Аналоги нуклеозидов, содержащие 1,2,4-триазольный фрагмент тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат наук Матвеев, Андрей Валерьевич

• Матвеев, Андрей Валерьевич
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Матвеев, Андрей Валерьевич

СОДЕРЖАНИЕ

Список условных обозначений и сокращений

1. Введение

2. Литературный обзор

2.1 Синтез рибавирина и его аналогов

2.1.1 Синтез производных 1Н-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты

2.1.2 Способы образования гликозидной связи в молекуле рибавирина и его аналогов

2.1.2.1 Химическое рибозилирование

2.1.2.2 Химико-ферментативное рибозилирование

2.1.2.3 Синтез на основе гидразидов рибозы

2.1.3 Возможные пути модификации молекулы нуклеозидного аналога

2.1.4 Пролекарственные формы рибавирина

2.2 Биологическая активность рибавирина и его аналогов

2.2.1 Рибавирин: механизм действия и побочные эффекты

2.2.2 Монотерапия и комбинированная терапия с помощью рибавирина

2.2.3 Аналоги рибавирина

2.2.3.1 Вирамидин

2.2.3.2 Мизорибин

2.2.3.3 Этинилсодержащие аналоги рибавирина

2.2.3.4 Аналоги рибавирина с гидрофобными заместителями в гетероциклическом основании

2.2.4 Специфическая Таргетная Антивирусная Терапия ВГС (СТАТ-С)

2.2.5 Противовирусная активность рибавирина и его

аналогов

3. Теоретическая часть

3.1 Синтез 5-замещенных производных 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты

3.2 Оценка возможности химико-ферментативного (биотехнологического) способа получения аналогов рибавирина с 5-замещенным 1,2,4-триазол-З-

карбоксамидным фрагментом

3.3 Химическое получение аналогов рибавирина с 5-замещенным 1,2,4-триазол-З-карбоксамидным фрагментом

3.4 Исследование биологической активности 5-замещенных аналогов рибавирина

4. Экспериментальная часть

5. Выводы

6. Публикации автора

7. Благодарности

8. Список литературы

Список условных обозначений и сокращений

АТФ - аденозинтрифосфат

ВГС - вирусный гепатит С

ГТФ - гуанозинтрифосфат

ДМСО - диметисульфоксид

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИМФДГ - инозинмонофосфатдегидрогеназа

ПНФ - пуриннукпеозидфосфорилаза

РНК - рибонуклеиновая кислота

РТФ - рибавиринтрифосфат

ТГФ - тетрагидрофуран

ТСХ - тонкослойная хроматография

ЯМР - ядерный магнитный резонанс

CDI - карбонилдиимидазол

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Аналоги нуклеозидов, содержащие 1,2,4-триазольный фрагмент»

1. Введение.

Ежегодно ВГС становится причиной смерти около 500 тыс. пациентов в мире. Для лечения пациентов, инфицированных ВГС, в настоящее время применяется сочетание двух препаратов -интерферона А и нуклеозидного аналога рибавирина, однако эффективность этой терапии крайне невысока. Она достигает 60 % при применении стандартной схемы лечения: пегилированный а-интерферон (ред1РМа) совместно с рибавирином [1]. Несмотря на интенсивные поиски других вариантов химиотерапии ВГС в последние годы, селективные и малотоксичные терапевтические агенты из других классов химических соединений предложены не были.

Вирус гепатита С - небольшой сферический РНК-содержащий вирус, покрытый капсидной оболочкой с размером вириона 55-65 нм. Известно, по крайней мере, 6 различных генотипов и более чем 30 подтипов этого вируса. Между подтипами различия нуклеотидной последовательности генома достигают 15%. Кроме того, геном вируса постоянно видоизменяется для обеспечения защиты от иммунной системы хозяина. В ходе постоянного мутационного процесса естественным путем отбираются штаммы, способные уклоняться от действия нейтрализующих антител. Скорость изменения генетической информации вируса настолько велика, что в организме одного и того же инфицированного индивидуума возникает множество вариантов, отличающихся от «родительского» возбудителя. Жизненный цикл ВГС также имеет особенности, которые позволяют ему уклоняться от иммунного надзора. Вирус способен к длительной персистенции в клетках хозяина без выраженного цитопатического эффекта и с минимальным уровнем присутствия в периферической крови.

Рибавирин - противовирусный препарат, является синтетическим аналогом природных нуклеозидов.

Рибавирин легко проникает в пораженные вирусом клетки и быстро фосфорилируется внутриклеточной аденозинкиназой в moho-, ди- и трифосфат. Эти метаболиты, особенно трифосфат рибавирина (2), обладают выраженной противовирусной активностью. Рибавирин ингибирует репликацию новых вирионов, что обеспечивает снижение вирусной нагрузки.

Рибавирин эффективен в отношении многих ДНК и РНК вирусов, не чувствительных к другим антивирусным препаратам. Наиболее чувствительные к рибавирину ДНК-вирусы - вирус простого герпеса, вирусы группы оспы, аденовирусы, цитомегаловирус, вирус болезни Марека; РНК-вирусы - вирусы гриппа А и В, аренавирусы, буньявирусы, ретровирусы, парамиксовирусы (парагриппа, эпидемического паротита, ньюкаслской болезни), реовирусы, онкогенные РНК-вирусы. Рибавирин угнетает репликацию вирусов-возбудителей особо опасных геморрагических лихорадок как in vitro, так и in vivo. Активен в отношении респираторно-синтициального вируса.

Нечувствительные к рибавирину ДНК-вирусы - Varicella zoster, вирус псевдобешенства, натуральной коровьей оспы; РНК-вирусы -энтеровирусы, риновирусы, вирус энцефалита леса Семлики.

Трифосфат рибавирина является субстатом полимеразы вируса, и его включение в цикл репликации приводит к возникновению летальных для ВГС мутаций. Кроме того, этот трифосфат является ингибитором хеликазы вируса, и наконец, у рибавирина есть и третий механизм действия - ингибирование инозинмонофосфатдегидро-геназы клеток, что понижает количество гуаниновых нуклеотидов и отрицательно сказывается на репликации различных вирусов. Какой из механизмов действия является основным, на данный момент неясно.

Данные клинических исследований показывают, что применение рибавирина как единственного терапевтического средства при гепатите С, в том числе при его хронической форме, неэффективно.

о О

НО—

N—N

N1+

И

ОН он

(1)

О II о II О II

II Р—о- II -Р—о- II -р—

I он I он I он

он он он он

(2) (4)

Рисунок 1. Структура рибавирина и его аналогов.

Однако комбинированное лечение рибавирином и а-интерфероном больных гепатитом С, имевших рецидив заболевания на фоне монотерапии а-интерфероном, оказалось в 10 раз более эффективно, чем монотерапия а-интерфероном и примерно в 3 раза более эффективно у больных, ранее не лечившихся а-интерфероном [1]. Механизм, посредством которого рибавирин в комбинации с а-интерфероном проявляет свое противовирусное действие против вируса гепатита С, до конца неизвестен. Предполагается, что накапливающийся по мере фосфорилирования рибавирин трифосфат конкурентно подавляет образование гуанозин трифосфата, тем самым снижая синтез вирусных РНК. Считается также, что механизм синергетического действия рибавирина и а-интерферона против вируса гепатита С обусловлен усилением фосфорилирования рибавирина а-интерфероном.

