Анализ молекулярных аспектов функционирования миозина II в мышечном сокращении и клеточной подвижности с помощью белка KRP тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Серебряная, Дарья Владимировна

• Серебряная, Дарья Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Серебряная, Дарья Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

СПИСОК ИЛЛЮСТРАЦИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ АКТОМИОЗИН-ЗАВИСИМОЙ КЛЕТОЧНОЙ

ПОДВИЖНОСТИ И СОКРАТИМОСТИ ГЛАДКИХ МЫШЦ.

1.1 Актомиозиновый цитоскелет - механическая основа движения клеток.

1.2. Актин и миозин II - главные сократительные белки клетки.

1.3. Фосфорилирование РЛЦ - ведущий механизм активации миозина.

1.4. Ферменты, регулирующие уровень фосфорилирования миозина II.

1.4.1. Киназа легких цепей миозина (КЛЦМ).

1.4.2. Rho-активируемая киназа (Rho-киназа).

1.4.3. Другие Са"' -независимые протеинкиназы.

1.4.4. Фосфатаза легких цепей миозина (ФЛЦМ).

1.4.5. Химические ингибиторы ферментов-модуляторов активности миозина II

2. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ МИОЗИНА II В

СОКРАТИТЕЛЬНОМ АППАРАТЕ ГЛАДКИХ МЫ1ИЩ.

2.1. Ультраструктура миозиновых филаментов II гладких мышц.

2.2. Факторы, препятствующие деполимеризации миозиновых филаментов гладких мышц.

2.3. Особенности регуляции сокращения гладких мышц под действием фосфорилирования РЛЦ миозина.

2.4. Пермеабилизованные гладкомышечные волокна как модель исследования регуляции сокращения гладкой мускулатуры.

3. ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ И РЕГУЛЯЦИИ АКТИВНОСТИ

МИОЗИНА II В НЕМЫШЕЧНЫХ КЛЕТКАХ.

3.1. Двигательные реакции в миграции немышечных клеток.

3.2. Распределение структурных элементов миозина II в мигрирующей клетке.

3.3. Пространственная регуляция фосфорилирования РЛЦ миозина II в клетке.

3.4. Экспериментальные подходы к исследованию механизмов миозин II -зависимой подвижности немышечных клеток.

4. СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА БЕЛКА KRP (ТЕЛОКИНА).

4.1. Структура KRP.

4.2. KRP как эндогенный регулятор активности миозина II.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. МАТЕРИАЛЫ.

1.1 .Реактивы и материалы для биохимических и молекулярно-биологических исследований.

1.2.Реактивы и материалы для клеточно-биологических исследований.

1.3. Реактивы и материалы для физиологических исследований.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Биохимические методы.

2.1.1. Определение концентрации белка.

2.1.2. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-электрофорез).

2.1.3. Мочевинно-глицеролъный электрофорез.

2.1.4. Иммуноблоттинг.

2.1.5. Приготовление образцов клеток и гладкомышечных волокон для ДСП-электрофореза

2.1.6. Приготовление образцов из гладкомышечных волокон и NIH3T3 фибробластов для мочевинно-глицеролъного электрофореза.

2.1.7. Экспрессия и очистка рекомбинантного KRP и его мутантных форм.

2.1.8. Фосфорилирование KRP in vitro.

2.1.9. Получение KRP, меченого 5-TMRIA.

2.2. Молекулярно-биологические методы.

2.2.1. Создание и характеристика молекулярно-генетических конструкций.

2.3. Клеточно-биологические методы.

2.3.1. Культивирование фибробластов линии NIH ЗТЗ.

2.3.2. Транзиторная трансфекция фибробластов линии NIH3T3.

2.3.3. Получение трансгенных фибробластов линии NIH ЗТЗ, стабильно экспрессирующих KRP и ACKRP.

2.3.4. Направленная миграция в камере Бойдена.

2.3.5. Адгезия фибробластов на иммунологические планшеты, покрытые коллагеном

I типа.

2.3.6 Измерение миграции клеток методом зарастания царапины (Scratch assay).

2.3.7. Измерение сократительной активности фибробластов в коллагеновом матриксе.

2.3.8. Экстракция растворимого миозина из клеток с помощью Тритона Х-100.

