Анализ взаимодействия генов при скрещивании низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа Н5 и высокопродуктивного штамма вируса гриппа человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Кочергин-Никитский, Константин Сергеевич

• Кочергин-Никитский, Константин Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кочергин-Никитский, Константин Сергеевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Молекулярная биология и генетика вируса гриппа А.

1.1. Таксономия.

1.2. Геном вируса гриппа А.

1.3. Вирион вируса гриппа А и белки, входящие в его состав.

1.4. Стадии репродукции вируса гриппа А.

1.4.1. Проникновение в клетку.

1.4.2. Транскрипция и репликация РНК.

1.4.3. Регуляция экспрессии генов вируса гриппа.

1.4.4. Сборка вириона и выход из клетки.

Глава 2. Реассортация у вирусов гриппа А.

2.1 .Сегментированность генома вируса гриппа как основа реассортации.

2.2. Контроль упаковки вирусного генома в вирион.

2.3. Реассортация вирусов гриппа в природных условиях.

Глава 3. Использование реассортации для исследования взаимодействия генов и для получения вакцинных штаммов.

3.1. Области применения реассортации в лаборатории.

3.2. Функциональное взаимодействие НА и ЫА и баланс их активностей.

3.3. Получение вакцинных штаммов на основе реассортантных вирусов гриппа.

ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 1. Материалы и методы.

1.1. Вирусы.

1.2. Очистка и концентрация вирусов.

1.3. Инактивация вируса глютаральдегидом.

1.4. Антитела.

1.5. Получение реассортантов.

1.6. Реакция гемагглютинации.

1.7. Иммунологические реакции.

1.8. Количественное определение вирусных белков в гель-электрофорезе.

1.9. Определение аффинности НА вирусов к сиаловым субстратам.

1.10. Постановка полимеразной цепной реакции.

1.11. Электрофорез в агарозном геле.

1.12. Автоматическое секвенирование.

1.13. Заражение мышей.

1.14. Опыты перекрестной иммунной защиты на мышах.

1.15. Статистическая обработка результатов экспериментов.

Глава 2. Получение реассортантных вирусов.

Глава 3. Вирулентность реассортантов для мышей.

Глава 4. Сравнение антигенной специфичности реассортантов, содержащих ген НА вируса A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2), с вирусом, содержащим ген НА современного вируса H5N1.

4.1. Иммунологические реакции.

4.2. Опыты перекрестной иммунной защиты.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ взаимодействия генов при скрещивании низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа Н5 и высокопродуктивного штамма вируса гриппа человека»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Одним из распространенных возбудителей вирусных заболеваний человека и животных является вирус гриппа. Существуют три типа вируса гриппа: А, В, С. Они принадлежат к одному семейству, образуя отдельные роды. Вирусы гриппа В и С поражают преимущественно людей, тогда как вирус гриппа А обладает широким кругом хозяев. Вирус гриппа А, в отличие от вирусов гриппа В и С, вызывает не только локальные вспышки и сезонные эпидемии, но и глобальные пандемии, охватывающие весь земной шар и случающиеся с интервалом 10-40 лет, когда болеют миллионы и десятки миллионов человек.

Поскольку поверхностные вирусные белки гемагглютинин (НА) и нейраминидаза (NA) наиболее важны для иммунитета к инфекции, номенклатура вируса гриппа А основана на подтипах НА и NA. Известно 16 подтипов НА (HI - Н16) и 9 подтипов NA (N1 - N9). В настоящее время в человеческой популяции циркулируют вирусы H1N1 и H3N2. У птиц, являющихся природным резервуаром вируса гриппа А, выделяют вирусы всех подтипов НА, однако у разных видов те или иные подтипы встречаются с разной частотой.

Вирус гриппа А характеризуется большой вариабельностью. Наиболее подвержены изменениям поверхностные гликопротеины вириона - НА и NA. Известны два пути изменения. Первый - антигенный дрейф, присущий в основном вирусам гриппа человека. В человеческой популяции на вирус давит коллективный иммунитет. В таких условиях мутации, позволяющие вирусу преодолеть иммунитет, дают ему серьезное преимущество и закрепляются. В итоге антигенные варианты сменяют друг друга. Второй путь - антигенный сдвиг или шифт (от англ. shift), то есть изменение антигенной формулы из-за замены гена и соответствующего белка в результате реассортации генов. Если два вируса гриппа А заражают одну и ту же клетку, то в вирусном потомстве многие вирусные частицы окажутся реассортантными, то есть получившими часть генов от одного вируса-родителя, а часть - от другого. К вирусу гриппа, получившему ген НА (или НА и ЫА) от вируса гриппа птиц, который ранее не циркулировал в человеческой популяции, у населения нет иммунитета. Поэтому он быстро распространяется и вызывает пандемию.

В последние годы вирус гриппа птиц подтипа Н5Ш вызвал эпизоотии у птиц в юго-восточной Азии, а также вспышки в других регионах мира. При этом некоторые варианты этого вируса обладали способностью иногда передаваться людям, вызывая тяжелейшие заболевания, часто со смертельным исходом. Пока еще не зарегистрирована массовая передача этих вирусов от человека к человеку. Имеются основания полагать, что для приобретения вирусом способности распространяться среди людей достаточно нескольких мутаций. Другим фактором, повышающим вероятность приобретения вирусом подтипа Н5Ш к распространению среди людей, может быть его скрещивание с вирусом гриппа человека. В случае возникновения обычной вспышки гриппа в регионе, где отмечаются случаи заражения людей вирусом гриппа птиц Н5>П, возможно появление вирусов-реассортантов, способных успешно распространяться среди людей.

Человечество уже преодолело не одну пандемию гриппа. Однако при возникновении пандемии, вызванной высоковирулентными вирусами гриппа, относящимися к подтипу Н5, последствия могут оказаться гораздо более тяжелыми, нежели при прежних пандемиях. Вирусы этого подтипа часто обладают особыми свойствами, которые позволяют им поражать многие ткани организма и вызывать у птиц тяжелейшую, обычно смертельную инфекцию. Те вирусы, которые оказались способны заражать человека, также вызывали заболевание с необычно высокой смертностью.

Вероятность возникновения пандемии, вызванной вирусом подтипа Н5, достаточно велика, и поэтому весьма актуальна проблема получения высокопродуктивных и иммуногенных вирусов-реассортантов, имеющих НА 6 подтипа Н5 и пригодных для продукции инактивированных и субъединичных вакцин. Однако ген НА вирусов подтипа Н5№ делает своего носителя столь агрессивным, что зараженный им куриный эмбрион гибнет раньше, чем вирус накапливается в необходимых титрах. Кроме того, эти вирусы небезопасны в работе. Попытки создания инактивированных вакцин против вируса подтипа Н5>П, тем не менее, были предприняты в ряде стран. Были получены реассортанты, содержащие модифицированный гемагглютинин, из которого удален сайт расщепления, делающий вирус высокопатогенным. Но продуктивность таких реассортантных штаммов часто не достигает значений, характерных для обычных вакцинных штаммов, хотя и превосходит продуктивность патогенного вируса Н5№. Низкая продуктивность вообще часто встречается у реассортантов вируса гриппа человека и вируса гриппа птиц в связи с неполным функциональным соответствием вирусных генов.

Среди природных вирусов, содержащих НА подтипа Н5, имеются варианты, у которых иммунная специфичность НА близка к специфичности НА вирусов Н5Ш. Однако у этих вирусов НА не столь легко разрезается протеазами, и вирус поэтому не обладает высокой патогенностью. Такие штаммы выделены на территории России сотрудниками отдела экологии НИИ вирусологии им Д.И. Ивановского. Благодаря относительной безопасности в работе и близкому иммунологическому сходству с высокопатогенными вирусами подтипа Н5 они могут быть использованы для выявления причин ограничения продуктивности реассортантов и для разработки научных подходов к оптимизации вакцинных штаммов.