Побочные эффекты рибавирина, особенно со стороны кроветворной системы, вынуждают искать альтернативные, более безопасные терапевтические агенты. Последние перспективные разработки в этом направлении - аналоги рибавирина: левовирин и вирамидин.

Левовирин (3) - 1_-энантиомер рибавирина, который обладает подобной рибавирину иммуномодулирующей активностью, но не подвергается фосфорилированию и поэтому не вызывает гемолиз эритроцитов.

Вирамидин (тарибавирин) (4) - аналог рибавирина, в котором карбоксамидная группа замещена на амидиновую, он выступает как пролекарство рибавирина, трансформируется в активную форму в печени и не накапливается в эритроцитах, тем самым существенно снижая токсическое действие фармакофора.

Молекула рибавирина состоит из остатка О-рибозы и гетероциклического основания. Возможные модификации включают замену (в том числе на ациклические структуры) сахарного остатка или его функционализацию, замену карбоксамидной группы в 3-м положении или введение заместителя в 5-м положении гетероциклического основания. Также возможно изменение структуры гетероцикла (например, замена 1,2,4-триазола на 1,2,3-триазол, имидазол или тетразол), введение других гетероатомов или изменение положения рибозильного остатка. В той или иной степени, все указанные типы модификации были опробованы ранее.

Замена сахарного остатка или его функционализация, так же как замена гетероциклического основания ведёт к изменению специфичности биологического действия, поэтому эти типы модификации будут исключены из рассмотрения.

Синтез нукпеозидов и их аналогов, как правило, включает стадию гликозилирования - образования химической связи между

гетероциклическим основанием и сахарным остатком. Структурные модификации молекулы, необходимые для получения новых аналогов, возможны либо на предыдущей стадии - в процессе построения гетероцикпа, либо на более поздней - при введении функциональных групп в молекулу нуклеозида.

Таким образом, литературный обзор будет посвящен анализу известных способов синтеза производных 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты (гетероциклического синтона) и способов образования гликозидной связи, а также известных путей функционализации гетероциклического основания молекулы нуклеозида.

2. Литературный обзор.

2.1. Синтез рибавирина и его аналогов.

2.1.1. Синтез производных 1Н-1,2,4-триазол-3-карбоновой

кислоты.

При всём разнообразии известных способов синтеза производных 1,2,4-триазола, количество возможных путей получения МН-свободных 1,2,4-триазолов, содержащих в положении 3 карбоксильную группу или её производное или аналог и функционализованных по положению 5, весьма ограничено.

Ранние источники [2-4] описывают получение 1,2,4-триазол-З- (5) карбоновых кислот при окислении соответствующих алкил-1,2,4-триазолов перманганатом калия в щелочной среде (схема 1). При этом выделение их из реакционной массы иногда весьма затруднительно и связано с большими потерями. К тому же, этот способ относительно эффективен только в случае монозамещённого триазола (К=Н). При необходимости получения 5-замещённых производных возникает проблема селективного окисления.

Схема 1. Окисление метилтриазолов.

Позднее были предложены [5-7] способы получения 1,2,4-триазол-3-карбоновой кислоты (7) и некоторых её производных (8-11) через легкодоступную 5-амино-1,2,4-триазол-З-карбоновую кислоту (5) (схема 2). Способ [6] до настоящего момента используется в промышленном синтезе рибавирина, несмотря на существенные

О

N—N Н

N—N Н

недостатки, такие как взрывоопасность и неустойчивость промежуточных продуктов.

НО

О

Л

О

+ нм

ОН

ын-ын^

ЫНо

Ч №N0, N N

восстановление р-ция Зандмейера

*- (6) --

Си+ГГ

НО но

01, Вг, Ы02, сы (8) (9) (10) (11)

Схема 2. Синтез триазолкарбоновой кислоты и её производных.

Для получения 5-галогензамещённых производных единственный альтернативный реакции Зандмейера путь - обменные реакции, которые подразумевают в качестве субстрата также галоген-или нитропроизводные. Таким путём, реакцией метилового эфира 5-нитро-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты с жидким фтороводородом при 150°С, был получен метиловый эфир 5-фтор-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты с выходом 70% [8] (схема 3).

ОТ

ОМе

ОМе

Схема 3. Синтез 5-фтор-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты.

Незамещённые и 5-алкил(арил) замещённые производные 1,2,4-триазол-3-карбоновой кислоты (12-15) могут быть получены, исходя из различных С2-компонентов, таких, как гидразид оксамовой кислоты [9] (схема 4), эфиры оксикарбонилформимидной [10] или оксикарбонилтиоформимидной [11] кислоты (схема 6).

НЫ,

ЫН-

Н2Ы

о

г

4

о

ын-ын.

ын

N4 (12)

СН3,

о-сн3

Схема 4. Синтез из гидразида оксамовой кислоты.

(13а) (136)

Также имеются сведения о возможности получения 3,5-гетероцикл-замещенных 1,2,4-триазолов при помощи вышеуказанного способа. Например взаимодействием оксазол-2-карбогидразида и гидрохлорида пиримидин-2-карбамидина в этаноле при кипении может быть получен 2-[5-(оксазол-2-ил)-1,2,4-триазол-3-ил]пиримидин. (схема 5) [12]. Есть основания полагать, что данным способом можно получить и 5-гетероцикп-замещенные производные 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты.

Схема 5. Получение 5-гетероциклзамещенных производных 1,2,4-триазола

Сходным образом из гидразида цианформимидной кислоты был получен 1,2,4-триазол-З-карбонитрил (16), который может быть легко превращен в другие производные 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты или непосредственно использован в химическом синтезе рибавирина и вирамидина [13]. Однако синтез 5-замещённых карбонитрилов этим способом оказался неэффективным, даже 5-метилпроизводное было выделено только с выходом 25% [14]. Другой способ [7] получения соединения (16) - термическое декарбоксилирование 5-циано-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты (11) (схема 7).

ЕЮ

Н3С

н,с

=0

С2Н5ОН

о

о

НС1

о

г

г

-й

[МНоС!

о

н,с

о-

N (14)

сн

о

3Н3Ц

N (15)

ЫН-МН,

1) Нов

О 1МН2 ВР4~

2) Е130+ВР4

/Г

О Б-

сн.

Схема 6. Синтез на основе цианоформимидной кислоты

Нужно отметить, что традиционный способ получения нитрилов дегидратацией амидов в случае 1,2,4-триазол-З-карбоксамида (12) малоэффективен, повидимому вследствие исключительно низкой растворимости в органических средах (в том числе, обычно используемой хлорокиси фосфора) и высокой температуры плавления [15-16].

