Ассоциация экспрессии некоторых провирусов семейства HERV-К с возникновением и развитием герминогенных опухолей человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Клейман, Анна Михайловна

• Клейман, Анна Михайловна
• кандидат медицинских наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Клейман, Анна Михайловна

Список сокращений

Введение

Глава I. Обзор литературы

1.1. Общие представления о происхождении и строении HERVs

1.2. Биологическое значение HERVs

1.2.1. Влияние HERVs на экспрессию клеточных генов

1.2.2. Инсерционный мутагенез

1.2.3. Влияние HERVs на взаимодействие экзогенных вирусов с клеткой.

1.2.4. HERVs и аутоиммунные заболевания человека. 1.2.5. Иммуносупрессивное действие HERVs

1.3. Семейство HERV-K/HTDV

1.3.1. Семейство HERV-K/HTDV - член суперсемейства HERV-K

1.3.2. Провирусы HERV-K/HTDV

1.3.3. Продукты, кодируемые провирусами семейства HERV-K/HTDV

1.3.4. Экспрессия провирусов HERV-K/HTDV в тканях и в клеточных линиях

1.3.5. Детекция антител к белкам провирусов HERV-K/HTDV

1.4. Герминогенные опухоли подростков и взрослых (у мужчин)

1.5. Ассоциация ГО и экспрессии провирусов HERV-K/HTDV

Глава II. Материалы и методы

Глава III. Результаты и обсуждение

3.1. Изучение транскрипции e«vHERV-K/HTDV, cORF и PLZF при различных морфологических вариантах ГО

3.1.1. Транскрипция гена env HERV-K/HTDV

3.1.2. Транскрипция гена cORF HERV-K/HTDV

3.1.3. Транскрипция гена PLZF

3.2.Изучение гуморального иммунного ответа к белкам HERV-K/HTDV у больных ГО

3.2.1. Скрининг сывороток от больных и здоровых лиц для обнаружения антител к структурным белкам Gag и Env провирусов HERV-K/HTDV

3.2.2. Изучение особенностей антительного ответа к белкам Gag и Env HERV-K/HTDV при разных морфологических вариантах ГО

3.2.3. Подтверждение специфичности антител к Gag и Env HERV-K/HTDV, определяемых у больных ГО

3.3, Использование антител к структурным белкам Gag и Env HERV-К/ HTDV в качестве маркеров герминогенных опухолей

3.3.1. Корреляция между уровнем гуморального иммунного ответа к белкам HERV-K/HTDV и распространенностью опухолевого процесса

3.3.2. Динамика антительного ответа к структурным белкам HERV-К/ HTDV и ее корреляция с результатами лечения больных ГО

3.3.3. Антитела к белкам HERV-K/HTDV - маркеры присутствия клеток герминогенной опухоли в организме больного

3.3.4. Сравнение значения классических маркеров ГО и антител к белкам HERV-K/HTDV для мониторинга больных

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ассоциация экспрессии некоторых провирусов семейства HERV-К с возникновением и развитием герминогенных опухолей человека»

В геномах всех позвоночных животных присутствуют эндогенные ретровирусы (Endogenous Retroviruses - ERVs). Предполагается, что ERVs являются потомками экзогенных ретровирусов, инфицировавших клетки зародышевого пути предков современных животных миллионы лет назад и с тех пор закрепившихся в геноме. До 8% ДНК человека приходится на долю эндогенных ретровирусов человека (Human Endogenous Retroviruses - HERVs) (2). Большинство провирусов HERVs из-за многочисленных мутаций дефектны и не имеют открытых рамок считывания для вирусных белков (8). В нормальных тканях человека HERVs не транскрибируются или транскрипция осуществляется на низком уровне. В то же время в плаценте многие HERVs интенсивно транскрибируются, происходит синтез белков и сборка вирусных частиц, что дало основания предположить, что белки, кодируемые HERVs необходимы для образования и нормального функционирования плаценты (4,8,10).

О биологическом значении HERVs достоверно известно немного. Предполагается, что помимо участия в эмбриональном развитии и образовании плаценты (4, 10). HERVs играют роль в развитии аутоиммунных и опухолевых процессов (6, 8). Существуют экспериментальные данные, подтверждающие, что HERVs принимают участие в регуляции экспрессии клеточных генов и модулируют иммунный ответ. В настоящее время интенсивно изучается ассоциация между экспрессией HERVs и некоторыми заболеваниями человека.

Провирусы из семейства HERV-K/HTDV (Human Teratocarcinoma Derived Viruses) обладают наибольшей биологической активностью среди HERVs. Они кодируют полноценные структурные вирусные белки и функционально активные ферменты (32, 87, 88, 89, 94,102,105). В геноме присутствует два типа провирусов HERV-K/HTDV, различающихся по наличию (первый тип) или отсутствию (второй тип) 292-х нуклеотидной делеции на границе генов pol-env (80). Геномная мРНК провирусов HERV-K/HTDV 2-го типа сплайсируется, давая несколько субгеномных мРНК (83). В результате сплайсинга env мРНК образуется матрица для небольшого белка cORF (central open reading frame), который является регулятором сплайсинга полноразмерной мРНК провируса и участвует в транспорте несплайсированных мРНК из ядра в цитоплазму (83, 85, 107, 110). мРНК провирусов HERV-K/HTDV 1-го типа из-за делеции и потери акцепторного сайта сплайсинга не может сплайсироваться дважды, и провирусы HERV-K/HTDV 1-го типа не кодируют cORF (83). Недавно было показано, что cORF обладает трансформирующими свойствами и определен один из клеточных белков -мишеней, с которым взаимодействует cORF. Им оказался PLZF - клеточный регулятор транскрипции, участвующий в регуляции развития гонад у плода и контролирующий процесс сперматогенеза. (109,148).