2.3.9. Вычисление линейных параметров ядер и объема фибробластов линии ШНЗТЗ

2.4. Физиологические методы.

2.4.1. Получение препарата taenia caeci, пермеабшизованного Тритоном Х-100.

2.4.2. Измерение сократительной активности taenia caeci.

2.4.3. Приготовление препаратов taenia caeci с меченым KRP для флуоресг(ентной микроскопии.

2.5. Количественная обработка изображений и статистический анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. ВЛИЯНИЕ KRP НА СОКРАТИМОСТЬ СКИНИРОВАННЫХ ГЛАДКОМЫШЕЧНЫХ

ВОЛОКОН.

1.1. Характеристика скинированных препаратов гладких мыщц taenia caeci.

1.2 .Влияние KRP на Са2+-независимое сокращение, вызванное микроцистином.

1.3.Влияние KRP на Са2+-зависимое сокращение и расслабление.

1.3.1. Эффекты полноразмерного и фосфорилированного KRP на расслабление скинированных волокон.

1.3.2. Релаксирующие эффекты мутантных форм KRP.

2. ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОГО МЕХАНИЗМА ДЕЙСТВИЯ KRP НА МОДЕЛИ

ТРАНСГЕННЫХ КЛЕТОК.

2.1 .Получение и характеристика трансгенных по KRP фибробластов.

2.2. Влияние KRP на фосфорилирование РЛЦ миозина в фибробластах.

2.3. Влияние KRP на количество полимерного миозина II в фибробластах.

2.4. Роль С-концевого домена KRP в регуляции функционального состояния миозина II в клетках

2.5. Влияние KRP на подвижность и сократимость трансгенных фибробластов.

2.6. С-концевая последовательность KRP необходима для стимуляции хемотаксиса фибробластов.

2.7. Внутриклеточные эффекты KRP связаны с миозином, регулируемым КЛЦМ и, возможно, Zip-киназой, но не Ию-киназой.

2.7.1. Влияние KRP на фосфорилирование миозина при ингибировании киназ РЛЦ миозина.

2.1.2. Влияние KRP на двигательные реакции клеток при ингибировании киназ РЛЦ миозина.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

1. РЕГУЛЯЦИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ МИОЗИНА II В КЛЕТКЕ ПОД

ДЕЙСТВИЕМ KRP.

2. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ KRP ОБУСЛОВЛЕНЫ ЕГО ПРЯМЫМ

СВЯЗЫВАНИЕМ С МИОЗИНОМ.

3. KRP ПРЕПЯТСТВУЕТ ФОСФОРИЛИРОВАНИЮ РЛЦ МИОЗИНА В КЛЕТКЕ.

4. РОЛЬ СТРУКТУРНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ МИОЗИНА II В АКТОМИОЗИН

ЗАВИСИМОЙ ПОДВИЖНОСТИ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ молекулярных аспектов функционирования миозина II в мышечном сокращении и клеточной подвижности с помощью белка KRP»

Двигательная активность клеток, обеспечиваемая работой двух главных белков -актина и миозина II типа, является фундаментальным свойством всех живых систем и играет ключевую роль в широком спектре биологических явлений. В специализированных мышечных клетках она проявляется в их сократительной деятельности, или сокращении, а в немышечных клетках обеспечивает сложные процессы пространственного перемещения, или миграции. Данная работа посвящена изучению функции миозина II именно в этих процессах, а разнообразные формы внутриклеточной подвижности не рассматриваются.

В норме клеточная миграция происходит на всем протяжении эмбриогенеза, в постнатальном развитии, репарации и ремоделировании тканей, при ангиогенезе, воспалительном и иммунном ответах и других биологических процессах. Нарушения миграционного поведения клеток часто сопровождают различные патологические состояния, в том числе в сердечно-сосудистой системе, при заживлении ран и канцерогенезе. Например, опухолевые клетки активно секретируют пептидные и белковые факторы, являющиеся специфическими хемоаттрактантами для сосудистого эндотелия, что стимулирует ангиогенез и рост сосудов в направлении опухоли. Метастазирование связано с миграцией раковых клеток из первичной опухоли в кровоток, который они впоследствии покидают и инвазируют в участки новообразований. Кроме того, миграция клеток является важным аспектом современной биотехнологии, играя ключевую роль в наполнении биоматериалов и формировании биокаркасов при биопротезировании. Очевидно, что знание внутриклеточных механизмов и путей регуляции двигательной активности клеток совершенно необходимо для создания способов направленного воздействия и управления двигательными реакциями клеток.

