Ауторегулятор культуры Streptomyces imbricatus и его влияние на биосинтез макролидных антибиотиков тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Топкова, Оксана Владимировна

• Топкова, Оксана Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Топкова, Оксана Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Некоторые механизмы регуляции биосинтеза антибиотиков.

1.1.1. Низкомолекулярные микробные ауторегуляторы.

1.1.2. Характеристика ауторегуляторов, образуемых актиномицетами

1.2. Механизм биологического действия некоторых ауторегуляторов актиномицетов.

1.2.1. Влияние A-фактора на различные виды актиномицетов.

1.2.2. Роль других регуляторов, образуемых актиномицетами, в дифференциации некоторых представителей рода Streptomyces.

1.2.3. Методы и условия выделения и идентификации микробных ауторегуляторов.

1.3. Макролидные противогрибковые антибиотики.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. ОБРАЗОВАНИЕ КУЛЬТУРОЙ STREPTOMYCES IMBRICATUS ВЕЩЕСТВ, СТИМУЛИРУЮЩИХ БИОСИНТЕЗ АНТИБИОТИКОВ.

3.1. Условия образования эндорегулятора при культивировании.

S. imbrica tus на комплексной регламентной среде.

3.2. Образование эндорегулятора различными штаммами.

S. imbricatus.

3.3. Влияние состава питательной среды на образование эндорегулятора культурой S. imbrica tus.

3.4. Влияние эндорегулятора S. imbricatusна антибиотикообразование у продуцентов некоторых макролидных антибиотиков.

3.5. влияние эндорегулятора S. imbrica tus на морфолого-культуральные признаки собственного продуцента и продуцентов некоторых макролидных антибиотиков.

3.6. влияние фильтрата кж S. imbrica tus на образование имбрицина при его внесении на разных стадиях процесса культивирования.

ГЛАВА 4. ВЫДЕЛЕНИЕ СЫРЦА ЭНДОРЕГУЛЯТОРА S. IMBRICATUS ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ И ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ ЕГО ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ.

4.1. Изучение физико-химических свойств фильтрата кж.

S. imbricatus, содержащего эндрегулятор.

4.2. Очистка фильтрата, содержащего эндорегулятор S. imbricatus.

4.3. Выделение эндорегулятора S. imbricatus из фильтрата кж продуцента.

4.4. Определение химической природы сырца эндорегулятора

S. imbricatus.

4.5. Изучение биологических свойств сырца эндорегулятора

S. imbricatus.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ЭНДОРЕГУЛЯТОРА НА НЕКОТОРЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ФУНКЦИИ STREPTOMYCESIMBRICATUS.

5.1. Разработка и оптимизация состава синтетической питательной среды для биосинтеза имбрицина.

5.2. Изучение роста S. imbricatus в условиях ауторегуляции биосинтеза имбрицина.

5.3. Влияние эндорегулятора на активность некоторых ферментов

S. imbricatus.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ауторегулятор культуры Streptomyces imbricatus и его влияние на биосинтез макролидных антибиотиков»

Регуляция, то есть управление скоростью биохимических процессов, лежащих в основе биосинтеза биологически активных веществ, является одним из приоритетных направлений исследований в области фундаментальной биотехнологии. Изучение процессов регуляции клеточной дифференциации актиномицетов и связанного с ними сверхсинтеза вторичных метаболитов, в частности антибиотиков, заключается в поиске путей управления скоростью биохимических реакций синтеза вследствие обратимого изменения количества посредников или промежуточных продуктов и их активности. По своей природе регуляторы делятся на две основные группы - эндо- и экзорегуляторы. Эндорегуляцию осуществляют соединения - аутобиорегуляторы, синтезируемые самим микроорганизмом и являющиеся, как правило, индукторами ферментов синтеза вторичных метаболитов; экзорегуляцию -специфические соединения, вносимые извне.

Наиболее изучены низкомолекулярные микробные ауторегуляторы, образуемые микроорганизмами рода Б^ер^тусез, среди которых основными являются А-фактор и его аналоги - низкомолекулярные соединения -бутиролактоны [1]. Известно, что эти соединения выполняют функцию «сигнальных молекул» при переключении этапов дифференциации и являются индукторами активации ферментов синтеза вторичных метаболитов [2].

В последние годы доказано полимодальное действие ауторегулятора, проявляющееся уже на уровне популяции и являющееся своеобразным биохимическим сигналом для более синхронного прорастания спор. Однако сведений о конечном результате этого воздействия - синтезе вторичных метаболитов, в источниках литературы не приводится.

Представленные в литературе сведения об образовании аутобиорегуляторов продуцентами макролидных антибиотиков весьма немногочисленны. Сведений об образовании регуляторных соединений продуцентами противогрибковых антибиотиков, в том числе продуцентом имбрицина Я. тЪпсаШ, в источниках литературы не обнаружено.

В связи с вышеизложенным важными и своевременными представляются исследования, направленные на изучение регулятора, обнаруженного у продуцента противогрибкового неполиенового макролидного антибиотика имбрицина и выяснение роли этого соединения в регуляции роста культуры и антибиотикообразования.

Исследование проводилось в рамках научных работ, выполняемых на кафедре биотехнологии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии в соответствии с планом по теме «Исследование молекулярно-биологических механизмов синтеза вторичных метаболитов из ряда макроидных антибиотиков и низкомолекулярных цитокинов».

Цель и задачи исследования

Изучение возможности регуляции биосинтеза противогрибкового антибиотика имбрицина и других макролидных антибиотиков эндорегулятором, образуемым культурой Б^ер^тусеБ тЬпсШш.

В соответствии с целью исследования в работе были поставлены следующие задачи:

- изучить условия образования эндорегуляторного соединения продуцентом имбрицина и его влияние на биосинтез антибиотика различными штаммами & тЬпсаШ;

- исследовать влияние эндорегулятора Б. тЬпсаШБ на морфолого-культуральные признаки собственного продуцента и продуцентов некоторых макролидных антибиотиков;

- выделить эндорегулятор из культуральной жидкости актиномицета Я. тЬНсаШ, изучить некоторые его физико-химические и биологические свойства;

- исследовать особенности основных путей обмена углеводов у & тЬпсаШ в условиях стимуляции биосинтеза имбрицина в присутствии регулятора.

Научная новизна исследования

Впервые доказано наличие ауторегуляторной системы антибиотикообразования у культуры & тЬпсШт - продуцента противогрибкового макролидного неполиенового антибиотика имбрицина.

Выявлено влияние условий культивирования продуцента на синтез эндорегулятора, максимальное накопление которого в культуральной жидкости (кж) совпадает с максимумом антибиотикообразования и зависит от состава питательной среды, значения рН и интенсивности аэрации.

Установлено, что способностью образовывать эндорегуляторное соединение обладают мутантные штаммы актиномицета Я. тЬпсаШ, как низкоактивные, так и высокопродуктивные варианты. Внесение эндорегулятора в агаризованную среду Чапека вызывает изменение морфолого-культуральных признаков всех мутантных штаммов продуцента.

Доказана возможность увеличения интенсивности образования противогрибковых полиеновых антибиотиков - нистатина, леворина, амфотерицина В под воздействием эндорегуляторного соединения & тЬпсаШ на разных стадиях развития продуцентов указанных антибиотиков. Для продуцентов этих антибиотиков эндорегулятор, образуемый культурой £ тЬпсаШ, является экзогенным стимулятором прорастания спор и/или индуктором дифференциации.

Показано, что по ряду физико-химических и биологических свойств выделенный эндорегулятор является новым и отличается от описанных в литературе регуляторов, образуемых актиномицетами.

Впервые для продуцента противогрибкового неполиенового антибиотика имбрицина установлено, что усиление антибиотикообразования в присутствии эндорегулятора происходит вследствие подавления активности ферментов цикла трикарбоновых кислот, что обеспечивает перераспределение пирувата в путях образования поликетидной цепи молекулы антибиотика.