Получены данные о строгой ассоциации экспрессии провирусов семейства HERV-K/HTDV в герминогенных опухолях подростков и взрослых (ГО). Показано, что в опухолевой ткани и в клетках carcinoma in situ (CIS) синтезируется мРНК gag и env HERV-K/HTDV и продуцируется белок Gag HERV-K/HTDV (111, 115, 123, 124). В клеточных линиях, полученных из герминогенных опухолей, синтезируются вирусные белки, и образуются вирусные частицы (5, 84, 103, 104, 117, 118). У больных ГО в значительном проценте случаев (от 62,5% до 70%) образуются антитела к структурным белкам HERV-K/HTDV (44, 98). Все эти данные указывают на возможное участие провирусов HERV-K/HTDV в возникновении и развитии ГО. A.Boese et al. была предложена гипотеза, согласно которой взаимодействие cORF и PLZF играет важную роль в этиопатогенезе герминогенных опухолей (109).

Актуальность проблемы. Среди онкологических заболеваний мужчин герминогенные опухоли являются сравнительно редкими и составляют всего 1-2% от всех опухолевых заболеваний мужчин. Анализ заболеваемости ГО в разных возрастных группах показывает, что герминогенными опухолями болеют в основном молодые мужчины в возрасте от пятнадцати до пятидесяти лет, и пик заболеваемости приходится на 20-25 и 35 лет в зависимости от морфологического варианта заболевания. Уровень заболеваемости ГО в последнее время медленно, но неуклонно повышается, особенно в развитых странах, в связи с чем изучение этиологии и патогенеза герминогенных опулолей, а также поиск маркеров, позволяющих обнаружить опухоль на ранних стадиях заболевания, является важной и актуальной задачей. С другой стороны, изучение экспрессии эндогенных ретровирусов человека семейства HERV-K/HTDV в герминогенных опухолях подростков и взрослых может внести определенный вклад в фундаментальные исследования роли HERVs в канцерогенезе.

К началу наших исследований было известно об активации экспрессии провирусов НЕКУ-КЖГОУ в клетках герминогенных опухолей. Тем не менее, некоторые важные вопросы оставались неизученными. Так, например, не было известно, с каким из двух типов провирусов НЕЯУ-К/НТОУ ассоциировано развитие ГО. Еще одним важным направлением в изучении роли провирусов НЕКУ-К/НТЕ)У в возникновении и развитии ГО является исследование экспрессии генов ет и сОШ7 НЕЯУ-К/НТОУ, так как предполагается, что Епу, обладает иммуносупрессивными свойствами, а белок сОШ7 имеет трансформирующую активность. Однако экспрессия сОШ7 в клетках ГО не была изучена совсем, а транскрипция гена ет НЕКУ-К/НТЮУ изучалась методом гибридизации т ей!, чувствительность которого недостаточна для выявления низкопредставленных транскриптов. Поэтому данные об отсутствии транскрипции ет при определенных морфологических вариантах ГО нуждались в подтверждении более чувствительным методом.

Предположение о том, что антитела к белкам провирусов НЕ11У-К/ШТ)У можно использовать как серологические маркеры ГО, неоднократно обсуждалось в литературе (32, 89, 100, 103). Однако до настоящего времени работы по изучению динамики титров антител у больных ГО, ее корреляции с другими проявлениями болезни и результатами лечения не проводились. Вопрос о том, какие морфологические варианты ГО сопровождаются гуморальным иммунным ответом к белкам НЕКУ-К/НТБУ, также оставался открытым.

Таким образом, исследования экспрессии генов ет и сОКР провирусов НЕЯУ-К/НТОУ при различных морфологических вариантах ГО, а также изучение антительного ответа на белки провирусов НЕИУ-К/НТОУ по-прежнему остаются актуальными.

Целью работы Целью настоящей работы было изучение экспрессии провирусов НЕЛУ-К/НТОУ при различных морфологических вариантах ГО и проверка гипотезы о взаимодействии белков сОЮ7 и в клетках герминогенных опухолей. Кроме того, целью работы было изучение гуморального иммунного ответа к белкам НЕЛУ-К/НТОУ при различных морфологических вариантах ГО и возможности использования вирусспецифических антител как серологических маркеров ГО.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1) Изучить экспрессию гена env HERV-K/HTDV при различных морфологических вариантах ГО;

2) Изучить экспрессию cORF HERV-K/HTDV при различных морфологических вариантах ГО;

3) Изучить экспрессию PLZF при различных морфологических вариантах ГО;

4) Исследовать гуморальный иммунный ответ к белкам провирусов HERV-K/HTDV при различных морфологических вариантах ГО;

5) Проанализировать возможность использования вирусспецифических антител как серологических маркеров ГО.

Научная новизна. Высокочувствительным методом RT-PCR было показано, что env HERV-K/HTDV транскрибируется во всех злокачественных морфологических формах ГО яичка, но не транскрибируются в зрелой и незрелой тератомах. Кроме того, показано, что env HERV-K/HTDV транскрибируется в нормальной паренхиме яичка и плаценте.