М2Н4

Ы:

Схема 7. Синтез из дициана

ЫН

(ЕЮ)3СН

ЫН-ЫК

110°С

\

N

\\ // (16)

N

Дегидратации 1,2,4-триазол-З-карбоксамида, по-видимому, препятствует и ЫН-незамещенное положение триазольного кольца, поскольку в научной литературе имеются примеры дегидратации 1-(2',3',5'-три-0-ацетил-(В-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-З-карбоксамида хлорокисью фосфора в присутствии триэтиламина и 5-хлор-1-(2',3',5'-три-0-ацетил-(3-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-З-карбоксамида фосгеном в присутствии пиридина на холоду (схема 8) [17].

АсО.

ОН Н

N—N

ОАс ОАс

О

N4,

РОСк

ТЭА

АсО^

-О.

N

* И

N—N

Ч Н Н У

N_И

ОАс ОАс

АсО„

Ск

-О,

N—N

V н н >

N_И,

ОАс ОАс

О

ЫН,

соси

Ру

Ск

АсО.

-О,

N—N

Vм н >>

Н^_[/А

ОАс ОАс

Схема 8. Дегидратация карбоксамидной группы аналогов нуклеозидов

Единственным описанным способом проведения данной реакции с приемлемым выходом на 1\1Н-свободном субстрате является дегидратация 1,2,4-триазол-З-карбоксамида трифторуксусным ангидридом в пиридине на холоду (схема 9) [18].

о

(СР3С0)20

Ру

Схема 9. Дегидратация 1,2,4-триазол-З-карбоксамида

Существуют общие подходы к синтезу Ы-незамещённых 1,2,4-триазолов. Наиболее универсальным можно считать способ, по которому триазолы получают взаимодействием свободных оснований иминоэфиров с гидразидами кислот (схема 10) [19].

1ЧН о

■К + Ак

О-СН, Н^-N14 ^

Я

N4 О N4—N4

N—N Н

Схема 10. Синтез из иминоэфиров и гидразидов кислот

Именно таким или сходным образом были проведены описанные ранее синтезы соединений (12-15). Из этих примеров видно, что использование этого подхода к синтезу производных [1Н]-1,2,4-триазол-3-карбоновой кислоты ограничено набором синтонов, содержащих карбонильный остаток.

Способ получения 5-замещённых амидов [1 Н]-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты описан в патенте [20] (схема 11).

РО

о

Г

4

о

Г

РГС(ОРГ)3

о

СЖ 2> мн2|^н2 о ын-ын2

о

Г X /

К"

0^"

N—N

н

-РГ

Схема 11. Синтез из замещенных гидразидов оксамовой кислоты

Аналогичным образом, реакцией семиоксамазида с формамидом, получали 1 [Н]-1,2,4-триазол-З-карбоксамид (12) [21].

Кроме того, существуют некоторые вариации двух последних методов получения 3,5-замещенных-1,2,4-триазолов. Суть данных способов, как и двух предыдущих, сводится к термической циклизации Р-ациламидразонов, получение которых производится разными способами.

Так, например, эфиры 5-замещенных-1,2,4-триазол-З-карбоновых кислот, либо соответствующие амиды получали взаимодействием тиоиминоэфиров с моногидразидом метилоксалата или семиоксамазидом нагревая до кипения в пиридине (схема 12). [22].

о

н

К = Ме; Вг1; р-1\Ю2Вг1.

Схема 12. Синтез из тиоиминоэфиров

Получение 3,5-замещенных-1,2,4-триазолов возможно и при взаимодействии тиоамидов с гидразидами карбоновых кислот в расплаве при 180°С. В данных условиях по литературным данным сначала проходит синтез ациламидразонов (ациклических предшественников триазолов), а затем их циклизация в 3,5-замещенные-1,2,4-триазолы (схема 13) [23]. Этим способом были получены эфиры 5-метил и 5-фенил-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты.

Б о

МН2 Н2Ы—ЫН

ЫН О

V

ын-ын

к.

Ру

N—N Н

1*1 COOEt СОСЮ COOEt Ме Ме Ме РИ РИ

Н Ме РИ Н Ме РИ Н РИ

Схема 13. Синтез из тиоамидов

И наконец промежуточные ациламидразоны могут быть получены взаимодействием гидразидов карбоновых кислот с тетрафторборатом карбэтокси-8-метилтиоформамидиния,

последующая циклизация производится нагреванием полученных ациламидразонов выше температуры плавления и приводит к эфирам 5-арил-1,2,4- триазол-3-карбоновой кислоты (схема14). [24].

Агу!

Н2Ы—1МН

ЕЮОС

Н2М

N О 1ЧН-

4 а

Агу!

М—N Н

ЕЮОС

СН,

Схема 14. Синтез метилтиоформамидина

использованием карбэтокси-8-

Ряд синтезов производных [1Н]-1,2,4-триазол-3-карбоновой кислоты, не носящих общего характера, приведён также в монографии [25].

2.1.2. Способы образования гликозидной связи в молекуле рибавирина и его аналогов.

Описаны 3 основных пути формирования гликозидной С-Ы связи в молекуле рибавирина и его 5-замещённых аналогов (а также родственных нуклеозидных молекул, отличающихся структурой сахарного остатка). Это, во-первых, прямое взаимодействие защищённого сахара (ацетил- или броморибозида) с производным 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты в присутствии кислотного катализатора, во-вторых, биотехнологическое (микробиологическое или ферментативное) трансгликозилирование, в котором субстратами служат природный нуклеозид и триазолкарбоксамид, и, наконец, формирование триазольного кольца при взаимодействии различных гидразидных производных защищённой О-рибозы с ортоэфирами.

2.1.2.1. Химическое рибозилирование.

Синтез самого рибавирина и некоторых его аналогов первым из указанных способов описан в ряде статей и патентов [26-30] (схема 15).

X

н

N

\

N-

N

Y

В

АсО.

-О-'Н К

ОАс

н^-¡/н

ОАс ОАс

R'Ov

СН,

Н3С—Si-CH3

HMDS

X

N

\

N

N-

Y

Х= Н [26,29,30], CI [27,28], NH2 [28], SH [28], СН3 [28]. Y= COOEt, СООМе, CN

X

О N—N OR' OR'

Y

BzO,

-О-

"H H>~Br

H

OBz OBz

Схема 15. Способы рибозилирования 1,2,4-триазолов

Условия синтеза, приводимые в различных источниках, довольно сходные: в варианте А, как правило, защищенный сахар и триазол сплавляют при 160-165°С в присутствии каталитического количества ди-(4-нитрофенил)фосфата; в варианте В (гликозилирование по Форбрюггену), силилированное производное триазола и галогенрибозид вводят в реакцию в безводном растворителе типа в отсутствии катализатора или в присутствии кислот Льюиса, триметилсилилтрифлата и т.п. Очевидными проблемами такого синтеза являются как возможность образования изомерных нуклеозидов в результате прохождения реакции по другим (2 и 4) положениям триазольного кольца, так и образование 2-х аномеров по гликозидной связи. По данным большинства источников, количество а-аномера минимально (как правило, его не удаётся выделить).

