Авторегуляция синтеза актина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Склярова, Татьяна Вадимовна

• Склярова, Татьяна Вадимовна
• кандидат биологических наук
• 1995

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Склярова, Татьяна Вадимовна

1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Введение

2.2. Деградация мРНК и экспрессия генов

2.2.1. Деградация мРНК и экспрессия генов домашнего хозяйства" (housekeeping)

2.2.2. Регуляция стабильности гистоновой мРНК

2.2.3. Концентрация тубулиновой мРНК регулируется посттранскрипционно

2.2.4. Концентрация мРНК трансферинового рецептора регулируется, отчасти на уровне деградации мРНК

2.2.5. Скорость деградации некоторых мРНК флуктуирует при смене скорости клеточного роста

2.3. Скорость деградации некоторых мРНК модулируется внешними факторами

2.3.1. Стабильность мРНК белков теплового шока

2.3.2. Гормоны и ростовые факторы модулируют стабильность многих мРНК

2.3.3. Воспалительный ответ и изменения стабильности мРНК

2.3.4. Вирусные инфекции могут воздействовать на время полу жизни мРНК

2.4. Роль распада мРНК в развитии и диференцировке клеток

2.5. Последовательности, определяющие скорость деградации мРНК

2.5.1. 5'-Ken структура и стабильность мРНК

2.5.2. 5'-UT последовательность и стабильность

2.5.3. У-нетранслируемый район (5'UTR) и необходимость в трансляции для деградации

2.5.4. Дестабилизирующие последовательности открытой рамки считывания

2.5.5. Преждевременная терминация и дестабилизация мРНК

2.5.6. Дестабилизирующие элементы, расположенные в З'-UTR последовательности

2.5.1. Поли(А) последовательности и ее роль в деградации мРНК

2.6. Пути деградации мРНК и трансдействующие факторы

2.6.1. Деаденилирование предшествует распаду многих эукариотических мРНК

2.6.2. Поли(А) независимая деградация мРНК

2.6.3. Родственны ли эти пути?

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Авторегуляция синтеза актина»

Актин является самым мажорным белком в большинстве эукариотических клеток. Его мономеры (G-актин) способны полимеризоваться, образуя филаменты (F-актин). Актиновые филаменты (микрофиламенты) вместе с микротрубочками и промежуточными филаментами формируют клеточный скелет.

Изменения в организации актинового скелета играют существенную роль в осуществлении многочисленных клеточных процессов, включая подвижность клетки, морфогенез тканей, экзоцитоз и передачу сигнала от мембраны в ядро (Cooper, 1991; Bray, 1992). Реорганизации в сети микрофиламентов осуществляются, как правило, путем сборки и разборки актиновых филаментов, и контролируются внешними сигналами. Таковыми являются хемотактические стимулы (Howard и Meyer, 1984), ростовые факторы (Paves et al., 1990), адгезия к внеклеточному матриксу (Hartwig, 1992), и агенты, воздействующие на пути проведения сигналов, такие как форболовые эфиры и СЗ ботулинический токсин (Sheterline et al., 1986; Ridley et al., 1993). Мишенями регуляторных воздействий могут служить как сам актин (Howard et al., 1993), так и актин-связывающие белки, регулирующие события полимеризации-деполимеризации микрофиламентов, гелеобразования и т.п. (Forscher, 1989; Morgan et al., 1993).

Считается, что для обеспечения быстрой сборки актиновых филаментов в ответ на внешние стимулы клетки содержат значительное количество неполимеризованного, мономерного актина. G- актин сохраняется в клетке в комплексах со специфическими белками, таким образом, предотвращая спонтанную полимеризацию актина.

Предполагается, что для обеспечения быстрых изменений в актиновом скелете, стимулированных внешними сигналами, количество G-актина должно оставаться постоянным для компенсации его потерь во время полимеризации. Поэтому вполне вероятно существование специального механизма обратной связи, который бы связывал количество мономерного актина в клетке с его синтезом, и возможно, синтезом некоторых актин-ассоциированных белков.

Очевидным подходом для проверки этой гипотезы является изучение экспрессии актина в клетках, где изменено количество G-актина. Предварительные результаты, полученные с использованием этого подхода, согласуются с предлагаемой гипотезой регуляции по принципу обратной связи. Было показано, что обработка фибробластов фаллоидином, агентом, стабилизирующим актиновые филаменты и стимулирующим полимеризацию актина (Wieland, 1977) уменьшает количество G-актина и приводит к увеличению количества мРНК актина и стимуляции синтеза актина (Serpinskaya et al., 1990). С другой стороны, были получены данные о том, что С2-токсин из Clostridium botulinum, который ADP-рибозилирует мономерный актин и этим предотвращает его полимеризацию (Aktories, 1990), ингибирует синтез актина (Reuner et al., 1991; Serpinskaya et al., 1991).

В этих работах, хотя и указывавших на существование механизма авторегуляции синтеза актина, не было поставлено несколько важных вопросов, касающихся данной гипотезы. Во-первых, количественная зависимость синтеза актина от соотношения мономерного актина к полимерному (G/F) не была исследована. Во-вторых, С2-токсин, как известно, вызывает изменения не только в О/Р соотношении актина, но и в клеточной морфологии, индуцируя арборизацию ламеллярной части клетки и округление клеточного тела. Ранее было убедительно показано, что изменения в клеточной морфологии и прикрепленности к субстрату, могут индуцировать изменения в экспрессии цитоске летных белков (Веп-2е'еу, 1986, 1991). Поэтому необходимо было определить, являются ли изменения в синтезе актина следствием пертурбаций в клеточной морфологии или же следствием изменения количества мономерного актина. В-третьих, не было исследовано, на каком уровне экспрессии генов осуществляется О/Р-зависимая регуляция экспрессии актина.

В данной работе, используя С2-токсин, мы получили количественные данные о зависимости между степенью полимеризованности актина и скоростью его синтеза. Мы показали, что изменения в синтезе актина не являются следствием нарушения клеточной морфологии, а коррелируют с количеством О-актина в клетках. Мы обнаружили, что регуляция синтеза актина осуществляется посредством регуляции стабильности его мРНК. И наконец, было определено, что увеличение соотношения О/Т актина приводит к изменениям в экспрессии актин-связывающих белков: винкулина, тропомиозина и аннексина-1. На основании полученных данных нами выдвинуто предположение о существовании О/Е-актин-зависимого регуляторного механизма, координирующего синтез актина и ключевых белков, ассоциированных с микрофиламентной сетью.