При изучении транскрипции cORF впервые показано, что мРНК полноразмерного cORF обнаруживается только в образцах герминогенных опухолей, но отсутствует в образцах паренхимы здорового яичка. В паренхиме яичка, прилегающей к опухоли, обнаружение мРНК белка cORF коррелирует с присутствием в ткани либо клеток опухоли, либо клеток carcinoma in situ (CIS).

Впервые изучена транскрипция гена PLZF при различных морфологических формах герминогенных опухолей и показано, что PLZF не транскрибируется в герминогенных опухолях яичка. Следовательно, в клетках ГО не может происходить взаимодействие между белками cORF и PLZF.

При изучении гуморального иммунного ответа к белкам Gag и/или Env HERV-K/HTDV из 310 у 209 (67,4%) больных ГО были обнаружены антитела к Gag и/или Env HERV-K/HTDV. При этом впервые было установлено, что гуморальный иммунный ответ к белкам HERV-K/HTDV у больных ГО развивается при всех морфологических вариантах первичной опухоли. В случае, когда первичная опухоль представлена только элементами зрелой и/или незрелой тератомы, присутствие антител к вирусным белкам свидетельствует, скорее всего, о том, что в метастазах у этого больного присутствуют клетки злокачественной формы ГО, которые и продуцируют вирусные антигены.

Впервые показано, что наиболее часто антитела к белкам НЕЯУ-К/НТОУ встречаются у больных семиномой (77,6%), смешанной опухолью с элементами семиномы (81%) и опухолью желточного мешка (80%). Реже всего антивирусные антитела встречались у больных хориокарциномой (33,3%) и эмбриональным раком (43%).

При изучении динамики изменения антительного ответа к белкам НЕЯУ-К/НТОУ и ее корреляции с результатами лечения было впервые показано: у большинства серопозитивных больных происходит снижение значений титров антивирусных антител в ходе проводимого лечения, что коррелирует с улучшением состояния больного и регрессией опухоли; повышенные титры антител к белкам НЕЯУ-К/НТОУ отражают присутствие в организме больного клеток ГО, продуцирующих вирусные антигены.

Практическая ценность. Впервые на большом клиническом материале было показано, что повышенные титры антител к белкам провирусов НЕЯУ-К/НТБУ после окончания химиотерапевтического лечения статистически достоверно коррелируют с обнаружением живых опухолевых клеток ГО, прогрессированием заболевания и возникновением рецидивов. Исходя из этих данных, было сделано заключение, что антитела к белкам НЕЛУ-К/НТОУ отражают наличие в организме больного живых опухолевых клеток, и могут быть использованы как серологические маркеры для мониторинга больных ГО подростков и взрослых.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Клейман, Анна Михайловна

Выводы

1. Ген env HERV-K/HTDV транскрибируется во всех злокачественных морфологических вариантах ГО яичка, но не транскрибируются в тератомах - доброкачественных формах этих опухолей.

2. Провирусы HERV-K/HTDV, кодирующие полноразмерный белок cORF, транскрибируются только в злокачественных герминогенных опухолях яичка. В паренхиме прилегающей к опухоли, транскрипция провирусов HERV-K/HTDV, кодирующих полноразмерный белок cORF, коррелирует с присутствием клеток carcinoma in situ или опухоли.

3. В герминогенных опухолях яичка ген PLZF не транскрибируется. В клетках ГО не происходит взаимодействие между PLZF и cORF.

4. Гуморальный иммунный ответ к белкам HERV-K/HTDV у больных ГО развивался при всех морфологических вариантах первичной опухоли, включая тератому. У 209 из 310 больных ГО (67,4%) были обнаружены антитела к Gag и/или Env HERV-K/HTDV.

5. Наиболее часто антитела к белкам HERV-K/HTDV встречались у больных семиномой (77,6%), смешанной опухолью с элементами семиномы (81%) и опухолью желточного мешка (80%). Реже всего антивирусные антитела продуцировали больные хориокарциномой (33,3%) эмбриональным раком (43%)

6. Понижение титров вирусспецифических антител коррелировало с успешным лечением ГО; повышенные титры антител к белкам НЕЯУ-КЛТГОУ после лечения коррелировали с неудачами лечения и отражали наличие в организме живых клеток ГО, продуцирующих вирусные антигены.

7. Антитела к белкам НЕЯУ-К/НТОУ могут быть использованы как серологические маркеры герминогенных опухолей для мониторинга больных ГО.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Клейман, Анна Михайловна, 2002 год

1. Huebner R.J., Todaro G.J. Proceed. Nat. Acad. Sci. USA, 1970, v.64, p. 10871094

2. Nature, 2001, "Human genome", Initial sequencing and analysis of the human genome, p. 860-921

3. Leib-Mosch C., Seifarth W. Evolution and biological significance of human retroelements. Virus Genes, 1996, v.l 1, N2-3, p. 133-145

4. Harris J.R. BioEssays, 1998, v.20,307-316

5. Boiler K., Konig H, Sauter M., Mueller-Lantzsch N., Lower R., Lower J., Kurth R. Evidance that HERV-K is the endogenous retrovirus sequence that codes for the human teratocarcinoma-derived retrovirus HTDV Virology, 1993, v. 196, p. 349-353

