Бактериальные рибонуклеазы как индукторы дифференциальных токсических изменений клеток различного уровня организации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Зеленихин, Павел Валерьевич

• Зеленихин, Павел Валерьевич
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Зеленихин, Павел Валерьевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биологическая активность рибонуклеаз.

1.1.1. Роль рибонуклеаз в регуляции экспрессии генов.

1.1.2. Защитные функции рибонуклеаз.

1.2. Цитотоксичные рибонуклеазы различных организмов.

1.2.1. Механизмы цитотоксичности рибонуклеаз.

1.2.2. Молекулярные детерминанты цитотоксичности рибонуклеаз.

1.3. Иммуногенные эффекты рибонуклеаз.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Используемые в экспериментальной работе материалы.

2.1.1. Ферментные препараты.

2.1.2. Бактериальные штаммы.

2.1.3. Клеточные культуры.

2.2. Методы определения токсического и генотоксического действия РНКаз в прокариотических тест-системах.

2.2.1. Оценка токсичности ферментных препаратов по выживаемости тестерных штаммов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов.

2.2.2. Оценка токсичности ферментных препаратов по ингибированию уровня конститутивных ферментов.

2.2.3. Тестирование на мутагенность в бактериальных тест-системах.

2.2.3.1. Тест Эймса на выявление генных мутаций.

2.2.3.2. 808-хромотест.

2.3. Оценка жизнеспособности клеточных культур.

2.4. Цитометрическое определение апоптических клеток.

2.5 Визуализация апоптических изменений клеток с помощью методов микроскопии.

2.5.1. Микроскопическое исследование апоптических изменений клеточной морфологии.

2.5.2. Микроскопия с использованием витального окрашивания флуоресцентным красителем 1С-1.

2.5.3. Прямая регистрация уровня внутриклеточного Са с помощью флуорохромного агента Р1ЖА-2.

2.6. Выявление двойных разрывов ДНК методом электрофореза в пульсирующем поле.

2.7. Цитометрическое исследование индукции неспецифического иммунного ответа.

2.8. Статистическая обработка результатов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Токсические и генотоксические эффекты микробных рибонуклеаз.

3.1.1. Токсические эффекты рибонуклеаз.

3.1.2. Индукция генных мутаций рибонуклеазами в тесте Эймса.

3.1.3. ЗОЭ-индуцирующая активность рибонуклеаз.

3.2. Апоптозиндуцирующее действие микробных рибонуклеаз на нормальные и малигнизированные клетки эукариот.

3.2.1. Апоптозиндуцирующее действие рибонуклеаз на нормальные и опухолевые клетки крови.

3.2.2. Апоптозиндуцирующее действие рибонуклеаз на клетки солидных опухолей.

3.3. Оценка жизнеспособности клеточных культур при росте в присутствии микробных РНКаз.

3.4. Апоптотические изменения морфологических и физиологических характеристик клеток под действием рибонуклеазы Bacillus intermedius.

3.5. Рибонуклаза Bacillus intermedius как индуктор поликлонального Т-клеточного ответа.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Бактериальные рибонуклеазы как индукторы дифференциальных токсических изменений клеток различного уровня организации»

Актуальность проблемы. Рибонуклеазы (РНКазы) - важнейшие ферменты метаболизма РЖ, функции которых заключаются в расщеплении мРНК, превращении предшественников РНК в зрелые формы, продукции малых регуляторных РНК, деградации определенных типов РНК. Клетка содержит около 20 видов экзо- и эндорибонуклеаз, которые могут входить в состав надмолекулярных комплексов и проявлять высокую специфичность к определенным нуклеотидным последовательностям и структурам [Deutscher, Li, 2001]. В последние годы пристальное внимание уделяется функциям РНКаз, связанным с регуляцией экспрессии генов, роста и дифференцировки клеток, защитой от патогенов, индукцией апоптоза.

С определенной долей условности можно сказать, что многим РНКазам эволюционно присущи токсические свойства. Действительно, секретируемые микробные РНКазы не только обеспечивают клетки-хозяина доступным источником фосфора в условиях фосфатного голодания [Rittmann et al., 2005], который образуется при разложении РНК нежизнеспособных клеток, но и могут служить оружием в конкурентной борьбе с другими микроорганизмами за экологическую нишу.

В настоящее время особое внимание уделяется биологическим эффектам рибонуклеаз, таким, как контроль роста кровеносных сосудов, токсичность по отношению к клеткам опухолей, противовирусная активность. Современные представления о роли и функциях РНКаз в клетках позволяют рассматривать эти ферменты как перспективную альтернативу традиционным химиотерапевтическим средствам в щадящей терапии злокачественных новообразований. На сегодняшний день известно значительное количество РНКаз, обладающих селективным цитотоксическим действием по отношению к клеткам опухолей [Leland, Raines, 2001; Spalletti-Cernia et al., 2004; Ильинская, Макаров, 2005].

Наиболее известным ферментом этого ряда является РНКаза лягушки Rana pipiens - онконаза [Saxena, et al., 2003], успешно проходит III стадию клинических испытаний как противоопухолевый препарат в терапии злокачественных новообразований легких. Для РНКаз, как средств противоопухолевой терапии, основное значение имеет фактор избирательного действия по отношению к раковым клеткам. Кроме того, иммуногенный эффект ферментов, внедряемых в практическую медицину, должен быть по возможности низким. При этом целенаправленный поиск терапевтически перспективных ферментов среди РНКаз млекопитающих не всегда тактически оправдан в связи с эволюционно сформировавшейся системой защиты клетки млекопитающих от излишней активности собственных РНКаз, опосредованной действием специфического цитозольного ингибитора РНКаз (РИ) [Leland, Raines, 2001]. В связи с этим особое внимание на себя обращают РНКазы филогенетически далекие от своих аналогов у млекопитающих, такие, как РНКазы амфибий, грибов и микроорганизмов, нечувствительные к действию РИ [Sevcik et al., 2002]. Таким образом, отсутствие возможности у бактериальных рибонуклеаз быть инактивированными РИ, а также широкие возможности для биоинженерии этих ферментов делает их весьма привлекательными для разработки новых терапевтических средств.

Основы исследования противовирусного действия РНКаз животных в России были заложены работами Р.И. Салганика с соавторами [1976], это важное направление развивается сегодня с привлечением микробных РНКаз [Грибенча с соавт., 2004], причем особенное внимание уделяется синтезу искусственных небелковых РНКаз с противовирусными эффектами, проводимому под руководством В.В. Власова [Власов, 2004; Kuznetsova et al., 2005]. Эффекты нуклеодеполимераз в отношении опухолевых клеток изучались в нашей стране с 60-х гг. прошлого века [Беляева, Нужина, 1969], однако пристальное внимание эффектам бактериальных РНКаз было уделено позже в работах Куриненко с соавторами [1991].

До сих пор вопрос о механизмах противоопухолевого действия РНКаз остается открытым. Современный уровень исследования структуры РНКаз и клеточных компонентов, с которыми они взаимодействуют, позволяет по-новому оценить вклад отдельных молекулярных детерминант в процесс индуцированной гибели опухолевых клеток. Регуляция экспрессии генов малыми РНК (РНК-интерференция) определяет особый путь действия экзогенных РНКаз на клетки эукариот [McManus, 2003]. Определение молекулярных детерминант РНКаз бактерий, ответственных за проявление их цитотоксических свойств по отношению к злокачественным и нормальным клеткам человека, а также изучение их иммуногенной активности позволит обосновать возможность применения микробных РНКаз и биоинженерных конструкций на их основе в лечении злокачественных новообразований и наметить технологические подходы к решению проблемы получения функционально активных терапевтических белков.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явились оценка цитотоксического действия микробных РНКаз на злокачественные клетки крови и клетки солидных опухолей, а также характеристика показателей селективности действия, генотоксичности и иммуногенности ферментов, позволяющие экспериментально подтвердить потенциальную возможность использования РНКаз как средств щадящей противоопухолевой терапии. В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Исследовать токсические эффекты РНКаз Bacillus intermedius (биназы) и Streptomyces aureofaciens (РНКазы Sa) и их мутантов при воздействии на клетки бактерий.

2. Охарактеризовать генотоксическую активность микробных РНКаз и их мутантов в прокариотических тест-системах.

3. Исследовать апоптогенное действие РНКазы Bacillus intermedins — биназы и ее мутантов со сниженной каталитической активностью на культуры нормальных и злокачественных клеток крови, а также на клетки солидных опухолей животных.