2. Обзор литературы

Скорость, с которой синтезируется определенный белок в единицу времени, зависит от количества его мРНК и эффективности, с которой эта мРНК транслируется. Количество мРНК, в свою очередь, зависит от скоростей ее синтеза, сплайсинга и процессинга, транспорта в цитоплазму и деградации. Этот обзор посвящен роли распада мРНК в регуляции экспрессии генов млекопитающих.

Регуляция стабильности матричной РНК у эукариот 2.1. Введение

Одним из механизмов регуляции экспрессии генов во всех организмах является контроль концентрации индивидуальных транскриптов генов в цитоплазме. Количество определенной мРНК может значительно флуктуировать в процессе клеточного роста, дифференцировки и адаптации к новым условиям внешней среды. Это является результатом изменений в транскрипции, РНК-процессинге, транспорте и распаде мРНК. За последние годы получено много данных о регуляции синтеза мРНК, но совсем немного известно о механизмах, которые контролируют ее деградацию. Тем не менее, проведенные исследования обнаружили, что экспрессия генов бактерий и, в большей степени, млекопитающих может модулироваться путем изменения стабильности мРНК (Ве1а8со и Higgins 1988; Вгауегтап, 1987).

Хотя уровень мРНК в равновесном состоянии является отражением скорости ее синтеза и распада, время полужизни большинства мРНК, по-видимому, выступает основной де-терминантой их относительного содержания в клетке. Чаще всего наблюдается большая корреляция между количеством транскрипта и тем, как долго он присутствует в цитоплазме, чем тем, насколько быстро он синтезируется. Время полу жизни задает временной интервал, необходимый для достижения нового равновесного состояния после изменения скорости транскрипции. Чем короче время полужизни, тем скорее устанавливается новое равновесное состояние (Hargrove и Schmidt, 1989). Время полужизни большинства мРНК определяется комплексом взаимодействий, которые зависят от первичной и вторичной структуры мРНК, скорости ее трансляции, а также от места локализации в цитоплазме. Конечно, время полужизни зависит также от типа и количества рибонуклеаз, РНК-связывающих белков и регуляторных факторов в клетке. Активность этих компонентов, в свою очередь, может варьировать в зависимости от скорости роста или в процессе дифференцировки клетки.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Склярова, Татьяна Вадимовна

4. Выводы

1. Исследована взаимосвязь между скоростью синтеза актина и его организацией в клетке. Показано, что: а) деполимеризация актина под действием С2 токсина приводит к подавлению его синтеза, что сопровождается снижением концентрации актиновой мРНК; б) уменьшение количества актиновой мРНК в клетках является результатом ее дестабилизации; в) изменение клеточной формы, вызванное обработкой токсином, не является первичной причиной эффекта на синтез актина.

2. Изучено влияние деполимеризации микрофиламентов на синтез актин-связывающих белков. Обнаружено, что существует координирование экспрессии актина и ассоциированных с микрофиламентнами белков, винкулина, тропомиозина и аннексина-I.

3. Показано, что мономеризация актина приводит к: а) подавлению синтеза винкулина и тропомизина и снижению концентрации соответствующих им мРНК; б) индукции синтеза аннексина-1 и небольшой группы белков за счет активации трансляции их мРНК.

4. Изучено влияние хронического иммобилизационного стресса на состояние актина в лимфоцитах крыс. Обнаружено, что стресс индуцирует деполимеризацию, Са2+-зависимый специфический протеолиз и супрессию синтеза актина.

Благодарности

Я выражаю глубокую благодарность моему научному руководителю Олегу Денисенко за предоставление темы, повседневное внимание, советы и преподаную школу научного поиска.

Выражаю искреннюю признательность Петру Симоненко за помощь в выполнении некоторых экспериментов, рисунков и оформлении текста данной работы, а также за дружескую поддержку.

Глубоко благодарна Льву Павловичу Овчинникову и всему коллективу лаборатории регуляции биосинтеза белка за теплое отношение и каждодневную помощь.

Хочу поблагодарить также проф. Жоела Вандекеркхове из Государственного Университета г. Гента в Бельгии за предоставленую возможность выполнения некоторых экспериментов в его лаборатории и обсуждение результатов.

Благодарю Людмилу Петровну Волынкину и Андрея Чернявского за фотографическое оформление результатов моей работы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Склярова, Татьяна Вадимовна, 1995 год

1. Adams, L., Tomasselli,, A., Robbins, P., Moss, В., and Heinrikson, R. (1992) HIV-1 protease cleaves actin during acute infection of human T-lymphocytes. AIDS Res. Hum. Retroviruses 8, 291-295.

2. Adams S.A., Nakagava, А.Т., Swanson, M.S., Woodruff, Т.К., and Dreyfuss, G., (1986) mRNA polyadenylate-binding protein: gene isolation, sequencing and identification of a ribonucleoprotein consensus sequence, Mol. Cell. Biol., 6, 2932-2938.

3. Adams, J.M., Harris, A.W., Pinkert, C.A., Corcoran, L.M., Aleksander, W.S., Cory, S., Palmiter, R.D., and Brinster, R.L. (1985) The c-myc oncogene driven by immunoglobulin enhancers induces lymphoid malignancy in transgenic mice, Nature, 318, 533-536.

4. Adesnik, M. and Darnell, J.E. (1972) J.Mol.Biol., 67, 397-405.

5. Aharon, Т., and Schneider, R.J. (1993) Selective destabilization of shortlived mRNAs with the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor AU-rich 3'noncoding region is mediated by a cotranslational mechanism. Mol. Cell. Biol. 13 1971-1980.

6. Aktories, K. (1990). ADP-ribosylation of actin. J. Muscle Res. Cell Motil. 11, 95 97.

7. Aktories, K., Barmann, M., Ohishi, I., Tsuyama, S., Jacobs, K.H. and Habermann, E. (1986). Botulinum C2 toxin ADP-ribosylates actin. Nature 322, 390 392.