Для 5-незамещённого метилового эфира 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты синтез по способу В (схема 15) [26] приводит к

19

смеси изомерных нуклеозидов (1-(2,3,5-три-0-бензоил-р-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-З-карбоксиметилата и 1-(2,3,5-три-0-бензоил-(3-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-5-карбоксиметилата) в соотношении 2:1. Способ А (схема 15) даёт соотношение изомеров 10:1, поэтому промышленный химический синтез рибавирина основан именно на нём. Однако результат реакции для триазолов, имеющих в 5-ом положении заместитель, может существенно отличаться. Так метиловый эфир 5-хлор-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты даёт 50% 3-хлор-1-(2,3,5-три-0-бензоил-(3-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-5-карбоксиметилата и только 36% 5-хлор-1-(2,3,5-три-0-бензоил-(3-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-З-карбоксиметилата [27]. Несмотря на то, что метод известен с 70-х годов, частичные усовершенствования в него вносились до последнего времени, например, существует ряд патентов, связанных с промышленным синтезом рибавирина и его аналогов [31-33], в которых описываются пути увеличения выхода и изомерной чистоты продуктов. Как правило, усовершенствования связаны с заменой катализатора или изменением его количества в реакционной смеси.

Как альтернативный путь получения триазольных нуклеозидов используется гликозилирование соответствующего

триметилсилильного производного (силильный метод синтеза нуклеозидов по Форбрюггену). Согласно источнику [34], суммарная реакция, используемая для синтеза 1,2,4-триазольных нуклеозидов вышеописанным способом, выглядит следующим образом (схема 16):

Схема 16. Силильный способ рибозилирования (I)

Ввиду того, что, в соответствии с вышеописанной схемой, образуется смесь изомеров по 1-му и 2-му положению 1,2,4-триазольного кольца, необходимо разделение данной смеси посредством перекристаллизации и (или) колоночной хроматографии.

Возможна также несколько видоизмененная схема получения аналогов нуклеозидов (схема 17)

Схема 17. Силильный способ рибозилирования (II)

Обработка триметилсилильного производного метилового эфира З-амино-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты 2,3,5-три-0-бензоил-0-рибофуранозил бромидом в ацетонитриле при комнатной температуре позволяет получить защищенный нуклеозид.

К преимуществам данного способа следует отнести мягкие условия проведения синтеза, а к недостаткам необходимость разделения изомеров, неизбежно получающихся в составе продуктов реакции.

2.1.2.2. Химико-ферментативное рибозилирование.

Второй способ образования гликозидной связи - использование ферментативной реакции трансгликозилирования - также применяется довольно давно. Возможны два варианта такого способа, отличающиеся применением или живых систем (иммобилизованные клетки [35], штаммы микроорганизмов [36]) или ферментов [9,13, 34-42].

В процессе реакции происходит перенос углеводного остатка от природного пуринового или пиримидинового нуклеозида на природное или модифицированное гетероциклическое основание (схема 18). Нукпеозидфосфорилазы бактериальных клеток -

пуриннуклеозидфосфорилаза (ПНФ) и уридинфосфорилаза (УФ) - в присутствии неорганического фосфата катализируют обратимый фосфоролиз нукпеозидов. Эти ферменты обладают довольно низкой субстратной специфичностью и широко применяются в синтезе нукпеозидов и их аналогов. В качестве донора рибозы обычно используют природные нуклеозиды.

В'

но^ Гно. о

> П В 1^0 11

нЧ1_Ун мр'н>—/ Оон он > * [ он он в

В - природное гетероциклическое основание

В' - модифицированное гетероциклическое основание

ЫР- нуклеозидфосфорилаза

Схема 18. Принципиальная схема реакции трансгликозилирования.

НО,

ыр, кн2р04

т

^о В'

н ^ он он

Биотехнологический способ имеет как ряд очевидных преимуществ, так и понятные недостатки. К преимуществам следует отнести стерео- и региоспецифичность, нетоксичность реагентов и мягкие условия синтеза. Недостатком является зависимость выходов и вообще возможности проведения реакции от специфичности нукпеозидфосфорилаз по отношению к субстрату. Применимость метода к широкому ряду аналогов рибавирина сомнительна. Тем не менее, оценка субстратной специфичности для синтезируемых соединений необходима, так как может служить способом первичной оценки биологической активности.

2.1.2.3. Синтез на основе гидразидов рибозы.

Структура гетероциклического основания рибавирина и его аналогов предполагает различные способы образования 1,2,4-триазольного цикла. В частности, Ы2-компонент может быть представлен гидразином и его производными, гидразидами кислот, амидразонами, в зависимости от способа циклизации.

Было предложено несколько синтезов рибавирина и его аналогов на основе гидразидов рибозы - интермедиатов, образующихся при реакции защищенной рибозы с гидразином или гидразидами кислот. Так был синтезирован сам рибавирин (1) [43-45], его 5-метилзамещённый аналог [44], 1-((3-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-3-карбонитрил (17) - исходный синтон для рибавирина и вирамидина [45] (схема 19).

Такой путь синтеза исключает образование региоизомеров, характерное для химического гликозилирования, но при этом возникает проблема аномерной • конфигурации продуктов, несущественная для других путей синтеза. Поскольку разделение аномерных смесей представляет довольно сложный процесс, синтез

рибавирина через гидразиды рибозы не получил промышленного применения.

n1-1,

РО.

НЫ

нН ны н^-/н

ОР ОР

м2н4

n

III

с

ЫН^Ч РО

м'н ж

N.

ОР ОР

н2ы

РО.

г

4

о

н нг

ОР'

н

N4

N4,

ОР ОР

-О, 'н ьг

н

н2ы

о

ОР ОР

к

ОР'

ын

ОР ОР

n14

ОР'

о р"с(ое^3, н+

Р"= н, сн3

ОР'

Схема 19. Синтез на основе гидразидов рибозы

Выходы целевых нукпеозидов по этому способу также существенно ниже, чем по первым двум, однако не исключено, что для получения некоторых аналогов он может быть единственным. Также по этому пути возможно получение а-аномеров нуклеозидов, которые, как показывает пример левовирина, также могут иметь важную биологическую активность.

2.1.3. Возможные пути модификации молекулы нуклеозидного аналога.

Набор возможностей для модификации молекулы нуклеозидного аналога, подобного рибавирину, не очень широк. Структура такой

24

молекулы предполагает ограниченный набор точек модификации -гидроксилы сахарного остатка, карбоксильную (карбоксамидную, нитрильную) группу в гетероциклическом основании и , возможно, заместитель в 5-ом положении триазольного кольца. Кроме того, условия реакций при такой модификации не должны затрагивать остальные части молекулы, прежде всего Ы-гликозидную связь.

Так как классические способы получения рибавирина предполагают в качестве интермедиатов либо метиловый (этиловый) эфир 1-(р-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты (18), либо 1-(р-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-3-карбонитрил (17), основная часть известных аналогов рибавирина была получена модификацией именно этих соединений.

Так, в работах [29,30] соответствующие тиокарбоксамид (19), гидразид (20), амидин (4), амидразон (21), гидроксамовая кислота (22) и амидоксим (23), так же как их изомеры положения, были получены реакцией соединений (17) и (18) (защищенных по гидроксилам сахарного остатка) с соответствующими реагентами (схема 20).

Те же синтезы описаны в патенте [26] и, с некоторыми вариациями, в ряде других работ.