6. Lower R. The pathogenetic potential of endogenous retroviruses: facts and fantasies. Trends in Microbiology, 1999, v.7, N9, p. 350- 355

7. Hohenadl C., Germaier H., Hagenhofer M., Herrmann M., Kind P., Hehlmann R., Erfle V., Leib-Mosch C. Activation of human endogenous retroviral sequences by UVB

8. Urnovitz H.B., Murphy H.W. Human endogenous retroviruses: nature, occurence, and clinical implications in human disease Clin. Microbiol. Rev., 1996, v.9, p. 7299

9. Ono M., Kawakami M., Ushikubo H. Stimulation of expression of the human endogenous retrovirus genome by female steroid hormones in human breast cancer cell line T47D J.Virology, 1987, v.61, p. 2059-2062

10. Villareal L.P On Viruses, sex, and motherhood. J. Virology, v.71, N2, 859-865

11. Barbulescu M., Turner G., Seaman M.I. Deinard A.S., Kidd K.K., Lenz J. Many human endogenous retrovirus К (HERV-K) proviruses are unique to humans Current Biology, 1999, v.9, pp. 861-868

12. Lower R., Lower J., Kurth R. The viruses in all of us: characteristics and biological significance of human endogenous retrovirus sequences. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, v.93, p. 5177-5184

13. Хесин P. Б. Непостоянство генома. Наука, 1984 г., стр. 228-294

14. Leib-Mosch С., Brack-Werner R., Werner Т., Bachmann M., Faff O., Erfle V., Hehlmann R Endogenous retroviral elements in human DNA. Cancer Research (suppl.), 1990, v.50, 5636s-5642s

15. Лебедев Ю.Б. Эндогенные ретровирусы: возможная роль в функционировании клеток человека. Молекулярная биология, 2000, т.34, N4, стр. 635-645

16. Cordonnier A., Casella J.-F., Heidmann Т. Isolation of novel human endogenous retrovirus-like elements with foamy virus-related pol sequence. J.Virology, 1995, v.69, N9, p. 5890-5897

17. Blond J.-L., Beseme F., Duret L., Bouton O., Bedin F., Perron H., Mandrand B., Mallet F. Molecular characterization and placental expression of HERV-W, a new human endogenous retrovirus family J.Virology, 1999, v.73, N2, p. 1175-1785

18. Widegren B., Kjellman C., Aminoff S., Salford L.G., Sjogren H.O. The structure and phylogeny of a new family of human endogenous retroviruses. J.Gen. Virology, 1996, v.77, p. 1631-1641

19. Kjellman C., Sjogren H.-O., Widegren B. HERV-F, a new group of human endogenous retrovirus sequences J.Gen. Virology, 1999, v.80, p. 2383-2392

20. Blusch J.H., Haltmeier M., Frech K., Sander I., Leib-Mosch C., Brack-Werner R., Werner T. Identification of endogenous retroviral sequences based on modular organization: proviral structure at the SSAV1 locus. Genomics, 1997, v.43, p. 5261

21. Schon U., Seifarth W., Baust C., Hohenadl C., Erfle V., Leib-Mosch C. Cell type specific expression and promotor activity of human endogenous retroviral long terminal repeats. Virology, 2001, v.279, N1, p. 280-291

22. Kato N., Shimotohno K., VanLeeuwen D., Cohen M. Human proviral mRNAs down regulated in choriocarcinoma encodes a zink finger protein related to Krüppel. Molec. And Cell. Biology, 1990, v. 10, N8, p. 4401-4405

23. Feuchter-Murthy A., Freeman J.D., Mager D.L. Splicing of a human endogenous retrovirus to a novel phospholipase A2 related gene. Nucleic. Acids Res. 1993, v.21, p. 135-143

24. Kapitonov V.V., Jurka J. The long terminal repeat of an endogenous retrovirus induces alternative splicing and encodes an additionalcarboxy-terminal sequence in the human leptin receptor. J. Mol. Evol., 1999, v.48, N2, p. 248-251

25. Coffin J.M Chapter 58 in Fields Virilogy, Third Edition edited by B.N.Fields, Knipe D.M., Howley et al., 1996, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia

26. Patience C., Wilkinson D.A., Weiss R.A. Our rertroviral heritage. Trends in Genetic, 1997, v.l3,N.3,p. 116-120

27. Vijaya S., Steffen D.L., Robinson H.L. Acceptor sites for retroviral integration map near DNase I-hypersensitive sites in chromatin. J.Virology, 1986, v.60, p. 683-692

28. Berkhout B., Jebbink M., Zsiros J. Identification of an active reverse transcriptase enzyme encoded by a human endogenous HERV-K retrovirus. J.Virology, 1999, v.73, N3, p. 2365-2375

29. Goff S.P. Operating under a Gag order: a block against incoming virus by the Fvl gene. Cell, 1996, v86, p. 691-693

30. Benit L., Lallemand J.-B., Casella J.-F., Philippe H., Heidmann T. ERV-L elements: a family of endogenous retrovirus-like elements active throughout the evolution of Mammals. J. Virology, 1999, v.73, N. 4, p. 3301-3308

31. Schneider P.M., Witzel-Schlomp K., Rittner C., Zhang L. The endogenous retroviral insertion in the human complement C4 gene modulates the expression of homologous genes by antisense inhibition. Immunogenetics, 2001, v.53, N1, p.1-9