8. Aktories, K., Braun, S, Rosener, S., Just, I., Hall, A. (1989) The rho gene product expressed in E. coli is a substrate for botulinum ADP-ribisyltransferase C3. Biochem. Biophys. Res. Commun. 158, 209-213.

9. Almendral, J.M., Sommer, D., MacDonald-Bravo, R., (1988) Complexity of the early genetic response to growth factors, Mol. Cell. Biol., 8, 21402147.

10. Alterman, R.-B.M., Ganguly, S., Schulze, D.H., Marzluff, W.F., Schildkraut, C.L., and Skoultchi, A.I., (1984) Cell cycle regulation of mouse H3 histone mRNA metabolism, Mol.Cell.Biol., 4, 123-130.

11. Aullo, P., Giry, M., Olsnes, S., Popoff, M., Kocks, C., and Boquet, P. (1993) A chimeric toxin to study the role of the 21 kDa GTP binding protein rho in the control of actin microfilament assembly. EMBO J. 12, 921-931.

12. Aviv, H., Voloch, Z., Bastos, R., and Levy, S. (1976) Biosynthesis and stability of globin mRNA in cultured erythroleukemic friend cells. Cell 8, 495-503.

13. Aziz, N. and Munro, H.N. (1986) Both subunits of rat liver ferritin are regulated at a translational level by iron induction, Nucl.Acids Res., 14, 915-919.

14. Aziz, N., and Munro, H.N. (1987) Iron regulates ferritin mRNA translation through a segment of its 5' untranslated region. Proc. Natl. Acad.Sci. U.S.A., 84, 8478-8482.

15. Babich, A. and Nevins, J.R. (1981) The stability of early adenovirus mRNA is controlled by the viral 72 kD DNA binding protein, Cell, 26, 371378.

16. Babiss, L.E. and Ginsberg, H.S. (1984) Adenovirus type 5 early region 1 b gene product is required for efficient shutoff of host protein synthesis, J.Virol., 50, 202-209.

17. Bader, J.P., Hausman., F.A., and Ray, D.A. (1986) Intranuclear degradation of the transformation-inducing protein encoded by avian MC29 virus. J. Biol. Chem. 261, 8303-8310.

18. Bastow, K.F., Bouchard, J., Ren, X., and Cheng, Y. (1986) Synthesis of dihydrofolate reductase and metabolism of related RNA in methotrexate resistant human cell line infected with herpes simplex virus type 2, Virology, 149, 199-205.

19. Baumbach, L.L., Marashi, F., Plumb, M., Stein, G., and Stein, J. (1984) Inhibition of DNA replication coordinately reduces cellular levels of core and HI histone mRNAs: requirement for protein synthesis. Biochemistry 23, 1618-1623.

20. Baumbach, L.L., Stein,G.S., and Stein, J. (1987) Regulation of human histone gene expression: transcriptionsl and posttranscriptional control in the coupling of histone messenger RNA stability with DNA replication. Biochemistry 26, 6178-6183.

21. Bellas, R.E., Bendori, R. and Farmer, S.R. (1991). Epidermal growth factor activation of vanculin and bl integrin gene transcription in quiescent Swiss 3T3 cells. J. Biol. Chem. 266, 12008-12014.

22. Ben-Ze'ev, A. (1986). The relationship between cytoplasmic organization, gene expression and morphogenesis. Trends Biochem. Sci. 11, 478-481.

23. Ben-Ze'ev, A. (1990). Application of two-dimentional gel electrophoresis in the study of cytoskeletal protein regulation during growth activation and differentiation. Electrophoresis 11, 191-200.

24. Ben-Ze'ev, A. (1991). Animal cell shape changes and gene expression. BioEssays 13, 207-212.

25. Ben-Ze'ev, A., Farmer, S.R. and Penman, S. (1979). Mechanisms of regulating tubulin synthesis in cultured mammalian cells. Cell 17, 319-325.

26. Ben-Ze'ev, A., Reiss, R., Bendori, R. and Gorodecki, B. (1990). Transient induction of vinculin gene expression in 3T3 fibroblasts stimulated by serum-growth factors. Cell Regul. 1, 621-636.

27. Benecke, B.J., Ben-Ze'ev, A., and Penman, S. (1978). The control of mRNA production, translation and turnover in suspended and reattached anchorage-dependent fibroblasts. Cell 14, 931-939.

28. Bernstein, P.L., Herrik, D.J., Prokipcak, R.D., and Ross, J. (1992) Control of c-myc mRNA half-life in vitro by a protein capable of binding to a coding region stability determinant. Genes Dev. 6, 642-654.

29. Borun, T.W., Gabrielli, F., Ajiro, K., Zweidler, A., and Baglioni, C. (1975) Further evidence of transcriptional and translational control of histon messenger RNA during the HeLa S3 cycle. Cell 4, 59-66.

30. Bray, D. (1992). In Cell Movement pp. 1-406. Garland, NY.

31. Brawerman, G. (1987) Determinants of messenger stability. Cell 48, 5-7.

32. Brett, J.G. and Tannenbaum, J. (1985). Cytochalasin D-induced increase in actin synthesis and content in a variety of cell types. Cell Biol. Int. Rep. 9, 723-730.

33. Brewer, G. (1991) An A+U-rich element RNA-binding factor regulates c-myc mRNA stability in vitro. Mol.Cell. Biol.ll, 2460-2466.

34. Brewer, G. and Ross, J. (1989) Regulation of c-myc mRNA stability in vitro by a labile destabilizer with an essential nucleic acid component. Mol. Cell. Biol., 1996-2003.

35. Brock, M.L. and Shapiro, D. J. (1983) Estrogen stabilizes vitellogenin mRNA against cytoplasmic degradation. Cell 34, 207-214.

36. Brock, M. L., and Shapiro, D. J. (1983a) Estrogene regulates the absolute rate of transcription of the Xenopus Laevis vitellogenin genes. J. Biol. Chem. 258, 5449-5454.

37. Brower, P.T., Gizang, E., Boreen, S. and Schultz, R. (1981) Biochemical studies of mammalian oogenesis: synthesis and stability of various classes of RNA during growth of the mouse oocyte in vitro. Dev. Biol. 86, 373-378.