Щелочным алкоголизом нитрила (17) были получены метил и этил 1-((3-0-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-З-карбоксимидаты (24,25), обладающие противораковой активностью (схема 21). Довольно очевидной модификацией представляется получение Ы-замещённых амидов, однако таких соединений описано незначительное количество: Ы-бензилрибавирин (26) [46], N -метилрибавирин (27) [47], и ряд амидов с а-аминокислотами (28-31) [48] (схема 21).

ОМе

КО.

ОР ОР

МН4ОН

М2Н4

1\1Н2ОН

ОР ОР

о

РО.

N4,

н

РО (4) Н

о N—N

№

(1) ОР ОР

П

о N—N ОР ОР

ЫН4ОН

N4 ЫН,

ЫН3/МН4С1

РО. (19) Н

П

о n—n

ОР ОР

1ЧН,

Н2Э

О

РО.

мн-ык

о N—N (20) ОР ОР

Н

X

РО.

П

^О^ N—N

"Н

Ж-ОН

Х=0 (22) Н

ЫН2ОН

Н

ОР ОР N

МН Х=Ы (23)

РО

(21) Н>|-ГН

ОР ОР

// NN-N42 о- ^ 1Ч2Н4

Схема 20. Модификация карбоксамидной группы

rcl

N

N^N л \ О. N-

R'OH

H

H H

R'ONa

R'—О. /NH

N^N

'H H

OR OR

-N

NH

О OH

PhCH2NH2

PyBOP, Et3N ¿j H

;N -N

О

RO„

H

OR OR TMSCI /ТЮН

R'= CH3 (24) C2H5(25)

VNHn

RO.

d-ribose tetraacetate NH-\

Ph

N^N

'H НГ

Ph

H

OR OR

RO.

НО о

N^N

\

-O N-'H H

(26)

H2N

R"

О

OR

H

coupling reagent

rcl

X—HN ,0

N^N

\

-O^ N-

OR OR

H

OR OR

X= Gly (28), Asp (29), Glu (30), Phe (31)

Схема 21. Синтез из аналога нуклеозида содержащего З-циано-1,2,4-триазольный фрагмент

Можно отметить такой тип модификации, как замена карбоксильной группы на другую, сходную по свойствам, например сульфамидную [49] (схема 22) или нитрогруппу [50].

iV

N—N

HF, Cl

Ме0Н"Н20

H О

N- Vf

w -о

\\

N —N

NH,

H

X

N—N

О

VNH2

w -» о

HMDS, TMS-Tf d-ribose tetraacetate

AcO

OAc OAc

Схема 22. Получение сульфониламидных аналогов рибавирина

Также были синтезированы аналоги рибавирина, содержащие вместо карбоксамидной аминогруппу [50], ациламиногруппу [51], тиольную и тиоалкильные группы [49], альдегид (32) [52] (схема 23), а также имеющие в качестве основания незамещённое триазольное кольцо [50]. Впрочем, если исходить из имеющихся данных относительно механизмов биологического действия рибавирина, модификации такого типа должны радикально изменять активность молекулы. Это соотносится с приводимыми в вышеуказанных работах данными об отсутствии у всех этих соединений противовирусной активности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Матвеев, Андрей Валерьевич, 2013 год

8. Список литературы

1. Shiftman, M.L. What future for ribavirin? / M.L. Shiftman // Liver International. - 2009. - V. 29. - P. 68-73.

2. Potts, K.T. The Chemistry of 1,2,4-Triazoles / K.T. Potts // Chem. Rev. -

1961. - V.2. - P. 113.

3. Jones, R.G.1,2,4-Triazole-3-alanine / R.G. Jones, C. Ainsworth // J. Am.

Chem. Soc. - 1955. -V. 77. - P. 1538.

4. Верещагина, Т.Н. Синтез и превращения карбоновых кислот ряда 1,2,4-триазола. III. Получение и свойства З-метил-1,2,4-триазол-5-карбоновой кислоты / Т.Н. Верещагина, В.А. Лопырев // Химия гетероциклических соединений. - 1970. - №12. - С. 1695-1696.

5. Багал, Л.И. Синтез и превращения карбоновых кислот ряда 1,2,4-триазола / Л.И. Багал, М.С. Певзнер, В.А. Лопырев // Химия гетероциклических соединений. - 1967. - Сб. 1. - С. 180-183.

6. Чипен, Г.И. Новый способ получения 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты / Г.И. Чипен, В.Я. Гринштейн II Химия гетероциклических соединений. - 1965. - Т. 1. - С. 624 - 626.

7. Верещагина, Т.Н. Синтез производных 1,2,4-триазол-3,5-дикарбоновой кислоты / Т.Н. Верещагина, В.А. Лопырев, М.С. Певзнер, Л.М. Коган II Химия гетероциклических соединений. -1969.-Т.5.-№5.-С. 913-915.

8. Naik, S.R. A novel route to 3(5)-fluoro-1,2,4-triazoles and 8-fluoropurines

by displacement of the nitro group / S.R. Naik, J.T. Witkowski, R.K. Robins//J. Org. Chem. - 1973.-V. 88. - № 25. - P. 4353-4354.

9. Чудинов, M.B. Новый эффективный способ синтеза 5-замещенных производных 1,2,4-триазол-З-карбоксамида и рибавирина / М.В.Чудинов, И.Д. Константинова, О.И. Рыжова, Р.С. Есипов, A.M. Юркевич, В.И.Швец, А.И. Мирошников II Химико-фармацевтический журнал. - 2005. - №4. - С. 43-46.

10. Vemishetti, P. A Practical Synthesis of Ethyl 1,2,4-Triazole-3-Carboxylate and its use in the Formation of Chiral 1',2'-seco-Nucleosides of Ribavirin / P. Vemishetti, R.W. Leiby, E. Abushanab, R.P. Panzica // J. Het. Chem. - 1988. - V. 25. - P. 651-654.

11. Oliver, J.E. Improved routes to methyl 4-methylimidazole-2-carboxylate and methyl 5-methyl-1,2,4-triazole-3-carboxylate / J.E. Oliver, P.E. Sonnet//J. Org. Chem. - 1973. -V. 38. - P. 1437-1438.

12. C. Kim, T. W. Lee, J. Moore, T. Nakai, N. R. Perl, J. Rohde. Sgc stimulators // Патент WO 2012/064559(A1), выдан 18.05.2012.

13. J.Т. Witkowski, R.K. Robins. 1,2,4-Triazole-3-carboxamides as antiviral agents // Патент US 3976545(A), выдан 24.08.1976.

14. Matsuda, K. Preparation and Reactions of 1-Cyanoformimidic Acid Hydrazide / K. Matsuda, L. Morin // J. Org. Chem. - 1961. - V. 26. - P. 3783-3787.

15. Чипен, Г.И. Производные 1,2,4-триазол-З-карбоновой кислоты / Г.И. Чипен, В.Я. Гринштейн // Известия Академии Наук Латвийской ССР, серия химическая. - 1965. - Т. 2. - С. 204-208.

16. Постовский, И.Я. Синтез 3- и 3,5-замещённых триазолов-1,2,4 / И.Я. Постовский, Н.Н. Верещагина//Журнал Общей Химии. - 1959. - Т. XXIX. - Вып. 7. - С. 2139-2143.