Эксперименты с культивируемыми клетками in vitro в настоящее время - главный источник информации о механизмах клеточной подвижности. Хотя большинство используемых подходов и ограничено поведением клеток в двумерных моделях, общепринято считать, что основные принципы будут адекватны трехмерным системам и ситуации in vivo. Сравнительный анализ результатов, полученных с использованием моделей трехмерного матрикса или тканевых препаратов, позволяет оценить справедливость таких заключений. Эти соображения и составили методическую основу настоящей работы.

Функционирование миозина II типа как молекулярного мотора клетки является одним из базовых принципов клеточной подвижности, анализу которого посвящено данное исследование. Клетки гладкой мускулатуры используют миозин II типа для выполнения специализированной функции сокращения. В составе дифференцированной гладкомышечной ткани они связаны друг с другом и внеклеточным матриксом, что исключает возможность их пространственного перемещения. "Сократительная" специализация этих клеток поддерживается высоким содержанием основных сократительных белков, актина и миозина, и их организацией в полимерные структуры -миофиламенты, концы которых прочно прикреплены к клеточной мембране. Сборка-разборка этих структур за счет обратимой полимеризации актина и миозина препятствует быстрой силовой реакции клеток и поэтому сведена до минимума в клетках гладких мышц.

Для реализации своей двигательной активности немышечные клетки используют миозин II типа, гомологичный гладкомышечному миозину II. Необходимо отметить, что движение немышечных клеток является интегральным процессом, включающим два основных типа подвижности, только один из которых требует минимального участия миозина. Этот тип, условно обозначаемый как амебоидный, в чистом виде характерен только для некоторых эукариотических клеток, таких как кератиноциты и нейтрофилы, и морфологически выглядит как "перетекание" клетки по субстрату. Такой способ движения основан на обратимой полимеризации актина и является в настоящее время предметом пристального внимания, но выходит за рамки данной работы и будет лишь кратко проанализирован в одном из разделов обзора литературы. Далее под термином клеточной подвижности мы будем понимать форму актомиозин-зависимой подвижности, наиболее характерной для таких клеток с ярко выраженной структурой цитоскелета и адгезивными свойствами, как фибробласты. Именно поэтому эти клетки были выбраны нами в качестве объекта исследования. Как и большинство клеток организма, фибробласты используют актиновый тип подвижности как одну из важных компонент для поляризации и начальной фазы движения, но затем привлекают миозин II для координированного перемещения тела клетки и подтягивания ее задней части на заключительных этапах цикла миграции. Предполагается, что при этом миозин II играет важную роль как в структурной организации одиночных филаментов актина в пучки стресс-фибрилл, так и их связи с адгезивными контактами. Натяжение стресс-фибрилл вследствие сократительной активности актомиозина является существенным элементом как движения этих клеток, так и формирования прочных адгезивных контактов. Однако, эти аспекты функционирования миозина II в настоящее время исследованы мало, особенно это касается структурной роли миозина II.

Стабильность структуры гладкомышечного актомиозина, но общие принципы его сократимости как в гладкомышечных, так и в немышечных клетках позволяют избирательно исследовать моторную функцию актомиозина, используя препараты гладких мышц. Полученные результаты далее могут быть использованы для анализа поведения немышечных клеток при аналогичных воздействиях, и дать возможность вычислить, дедуктивным путем, роль структурной компоненты в клеточной подвижности. Такой сравнительный анализ и был применен в настоящей работе.

Для реализации функций немышечного и гладкомышечного миозина II типа требуется активация, для которой необходимо и достаточно фосфорилирования единственного остатка Ser19 регуляторных легких цепей (РЛЦ) миозина. В результате активации молекула миозина претерпевает конформационное изменение, которое одновременно "включает" как моторную активность, так и разрешает спонтанную ассоциацию миозина II в филаменты. С неразрывностью этих двух событий связана трудность анализа индивидуальной значимости каждой из составляющих для клеточной подвижности. Мы предположили, что нужного разобщения этих процессов можно достигнуть используя свойства белка KRP (Kinase Related Protein, или телокин), который взаимодействует с гладкомышечным и немышечным миозином in vitro и подавляет фосфорилирование его РЛЦ, но вызывает при этом полимеризацию миозина в филаменты.