38. Brown, A. (1993) mRNA translation and turnover: a cellular perspective on j their relationship. Trends in Cell Biol. 3, 180-183. Burdon, R. H. (1986) , Heat shock and the heat shock proteins. Eur. J. Biochem. 240, 313-318.

39. Burridge, K., Fath, K., Kelly, T., Nuckolls, G. and Turner, C. (1988). Focal adhesions: Transmembrane junctions between the extracellular matrix and the cytoskeleton. Ann. Rev. Cell Biol. 4, 487-525.

40. Campisi, J., Gray, H.E., Pardee, A.B., Dean, M., and Sonenshein, G.E. (1984) Cell-cycle control of c-myc but not c-ras expression is lost following chemical transformation. Cell 36, 241-248.

41. Capasso, O. and Heintz, N. (1985) Regulated expression of mammalian histone H4 genes in vivo requires a trans-acting transcrition factor, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 5622-5646.

42. Caponigro, G., Muhlrad, D., and Parker, R. (1993) A small segment of the MATal transcript promotes mRNA decay in yeast: a stimulatory role for rare codons. Mol. Cell. Biol. 13, in press.

43. Caron, J., Jones, A.L., Rail, L.B. and Kirschner, M.W. (1985). Autoregulation of tublin synthesis in enucleated cells. Nature 317, 648-650.

44. Casey, J. L., Heintz, M.W., Koeller, D. M., Caughman, S.W., Roualt, T.A., Klausner, R.D., and Harford, J. B. (1988) Iron-responsive elements: regulatory RNA sequences that control mRNA levels and translation. Science 240, 924-927.

45. Caughman, S.W, Hentze, M. W., Rouault, T.A., Harford, J. B., and Klasner, R.D. (1988) The iron-responsive element is the single element responsible for iron-dependent translational regulation or ferritn biosynthesis. J. Biol. Chem. 263, 19048-19054.

46. Cervera, M., Dreyfuss, G. and Penman, S. (1981) Messenger RNA is translated when associated with the cytoskeletal framework in normal and VSV-infected HeLa cells. Cell 23, 113-116.

47. Char din, P. Boquet, P. Maduale, P., Popoff, M., Rubin, E., and Gill, D. (1989) The mammalian protein rhoc is ADP-ribosylated by Clostridium botulinum exoenzyme C3 and affects actin microfilaments in Vero cells. EMBO J. 8, 1087-1092.

48. Chen, C.-Y.A., You, Y., and Shyu, A.-B. (1992) Two cellular proteins bind specifically to a purine-rich sequence necessary for the destabilization function of a c-fos protein-coding region determinant of mRNA instability. Mol.Cell. Biol. 12, 5748-5757.

49. Chomczynski, P. and Sacchi, N. (1987). Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem. 162, 156-159.

50. Clark-Adams, C.D., Norris, D., Osley, M.A., Fassler, J.S. and Winston, F. (1988) Changes in histone gene dosage alter transcription in yeast. Genes Dev. 2, 150-156.

51. Cleveland, D. W. (1977) Peptide mapping by limited proteolysis in sodium dodecyl sulfate and analysis by gel electrophoresis. J.Biol. Chem. 252, 11021106.

52. Cleveland, D. W. (1987) The multitubulin hypothesis revisited: what have we learned ? J Cell Biol. 104, 381-388.

53. Cleveland, D.W. (1988) Autoregulated instability of tubulin mRNAs: A novel eukaryotic regulatory mechanism. Trends Biochem. Sci. 13, 339-343.

54. Cleveland, D.W., Lopata, M.A., Sherline, P. and Kirschner, M.W. (1981). Unpolymerized tubulin modulates the level of tubulin mRNA. Cell 25, 537546.

55. Cole, M.D. (1986) The c-myc oncogene: its role in transformation and differentiayion. Annu. Rev. Genet. 20, 361-378.

56. Condeelis, J. (1993a). Life at the leading edge: The formation of cell protrusions. Ann. Rev. Cell Biol. 9, 411-444.

57. Condeelis, J. (1993b). Understanding the cortex of crawling cells: Insights form Dictyostelium. Trends Cell Biol. 3, 371-376.

58. Cooper, J.A. (1987). Effects of cytochalasins and phalloidin on actin. J. Cell Biol. 105, 1473-1478.

59. Cooper, J.A. (1991). The role of actin polymerization in cell motility. Ann. Rev. Physiol. 53, 585-605.

60. Coppola, T. and Morgan, J.I. (1986) Constitutive c-myc oncogene expression blocks mouse erythroleukemia cell differentiation but not commitment. Nature 320, 760-764.

61. Couw, M., Brenner, S.L., Spector, I. and Korn, E.D. (1987). Inhibition of actin polymerization by latrunculin A. FEBS Lett. 213, 316-318.

62. Curran, T. and Morgan, J.I. (1986) Barium modulates c-fos expression and post-translational modification. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85, 85218525.

63. Dani, C. (1984). Characterization of the transcription products of glycerolaldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene in HeLa cells. Eur. J. Biochem. 145, 299-304.

64. Dani, C., Mechti, N., Piechaczyk, M., Lebleu, B., Jeanteur, P., and Blanchard, J.M. (1985) Increased rate of degradation of c-myc mRNA in interferon -treated Daudi cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 4896-4900.

65. DasGupta, B., and Tepp, W. (1993) protease activity of botulinum neurotoxin type E and its light chain : cleavage of actin. Biochem. Biophys. Res. Commun. 190, 470-474.

66. Decker, C. J., and Parker, R. (1993) A pathway for mRNA turnover in yeast:evidence for a requirement for deadenilation. Genes Dev. 7, 1632-1643.

67. Decker, C and Parker, R. (1994) Mechanisms of mRNA degradation in eukaryotes. TIBS 19, 336-340.

68. Demma, M., Warren, V., Hock, R., Dharmawardhane, S. and Condeelis, J. (1990). Isolation of an abundant 50,000-dalton actin filament bundling protein from Dictiostelium amoeba. J. Biol.Chem. 265, 2286-2291.

69. Devreotes, P.N. and Zigmond, S.H. (1988). Chemotaxis in eukaryotic cells: A focus on leukocytes and Dictiostelium. Ann. Rev. Cell Biol. 4, 649-686.