В связи с важностью получения данных о механизмах, обуславливающих вариации репродуктивных свойств реассортантов, содержащих НА подтипа Н5, особую актуальность. приобретает исследование тех свойств реассортантных вирусов, которые определяются взаимодействием генов, полученных от разных вирусов-родителей и которые ограничивают продуктивность реассортантов. Этим обусловлена актуальность исследований, выполненных в рамках настоящей работы.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ

Целями данной работы были получение и характеристика реассортантных вирусов, получивших гены поверхностных белков от низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа Н5, а гены внутренних белков от высокопродуктивного вируса гриппа человека, исследование постреассортационного взаимодействия генов, оптимизация генного состава высокопродуктивных реассортантов и определение эффективности реассортантов в опытах перекрестной иммунной защиты в отношении вируса подтипа Н5Ш.

Для достижения этих целей нами были поставлены следующие задачи:

1. Получить набор реассортантов низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа Н5 и высокопродуктивного вируса гриппа человека.

2. Провести характеристику генного состава полученных реассортантов.

3. Провести оптимизацию генного состава реассортантов и селекцию высокопродуктивных вариантов.

4. Исследовать фенотипические свойства реассортантов и их вариантов

5. Определить иммуногенность реассортантов в опытах перекрестной иммунизации на мышах.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Получение эффективных вакцин против вируса гриппа А, как известно, затруднено из-за высокой изменчивости поверхностных белков его вириона. Требуется достаточно много времени, чтобы получить вакцину на основе актуального штамма. При угрозе пандемии, вызванной высоковирулентным вирусом гриппа, относящимся к подтипу Н5, такое промедление может привести к огромным человеческим потерям. Однако существуют возможности, позволяющие отразить или значительно ослабить первые удары пандемии. Одна из таких возможностей - создание «баррикадных» вакцин (по терминологии Э. Килбурна), то есть таких, которые способны создать определенный уровень иммунитета, несмотря на неполное соответствие актуальному штамму, и обеспечить защиту наиболее уязвимых контингентов населения, что позволит снизить массовую смертность при пандемии. Реассортантные штаммы для таких вакцин должны обладать набором свойств, необходимых для эффективной вакцинации. Для исследования тех свойств реассортантов, которые существенны для вакцинных штаммов, целесообразно использовать модельные системы, позволяющие исследовать взаимодействия генов в составе реассортантов, что и было выполнено в настоящей работе.

В ходе настоящей работы, путем скрещивания вируса гриппа человека A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) (вариант Mount Sinai) и вируса гриппа птиц A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2) были получены реассортанты, получившие либо только НА, либо оба поверхностных белка от вируса H5N2. Проведена характеристика их фенотипических свойств: продуктивности при заражении эмбрионов кур, вирулентности для мышей, сродства НА к сиаловым рецепторам, иммуногенности в опытах перекрестной иммунной защиты на мышах в отношении вируса, содержащего НА и NA современного вируса подтипа H5N1. Проведена оптимизация генного состава реассортанта посредством обратного скрещивания, существенно повысившая продуктивность вируса.

Полученные реассортанты обладают некоторыми характеристиками штамма, пригодного для получения инактивированной вакцины: они безопасны, поскольку не содержат высокорасщепляемого НА, придающего вирусам Н5 такую высокую вирулентность, но при этом они высокопродуктивны, хотя и уступают в этом отношении вирусу-родителю A/Puerto Rico/8/34 (H1N1).

Полученные данные указывают на реальную возможность использования низковирулентных штаммов подтипа Н5 для получения реассортантов, пригодных к применению в качестве штаммов для 9 производства инактивированных или субъединичных вакцин для использования в случае появления в человеческой популяции циркулирующего высокопатогенного штамма подтипа Н5, обладающего пандемическим потенциалом. Данные указывают на необходимость детальной антигенной характеристики низкопатогенных вирусов подтипа Н5, выделяемых в Евразии, в особенности на территории Российской Федерации, в связи с потенциальной возможностью их использования в качестве вирусов-родителей для получения реассортантных вакцинных штаммов. При использовании таких вирусов отпадает необходимость в применении дорогих и сложных генно-инженерных методов для снижения патогенности вируса путем устранения пептида в участке разрезания НА. Несмотря на неполное соответствие антигенной специфичности НА низкопатогенных вирусов подтипа Н5 и высокопатогенных вирусов Н5Ш, реассортанты такого типа могли бы использоваться в качестве «баррикадной» вакцины по Э. Килбурну для уменьшения смертности при первой волне пандемии.

Важным аспектом нашей работы является повышение продуктивности реассортантов вирусов гриппа человека и птиц в результате оптимизации их генного состава. Применение для этой цели метода обратного скрещивания может оказаться полезным для получения высокопродуктивных штаммов-кандидатов для инактивированных и субъединичных вакцин против вероятного возбудителя пандемии гриппа. Такой подход может быть применен не только к реассортантам, полученным методом скрещивания и селекции, но и к вирусам, полученным с использованием генно-инженерной техники, для оптимизации их генного состава.

Таким образом, полученные результаты расширяют представления о взаимодействии генов вирусов гриппа А при реассортации и должны учитываться в будущем при проведении исследований практического характера, направленных на создание и усовершенствование вакцинных штаммов, которые будут направлены против вероятных возбудителей будущих пандемий гриппа.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Кочергин-Никитский, Константин Сергеевич

выводы.

1. Получены и охарактеризованы реассортанты, содержащие ген гемагглютинина низкопатогенного вируса гриппа птиц A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2) и гены внутренних белков высокопродуктивного вируса гриппа человека A/Puerto Rico/8/34 (H1N1).

2. Реассортант 6:2, содержащий гены гемагглютинина и нейраминидазы вируса A/Duck/Primorie/2621 /01 (H5N2) и 6 генов вируса A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) имеет более высокую продуктивность, чем вирус A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2), но уступает вирусу A/Puerto Rico/8/34 (H1N1).

3. Реассортант 7:1, имеющий ген гемагглютинина вируса A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2) и 7 генов вируса A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), имеет низкую продуктивность. Селекция методом серийного пассирования позволила получить вариант, сходный по продуктивности с реассортантом 6:2. Повышение продуктивности коррелирует со снижением аффинности к сиалосодержащим субстратам, вызванным аминокислотной заменой N244D в субъединице НА1

4. Реассортант 5:3, содержащий гены гемагглютинина, нейраминидазы и РВ1 вируса A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2), имеет более высокую продуктивность, чем реассортанты 7:1 и 6:2.

5. Все реассортанты обладают вирулентностью для мышей при интраназальном заражении, близкой к вирулентности вируса A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) и намного превосходящей вирулентность вируса A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2), что указывает на связь ограничения вирулентности для мышей вируса A/Duck/Primorie/2621/01 (H5N2) с иными генами, нежели гены гемагглютинина, нейраминидазы и РВ1.

6. Реассортант, содержащий ген гемагглю^инина вируса А/Оиск/Рптопе/2621/01 (Н5Ш), обеспечивал перекрестную иммунную защиту против вируса-реассортанта, содержащего ген гемагглютинина современного высокопатогенного вируса подтипа Н5Ш, близкую по эффективности к защите гомологичным вирусом (УЫН5№-РК.8/С0С-110).

7. Полученные данные позволяют предложить новый подход к оптимизации генного состава реассортантных вирусов, предназначенных для использования в качестве штаммов для инактивированных вакцин против вирусов, содержащих гемагглютинины вирусов гриппа птиц.