В связи с этим, в начале мы использовали модель скинированной гладкой мускулатуры для определения избирательного эффекта KRP только на моторную функцию миозина II. Затем нашей задачей было создать модель трансгенных фибробластов с гетерологичной экспрессией KRP и показать, что этот белок регулирует состояние миозина II именно так, как это следует ожидать из результатов экспериментов in vitro, а также исследовать двигательный фенотип таких клеток. Мы предполагали, что дифференциальный анализ эффектов KRP в этих системах позволит нам выявить функциональную роль структурной организации миозина II в клеточной подвижности. Наконец, важной составляющей каждого раздела работы было проследить, связаны ли эффекты KRP на миозин II с прямым взаимодействием этих белков, в котором главную роль играет С-концевая последовательность KRP, или KRP может действовать иначе, например, используя фосфорилирование своей N-концевой последовательности, не являющееся критическим для связывания с миозином.

Таким образом, целью нашего исследования было выяснение механизма функционирования миозина II в клеточной подвижности с использованием двух экспериментальных систем и белка KRP в качестве инструмента для разобщения структурной и моторной функций миозина II. В модели скицированных гладких мышц мы исследовали избирательное действие KRP на сократительные свойства актомиозина, а в модели трансгенных фибробластов линии NIH3T3 - действие KRP на актомиозин-зависимую клеточную подвижность.

В работе были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Исследовать влияние KRP и его фосфорилирования на сократимость скинированных гладкомышечных волокон.

2. Получить линии трансгенных фибробластов, экспрессирующих белок KRP и измерить уровень фосфорилирования и содержание полимерного миозина II в этих клетках.

3. Исследовать двигательный фенотип трансгенных фибробластов.

4. Исследовать влияние ингибиторов протеинкиназ на хемотаксис и уровень фосфорилирования миозина II в трансгенных клетках

5. Установить вклад С-концевой миозин-связывающей последовательности KRP в регуляцию состояния миозина II и миграцию трансгенных клеток, а также сократимость скинированных волокон.

Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Серебряная, Дарья Владимировна

выводы

1. Получены линии трансгенных фибробластов, экспрессирующих KRP в концентрациях, сравнимых с содержанием миозина II. Уровень фосфорилирования РЛЦ миозина в этих клетках снижен в 2 раза по сравнению с контрольными клетками, но содержание полимерного миозина повышено на 20% по сравнению с контрольными клетками.

I. По сравнению с контрольными, экспрессирующие KRP клетки лучше адгезируют, сокращаются и мигрируют в различных тест-системах.

3. Ингибиторный анализ показывает, что KRP препятствует фосфорилированию РЛЦ миозина II под действием КЛЦМ и, возможно, ZIP-киназы, но не блокирует действия Rho-киназы на фосфорилирование РЛЦ миозина в клетках.

I. KRP ингибирует фосфорилирование РЛЦ миозина и развитие Са -независимого сокращения скинированных гладкомышечных волокон. Фосфорилирование KRP усиливает расслабление волокон, сокращенных в присутствии Са2+.

5. С-концевая миозин-связывающая последовательность необходима для внутриклеточного действия KRP. Сделан вывод о том, что наблюдаемые эффекты KRP обусловлены его прямым взаимодействием с миозином.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Серебряная, Дарья Владимировна, 2006 год

1. Воротников А. В., Крымский М. А., Хапчаев А. Ю., Серебряная Д. В. (2004) Сигнальные механизмы регуляции сократительной активности гладких мышц. Российский Физиол. Журнал, 90, 705-718.

2. Воротников А.В., Крымский М.А., Ширинский В.П. (2002) Внутриклеточная сигнализация и фосфорилирование белков при сокращении гладких мышц. Биохимия, 67, 12, 1587-1610.