4. Охарактеризовать иммуногенные свойства РНКазы В. intermedius. по анализу специфических активационных маркеров Т-клеток.

5. На основе полученных данных оценить вклад отдельных молекулярных детерминант, а именно катионности и каталитической активности РНКаз в апоптогенное и цитотоксическое действие ферментов.

Научная новизна. Впервые установлены токсические эффекты по отношению к грамположительным и грамотрицательным бактериям высоких концентраций биназы, ее мутанта Lys26Ala и катионных мутантов РНКазы Sa (5К, 7К). Впервые показано генотоксическое действие катионных бактериальных РНКаз в тесте Эймса по индукции мутаций от ауксотрофности к прототрофности по гистидину у бактерий Salmonella typhimurium ТА 100 и в тесте по индукции SOS-ответа у Escherichia coli PQ 37, при этом генотоксические свойства коррелировали с поверхностным зарядом молекулы фермента. В работе впервые с помощью методов проточной цитометрии, электрофореза в пульсирующем поле и дифференциального окрашивания зафиксировано апоптоз-индуцирующее действие биназы по отношению к клеткам солидных опухолей (карцинома легких А549) и клеткам миелогенного лейкоза К562 и проведен сравнительный анализ апоптогенной активности РНКазы по отношению к нормальным и опухолевым клеткам. Установлено, что в отношении ^трансформированных аналогов опухолевых клеток фермент не проявляет апоптоз-индуцирующих свойств. Впервые охарактеризован решающий вклад в апоптогенность биназы ее каталитической активности, то есть показано, что необходимым условием апоптогенности фермента является расщепление доступной клеточной РНК. Впервые выявлено, что вклад каталитической активности РНказ в поражение клеток солидных опухолей более значим в сравнении с ролью рибонуклеолитической активности в индукцию апоптоза злокачественных клеток крови. Апоптические свойства катионных мутантов РНКазы 8а и биназы продемонстрированы в отношении клеточных линий нормальных и гоу-трансформированных фибробластов, а также эмбриональных клеток почек человека, нормальных и искусственно экспрессирующих гены кальций-зависимых калиевых каналов, роль которых представляется важной для реализации цитотоксичности РНКаз. Впервые выявлено, что биназа, а также ее мутант Ьуэ26А1а с пониженной каталитической активностью не индуцировали экспрессии специфических маркеров иммунного ответа (СЭ69 и у-интерферона) в популяции СБ8+ и СБ4+ Т-лимфоцитов, что свидетельствует об отсутствии у цитотоксичных ферментов свойств индуктора поликлонального Т-клеточного ответа по типу суперантигена.

Практическая значимость. Актуальность проблемы раковых заболеваний заставляет вести постоянный поиск новых препаратов и подходов для лечения злокачественных новообразований, поэтому любая возможность получения новых щадящих средств противоопухолевой терапии, избирательно поражающих злокачественные клетки, имеет несомненную практическую ценность. Настоящая работа особенно важна в связи с тем, что обосновывает индукцию бактериальными РНКазами преимущественной гибели опухолевых клеток путем апоптоза, не нарушающего функционального состояния нормальных тканей организма. В данной работе обоснована возможность получения препаратов с селективным апоптоз-индуцирующим действием в отношении малигнизированных клеток на базе каталитически активных катионных микробных РНКаз. Выяснение роли отдельных молекулярных детерминант в токсическом действии РНКаз, в частности весомого вклада зарядовых свойств и каталитической активности молекулы, а также анализ механизма действия этих ферментов позволят разработать подходы к целенаправленному получению высокотоксичных для малигнизированных

•клеток препаратов нового поколения, альтернативных известным ДНК-повреждающим химиотерапевтическим агентам. Установленное отсутствие у биназы свойств инициатора неспецифического иммунного ответа позволяет в первом приближении обосновать возможность использования этого фермента, а также биоинженерных конструкций на его основе в терапии опухолевых заболеваний.

В ходе экспериментальной работы разработана и опробована оригинальная методика цитометрического определения апоптозиндуцирующего действия соединений, выгодно отличающаяся от классической меньшей стоимостью за счет замены использования дорогостоящих препаратов (аннексина и пропидиума йодида) для цитофлуорометрической фиксации апоптических изменений клеток на более дешевые аналоги (мероцианин 540 и 7-аминоактиномицин Б).

Связь работы с научными программами и собственный - вклад автора в исследования. Работа в течение 2002-2005гг. проводится в соответствии с планом НИР КГУ (№ гос. регистрации 01.2.00 104982 «Биосинтез, биогенез, классификация, физиологические функции новых микробных ферментов и возможные области их практического применения»). Исследования автора как исполнителя данной тематики поддержаны грантами Российского фонда фундаментальных исследований (04-04-49385), фонда Североатлантического союза (Ь8Т.СЬа979534), фонда "Университеты России - фундаментальные исследования" (ур. 11.01.004) и фонда академии наук Республики Татарстан (НИОКР АН РТ 03-3.10-292), госконтрактами 02.434.11.3020 «Конструирование противоопухолевых препаратов селективного действия на основе микробных рибонуклеаз» и «Центр коллективного пользования КГУ» 02.451.11.7019 (2005-2006гг.), а также программой «Развитие научного потенциала высшей школы РНП.2.1.1.1005. Авторские исследования получили персональную поддержку фонда Палаты депутатов г. Берлина (2003-2004гг.). Научные положения диссертации и выводы базируются на результатах собственных исследований автора. Цитометрические исследования и фиксацию апоптических изменений клеток проводили на базе института Медицинской иммунологии Шарите, Берлин, Германия.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на международных и региональных конференциях: VI международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды» (Пермь, 2005), XIII международной научной конференции «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение», (Казань, 2005г.), V конференции Научно-образовательного Центра КГУ «Материалы и технологии XXI века» (Казань, 2005г.), 79-й Всероссийской студенческой научной конференции, посвященной 1000-летию Казани (2005г.), 9-й Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых (Пущино, 2005г.), итоговых научных конференциях Казанского Государственного Университета (2003г. - 2005г.), а также на семинарах кафедры микробиологии и Института Биологии Казанского Государственного Университета.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, раздела экспериментальных исследований и обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 134 страницах машинописного текста, включает 6 таблиц, 28 рисунков. Библиография содержит 221 наименование российских и зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Зеленихин, Павел Валерьевич

выводы

1. Биназа и ее мутантные варианты Lys26Ala и His101Glu с пониженной каталитической активностью нетоксичны для тестерных штаммов грамотрицательных (Salmonella thyphimurium) и грамположительных {Bacillus subtilis) бактерий. Среди РНКаз Streptomyces aureofaciens токсичностью в отношении тестерного штамма Escherichia coli обладают лишь катионные варианты 5К и 7К, обладающие увеличенным по сравнению с ферментом дикого типа зарядом молекул.

2. У РНКазы Sa и ее мутантов 3NQ, 5NQ с частично нейтрализованным отрицательным зарядом молекулы и мутантов с дополнительным терминальным положительным зарядом SacG2K2, K2NSa, K2n5NQ генотоксические свойства не обнаружены. Генотоксичностью, определенной по способности индуцировать SOS-ответ клетки, обладают только мутанты РНКазы Sa с увеличенной катионностью - 5К и 7К.

3. Апоптоз-индуцирующие свойства продемонстрированы для

О (л катионных мутантов РНКазы Sa 5К, 7К, биназы и ее мутанта Lys~ Ala с пониженной каталитической активностью. Зафиксированы морфологические изменения клеток под действием бактериальных РНКаз: конденсация хроматина, вакуолизация цитоплазмы, образование пузырчатых выростов мембран, апоптических телец, а также физиологические изменения: повышение концентрации внутриклеточного Ca и падение мембранного потенциала митохондрий обработанных РНКазами клеток.

4. Установлено, что биназа и ее каталитически активный мутант 26

Lys Ala обладают селективным апоптоз-индуцирующим действием в отношении клеток миелоидного лейкоза К562, ингибируя пролиферацию и вызывая апоптоз злокачественных клеток, в отличие от лимфоцитов периферической крови здоровых доноров. Обнаружено, что уровень каталитической активности, необходимый для индукции апоптоза клеток солидных опухолей, выше, чем таковой для злокачественных клеток крови.

5. В популяции CD4+ и CD8+ Т лимфоцитов крови человека РНКаза Bacillus intermedius не стимулирует экспрессию активационных маркеров CD69 и у-интерферона, что указывает на отсутствие у биназы свойств индуктора поликлонального Т-клеточного ответа.