32. Abraham G.N., Khan A.S. Human endogenous retroviruses and immune disease. Clinical immunology and immunopathology, 1990, v.56, p. 1-8

33. Krieg A.M., Gourley M.F., Perl A. Endogenous retroviruses: potential etiologic age in autoimmunity. FASEB J., 1992, v.6, p. 2537-2544

34. Rasmussen H.B., Perron H., Clausen J. Do endogenous retroviruses have etiologi implications in inflammatory and degenerative nervous system diseases? Acta Neu Scand., 1993, v.88, p. 190-198

35. Gourley M.F., Kisch W.J., Mojcik C.F., King L.B., Krieg A.M., Steinberg A.D. Role of endogenous retroviruses in autoimmune diseases. Tohoku J. Exp. Med., 1994, v.173, p. 105-114

36. Query H.C., Keene J.D. Human autoimmune protein associated with U1 RNA conta a region of homology that is cross-reactive with retroviral p30BaB antigen. Cell, 19 v.51, p. 211-220

37. Nakagawa K., Brusic V., McColl G., Harrison L.C. Direct evidence for the expression of multiple endogenous retroviruses in the synovial compartment in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum., 1997, v.40, N4, p. 627-638

38. Jolivet-Reynaud C., Perron H., Ferrante P., Becquart L., Dalbon P., Mandrand B. Specificities of multiple sclerosis cerebrospinal fluid and serum antibodies against mimotopes. Clin. Immunol., 1999, v.93, N3, p. 283-293

39. Boiler K., Janssen O., Schuldes H., Tonjes R.R., Kurth R. Characterization of the antibody response specific for the human endogenous retrovirus HTDV/HERV-K. J.Virology, 1997, v.71, p. 4581-4588

40. Choi Y., Kappler J.W., Marrack P. A superantigen encoded in the open readind frame of the 3' long terminal repeat of mouse mammary tumour virus. Nature, 1991, v.350, p. 203-206

41. Kappler J.W., Staerz U., White J., Marrack P.C. Self-toleranceeliminates T cells specific for Mis-modified products of the major histocompatibility complex. Nature, 1988, v.332,p. 35-40

42. MacDonald H.R., Schneider R, Lees R.K., Howe R.C., Acha-Orbea H., Festenstein H., Zinkernagel R.M., Hengartner H. T-ceil receptor Vb use predicts reactivity and tjlerance to Mlsa-encoded antigens. Nature, 1988, v.332, p. 40-45

43. Baccala R., Kono D.H., Walker S., Balderas R.S., Theofilopoulos A.N. Genomically imposed and somatically modified human thymocyte Vb gene repertoires. Proceed. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, v 88,2908-2912

44. Conrad B., Weissmahr R.N., Boni J., Arcari R., Schupbach J., Mach B. A human endogenous retroviral superantigen as candidate autoimmune gene in type I diabetes. Cell, 1997, v.90, p. 303-313

45. Murphy V.J., Harrison L.C., Rudert W.A., Luppi P., Trucco M., Fierabracci A., Biro P.A., Bottazzo G.F. Retroviral superantigen and type I diabetes mellitus. Cell, 1998,v.95, p. 9-11

46. Lan M.S., Mason A., Coutant R., Chen Q.-Y., Vargas A., Rao J., Gomez R., Chalew S., Garry R., Maclaren N.K. HERV-KlOs and immune-mediated (type I) diabetes. Cell, 1998, v.95, p. 14-16

47. Jaeckel E., Heringlake S., Berger D., Brabant G., Hunsmann G., Manns M.P. No evidance for association between IDDMK( 1,2)22, a novel isolated retrovirus and IDDM. Diabetes, 1999, v.48, N1, p. 209-214

48. Lapatschek M., Durr S., Lower R., Magin C., Wagner H., Miethke T. Functional analysis of the env open reading frame in human endogenous retrovirus IDDMK( 1,2)22 encoding superantigen activity. J.Virilogy, 2000, v.74, N14, p. 6386-6393

49. Seidl C., Donner H., Petershofen E., Usadel K.H., Seifried E., Kaltwasser J.P., Badenhoop K. An endogenous retroviral long terminal repeat at the HLA-DQB1 gene locus confers susceptibility to rheumatoid arthritis. Hum. Immunology, 1999, v.60, p. 63-68

50. Andersson G., Syensson A.C., Setterblad N., Rask L. Retroelements in the human MHC classll region. Trends Genet., 1998, v. 14, N3, p. 109-114

51. Cianciolo G.J., Copeland T.D., Oroszlan S., Snyderman R. Inhibition of lymphocyte proliferation by a synthetic peptide homologous to retroviral envelope proteins. Science, 1985, v.230, p. 453-455

52. Haraguchi S., Good R.A., Cianciolo G.J., Day N.K. A synthetic peptide homologous to retroviral envelope protein down-regulates TNF-alpha and IFN-gamma mRNA expression. J. Leukoc Biol 1992, v.52, N4, p. 469-472

53. Nelson M., Nelson D. Inhibition of interleukin-2 production by tumor cell products and by CKS-17, a synthetic retroviral envelope peptide. Cancer Immunol Immunother., 1990; v.30, N6 p. 331-341

54. Lang M.S., Oostendorp R.A., Simons P.J., Boersma W., Knegt P., van Ewijk W. New monoclonal antibodies against the putative immunosuppressive site of retroviral pl5E. Cancer Res., 1994, v.54 p. 1831-1836