3. Хапчаев А. Ю., Ширинский В. П., Воротников А. В. (2003) Структура, свойства и регуляция белковых продуктов генетического локуса киназы легких цепей миозина. Yen. Виол. Химии, 43, 365-420.

4. Чадин А.В.(2004) Исследование роли белка KRP в актомиозин-зависимой клеточной подвижности. Дипломная работа.

5. Щербакова О.В. (2006). Изучение механизма ингибиторного действия KRP на фосфорилирование миозина. Дипломная работа.

6. Ahnert-Hilger, G, Mach, W, Fohr, К.J., Gratzl, M. (1989) Poration by alpha-toxin and streptolysin O: an approach to analyze intracellular processes. Methods Cell Biol, 31, 6390.

7. Amano, M, Mukai, H, Ono, Y, Chihara, K, Matsui, T, Hamajima, Y, Okawa, K, Iwamatsu, A, Kaibuchi, K. (1996) Identification of a putative target for Rho as the serine-threonine kinase protein kinase N. Science, 271, 5249, 648-650.

8. Applegate, D, Pardee, J.D. (1992) Actin-facilitated assembly of smooth muscle myosin induces formation of actomyosin fibrils. J Cell Biol., 117,6, 1223-1230.

9. Arefieva, T.L., Krasnikova, T.L. (2001) Monocytic cell adhesion to intact and plasmin-modified fibrinogen: possible involvement of Mac-1 (CD1 lb/CD 18) and ICAM-1 (CD54). J Cell Physiol, 188, 3,403-409.

10. Arner, A. (1982) Mechanical characteristics of chemically skinned guinea-pig taenia coli. Pflugers Arch, 395, 4, 277-284.

11. Ashton, F.T., Somlyo, A.V., Somlyo, A.P. (1975) The contractile apparatus of vascular smooth muscle: intermediate high voltage stereo electron microscopy. J Mol Biol. 98, 1, 17-29.

12. Bagby, R.M. (1983) Organization of contractile/cytoskeletal elements. In: Biochemistry of Smooth muscle (Stephens, N.L., ed), CRS Press, Boca Raton, FL, 4-84.

13. Bain, J, McLauchlan, H, Elliott, M, Cohen, P. (2003) The specificities of protein kinase inhibitors: an update. BiochemJ. 371,199-204

14. Bao J., Jana S.S., Adelstein R.S. (2006) Vertebrate nonmuscle myosin II isoforms rescue small interfering RNA-induced defects in COS-7 cell cytokinesis. J.Biol.Chem., 280, 20, 19594- 19599.

15. Bershadsky, A. (2004) Magic touch: how does cell-cell adhesion trigger actin assembley? Trends Cell Biology, 14, 11, 588 594.

16. Bershadsky, A.D., Balaban, N.Q., Geiger, B. (2003) Adhesion-dependent cell mechanosensitivity. A mm Rev Cell Dev Biol.\9, 677-695.

17. Borman, M.A., MacDonald, J.A,. Muranyi, A., Hartshorne, D.J., Haystead, T.A. (2002) Smooth muscle myosin phosphatase-associated kinase induces Ca2+ sensitization via myosin phosphatase inhibition. J Biol Chem. 277, 26, 23441 23446.

18. Borovikov, Yu.S. (1999) Conformational changes of contractile proteins and their role in muscle contraction. IntRev Cytol, 189, 267 301.

19. Borovikov, Yu.S., Horiuchi, K.Y., Avrova, S.V., Chacko, S. (1996) Modulation of actin conformation and inhibition of actin filament velocity by calponin. Biochemistry, 35, 43, 13849 13857.

20. Carlier, M.F., (1991) Minireview: Actin: Protein Structure and Filament Dinamics. J. Biol. Chem., 266, 1 4.

21. Chen, X.Q., Tan, I, Nig, C.H., Hall, C., Lim, L., Leung, T. (2002) Characterization of RhoA-binding kinase ROKalpha implication of the pleckstrin homology domain in ROK alpha function using region-specific antibodies, J Biol Chem. 277(15), 12680 12688.

22. Choudhury, N., Khromov, A. S., Somlyo, A. P., Somlyo, A. V. (2004) Telokin mediates2+

23. Conti, M.A., Adelstein, R.S. (1981) The relationship between calmodulin binding and phosphorylation of smooth muscle myosin kinase by the catalytic subunit of 3',5' cAMP-dependent protein kinase. J Biol Chem, 256,7, 3178-3181.