70. Diamond, D. J. and Goodman, H.M. (1985) Regulation of growth hormon messenger RNA synthesis by dexamethasone and triodothyronine: transcriptional rate and mRNA stability changes in pituitary tumor cells.J. Mol. Biol. 81, 41-46.

71. DiDomenico, B.J., Bugaisky, G.E. and Lindquist, S. (1982) The heat-shock response is self-regulated at both the transcriptional and postranscriptional levels. Cell 31, 593-599.

72. Dike, L.E. and Farmer, S.R. (1988). Cell adhesion induces expression of growth-associated genes in suspension-arrested fibroblasts. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 6792-6796.

73. Dmitrovski, E., Kuehl, W. M., Hollis, G.F., Krisch, I, R., Bender, T.P., and Segal, S. (1986) Expression of a transfected human c-myc oncogene inhibits differentiation of a mouse erythroleukemia cell line. Nature 322, 748-752.

74. Farmer, S.R., Wan, K.M., Ben-Ze'ev, A. and Penman, S. (1983). Regulation of actin mRNA levels and translation responds to changes in cell configuration. Mol. Cell. Biol. 3, 182-189.

75. Fechheimer, M. and Zigmond, S.H. (1993). Focusing on unpolymerized actin. J. Cell Biol. 123, 1-5.

76. Fenwick, M.L. and Claek, J. (1982) Early and delayed shutoff of host protein synthesis in cells infected with herpes simplex virus. J.Gen. Virol. 61, 121-127.

77. Fenwick, M. L. and McMenamin, M.M. (1984) Early virion-associated suppression of cellular protein synthesis by herpes simplex virus is accompanied by inactivation of mRNA. J.Gen. Virol. 65, 1225-1232.

78. Forscher, P. (1989). Calcium and polyphosphoinositide control of cytoskeletal dynamics. Trends Neurosci. 12, 468-474.

79. Fujita, T., Shibuya, H., Ohashi, T., Yamanishi, K., and Taniguchi, T. (1986) Regulation of human interleukin-2 gene: functional DNA sequences in the 5' flanking region for the gene expression in activated T lymphocytes. Cell 46, 401-407.

80. Furuichi, Y., LaFiandra, A., and Shatkin, A. (1977) 5'-Terminal structure and mRNA stability. Nature 266, 235-238.

81. Garrels, J.I. (1989). The QUEST system for quantitative analysis of two-dimentional gels. J. Biol. Chem. 264, 5269-5282.

82. Geiger, B., Ayalon, O., Ginsberg, D., Volberg, T., Rodrhguez Fernsndez, J.L., Yarden, Y. and Ben-Ze'ev, A. (1992). Cytoplasmic control of cell-adhesion. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 57, 631-642.

83. Geiger, B. and Ginsberg, D. (1991). The cytoplasmic domain of adherens-type junctions. Cell Motil. Cytoskel. 20, 1-6.

84. Gick, O., Kramer, A., Vasserot, A., and Birnstiel, M.L. (1987) Heat-labile regulatory factor is required for 3'processing of histone precursor mRNAs. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 8937-8941.

85. Gluck, U., Rodrhguez Fernsndez, J.L., Pankov, R. and Ben-Ze'ev, A. (1992). Regulation of adherens junction protein expression in growth-activated 3T3 cells and in regenerating liver. Exp. Cell Res. 202, 477-486.

86. Gordon, D.A., Shelness, G.S., Nicosia, M., and Williams, D.L. (1988) Estrogen-induced destabilization of yolk precusor protein mRNAs in avian liver. J. Biol. Chem. 263, 2625-2631.

87. Graves, R.A. and Marzluff, W.F. (1984) Rapid reversible changes i the rate of histone gene transcription and histone mRNA levels in mouse myeloma cells. Mol. Cell. Biol. 4, 351-357.

88. Green, L. L., Schroeder, M. M., Diggins, M. A., and Dove, W. F. (1987) Developmental regulation and identification of an isotype encoded by altB, an alpha tubulin locus in Phisarum polycefalum. Mol. Cell. Biol. 7, 33373343.

89. Greenberg, J. R. and Perry, R. P. (1972) J. Mol. Biol. 72, 91-97. Greenberg, M.E. and Ziff, E.B. (1984). Stimulation of mouse 3T3 cells induces transcription of the c-fos proto-oncogene. Nature 313, 433-437.

90. Hayward, M. A. and Shapiro, D. J. (1981) A middle-affinity estrogen-specific binding protein in livers of vitellogenic and nonvitellogenic Xenopus laevis. Dev, Biol. 88, 333-339.

91. Hereford, L. M., Osley, M. A., Ludwig, J. R., and McLaughlin, C. S. (1981) Cell-cycle regulationof yeast histone mRNA. Cell 24, 367-374.

92. Herman, B., and Pledger, W.J. (1985). Platelet-derived growth factor-induced alterations in vinculin and actin distribution in Balb/c-3T3 cells. J. Cell Biol. 100, 1031-1040.

93. Herrick, D., Parker, R., and Jacobson, A. (1990) Identification and comparison of stable and unstable mRNAs in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Cell. Biol. 10, 2269-2284.

94. Hershka, A. and Ciechanover, A. (1982) Mechanismof intracellular portein breakdown. Ann. Rev. Biochem. 51, 335-351.

95. Hesketh, J.E. and Pryme, I.F. (1991) Interaction between mRNA, ribosomes and the cytoskeleton. Biochem. J. 277,1-10.

96. Hill, M.A. and Gunning, P. (1993). Beta and gamma actin mRNAs are differentially located within myoblasts. J. Cell Biol. 122, 825-832.

97. Honess, R. W. and Roizman, B. (1974) Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis. I. cascade regulation of the synthesis of three groups of viral porteins. J. Virol. 14, 8-14.

98. Hoock, T.C., Newcomb, P.M. and Herman, I.M. (1991). b actin and its mRNA are localized at the plasma membrane and the regions of movingcytoplasm during the cellular response to injury. J. Cell Biol. 112, 653664.

99. Howard, P.K., Sefton, B.M. and Firtel, R.A. (1993). Tyrosine phosphorylation of actin in Dictiostelium associated with cell-shape changes. Science 259, 241-244.