55. Braendstrup O. HLA class I antigens are expressed by Sertoli cells of intratubular germ cell neoplasia. APMIS, 1996, v.104, p. 579-582

56. Lindeskog M., Mager D.L., Blomberg J. Isolation of a human endogenous retroviral HERV-H element with an open env reading frame. Virology, 1999, v.258, N2, p. 441-50

57. Mi S., Lee X., Li X., Veldman G.M., Finnerty H., Racie L., Lavallie E., Tang X.Y., Howes S., Keith J.C., McCoy J.M. Syncytin is a captive retroviral envelope protein involved in human placental morphogenesis. Nature, 2000, v.403, N6671, p. 785-789

58. Venables P.J.W., Brookes S.M., Griffiths D.,Weiss R.A., Boyd M.T. Abundance of an endogenous retroviral envelope protein in placental trophoblasts suggests a biological function. Virilogy, 1995, v.211, p. 589-592

59. Callahan R. Two families of human endogenous retroviral genome. Banbury report, 1988, v.30, p. 91-100

60. Deen K.C., Sweet R.W. Murine mammary tumor virus pol-related sequences in human DNA: characterization and sequence comparison with the complete murine mammary tumor pol gene J.Virology, 1986, v.57, p. 422-432

61. Medstrand P., Blomberg J. Characterization of novel reverse transcriptase encoding human endogenous retroviral sequences similar to type A and Type B retroviruses: differential transcription in normal human tissues J.Virology, 1993, v.67, p. 6778-6787

62. Franklin G.C., Chretien S., Hanson I.M., Rochefort H., May F.E.B., Westley B.R., Expression of human sequences related to those of mouse mammary tumor virus J.Virology, 1988, v.62, p. 1203-1210

63. Anderson M-L., Lindeskog M,, Medstrand P., Westley B., May F., Blomberg J. Diversity of human endogenous retrovirus class II-like sequences J. of General Virology, 1999, v.80, p. 255-260

64. Ono M., Yasunaga T., Miyata T., Ushikubo H. Nucleotide sequence of human endogenous retrovirus genome related to the mouse mammary tumor virus genome J.Virology, 1986, v.60, p. 589-598

65. Tonjes R.R., Czauderna F., Kurth R. Genome-wide screening, cloning, chromosomal assignment, and expression of full-length human endogenous retrovirus type K. J.Virology, 1999, v.73, N.l 1, p. 9187-9195

66. Mayer J., Sauter M., Racz A., Scherer D., Mueller-Lantzsch N. An almost intact human endogenous retrovirus K on human chromosome 7. Nature Genetics, 1999, v.21, p. 257-258

67. Lower R., Tonjjes R.R., Korbmacher C., Kurth R, Lower J. Identification of Rev-related protein by analysis of spliced transcripts of the human endogenous retroviruses HTDV/HERV-K. J.Virology, 1994, v. 69, N1, p. 141-149

68. Lower R, Boiler K., Hasenmaier B., Corbmacher C., Muller-Lantzsch N., Lower J., Kurth R. Identification of human endogenous retroviruses with complex mRNA expression and particle formation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v.90, p. 4480-4484

69. Magin C., Lower R., Lower J! cORF and RcRE, the Rev/Rex and RRE/RxRE homologues of the human endogenous retrovirus family HTDV/HERV-K. J.Virology, 1999, v.73, p. 9496-9507

70. Etkind P.R., Lumb K., Du J., Racevskis J Type 1 HERV-K genome is spliced into subgenomic transcripts in the human breast tumor cell line T47D. Virology, 1997, v.234, p. 304-308

71. Roest P.A.M., Roberts R.G., Sugino S., van Ommen G.J.B., den Dunnen J.T. Protein trancated test (PTT) for rapid detection of translation-terminating mutations. Hum.Mol.Genetic, 1993, v.2, p. 1719-172

72. Mayer J., Meese E., Mueller-Lantzsch N. Multiple human endogenous retrovirus (HERV-K) loci with gag open reading frames in human genome. Cytogenetic Cell Genetic, 1997, v.78, p. 1-5

73. Padow M., Lai L., Fisher R.J., Zhou Y.C., Wu X., Kappes J.C., Towler E.M. Analysis of human immunodeficiency virus type 1 containing HERV-K protease AIDS Res Hum Retroviruses, 2000, v.16, N18, p. 1973-1980

74. Lander R.D., McNulty D.E., Carr S.A., RobertsG.D., Caradonna S.J Characterization of distinct nuclear and mitochondrial isoforms of human deoxyuridine triphosphate nucleotidohydrolase J.Boil. Chem. 1996, v.271, pp. 7745-7751

75. Mcintosh E.M., Haynes R.H. HIV and human endogenous retroviruses: an hypothesis with therapeutic implications Acta Biochim Pol 1996; v.43 pp. 583592

76. Harris J.M., Mcintosh E.M., Muscat G.E. Expression and cytoplasmic localisation of deoxyuridine triphsphate pyrophosphatase encoded by a human endogenous retrovirus. Arch. Virol., 2000, v. 145, p. 353-363

77. Bergman AC, Bjornberg O., Nord J., Nyman P.O., Rosengren A.M. The protein p30, encoded at the gag-pro junction of mouse mammary tumor virus, is a dUTPase fused with a nucleocapsid protein. J Virol 1994 v.68, pp. 2313-2319