8. Результаты указывают на перспективность применения инактивированных вакцин, содержащих гемагглютинин низкопатогенных вирусов гриппа птиц подтипа Н5 без генно-инженерной модификации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кочергин-Никитский, Константин Сергеевич, 2007 год

1. Александрова Г.И. Применение метода генной рекомбинации для получения вакцинных штаммов вируса гриппа. Вопр. вирусол. 1997, №4, стр. 387-395

2. Гендон Ю.З., Маркушин С.Г., Акопова И.И., Коптяева И.Б., Исаченко A.A., Мазуркова H.A., Нечаева Е.А. Разработка культуральной живой холодоадаптированной реассортантной гриппозной вакцины. Вопр. вирусол. 2003, т.48, №2, стр. 12-17.

3. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика (4-е издание). Москва, Высшая школа, 1972, стр. 145-146.

4. Гребенникова Т.В., Киреев Д.Е., Забережный А.Д., Алипер Т.И. Разработка средств молекулярной диагностики. Ветеринария 2006, № 6, стр. 30-33.

5. Жирнов О.П. Белки вируса гриппа: получение растворимого полипептида Ml посредством поэтапной депротеинизации вирионов. Мол. биол. 1991, т.25, № 2, стр. 375-380.

6. Жирнов О.П. Влияние pH in vitro на депротеинизацию у орто- и парамиксовирусов. Мол. ген., микробиол., вирусол. 1990, № 3, 11-15.

7. Кингсбери Д.У. Орто- и парамиксовирусы и их репликация. В: Вирусология. Том 2, Москва, Мир, 1989, стр. 446-486.

8. Киселева И.В., Ларионова Н.В., Исакова И.Н., Руденко Л.Г. Генетическая стабильность холодоадаптированных вирусов гриппа. Вопр. вирусол. 2006, т.51, №4, стр. 13-16.

9. Львов Д.К., Подчерняева Р.Я., Вебстер Р., Ронина М.В., Пысина Т.В., Получение рекомбинантов, антигенно идентичных циркулирующим в природе штаммам вируса гриппа. Вопр. вирусол. 1979, № 5, стр. 493497.

10. Мэйхи Б. Мутанты вируса гриппа. В: «Генетика вирусов гриппа», под ред. П. Пейлиза и Д. У. Кингсбери, Москва, Медицина, 1986, стр. 186248.

11. Руднева И.А., Ильюшина H.A., Шилов A.A., Варич Н.Л., Синицын Б.В., Кропоткина Е.А., Каверин Н.В. Функциональное взаимодействие гликопротеинов вируса гриппа. Мол. биология 2003, т.37, № 1, стр. 3440.

12. Финни Д.Д. Применение статистики в опытном деле. Москва, Государственное статистическое издательство, 1957, стр. 14-32.

13. Шилов А.А., Руднева И.А., Образцова-Серова Н.П., Чайка О.В., Синицын Б.В. Генетическая изменчивость вируса гриппа человека в процессе адаптации к мышам. Вопр. вирусол. 1984, т.29, № 4, стр. 410417.

14. Шубладзе А.К., Гайдамович С.Я. Краткий курс практической вирусологии. Москва, Медгиз, 1964, стр. 379.

15. Baez М., Palese P., Kilbourne E.D. Gene composition of high-yielding influenza vaccine strains obtained by recombination. J. Infect. Dis. 1980, 141,362-365.

16. Bancroft C.T., Parslow T.G. Evidence for segment-nonspecific packaging of the Influenza A virus genome. J. virol. 2002, 76, 7133-7139.

17. Baron S., Jensen K.E. Evidence of genetic interaction between noninfectious and infectious influenza A viruses. J. Exp. Med. 1955, 102, 677697.

18. Barry R.D. The multiplication of influenza virus. II. Multiplicity reactivation of ultraviolet irradiated virus. Virology 1961,14, 398-405.

19. Basak S., Compans R.W., Studies of the role of glycosylation in the function and antigenic properties of influenza virus glycoproteins. Virology 1983, 128, 77-91.

20. Basak S., Tomana M., Compans R.W. Sialic acid is incorporated into influenza hemagglutinin glycoproteins in the absence of viral neuraminidase. Virus Res. 1985,2,61-68.

21. Baum L.G., Paulson J.C. The N2 neuraminidase of human influenza virus has acquired a substrate specificity complementary to the hemagglutinin receptor specificity. Virology 1991,180, 10-15.

22. Beaton A.R., Krug R.M. Transcription antitermination during influenza viral template RNA synthesis requires the nucleocapsid protein and the absence of a 5' capped end. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986, 83, 6282-6286.

23. Bergman M., Muster T. The relative amount of an influenza A virus segment present in the viral particle is not affected by a reduction in replication of that segment. J. Gen. Virol., 1995, 76, 3211-3215.

24. Brown E.G. Increased virulence of a mouse-adapted variant of influenza A/FM/1/47 virus is controlled by mutations in genome segments 4, 5, 7, and 8. J. Virol. 1990, 64, 4523-4533.

25. Brown E.G., Bailly J.E. Genetic analysis of mouse-adapted influenza A virus identifies roles for the NA, PB1, and PB2 genes in virulence. Virus Res. 1999,61,63-76.

26. Brown E.G., Liu H., Kit L.C., Baird S., Nesrallah M. Pattern of mutation in the genome of influenza A virus on adaptation to increased virulence in the mouse lung, identification of functional themes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001,98, 6883-6888.

27. Brown I.H., Harris P.A., McCauley J.W., Alexander D.J. Multiple genetic reassortment of avian and human influenza A viruses in European pigs,resulting in the emergence of an HIN2 virus of novel genotype. J. Gen. Virol. 1998, 79, 2947-2955.

28. Bullough P. A., Hughson F.M., Shekel J .J., Wiley D.C. Structure of influenza hemagglutinin at the pH of membrane fusion. Nature 1994, 371, 37-43.

29. Burnet F.M., Lind P.E. Recombination of characters between two influenza virus strains. Aust. J. Sci. 1949,12,109-110.

30. Burnet F.M., Lind P.E. Studies on recombination with influenza viruses in the chick embryo. III. Reciprocal genetic interaction between two influenza virus strains. Aust J. Exp. Biol. Med. Sci. 1952,30,469-477.

31. Callan R.J., Early G., Kida H., Hinshaw V.S. The appearance of H3 influenza viruses in seals. J. Gen. Virol. 1995, 76,199-203.

32. Campitelli L., Donatelli I., Foni E., Castrucci M.R., Fabiani C., Kawaoka Y., Krauss S., Webster R.G. Continued evolution of H1N1 and H3N2 influenza viruses in pigs in Italy. Virology 1997, 232,310-318.

33. Castrucci M.R, Kawaoka Y. Biologic importance of neuraminidase stalks length in influenza A virus. J. Virol. 1993, 67, 759-764.

34. Chambers T.M., Hinshaw V.S., Kawaoka Y., Easterday B.C., Webster R.G. Influenza viral infection of swine in the United States 1988-1989. Arch. Virol. 1991,116, 261-265.

35. Chen W., Calvo P.A., Malide D., Gibbs J., Schubert U., Bacik I., Basta S., O'Neill R., Schickli J., Palese P., Henklein P., Bennink J.R., Yewdell J.W. A novel influenza A virus mitochondrial protein that induces cell death. Nat. Med. 2001,7, 1306-1312.

36. Claas E.C., de Jong J.C., van Beek R., Rimmelzwaan G.F., Osterhaus A.D. Human influenza virus A/HongKong/156/97 (H5N1) infection. Vaccine 1998, 16, 977-978.

37. Claas E.C., Osterhaus A.D., van Beek R., De Jong J.C., Rimmelzwaan G.F., Senne D.A., Krauss S., Shortridge K.F., Webster R.G. Human influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus. Lancet 1998,351,472-477.

38. Clements M.L., Snyder M.H., Buckler-White A.J., Tierney E.L., London W.T., Murphy B.R. Evaluation of avian-human reassortant influenza A/Washington/897/80 x A/Pintail/119/79 virus in monkeys and adult volunteers. J. Clin. Microbiol. 1986, 24,47-51.

