиковый антиген, Н-Аг (Lavoie, E.G. et al., 2011). О-антигенный комплекс синегнойной палочки — сложный макромолекулярный агрегат ЛПС и белков. На основе структуры О-Аг проводят серологическое типирование. Белковый компонент О-Аг — антигенный комплекс, общий для псевдомонад, то есть родовой О-Аг. По структуре О-Аг выделяют более 20 серогрупп. Н-антигенный комплекс P. aeruginosa представлен термолабильными белками низкой специфичности, обусловленной различиями в строении флагеллинов. Выявлено 15 различных типов Н-Аг. НАг обнаруживают лишь у жизнеспособных, подвижных бактерий, не подвергшихся какому-либо воздействию дезинфицирующих или антимикробных средств (Lavoie E.G. et al., 2011).

Указанные факторы патогенности могут оказывать влияние на состояние естественной резистентности макроорганизма, в частности, О-антиген, по-видимому, обладает антифагоцитарным ээфектом, липид А проявляет свойства эндотоксина, проеазы подавляют комплемент-зависимые механизмы защиты, а экзотоксин А токсичен для макрофагов.

Клетки P.aeruginosa содержат большое количество плазмид, ряд которых обуславливает широкую антибиотикорезистентность и устойчивость к химическим веществам. Это и образование протеаз, вызывающих изъязвление тканей, способствующих нарушению микроциркуляторного русла, а также способность формировать биопленки, особенно на изделиях

медицинского назначения (катетерах, имплантах) (Ammons, М.С. et al., 2009) делают синегнойную палочку опасным патогеном, вызывающим внутрибольничные пневмонии, эндокардиты, поражения урогенитальной системы, пиодермии, ожоговые инфекции с высоким уровнем летальности.

Другим важнейшим возбудителем инфекций мягких тканей является Staphylococcus aureus благодаря тому, что его носительство на кожных покровах широко распространено, и при раневых поражениях представители данного вида оказываются одними из первых контаминантов открытых ран (Schierle C.F. et al., 2009).

S. aureus относят к роду Staphylococcus, кроме него туда входит еще 45 видов, в 11 из которых дополнительно выделены 2-4 подвида, большинство которых колонизирует поверхность тела человека (Руководство по медицинской микробиологии. Под ред. Лабинской А.С., 2013). Стафилококки - грамположительные бактерии диаметром 0,5-1,5 мкм, располагающихся в мазках одиночно, парами или гроздьями (Медицинская микробиология. Под ред. Покровского В.И., 1999). Неподвижны, факультативные анаэробы, хемоорганотрофы,

Факторы патогенности S. aureus позволяют ему прикрепляться к поверхностям, нарушать или избегать иммунного ответа и вызывать токсические эффекты. К ним относят:

- адгезины;

- инвазины;

- факторы, позволяющие уклоняться от действия иммунной системы (ингибиции фагоцитоза, увеличивающие выживание внутри фагоцита);

мембрано-повреждающие токсины, лизирующие мембраны эукариотической клетки;

- токсины (энтеротоксины, эксофолиативные токсины, токсин синдрома токсического шока и т.д.).

Многие поверхностные структуры стафилококка обладают антигенной и иммуномодулирующей активностью. Так, пептидогликан обеспечивает неспецифическую резистентность, активацию комплемента, является пирогенном. Капсула обладает антифагоцитарным и сенсибилизирующим действием, стимулирует появление в сыворотке крови опсонинов и протективных антител. Тейхоевые кислоты являются сильным тимус-независимым антигеном, активируют комплемент, обладают видовой антигенной специфичностью. Белок А имеет свойства преципитиногена, агглютиногенов благодаря неспецифическому взаимодействию с Fc-фрагментом сывороточных иммуноглобулинов и связыванию комплемента (Fournier, В. et al., 2005) Однако патогенез большинства болезней, вызванных S. aureus, — многофакторный, что сильно затрудняет точное определение роли каждого конкретного фактора патогенности.

К наиболее важным свойствам S. aureus принято относить выраженную приобретенную устойчивость к антибиотикам, контролируемую плазмидами (Boucher, Н. et al., 2010), и способность продуцировать биопленку, которая облегчает адгезию и формирование микроколоний микроорганизма на слизистых оболочках и раневой поверхности, тем самым, затрудняя лечение и способствуя формированию хронических форм инфекции (Davis S.C. et al., 2008).