6. Токсические, генотоксические и апоптогенные эффекты бактериальных РНКаз детерминированы главным образом катионными и каталитическими свойствами. Для проявления ферментом цитотоксичности он должен сохранять определенный уровень рибонуклеолитической активности и обладать положительным зарядом молекулы.

Автор благодарит доктора химических наук Г.И Яковлева (Институт молекулярной биологии РАН) за конструирование мутантов рибонуклеазы Bacillus intermedius; кандидата химических наук В.А. Митъкевича (Институт молекулярной биологии РАН) за определение каталитических параметров бактериальныхрибонуклеаз; доктора биологических наук A.A. Макарова (Институт молекулярной биологии РАН) за участие в обсуждении результатов; доктора химических наук Н. Пейса (Техасский университет) за создание и предоставление мутантов рибонуклеазы Streptomyces aureofaciens; доктора биологических наук Ф. Керна (Институт медицинской иммунологии Шарите) за возможность проведения цитометрии на базе его лаборатории.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В исследовании роли характеристик молекул РНКаз, важных для цитотоксичности, достигнут определенный успех. Получены четкие доказательства необходимости наличия некоторого уровня каталитической активности для проявления цитотоксичности. Поэтому одним из определяющих цитотоксичность свойств РНКазы является ее способность избегать взаимодействия с цитозольным ингибитором РНКаз, блокирующим каталитические функции фермента [Leland, Raines, 2001].

Именно бактериальные РНКазы, в силу их филогенетической удаленности, не связываются с цитозольным ингибитором, который эволюционно предназначен для защиты клетки от действия собственных рибонуклеаз. В связи с этим свойством бактериальные РНКазы обладают несомненным преимуществом для разработки в качестве основы новых противоопухолевых препаратов, которая исторически начиналась с РНКазами животного происхождения , в частности, с РНКазы A [Leland, Raines, 2001]. Наши исследования показали, что среди микробных РНКаз высокотоксичными оказались ферменты с достаточным уровнем п г каталитической активности: биназа, ее мутант Lys Ala, и катионные мутанты РНКазы Sa - 5К и 7К. Оказалось, что только те молекулы каталитически активных РНКаз, которые несут положительный заряд, способны к индукции токсических, генотоксических и апоптических эффектов. Ряд авторов ранее отмечал роль положительного заряда в цитотоксичности, при этом молекула РНКазы может быть катионной по природе, то есть как дикий тип фермента (онконаза [Saxena et al., 2003]), либо модифицированной генно-инженерным путем [Ilinskaya et al., 2002] или путем химической модификации [Futami et al., 2002].

Как взаимодействие РНКаз с клеточными компонентами приводит к апоптической гибели клетки, до сих пор до конца не установлено. На основе данных литературы мы составили сводную таблицу 6, отражающую современное представление о клеточных мишенях действия экзогенных РНК аз.

Фактически главной мишенью действия РНКаз является РНК, многообразие форм которой охватывает как связанные с белками РНК (рибосомные, информационные, РНК в составе рибонуклеопротеинов -сигнал-узнающих частиц, так и не связанные с белками транспортные РНК, малые интерферирующие и некодирующие микроРНК [McManus, Sharp, 2002; McManus, 2003].

Фермент-субстратные взаимодействия экзогенной РНКазы с клеточной РНК зависят от доступности РНК-содержащих компонентов клетки действию фермента. Информация о наличии РНК в составе клеточных структур неоднозначна, поскольку содержание РНК — динамический показатель, зависящий от внешних условий, стадии развития, клеточного цикла и других факторов. На сегодня одним из особенно привлекательных предположений является возможное участие РНКаз в регуляции процессов РНК-интерференции. Предполагают, что онконаза расщепляет малые некодирующие РНК (микроРНК, или miRNA), являющиеся антисмысловыми посттрансляционными репрессорами мРНК различных белков-регуляторов клеточного цикла [Ardelt et al., 2003]. Поскольку последние представляют собой двуспиральные РНК, вклад каталитической активности в цитотоксические эффекты, вероятно, во многом будет связан с каталитической активностью РНКаз по отношению к дсРНК.

Наш вклад в расшифровку механизмов действия бактериальных РНКаз заключается в подтверждении роли клеточных мишеней, таких, как онкоген ras и кальций-зависимых калиевых каналов, в реализации токсических эффектов РНКаз. Нами осуществлена прямая регистрация апоптических изменений ряда клеток при действии цитотоксических бактериальных РНКаз (рис. 23-25, 27), а также непосредственно в живых

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Зеленихин, Павел Валерьевич, 2006 год

1. Акоев И.Г. Биофизика познает рак / И.Г. Акоев // М.:Наука,- 1988.-160с.

2. Алексеева И.И. Противовирусная активность модифицированных РНКаз / И.И. Алексеева, Б.М. Куриненко, Г.А. Пензикова, М.Г. Орешина // Антибиотики.- 1982.- Вып.4.- С.21-28.

3. Алексеева И.И. Сравнительное изучение противовирусной активности панкреатической и микробной РНКаз / И.И. Алексеева, Б.М. Куриненко, Г.И. Клейнер, А.Ж. Скуя, Г.А. Пензикова, М.Г. Орешина // Антибиот. и мед. технол.- 1981.- Т.26.- №7,- С.527-532.

4. Астапович Н.И. Нуклеотидный фонд и метаболизм микробной клетки / Н.И. Астапович // Минск: Наука и техника.- 1979.- 152с.

5. Беляева М.И. Нуклеодеполимеразы бактерий и их противоопухолевое действие / М.И. Беляева, А.Н. Нужина // Бактериальные нуклеазы и их действие на опухолевый рост. Казань:Изд-во КГУ.- 1969.- С.49-78.

6. Власов В.В. Олигонуклеотиды основа геннаправленных терапевтических препаратов / В.В. Власов // Вестник РАН.- 2004.- Т. 74.-С.419-423.

7. Ильинская О.Н. Генотоксические эффекты рибонуклеазы in vivo / О.Н. Ильинская, X. Фрай // Биополимеры и клетка.- 2000.- Т.4.- С. 270-274.

8. Ильинская О.Н. Клеточные мишени противоопухолевого действия микробных рибонуклеаз /О.Н. Ильинская, А.И. Колпаков // Наукоемкие технологии.- 2004.- Т.4.- С.61-67.

9. Ильинская О.Н. Краткосрочные тест-системы для определения генотоксичности / О.Н.Ильинская, А.Б.Маргулис // Методическое руководство. -Казань: изд-во КГУ. -2005. -31с.

10. Ильинская О.Н. Почему рибонуклеазы вызывают гибель раковых клеток / О.Н. Ильинская, A.A. Макаров // Молекулярная биология — 2005— Т.39.- № 1.- С.1-11.

11. Индулен М.К. Антивиручная активность и механизм действия микробной РНКазы / М.К. Индулен, Д.Р. Дзегузе, H.A. Замятина // Всесоюзн. конф. «Нуклеазы микроорганизмов и их практическое использование». Тезисы докладов. Рига.- 1985.- С. 15-19.

12. Конев C.B. Структурная лабильность биологических мембран и регуляторные процессы / C.B. Конев // Минск.: Наука и техника.- 1985.-345с.

13. Курбанов Ф.Т. Сравнительное изучение РНКаз барназы и биназы: метод гибридных генов / Ф.Т. Курбанов, A.A. Шульга, Б. Ранджбар, A.A. Макаров, М.П. Кирпичников // Молекулярная Биология.- 1997.- Т.31.-С.1057-1063.

14. Куриненко Б.М. Изучение токсичности РНКазы Bacillus intermedius in vitro и in vivo / Б.М. Куриненко, E.B. Сергеева, Л.И. Собчук и др. // Антибиот. химиотерап.- 1989.- Т.34.- С.266-270.

15. Куриненко Б.М. Механизмы биологического действия нуклеаз / И.Б. Лещинская, В.П. Варламов, Б.М. Куриненко // Нуклеазы бактерий. Казань:Изд-во КГУ.- 1991.- С.153-230.

16. Куриненко Б.М. Противоопухолевая активность рибонуклеазы Bacillus intermedins 7Р / Б.М. Куриненко, Л.И. Собчук, С.А. Хайбуллина, С.И. Карпова//Эксперимент, онкол.- 1988.- Т.Ю.- С.54-57.

17. Нехорошкова З.М. Влияние рибонуклеаз на гуморальный иммунитет экспериментальных животных / З.М. Нехорошкова, И.В. Мирошниченко, Б.М. Куриненко, А.А. Ярилин // Антибиот. химиотерап.- 1988.- Т.9.-С.676-681.