39. Compans R. W., Choppin P. W. Reproduction of myxoviruses, In: Comprehensive virology, vol. 6. Eds H. Fraenkel-Conrat and R. R. Wagner (ed.), New York, Plenum Press, 1975, pp: 179-252.

40. Compans R.W., Content J., Duesberg P.H. Structure of the ribonucleoprotein of influenza virus. J. Virol. 1972, 10, 795-800.

41. Couceiro J.N., Paulson J.C., Baum L.G. Influenza virus strains selectively recognize sialyloligosaccharides on human respiratory epithelium, the role of the host cell in selection of hemagglutinin receptor specificity. Virus Res. 1993,29,155-165.

42. Doms R.W., Lamb R.A., Rose J.K., Helenius A. Folding and assembly of viral membrane proteins. Virology 1993,193, 545-562.

43. Donald H.B., Isaacs A. Counts of influenza virus particles. J. Gen. Microbiol. 1954,10, 457-464.

44. Edwards K.M., Dupont W.D., Westrich M.K., Plummer W.D. Jr., Palmer P.S., Wright P.F. A randomized controlled trial of cold-adapted and inactivated vaccines for the prevention of influenza A disease. J. Infect. Dis. 1994, 169, 68-76.

45. Elbers A.R., Fabri T.H., de Vries T.S., de Wit J.J., Pijpers A., Koch G. The highly pathogenic avian influenza A (H7N7) virus epidemic in The Netherlands in 2003 lessons learned from the first five outbreaks. Avian Dis. 2004,48, 691-705.

46. Els M.C., Air G.M., Murti K.G., Webster R.G., Laver W.G. An 18-amino acid deletion in an influenza neuraminidase. Virology 1985, 142,241-247.

47. Enami M. Structure and function of influenza virus NS1 and NS2 proteins. Nippon Rinsho 1997, 55, 2605-2609.

48. Enami M., Fukuda R., Ishihama A. Transcription and replication of eight RNA segments of influenza virus. Virology 1985, 142, 68-77.

49. Enami M., Luytjes W., Krystal M., Palese P. Introduction of site-specific mutations into the genome of influenza virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87,3802-3805.

50. Enami M., Palese P. High-efficiency formation of influenza virus transfectants, J. Virol. 1991, 65,2711-2713.

51. Enami M., Sharma G., Benham C., Palese P. An influenza virus containing nine different RNA segments. Virology 1991,185, 291-298.

52. Flandorfer A., Garcia-Sastre A., Basler C.F., Palese P. Chimeric influenza A viruses with a functional influenza B virus neuraminidase or hemagglutinin. J. Virol. 2003,77,9116-9123.

53. Fujii Y., Goto H., Watanabe T., Yoshida T., Kawaoka Y. Selective incorporation of influenza virus RNA segments into virion. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2003,100, 2002-2007.

54. Gabriel G., Dauber B., Wolff T., Planz O., Klenk H.D., Stech J. The viral polymerase mediates adaptation of an avian influenza virus to a mammalian host. Proc. Natl. Acad Sci. USA 2005, 102, 18590-18595.

55. Gambaryan A., Tuzikov A., Pazynina G., Bovin N., Balish A., Klimov A. Evolution of the receptor binding phenotype of influenza A (H5) viruses. Virology 2006, 344,432-438.

56. Gambaryan A.S., Matrosovich M.N. A solid-phase enzyme-linked assay for influenza virus receptor-binding activity. J. Virol. Methods. 1992, 39, 111-123.

57. Gambaryan A.S., Piskarev V.E., Yamskov I.A., Sakharov A.M., Tuzikov A.B., Bovin N.V., Nifant'ev N.E., Matrosovich M.N. Human influenza virus recognition of sialyloligosaccharides. FEBS Lett. 1995, 366, 57-60.

58. Gao P., Watanabe S., Ito T., Goto H., Wells K., McGregor M., Cooley A.J., Kawaoka Y. Biological heterogeneity, including systemic replication in mice, of H5N1 influenza A virus isolates from humans in Hong Kong. J. Virol. 1999, 73,3184-3189.

59. Garcia-Sastre A., Egorov A., Matassov D., Brandt S., Levy D.E., Durbin J.E., Palese P., Muster T. Influenza A virus lacking the NS1 gene replicates in interferon-deficient systems. Virology 1998, 252, 324-330.

60. Gog J.R., Afonso Edos S., Dalton R.M., Leclercq I., Tiley L., Elton D., von Kirchbach J.C., Naffakh N., Escriou N., Digard P. Codon conservation in the influenza A virus genome defines RNA packaging signals. Nucleic Acids Res. 2007,35,1897-1907.

61. Goto H., Bethell R.C., Kawaoka Y. Mutations affecting the sensitivity of the influenza virus neuraminidase to 4-guanidino-2, 4-dideoxy-2, 3-dehydro-N-acetylneuraminic acid. Virology 1997, 238, 265-272.

62. Gourreau J.M., Kaiser C., Valette M., Douglas A.R., Labie J., Aymard M. Isolation of two H1N2 influenza viruses from swine in France. Arch. Virol. 1994,135,365-382.

63. Govorkova E.A., Gambaryan A.S., Claas E.C., Smirnov Y.A. Amino acid changes in the hemagglutinin and matrix proteins of influenza a (H2) viruses adapted to mice. Acta. Virol. 2000, 44, 241-248.

64. Gregoriades A., Hirst G.K. Mechanism of influenza recombination. III. Biochemical studies of temperature-sensitive mutants belonging to different recombination groups. Virology 1976, 69, 81-92.

65. Guan Y., Shortridge K.F., Krauss S., Chin P.S., Dyrting K.C., Ellis T. M., Webster R.G., Peiris M. H9N2 influenza viruses possessing H5Nl-like internal genomes continue to circulate in poultry in southeastern China. J. Virol. 2000,74,9372-9380.

66. Guan Y., Shortridge K.F., Krauss S., Webster R.G. Molecular characterization of H9N2 influenza viruses: were they the donors of the "internal" genes of H5N1 viruses in Hong Kong? Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 9363-9367.

67. Gubareva L.V., Bethell R., Hart G.J, Murti K.G., Penn C.R., Webster R.G. Characterization of mutants of influenza A virus selected with the neuraminidase inhibitor 4-guanidino-Neu5Ac2en. J. Virol. 1996, 70, 18181827.

68. Gubareva L.V., Matrosovich M.N., Brenner M.K., Bethell R.C., Webster R.G. Evidence for zanamivir resistance in an immunocompromised child infected with influenza B virus. J. Infect. Dis. 1998,178,1257-1262.

69. Gulati U., Wu W., Gulati S., Kumari K., Waner J.L., Air G.M. Mismatched hemagglutinin and neuraminidase specificities in recent human H3N2 influenza viruses. Virology 2005, 339,12-20.

70. Ha Y., Stevens D.J., Skehel J.J., Wiley D.C. H5 avian and H9 swine influenza virus hemagglutinin structures, possible origin of influenza subtypes. EMBO J. 2002,21, 865-875.

71. Ha Y., Stevens D.J., Skehel J.J., Wiley D.C. X-ray structures of H5 avian and H9 swine influenza virus hemagglutinins bound to avian and human receptor analogs. Proc. Natl. Acad Sci. USA 2001, 98,11181-11186.

72. Hartley C.A., Reading P.C., Ward A.C., Anders E.M. Changes in the hemagglutinin molecule of influenza type A (H3N2) virus associated with increased virulence for mice. Arch. Virol. 1997, 142, 75-88.

73. Hatchette T.F., Walker D., Johnson C., Baker A., Piyor S.P., Webster R.G. Influenza A viruses in feral Canadian ducks: extensive reassortment in nature. J. Gen. Virol. 2004, 85, 2327-2337.