Для человека S. aureus является оппортунистическим микроорганизмом (Руководство по медицинской микробиологии. Под ред. Лабинской A.C., 2013). Золотистый стафилококк вызывает кожные заболевания, инфекции мягких тканей, включая фурункулезы, абсцессы и раневые инфекции (Boucher Н. et all., 2010). Он является основным возбудителем маститов у женщин и инфекционных осложнений хирургических ран и пневмоний (Kraus, D. et al. 2008). Обычные пневмонии, вызванные S.aureus,

регистрируют редко, но в стационарах этот микроорганизм является вторым по значимости этиологическим фактором (после P. aeruginosa).

Псевдомонадные инфекции поражают кожу, подкожные ткани, кости и суставы, глаза, уши, сосцевидные и параназальные синусы, мозговые оболочки и сердечные клапаны. Микроорганизмы рода Pseudomonas являются обычными возбудителями инфекционных поражений мочевых путей. Как и S.aureus, P.aeruginosa может колонизировать кожу, легкие и другие ткани, являясь оппортунистическим видом. В некоторых случаях он может проникать в кровь, вызывая бактериемию, сепсис и смерть. Этот патоген часто поражает пациентов, находящихся в отделениях интенсивной терапии, ожоговых, онкологических, ВИЧ-инфицированных больных.

Благоприятные условия для реализации патогенных свойств обоих микроорганизмов создаются при нарушении целостности кожи и слизистых оболочек (ожоги, раны, хирургические вмешательства), ослаблении иммунной системы (злокачественные новообразования, химиотерапия, грудной и преклонный возраст, сахарный диабет, ВИЧ-инфекция), подавлении нормальной микрофлоры антибиотиками широкого спектра действия, а также при длительном пребывании в стационаре. Оба возбудителя способны быстро колонизировать поврежденные поверхности, в том числе, совместно, образовывать биопленки, обладают устойчивостью к ряду антибиотиков, что способствует утяжелению инфекционного процесса и его хронизации (Kirketerp-Moller К. et al., 2008)

Антибиотикотерапия и другие способы терапии инфицированных

ран

На сегодняшний день основным способом терапии и профилактики раневых инфекций является антибиотикотерапия. Весьма эффективным показало себя комбинирование аминогликозидов (например, гентамицина) или цефалоспоринов (например, цефотаксима или цефуроксима) с

препаратами, активными в отношении анаэробных микроорганизмов (например, метронидазолом). Высокую эффективность для предотвращения развития инфекции имеют поверхностные антибактериальные мази и кремы. Показано, однако, что они эффективны преимущественно для профилактики, а не лечения инфекций.

Неудачи в лечении хронических инфицированных ран, с трудом поддающихся антибиотикотерапии, во многом связаны с образованием патогенными бактериями биопленок на раневой поверхности (Scali С. et al.,2013). Второй причиной является распространенность множественной антибиотикоустойчивости среди основных возбудителей раневых инфекций. Так, P. aeruginosa резистентны к пенициллинам, ампициллину, амоксициллин-клавулановой кислоте, ампициллин-сульбактаму,

тетрациклинам, макролидам, рифампицину, хлорамфениколу, триметаприм-сульфаметаксозолу, цефалоспоринам узкого и широкого спектра, оральным цефалоспоринам широкого спектра (цефиксиму и цефподоксиму) (Livermore D.M. et al., 2002). А в последнее время отмечается устойчивой рост числа клинических изолятов, устойчивых к кинолонам, таким как ципрофлоксацин, которые являлись основными антибиотиками при лечении инфекций, вызываемых псевдомонадами. Особенно высокий процент антибиотикоустойчивых штаммов наблюдается в развитых странах, где число изолятов, устойчивых к перечисленным лекарствам, достигает 50% (Kerr K.G. et al., 2009) В России распространение антибиотикоустойчивых псевдомонад находится на уровне 20-45 % (Шагинян И.А., 2005).