24. Conrad, P.A., Giuliano, K.A., Fisher, G., Collins, K., Matsudaira, P.T., Tailor, D.L. (1993) Relative distribution of actin, myosin I, and myosin II during the wound healing response of fibroblasts. J. Cell. Biol, 120, 1381 1391.

25. Cooke, P.H., Kargacin, G., Craig, R., Fogarty, K., Fay, F.S. (1987) Molecular structure and organization of filaments in single, skinned smooth muscle cells. Prog Clin Biol Res. 245, 1-25.

26. Davies, S.P., Reddy, H., Caivano, M., Cohen, P. (2000) Specificity and mechanism of action of some commonly used protein kinase inhibitors. Biochem J., 351, 95-105

27. Deng, J.T., Van Lierop, J.E., Sutherland, C., Walsh, M.P. (2001) Ca2+-independent smooth muscle contraction. A novel function for integrin-linked kinase. J Biol Chem., 276, 19,16365-16373.

28. DiMilla, P.A., Barbee, K., and Lauffenburger, D.A. (1991) Mathematical model for the effects of adhesion and migration on cell migration speed., Biophys.J., 60, 15 37.

29. Eddy, R.J., Pierini, L.M., Matsumura, F., Maxfield, F.R. (2000) Ca2+-dependent myosin II activation is reqiured for uropod retraction during neutrophil migration. J.Cell.Sci, 113, 7, 1287-1298.

30. Eddy, R.J., Pierini, L.M., Maxfield, F.R. (2002) Microtubule asymmetry during neutrophil polarazation and migration. Mol. Cell. Biol., 13,12, 4470 4483.

31. Eto, M., Ohmori, Т., Suzuki, M., Furuya, K., Morita, F. (1995) A novel protein phosphatase-1 inhibitory protein potentiated by protein kinase C. Isolation from porcine aorta media and characterization. J Biochem (Tokyo). 118, 6, 1104-1107.

32. Eto, M., Senba, S., Morita, F., Yazawa, M. (1997) Molecular cloning of a novel phosphorylation-dependent inhibitory protein of protein phosphatase-1 (CPU 7) in smooth muscle: its specific localization in smooth muscle. FEBS Lett. 410, 2-3, 356-360.

33. Fabiato, A., Fabiato, F. (1979) Use of chlorotetracycline fluorescence to demonstrate Ca2+-induced release of Ca2+ from the sarcoplasmic reticulum of skinned cardiac cells. Nature, 281(5727), 146-148.

34. Fay, F.S., Delise, C.M. (1973) Contraction of isolated smooth-muscle cells structural changes. Proc Natl Acad Sci USA. 70, 3, 641-645.

35. Feng, J., Ito, M., Kureishi, Y., Ichikawa, K., Amano, M., Isaka, N., Okawa, K., Iwamatsu, A., Kaibuchi, K., Hartshorne, D.J., Nakano, T. (1999) Rho-associated kinase of chicken gizzard smooth muscle. J Biol Chem, 21 A, 6, 3744 3752.

36. Fisher, B.A., Bagby, R.M. (1977) Reorientation of myofilaments during contraction of a vertebrate smooth muscle. Am J Physiol., 232, 1, 5 14.

37. Ford, H.L., Silver, D.L., Kaehar, B, Sellers, J.R, Zain, S.B. (1997) Effect of Mtsl on the structure and activity of nonmuscle myosin II. Biochemistry, 36, 51, 16321-16327.

38. Fukata, M., Nakagawa, M., Kuroda, S., Kaibuchi, K. (1999) Cell adhesion and Rho small GTPases., J Cell ScL, 24, 4491 5000.

39. Gabella, G. (1977) Arrangement of smooth muscle cells and intramuscular septa in the taenia coli. Cell Tissue Res. 184, 2, 195-212.

40. Gallagher, P. J., Herring, B. P. (1991) The carboxyl terminus of the smooth muscle myosin light chain kinase is expressed as an independent protein, telokin. J. Biol. Chem., 266, 35, 23945-23951.