74. Hatta M., Gao P., Halfmann P., Kawaoka Y. Molecular basis for high virulence of Hong Kong H5N1 influenza A viruses. Science 2001, 293, 1840-1842.

75. Hatta M., Neumann G., Kawaoka Y. Reverse genetics approach towards understanding pathogenesis of H5N1 Hong Kong influenza A virus infection. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2001, 356,1841-1843.

76. Hayden F.G., Rollins B.S., Madren L.K. Anti-influenza virus activity of the neuraminidase inhibitor 4-guanidino-Neu5Ac2en in cell culture and in human respiratory epithelium. Antiviral Res. 1994, 25, 123-131.

77. Hinshaw V.S., Bean W.J., Webster R.G., Rehg J.E., Fiorelli P., Early G„ Geraci J.R., St Aubin D.J. Are seals frequently infected with avian influenza viruses? J. Virol. 1984, 51, 863-865.

78. Hoffmann E., Krauss S., Perez D., Webby R., Webster R.G. Eight-plasmid system for rapid generation of influenza virus vaccines. Vaccine 2002, 20, 3165-3170.

79. Hoffmann E., Mahmood K., Chen Z., Yang C.F., Spaete J., Greenberg H.B., Herlocher M.L., Jin H., Kemble G. Multiple gene segments control the temperature sensitivity and attenuation phenotypes of ca B/Ann Arbor/1/66. J.Virol. 2005,79,11014-11021.

80. Hoffmann E., Stech J., Guan Y., Webster R.G., Perez D.R. Universal primer set for the full-length amplification of all influenza A viruses. Arch. Virol. 2001,146,2275-2289.

81. Holsinger L.J., Nichani D., Pinto L.H., Lamb R.A. Influenza A virus M2 ion channel protein, a structure-function analysis. J. Virol. 1994, 68,1551-1563.

82. Horimoto T., Kawaoka Y. Pandemic threat Posed by Avian Influenza A Viruses. Clinical Microbiology Reviews, 2001, 14, 129-149.

83. Hoyle L. The entry of myxoviruses into the cell. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1962,27, 113-121.

84. Hughes M.T, Matrosovich M., Rodgers M.E., McGregor M., Kawaoka Y. Influenza A viruses lacking sialidase activity can undergo multiple cycles of replication in cell culture, eggs, or mice. J. Virol. 2000, 74, 5206-5212.

85. Hulse D.J., Webster R.G., Russell R.J., Perez D.R. Molecular determinants within the surface proteins involved in the pathogenicity of H5N1 influenza viruses in chickens. J. Virol. 2004, 78, 9954-9964.

86. Jin H., Leser G.P., Zhang J., Lamb R.A. Influenza virus hemagglutinin and neuraminidase cytoplasmic tails control particle shape. EMBO-J 1997, 16, 1236-1247.

87. Karasin A.I., Brown I.H., Carman S., Olsen C.W. Isolation and characterization of H4N6 avian influenza viruses from pigs with pneumonia in Canada. J. Virol. 2000, 74, 9322-9327.

88. Karasin A.I., Olsen C.W., Anderson G.A. Genetic characterization of an H1N2 influenza virus isolated from a pig in Indiana. J. Clin. Microbiol. 2000, 38, 2453-2456.

89. Katinger D., Mochalova L., Chinarev A., Bovin N., Romanova J. Specificity of neuraminidase activity from influenza viruses isolated in different hosts tested with novel substrates. Arch. Virol. 2004, 149, 2131-2140.

90. Katz J.M., Liu X., Tumpey T.M., Smith C.B., Shaw M.W., Subbarao K. Molecular correlates of Influenza A H5N1 virus pathogenesis in mice. J. Virol. 2000,74,10807-10810.

91. Kaverin N.V. Rudneva I.A., Uyushina N.A., Varich N.L., Lipatov A.S., Smirnov Y.A., Govorkova E.A., Gitelman A.K., Lvov D.K., Webster R.G.

92. Structure of antigenic sites on the hemagglutinin molecule of H5 influenza virus and phenotypic variation of escape mutants. J. Gen. Virol. 2002, 83, 2497-2505.

93. Kaverin N.V., Rudneva I.A., Smirnov Y.A., Finskaya N.N. Human-avian influenza virus reassortants: effect of reassortment pattern on multi-cycle reproduction in MDCK cells. Arch. Virol. 1988, 103, 117-126.

94. Kawaoka Y., Krauss S., Webster R.G. Avian-to-human transmission of the PB1 gene of influenza A viruses in the 1957 and 1968 pandemics. J. Virol. 1989, 63, 4603-4608.

95. Kawaoka Y., Yamnikova S., Chambers T.M., Lvov D.K., Webster R.G. Molecular characterization of a new hemagglutinin, subtype H14, ofinfluenza A virus. Virology 1990,179, 759-767.

96. Kemink S.A., Fouchier R.A., Rozendaal F.W., Broekman J.M., Koopmans M., Osterhaus A.D., Schneeberger P.M. A fatal infection due to avian influenza-A (H7N7) virus and adjustment of the preventive measures. Ned. Tijdschr. Geneeskd. 2004,148, 2190-2194

97. Kendal A.P. Cold-adapted live attenuated influenza vaccines developed in Russia: can they contribute to meeting the needs for influenza control in other countries? Eur. J. Epidemiol. 1997,13, 591-609.

98. Kida H., Ito T., Yasuda J., Shimizu Y., Itakura C., Shortridge K.F., Kawaoka Y., Webster R.G. Potential for transmission of avian influenza viruses to pigs. J. Gen. Virol. 1994, 75, 2183-2188.

99. Kida H., Shortridge K.F., Webster R.G. Origin of the hemagglutinin gene of H3N2 influenza viruses from pigs in China. Virology 1988, 162, 160-166.

100. Kilbourne E.D. Influenza pandemics of the 20th century. Emerg Infect. Dis. 2006, 12,9-14.

101. Kilbourne E.D. Influenza pandemics, can we prepare for the unpredictable? Viral Immunol. 2004, 17, 350-357.

102. Klenk H.D., Compans R.W., Choppin W.P. An electron microscopic study of the presence or absence of neuraminic acid in enveloped viruses. Virology 1970,42, 1158-1262.

103. Klimov A.I., Kiseleva I.V., Desheva J.A., Alexandrova G.I., Cox N.J., Rudenko L.G. Live attenuated reassortant vaccine prepared using

104. Klimov A.I., Sokolov N.I., Orlova N.G., Ginzburg V.P. Correlation of amino acid residues in the Ml and M2 proteins of influenza virus with high yielding properties. Virus Res. 1991,19, 105-114.

105. Kou Z., Lei F.M., Yu J., Fan Z.J., Yin Z.H., Jia C.X, Xiong K.J., Sun Y.H., Zhang X.W., Wu X.M., Gao X.B., Li T.X. New genotype of avian influenza H5N1 viruses isolated from tree sparrows in China. J. Virol. 2005, 79, 15460-15466.

106. Kuiken T., Rimmelzwaan G., van Riel D., van Amerongen G., Baars M., Fouchier R., Osterhaus A.D. Avian H5N1 influenza in cats. Science 2004, 306,241.

107. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970, 227, 680-685.

108. Lakadamyali M., Rust M.J., Zhuang X. Endocytosis of influenza viruses. Microbes Infect. 2004, 6, 929-936.

109. Lamb R.A. and, Krug R.M. Orthomyxoviridae. In: Fields Virology. Section 2, Specific Virus Families. Eds B.N. Fields and D.M. Knipe, Lippincott, Williams & Wilkins, 2001, pp: 1091-1137.