17. Kini, G.D. Synthesis and antitumor activity of ribavirin imidates. A new facile synthesis of ribavirin amidine (1-p-D-ribofuranosyl- 1,2,4-triazole-3-carboxamidine hydrochloride) / G.D. Kini, R.K. Robins, T.L. Avery // J. Med. Chem. - 1989. -V. 32. - P. 1447-1449

18. D. Huang, B. Mendoza, A. A. Malik. Process for the preparation of 3-cyano-1,2,4-triazoles // Патент US 8198461 (B2), выдан 12.06. 2012.

19. Browne, E.J. Triazoles. Part VII. Syntheses of substituted 1,2,4-triazoles / E.J. Browne, J.B. Polya // J. Chem. Soc. - 1962. - V. 15. -P. 5149-5152.

20. Ube Kosan К.К., Kiyoshi Fukui. Preparation of 1,2,4-triazole-3-carboxylic acid amides. // Патент JP 59-206368, выдан 22.11.1984.

21. Ube Kosan K.K., Kiyoshi Fukui. Preparation of 1,2,4-triazole-3-carboxylic acid amides. // Патент JP 59-206367, выдан 22.11.1984.

22. Huynh-Dinh, T. Synthesis of C-nucleosides. Part 14. 5(3)-Glycosyl-1,2,4-triazole-3(5) carboxamides as analogues of ribavirin / T. Huynh-Dinh, J. Igolen, E. Bisagni, J. P. Marquet, A. Civier // J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1. - 1977. - P. 761-764.

23. Vanek, T. Preparation of 3- and 3,5-substituted 1,2,4-triazoles / T. Vanek, V. Velkova, J. Gut // Collect. Czech. Chem. Commun. - 1984. -V. 49. - P. 2492-2495.

24. Catarzi, D. Synthesis of some 2-aryl-1,2,4-triazolo[1,5-c][1,3]benzoxazin-5-ones as tools to define the essential pharmacophoric descriptors of a benzodiazepine receptor ligand / D. Catarzi, L. Cecchi, V. Colotta, G. Filacchioni, F. Varano, C. Martini, L. Giusti, A. Lucacchini // J. Med. Chem. - 1995. -V. 38. - P. 2196-2201.

25. Temple, C. Triazoles-1,2,4 ("The Chemistry of Heterocyclic Compounds", v. 37, ed. J. A. Montgomery) / C. Temple. - New York: John Wiley & Sons, 1981. - P. 96-120.

26. J.T. Witkowski, R.K. Robins. 1,2,4-Triazole Nucleosides // Патент US 3798209, выдан 19.03.1974.

27. R.K. Robins, J.T. Witkowski. 5-substituted 1,2,4-triazole-3-carboxamido nucleosides and analogs thereof // Патент US 3897415, выдан 29.07.1975.

28. Naik, S.R. Synthesis of nucleosides of 5- substituted 1,2,4-triazole-3-carboxamides / S.R. Naik, J.T. Witkowski, R.K. Robins // J. Het. Chem. - 1974. -V. 11. - P. 57-61.

29. Witkowski, J.T. Design, Synthesis, and Broad Spectrum Antiviral Activity of 1-p-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide and

Related Nucleosides / J.T. Witkowski, R.K. Robins, R. W. Sidwell, L. N. Simon // Journal of Med. Chem. - 1972. - V. 15. - P. 1150-1154.

30. Witkowski, J.T. Synthesis and Antiviral Activity of 1,2,4-Triazole-3-thiocarboxamide and 1,2,4-Triazole-3-carboxamidine Ribonucleosides / J.T. Witkowski, R.K. Robins, G.P. Khare, R.W. Sidwell // J. Med. Chem. - 1973.-V. 16.-P. 935-937.

31. M. Frigerio. Process for the preparation of L-ribavirin // Патент ЕР 1414836(A2), выдан 05.06.2004.

32. A. Banfi, B. Dall'Oro, M. Frigerio, A. Mancini. Process for the preparation of L-ribavirin // Патент US 7285660, выдан 23.10.2007.

33. Y. Li, C. Tan. Chemical synthesis method of ribavirin condensation compound // Патент CN 101397316(A), выдан 01.04.2009.

34. J. Khoo, B. Lee, T. Lee, N. Park. Processes for preparing beta-D-ribofuranose derivatives // Патент US 20030120064(A1), выдан 26.06.2003.

35. Яскович, Г.А. Микробиологический синтез виразола иммобилизованными клетками / Г.А. Яскович, Е.П. Яковлева // Прикладная биохимия и микробиология. - 1999. - Т. 35. - №27. -С. 146-149.

36. Yokozeki, К. Enzymatic production of ribavirin from pyrimidine nucleosides by Enterobacter aerogenes AJ 11125 / K. Yokozeki, T. Tsuji // J. Mol. Catalysis B: Enzymatic. - 2000. - V. 10. - P. 207-213.

37. Utagawa, T. Enzymatic preparation of nucleoside antibiotics / T. Utagawa // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 6. - 1999. - P. 215-222.

38. Shirae, H. Enzymatic production of ribavirin / H. Shirae, K. Yokozeki, K. Kubota // Agric. Biol. Chem. - 1988. - V. 52. - P. 295-296.

39. Barai, V.N. A Universal Biocatalyst for the Preparation of Base Modified and Sugar-Modified Nucleosides via an Enzymatic Transglycosylation / V.N. Barai, A.I.Zinchenko, L.A. Eroshevskaya, E.N. Kalinichenko, T.I.

Kulak, I.A. Mikhailopulo // Helvetica Chimica Acta. - 2002. - V. 85. - P. 1901-1908.

40. Константинова, И.Д. Биотехнологический способ получения рибавирина. Действие рибавирина и некоторых его комбинаций на репродукцию вируса осповакцины (Vaccinia virus) / И.Д. Константинова, H.A. Леонтьева, Г.А. Галегов, О.И. Рыжова, Д.В. Чувиковский, К.В. Антонов, P.C. Есипов, С.А. Таран, К.Н. Веревкина, С.А. Феофанов, А.И. Мирошников // Биоорган. Химия. -2004. -№ 30. - С. 613-620.

41. И. Д. Константинова, Р. С. Есипов, Т. И. Муравьева, С. А. Таран, К. Н. Веревкина, А. И. Гуревич, С. А. Феофанов, А. И. Мирошников. Способ получения 1-бета-0-рибофуранозил-1,2,4-триазол-З-карбоксамида (рибавирина) // Патент РФ 2230118, опубл. 10.06.2004.

42. L.J. Clay. High-temperature method for the production of ribavirin // Патент ЕР 0307854(A2), выдан 22.03.1989.

43. Ito, Y. Regioselective synthesis of virazole using benzyl cyanoformate as a synthon / Y. Ito, Y. Nii, S. Kobayashi, M. Ohno // Tet. Lett. - 1979. -V. 27.-P. 2521-2524.

44. Schmidt, R.R. 1H-1,2,4-triazol-nucleoside - Synthese von Virazol / R.R. Schmidt, D. Heermann II Chem. Ber. - 1981. -V. 114. - P. 2825-2833.