78. Harris J.M., Haynes R.H., Mcintosh E.M. A consensus sequence for a functional human endogenous retrovirus K (HERV-K) dUTPase Biochem. Cell Biol., 1997, v.75, p. 143-151

79. Lower, J. Lower, R. Kurth The viruses in all of us: characteristics and biological significance of human endogenous retrovirus sequenses Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, v.93, 5177-5184

80. Tonjes R.R., Boiler K., Limbach C., Lugert R., Kurth R. Characterization of human endogenous retrovirus type K virus-like particles generated from recombinant baculoviruses. Virology, 1997, v.233, p. 289-291

81. Kitamura Y., Ayukawa T., Ishikawa T., Kanda T., Yoshiike K. Human endogenous retrovirus K10 encodes a functional integrase J.Virology, 1996, v.70, p. 3302-3306

82. Lower R., LowerJ., Frank H., Harzmann R., Kurth R Human teratocarcinoma cultured in vitro produce unique retrovirus-like viruses. J,Gen.Virology, 1984, v.65, p.887-898

83. Mayer J., Meese E., Mueller-Lantzsch N. Chromosomal assignment of human endogenous retrovirus K (HERV-K) env open reading frame Cytogenetic Cell Genet, 1997, v.79, N1-2, p. 157-161

84. Tonjes R.R., Limbach C., Lower R., Kurth R. Expression of human endogenous retrovirus type K envelope glycoprotein in insect and mammalian cells J.Virology, 1997, v.71,p. 2747-2756

85. Gotzinger N., Sauter M., Roemer K., Mueller-Lantzsch N. Regulation of human endogenous retrovirus-K Gag expression in teratocarcinoma cell lines and human tumours. J.Gen. Virology, 1996, v.77, p. 1-8

86. Bieda K., Hoffmann A., Boiler K. Phenotypic heterogeneity of human endogenous retrovirus particles produced by teratocarcinoma cell lines. J.Gen.Virology, 2001, v.82, p. 591-596

87. Herbst H., Sauter M., Muller-Lantzsch N. Expression of human endogenous retrovirus K element in germ cell and trophoblastic tumors Am.J. Pathology, 1996, v.149, p. 1727-1735

88. Li M.D., Bronson D.L., Lemke T.D., Faras A.J. Restricted expression of new HERV-K members in human teratocarcinoma cells. Virology, 1995, v.208, p. 733741

89. Brodsky I., Foley B.,Gillespie D.Expression of human endogenous retrovirus (HERV-K) in chronic myeloid leukemia. Leuk-Limphoma, 1993, v. 11, Suppl. 1, p. 119-123

90. Brodsky I., Foley B., Haines D., Johnston J., Cuddy K., Gillespie D.Expression of HERV-K proviruses in human leukocytes. Blood, 1993, v.81, N9, p. 2369-2374

91. Medstrand P., Lindeskog M., Blomberg J. Expression of human endogenous sequences in peripheral blood mononuclear cells of healthy individuals. J. Gen. Virology, 1992, v.73, p. 2463-2466

92. Wilier A., Saussele S., Gimbel W., Seifarth W., Kister P., Leib-Mosch C., Hehlmann R. Two groups of endogenous MMTV related retroviral env transcripts expressed in human tissues. Virus Genes, 1997, v.15, N2, p. 123-133

93. Herbst H., Kuhler-Obbarius C., Lauke H., Sauter M., Mueller-Lantzsch N.,Harms D., Loning T. Human endogenous retrovirus (HERV)-K transcripts in gonadoblastomas and gonadoblastoma-derived germ cell tumours Virchows Arch., 1999, v.434, Nl,p. 11-15

94. Harris J.M., Mcintosh E.M., Muscut G.E.O. Structure/function analysis of a dUTPase:catalytic mechanism of a potential chemotherapeutic target J.Mol.Biol. 1999, v.288, pp. 275-287

95. Хэм А., Кормак Д. Гистология, том 5, глава 27, стр. 183-222

96. Bosl G.J., Motzer R.J. Testicular Germ Cell cancer The New England Journal of Medicine, 1997, v.337, N4, p. 242-252

97. Hales D.B., Diemer Т., Hales K.H. Role of cytokines in testicular function. Endocrine, 1999, v. 10, N.3, p. 201-217

98. Braendstrup O., Moller M.-L., Werdelin O. Sertoli cells of intratubular germ cell neoplasia express p2 microglobulin. APMIS, 1995, v. 103, p. 548-552

99. Bols В., Jensen L., Jensen A., Braendstrup O. Immunopathology of in situ seminoma. International. J. Experimental Pathology, 2000, v.81, N3, p. 211-217

100. Bols В., Jensen L., Jensen A., Braendstrup O. Immunopathology of in situ seminoma. International. J. Experimental Pathology, 2000, v.81, N3, p. 211-217

101. Rajpert-De Meyts E., Jorgensen N., Brondum-Nielsen K., Muller J., Skakkebaek N.E. Developmental arrest of germ cells in the pathogenesis of germ cell neoplasia. APMIS 1998 v. 106, N.l, p. 198-204

102. Looijenga L.H., de Munnik H., Oosterhuis J.W. A molecular model for the development of germ cell cancer. Int J Cancer 1999, v.83, N.6, p. 809-814