18. Самуилов В.Д. Прграммируемая клеточная смерть / В.Д. Самуилов, А.В. Олескин, Е.М. Лагунова // Биохимия.- 2000.- Т.65.- Вып.8.- С. 10291046.

19. Танирбергенов Т. Штаммы Salmonella typhimurium, используемые при изучении мутагенов окружающей среды / Т. Танирбергенов, С. Абилев // Цитология и генетика. -1989. -Т.23.- N 6. -С.47-56.

20. Тарчевский И.А. Регуляторная роль деградации биополимеров и липидов / И.А. Тарчевский // Физиология растений.- 1992.- Т.39.- №6.-С.1235-1223

21. Фонштейн Л.М. Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей среды с помощью бактериальных тест-систем / Л.М. Фонштейн, С.К. Абилев, Е.В. Бобринев // Методические указания. М.- 1985.-34с.

22. Шлегель Г. Микробиология. / Г. Шлегель // М:Мир.- 1987.- 566с.

23. Шнейдер М.А. / М.А. Шнейдер, Е.Б. Штильбанс, Э.Г. Куприянов и др. // Антибиотики и химиотерапия.- 1990.- Т.35,- Вып.З.- С.27-31.

24. Abraham А.Т. RNA cleavage and inhibition of protein synthesis by bleomycin / A.T. Abraham, Lin J., D.L. Newton, S. Rybak, S. Hecht // Chem. Biol.- 2003.- V.10.- P.45-52.

25. Alifano P. Ribonuclease E provides substrates for ribonuclease P-dependent processing of a polycistronic mRNA / P. Alifano, F. Rivellini, C. Piscitelli, C.M. Arraiano, C.B. Bruni // Genes Dev.- 1994.- V.8.- P.3021-3031.

26. Altman S. Ribonuclease P. In the RNA world / S. Altman, L.A. Kirsebom // 2th ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press.- 1999.- P.351-380.

27. Antignani A. Antitumor action of seminal ribonuclease, its dimeric structure, and its resistance to the ribonuclease inhibitor / A. Antignani, M. Naddo, M.V. Cubellis, A. Russo, G. D'Alessio // Biochemistry.- 2001.- V.40.-P. 3492-3496.

28. Ardelt B. Cytotoxic ribonucleases and RNA interference (RNAi) / B. Ardelt, W. Ardelt, Z. Darzynkiewicz // Cell Cycle.- 2003.- V.2.- P.A10-F12.

29. Baaklini I. RNase HI overproduction is required for efficient full-length RNA synthesis in the absence of topoisomerase I in Escherichia coli / I. Baaklini, C. Hraiky, F. Rallu, Y.C. Tse-Dinh, M. Drolet // Mol. Microbiol.2004.- V.54.- P.198-211.

30. Batey R.T. Structural and energetic analysis of metal ions essential to SRP signal recognition domain assembly / R.T. Batey, J.A. Doudna // Biochemistry.-2002.-V.41.-P. 11703-11710.

31. Bennasser Y. Evidence that HIV-1 encodes an siRNA and a suppressor of RNA silencing / Y. Bennasser, S.Y. Le, M. Benkirane, K.T. Jeang // Immunity.2005.-V.22.-P.607-619.

32. Benner S.A. Extracellular 'communicator RNA' / S.A. Benner // FEBS Lett.- 1988.- V.233.- P.225-228.

33. Blaszczyk J. Noncatalytic assembly of ribonuclease III with double-stranded RNA / J. Blaszczyk, J. Gan, J.E. Tropea, D.L. Court, D.S. Waugh, X. Ji // Structure (Camb).- 2004.- V.12.- P. 457-466.

34. Borenfreund E. Comparison of two in vitro cytotoxicity assays the neutral red and tetrazolium MTT test / E. Borenfreund, H. Babich, N. Martin-Alguacil // Toxic, in vitro - 1988. - V.2.- N.1.-P.1-6.

35. Bracale A. A role for the intersubunit disulfides of seminal RNase in the mechanism of its antitumor action / A. Bracale, F. Castaldi, L. Nitsch, G. D'Alessio // Eur. J. Biochem.- 2003.- V.270.- P.1980-1987.

36. Bracale A. Essential stations in the intracellular pathway of cytotoxic bovine seminal ribonuclease / A. Bracale, D. Spalletti-Cernia, M. Mastronicola, F. Castaldi, R. Mannucci, L. Nitsch, G. D'Alessio // Biochem. J.- 2002.- V.362.-P. 553-560.

37. Brecht M. TbMP42, a protein component of the RNA editing complex in African trypanosomes has endo-exoribonuclease activity / M. Brecht, M. Niemann, E. Schluter, U.F. Muller, K. Stuart, H.U. Goringer // Mol. Cell.-2005.- V.17.- P.621-630.

38. Bystrom J. Monocytes, but not macrophages, produce the eosinophil cationic protein / J. Bystrom, T. Tenno, L. Hakansson, K. Amin, A. Trulson, E. Hogbom, P. Venge // APMIS.- 2001.- V.109.- N.7-8.- P.507-516.

39. Cai T. Characterization of ribonuclease MRP function / T. Cai, M.E. Schmitt//Genetics.- 2001.- V.342.- P. 135-142.

40. Cairrao F. Cold shock induction of RNase R and its role in the maturation of the quality control mediator SsrA/tmRNA / F. Cairrao, A. Cruz, H. Mori, C.M. Arraiano //Mol. Microbiol.- 2003.- V.50.- P. 1349-1360.

41. Carmell M.A. RNase III enzymes and the initiation of gene silencing / M.A. Carmell, GJ. Hannon //Nat. Struct. Mol. Biol.- 2004,- V.l 1.- P.214-218.

42. Carr D.J. Interferon-beta suppresses herpes simplex vims type 1 replication in trigeminal ganglion cells through an RNase L-dependent pathway / D.J. Carr, K. Al-khatib, C.M. James, R. Silverman // J. Neuroimmunol.- 2003.-V.141.- N.l-2.- P.40-46.

43. Chen H. РНКазная активность однонитевых рибосома-инактивирующих белков / Н. Chen, L. Hua, V. Wang // Progr.Biochem.Biophys.(kht.).- 1996.- V.23.- N5.- P.453-456.

44. Cheng B. RNase H overproduction allows the expression of stress-induced genes in the absence of topoisomerase I / B. Cheng, S. Rui, C. Ji, V.W. Gong, Т.К. Van Dyk, M. Drolet, Y.C. Tse-Dinh // FEMS. Microbiol. Lett.-2003.- V.221.- P.237-242.

45. Chi X. Potassium channel openers prevent beta-amyloid toxicity in bovine vascular endothelial cells / X. Chi, E.T. Sutton, G. Hellermenn, J.M. Price // Neurosci Lett.- 2000.- V.290.- P.9-12.

46. Chirino A .J. Minimizing the immunogenicity of protein therapeutics / A.J. Chirino, M.L. Ary, S.A. Marshall // DDT.- 2004.- V.9.- N.2.- P.82-90.

47. Chu S. The RNA of RNase MRP is required for normal processing of ribosomal RNA / S. Chu, J.M. Zengel, L. Lindahl // Proc. Natl. Acad. Sci.-1994.- V.18.- P.659-663.

48. Coburn G.A. Potent and specific inhibition of HIV-1 replication using RNA interference / G.A. Coburn, B.R. Cullen // J. Virol.- 2002.- V.76.- P.9225-9231.

49. Cohen L. Accumulation of nucleotides by starved Escherichia coli cells as a probe for the involvement of ribonucleases in ribonucleic acid degradation / L. Cohen, R. Kaplan // J. Bacteriol.- 1977.- V.2 P.651-657.

50. Costabel U. Atlas der bronchoalveolaeren Lavage / U. Costabel // Georg Thieme Verlag Stuttgart New York.- 1994.- P.80.

51. Couzin J. Small RNAs make big splash / J. Couzin // Science.- 2002.-V.298.- P.2296-2297.

52. D'Alessio G. New and cryptic biological messages from RNases / G. D'Alessio // Trends Cell Biol.- 1993.- V.3.- P. 106-109.

53. De Lorenzo C. A new RNase-based immunoconjugate selectively cytotoxic for ErbB2-overexpressing cells / C. De Lorenzo, A. Nigro, R. Piccoli, G. D'Alessio // FEBS Lett.- 2002.- V.516.- N.l-3.- P.208-212.