100. Ho ward, T.H., and Meyer, W.H. (1984). Chemotactic peptide modulation of actin assembly and locomotion in neutrophils. J. Cell Biol. 98, 1265-1271.

101. Jinno, Y., and Merlino, G. T. and Pastan, I. (1988) A novel effect of EGF on mRNA stability. Nucl. Acid. Res. 16, 4957-4961.

102. Jones, T. and Cole, M. (1987) Rapid cytoplasmic turnover of c-myc mRNA: requirement of the 3'-untranslated sequences. Mol. Cell. Biol. 7, 4513-4520.

103. Kabnick, K. S., and Housman, D.E. (1988) Determinants that contribute to cytoplasmic stability of human c-fos and b-globin mRNAs are located at several sites in each mRNA. Mol. Cell. Biol. 8, 3244-3250.

104. Kagan, R., Bratescu, D.V., Jonasson, O., Matsuda, T., and Teodorescu, M. (1989) The relationship between the persentage of circulating B cells,corticosteroid levels, and other immunologic parameters in termally injured patients. J. Trauma 29, 208-213.

105. Kearsey, S., and Kipling, D. (1991) Recombination and RNA processing: a common strand? Trends Cell Biol. 1, 110-112.

106. Kenna, M., Stevens, A., McCammon, M., and Douglas, M.G. (1993) An essential gene with homology to the exonuclease-encoding XRN1/KEM1 also encodes a protein with exoribonuclease activity. Mol.Cell. Biol. 13, 341-350.

107. Khalili, K. and Weinmann, R. (1984) Shutoff of actin biosynthesis in adenovirus serotype-2-infected cells. J. Mol. Biol. 175, 453-460.

108. Khalili, K. and Weinmann, R. (1984a) Actin mRNAs in HeLa cells. Stabilization after adenovirus infection. J. Mol. Biol. 180, 1007-1005.

109. Kindy, M. S. and Sonnenshein, G. E. (1986) Regulation of oncogene expression in cultured aortic smooth muscle cells. Post-transcriptional control of c-myc mRNA. J. Biol. Chem. 261, 12865-12872.

110. Koeller, D.M., Horowitz, J.A., Casey, J.L., Klausner, R.D., and Harford, J.B. (1991) Translation and the stability of mRNAs encoding the transferrin receptor and c-fos. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88, 7778-7782.

111. Larimer, F.W., Hsu, C., Maupin, M., and Stevens, A. (1992) Characterization of the XRN1 gene encoding a 5'-3' exoribonuclease: sequence data and analysis of disparate protein and mRNA levels of gene-disrupted yeast cells. Gene 120, 51-57.

112. Laso, M.R.V., et al. (1993) Inhibition of translational initiation in the yeast Saccharmyces cerevisiae as a function of the stability and position of hairpin structures in the mRNA leader. J. Biol.Chjem. 268, 6453-6462.

113. Lawrence , J.B. and Singer, R.H. (1986). Intracellular localization of messenger RNAs for cytoskeletal proteins. Cell 45, 407-415.

114. Lazaradis, I. A., Babich, A., and Nevims, J. R. (1988) Role of the adenovirus 72-kDa DNA binding protein in the rapid decay of early adeno mRNA. Virology, 165, 438-444.

115. Lee, S.W. et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85, 1204-1208.

116. Leeds, P., Peltz, S. W., Jacobson, A., and Culbertson, M.R. (1991) The product of the yeast UPF1 gene is required for rapid turnover of mRNAs containing a premature translational termination codon. Genes Dev. 5, 23032314.

117. Leeds, P., Wood, J.M., Lee, B.-S., and Culbertson, M.R. (1992) Gene products that promote mRNA turnover in Saccharomyces cerevisiae. Mol.Cell.Biol. 12, 2165-2177.

118. Lindsten, T., June, C. H., Ledbetter, J. A., Stella, G., and Thompson, C. B. (1989) Regulation of limphokine messenger RNA stability by a surface-mediated T cell activation pathway. Science 244, 339-343.

119. Lloyd, C., Schevzov, G. and Gunning, P. (1992). Transfection of non-muscle b- and g-actin genes into mioblasts elicits different feedback regulatory responses from endogenous actin genes. J. Cell Biol. 117, 787797.

120. Lowell,J.E., Runder,D.Z., and Sachs, A.B. (1992) 3'-UTR-dependent deadenylation by the yeast poly(A) nuclease. Genes Dev. 6, 2088-2099.

121. Martin, P. and Lewis, J. (1992). Actin cables and embryonic wound healing. Nature 360, 179-181.

122. Mellstrom, K., Heldin, C.-H. and Westermark, B. (1988). Induction of circular membrane ruffling on human fibroblasts by platelet-derived growth factor. Exp. Cell Res. 177, 347-359.

123. Moor, M. A. and Shenk, T. (1988) The adenovirus tripartite leader sequence can alter nuclear and cytoplasmic metabolism of a non-adenovirus mRNA with infected cells. Nucl.Acids Res. 16, 2247-2252.

124. Morgan, T.E., Lockerbie, R.O., Minamide, L.S., Browning, M.D. and Bamburg, J.R. (1993). Isolation and caracterization of regulated form of actin depolymerization factor. J. Cell Biol. 122, 623-633.

125. Morgan, J.I. and Curran, T. (1986) Role of ion flux in the control of c-fos expression. Nature 322, 552-555.

126. Morris, A. and Tannenbaum, I. (1980). Cytochalasin D does not produce net depolymerization of actin filaments in HEp-2 cells. Nature 287, 637-639.

127. Muhlrad, D., and Parker, R. (1992) Mutations affecting stability and deadenilation of the yeast MFA2 transcript. Genes Dev. 6, 2100-2111.

128. Mullner E. W. and Kuhn, L.C. (1988) A stem-loop in the 3' untranslated region mediates iron-dependent regulation of transferrin receptor mRNA stability in the cytoplasm. Cell 53, 815-822.

129. Nachmias, V.T. (1993). Small actin-binding proteins: the b-thymosin family. Curr. Opin. Cell Biol. 5, 56-62.

130. Nir, U., Cohen, L., and Revel, M. (1984) A human IFN-beta 1 gene deleted of promoter sequences upstream from TATA box is controlled post-transcriptionally by dsRNA. Nucl. Acids Res. 12, 6979-6983.