Практическая значимость работы

При внесении ауторегулятора, содержащегося в кж 5. тЬгкаШз, в ферментационную среду синтез имбрицина увеличивается на 40 - 50 %.

Составлена ведомость изменений к лабораторному регламенту на производство имбрицина, предусматривающая использование фильтратов кж Я. ШЬгкШш вместо воды при приготовлении питательных сред. Это позволит сократить количество стоков в виде отработанного нативного раствора на стадии фильтрации культуральной жидкости.

Разработан и оптимизирован состав синтетической питательной среды для культивирования & тЬгкШт, на которой уровень антибиотической активности продуцента близок к уровню синтеза имбрицина на регламентной питательной среде, а при добавлении ауторегулятора достигает максимальных значений активности высокопродуктивного штамма.

Показано сохранение высокого уровня антибиотикообразования в течение длительного времени при хранении спорового посевного материала продуцентов имбрицина, леворина, нистатина и амфотерицина В на агаризованных средах с эндорегулятором Я. тЬНсШш, что позволяет рекомендовать включение фильтратов кж & тЬпсШш в состав прописей этих сред.

Разработан метод получения и очистки сырца эндорегулятора из культуральной жидкости £ тЬпсаШ. Выделен сырец со степенью очистки 90,0 %.

Результаты работы используются в лабораторном практикуме по дисциплине «Технология биосинтеза БАВ» для студентов факультета промышленной технологии лекарств (специальность 240901 - Биотехнология) на кафедре биотехнологии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Продуцент имбрицина, культура БКер^тусез тЪпсаШз образует регулятор, стимулирующий биосинтез собственного антибиотика.

2. Применение эндорегулятора & тЬпсаШ на разных стадиях культивирования продуцентов леворина, амфотерицина В и нистатина обеспечивает повышение образования этих антибиотиков.

3. Способ выделения и очистки эндорегулятора & тЬНсШш из культуральной жидкости обеспечивает получение сырца эндорегулятора со степенью чистоты 90 %.

4. Эндорегулятор & тЪпсаШ изменяет метаболизм продуцента в сторону увеличения синтеза имбрицина.

Апробация работы

Результаты исследований обсуждены на заседании кафедр биотехнологии и микробиологии СПХФА, доложены на Международной научной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции» (Санкт-Петербург, 1999); научно-методической конференции СПХФА «Состояние и перспективы подготовки специалистов для фармацевтической отрасли» (Санкт-Петербург, 2004); научной конференции СПХФА «Подготовка кадров для фармацевтической промышленности», (Санкт-Петербург, 2005).

Личный вклад автора

Лично автором получены все результаты, представленные в главах 3 и 5 исследования. Результаты, изложенные в главе 4, получены при совместной работе с ведущим научным сотрудником лаборатории биотехнологии СПХФА Яскович Г.А.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, обзора литератур, экспериментальной части, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 176 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 22 рисунка. Библиография включает 191 источник.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Топкова, Оксана Владимировна

выводы

1. Установлено наличие у продуцента противогрибкового макролидного неполиенового антибиотика имбрицина S. imbrîcatus ауторегуляторной системы антибиотикообразования. В процессе культивирования актиномицет S. imbrîcatus выделяет в среду ауторегулятор, стимулирующий образование собственного антибиотика на 40-50 %.

2. Показано, что образование эндорегулятора культурой S. imbrîcatus начинается с первых часов культивирования и достигает максимума к 96 часам в условиях интенсивной аэрации при рН 7,0-7,5 и зависит от состава питательной среды.

3. Показано, что образование эндорегулятора возможно только мутантными штаммами S. imbrîcatus, причем как низкоактивным (штамм 1.5), так и высокопродуктивными штаммами 9М и С9. Исходный штамм ЛИА 0112/90, выделенный из почвенного образца, не обладает способностью образовывать эндорегулятор. Добавление эндорегулятора в агаризованную среду Чапека вызывает изменение морфолого-культуральных признаков всех мутантных штаммов продуцента S. imbrîcatus.

4. Внесение эндорегуляторного соединения S. imbrîcatus на разных стадиях развития продуцентов противогрибковых макролидных полиеновых антибиотиков - нистатина, амфотерицина В, леворина -способствует увеличению образования этих антибиотиков на 15-35 %. Для этих продуцентов эндорегулятор, образуемый культурой S. imbrîcatus является экзогенным стимулятором прорастания спор.

5. Разработан метод выделения и очистки эндорегулятора из культуральной жидкости S. imbrîcatus, позволяющий получить стабильный сухой препарат сырца эндорегулятора со степенью очистки 90 % без потери стимулирующего эффекта.

6. Усиление биосинтеза имбрицина в присутствии эндорегулятора связано с изменением функционирования гликолиза и подавлением активности ферментов ЦТК, что обеспечивает перераспределение пирувата в сторону образования малонатных единиц, составляющих молекулу имбрицина. Одновременно происходит увеличение активности НАДФ-специфичных систем, осуществляющих образование макролактонного кольца молекулы антибиотика.

заключение

Проблема достижения сверхсинтеза биологически активных веществ стоит перед исследователями практически с момента становления биотехнологии как отрасли промышленности. В последние годы решение этой проблемы связывают с изучением новых путей управления ходом биотехнологических процессов с использованием молекулярных механизмов регуляции.

Регуляция, то есть управление скоростью биохимических процессов, лежащих в основе биосинтеза биологически активных веществ, является одним из приоритетных направлений исследований в области фундаментальной биотехнологии. Регуляцию осуществляют специфические вещества, синтезируемые самими микроорганизмами - эндорегуляторы, или вносимые извне - экзорегуляторы. Наиболее известными эндорегуляторами стрептомицетов являются А-фактор и его аналоги - низкомолекулярные соединения бутиролактонной природы, выполняющие роль триггера при переключении этапов дифференциации и являющиеся индукторами активации ферментов синтеза вторичных метаболитов [1, 69, 95].

В результате проведенных нами исследований установлено, что в процессе культивирования актиномицет & ШЬпсШш выделяет в среду вещество, стимулирующее образование собственного антибиотика эндорегулятор. Максимальное накопление этого вещества в кж совпадает с максимумом образования имбрицина и приходится на 96 часов роста продуцента (рис. 3).

Обследование различных по уровню антибиотической активности вариантов штаммов 5. тЬпсШш показало, что не все они способны образовывать эндорегуляторное вещество. Исходный «дикий» штамм & тЬпсШш ЛИА-0112/90, выделенный из почвенного образца, вообще не обладает способностью к синтезу эндорегулятора, а высокоактивный мутантный вариант & тЬпсаШя С9 образует данное вещество в незначительных количествах. Очевидно, образование эндорегулятора напрямую связано с воздействием на культуру Я. тЪгкаШя различных мутагенных факторов.

Изучено влияние условий культивирования на образование эндорегулятора. Показано, что важнейшими из этих условий являются рН, аэрация, состав питательной среды. Культура & тЬНсаШ образует регулятор только в интервале рН 7,0-7,5, в условиях интенсивной аэрации. Оптимальными для синтеза эндорегулятора являются обогащенные питательные среды, содержащие значительные количества источников углерода и азота. Полученные данные в некоторой степени подтверждают существующую сегодня теорию реакций «кворум-сенсинга» у микроорганизмов, согласно которой ауторегуляторы начинают свое действие только при достижении определенной концентрации в среде и определенной плотности популяции продуцента [96,97].

При изучении условий, благоприятствующих наиболее полному проявлению стимулирующего действия эндорегулятора, было выяснено, что он оказывает стимулирующий эффект на образование имбрицина высокоактивными штаммами & ¡тЬпсаШя 9М и С9 только при прибавлении его в исходную ферментационную среду. Для низкоактивного штамма 1.5 стимулирующий эффект от внесения эндорегулятора проявляется на всех стадиях культивирования. Имеет место кумулятивный эффект от внесения эндорегулятора на всех стадиях культивирования этого штамма, который выражается в увеличении биосинтеза имбрицина на 260 % по сравнению с контролем.