103. Petersen P.M., Giwercman A., Hansen S.W., Berthelsen J.G., Daugaard G., Rorth M., Skakkebaek N.E. Impaired testicular function in patients with carcinoma-in-situ of the testis. J. Clin. Oncol. 1999, v. 17, N.l, p. 173-179

104. Dieckmann K.P., Skakkebaek N.E., Carcinoma in situ of the testis: review of biological and clinical features. Int J Cancer, 1999, v.83 N.6, p. 815-822

105. Гилберт С. Биология развития, «Мир», 1995, т.З, стр. 259-293

106. Looijenga L.H., Verkerk A.J.M.H., Dekker М.С., van Gurp R.J.H.L.M., Gillis A.J.M., oosterhuis J.W. Genomic imprinting in testicular germ cell tumours. APMIS, 1998, v.106, p. 187-197

107. Jorgensen N., Rajpert-De Meyts E., Graem N., Muller .J, Giwercman A., Skakkebaek N.E. Expression of immunohistochemical markers for testicular carcinoma in situ by normal human fetal germ cells. Lab Invest, 1995, v.72, N.2, p. 223-231

108. Andrews P.W. Teratocarcinomas and human embriology: pluripotent human EC cell lines. APMIS, 1998, v. 106, p. 158-168

109. Кадагидзе З.Г., Шелепова B.M., Соколов A.B. Значение опухолевых маркеров в клинике герминогенных опухолей яичка. Материалы конференции «Герминогенные опухоли яичка: биология, клиника, диагностика, лечение» Москва, 2-3 марта 2000г., стр. 14-23

110. Dmitrovsky E., Bosl G.J., Chaganti R.S.K. Clinical and genetic features of human germ cell cancer. Cancer Surveys, 1990, v.9, N.2, p. 369-387

111. Nakazumi H., Sasano H., Maehara I., Ozaki M., Tezuka F., Orikasa S. Estrogen metabolism and impaired spermatogenesis in germ cell tumors of the testis. J Clin Endocrinol Metab., 1996, v.81,N3,p. 1289-1295

112. Schar B.K., Otto V.I., Hanseler E. Simultaneous detection of all four alkaline phosphatase isoenzymes in human germ cell tumors using reverse transcription PCR. Cancer Reseach, 1997, v.57, p. 3841-3846

113. Hawe N„ Soares V., Niswander L., Cattoretti G., Pandolfi P.P. Targeted disruption of the PLZF gene of acute promyelocytic leukemia results in phocomelia and altered spermatogenesis. Acute Leukemia Therapy 1. abs.l 151

114. Shaknovich R., Yeyati P.L., Ivins S., Melnick A., Lempert C., Waxman S., Zelent A., Licht J.D. The promyelocytic leukemia zink finger protein affects myeloid cell growth differentiation and apoptosis. Mol. Cell. Bilology, 1998, v.18, N9, p. 55335545

115. Yeyati P.L., Shaknovich R., Boterashvili S., LiJ., Ball H.J., Waxman S., Nason-Burchenal K., Dmitrovsky E., Zelent A., Licht J.D. Leukemia translocation protein PLZF inhibits cell growth and expression of cyclin A. Oncogene, 1999, v.18, p. 925-934

116. Lai-Chu Wu Isolation and long-term storage of proteins from tissues and cells using TRIzol reagent. Focus, v. 17, N3, p. 98-100

117. Галактионов В.Г. Иммунология, Издательство Московского университета, 1998, стр.64

118. Дейчман Г.И. Опухолевые антигены и противоопухолевый иммунитет (врожденный и приобретенный). Канцерогенез, Научный мир, 2000, стрЗЮ-332

119. Schommer S., Sauter М., Krausslich H.G., Best В., Mueller-Lantzsch N. Characterization of the human endogenous retrovirus К proteinase J.General Virology, 1996, v.77, pp 375-379

120. Shi S.-R., Imam S.A., Young L., Cote R.J., Taylor C.R. Antigen retrieval immunohistochemistry under the influence of pHusing monoclonal antibodies. J. Histochemistry and Cytochemistry, 1995, v.43, N2, p. 193-201

121. Sci S.-R., Cote R.J., Taylor C.R. Antigen retrieval immunohistochemistry: past, present and future. J. Histochemistry and Cytochemistry, 1997, v.45, N3, p. 3273431. Благодарности

122. Автор выражает искреннюю благодарность всем, без кого эта работа не могла состояться:

123. Ведущему научному сотруднику лаборатории структуры и функций генов человека Института биоорганической химии им. М.М Шемякина Ю.А. Овчинникова РАН Виноградовой Т.В. за моральную поддержку, помощь в работе и внимательное обсуждение результатов

124. Главному научному сотруднику отделения клинической фармакологии и химиотерапии, профессору Тюляндину С.А. за помощь в организации работы и активную под держку работы

125. Врачу онкологу отделения клинической фармакологии и химиотерапии Трякину A.A. за самое непосредственное и активное участие в работе Ведущему инженеру лаборатории вирусного канцерогенеза Репкиной И.А за техническое содействие в работе

126. Всем сотрудникам Лаборатории вирусного канцерогенеза, и, прежде всего, Степиной В.Н., Яковлевой Л.С., Щербак Л.Н. и Новиковой Е.В. за помощь в работе и ценные советы

127. Заведующему лабораторией механизмов регуляции иммунитета Казанскому А.Б. за ценные консультации