110. Lamb R.A., Choppin P.W. Segment 8 of the influenza virus genome is unique in coding for two polypeptides. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1979, 76,4908-4912.

111. Lamb R.A., Choppin P.W. The gene structure and replication of influenza virus. Ann. Rev. Biochem 1983, 52, 467-506.

112. Lazarowitz S.G., Goldberg A.R., Choppin P.W. Proteolytic cleavage by plasmin of the HA polypeptide of influenza virus, host cell activation of serum plasminogen. Virology 1973, 56, 172-180.

113. Li S., Liu C., Klimov A., Subbarao K., Perdue M.L., Mo D., Ji Y., Woods L., Hietala S., Bryant M. Recombinant influenza A virus vaccines for the pathogenic human A/Hong Kong/97 (H5N1) viruses. J. Infect. Dis. 1999, 179, 1132-1138.

114. Li S., Perdue M.L., Patzer E. Seed viruses containing novel avian HA and NA antigens for prevention against potential influenza pandemic. Dev Biol (Basel) 2002,110, 135-141.

115. Lin Y.P., Shu L.L., Wright S., Bean W.J., Sharp G.B., Shortridge K.F., Webster R.G. Analysis of the influenza virus gene pool of avian species from southern China. Virology 1994, 198, 557-566.

116. Lipatov A.S., Govorkova E.A., Webby R.J., Ozaki H., Peiris M., Guan Y., Poon L., Webster R.G. Influenza: emergence and control. J. Virol. 2004, 78, 8951-8959.

117. Liu C., Air G.M. Selection and characterization of a neuraminidase-minus mutant of influenza virus and its rescue by cloned neuraminidase genes. Virology 1993, 194, 403-407.

118. Liu M., Wood J.M., Ellis T., Krauss S., Seiler P., Johnson C., Hoffmann E., Humberd J., Hulse D., Zhang Y., Webster R.G., Perez D.R. Preparation of a standardized, efficacious agricultural H5N3 vaccine by reverse genetics. Virology 2003, 314, 580-590.

119. Liu M., Zhang Y., Liu C.G., Pan W.Q., Liu C.N., Yang T. Generation high yield vaccine strain wholly derived from avian influenza viruses by reverse genetics. Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao. 2006, 22, 720-726.

120. Liu T., Muller J., Ye Z. Association of influenza virus matrix protein with ribonucleoproteins may control viral growth and morphology. Virology 2002, 304, 89-96.

121. Lu X., Cho D., Hall H., Rowe T., Sung H., Kim W., Kang C., Mo I., Cox N., Klimov A., Katz J. Pathogenicity and antigenicity of a new influenza A (H5N1) virus isolated from duck meat. J. Med. Virol. 2003, 69, 553-559.

122. Lu X., Tumpey T.M., Morken T., Zaki S.R., Cox N.J., Katz J.M. A mouse model for the evaluation of pathogenesis and immunity to influenza A (H5N1) viruses isolated from humans. J. Virol. 1999, 73, 5903-5911.

123. Luke C.J., Subbarao K. Vaccines for pandemic influenza. Emerg. Infect. Dis. 2006,12, 66-72.

124. Ma W., Gramer M., Rossow K., Yoon K.J. Isolation and genetic characterization of new reassortant H3N1 swine influenza virus from pigs in the midwestern United States. J. Virol. 2006, 80, 5092-5096.

125. Maeda Y., Horimoto T., Kawaoka Y. Classification and genome structure of influenza virus. Nippon Rinsho. 2003, 61, 1886-1891.

126. Marozin S., Gregory V., Cameron K., Bennett M., Valette M., Aymard M., Foni E., Barigazzi G., Lin Y., Hay A. Antigenic and genetic diversity among swine influenza A H1N1 and H1N2 viruses in Europe. J. Gen. Virol. 2002, 83, 735-745.

127. Martin K., Helenius A. Transport of incoming influenza virus nucleocapsids into the nucleus. J. Virol. 1991, 65, 232-244.

128. Matrosovich M., Zhou N., Kawaoka Y., Webster R. The surface glycoproteins of H5 influenza viruses isolated from humans, chickens, and wild aquatic birds have distinguishable properties. J. Virol. 1999, 73, 11461155.

129. Matrosovich M.N., Matrosovich T.Y., Gray T., Roberts N.A, Klenk H.D. Human and avian influenza viruses target different cell types in cultures of human airway epithelium. 2004, 101,4620-4624.

130. McGeoch D., Fellner P., Newton C. Influenza virus genome consists of eight distinct RNA species. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1976, 73, 3045-3049.

131. Mitnaul L.J., Matrosovich M.N., Castrucci M.R., Tuzikov A.B., Bovin N.V., Kobasa D., Kawaoka Y. Balanced hemagglutinin and neuraminidase activities are critical for efficient replication of influenza A virus. J. Virol. 2000, 74, 6015-6020.

132. Mould J.A., Drury J.E., Frings S.M., Kaupp U.B., Pekosz A., Lamb R.A., Pinto L.H. Permeation and activation of the M2 ion channel of influenza A virus. J. Biol. Chem. 2000, 275, 31038-31050.

133. Murphy B.R. Use of live attenuated cold-adapted influenza A reassortant virus vaccines in infants, children, young adults, and elderly adults. Infect. Dis. Clin. Pract. 1993, 2, 174-181.

134. Murphy B.R., Coelingh K. Principles underlying the development and use of live attenuated cold-adapted influenza A and B virus vaccines. Viral Immunol. 2002,15,295-323.

135. Murti K.G., Brown P.S., Bean W.J., Webster R.G. Composition of the helical internal components of influenza virus as revealed byimmunogoldlabeling/electron microscopy. Virology 1992,186, 294-299.

136. Naeve C.W., Hinshaw V.S., Webster R.G. Mutations in the hemagglutinin receptor-binding site can change the biological properties of an influenza virus. J. Virol. 1984, 51, 567-569.

137. Naffakh N., Massin P., Escriou N., Crescenzo-Chaigne B., van der Werf S. Genetic analysis of the compatibility between polymerase proteins from human and avian strains of influenza A viruses. J. Gen Virol. 2000, 81, 1283-1291.

138. Nakajama K., Compans R.W. Biosynthesis of the oligosaccharides of influenza viral proteins. Virology 1979, 93, 31-47.

139. Nakajima K. Influenza virus genome structure and encoded proteins. Nippon Rinsho 1997, 55, 2542-2546.

140. Nakajima K., Sugiura A. Three-factor cross of influenza virus. Virology 1977,81,486-489.

141. Nayak D.P., Chambers T.M., Akkina R.K. Defective-interfering (DI) RNAs of influenza viruses: origin, structure, expression, and interference. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1985, 114, 103-151.

142. Neumann G., Fujii K., Kino Y., Kawaoka Y. An improved reverse genetics system for influenza A virus generation and its implications for vaccine production. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2005, 102, 16825-16829.

143. Neumann G., Hughes M.T., Kawaoka Y. Influenza A virus NS2 protein mediates vRNP nuclear export through NES-independent interaction with hCRMl. EMBO J. 2000,19, 6751-6758.

144. Nichol K.L., Treanor J.J. Vaccines for seasonal and pandemic influenza. J. Infect. Dis. 2006,194,111-118.

145. Nicolson C., Major D., Wood J.M., Robertson J.S. Generation of influenza vaccine viruses on VERO cells by reverse genetics, an H5N1 candidatevaccine strain produced under a quality system. Vaccine 2005, 23, 29432952.

146. Odagiri T. Development of attenuated H5N1 avian influenza vaccines using reverse genetic technology. Nippon Rinsho 2006, 64, 1855-1864.

147. Olsen C.W. The emergence of novel swine influenza viruses in North America. Virus Res. 2002, 85, 199-210.

148. O'Neill R.E., Talon J., Palese P. The influenza virus NEP (NS2 protein) mediates the nuclear export of viral ribonucleoproteins. EMBO J. 1998, 17, 288-296.