45. L.F. Christensen, J.Т. Witkowski. Process for preparing 1,2,4-triazole nucleosides // Патент US 4138547, выдан 06.02.1979.

46. Ulrich, S.M. Towards the Engineering of an Orthogonal Protein Kinase / Nucleotide Triphosphate Pair / S.M. Ulrich, О. Buzko, К. Shahb, К. M. Shokata // Tetrahedron. - 2000. - V. 56. - P. 9495-9502.

47. Gabrielsen, B. Synthesis and antiviral evaluation of N-carboxamidine-substituted analogs of 1-ß-D-ribofuranosyM ,2,4-triazole-3-carboxamidine hydrochloride / B. Gabrielsen, M. J. Phelan, L. Barthel-Rosa, C. See, J. W. Huggins, D. F. Kefauver, T. P. Monath, M. A.

Ussery, G. N. Chmurny, and et al. // J. Med. Chem. - 1992. - V. 35. P. 3231-3238.

48. Ramasamy, K. Nucleoside Peptides. 8. Synthesis of certain peptide derivatives of ribavirin and tiazofurin / K. Ramasamy, G.D. Kini, R.K. Robins, G.R. Revankar // Nucleosides & Nucleotides. - 1987. - V. 6. -P. 901-911.

49. Hanna, N.B. Synthesis and single-crystal X-ray diffraction studies of 1-p-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-sulfonamide and certain related nucleosides / N.B. Hanna, S.D. Dimitrijevich, S.B. Larson, R.K. Robins, G.R. Revankar//J. Heterocycl. Chem. - 1988. -V. 25. - P. 1857-1868.

50. Witkowski, J.T. Chemical synthesis of the 1,2,4-triazole nucleosides related to uridine, 2'-deoxyuridine, thymidine, and cytidine / J.T. Witkowski, R.K. Robins // J. Org. Chem. - 1970. - V.35. - P. 26352641.

51. Фатеев, И.В. Биотехнологический способ синтеза новых аналогов рибавирина / И.В. Фатеев, И.Д. Константинова, В.И. Швец // Вестник МИТХТ. - 2008. - Т. 3. - №4. - С. 56-60.

52. Murakami, Т. Efficient synthesis of 3-formyl-1,2,4-triazole nucleoside using diethoxyacetonitrile as a synthon / T. Murakami, M. Otsuka, S. Kobayashi, M. Ohno// Heterocycles. - 1981. - V. 15. - P. 301-304.

53. Wei-Yong, L. Synthesis of novel ribavirin hydrazone derivatives and anti-proliferative activity against A549 lung cancer cells / L. Wei-Yong, L.Hai-Ying, Z. Bao-Xiang, S. Dong-Soo, L. Song, M. Jun-Ying // Carbohydrate Research. - 2009. -V. 344. - P. 1270-1275.

54. Revankar, G.R. The synthesis and PMR study of certain 3-substituted 2-((B-D-Ribofuranosyl)indazoles I G.R. Revankar, L.B. Townsend // J. Heterocyclic Chem. - 1970. -V. 7. - P. 1329-1332.

55. Wu, Q. Design, synthesis, and characterization of photolabeling probes for the study of the mechanisms of the antiviral effects of ribavirin / Q.

Wu, F. Qu, J. Wan, X. Zhu, Y. Xia, L. Peng // Helvetica Chimica Acta. -2004.-V. 87.-P. 811-819.

56. Wu, Q. Photolabeling probes of ribavirin and eicar / Q. Wu, F. Qu, J. Wan, X. Zhu, Y. Xia, L. Peng // Nucleosides, Nucleotides, and Nucleic Acids. - 2005. - V. 24. - P. 999-1008.

57. Wan, J. Synthesis of 5-aryltriazole ribonucleosides via Suzuki coupling and promoted by microwave irradiation / J. Wan, R. Zhu, Y. Xia, F. Qu, Q. Wu, G. Yang, J. Neytsc, L. Peng // Tetrahedron Letters. - 2006. -V. 47. - P. 6727-6731.

58. Wan, J. Discovery of novel arylethynyltriazole ribonucleosides with selective and effective antiviral and antiproliferative activity / J. Wan, Y. Xia, Y. Liu, M. Wang, P. Rocchi, J. Yao, F. Qu, J. Neyts, J. L. lovanna, L. Peng //J. Med. Chem. - 2009. - V. 52. - P. 1144-1155.

59. Xia, Y. Novel triazole ribonucleoside down-regulates heat shock protein 27 and induces potent anticancer activity on drug-resistant pancreatic cancer / Y. Xia, Y. Liu, J. Wan, M. Wang, P. Rocchi, F. Qu, J. L. lovanna, L. Peng // J. Med. Chem. - 2009. - V. 52. - P. 6083-6096.

60. Liu, Y. N-Aryltriazole ribonucleosides with potent antiproliferative activity against drug-resistant pancreatic cancer / Y. Liu, Y. Xia, Y. Fan, A. Maggiani, P. Rocchi, F. Qu, J. L. lovanna, L. Peng // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. - 2010. - V. 20. - P. 2503-2507.

61. K. Ramasamy, G. Wang, J. Lau. Nucleoside compounds // Патент US 6495677B1, выдан 17.12.2002.

62. Z. Hong, J.-L. Girardet, K. Ramasamy, J. Lau. Nucleoside compounds and uses thereof//Патент US 6815542B2, выдан 09.11.2004.

63. A. K. Ganguly, J. McCormick, R.G. Lovey, F. Bennett, A.K. Saksena, V.M. Girijavallabhan. 5'-Amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis С with interferon // Патент US 6277830B1, выдан 21.08.2001.

64. Т. Mickle, S. Guenther. Prodrugs of ribavirin with improved hepatic delivery. Заявка на патент US2008/0260691A1,. опубликована

23.10.2008.

65. S. Dong, M.C. Schroeder. Antiviral compounds. // Заявка на международный патент W02009/085267A1, опубликована

09.07.2009.

66. Fried, M.W. Combination of peginterferon alfa-2a (40 kd) plus ribavirin in patients with chronic hepatitis С virus infection / M.W. Fried, M.L. Shiffman, K.R. Reddy, et al. // N. Engl. J. Med. - 2002. - V. 347. - P. 975-982.

67. Manns, M.P. Peginterferon-alfa-2b plus ribavirin compared with interferon alfa-2bplus ribavirin for initial treatment of chronic hepatitis C: a randomized trial / M.P. Manns, J.G. McHutchinson, S.C. Gordon, et al. // Lancet. - 2001. - V. 358. - P. 958-965.

68. Barnard, D. Viramidine (Ribapharm) / D. Barnard // Curr. Opin. Investig. Drugs. - 2002. - V. 3. - P. 1585-1589.

69. Gish, R. Treating HCV with ribavirin analogues and ribavirin-like molecules / R. Gish // J. Antimicrob. Chemother. - 2006. - V.57. - P. 813.

70. Cameron, C.E. The mechanism of action of ribavirin: lethal mutagenesis of RNA virus genomes mediated by the viral RNA-dependent RNA polymerase / C.E. Cameron, C. Castro // Curr. Opin. Infect. Dis. - 2001. - V.14. - P. 757-764.