Среди штаммов S. aureus в последние годы получили широкое распространение так называемые метициллин-резистентные (MRSА), также характеризующиеся повышенной устойчивостью к основным антибиотикам, используемым в лечении послеожоговых и посттравматических инфекций. Кроме того, распространяются штаммы, устойчивые к макролидам, так называемые MLSB стафилококки, и начали встречаться изоляты, устойчивые

к ванкомицину, являющемуся практическим единственным препаратом при лечении инфекций, вызванных метицилин-устойчивыми стафилококками (MRSА). (Шагинян И.А., 2003; Дмитренко О.А., 2005).

Сниженный иммунный статус пациента или нарушение трофических процессов в окружающих рану тканях (что встречается, например, при синдроме диабетической стопы) также приводит к неудачам в терапии и способствует переходу инфекционного процесса в хроническую форму. В таких случаях применения одних антибиотиков недостаточно, необходимо комплексное лечение, включающее в себя различные, в том числе, немедикаментозные подходы (Lima A.L. et al., 2013).

1.1.3. Chlamydia trachomatis - внутриклеточный паразит, вызывающий хронические инфекционные процессы

Хламидии - облигатные паразиты эукариотических клеток, возбудители различных заболеваний человека, животных и птиц. Представляют собой мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии, не образующие капсул и спор. Их клеточная стенка состоит из наружной и внутренней мембран и не содержит пептидогликана. Энергетически хламидии зависимы от клетки хозяина, так как для своего размножения используют макроэргические соединения эукариотической клетки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сысолятина, Елена Владимировна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акишев, Ю.С. Исследование элементарных процессов в низкотемпературной плазме электроотрицательных газов / Ю.С. Акишев, С.В. Двуреченский, А.И. Захарченко и др. // Физика плазмы - 1981 - Т.7(6). -с.1273.

2. Акишев, Ю.С. О концентрации отрицательных ионов в тлеющем разряде в воздухе / Ю.С. Акишев, А.В. Артамонов, В.Г.Наумов и др. // ЖТФ - 1979 - Т.49(4). - С.900.

3. Дмитренко, О. А. Молекулярно-генетическое типирование метициллин-резистентных штаммов Staphylococcus aureus, выделенных в стационарах различных регионов России и Беларуси / О.А. Дмитренко, А .Я. Прохоров, С.М. Матвеев, А. Л. Гинцбург, И. А. Шагинян // Ж.микробиол.,эпидем, иммунобиол. - 2005. - №4. - С.46-52.

4. Зигангирова, Н.А. Генерализация инфекции у больных с урогенитальным хламидиозом / Н.А. Зигангирова, И.М. Петяев, Ю.П. Пашко и др.// Клин. Микробиол. Антимикроб. Химиотер. - 2007.- Т.9(4). - С. 351360.

5. Ильина, Т.С. Биопленки как способ существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина: феномен, генетический контроль и системы регуляции их развития / Т.С. Ильина, Ю.М. Романова, А.Л. Гинцбург // Генетика - 2004. - Т. 40. - С. 1445-1456.

6. Кабисов, Р.К. Опыт применения экзогенной NO-терапии для лечения послеоперационных ран и лучевых реакций у онкологических больных / Р.К. Кабисов, В.В. Соколов, А.Б. Шехтер и др. // Рос .онкол. журн. -2000.-Т. 1.-С. 24—29.

7. Кисина, В.И. Урогенитальный хламидиоз: оптимальная программа лечения / В.И.Кисина // Consilium Medicum - 2006 - T.8(l). - СЛ.

8. Липатов К.В. Использование газового потока, содержащего оксид азота (no-терапия), в комплексном лечении гнойных ран / К.В. Липатов, М.А. Сопромадзе, А.Б. Шехтер и др. // Хирургия - 2002. - Т. 2. - С. 41-43.

9. Медицинская микробиология / под ред. В.И.Покровского. -ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. - 1200стр.

10. Потекаев, H.H. Современные подходы к рациональному выбору этиотропной терапии урогенитальных инфекций у женщин / Н.Н.Потекаев, М.В.Горячкина, Т.А.Белоусова, В.В.Савенков // Consilium Medicum. - 2010. -Т12 №4. - С.39-44.

11. Пушкарева В.И. Паразитизм в простейших как стратегия существования патогенных абктерий в почвах и водоемах / В.И.Пушкарева // Успехи современной биологии - 2006 - Т. 126(4) - С.323-333.