149. Palese P., Compans R.W. Inhibition of influenza virus replication in tissue culture by 2-deoxy-2,3-dehydro-N-trifluoroacetylneuraminic acid (FANA, mechanism of action). J. Gen Virol. 1976, 33, 159-163.

150. Palese P., Tobita K., Ueda M., Compans R.W. Characterization of temperature sensitive influenza virus mutants defective in neuraminidase. Virology 1974,61,397-410.

151. Peins J.S., Guan Y., Markwell D., Ghose P., Webster R.G., Shortridge K.F. Cocirculation of avian H9N2 and contemporary "human" H3N2 influenza A viruses in pigs in southeastern China: potential for genetic reassortment? J. Virol. 2001,75, 9679-9686.

152. Peiris J.S., Yu W.C., Leung C.W., Cheung C.Y., Ng W.F, Nicholls J.M., Ng T. K., Chan K.H., Lai S.T., Lim W.L., Yuen K.Y., Guan Y. Re-emergence of fatal human influenza A subtype H5N1 disease. Lancet 2004, 363, 617619.

153. Peiris M., Yuen K.Y., Leung C.W., Chan K.H., Ip P.L., Lai R.W., Orr W.K., Shortridge K.F. Human infection with influenza H9N2. Lancet 1999, 354, 916-917.

154. Pennisi E. First genes isolated from the deadly 1918 flu virus. Science 1997, 275, 1739.

155. Philpott M., Easterday B.C., Hinshaw V.S. Neutralizing epitopes of the H5 hemagglutinin from a virulent avian influenza virus and their relationship to pathogenicity. J. Virol. 1989, 63, 3453-3458.

156. Pinto L.H., Holsinger L.J., Lamb R.A. Influenza virus M2 protein has ion channel activity. Cell 1992,69, 517-528.

157. Plotch S.J., Bouloy M., Ulmanen I., Krug R.M. A unique cap(m7GpppX.m)-dependent influenza virion endonuclease cleaves capped RNAs to generate the primers that initiate viral RNA transcription. Cell 1981, 23, 847-858.

158. Podchernyaeva R.Ya, Shchipanova M.V., Elkin V.S., Melnichenko E.I. Preparation of influenza B virus recombinant strains. Acta. Virol. 1987, 31, 475-480.

159. Polezhaev F.I., Garmashova L.M., Koval T.A., Taranova G.P., Topuriya N.V., Aleksandrova G.I. Attenuated ts-recombinants of influenza

160. A/USSR/77 (H1N1) virus obtained by crossing with the cold-adapted donor A/Leningrad/134/57 (H2N2) virus. Acta. Virol. 1982, 26, 221-226.

161. Porter A.G., Barber C., Carey N.H., Hallewell R.A., Threlfall G., Emtage J.S. Complete nucleotide sequence of an influenza virus hemagglutinin gene from cloned DNA. Nature 1979, 282, 471-477.

162. Reed L.J., Muench H. A simple method of estimating fifty percent endpoints. Am. J. Hyg. 1938, 27, 493^97.

163. Ritchey M.B., Palese P., Kilbourne E.D. RNAs of influenza A, B, and C viruses. J. Virol. 1976, 18, 738-744.

164. Roberts P.C., Lamb R.A., Compans R.W. The Ml and M2 proteins of influenza A virus are important determinants in filamentous particle formation. Virology 1998,240, 127-137.

165. Rogers G.N., Paulson J.C. Receptor determinants of human and animal influenza virus isolates: Differences in receptor specificity of the H3 hemagglutinin based on species of origin. Virology 1983, 127, 361-373.

166. Rott R. Genetic determinants for infectivity and pathogenicity of influenza viruses. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1980, 288, 393-399.

167. Rott R., Orlich M., Scholtissek C. Correlation of pathogenicity and gene constellation of influenza A viruses. III. Non-pathogenic recombinants derived from highly pathogenic parent strains. J. Gen Virol. 1979, 44, 471477.

168. Rudneva I.A., Sklyanskaya E.I., Barulina O.S., Yamnikova S.S., Kovaleva V.P., Tsvetkova I.V., Kaverin N.V. Phenotypic expression of HA-NA combinations in human-avian influenza A virus reassortants. Arch. Virol. 1996,141,1091-1099.

169. Russell R.J., Gamblin S .J., Haire L.F., Stevens D.J., Xiao B., Ha Y., Skehel J.J. HI and H7 influenza hemagglutinin structures extend a structural classification of hemagglutinin subtypes. Virology 2004, 325, 287-296.

170. Schafer J.R., Kawaoka Y., Bean W.J., Suss J., Senne D., Webster R.G. Origin of the pandemic 1957 H2 influenza A virus and the persistence of its possible progenitors in the avian reservoir. Virology 1993, 194, 781-788.

171. Scholtissek C., Burger H., Bachmann P.A., Hannoun C. Genetic relatedness of hemagglutinins of the HI subtype of influenza A viruses isolated from swine and birds. Virology 1983, 129, 521-523.

172. Scholtissek C., Rohde W., Von Hoyningen V., Rott R. On the origin of the human influenza virus subtypes H2N2 and H3N2. Virology 1978, 87,13-20.

173. Scholtissek C., Spring S.B. Extragenic suppression of temperature-sensitive mutations in RNA segment 8 by replacement of different RNA segments with those of other influenza A virus prototype strains. Virology 1982, 118, 28-34.

174. Schultz U., Fitch W.M., Ludwig S., Mandler J., Scholtissek C. Evolution of pig influenza viruses. Virology 1991, 183, 61-73.

175. Schulman J.L., Palese P. Selection and identification of influenza virus recombinants of defined genetic composition J. Virol. 1976, 20, 248-254.

176. Sha B., Luo M. Structure of a Afunctional membrane-RNA binding protein, influenza virus matrix protein Ml. Nat. Struct. Biol. 1997,4, 239-244.

177. Shapiro G.I., Gurney T.Jr., Krug R.M. Influenza virus gene expression, control mechanisms at early and late times of infection and nuclear-cytoplasmic transport of virus-specific RNAs. J. Virol. 1987, 61, 764-773.

178. Shapiro G.I., Krug R.M. Influenza virus RNA replication in vitro, synthesis of viral template RNAs and virion RNAs in the absence of an added primer. J. Virol. 1988, 62,2285-2290.

179. Sharp G.B., Kawaoka Y., Jones D.J., Bean W.J., Pryor S.P., Hinshaw V., Webster R.G. Coinfection of wild ducks by influenza A viruses: Distribution patterns and biological significance. J. Virol. 1997, 71, 6128-6135.

180. Shinya K., Watanabe S., Ito T., Kasai N., Kawaoka Y. Adaptation of an H7N7 equine influenza A virus in mice. J. Gen Virol. 2007, 88, 547-553.

181. Shu L.L., Lin Y.P., Wright S.M., Shortridge K.F., Webster R.G. Evidence for interspecies transmission and reassortment of influenza A viruses in pigs in southern China. Virology 1994, 202, 825-833.

182. Sims L.D., Domenech J., Benigno C., Kahn S., Kamata A., Lubroth J., Martin V., Roeder P. Origin and evolution of highly pathogenic H5N1 avian influenza in Asia. Vet. Rec. 2005, 157, 159-164.

183. Smeenk C.A., Brown E.G. The influenza virus variant A/FM/1/47-MA possesses single amino acid replacements in the hemagglutinin, controlling virulence, and in the matrix protein, controlling virulence as well as growth. J. Virol. 1994, 68, 530-534.

184. Smeenk C.A., Wright K.E., Burns B.F., Thaker A.J., Brown E.G. Mutations in the hemagglutinin and matrix genes of a virulent influenza virus variant, A/FM/1/47-MA, control different stages in pathogenesis. Virus Res. 1996, 44, 79-95.