71. Crotty, S. RNA virus error catastrophe: direct molecular test by using ribavirin / S. Crotty, C.E. Cameron, R. Andino // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2001. - V.98. - P. 6895-6900.

72. Shiffman, M.L. Side effects of medical therapy for chronic hepatitis С / M.L. Shiffman //Ann. Hepatol. - 2004. - V.3. - P. 5-10.

73. Lin, C-C. Pharmacokinetics and safety of viramidine, a prodrug of ribavirin, in healthy volunteers / C-C. Lin, L. Philips, C. Xu, et al. // J. Clin. Pharmacol. - 2004. - V. 44. - P. 265-275.

74. Franceschi, L. De. Hemolytic anemia induced by ribavirin therapy in patients with chronic hepatitis С virus infection: role of membrane oxidative damage / L. De Franceschi, G. Fattovich, F. Turrini, et al. // Hepatology. - 2000. - V. 31. - P. 997-1004.

75. Birgegard, G. Cancer-related anemia: pathogenesis, prevalence and treatment / G. Birgegard, M.S. Aapro, C. Bokemeyer, et al. // Oncology. - 2005. - V. 68, Suppl 1. - P. 3-11.

76. Shiffman, M.L. Optimizing the current therapy for chronic hepatitis С virus: peginterferon and ribavirin dosing and the utility of growth factors / M.L. Shiffman // Clin. LiverDis. - 2008. - V. 12. - P. 487-505.

77. Shiffman, M.L. Impact of reducing peginterferon alfa-2a and ribavirin dose during retreatment in patients with chronic hepatitis С I M.L. Shiffman, M.G. Ghany, T.R. Morgan, et al. // Gastroenterology. - 2007. -V. 132.-P. 103-112.

78. Shiffman, M.L. Treatment of chronic hepatitis С virus genotype 1 with peginterferon, ribavirin, and epoetin alpha / M.L. Shiffman, J. Salvatore, S. Hubbard, et al. II Hepatology. - 2007. - V. 46. - P. 371-379.

79. McDowell, M. A novel nucleoside analog, 1-(3-D-ribofuranosyl-3-ethynyl-[1,2,4]-triazole (ETAR),exhibits efficacy against a broad range of flaviviruses in vitro / M. McDowell, S. R. Gonzales, S. C. Kumarapperuma et.al. // Antivir.Res. - 2009. - V. 87. - P. 78-80.

80. McHutchison, J.G. Strategies for managing anemia in hepatitis С patients undergoing antiviral therapy / J.G. McHutchison, M.P. Manns, Jr. R.S. Brown, et al. // Am. J. Gastroenterol. - 2007. - V.102. - P. 880-889.

81. Wu, J.Z. Conversion of viramidine to ribavirin in vivo by adenosine deaminase and its inhibition by 20-deoxycoformycin / J.Z. Wu, L.T. Yeh,

C.С. Lin, Z. Hong // Antiviral. Chem. Chemother. - 2006. - V. 17. - P. 33-39.

82. Chung, D.H. Synthesis of 1-beta-d-ribofuranosyl-3-ethynyl-[1,2,4]triazole and its in vitro and in vivo efficacy against Hantavirus /

D.H. Chung, S.C. Kumarapperuma, Y. Sun // Antivir. Res. - 2008. - V. 79.-P. 19-27.

83. Moriyama, K. Effects of introduction of hydrophobic group on ribavirin base on mutation induction and anti-RNA viral activity / K. Moriyama, T. Suzuki, K. Negishi, et al. // J. Med. Chem. - 2008. - V. 51. - P. 159166.

84. J. Neyts, L. Peng, F. Que, R. Zhu. Novel viral replication inhibitors // Заявка на международный патент WO 2009/015446, опубликована 05.02.2009.

85. Tam, R.C. Immunomodulatory activities of viramidine, a liver-targeting ribavirin prodrug, in vitro and in vivo / R.C. Tam, C. Lim, J. Bard, et al. // Hepatology. - 2001. - V.34. - P. 351.

86. Lawitz, E. Antiviral effects and safety of telaprevir, peginterferon alfa-2a, and ribavirin for 28 days in hepatitis С patients / E. Lawitz, M. Rodriguez-Torres, A.J. Muir, et al. // J. Hepatol. - 2008. - V. 49. - P. 163-169.

87. McHutchison, J.G. Prove 1: results from a phase 2 study of telaprevir with peginterferon alfa-2a and ribavirin in treatment native subjects with hepatitis С / J.G. McHutchison, G.T. Everson, S.C. Gordon, et al. // J. Hepatol. - 2008. - V. 48(Suppl. 2). - P. 4.

88. Dusheiko, G.M. Treatment of chronic hepatitis С with telaprevir in combination with peginterferon alfa-2a with or without ribavirin: further interim analysis results of the prove 2 study / G.M. Dusheiko, C. Hezode, S. Pol, et al. // J. Hepatol. - 2008. - V. 48(Suppl. 2). - P. 26.

89. К wo, P. Interm results from HCV sprint-1: RVR/EVR from phase 2 study of boceprevir plus pegintron (peginterferon alfa-2b)/ribavirin in

treatment nafve subjects with genotype-1 CHC / P. Kwo, E. Lawitz, J. McCone, et al. // J. Hepatol. - 2008. - V. 48(Suppl.2). - P. 372.

90. McHutchison, J.G. A phase 2b study of telaprevir with peginterferon alfa-2a and ribavirin in hepatitis С genotype 1 null and partial responders and relapsers following a prior course of peginterferon alfa-2a/b and ribavirin therapy. Prove 3 interim results / J.G. McHutchison, M.L. Shiftman, N. Terrault, et al. // Hepatology. - 2008. - V.48(Suppl). -P. 431.

91. MsHutchison, J. G. Interferon alpha-2b alone or in combination with ribavirin as initial treatment for chronic hepatitis / J.G. MsHutchison, S.C. Gordon, E.R. Schiff, M.L. Shiftman, W.M. Lee // New Engl. J. Med. - 1998. - V. 339. - P. 1485-1492.

92. Lin, C.-C. Absorption, pharmocokinetics and excretion of levovirin in rats, dogs and Cynomolgus monkeys / C.-C. Lin, T. Luu, D. Lourenco, Li-Tain, J. Y. N. Lau // Journal of Antimicrobal Chemotherapy. - 2003. -V. 51.-P. 93-99.

93. G.D. Kini, R.K. Robins. Synthesis and anti-leukemic activity of alkyl-1-((3-D-ribofuranosyl)[1,2,4]-triazole-3-carboximidates. Патент US 4925930, выдан 15.05.1990.

94. R.K. Robins, J.T. Witkowski. 1-(p- D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazole acid esters. Патент US 3984396, выдан 05.10.1976.

95. McKillop, A. Applications of Ethyl Carboethoxyformimidate to Heterocyclic Synthesis: Preparation of Condensed Pyrazinones and 1,4-Oxazinones / A. McKillop, S. K. Chattopadhyay, A. Henderson, C. Avendano // Synthesis. - 1997. - №3. - P. 301-304.