41. Gallagher, P.J., Herring, B.P., Griffin, S.A., Stull, J.T. (1991) Molecular characterization of a mammalian smooth muscle myosin light chain kinase. J Biol Chem., 266, 35, 2393623944.

42. Geiger, В., Bershadsky, A., Pankov, R., Yamada, K.M. (2001) Transmembrane crosstalk between the extracellular matrix-cytoskeleton crosstalk. Nat Rev Mol Cell Biol, 2, 11, 793805.

43. Gillis, J.M., Cao, M.L., Godfraind-De Becker, A. (1988). Density of myosin filaments in the rat anococcygeus muscle, at rest and in contraction. II. J Muscle Res Cell Motil, 9, 1, 18 -29.

44. Giuliano, K.A., Kolega, J., De Biasio, R.L., Taylor, D.L. (1992) Myosin II Phosphorylation and the dynamics of stress fibers in serum-deprived and stimulated fibroblasts. Mol. Biol.Cell., 3, 1037- 1048.

45. Goeckeler, Z.M., Masaracchia, R.A., Zeng, Q., Chew, T.L., Gallagher, P., Wysolmerski, R.B. (2000) Phosphorylation of myosin light chain kinase by p21-activated kinase PAK2, J Biol Chem., 275, 24, 18366 18374.

46. Gong, M.C., Cohen, P., Kitazawa, Т., Ikebe, M., Masuo, M., Somlyo, A.P., Somlyo, A.V. (1992). Myosin light chain phosphatase activities and the effects of phosphatase inhibitors in tonic and phasic smooth muscle. J Biol Chem. 267, 21, 14662 14668.

47. Grinnell, F. (2000) Fibroblast-collagen-matrix contraction: growth-factor signalling and mechanical loading. Trends Cell Biol, 10, 9, 362 365.

48. Guilford, W.H., Warshaw, D.M. (1998) The molecular mechanics of smooth muscle myosin. Comp Biochem Physiology В Biochem Mol Biol., 119, 3, 451 458.

49. Gumbiner, B.M. (1996) Cell adhesion: the molecular basis of tissue architecture and morphogenesis. Cell., 84, 3, 345 357.

50. Gunst, S.J., Fredberg, J.J. (2003) The first three minutes: smooth muscle contraction, cytoskeletal events, and soft glasses. JAppl Physiol. 95,1, 413 425.

51. Hannigan, G.E., Leung-Hagesteijn, C., Fitz-Gibbon, L., Coppolino, M.G., Radeva, G., Filmus, J., Bell, J.C., Dedhar, S. (1996) Regulation of cell adhesion and anchorage-dependent growth by a new beta 1-integrin-linked protein kinase. Nature, 379, 91-96.

52. Hartshorne, D.J., Ito, M., Erdodi, F. (1998) Myosin light chain phosphatase: subunit composition, interactions and regulation, J Muscle Res Cell Motil. 19, 4, 325-341.

53. Hashimoto, Y., Saaki, H., Togo, M., Tsukamoto, K., Horie, Y., Fukata, H., Watanabe, Т., Kurokawa, K. (1994) Roles of myosin light chain kinase in platelet shape change and aggregation. Biochim. Biophys. Acta, 1223, 163-169.

54. Helfman, D.M., Pawlak, G. (2005) Myosin light chain kinase and acto-myosin contractility modulate activation of the ERK cascade downstream of oncogenic Ras. J Cell Biochem. 95,5,1069-1080.

55. Herman, I.M. (1993) Actin isoforms. Curr Opin Cell Biol, 1, 48-55.

56. Herrera, A.M., McParland, B.E., Bienkowska, A., Tait, R., Pare, P.D., Seow, C.Y. (2005) "Sarcomeres" of smooth muscle: functional characteristics and ultrastructural evidence,.J Cell Sci. 118, 11,2381 -2392.

57. Herring, B. P., Lyons, G. E., Hoggatt, A. M., Gallagher, P. J. (2001) Telokin expression is restricted to smooth muscle tissues during mouse development. Am. J. Physiol. Cell. Physiol., 280, 12-21.

58. Herring, B. P., Smith, A. F. (1996) Telokin expression is mediated by a smooth muscle cell-specific promoter. Am. J. Physiol., 270, C1656-C1665.