Изучение микробных ауторегуляторов типа А-фактора показало, что они обладают не только эндо-, но и экзорегуляторным воздействием на стрептомицеты [1, 65, 69]. Критерием оценки действия таких регуляторов является усиление или индуцирование процессов морфогенеза и синтеза антибиотиков при внесении регулятора в среду культивирования.

Отмечено, что эндорегулятор & ЫЬпсаШ обладает экзорегуляторным воздействием на продуценты некоторых макролидных антибиотиков. При внесении фильтратов кж З1. тЬпсМш в соответствующие питательные среды наблюдали стимулирование биосинтеза нистатина культурой 5. поиг$е1 845 на 36 %, а также изменение морфолого-культуральных признаков у продуцентов леворина (& 1еуот 78), амфотерицина В (5. пойозт 143) и нистатина. Кроме того, было установлено, что при внесении в агаризованные питательные среды эндорегулятора & тЬпсШт споровый посевной материал указанных выше продуцентов антибиотиков хранится в течение 24 месяцев без снижения уровня антибиотикообразования.

Таким образом, в результате проведенных исследований у продуцента имбрицина обнаружен ауторегулятор, при внесении которого в ферментационную питательную среду синтез собственного антибиотика возрастает на 40-50 %.

Также ауторегулятор 5. тЪпсаШъ оказывает положительное влияние на биосинтез противогрибкового антибиотика нистатина.

В связи с этим при осуществлении ферментации 5. тЬНсШш и 5. поиг$е1 можно рекомендовать приготовление питательных сред с использованием нативного раствора со стадии фильтрации кж тЬпсаШ. Это позволит сократить количество промышленных стоков (приложение III).

В ходе дальнейших исследований были изучены физико-химические характеристики фильтратов кж 5. тЬпсШш и выбраны параметры для стандартизации фильтратов. В качестве таких параметров приняты рН, цветность при А, = 360 нм и содержание сухого остатка (табл. 10). Разработан способ выделения сырца эндорегулятора из кж продуцента имбрицина путем сорбции на анионите Оо\уех 2x8 (рис. 14).

Сырец эндорегулятора представляет собой лиофильно высушенный порошок белого с кремоватым оттенком цвета, гигроскопичный, хорошо растворимый в воде, термостабильный и является многокомпонентной смесью. Установлено, что эндорегулятор не является белком и представляет собой низкомолекулярное вещество (или вещества) органической природы.

Дальнейшую очистку сырца эндорегулятора проводили методом гель-фильтрации на Сефадексе ЬН-20 (см. раздел 4.4). Показано, что фракции стимуляторов антибиотикообразования (10-14) проявляли более высокую стимулирующую активность, чем исходный раствор сырца эндорегулятора. Можно полагать, что причиной этого являлось отсутствие высокомолекулярных соединений, оставшихся во фракциях 1-9.

Влияние сырца эндорегулятора на биосинтез имбрицина различными штаммами & тЬпсаШ зависит от вносимой дозы и времени его внесения в питательную среду для культивирования актиномицета. Наибольший стимулирующий эффект сырец эндорегулятора оказывает при добавлении его в среду перед посевом, в концентрации 12 мг/мл для высокоактивного штамма 9М и 0,1 мг/мл - для низкоактивного штамма 1.5 культуры Б. тЪпсМш. Очевидно, низкоактивный мутантный штамм 1.5 более чувствителен к действию эндорегулятора вследствие возникшей в результате воздействия мутагенов активации резервных регулирующих систем, отвечающих за рецепцию регуляторного фактора.

Изучение обменных процессов, протекающих в микробной клетке, проводят, как правило, на синтетических средах, позволяющих оценить метаболизм основных питательных веществ среды и уровень ферментативной активности.

Для этой цели нами была разработана синтетическая питательная среда, на которой уровень активности & тЬпсаШ сопоставим с активностью кж, полученной при ферментации продуцента на комплексной питательной среде.

Показано, что, усиление образования имбрицина в присутствии сырца эндорегулятора обусловлено не увеличением биомассы актиномицета, а его более высокой продуктивностью. Уровень продуктивности мицелия тЬНсШш в присутствии эндорегулятора превышал контрольные значения в среднем на 60 %, а наибольшая продуктивность отмечалась при скорости роста, которая была в 10 раз меньше максимальной (табл. 22).

Усиление биосинтеза имбрицина в присутствии эндорегулятора обусловлено, очевидно, происшедшими изменениями в обменных процессах & ШЬпсаШ, обеспечивающих синтез антибиотика. Поэтому дальнейшие исследования были направлены на изучение влияния эндорегулятора на некоторые ферментные системы первичного метаболизма, участвующие в биосинтезе имбрицина. Прежде всего, нас интересовали изменения в углеводном обмене, так как образование предшественников молекулы неполиенового антибиотика имбрицина связано с метаболизмом глюкозы.

В ряде работ, посвященных изучению биологического действия А-фактора, показано его воздействие на ферментативную активность продуцентов антибиотиков и, в частности, блокирование Г-6-ФДГ, приводящее к прекращению функционирования пентозофосфатного пути утилизации глюкозы. В свою очередь, взаимосвязь основных путей метаболизма углеводов - гликолитического и пентозофосфатного - с антибиотикообразованием давно и широко обсуждается в литературе [27, 113, 123,181, 182].

Именно поэтому нами было изучено влияние эндорегулятора & тЪпссйт на активность некоторых ферментов гликолиза и пентозофосфатного цикла. Показано, что в условиях аутостимуляции биосинтеза имбрицина активность исследованных ферментов гликолитического и пентозофосфатного путей была выше, чем в контрольном варианте (рис. 19, 20), особенно на 48 часов ферментации. В этот период начиналось и наибольшее превышение образования антибиотика в опытах с использованием сырца эндорегулятора по сравнению с обычными условиям культивирования & тЬпсаШ.

Полученные результаты представляются закономерными с учетом того, что в процессе гликолиза образуется фосфоенолпируват, участвующий в образовании предшественников макролидного кольца молекулы имбрицина.

Интересным представляется факт отсутствия блокирования активности Г-6-ФДГ при наличии в среде сырца эндорегулятора. Очевидно, это может свидетельствовать о различной природе А-фактора и исследуемого нами эндорегулятора & тЬпсаШ.

Синтез макролидного кольца полиеновых и неполиеновых антибиотиков осуществляется за счет конденсации малонатных и метилмалонатных единиц, которые образуются при карбоксилировании ацетил-КоА и пропионил-КоА [121, 125,126,191].

Наблюдаемое нами уменьшение активности пируватдегидрогеназного комплекса в период увеличения биосинтеза имбрицина (рис. 21) свидетельствует, что в условиях эндорегуляции образования антибиотика в начальный период усиливается активность карбоксилирующих систем, в том числе и ФЕП-карбоксилазы. Конкурирование ФЕП-карбоксилазы и пируваткиназы за общий субстрат (ФЕП) и объясняет низкую активность пируватдегидрогеназы у & тЬпсайю при стимулировании биосинтеза имбрицина.

Присутствие в среде культивирования сырца эндорегулятора приводило также к изменению активность дегидрогеназ цикла трикарбоновых кислот (рис. 22).

Активность сукцинатдегидрогеназы и малатдегидрогеназы в условиях эндорегуляции биосинтеза имбрицина снижалась по сравнению с контролем.

Результаты наших исследований подтверждают точку зрения исследователей [27, 113, 127, 128], считающих, что низкая активность ферментов ЦТК создает условия для утилизации ацетата в основном для биосинтеза антибиотиков. Низкая активность дегидрогеназ ЦТК дает возможность продуценту более интенсивно вовлекать оксалоацетат в образование малонил-КоА и метилмалонил-КоА. Так, вероятно, осуществляется регуляция биосинтеза имбрицина в данном случае.