131. Ohishi, I., Iwasaki, M. and Sakaguchi, G. (1980) Infect. Immun. 30, 668673.

132. Paek, I. and Axel, R. (1987) Glucocorticoids enhance stability of human growth homone mRNA. Mol. Cell. Biol. 7, 1496-1503.

133. Parker, R., and Jacobson, A. (1990) Translation and a 42-nucleotide segment within the coding region of the mRNA encoded by the MATal gene are involved in promoting rapid mRNA decay in yeast. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 2780-2784.

134. Paynton, B., Rempel, R., and Bachvarova, R. (1988) Changes in the state of adenylation and time course of degradation of maternal mRNAs during oocyte maturation and early embryonic development in the mouse. Dev. Biol. 129, 304-311.

135. Paves,H., Neuman, T., Metsis, M. and Saarma, M. (1990). Nerve growth factor-induced rapid reorganization of microfilaments in PC12 cells: Possible roles of different second messengers systems. Exp. Cell Res. 186, 218-226.

136. Peltz, S.W., Brewer, G., Bernstein, P., Hart, P.A., and Ross, J. (1991) Regulation of mRNA turnover in eucaryotic cells. Crit. Rev. Euc.Gene Expr. 1, 99-126.

137. Peltz, S.W., Brown, A.H., and Jacobson, A. (1993) mRNA destabilization triggered by premature translational termination depends on at least three cis-acting elements and one trans-acting factor. Genes Dev. 7, in press.

138. Peltz, S.W., Donahue, J.L., and Jacobson, A. (1992) A mutation in the tRNA nucleatidyltransferase gene promotes stabilization of mRNA in Saccharamyces cerevisiae. Mol.Cell.Biol. 12, 5778-5784.

139. Peltz, S. W. and Ross, J. (1987) Autogenous regulation of histone mRNA decay by histone proteins in a cell-free system. Mol. Cell. Biol. 7, 43454351.

140. Pittenger, M.F. and Cleveland, D.W. (1985). Retention of autoregulatory control of tubulin synthesis in cytoplasts: Demonstration of a cytoplasmic mechanism that regulates the level of tubulin expression. J. Cell Biol. 101, 1941-1952.

141. Rao, K.M.K., Padmanabdhan, J. and Cohen, H.J. (1992). Cytochalasins induce actin polymerization in human leukocytes. Cell Motil. Cytoskel. 21, 58-64.

142. Reuner, K.H., Presek,P., Boschek, C.B. and Aktories, K. (1987). Botolinum C2 toxin ADP-ribosylates actin and disorganizes the microfilament network in intact cells. Eur. J. Cell 43, 134-140.

143. Reuner, K.H., Schlegel, K., Just, E and Katz, N. (1991). Autoregulatory control of actin synthesis in cultured rat hepatocytes. FEBS Lett. 286, 100104.

144. Ridley, A.J. and Hall, A. (1992) The small GTP-binding protein rho regulates the assembly of focal adhesions and actin stress fibers in response to growth factors. Cell 70, 389-399.

145. Ridley A.J., Paterson, H.F., Johnston, C.L., Diekman, D., Hall, A.1992) The small GTP-binding protein rac regulates growth factor-induced ruffling. Cell 70, 401-410.

146. Rijken, P.J., Haage, W.J., Henegouwen, P.M., Verkleij, A.J. and Boonstra, J. (1991). Epidermal growth factor induces rapid reorganization of the actin microfilament system in human A431 cells. J. Cell Sci. 100, 491-499.

147. Rodrhguez Fernsndez, J.L., Geiger, B., Salomon, D., Sabanay, I., Zoller, M. and Ben-Ze'ev, A. (1992a). Suppression of tumorigenicity in transformed cells following transfection with vinculin cDNA. J. Cell Biol. 119, 427- 438.

148. Rodrhguez Fernsndez, J.L., Salomon, D. and Ben-Ze'ev, A. (1992b). Overexpression of vinculin supresses cell motility in 3T3 cells. Cell Motil. Cytoskel. 22, 127-134.

149. Roos, F.J., Zimmerman, A., and Keller, H.U. (1987). Effect of phorbol myristate acetate and the chemotactic peptide fNLPNTL on shape and movement of human neutrophils. J. Cell Sci. 88, 399-406.

150. Sachs, A.B. (1990) The role of poly(A) in the translation and stability of mRNA. Curr.Opin.Cell Biol. 2, 1092-1098.

151. Sachs, A.B., and Davis, R.W.(1989) The poly(A) binding protein is required forpoly(A) shortening and 60S ribosomal subunit-dependent translation initiation. Cell 58, 857-867.

152. Sachs, A.B., and Deardorff, J.A. (1992) Translational initiation requires the PAB-dependent poly (A) ribonuclease in yeast. Cell 70, 961-973.

153. Sampath, P. and Pollard, T.D. (1991). Effects of cytochalasin, phalloidin, and pH on the elongation of actin filaments. Biochem. 30, 1973-1980.

154. Samstag, Y., Eckerskorn, C., Wesselborg, S., Henning, S., Wallich, R. and Meuer, S.C. (1994) Costimulatory signals for human T cell activation induce the nuclear translocatin of cofilin. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 4494-4498.

155. Santos, G., Scott, G., Lee, M., Liu, E., and Benz, C. (1988) Estrogen-induced post-transcriptional modulation of c-myc proto-oncogene expression in human breast cancer cells. J. Biol. Chem. 263, 9565-9571.

156. Savant-Bhonsale, S., and Cleveland, D.W. (1992) Evidence for instability of mRNAs containing AUUUA motifs mediated through translation-dependent assembly of a >20S degradation complex. Genes Dev. 6, 19271939.

157. Schevzov, G., Lloyd, C., Hailstones, D. and Gunning, P. (1993). Differential regulation of tropomyosin organization and gene expression in response to altered actin gene expression. J. Cell Biol. 121, 811-821.

158. Segner, W.P. Shmidt,C.F., and Boltz, J.K. (1971) Appl. Microbiol. 22, 1017-1024.

159. Serpinskaya, A.S., Denisenko, O.N., Gelfand, V.I. and Bershadsky, A.D. (1990). Stimulation of actin synthesis in phalloidin-treated cells. FEBS Lett. 277, 11-14.