12. Решетов, И.В. Применение воздушно-плазменного аппарата "плазон" в режимах коагуляции и no-терапии при реконструктивно-пластических операциях у онкологических больных / И.В. Решетов, А.Б. Шехтер, Р.К. Кабисов // Анналы пласт реконстр и эстетич хирургии - 2000. -Т. 4.-С. 24-38.

13. Руководство по медицинской микробиологии. Книга III. Том первый. Оппортунистические инфекции: возбудители и этиологическая диагностика. / под ред. Лабинской A.C. - издательство БИНОМ, 2013. -752стр.

14. Руководство по медицинской микробиологии. Под ред. Лабинской A.C. Москва: Бином, 2013, с.752.

15. Тихомиров, A.Jl. Комплексное лечение смешанных инфекций / А.Л. Тихомиров, С.И. Сарсания // Гинекология. - 2004. - Т.6 (6). - С.289-92.

16. Улащик, B.C. Иммуномодулирующее действие лечебных физических факторов /B.C. Улащик //Медицинские новости - 2006. - №11. -С.8-14.

17. Ультрафиолетовое излучение и здоровье людей. Информационный бюллетень ВОЗ №305. Декабрь 2009.

18. Шагинян, И.А. Молекулярная эпидемиология внутрибольничных инфекций, вызываемых метициллинустойчивыми стафилококками / И.А. Шагинян, O.A. Дмитренко // Ж. микробиол. эпидемиол.. иммунол. - 2003. -№3. - С. 99-109.

19. Шагинян, И.А. Неферментирующие грамотрицательные бактерии в этиологии внутрибольничных инфекций: клинические, микробиологические и эпидемиологические особенности / И.А. Шагинян, М.Ю. Чернуха // КМАХ . - 2005. - Т . 7(3). - С. 271-285.

20. Шемарова И.В. Методические рекомендации по использованию инфузорий Tetrahymena pyriformis GL в качестве тест-объектов в токсикологических, фармакологических и экологических исследованиях. СПб:СПбГАВМ, 2007. - 26с.

21. Шулутко, А. М. NO-терапия у больных сахарным диабетом, осложненным гнойно-некротическими поражениями нижних конечностей / A.M. Шулутко, Н.В Антропова, Ю.А. Крюгер // Хирургия - 2004. - Т. 12. - С. 23-26.

22. Энциклопедия низкотемпературной плазмы / под ред. В.Е.

Фортова. - "ФИЗМАТЛИТ", 2004. - 536 стр.

23. Akishev, Y. Atmospheric-pressure, nonthermal plasma sterilization of microorganisms in liquids and on surfaces/ Akishev Y., Grushin M., Karalnik V. et al. // Pure Appl Chem. - 2008. - Vol 80. - P. 1953-1969.

24. Amnions, M.C. In vitro susceptibility of established biofilms composed of a clinical wound isolate Pseudomonas aeruginosa treated with lactoferrin and xylitol / M.C. Ammons, L.S. Ward, S.T.Fisher et al. // International Journa of Microbiological Agents. - 2009. - Vol.33 (3). - P.230-236

25. Ball, B.R. Whole effluent toxicity reduction by ozone / B.R. Ball, K.V. Brix, M.S. Brancato et al. // Environ. Prog. - 1997. - Vol. 16, №2. - P. 121124.

26. Boucher, H. Serious infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus / H. Boucher H., L.G. Miller // Clin Infect Dis. - 2010. -Vol.51, Suppl 2. - S183-97

27. Boucher, H. Serious infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus / H. Boucher, L.G. Miller, R.R. Razonable // Clin Infect Dis- 1010.-Vol.l6(l).-P.157-159.

28. Breidenstein, E.B. Pseudomonas aeruginosa: all roads lead to resistance/ E.B. Breidenstein, C. de la Fuente-Núñez, R.E. Hancock // Trends Microbiol. -2011. -Vol. 19(8). -P.419-26.

29. Ching YH, Sutton TL, Pierpont YN, Robson MC, Payne WG. The use of growth factors and other humoral agents to accelerate and enhance burn wound healing/ Y.H. Ching, T.L.Sutton, Y.N.Pierpont, M.C.Robson et al.// Eplasty.-2011.-Vol. 11.- e41.