185. Smirnov Y.A., Lipatov A.S., Van Beek R., Gitelman A.K., Osterhaus A.D., Claas E.C. Characterization of adaptation of an avian influenza A (H5N2) virus to a mammalian host. Acta Virol. 2000, 44, 1-8.

186. Smirnov YA, Gitelman AK, Govorkova EA, Lipatov AS, Kaverin NV. Influenza H5 virus escape mutants: immune protection and antibodyproduction in mice.Virus Res. 2004, 99,205-208.

187. Smith G.L., Hay A.J. Replication of the influenza virus genome. Virology 1982, 118,96-108.

188. Subbarao K., Luke C. H5N1 viruses and vaccines. PLoS Pathog. 2007, 3, e40.

189. Subbarao Xu.X., Cox N.J., Guo Y. Genetic characterization of the pathogenic influenza A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) virus: similarity of its hemagglutinin gene to those of H5N1 viruses from the 1997 outbreaks in Hong Kong. Virology 1999,261, 15-19.

190. Sugimura T., Yonemochi H., Ogawa T., Tanaka Y., Kumagai T. Isolation of a recombinant influenza virus (Hsw 1 N2) from swine in Japan. Arch. Virol. 1980, 66, 271-274.

191. Suzuki Y. Sialobiology of Influenza. Molecular mechanism of host range variation of influenza viruses. Biol. Pharm. Bull. 2005, 28, 399-408.

192. Taubenberger J.K. The origin and virulence of the 1918 "Spanish" influenza virus. Proc. Am Philos. Soc. 2006, 150, 86-112.

193. Taubenberger J.K., Reid A.H., Krafft A.E., Bijwaard K.E., Fanning T.G. Initial genetic characterization of the 1918 "Spanish" influenza virus. Science 1997, 275, 1793-1796.

194. Taylor P.M., Askonas B.A. Influenza nucleoprotein-specific cytotoxic T-cell clones are protective in vivo. Immunology 1986, 58,417-420.

195. Tian G., Zhang S., Li Y., Bu Z., Liu P., Zhou J., Li C., Shi J., Yu K., Chen H. Protective efficacy in chickens, geese and ducks of an H5N1-inactivated vaccine developed by reverse genetics. Virology 2005, 341, 153-162.

196. Tsuchiya E., Sugawara K., Hongo S., Matsuzaki Y., Muraki Y., Li Z.N., Nakamura K. Antigenic structure of the hemagglutinin of human influenza A/H2N2 virus. J. Gen. Virol. 82,2475-2484.

197. Tumpey T.M., Basler C.F., Aguilar P.V., Zeng H., Solórzano A., Swayne D.E, Cox N.J., Katz J.M., Taubenberger J.K., Palese P., García-Sastre A. Characterization of the reconstructed. 1918 Spanish influenza pandemic virus. Science 2005,310, 77-80.

198. Tumpey T.M., Garcia-Sastre A., Taubenberger J.K., Palese P., Swayne D.E., Basler C.F. Pathogenicity and immunogenicity of influenza viruses withgenes from the 1918 pandemic virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004, 101, 3166-3171.

199. Tyrrell D. Discovery of influenza viruses. In: Textbook of influenza, Eds, K. G. Nicholson, R. G. Webster, and A. J. Hay. U.K., Blackwell Science Ltd, 1998, 19-26.

200. Ulmanen I., Broni B.A., Krug R.M. Role of two of the influenza virus core P proteins in recognizing cap 1 structures (m7GpppNm) on RNAs and in initiating viral RNA transcription. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1981, 78, 7355-7359.

201. Varghese J.N., Laver W.G., Colman P.M. Structure of the influenza virus glycoprotein antigen neuraminidase at 2.9 A resolution. Nature 1983, 303, 35-40.

202. Wagner R., Matrosovich M., Klenk H.D. Functional balance between hemagglutinin and neuraminidase in influenza virus infections. Rev. Med. Virol. 2002,12, 159-166.

203. Wagner R., Wolff T., Herwig A., Pleschka S., Klenk H.D. Interdependence of hemagglutinin glycosylation and neuraminidase as regulators of influenza virus growth: a study by reverse genetics. J. Virol. 2000, 74, 6316-6323.

204. Wallenstain A., Munster V.J., Elmberg J., Osterhause A.D., Fouchier R.A.M., Olsen B. Multiple gene segment reassortment between Eurasian and American lineages of influenza A virus (H6N2) in guillemot (Uria aalge). Arch. Virology 2005, 150, 1685-1692.

205. Wareing M.D., Marsh G.A., Tannock G.A. Preparation and characterisation of attenuated cold-adapted influenza A reassortants derived from the A/Leningrad/134/17/57 donor strain. Vaccine 2002, 20, 2082-2090.

206. Watanabe T., Watanabe S., Noda T., Fujii Y., Kawaoka Y. Exploitation of nucleic acid packaging signals so generate a novel influenza virus-based vector stably expressing two foreign genes, J. Virol. 2003, 77, 10575-10583.

207. Webby R.J., Webster R.G. Emergence of influenza A viruses. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 2001, 29, 356,1817-1828.

208. Webster R.G., Brown L.E., Laver W.G. Antigenic and biological characterization of influenza virus neuraminidase (N2) with monoclonal antibodies. Virology 1984,135, 30-42.

209. Webster R.G., Geraci J., Petursson G., Skirnisson K. Conjunctivitis in human beings caused by influenza A virus of seals. N. Engl. J. Med. 1981, 304,911.

210. Webster R.G., Kawaoka Y., Bean W.J., Beard C.W., Brugh M. Chemotherapy and vaccination, a possible strategy for the control of highly virulent influenza virus. J. Virol. 1985, 55,173-176.

211. White J., Matlin K., Helenius A. Cell fusion by Semliki Forest, influenza, and vesicular stomatitis viruses. J. Cell Biol. 1981, 89, 674-679.

212. Wilson I.A., Skehel J.J., Wiley D.C. Structure of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3A resolution. Nature 1981, 289, 366-373.

213. Winter G., Fields S. The structure of the gene encoding the nucleoprotein of human influenza virus A/PR/8/34. Virology 1981, 114, 423-428.

214. Wright P.F., Webster R.G. Orthomyxoviruses. In: Fields Virology. Section 2: Specific virus families. Eds B.N. Fields and D.M. Knipe, Lippincott, Williams & Wilkins, 2001, pp: 1091-1137.

215. Yasuda J., Nakada S., Kato A., Toyoda T., Ishihama A. Molecular assembly of influenza virus, association of the NS2 protein with virion matrix. Virology 1993,196, 249-255.

216. Ye Z.P., Baylor N.W., Wagner R.R. Transcription-inhibition and RNA-binding domains of influenza A virus matrix protein mapped with antiidiotype antibodies and synthetic peptides. J. Virol. 1989, 63, 3586-3594.

217. Yoshimura A., Kuroda K., Kawasaki K., Yamashina S., Maeda T., Ohnishi S. Infectious cell entry mechanism of influenza virus. J. Virol. 1982, 43, 284-293.

218. Zheng H., Palese P., García-Sastre A. Antitumor properties of influenza virus vectors. Cancer Res. 2000, 60, 6972-6976.

219. Zhirnov O.P. Solubilization of matrix protein Ml/M from virions occurs at different pH for orthomyxo- and paramyxoviruses. Virology 1990, 176, 274279.

220. Zhou N.N., Senne D.A., Landgraf J.S., Swenson S.L., Erickson G., Rossow K., Liu L., Yoon K., Krauss S., Webster R.G. Genetic reassortment of avian, swine, and human influenza A viruses in American pigs. J. Virol. 1999, 73, 8851-8856.1. БЛАГОДАРНОСТИ.