Важно подчеркнуть, что в наших опытах под влиянием сырца эндорегулятора возрастали активности ферментов, ответственных за регенерацию НАДФ-Н2: Г-6-ФДГ, глутаматдегидрогеназы и изоцитратдегидрогеназы. Можно полагать, что синтез имбрицина актиномицетом & тЪпсШш тесно связан с активностью этих ферментов. Подобное явление корреляции биосинтеза антибиотика с активностями НАДФ-зависимых дегидрогеназ отмечалось для продуцентов леворина [187] и новобиоцина [8]. Увеличение активности глутаматдегидрогеназы в опытных ферментациях связано, вероятно, и с интенсивным образованием глутаминовой кислоты, являющейся предшественником структурных единиц боковой цепи молекулы имбрицина.

В условиях эндорегуляции усиление образования имбрицина происходит на сравнительно высоком уровне катаболизма глюкозы как по гликолитическому, так и по пентозофосфатному пути, обеспечивая биосинтез антибиотика необходимыми предшественниками и восстановительными эквивалентами. Регуляция биосинтеза имбрицина осуществляется за счет снижения активности дегидрогеназ ЦТК и более интенсивного вовлечения оксалоацетата в образование малонил-КоА и метилмалонил-КоА.

Под влиянием эндорегулятора, образуемого 5. тЬпсаШз, происходило также увеличение образования макролидных полиеновых антибиотиков, таких, как нистатин, леворин, амфотерицин В.

Сопоставляя известные литературные и собственные экспериментальные данные, выявили определенные отличия изучаемого эндорегулятора Б. тЬпсаШя от наиболее известного и изученного актиномицетного регулятора дифференциации и антибиотикообразования - А-фактора [1, 166]. Сравнительная характеристика этих регуляторных соединений приведена в табл. 23.

Из представленных данных видно, что отличия между А-фактором и эндорегулятором Б. тЬпсШш существует на уровне как физико-химических, так и биологических свойств, что позволяет считать этот ауторегулятор новым, существенно отличным от описанных в литературе.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Топкова, Оксана Владимировна, 2007 год

1. Хохлов, А. С. Низкомолекулярные микробные ауторегуляторы М.: Наука, 1988.-272 с.

2. Люй, X., Нефедова, М. В., Захарчук, Л. М. Влияние теплового шока на образование и состав актиномицинов // Антибиотики и химиотерапия. 2000. -Т.45, № 2. - С.5-9.

3. Дубицкая, Л. П., Федоренко, В. А. Влияние глюкозы на антибиотическую активность и резистентность к антибиотикам у Streptomyces peuceticus subsp. caesius АТСС 27952-2 и его мутантов // Антибиотики и химиотерапия. 2002. -Т.47, № 6. - С.7-11.

4. Безбородое, А. М. Биохимические основы регуляции биосинтеза антибиотиков // Механизмы биосинтеза антибиотиков. М.: Наука, 1986. - С.34-45.

5. Яковлева, Е. П. Научные основы совместного культивирования продуцентовполиеновых антибиотиков с дрожжеподобными грибами: дис. д-р биол.наук: 03.00.23 -Л., 1986.-397 с.

6. Безрукова, И. П. Регуляция биосинтеза новобиоцина и микогептина: дис.канд. биол. наук: 03.00.23 Л., 1987. - 196 с.

7. Martin, J. F., Demain, A. L. Control of antibiotics biosynthesis // Microbiol. Rev. -1980.- V.44,№2.-P. 230-251.

8. Бирюков, В. В., Кантере, В. М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.: Наука, 1985. - 296 с.

9. Егоров, Н. С. Антибиотики / Н. С. Егоров // Промышленная микробиология. M.: Высшая школа, 1989. - С. 236-285.

10. Семенова, Л. Э., Бирюков, В. В., Орлова, Н. В. Изучение влияния параметров аэрации перемешивания на процесс биосинтеза окситетрациклина //Антибиотики. - 1976. -Т.21,№ 11. - С.971-978.

11. Лазникова, Т. Н., Фочкина, О. С., Орлова, Н. В. Значение pH для роста продуцента сизомицина и биосинтеза антибиотика // Антибиотики. 1981. -Т.26, № 6. - С.410-414.

12. Weinberg, Е. D. Mineral element control of microbial secondary methabolism // Microorganisms and minerals. Dekker, 1977. - P.289-316.

13. Сухаревич, В. И., Яковлева, Е. П., Цыганов, В. А. Влияние аэрации и редокс-потенциала среды на биосинтез леворинов А и Б // Микробиология. -1970. Т.34, вып.6. - С.981-985.

14. Сухаревич, В. И., Швецова, H. М., Яковлева, Е. П. О зависимости между редокс-потенциалом среды и процессом антибиотикообразования у Streptoverticillium mycoheptinicum шт.56 // Антибиотики. 1970. - Т. 15, № 11. -С.981-984.

15. Воробьева, Л. И. Техническая микробиология. М.: МГУ, 1987. - С. 139-150.

16. Навашин, С. М. Проблемы генетической инженерии в области антибиотиков // Механизмы биосинтеза антибиотиков. М.: Наука, 1986. - С.5-34.

17. Huckenhull, J. D. Antibiotic production by fermentation // Essays in Appl. Microbiol. / Eds. J. R. Norris, M. N. Richmond. New-York, 1981. - P.411.

18. Sankaren, L., Pogell, В. M. Biosynthesis of puromycin in Streptomyces alboniger: regulation and properties of O-demethylpuromycin O-methyltransferase // Antimicrob. Agents Chemother. 1975. - V.8, № 6. - P.721-732.

19. Satoh, A., Ogawa, H., Satomura, J. Regulation of N-acetylkanamycin-amidochydrolase in the idiophase in kanamycin fermentation // Agr. Biol. Chem. -1976. V.40, № 2. - P.191-196.

20. Hinnen, A., Naesch, J. Ensymatic hydrolysis of cephalosporin С by an extracellular acetylhydrolase of Cephalosporium acremonium // Antimicrob. Agents Chemother. 1976. - V.9, № 5. - P.824-830.

21. Грачева, В. И., Орлова, Н. В. Влияние концентрации фосфора на образование новобиоцина продуцентом Act. spheroides // Антибиотики. 1975. -Т.20, № 10. - С.871-876.

22. Behal, V., Gregorova-Prusakova, J., Hostalek, Z. The influence of inorganic phosphate and benzyl thiocyanate on the activity of anhydrotetracycline oxygenase in Streptomyces aureofaciens // Folia Microbiol. 1982. - V.27, № 2. - P. 102-107.

23. Алексинцева, О. А. Особенности биосинтеза леворина культурой Streptomyces levoris Krass: дис. канд. биол. наук: 03.00.23 JI., 1982. - 194 с.

24. Martin, J. F., Liras, P., Demain, A. L. Control by phosphate and ATPH of antibiotic formation: In. / 5th Int. Ferment. Symp. 4th Int. Spec. Symp. Yeasts. Berlin. 1976. Abstr. Pap. Berlin, 1976. - P. 146-152.

25. Martin, J. F. Phosphate regulation of gene expression of candicidin biosynthesis // Microbiology / Ed. by Schlessinger D. American Society for Microbiology. Washington.: D.C. - 1976. - P.548-552.

26. Gil, J. A., Campelo-Diez, A. B. Candicidin biosynthesis in Streptomyces griseus // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 2003. - V.60, № 6. - P.633-642.

27. Гошталек 3. Метаболическая регуляция биосинтеза хлортетрациклина // Регуляция микробного метаболизма факторами внешней среды: тезисы докл. и сообщ. симп. ФЕМО. 1-7 июня 1983 г., Пущино. Пущино, 1983. - С.13-14.