30. Dahl, T.A. Comparison of Killing of Gram-Negative and GramPositive Bacteria by Pure Singlet Oxygen / T.A. Dahl, R. Midden, P.E. Hartman // Journal of Bacteriology - 1989. - Vol. 171, № 4. - P. 2188-2194.

31. Davey, M.E. Microbial biofilms: from ecology to molecular genetics / M.E. Davey, G.A. O'toole // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 2000. - Vol. 64. - P. 847-867.

32. Davis, S.C. Microscopic and physiologic evidence for biofilm-associated wound colonization in vivo / S.C. Davis, C.Ricotti, A. Cazzaniga, et al. // Wound Repair Regen. - 2008. - Jan-Feb;16(l). - P.23-9.

33. Dobrynin, D. Physical and biological mechanisms of direct plasma interaction with living tissue / D. Dobrynin, G. Fridman, G. Friedman et al. // New Journal of Physics - 2009. Vol. 11.-P. 115020.

34. Ermolaeva, S. Effects of nonthermal argon plasma on intracellular pathogens and host cells / S. Ermolaeva, O. Petrov, N. Kolkov .et al. // Abstr. ICPM3 - 2010. - Greifswald Sept. 19-24: p. 37.

35. Ermolaeva, S.A. Bactericidal effects of non-thermal argon plasma in vitro, in biofilms and in the animal model of infected wounds / S.A. Ermolaeva, A.F. Varfolomeev, M.Y. Chernukha et al. // J. Med. Microbiol. - 2011. - Vol. 60. -P. 75-83.

36. Fournier, B. Recognition of Staphylococcus aureus by the innate immune system / B.Fournier, D.J. Philpott // Clinical Microbiology Reviews. -2005. - Vol.18(3). - P.521-540.

37. Fricke, K. High rate etching of polymers by means of an atmospheric pressure plasma jet / K. Fricke, H. Steffen, T. von Woedtke et al. // Plasma Proc. Polym.-2011.-Vol. 8.-P. 51-58.

38. Fridman, G Applied plasma medicine / G. Friedman, A. Gutsol et al. // Plasma Process Polym. - 2008. - Vol. 5. - P. 503-533.

39. Fridman, G. Comparison of direct and indirect effects of non-thermal atmospheric-pressure plasma on bacteria / G. Fridman, A. Brooks, M. Balasubramanian et al. // Plasma Process. Polym. - 2007. - Vol. 4. - P. 370-375.

40. Goree, J. Killinng of s. mutans bacteria using a plasmaneedle at atmospheric pressure / J. Goree, B. Liu, D. Drake et al. // IEEE Trans Plasma Sei. -2006.-Vol . 34.-P. 1317-1324.

41. Grund, K.E. New haemostatic techniques: argon plasma coagulation / K.E. Grund, T.Straub, G.Farin. // Best Pract Res Clin Gastroenterol. - 1999. -Vol.13. -P.67-84.

42. Honigsmann H. Mechanisms of phototherapy and photochemotherapy for photodermatoses / H. Honigsmann // Dermatol Ther. - 2003 - Vol. 16(1). -P.23-27

43. Isbary, G. A first prospective randomized controlled trial to decrease bacterial load using cold atmospheric argon plasma on chronic wounds in patients / G. Isbary, G. Morfill, H.U. Schmidt et al. // Br. J. Dermatol. - 2010. - Vol. 163. P. 78-82.

44. Joaquin, J. C. Is gas-discharge plasma a new solution to the old problem of biofilm inactivation? / J.C Joaquin, C. Kwan, N. Abramzon, et al. // Microbiology - 2009. - Vol. 155. - P. 724-732.

45. Joshi, S.G. Control of methicillin-resistant staphylococcus aureus in planktonic form and biofilms: a biocidal efficacy study of nonthermal dielectric-barrier discharge plasma / S.G. Joshi, M. Paff, G. Friedman et al. // Am J Infect Control-2010.-Vol. 38.-P. 293-301.

46. Kalghatgi, S . Endothelial cell proliferation is enhanced by low dose non-thermal plasma through fibroblast growth factor-2 release / S. Kalghatgi, G. Friedman, A. Fridman et al. // Ann. Biomed. Eng. - 2010. - Vol. 38. P. 748-757.