160. Serpinskaya, A.S., Denisenko, O.N., Gelfand, V.l. and Bershadsky, A.D. (1991). Autoregulation of actin synthesis. J. Muscle Res. Cell Motil. 12, 484.

161. Sheterline, P., Rickard, J.E., Boothroyed, B. and Richards, R.C. (1986). Phorbol ester induces rapid actin assembly in neutrophil leukocytes independently of changes in Ca i and pHi. J. Muscle Res. Cell Motil. 7, 405-412.

162. Shortle D., Haber, J., and Botstein, D. (1982) Lethal disruption of the yeast actin gene by integrative DNA transformation. Science 217, 371-373.

163. Shyu, A.-B., Greenberg, M.E., and Belasco, J.G. (1989) The c-fos transcript is targeted for rapid decay by two distinct mRNA degradation pathways. Genes Dev. 3, 60-72.

164. Shyu, A.-B., Belasco, J.G., and Geernberg, M.E. (1991) Two distinct destabilizing elements in the c-fos message trigger deadenylation as a first step in rapid mRNA decay. Genes Dev. 5, 221-231.

165. Singer,R. H. (1993) Spatial organization of mRNA within cells. J. Cell. Biochem. 52, 125-126.

166. Spector, I., Shochet, N.R., Kashman,Y. and Groweiss,A. (1983). Latrunculins: Novel marine toxins that disrupt microfilament organization in cultured cells. Science 214, 493-495.

167. Spector, I., Shochet, N.R., Blasberg, D. and Kashman,Y. (1989). Latrunculins- Novel marine macrolides that disrupt microfilament organization and affect cell growth: I. Comparison with cytochalasin D. Cell Motil. Cytoskel. 13, 127-144.

168. Stevens, A (1988) mRNA-decapping enzyme from Saccharamyces cerevisiae: purification and unique substrate specificity for long RNA chains. Mol.Cell.Biol. 8, 2005-2010.

169. Stossel, T.P. (1989). From signal to pseudopod. How cells control cytoplasmic actin assembly. J. Biol. Chem. 264, 18261-18264.

170. Stossel, T.P. (1993). On the crawling of animal cells. Science 260, 10861094.

171. Sundell, C.L. and Singer, R.H. (1991). Requirement of microfilaments in sorting of actin messenger RNA. Science 253, 1257-1277.

172. Taneja, K.L., Lifshitz, L.M., Fay, F.S. and Singer, R.H. (1992). Poly(A)RNA codistribution with microfilaments: evaluation by in situ hybridization and quantitative digital imaging microscopy. J. Cell Biol. 119, 1245-1260.

173. Tannenbaum, J. and Godman, G.C. (1983). Cytochalasin D induces increased actin synthesis in HEp-2 cells. Mol. Cell. Biol. 3, 132-142.

174. Theodorakis, N.G. and Cleveland, D.W. (1992). Physical evidence for cotranslational regulation of b-tubulin mRNA degradation. Mol. Cell. Biol. 12, 791-799.

175. Towbin, H., Staehelin, T. and Gordon, J. (1979). Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 4350-4354.

176. Urlaub, G., Mitchell, P., Ciudac, C., Chasin, L. (1989) Nonsense mutations inthe dihydrofolate reductase gene affect RNA processing. Mol. Cell. Biol. 9, 2868-2880.

177. Vandekerckhove, J., Schering, B., Barmann, M. and Aktories, K. (1988). Botujinum C2 toxin ADP-ribosylates cytoplasmic beta/gamma- actin in arginine 177. J. Biol. Chem. 263, 696-700.

178. Vandekerckhove, J., and Weber, K. (1978) Actin-amino acid sequences. Comparison of actins from calf thymus, bovine brain, and SV40-transformedmouse 3T3 cells with rabbit skeletal muscle actin. Eur. J. Biochem. 90, 451462.

179. Volloch, V., Schweitzer, B., and Rits, S. (1987) Messenger RNA changes during differentiation of murine erytholeukemia cell. Exp. Cell. Res. 173, 38-44.

180. Vreken, P., Buddenlmeijer, N. and Raue, H.A. (1992) A cell-free extract from yeast cells for studying mRNA turnover. Nucl. Acids Res. 20, 25032510.

181. Wegner, A. and Aktiries, K. (1988) ADP-ribosylated actin caps the barbed ends of actin filaments. J. Biol.Che. 263, 13739-13742.

182. Wehland, J., Osborn, M. and Weber, K. (1977). Phalloidin-induced actin polymerization in the cytoplasm of cultured cells interferes with cell locomotion and growth. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 5613-5617.

183. Wieland, T. (1977). Modifications of actin by phallotoxins. Naturwiss. 64, 303-309.

184. Wigler, M.M. and Weinstein, EB. (1975). A preparative method for obtaining enucleated mammalian cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 63, 669-674.

185. Wyllie, A.H. (1980) Glucocorticoid-induced thymocyte apoptopsis is associated with endogenous endonuclease activation. Nature 284, 555-556.

186. Yang, F., Demma, M., Dharmawardhane, S. and Condeelis, J. (1990). Actin regulates the protein synthetic activity of ABP-50, the EF-la of Dictiostelium. J. Cell Biol. Ill, 160a.

187. Yen, T.J., Gay, D.A., Pachter, J.S., and Cleveland, D.W. (1988) Autoregulated changes in stability of polyribosome-bound b-tubulin mRNAs are specified by the first thirteen translated nucleotides. Mol.Cell.Biol. 8, 1224-1235.

188. Yen, T.J., Machlin, P.S. and Cleveland, D.W. (1988). Autoregulated changes in stability of b-tubulin mRNAs by recognition of the nascent amino terminus of b-tubulin. Nature 334, 580-585.

189. Yoshida, K. and Katoh, A. (1972) Crystallin synthesis by chicken lens. Ill mRNA stabilization under in vitro culture conditions. Exp. Cell. Res. 71, 361-368.

190. Yoshida, H., Murachi, T., and Tsukahara, I. (1984) Degradation of actin and vimentin by calpain II, a calcium-dependent cystein proteinase, in bovine lens. FEBS Lett. 170, 259-262.