54. Deutscher M.P. Exoribonucleases and their multiple roles in RNA metabolism / M.P. Deutscher, Z. Li // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol.-2001.- V.66.- P.67-105.

55. Deutscher M.P. tRNA processing nucleases / M.P. Deutscher // tRNA: Structure, Biosynthesis and Function / D. Soll, U. RajBhandary (eds.) ASM, Washington, DC.- 1995.- P.51-65

56. Dubrovsky E.B. Drosophila RNase Z processes mitochondrial and nuclear pre-tRNA 3' ends in vivo / E.B. Dubrovsky, V.A. Dubrovskaya, L. Levinger, S. Schiffer, A. Marchfelder //Nucleic. Acids. Res.- 2004.- V.32.- N.I.- P.255-262.

57. Elbashir S.M. RNA interference is mediated by 21- and 22-nucleotide RNAs / S.M. Elbashir, W. Lendeckel, T. Tuschl // Genes Dev.- 2001.- V.15.-P. 188-200.

58. Endo Y. Effective inhibition of HIV-1 replication in cultured cells by external guide sequences and ribonuclease / Y. Endo, N. Miyano-Kurosaki, M. Kitano, Y. Habu, H. Takaku // Nucleic Acids Res. Suppl.- 2001.- N.I.- P. 213214.

59. Falconer M. High-throughput screening for ion channel modulators / M. Falconer, F. Smith, S. Sura-Narwal, G. Congrave, Z. Liu, P. Hayter, G. Ciaramella, W. Keighley, P. Haddock, G. Waldron, A. Sewing // J. Biomolec. Screen.- 2002.- V.7.- P. 460-465.

60. Fire A. Potent and specific genetic genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans / A. Fire, S. Xu, M.K. Montgomery, S.A. Kostas, S.E. Driver, C.C. Mello //Nature.- 1998.- V.391.-P.806-811.

61. Frank D.N. Ribonuclease P: unity and diversity in a tRNA processing ribozyme / D.N. Frank, N.R. Pace // Annu. Rev. Biochem.- 1998.- V.67.- P. 153180.

62. Frisch S.M. Methods for studying anoikis / S.M. Frisch // Methods Mol. Biol.- 1999.- V.129.- P.251-256.

63. Futami J. Preparation of potent cytotoxic ribonucleases by cationization: enhanced cellular uptake and decreased interaction with ribonuclease inhibitor by chemical modification of carboxyl groups / J. Futami, T. Maeda, M. Kitazoe,

64. E. Nukui, H. Tada, M. Seno, M. Kosaka, H. Yamada // Biochemistry.- 2001.-V.40.- N.25.-P.7518-7524.

65. Gaforio J. Phagocytosis of apoptotic cells assessed by flow cytometry using 7-Aminoactinomycin D / J. Gaforio, M. Serrano, I. Algarra, E. Ortega, G. Alvarez de Cienfuegos // J. Immunol. Meth.- 2002.- V.261.- 129-139.

66. Gho Y.S. Antiplasmin activity of a peptide that binds to the receptor-binding site of angiogenin / Y.S. Gho, W.H. Yoon, C.B. Chae // J. Biol. Chem.-2002.- V.277.- P.9690-9694.

67. Gill T. RNase MRP cleaves the CLB2 mRNA to promote cell cycle progression: novel method of mRNA degradation / T. Gill, T. Cai, J. Aulds, S. Wierzbicki, M.E. Schmitt // Mol. Cell. Biol.- 2004.- V.24.- P.945-953.

68. Glukhov B.N. Ribonuclease treatment of tick-borne encephalitis / B.N. Glukhov, A.P. Jerusalimsky, V.M. Canter, R.I. Salganik // Arch Neurol.- 1976.-V.33.- N.9.- P.598-603.

69. Grabarek J. Activation of caspases and serine proteases during apoptosis induced by onconase (Ranpirnase) / J. Grabarek, B. Ardelt, L. Du, Z. Darzynkiewicz//Exp Cell Res.- 2002.- V.278.- N.I.- P.61-71.

70. Graham M.L. Pegaspargase: a review of clinical studies / M.L. Graham // Adv. Drug Deliv. Rev.- 2003.- V.10.- P. 1293-1302.

71. Haigis M.C. Secretory ribonucleases are internalized by a dynamin-independent endocytic pathway / M.C. Haigis, R.T. Raines // J. Cell Sci.- 2002.-V.116.- P. 313-324.

72. Harder J. Psoriatic scales: a promising source for the isolation of human skin-derived antimicrobial proteins // J. Harder, J.M. Schroder // J. Leukoc. Biol.- 2005.- V.77.- N.4.- P.476-486.

73. Harder J. RNase 7, a novel innate immune defense antimicrobial protein of healthy human skin Schroder / J. Harder, J.M. Schroder // J. Biol. Chem.-2002.- V.277.- N.48.- P. 46779-46784.

74. Hebert E.J. Contribution of a conserved asparagin to the conformational stability of ribonucleases Sa, Ba and T1 / E.J. Hebert, A. Giletto, J. Sevcik, L. Urbanikova, Wilson K.S., Z. Dauter, C.N. Pace // Biochemistry.- 1998.- V.37.-P.16192-16200.

75. Heidenreich O. Oncogene suppression by small interfering RNAs / O. Heidenreich // Curr. Pharm. Biotechnol.- 2004.- V.5.- P.349-354.

76. Heise T. Characterization of nuclear RNases that cleave hepatitis B virus RNA near the La protein binding site / T. Heise, L.G. Guidotti, F.V. Chisari // J. Virol.- 2001.- V.75.- N.15.- P.6874-6883.

77. Hooper L.V. Angiogenins: a new class of microbicidal proteins involved in innate immunity / L.V. Hooper, T.S. Stappenbeck, C.V. Hong, J.I. Gordon // Nat. Immunol.- 2003.- V.4.- N.3.- P.269-273.

78. Hugot K. A tobacco S-like RNase inhibits hyphal elongation of plant pathogens / K. Hugot, M. Ponchet, A. Marais, P. Ricci, E. Galiana // Mol. Plant. Microbe Interact.- 2002.- V.15.- N.3.- P.243-250.

79. Ilinskaya O.N. Bacillus intermedius ribonuclease as inhibitor of cell proliferation and membrane current / O.N. Ilinskaya, K. Decker, A. Koschinski, F. Dreyer, H. Repp // Toxicology.- 2001.- V.156.- P. 101-107.

80. Ilinskaya O.N. Bacterial ribonuclease: mutagenic effect in microbial testsystems / O.N. Ilinskaya, O.B. Ivanchenko, N.S. Karamova // Mutagenesis.-1995.- V.10.- N.3.- P.165-170.

81. Ilinskaya O.N. Changing the net charge from negative to positive makes ribonuclease Sa cytotoxic / O.N. Ilinskaya, F. Dreyer, V.A. Mitkevich, K.L. Shaw, C.N. Pace, A.A. Makarov // Protein Sci.- 2002.- V.ll.- N.10.- P. 25222525.

82. Ilinskaya O.N. Nephrotoxic effects of bacterial ribonucleases in the isolated perfused rat kidney / O.N. Ilinskaya, S. Vamvakas // Toxicology.-1997.- V.120.- P.55-63.

83. Ilinskaya O.N. SOS-inducing ability of native and mutant microbial ribonucleases / O.N. Ilinskaya, O.B. Ivanchenko, N.S. Karamova, L.V. Kipenskaya // Mut. Res.- 1996.- V.354.- P.203-209.

84. Ioannou Y.A. Quantitation of DNA fragmentation in apoptosis / Y.A. Ioannou, F.W Chen // Nucleic Acids Res.- 1996.- V.24.- P.992-993.

85. Iordanov M.S. Molecular determinants of apoptosis induced by the cytotoxic ribonuclease onconase: evidence for cytotoxic mechanisms different from inhibition of protein synthesis /M.S. Iordanov, O.P. Ryabinina, J. Wong,

86. T.H. Dinh, D.L. Newton, S.M. Rybak, B.E. Magun // Cancer Res.- 2000.- V.60.-N.7.- P.1983-1994.

87. Ishii R. Crystal structure of the tRNA 3' processing endoribonuclease tRNase Z from Thermotoga marítima / R. Ishii, A. Minagawa, H. Takaku, M. Takagi, M. Nashimoto, S. Yokoyama // J. Biol. Chem.- 2005.- V.280.- N.14.-P.14138-14144.