47. Kalghatgi, S. Effects of non-thermal plasma on mammalian cells / S. Kalghatgi, C.M. Kelly, E. Cerchar et al. // PLoS One - 2011. - Vol. 6. - P. el6270.

48. Kamgang, J.O. Destruction of planktonic, adherent and biofilm cells of staphylococcus epidermidis using a gliding discharge in humid air / J.O. Kamgang, R. Briandet, J.M. Herry et al. // J. Appl. Microbiol. - 2007. - Vol. 103. -P. 621-628.

49. Kang, J.W. Kinetics and mechanism of the sonolytic destruction of methyl tert-butyl ether by ultrasonic irradiation in the presence of ozone / J.W. Kang, M.R. Hoffmann. // Environ. Sei. Technol. - 1998. - Vol. 32, № 20. - P. 3194-3199.

50. Kapsenberg, M.L. The role of antigen-presenting cells in the regulation of allergen-specific T cell responses / M.L. Kapsenberg, C.M. Hilkens, E.A. Wierenga et al. // Curr. Opin. Immunol. - 1998. - Vol. 10, №. 6. - P. 607613.

51. Kayes, M. Inactivation of foodborne pathogens using a one atmosphere uniform glow discharge plasma/M.M. Kayes, F.J. Critzer, K. KellyWintenberg et al.//Foodborne Patog. Dis. - 2007. - Vol.4. - 50-59.

52. Kerr, K.G. Pseudomonas aeruginosa: a formidable and ever-present adversary / K.G. Kerr, A.M. Snelling // J Hosp Infect. - 2009. - Vol.73(4). -P.338-44.

53. Kirketerp-Mol 1 er, K. Distribution, organization and ecology of bacteria in chronic wounds / K. Kirketerp-Moller, P. Jensen, M. Fazli et al. // Journal of Clinical Microbiology. - 2008. - Vol.46 (8). - P.2717-22

54. Kiska D.L., Gilligan P.H. Pseudomonas// In: Murray P.R., Baron E.J., Jorgensen J.H., Pfaller M.A., Yolken R.H., editors. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. Washington: ASM Press.- 2003.-P. 719-728.

55. Klein, C.P. Long-term in vivo of plasma-sprayed coating on titanium alloys of tetralcium phosphate, hydroxyapatite and alpha-tricalcium phosphate / C.P. Klein, P.Patka, J.G.Wolke et al. // Biomaterials. - 1994. - Vol. 15(2). - P. 146150.

56. Kong, M. Plasma medicine: an introductory review / M. Kong, G. Kroesen, G. Morfill et al. // New Journal of Physics - 2009. - Vol. 11. - P. 115012.

57. Kraus, D. Staphylococcus aureus evasion of innate antimicrobial defence / D. Kraus, A. Peschet // Future Microbiol. - 2008. - Vol.3(4). - P.437-451.

58. Kubasova, T. Effect of visible light on some cellular and immune parameters / T.Kubasova, M. Fenyo, Z. Somosy et al. // Immunology and Cell Biol - 1995. -Vol73.- 239-244

59. Laroussi, M. Plasma Medicine Applications of Low-Temperature Gas Plasmas in Medicine and Biology/ ed M. Laroussi, M. G. Kong, G. Morfill and W. Stolz. - Cambridge: Cambridge University Press. -2012

60. Laroussi, M. Plasma interaction with microbes/ M.Laroussi, D. Mendis, M.Rosenberg// New J Phys. - 2003. - Vol. 5. - P. 41.1-41.10.

61. Laroussi, M. Effects of non-equilibrium atmospheric pressure plasmas on the heterotrophic pathways of bacteria and on their cell morphology / M. Laroussi, J. Richardson, F. Dobbs // Appl. Phys. Lett. - 2002. - Vol. 81. - P. 772774.

62. Laroussi, M. Evaluation of the roles of reactive species, heat and UV radiation in the inactivation of bacterial cells by air plasmas at atmospheric pressure / M. Laroussi, F. Leipold // Int. J. Mass. Spectrom. - 2004. - Vol. 233, № 1-3, -P.81-86.

63. Laroussi, M. Low temperature plasma-based sterilization: overview and state-of-the-art / M. Laroussi // Plasma Proc. Polym. - 2005. - Vol. 2. - P. 391-400.