28. Бакулин, М. К. и др. Влияние перфторорганических соединений на рост стрептомицетов и биосинтез ими антибиотика даунорубицина /М. К. Бакулин,

29. А. С. Кучеренко, JL В. Бакунина, В. В. Шведов // Антибиотики и химиотерапия.- 2003. Т. 48, № 12. - С.5-8.

30. Лойко, Н. Г. Ауторегуляторные факторы развития бактериальных культур: автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2003. - 24 с.

31. Demain, A. L. Regulatory mechanisms and industrial production of microbial metabolites // Lloydia 1968. - V.31. - P.395-418.

32. Навашин, С. M., Сазыкин, Ю. О. Перспективы современной биотехнологии в области антибиотиков // Биотехнология. М.: Наука, 1984. - 457 с.

33. Shapiro, J. A. The significances of bacterial colony patterns // BioEssays. 1995.- V.17, № 7. P.597-607.

34. Gray, К. M. Intercellular communication and group behaviour in bacteria // Trends Microbiol. 1997. - V.5, № 5. - P. 184-188.

35. Greenberg, E. P., Winans, S., Fuqua, C. Quorum sensing by bacteria // Ann. Rev. Microbiol. 1996. - V.50. - P.727-751.

36. Brandner, J. P., Kroos, L. Identification of the W 4400 regulatory region, a developmental promoter of Myxococcus xanthus // J. Bacteriol. 1998. - V.180, № 8. -P. 1995-2002.

37. Bowden, M. G., Kaplan, H. B. The Myxococcus xanthus lipopolysaccharide O-antigen is required for social motility and multicellular developme // Mol. Microbiol.- 1998.-V.30,№2.-P. 275-284.

38. Austin, D. J., Bu Lock, J. D., Gooday, G. W. Trisporic acids: Sexual gormones from Mucor mucedo and Blakeslea trispora // Nature. 1969. - V. 223. - P. 11781179.

39. Katayama, M., Marumo, S. Isolation of sclerosporin, a sporogenic substanse, from Sclerotinia fructicola// Agr. and Biol. Chem. 1978. - V. 42. - P. 505-506.

40. Батраков, С. Г. и др. Необычный полиольный липид 2-с-а-талопиранозил-5-алкил-(С1зС21)-резорцин из азотфиксирующей бактерии Azotobacter chroococcus / С. Г. Батраков, Н. И. Придачина, Е. Б. Кругляк // Биоорг. химия. 1982. - Т.8. -С.980-996.

41. Reusch, R. N., Sadoff, Н. С. 5-n Alkylresorcinols from Azotobacter vienelandii: isolation and characterisation // J.Bacteriol. 1979. - V.139. - P.448-453.

42. Дуда, В. И. и др. Образование покоящихся рефрактильных клеток у Bacillus cereus под влиянием ауторегулирующего фактора / В. И. Дуда, С. В. Пронин, Г. И. Эль-Регистан, А. С. Капрельянц, Л. Л. Митюшина// Микробиология. 1982. - Т.51. - С.77-81.

43. Капрельянц, А. С. и др. Изменение метаболизма и ультраструктурной организации клеток Вас. cereus под влиянием специфического ауторегуляторного фактора / А. С. Капрельянц, Г. И. Эль-Регистан, А. Н.

44. Козлова, JI. Л. Митюшина, М. В. Дужа, О. Г. Поплаухина, В. И. Дуда, Д. Н. Островский, С. Г. Игнатов // Экспериментальное изучение развития микроорганизмов. Пущино: НЦБИ, 1978. - С.24-25.

45. Кубарева, О. Г. Выделение ауторегуляторного фактора d2 Bacillus cereus и применение его для индукции автолиза клеток культуры продуцента: автореф. дис. канд. биол. наук. М.,1980. - 24 с.

46. Батраков, С. Г. и др. Тирозол ауторегуляторный фактор d дрожжей S. cerevisiae / С. Г. Батраков, Г. И. Эль-Регистан, Н. И. Придачина // Микробиология. - 1993. - Т.62, вып.4. - С.633-638.

47. Коновалова, Е. Ю., Эль-Регистан, Г. И., Бабьева, И. П. Динамика и накопление ауторегуляторных факторов dj и d2 дрожжами Rhodosporidium toruloides // Биотехнология. 1985. - № 3. - С.71-74.

48. Мулюкин, А. Л. и др. Обнаружение и изучение динамики накопления ауторегуляторного фактора d в культуральной жидкости Micrococcus luteus / А. Л. Мулюкин, А. Н. Козлова, А. С. Капрельянц, Г. И .Эль-Регистан // Микробиология. 1996. - Т.65, № 1. - С.35-38.

49. Степаненко, И. Ю. и др. Роль алкилоксибензолов в адаптации Micrococcus luteus к температурному шоку / И. Ю. Степаненко, А. Л. Мулюкин, А. Н. Козлова, Ю. А. Николаев, Г. И. Эль-Регистан // Микробиология. 2005. - Т.74, № 1. -С.2633.

50. Коновалова, Е. Ю. Ауторегуляция роста и развития дрожжей Rodospiridium toruloides факторами d: автореф. дис. . канд. биол. наук / Е. Ю. Коновалова. -Л., 1985.- 18 с.

51. Бабусенко, Е.С. Ауторегуляция роста и развития метанокисляющих бактерий: автореф. дис. канд. биол. наук / Е. С. Бабусенко М., 1992. - 25 с.

52. Лойко, Н. Г. и др. Низкомолекулярные ауторегуляторы развития бактерий Thioalkalivibrio versutus / Н. Г. Лойко, А. Н. Козлова, Г. А. Осипов, Г. И. Эль-Регистан // Микробиология. 2002. - Т. 17, вып.З. - С.308-316.

53. Эль-Регистан, Г. И. Покой как форма адаптации микроорганизмов // В кн.: О. В. Бухарин, А. Л. Гинцбург, Ю. М. Романова, Г. И. Эль-Регистан // Механизмы выживания бактерий. М.: Медицина, 2005. - 367 с.

54. Вахитов, Т. Я. Регуляторные функции бактериальных экзометаболитов на внутрипопуляционном и межвидовом уровнях : автореф. дис. . д-ра биол. наук: 03.00.23 / Т. Я. Вахитов. СПб., 2007. - 40 с.

55. Вахитов, Т. Я. и др. Динамика функции экзометаболитов в процессе роста периодической культуры Escherichia coli М-17 / Т. Я. Вахитов, Е. Н. Момот, Ю. Н. Толпаров // Журн. микробиол. 2005. - № 1. - С. 16-21.

56. Грузина, В. Д. Индукция роста, образования антибиотиков и морфологической дифференцировки при межвидовых взаимодействиях бактерий: автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2003. - 24 с.

57. Корницкая, Е. Я., Товарова, И. И., Хохлов, А. С. Изучение образования А-фактора различными актиномицетами // Микробиология. 1976. - Т.45. - С.302-305.

58. Ефременкова, О. В., Анисова, Л. Н., Бартошевич, Ю. Э. Регуляторы дифференциации актиномицетов // Антибиотики и мед. биотехнология. 1985. -Т.30, № 9. - С.687-707.

59. Ефременкова, О. В. и др. Поиск А-факторозависимых вариантов в популяциях актиномицетов / О. В. Ефременкова, В. Д. Грузина, И. Г. Сумарукова, В. Д. Кузнецов // Микробиология. 2003. - Т.72, № 6. - С.766-769.

60. Анисова, Л. Н. и др. Регуляторы развития Streptomyces coelicolor А3(2) / Л. Н. Анисова, И. Н. Блинова, О. В. Ефременкова, Ю. П. Козьмин, В. В. Оноприенко, Г. М. Смирнова, А. С. Хохлов // Изв. АН СССР: Сер. биол. 1984. - С.98-108.