88. Izquierdo M. Short interfering RNAs as a tool for cancer gene therapy / M. Izquierdo // Cancer Gene. Ther.- 2005.- V.12.- P.217-227.

89. Jacque J.M. Modulation of HIV-1 replication by RNA interference / J.M. Jacque, K. Triques, M. Stevenson // Nature.- 2002.- V.418.- 435-438.

90. Kao R. Fungal ribotoxins: a family of naturally engineered targeted toxins? / R. Kao, J. Davies // Biochem. Cell Biol.- 1995.- V.73.- N.ll-12.-P.1151-1159.

91. Kao R. Molecular dissection of mitogillin reveals that the fungal ribotoxins are a family of natural genetically engineered ribonucleases // R. Kao, J. Davies // J. Biol. Chem.- 1999.- V.274.- N.18.- P.12576-12582.

92. Kennedy S. A conserved siRNA-degrading RNase negatively regulates RNA interference in C. elegans / S. Kennedy, D. Wang, G. Ruvkun // Nature.-2004.- V.427.- P.645-649.

93. Ketting R.F. Dicer functions in RNA interference and in synthesis of small RNA involved in developmental timing in C. elegans / R.F. Ketting, S.E.

94. Fischer, E. Bernstein, T. Sijen, G.J. Hannon, R.H. Plasterk // Genes Dev.- 2001.-V.15.- P.2654-2659.

95. Kim B. Glycosylation of onconase increases its conformational stability and toxicity for cancer cells / B.M. Kim, H. Kim, R. Raines, Y. Lee // Biochem. Biophys. Res. Comm.- 2004.- V.315.- P. 976-983.

96. Kim J.S. Mechanism of ribonuclease cytotoxicity / J.S. Kim, J. Soucek, J. Matousek, R.T. Raines // J. Biol. Chem.- 1995.- V.270.- N.52.- P. 31097-31102.

97. Kim K. Intracellular expression of engineered RNase P ribozymes effectively blocks gene expression and replication of human cytomegalovirus (6) / K. Kim, S. Umamoto, P. Trang, R. Hai, F. Liu // RNA.- 2004.- V.10.- N.3.-p. 438-447.

98. Kim K. RNase P ribozyme inhibits cytomegalovirus replication by blocking the expression of viral capsid proteins (a) / K. Kim, P. Trang, S. Umamoto, R. Hai, F. Liu // Nucleic Acids Res.- 2004.- V.32.- N.ll.- P.3427-3434.

99. Kishine M. Ribosomal RNA processing and an RNase R family member in chloroplasts of Arabidopsis / M. Kishine, A. Takabayashi, Y. Munekage, T. Shikanai, T. Endo, F. Sato // Plant. Mol. Biol.- 2004.-V.55.- N.4.- P.595-606.

100. Klaassen C.D. (Eds) Casarett and Doull's toxicolody: the basic science of poisons / C.D. Klaassen, M.O. Admur, J. Doull // 5th ed. McGraw-Hill, Heals Professions Division.- 1995. 111 lp

101. Klink T.A. Conformational stability is a determinant of ribonuclease A cytotoxicity / T.A. Klink, R.T. Raines // J. Biol. Chem.- 2000.- V.275.- N.23.- P. 17463-17467.

102. Kourie J.I. Ion channel formation and membrane-linked pathologies of misfolded hydrophobic proteins: The role of dangerous unchaperoned molecules / J.I. Kourie, C.L. Henry // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol.- 2002.- V.29.- P. 741753.

103. Krauss J. Efficient killing of CD22+ tumor cells by a humanized diabody-RNAse fusion protein / J. Krauss, M.A.Arndt, B.K. Vu, D.L. Newton, S. Seeber,

104. S.M. Rybak // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2005.- V.331.- N.2.- P.595-602.

105. Kreuze J.F. Viral class 1 RNase III involved in suppression of RNA silencing / J.F. Kreuze, E.I. Savenkov, W. Cuellar, X. Li, J.P. Valkonen // J. Virol.- 2005.- V.79.- P.7227-7238.

106. Kurinenko B.M Effect of ribonuclease from Bacillus intermedius on human blood lymphocytes/ B.M Kurinenko, R.Sh. Bulgakova., R.E. Davydov // FEMS Immunol. Med. Microbiol.- 1998.- V.21.- P. 117-122.

107. Kushner S.R. mRNA decay in Escherichia coli comes of age / S.R. Kushner 11 J. Bacteriol.- 2002.- V.184.- P.465 8-4665.

108. Kuwabara T. A small modulatory dsRNA specifies the fate of adult neural stem cells / T. Kuwabara, J. Hsieh, K. Nakashima, K. Taira, F.H. Gage // Cell.-2004.- V.116.- P. 779-793.

109. Kuznetsova I.L. Enhanced RNA cleavage within bulge-loops by an artificial ribonuclease / I.L. Kuznetsova, M.A. Zenkova, H.J. Gross, V.V. Vlassov //Nucleic Acids Res.- 2005.- V.33.- N.4.- P. 1201-1212.

110. Laakko T. Versatility of merocyanine 540 for the flow cytometric detection of apoptosis in human and murine cells / T. Laakko, L. King, P. Fraker //J. Immunol. Meth.- 2002.- V.261.- P. 129-139.

111. Lammli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of Bacteriophage T4 / U.K. Lammli //Nature.- 1970.- V.227.- P.680-685.

112. Lee K. RraA, a protein inhibitor of RNase E activity that globally modulates RNA abundance in E. coli / K. Lee, X. Zhan, J. Gao, J. Qiu, Y. Feng, R. Meganathan, S.N. Cohen, G. Georgiou // Cell.- 2003.- V.l 14.- P.623-634.

113. Lee Y. The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing / Y. Lee, C. Ahn, J. Han, H. Choi, J. Kim, J. Yim, J. Lee, P. Provost, O. Radmark, S. Kim, V.N. Kim //Nature.- 2003.- V.425.- P.415-419.

114. Leland P. Cancer chemotherapy ribonucleases to the rescue / P. Leland, R. Raines // Chemistry and Biology.- 2001.- V.8.- P405-413.

115. Leland P.A. A synamorphic disulfide bond is critical for the conformational stability and cytotoxicity of an amphibian ribonuclease / P.A. Leland, K.E. Staniszewski, B.M. Kim, R. Raines // FEBS Lett.- 2000.- V.477.-P.203-207.

116. Li G. An apoptotic signaling pathway in the interferon antiviral response mediated by RNase L and c-Jun NH2-terminal kinase / G. Li, Y. Xiang, K. Sabapathy, R.H. Silverman // J. Biol. Chem.- 2004.- V.279.- N.2.- P.l 123-1131.

117. Lingel A. Novel modes of protein-RNA recognition in the RNAi pathway /A. Lingel, M. Sattler// Curr. Opin. Struct. Biol.- 2005.- V.15.- P.107-115.

118. Liu J. Targeted ribonuclease can inhibit replication of hepatitis B virus / J. Liu, Y.H. Li, C.F. Xue, J. Ding, W.D. Gong, Y. Zhao, Y.X. Huang // World J. Gastroenterol.- 2003.- V.9.- N.2.- P.295-299.

119. Maeda T. Growth inhibition of mammalian cells by eosinophil cationic protein (a)/ T. Maeda, M. Kitazoe, H. Tada, R. de Llorens, D.S. Salomon, M. Ueda, H. Yamada, M. Seno // Eur. J. Biochem.- 2002,- V.269.- N.L- P. 307316.

120. Maeda T. RNase 3 (ECP) is an extraordinarily stable protein among human pancreatic-type RNases (6)/ T. Maeda, K. Mahara, M. Kitazoe, J. Futami, A. Takidini, M. Kosaka, H. Tada, M. Seno, H. Yamada // J. Biochem. (Tokyo).- 2002.- V.132.- P.737-742.

121. Makarov A.A. Cytotoxic ribonucleases: molecular weapons and their targets / A.A. Makarov, O.N. Ilinskaya // FEBS Lett.- 2003.- V.540.- P. 15-20.

122. Manning F.C.R. Apoptosis: inhibitor or instigator of carcinogenesis? / F.C.R. Manning, S.R. Patierno // Cancer Invest.- 1996.- V.14.- N5. P.455-465.

123. Maron D.M. Revised methods for the Salmonella mutagenicity test / D.M. Maron, B.N. Ames //Mutat. Res.- 1983.-N.113. P.174-210.