64. Lavoie, E.G. Innate immune responses to Pseudomonas aeruginosa infection / E.G.Lavoie, T. Wangdi, B.I. Kazmierczak // Microbes Infect. - 2011. -Vol.13(14-15). -P.1133-45.

65. Leduc, M. Cell permeabilization using a non-thermal plasma / M. Leduc, D. Guay, R. Leask et al. // New Journal of Physics - 2009. - Vol. 11. - P. 115021-115032.

66. Legrini, O. Photochemical processes for water treatment / O. Legrini, E. Oliveros, A.M. Braun // Chem. Rev. - 1993. - Vol. 93, № 2. - P. 671-698.

67. Lerouge, S. Effect of gas composition on spore mortality and etching during low-pressure plasma sterilization / S. Lerouge, M.R. Wertheimer, R. Marchand et al. //J. Biomed. Mater. Res. - 2000. - Vol. 51. - P. 128-135.

68. Lieberman M. Principles of plasma discharges and materials processing / M.Lieberman M. and A. Lichtenberg (Eds.) // John Wiley and Sons. -2005.

69. Lima, A.L. Microbiology of diabetic foot infections: role of ertapenem / A.L. Lima, P.R. Oliveira, V.C. Carvalho, E.G. Peixoto de Miranda // Drugs Today (Bare). -2013. - Vol.49, Suppl A. - P. 1-20.

70. Livermore, D.M. Multiple mechanisms of antimicrobial resistance in Pseudomonas aeruginosa: our worst nightmare?/ D.M. Livermore // Clin. Infect. Dis. -2002.- Vol. 34.-P.634-640.

71. Lu. X. On atmospheric-pressure non-equilibrium plasma jets and plasma bullets / X. Lu, M. Laroussi and V. Puech //Plasma Sources Sci. Technol. -2012. - Vol.21 - P. 034005

72. Lynch, S E. Growth factors in wound healing. Single and synergistic effects on partial thickness porcine skin wounds / S E. Lynch, R.B. Colvin, H.N. Antoniades // J. Clin. Invest. - 1989. - Vol. 84, №. 2. - P. 640-646.

73. M. Vandamme, E .Robert, S. Dozias et al. Response of human glioma U87 xenografted on mice to non thermal plasma treatment // Plasma Medicine. -2011.-Vol. 1(1). - P.27-43

74. Machala, Z. Plasma agents in bio-decontamination by dc discharges in atmospheric air/ Z.Machala, L.Chladekova and M. Pelach // JPhys D: Appl Phys. - 2010. - Vol. 43. - P. 222001-222010.

75. Machala, Z. Plasma for Bio-Decontamination, Medicine and Food Security (NATO Science for Peace and Security Series A: Chemistry and Biology)/ ed. Z Machala, K Hensel, Yu Akishev. - Dordrecht: Springer, 2012

76. Manos, M. Plasma etching: an introduction/ M.Manos and D. Flamm (Eds.)// Academic Press, San Diego, CA, - 1989.

77. Messerli, M.A. Extracellular electrical fields direct wound healing and regeneration / M.A. Messerli, D.Grahami // Biol. Bull - 2011. - Vol. 221. - P.79-92

78. Millard, M.M. Surface analysis and depth profile composition of bacterial cells by x-ray photoelectron spectroscopy and oxygen plasma etching / M.M. Millard, R. Scherrer, R.S. Thomas // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1976.-Vol. 72.-P. 1209-1217.

79. Moisan, M. Low temperature sterilization using gas plasmas: a review of the experiments, and an analysis of the inactivation mechanisms / M. Moisan, J. Barbeau, S. Moreau et al. // Int J. Pharm. - 2001. - Vol. 226, no /2 - P. 1-21

80. Moreau, M. Gliding arc discharge in the potato pathogen erwinia carotovora subsp. atroseptica: mechanism of lethal action and effect on membrane-associated molecules / M. Moreau, M.G.J. Feuilloley, W.Veron et al. // Appl. Environ. Microbiol. -2007. - Vol. 73.-P. 5904-5910.

81. Moreau, M. Non-thermal plasma technologies: new tools for bio-decontamination / M. Moreau, N. Orange, M. Feuilloley // Biotechnol. Adv. -2008.-Vol. 26.-P. 610-617.