61. Анисова, Л. Н. и др. Регуляторы дифференциации Streptomyces cyanofuscatus / Л. Н. Анисова, И. Н. Блинова, О. В. Ефременкова, Г. М. Смирнова, А. С. Хохлов // Микробиология. 1984. - Т.53. - С.890-895.

62. Yanagimoto, М. Novel actions of inducer in staphylomycin production by Streptomyces virginiae // J. Farm. Technol. 1983. - V.61. - P.443-448.

63. Yanagimoto, M., Yamada, Y., Terui, G. Extraction and purification of inducing material produced in staphylomycin fermentation // Hakkokogaku. -1979. V.57. -P.6-14.

64. Ефременкова, О. В., Анисова, Т. Н., Камзолкина, О. В. Образование регуляторов типа А-фактора представителями рода Micromonospora // Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. - Т.32, № 9. - С.643-647.

65. Бушуева, О. А. и др. Влияние низкомолекулярных регуляторов на биосинтез рифамицина В штаммами Amycolatopsis mediterranei / О. А. Бушуева, О. В. Ефременкова, С. Е. Горин, Ю. Э. Бартошевич // Антибиотики и химиотерапия. -1991.-Т.36,№3.-С.11-14.

66. Biro, S., Birco, Z., van Wezel G. P. Transcriptional and functional analisis of the gene for factor C, an extracellular signal protein involved in cytodifferentiation of Streptomyces griseus // A. van Leeuwenhoek. 2000. - V.78, № 3/4. - P.277-285.

67. McCormic, J. R. D. et al. Cosynthesis of tetracyclines by pairs of Streptomyces aureofaciens mutants / I. R. D. McCormic, V. Hirsch, N. О. Sjolander, A. P. Doerschuk // J. Amer. Chem. Soc. 1960. - V.80. - P.5006-5007.

68. McCormic, J. R. D., Morton, G. D. Identity of cosynthetic factor I of Streptomyces aureofaciens and fragment FO from coenzyme F 420 of Methanobacterium species // J. Amer. Chem. Soc. 1982. - V.104. - P.4014-4015.

69. Jaenchen, R., Schönheit, P., Thauer, R. K. Studies on the biosynthesis of coenzyme F 420 in methanogenic bacteria // Arch. Microbiol. 1984. - Bd. 137. - P. 362-365.

70. Маркелова, С. И., Выпияч, А. Н., Егоров, Н. С. Спорообразование и прорастание спор Bacillus brevis var. G-B в связи с антибиотикообразованием // Антибиотики. 1984. - Т.29. - С.63-72.

71. Daher, Е., Demain, A. L. Germination-initiated spores of Bacillus brevis Nagano retain their resistance properties // J. Bacteriol. 1985. - V.161. - P.47-50.

72. Demain, A. L. How to antibiotic-producing microorganisms avoid suiside? // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1974. - V.22. - P.785-790.

73. Гоштялек, 3. и др. Действие хлортетрациклина на энзимы собственного продуцента Streptomyces aureofaciens / 3. Гоштялек, В. Ехова, В. Бегал, Э. Чурдова // Антибиотики. 1979. - Т.24. - С.254-258.

74. Егоров, Н. С., Торопова, Е. Г. Физиологическое значение антибиотиков для образующих их микроорганизмов // Онтогенез микроорганизмов. М.: Наука, 1979. - С.270-281.

75. Торопова, Е. Г., Егоров, Н. С., Бальджиновагийн, Ц. Антибиотики как регуляторы метаболизма микроорганизмов-продуцентов // Регуляция биохимических процессов у микроорганизмов: материалы симпоз. / Пущино: НЦБИ, 1979. С.300-303.

76. Грачева, И. В., Дмитриева, С. В., Орлова, Н. В. Влияние новобиоцина на рост и развитие Actinomyces spheroides //Антибиотики. -1971. Т.16. - С. 679-683.

77. Gräfe, U., Sarfert, Е. Reconstitution by a butyrolactone autoregulator of the parental protein pattern in an asporogenous mutant of Streptomyces griseus // FEMS Microbiol. Lett. 1985. - V.28. - P.249-253.

78. Воронина, О. И., Товарова, И. И., Хохлов, А. С. Механизм вызываемой А-фактором инактивации глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы в Actinomyces streptomycini // Биоорганическая химия. 1978. - Т.4. - С. 1538-1546.

79. Воронина, О. И. NAD- и ЫАО(Р)-гликогидролазы микроорганизмов и их роль в развитии продуцентов // Успехи современной биологии. 1985. - Т.99. -С.81-93.

80. Zaslavskaya Р. L. et al. Influence of A-factor on ultrastructure of the A-factor deficient mutant of Streptomyces griseus / P. L. Zaslavskaya, V. G. Zhukov, E. Ya. Kornitskaya, 1.1. Tovarova, A. S. Khokhlov // Microbios. -1979. V.25. - P. 145-153.

81. Eritt, I., Gräfe, U., Fleck, W. F. A screening method for autoregulators of anthracycline-producing streptomycetes // Ztschr. allg. Mikrobiol. 1982. - Bd.22. -S.91-96.

82. Gräfe, U., Eritt, I., Fleck, W. F. On the role of A-factor in cytodifferetiation of antracycline-producing strains of Streptomyces griseus // Actinomycetes. 19831984. - V.18. - P.220-246.

83. Олескин, А. В., Ботвинко, И. В., Цавкелова, Е. А. Колониальная организация и межклеточная коммуникация у микроорганизмов // Микробиология. 2000. -Т.69, вып. 3. - С.309-327.

84. Грузина, В. Д. Коммуникативные сигналы бактерий // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48, № 10. - С.32-39.

85. Fuqua, С., Winans, S., Greenberg, E. P. Quorum sensing in bacteria: the LuxR-Luxl family of cell density-responsive transcriptional regulators // J. Bacteriol. -1994. V.176, № 2. - P.269-275.

86. Szeszäk, F., Valu, G., Szabo, G. Some early effects of factor С on Streptomyces griseus mycelium // Biological, biochemical and biomedical aspects of actinomycetes / Ed. G. Szabo, S. Biro, M. Goodfellow. Budapest: Acad. Klado, 1986. - P.831-833.

87. O'Farrell, P. H. High resolution two-dimensional electrophoresis of proteins // J. Biol. Chem. 1975. - V.250. - P.4007-4021.

88. Chou, W.-G., Pogell, В. M. Pamamycin inhibits nucleoside and inorganic phosphate transport in Staphylococcus aureus // Biochem. et biophys. acta. -1981. -V.100. P.344-350.

89. Kawaguchi, T. et al. B-factor, an essential regulatory substance inducing the production of rifamycin in a Nocardia sp. / T. Kawaguchi, T. Asahi, T. Sato, T. Uozumi, T. Beppu// J. Antibiot. 1984. - V.37. - P.l587-1595.

90. Клейнер, E. M. и др. Строение А-фактора биорегулятора из Streptomyces griseus / Е. М. Клейнер, С. А. Плинер, В. С. Сойфер, В. В. Оноприенко, Т. А. Балашова, Б. В. Розынов, А. С. Хохлов // Биоорганическая химия. - 1976. - Т.2. -С.1142-1147.

91. Плинер, С. А. и др. Выделение и первичная характеристика А-фактора / С. А. Плинер, Е. М. Клейнер, Е. Я. Корницкая, И. И. Товарова, Б. В. Розынов, Г. М. Смирнова, А. С. Хохлов // Биоорганическая химия. 1975. - Т.1. - С.70-76.

92. Вахитов, Т. Я. и др. Выделение и идентификация аутостимуляторов роста Escherichia coli / Т. Я. Вахитов, Е. А. Протасов, Н. В. Виснольд, Ю. Н.Толпаров, JI. Н. Петров // Журн. микробиол. 2003. - № 2. - С.7-12.

93. Eritt, I., Gräfe, U., Fleck, W. F. Inducers of both cytodifferentiation and antracycline biosynthesis of Streptomyces griseus and their occurence inactinomycetes and other microorganisms // Ztschr. allg. Mikrobiol. 1984. - V.24. -P.3-12.