124. Martinez J. RISC is a 5' phosphomonoester-producing RNA endonuclease / J. Martinez, T. Tuschl // Genes Dev.- 2004.- V.18.- P.975-980.

125. Masaki H. The modes of action of colicins E5 and D, and related cytotoxic tRNases / H. Masaki, T. Ogawa // Biochimie.- 2002.- V.84.- P. 433438.

126. Masse E. Coupled degradation of a small regulatory RNA and its mRNA targets in Escherichia coli / E. Masse, F.E. Escorcia, S. Gottesman // Genes Dev.- 2003.-V.17.- P.2374-2383.

127. Matousek J. Antitumor activity and other biological actions of oligomers of ribonuclease A (a)/ J. Matousek, G. Gotte, P. Pouckova, J. Soucek, T. Slavik, F. Vottariello, M. Libonati // J. Biol. Chem.- 2003.- V.278.- P. 23817-23822.

128. Matousek J. Comprehensive comparison of the cytotoxic activities of onconase and bovine seminal ribonuclease (6)/ J. Matousek, J. Soucek, T. Slavik, M. Tomanek, J.E. Lee, R.T. Raines // Comp. Biochem. Physiol. Part C.-2003.- V.136.- P. 343-356.

129. Matousek J. Effect of hyaluronidase and PEG chain conjugation on the biologic and antitumor activity of RNase A / J. Matousek, P. Pouckova, D. Hlouskova, M. Zadvinova, J. Soucek, J. Skvor // J. Contr. Release.- 2002.-V.94.-P.401-410.

130. Matousek J. Ribonucleases and their antitumor activity / J. Matousek // Comp. Biochem. Physiol. C. Toxicol. Pharmacol.- 2001.- V.129.- P.175-191.

131. Mazzarella L. Bovine seminal ribonuclease: Structure at 1.9 A resolution / L. Mazzarella, S. Capasso, D. Demasi, G. Di Lorenzo, C.A. Mattia, A. Zagari // Acta Crystallogr. Sect. D.- 1993.- V.49.- P.389-402.

132. McGrath K. Immunology of streptokinase in human subjects / K. McGrath, R. Patterson // Clin Exp Immunol.- 1985.- V.2.- P.421-426.

133. McManus M.T. Gene silencing in mammals by small interfering RNAs / M.T. McManus, P.A. Sharp //Nature Reviews.- 2002.- V.3.- P.737-747.

134. McManus M.T. MicroRNAs and cancer / M.T. McManus // Semin Cancer Biol.- 2003.- V.13.- N.4.- P.253-258.

135. Mersch-Sundermann V. Genotoxicity of nitrated polycyclic aromatic hydrocarbons and related structures on Escherichia coli PQ37 (SOS-chromotest) / V. Mersch-Sundermann, S. Kern, F. Wintermann // Environ. And Molec. Mutagen.- 1991,- V.18.- P.41-50.

136. Mizejewski G.T. Biological role of alpha-fetoprotein in cancer: prospects for anticancer therapy / G.T. Mizejewski // Expert. Rev. Anticancer Ther.-2002.- V.2.- P.709-735.

137. Newton D.L. Unique recombinant human ribonuclease and inhibition of Kaposi's Sarcoma cell growth / D.L. Newton, S.M. Rybak // J National Cancer Institute.- 1998.- V.90.- N.23.- P.1778-1791.

138. Ngai P.H. A ribonuclease with antimicrobial, antimitogenic and antiproliferative activities from the edible mushroom Pleurotus sajor-caju / P.H. Ngai, T.B. Ng // Peptides.- 2004.- V.25.- N.L- P.l 1-17.

139. Notomista E. Contribution of chain termini to the conformational stability and biological activity of onconase / E. Notomista, F. Catanzano, G. Graziano, S. Di Gaetano, G. Barone, A. Di Donato // Biochemistry.- 2001.- V.40.- P. 9097-9103.

140. Novina C.D. siRNA-directed inhibition of HIV-1 infection / C.D. Novina, M.F. Murray, D.M. Dykxhoorn, P.J. Beresford, J. Riess, S.K. Lee, R.G. Collman, J. Lieberman, P. Shankar, P.A. Sharp // Nature Med.- 2002.- V.8.-P.681-686.

141. Nylund L. Mutagenicity testing of protein-contained and biological samples using Ames/Salmonella plate incorporation test and fluctuation test / L. Nylund, P. Einisto // Mut. Res.- 1993.- V.272.- P.205-214.

142. Olmo N. Cytotoxic mechanism of the ribotoxin alpha-sarcin. Induction cell death via apoptosis / N. Olmo, J. Turnay, G. Gonzalez de Butitrago, I. Lopez de Silanes, J.G. Gavilanes, M.A. Lizarbe // Eur. J. Biochem.- 2001.-V.268.- P. 2113-2123.

143. Otsuka Y. A novel endoribonuclease, RNase LS, in Escherichia coli / Y. Otsuka, T. Yonesaki // Genetics.- 2005.- V.169.- P. 13-20.

144. Park C.J. Pathogenesis-related protein 10 isolated from hot pepper functions as a ribonuclease in an antiviral pathway / C.J. Park, K.J. Kim, R. Shin, J.M. Park, Y.C. Shin, K.H. Paek // Plant J.- 2004.- V.37.- N.2.- P. 186-198.

145. Pedersen K. The bacterial toxin RelE displays codon-specific cleavage of mRNAs in the ribosomal A site / K. Pedersen, A.V. Zavialov, M.Y. Pavlov, J. Elf, K. Gerdes // Cell.- 2003.- V.l 12.- P. 131-140.

146. Prior T.I. Barnase toxin: a new chimeric toxin composed of pseudomonas exotoxin A and barnase / T.I. Prior, D.J. FitzGerald, I. Pastan // Cell.- 1991.-V.64.- N.5.- P.1017-1023.

147. Prior T.I. Studies on the activity of barnase toxins in vitro and in vivo / T.I. Prior, S. Kunwar, I. Pastan // Bioconjug Chem.- 1996.- V.7.- N.I.- P.23-29.

148. Psarras K. Targeting activated lymphocytes with an antirely human immunotoxin analogue: human pancreatic RNasel-human IL-2 fusion / K. Psarras, M. Ueda, M. Tanabe, M. Kitajima, S. Aiso, S. Komatsu, M. Seno // Cytokine.- 2000.- V.l2.- P.786-790.

149. Quillardet P. SOS-chromotest, a direct assay of a SOS-function in Escherichia coli K12 to measure genotoxity / P. Quillardet, O. Huisman, R. D Ari, M. Hofnung// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1982. -V. 79. -P. 5971-5975.

150. Ran S. Increased exposure of anionic phospholipids on the surface of tumor blood vessels / S. Ran, A. Downes, P.E. Thorpe // Cancer Res.- 2002.-V.62.-P. 6132-6140.

151. Ran S. Phosphatidylserine is a marker of tumor vasculature and potential target for cancer imaging and therapy / S. Ran, P.E. Thorpe // Inter. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys.- 2002.- V.54.- P. 1479-1484.

152. Rangarajan S. RNase P as a tool for disruption of gene expression in maize cells / S. Rangarajan, M.L. Raj, J.M. Hernandez, E. Grotewold, V. Gopalan // Biochem. J.- 2004.- V.380.- P.611-616.

153. Rathore D. Cytotoxic activity of ribonucleolytic toxin restrictocin-based chimeric toxins targeted to epidermal growth factor receptor / D. Rathore, J. Batra // FEBS Lett.- 1997.- V.407.- N.3.- P.275-279.

154. Reibarkh M. Three-dimensional structure of binase in solution / D. Reibarkh, D. Nolde, L. Vasilieva, E. Bocharov, A. Shulga, M. Kirpichnikov, A. Arseniev // FEBS Lett.- 1998.- V.431.- N.2.- P.250-254.

155. Rodriguez L. Assessment by flow cytometry of cytokine production in malnourished children / L. Rodriguez, C. Gonzalez, L. Flore, L. Jimenez-Zamudio, J. Graniel, R. Ortiz// Clin. Diagn. Lab. Immunol.- 2005.- V.4.- P.502-507.

156. Rosenberg H.F. Eosinophils, eosinophil ribonucleases, and their role in host defense against respiratory virus pathogens / H.F. Rosenberg, J.B. Domachowske //J. Leukoc. Biol.- 2001.- V.70.- N.5.- P.691-698.

157. Rosenberg H.F. Eosinophils, ribonucleases and host defense: solving the puzzle / H.F. Rosenberg, J.B. Domachowske // Immunol. Res.- 1999.- V.20.-N.3.- P.261-274.