82. Morfill, G. Focus on plasma medicine / G. Morfill, M. Kong, J. Zimmermann. //New Journal of Physics - 2009. - Vol. 11.-P. 115011.

83. Nosenko, T. Designing plasmas for chronic wound disinfection / T. Nosenko, T. Shimizu, G.E. Morfill // New Journal of Physics - 2009. - Vol. 11.-P. 115013.

84. Philip, N. The respective roles of UV photons and oxygen atoms in plasma sterilization at reduced gas pressure: the case of N2-02 mixtures / N.

Philip, B. Saoudi., M-C. Crevier et al. // IEE Trans.Plasma Sci. - , 2002. - Vol. 30, №4.-P. 1429-1436.

85. Philip, N. The respective roles of UV photons and oxygen atoms in plasma sterilization at reduced gas pressure: the case of N2-02 mixtures / N. Philip, B. Saoudi, C. Crevier et al. // IEEE Trans. Plasma Sci. - 2002. - Vol.30(4). -P. 1429-1436.

86. Plasma for Bio-Decontamination, Medicine and Food Security (NATO Science for Peace and Security Series A: Chemistry and Biology) / ed. Z. Machala, K. Hensel, Yu. Akishev - Dordrecht: Springer 2012 - 479p.

87. Plasma Medicine Applications of Low-Temperature Gas Plasmas in Medicine and Biology / ed M. Laroussi, M.G. Kong, G. Morfill and W. Stolz -New York: Cambridge: Cambridge University Press 2012 - 346p.

88. Purevdorj, D. Effect of feed gas composition of gas discharge plasmas on bacillus pumilus spore mortality / D. Purevdorj, N. Igura, O. Ariyada et al. // Lett Appl Microbiol. - 2003. - Vol. 37. - P. 31-34.

89. Scali, C. An update on chronic wounds and the role of biofilms / C.Scali, B.J. Kunimoto. // Cutan Med Surg. - 2013 - 17(0). - P. 1-6.

90. Schierle, C.F. Staphylococcal biofilms impair wound healing by delaying reepithelialization in a murine cutaneous wound model / C.F. Schierle, De la Garza M, Mustoe TA, Galiano R.D. // Wound Repair Regen. - 2009. -Vol.17(3). -P.354-9.

91. Schroder, K. Plasma-induced surface functionalization of polymeric biomaterials in ammonia plasma / K. Schroder, A. Meyer-Plath, D.Keller et al. // Contrib Plasma Phys. - 2001. - Vol. 41. - P.562-572

92. Svennilson, J. Novel approaches in GVHD therapy / J. Svennilson // Bone Marrow Transplant. - 2005. - Vol. 35. - P. 665-567.

93. Vandervoort, K. Plasma interactions with bacterial biofilms as visualizedthrough atomic force microscopy / K. Vandervoort, N. Abramzon, G. Brelles-Marino // IEEE Trans on Plasma Sci. - 2008. - Vol. 36. - P. 1296-1297.

94. Venezia, R.A. Lethal activity of nonthermal plasma sterilization against microorganisms / R.A. Venezia, M. Orrico, E. Houston et al. // Infect Control Hosp Epidemiol - 2008. - Vol. 29. - P. 430-436.

95. Wink, D.A. Nitric oxide protects against cellular damage and cytotoxicity from reactive oxygen species/ D.A.Wink, I.Hanbauer , M.C.Krishna et al.// Proc Natl Acad Sci U S A. - 1993. - Vol. 90. - P. 9813-9817.

96. Wolf, P. Pseudomonas exotoxin A: from virulence factor to anticancer agent / P. Wolf , U. Elsasser-Beile // Int J Med Microbiol. - 2009. -Vol.299(3). - P.161-76

97. Xie, X. Intracellular Staphylococcus aureus-induced NF-kB activation and proinflammatory responses of P815 cells are mediated by NOD2 / X. Xie, L. Wang, F. Gong et al. // Journal of Huazhong University of Science and Technology. - 2012. - Vol.32. - №. 3. -P.317-323.

98. Yasuda, H. States of biological components in bacteria and bacteriophages during inactivation by atmospheric dielectric barrier discharges / H. Yasuda, M. Hashimoto, M. Rahman et al. // Plasma Process. Polym. - 2008. - Vol. 5.-P. 615-621.