94. Торопова, E. Г., Побединский, H. А., Егоров, H. С. Биосинтез нистатина неактивными мутантами Actinomyces noursei при их совместном культивировании //Антибиотики. 1976. - Т.21, № 8. - С.704-709.

95. Лещенко В. М. Плесневые микозы // Антибиотики. 1967. - Т. 12, № 6. -С.536-538.

96. Ариевич, А. М., Минскер, О. Б., Пинзур, Г. С. О методике внутримышечного введения амфотерицина В при лечении больных висцеральными микозами // Антибиотики. -1971. Т.16, № 9. - С.858-860.

97. Vanbreuseghem, R., Larsh, Н. W. Conclusions to the round table on the global problems due to opportunistic fungi // In: Recent Adv. Med. and Vet. Mycol. Proc. 6th Congr. Int. Soc. Hum. and Anim. Mycol.: Tokyo, 1975. Tokyo, 1977. - P.253.

98. Катлинский, А. В. и др. Антифунгальные агенты. Новые предпосылки их создания и новые трудности / А. В. Катлинский, Ю. О. Сазыкин, М. В. Бибикова, С. Н. Орехов // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48, № 9. -С.20-27.

99. Ветлугина, Л. А., Никитина, Е. Н. Противогрибковые полиеновые антибиотики. Алма-Ата: Наука, 1980. - 322 с.

100. Aparicio, J.F. et al. Polyene antibiotic biosynthesis gene clusters / J.F.Aparicio, P.Caffrey, J.A.Gil, S.B.Zotchev // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 2003. - V. 61, № 3. - P. 179-188.

101. Fjaervik, E., Zotchev, S. B. Biosynthesis of the polyene macrolide antibiotic nystatin in Streptomyces noursei // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 2005. -V.67, № 4. - P.436-443.

102. Шенин, Ю. Д. Неполиеновые противогрибковые макролидные антибиотики //Антибиотики и химиотерапия. -1991. Т.36, № 10. - С.50-53.

103. Martin, J. F. Biosinthesis of polyene macrolide antibiotics // Annu Rev. Microbiol. 1977. - V.31, № 1. - P.13-38.

104. Liu, C. N., McDaniel, L. E., Schaffner, C. P. Studies on candicidin biosynthesis //J. Antibiot. 1972. - V.25, № 2. - P. 116-121.

105. Rafalski A., Raczynska-Bojanowska K. Non-specific acetyl-CoA carboxylase and methylmalonyl-CoA carboxyltransferase in Streptomyces noursei var. polifungini //Acta Biochim. Pol. 1975. - V.22, № 4. -P.311-317.

106. Rafalski A., Raczynska-Bojanowska K. Biochemical criteria in selection of productive strains of Streptomyces noursei var. polifungini II Acta Microbiol. Pol., Ser. B. 1973. - V.5. - P.87-93.

107. Rafalski A., Raczynska-Bojanowska K. Synthesis of malonate and methylmalonate and formation of polyene antibiotics // Ibid. 1972.- V.19, № 1. -P.71-87.

108. Janglova, Z., Suchy, J., Vanek, Z. Regulation of biosinthesis of secondary metabolites. VII. Intracellular adenosine-5'-triphosphate in Streptomyces aureofaciens // Folia Microbiol. 1969. - V. 14, № 3. - P.208-210.

109. Behal, V., Cudlin, J., Vanek, Z. Regulation of biosinthesis of secondary metabolites. III. Incorporation of 1-14C acetic acid into fatty acids and chlortetracycline in Streptomyces aureofaciens // Folia Microbiol. 1969. - V.14, № 2.-P. 117-120.

110. Dimroth, P., Ringelmann, E., Lynen, F. 6-methylsalicylic acid synthetase from Penicillium patulum // Europ. J. Biochem. 1976. - V. 68, № 3. - P. 591-596.

111. Caffrey, P. et al. Amphotericin biosynthesis in Streptomyces nodosus: deduction from analysis of polyketide synthase and late genes / P. Caffrey, S. Lynch, E. Flood, S. Finnan, M. Oliynyk // Chem. Biol. 2001. - V.8. - P.713-723.

112. Campleo, А. В., Gil, J. A. The candicidin gene cluster from Streptomyces griseus IMRU 3570 // Microbiology. 2002. - V. 148. - P.51-59.

113. Кирсанова P. В. Продуцент противогрибкового неполиенового антибиотика Actinomyces sp. 212/5 // Материалы IV науч. конф. / Ленинградский НИИ антибиотиков. Л., 1965. - С.69-70.

114. Цыганов В. А. и др. Образование антибиотиков типа азаломицина F культурой Actinomyces imbricatus п. sp. / В. А. Цыганов, Ю. В.Конев, Н. П. Барашкова, Л. Я. Петрова, С. Н. Соловьев // Антибиотики. 1970. - Т. 15, № 3. -С. 208-212.

115. Шенин, Ю. Д., Белахов, В. В., Рожкова, Н. Г. Фунгицидная активность имбрицина и его солей // Антибиотики и химиотерапия. 1996. - Т.41, № 6. -С Л 8-22.

116. Медведева, Н. Г. и др. Влияние имбрицина на рост и ультраструктуру клеточной поверхности микромицетов / Н. Г. Медведева, Н. Б. Гоголушко, М. Э. Сухаревич, О. В. Рыбальченко, Е. П. Яковлева // Микология и фитопатология. 1996. - Т.ЗО, № 1. - С. 17-21.

117. Сухаревич, М. Э. Регуляция биосинтеза имбрицина и механизм его действия на грибы: дис. канд. биол. наук: 03.00.23 СПб., 1997. - 156 с.

118. Горбунова, Н. А. Естественная и индуцированная изменчивость продуцента неполиенового противогрибкового антибиотика имбрицина: дис. . канд. биол. наук: 03.00.23 СПб., 2000. - 150 с.

119. Бирюков, В. В. Планирование экспериментов при оптимизации сложных процессов по схемам ортогональных латинских прямоугольников // Хим.-фарм. журнал. 1968. - Т.2, вып. 1. - С.57-62.

120. Пех, К., Треси М. В. Биохимические методы анализа растений. М.: Изд-воИЛ, I960.- 116с.

121. Асатиани В. С. Биохимическая фотометрия. М.: Изд-во АН СССР, 1957. -511 с.

122. Кочетов, Г. А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высш. школа, 1971.-352 с.

123. Лосев, В. В. Пути интенсификации биосинтеза гентамицина: автореф. дис. . канд. биол. наук: 14.00.31 М., 1982. - 20 с.

124. Егоров, Н. С. Основы учения об антибиотиках. М.: МГУ, 2004. - 512 с.

125. Иерусалимский, П. Д. Основы физиологии микробов. М.: Изд-во АН СССР, 1963.-244 с.

126. Логинова, Л. Г., Гужева, Э. П. Дегидрогеназная активность термотолерантных дрожжей // Микробиология. 1961. - Т.30, № 5. - С.917-920.

127. Pinto, P. V. S., Dreal, Р. А., Kaplan, A. Aldolase. Colorimetric determination // Clin. Chem. 1969. - V.15. - P. 339-345.

128. Ашмарин, И. П., Васильев, Н. Н., Амбросов, В. А. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов. Л.: ЛГУ, 1975. - 78 с.

129. Максимов, В. Н. Многофакторый эксперимент в биологии. М.: МГУ, 1980.-278 с.

130. Работнова, И. Л. Тактика оптимизации микробиологических процессов // Антибиотики. 1986. - Т.31, № 7. - С.508-513.

131. Белоусова, И. И., Лишневская, Е. Б., Эльгарт, Р. Е. К вопросу о естественной регуляции биосинтеза леворина // Материалы V науч. конф. Ленинградского научно-исследовательского института антибиотиков. Л., 1967. - С.22.