158. Rosenberg H.F. Recombinant human eosinophil cationic protein. Ribonuclease activity is not essential for cytotoxicity / H.F. Rosenberg // J.Biol.Chem.- 1995.-V.270.-P. 7876-7881.

159. Roy F.L. A newly discovered function for RNase L in regulating translation termination / F.L. Roy, T. Salehzada, C. Bisbal, J.P. Dougherty, S.W. Peltz // Nat. Struct. Mol. Biol.- 2005.- V.12.-N.6.- P.505-512.

160. Sanjeev S. Potential nuclease-based strategies for HIV gene therapy / S. Sanjeev, J. Sadhna//Frontiers in bioscience.- 2000.- V.5.- P.556-579.

161. Saxena S.K. Entry into cells and selective degradation of tRNAs by a cytotoxic member of the RNase A family / S.K. Saxena, R. Sirdeshmukh, W. Ardelt, S.M. Mikulski, K. Shogen, RJ. Youle // J Biol Chem.- 2002,- V.277.-N.17.- P.15142-15146.

162. Saxena S.K. Inhibition of HIV-1 production and selective degradation of viral RNA by an amphibian ribonuclease / S.K. Saxena, M. Gravell, Y.N. Wu, S.M. Mikulski, K. Shogen, W. Ardelt, R.J. Youle // J. Biol. Chem.-1996.-V271.- N34.- P. 20783-20788.

163. Saxena S.K. Onconase and its therapeutic potential / S.K. Saxena, K. Shogen, W. Ardelt // Lab. Med.- 2003.- V.34.- P.380-387.

164. Scharovsky O.G. Inhibition of ras oncogene: a novel approach to antineoplastic therapy / O.G. Scharovsky, V.R. Rozados, S.I. Gervasoni, P. Matar // J. Biochem. Sci.- 2000.- V.7.- P.292-298.

165. Schmittschmitt J.P. The role of protein stability, solubility, and net charge in amyloid fibril formation / J.P. Schmittschmitt, M. Scholtz // Protein Sci.-2003.- V.12.- P. 2374-2378.

166. Sevcik J. Determination and restrained least-squares refinement of the structures of ribonuclease Sa and its complex with 3'-guanylic acid at 1.8 A resolution / J. Sevcik, E. Dodson, G. Dodson // Acta Crystallogr.- 1991.- V.47.-N.2.- P.240-253.

167. Sevcik J. X-Ray structure of two crystalline forms of a Streptomycete ribonuclease with cytotoxic activity / J. Sevcik, L. Urbanikova, P.A. Leland, R.T. Raines // J. Biol. Chem.- 2002.- V.277.- P. 47325-47330.

168. Shaw K.L. The effect of net charge on the solubility, activity, and stability of ribonuclease Sa / K.L. Shaw, G.R. Grimsley, G.I. Yakovlev, A.A. Makarov, C.N. Pace // Protein Sci.- 2001.- V.10.- P. 1206-1215.

169. Sills R.C. Mutations in ras genes in experimental tumor of rodents / R.C. Sills, G.A. Boorman, J.E. Neal, H.L. Hong, T.R. Devereux // IARC Sci. Publ.-1999.- V.146.- P.55-86.

170. Silverman R.H. Implications for RNase L in prostate cancer biology / R.H. Silverman//Biochemistry.- 2003.- V.42.- N.7.- P.1805-1812.

171. Smith M.R. Cell cycle-related differences in susceptibility of NIH/3T3 cells to ribonucleases / M.R. Smith, D.L.Newton, S.M. Mikulski, S.M. Rybak // Exper. Cell. Res.- 1999.- V.247.- P.220-232.

172. Smolewski P. Kinetics of HL-60 cell entry to apoptosis during treatment with TNF-alpha or camptothecin assayed by the stathmo-apoptosis method / P. Smolewski, J. Grabarek, B. Lee, G. Johnson, Z. Darzynkiewicz // Cytometry.-2002.- V.47.- P.143-149.

173. Sorrentino S. Degradation of double-stranded RNA by human pancreatic ribonuclease: crucial role of noncatalytic basic amino acid residues / S.

174. Sorrentino, M. Naddeo, A. Russo, G. D'Alessio // Biochemistry.- 2003.- V.42.-P. 10182-10190.

175. Thomas S. RNA degradation precedes DNA clevage in autoreactivated CD4 T cells supressed by calicheamicin gammal/ S. Thomas, A. Preda-Paris, S. Casares, T.D. Brumeanu // Int. Immunopharmacol.- 2004.- V.4.- P.521-526.

176. Tomita K. A cytotoxic ribonuclease which specifically cleaves four isoaccepting arginine tRNAs at their anticodon loops / K. Tomita, T. Ogawa, T. Uozumi, K. Watanabe, H. Masaki // Proc. Natl. Acad. Sei. (USA).- 2000.-V.97.- N.15.- P.8278-8283.

177. Trang P. Developing RNase P ribozymes for gene-targeting and antiviral therapy / P. Trang, K. Kim, F. Liu // Cell Microbiol.- 2004.- V.6.- N.6.- P.499-508.

178. Trang P. RNase P ribozyme as an antiviral agent against human cytomegalovirus / P. Trang, F. Liu // Methods Mol. Biol.- 2004.- V.252.- P.437-450.

179. Umitsuki G. Involvement of RNAse G in in vivo mRNA metabolism in Escherichia coli / G. Umitsuki, M. Wachi, A. Takada, T. Hikichi, K. Nagai // Genes Cells.- 2001.- V.6.- P.403-410.

180. Vamvakas S. On the role of DNA Double-strand breaks in toxicity and carcinogenesis / S. Vamvakas, E. Vock, W.K. Lutz // Crit Rev Toxicol.- 1997.-V.27.-N.2.- P.155-174.

181. Vecerek B. Interaction of the RNA chaperone Hfq with mRNAs: direct and indirect roles of Hfq in iron metabolism of Escherichia coli / B. Vecerek, I. Moll, T. Afonyushkin, V.R. Kaberdin, U. Blasi // Mol. Microbiol.- 2003.- V.50.-P.897-909.

182. Vock E. Discrimination between genotoxicity and cytotoxicity for the induction of DNA double-strand breaks in cells treated with aldehydes and diepoxides / E. Vock, W. Lutz, O. Ilinskaya, S. Vamvakas // Mutat. Res.- 1999.-V.441.- P.85-93.

183. Waterhouse P.M. Gene silencing as an adaptive defence against viruses / P.M. Waterhouse, M.B. Wang, T. Lough // Nature.- 2001.- V.411.- P.834-842.

184. Xu H. A novel ribotoxin with ribonuclease activity that specifically cleaves a single phosphodiester bond in rat 28S ribosomal RNA and inactivates ribosome / H. Xu, WJ. He, W.Y. Liu // Arch. Biochem. Biophys.- 2004.-V.427.- P.30-40.

185. Xu Z. Potent inhibition of respiratory syncytial virus by combination treatment with 2-5A antisense and ribavirin / Z. Xu, M. Kuang, J.R. Okicki, H. Cramer, N. Chaudhary // Antiviral Res.- 2004.- V.61.- N.3.- P. 195-206.

186. Yang D. Eosinophil-derived neurotoxin (EDN), an antimicrobial protein with chemotactic activities for dendritic cells / D. Yang, H.F. Rosenberg, Q. Chen, K.D. Dyer, K. Kurosaka, J.J. Oppenheim // Blood.- 2003.- V.102.- N.9.-P.3396-3403.

187. Patel, J J. Oppenheim, O.M. Howard // J. Immunol.- 2004.- V.173.- N.10.-P.6134-6142.

188. Yang D. RNA interference (RNAi) with RNase Ill-prepared siRNAs / D. Yang, A. Goga, J.M. Bishop // Methods Mol. Biol.- 2004.- V.252.- P.471-482.

189. Youle R.J. RNAse inhibition of human immunodeficiency virus infection of H9 cells / R.J. Youle, Y.N. Wu, S.M. Mikulski, K. Shogen, R.S. Hamilton, D. Newton, G. D'Alessio, M. Gravell // Proc. Natl. Acad. Sci.- 1994,- V.91.- N.13.-P.6012-6016.

190. Zhang Y. MazF cleaves cellular mRNAs specifically at ACA to block protein synthesis in Escherichia coli / Y. Zhang, J. Zhang, K.P. Hoeflich, M. Ikura, G. Qing // Mol. Cell.- 2003.- V.12.- P.913-923.