132. Нугуманов, Б. С., Торопова, Е. Г., Егоров, Н. С. Стимулирующее действие нативных растворов Actinomyces noursei на образование нистатина // Антибиотики. 1973. - Т. 18, № 6. - С.489-493.

133. Буданов, С. В., Васильев, А. Н. Кларитромицин: особенности антимикробного спектра и клинического применения // Антибиотики и хиимиотерапия. 2004. - Т.49, № 2. - С. 19-25.

134. Буданов, С. В., Васильев, А. Н., Смирнова, Л. Б. Макролиды в современной терапии бактериальных инфекций. Особенности спектра действия, фармакологические свойства // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48, № 11. - С.15-22.

135. Яковлев, С. В., У хин, С. А. Азитромицин: основные свойства, оптимизация режимов применения на основе фармакокинетических и фармакодинамических параметров // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48, № 2. - С.22-28.

136. Сазыкин, Ю. О., Иванов, В. П., Салова, Т. В. Кетолиды производные эритромицина с активностью против макролидорезистентных бактерий // Антибиотики и химиотерапия. - 2000. - Т.45, № 2. - С.3-4.

137. Шенин, Ю. Д. Противогрибковые полиеновые макролиды. Зависимость между структурой и биологической активностью // Антибиотики и химиотерапия. 1988. - Т.ЗЗ, № 8. - С.622-630.

138. Conover, C.D. et al. / C.D.Conover, Z.Hong, C.B.Longley // Bioconjugate Chem. 2003. - V.14, № 3. - P. 661-666.

139. Borowy-Borowski, H. et al. / H.Borowy-Borowski, C.Sodja, J.Docherty// J. Drug Target. 2004. - V.12, № 7. - P.415-424.

140. Вайнштейн, В. А. Исследование механизма полимерной солюбилизации полиеновых макролидных антибиотиков методом гель-хроматографии // Хим.-фарм. журнал. 1989. - Т.23, № 7. - С.859-863.

141. Lopez-Berestein, S. et al. Treatment of hepatosplenic candidiasis with liposomal-amphotericin В / S. Lopez-Berestein, G. P. Bodey, L. S. Frankel, К. Mehta //J. Clin. Oncol. 1987. - V.5, № 2. - P.310-317.

142. Колбин, А. С., Климко, H. Н., Карпов, О. И. Нежелательные эффекты системных антимикотиков // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48, № 8. -С.37-43.

143. Белоусов, Д. Ю., Манешина, О. А. Терапия инвазивного аспергиллеза: обзор // Антибиотики и химиотерапия. 2006. - Т.51, № 3-4. - С. 26-46.

144. Падейская, Е. Н., Бакланова, О. В. Синтетические химиотерапевтические препараты для лечения микозов // Хим.-фарм. журнал. 1993. - Т.27, № 4. -С. 12-23.

145. Gräfe, U. et al. Isolation and structure of novel autoregulators from Streptomyces griseus /U. Gräfe, G. Reinhardt, W. Schade, D. Krebs, I. Eritt, W. F. Fleck // J. Antibiot. 1982. - V.35, № 5. - P.609-614.

146. Яковлева, E. П., Алексеева, JI. E. Выделение и изучение биологических свойств веществ, стимулирующих биосинтез леворина в совместной культуре актиномицета и дрожжей // Антибиотики. 1986. - Т.31, № 11. - С.830-835.

147. Бауер, К. Анализ органических соединений. М.: Изд-во ИЛ, 1953. - 488 с.

148. Хроматография в тонких слоях / под ред. Э. Шталя. М.: Изд-во «Мир», 1965.-508 с.

149. Лазникова, Т. Н., Грачева, И. В., Краснова, Т. П. и др. Синтетическая среда для биосинтеза гентамицина // Антибиотики. 1977. - Т.22, № 2. - С. 102-108.

150. Яковлева, Е. П. Синтетическая среда для биосинтеза пол неновых антибиотиков леворина и амфотерицина В // Антибиотики. - 1980. - Т.25, № 11.-С.817-822.

151. Королева, Т. А., Кузнецова, Н. А., Ларкин, А. И. Влияние минерального фосфора на биосинтез микогептина // Антибиотики. -1977. Т.22, № 2. - С.99-102.

152. Павлюк, Ю.В., Богацкий, М.А., Орлова, Н.В. и др. Влияние фосфора на биосинтез полимиксина В В. polimyxa 1538 на средах различного состава // Антибиотики. 1979. - Т.24, № 10. - С.723-727.

153. Левитов, M. М., Бринберг, С. Л. Физиология микроорганизмов -продуцентов и процесс биосинтеза антибиотиков // Антибиотики. 1967. -Т.12, № 11.-С. 985-999.

154. Петрова, Л. Я. Хроматография антибиотиков, близких к азаломицину F в тонком слое силикагеля // Антибиотики. 1970. - Т. 15, № 3. - С.395-397.

155. Петрова, Л. Я., Митрофанова, В. Г., Свешников, Ю. Ф. Выделение и физико-химическая характеристика основных компонентов имбрицина и препарата штамма ЛИА-0111 // Антибиотики. 1974. - Т.19, № 1. - С.68-71.

156. Оноприенко, В. В., Карапетян, М. Г., Гладкова, Л. Н. Изучение химии имбрицина: отчет о НИР / Ин-т биоорганической химии им. Шемякина АН СССР.-М., 1979.-С. 1-8.

157. Комов, В. П., Шведова В. Н. Биохимия: Учеб. для вузов. М.: Дрофа, 2004. -640 с.

158. Побединский, Н.А., Торопова, Е.Г., Егоров, Н.С. Изучение активности некоторых ферментов углеводного обмена Act. noursei П Антибиотики. 1976. - Т. 21, № 11.-С. 971-973.

159. Фадеева, JI. Е. Изучение биосинтеза нистатина культурой Actinomyces noursei в условиях регулируемой ферментации: автореф. дис. . канд. биол. наук-Л., 1980.-30 с.

160. Сотникова, И. В. и др. Активность ферментов гликолиза у Tolypocladium sp. продуцента циклоспорина / И. В. Сотникова, Г. Н. Телеснина, И. Н. Крахмалева, Ю. О. Сазыкин, С. М. Навашин // Антибиотики и химиотерапия. -1991. -Т.36, № 8. - С.10-13.

161. Ермакова, Г. Н., Филиппова, М. С., Нефелова, М. В. Активность некоторых ферментов Bacillus polymyxa 153 продуцента полимиксина В в процессе спорообразования и биосинтеза // Антибиотики и химиотерапия. - 1988. - Т.ЗЗ, № 8. - С.563-566.

162. Кузнецова, О. С. К механизму стимулирующего действия дрожжеподобных грибов на образование леворина культурой Actinomyces levoris Krass: дис. канд. биол. наук. Л., 1975. - 181 с.

163. Hostalek Z. et al. Specific primary pathways supplying secondary biosynthesis / Z. Hostalek, V. Behal, E. E. Gurdova, V. Jechova // In: Genet. Ind. Microorgan. Proc. 3-rd Int. Symp., Medison, Wise., 1978. Washington D.C., 1979. - P.225-232.

164. Raczynska-Bojanowska K. Biochemical criteria in evaluation of antibiotic producing microorganisms // Postepy Hig. Med. Dosw. 1974. - V.28. - P.499-514.

165. Raczynska-Bojanowska К., Rafalski A., Ostrowska-Krysiak B. Carboxylation of propionyl-CoA in erythromycin biosynthesis // Acta Biochim. Pol. 1970. -V.17, № 4. -P.331-338.

166. Нефедова, M. В. и др. Биосинтез полимиксина В и активность ферментов цикла трикарбоновых кислот / М. В. Нефедова, Г. А. Новикова, Г. Н. Ермакова, Н. С. Егоров // Антибиотики. 1978. - Т.23, № 8. - С.682-686.164