59. Holden, H. M., Ito, N., Hartshorne, D. J., Rayment, I. (1992) X-ray structure determination of telokin, the C-terminal domain light chain kinase, at 2.8 A resolution. J. Mol. Biol., 259, 11639-11642.

60. Holmes, K.C., Popp, D, Gebhard, W., Kabsch, W. (1990) Atomic model of the actin filament, Nature, 347, 44 49.

61. Honer, В., Citi, S., Kendrick-Jones, J., Jockusch, B.M. (1988) Modulation of cellular morphology and locomotory activity by antibodies against myosin, J Cell Biol, 107, 21812189.

62. Howard, J. (1997) Molecular motors: structural adaptations to cellular functions. Nature, 389, 561-567.

63. Iizuka, K, Ikebe, M, Somlyo, A.V., Somlyo, A.P. (1994) Introduction of high molecular weight (IgG) proteins into receptor coupled, permeabilized smooth muscle. Cell Calcium, 16,431-445.

64. Ikebe, M., Inagaki, M., Kanamaru, K., Hidaka, H. (1985) Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by Ca2+-activated, phospholipid-dependent protein kinase. J Biol Chem., 260, 4547-4550.

65. Ikebe, M., Inagaki, M., Naka, M., Hidaka, H. (1988) Correlation of conformation and phosphorylation and dephosphorylation of smooth muscle myosin. J Biol Chem., 263, 10698-10704.

66. Ikebe, M., Koretz, J., Hartshorne, D.J. (1988) Effects of phosphorylation of light chain residues threonine 18 and serine 19 on the properties and conformation of smooth muscle myosin. J Biol Chem, 263, 6432-6437.

67. Ю. Ikebe, M., Reardon, S. (1990) Phosphorylation of smooth myosin light chain kinase by smooth muscle Ca2+/calmodulin-dependent multifunctional protein kinase. J Biol Chem., 265, 8975-8978.

68. H. Ito, M., Dabrowska, R, Guerriero, V. Jr., Hartshorne, D.J. (1989) Identification in turkey gizzard of an acidic protein related to the C-terminal portion of smooth muscle myosin light chain kinase. J Biol Chem. 264, 13971-13974.

69. Ito, M., Nakano, Т., Erdodi, F., Hartshorne, D.J. (2004) Myosin phosphatase: structure, regulation and function, Mol Cell Biochem. 259(1-2), 197-209.

70. S3. Itoh, K., Yoshioka, K., Akedo, H., Uehata, M„ Ishizaki, Т., Narumiya, S. (1999) An essential part for Rho-associated kinase in the transcellular invasion of tumor cells. Nat Med. 5(2), 221-225.

71. Johnson, D., Cohen, P., Chen, M.X., Chen, Y.H., Cohen, P.T. (1997) Identification of the regions on the Ml 10 subunit of protein phosphatase 1M that interact with the M21 subunit and with myosin. Eur J Biochem. 244, 931-939.

72. Kamm, K.E., Stull, J.T. (1985) Myosin phosphorylation, force, and maximal shortening velocity in neurally stimulated tracheal smooth muscle. Am J Physiol., 249, 238-247.

73. Kasturi, R., Vasulka, C., Johnson, J.D. (1993) Ca2+, caldesmon, and myosin light chain kinase exchange with calmodulin. J Biol Chem., 268, 7958-7964.

74. Katoh, K., Kano, Y„ Amano, M., Kaibuchi, K., Fujiwara, K. (2001) Stress fiber organization regulated by MLCK and Rho-kinase in cultured human fibroblasts, Am J Physiol Cell Physiol, 280, 1669-1679.

75. Katoh, K., Kano, Y., Masuda, M., Onishi, H., Fujiwara, K. (1998) Isolation and contraction of the stress fibers. Mol Biol Cell, 7,1919-1938

76. Katoh, T, Morita, F. (1995) The effect of cross-linking of the two heads of porcine aorta smooth muscle myosin on its conformation and enzymic activity. Eur J Biochem, 233(1), 123-131.

77. Kawabata, S., Usukura, J., Morone, N., Ito, M., Iwamatsu, A., Kaibuchi, K., Amano, M. (2004) Interaction of Rho-kinase with myosin II at stress fibers. Genes Cells, 9, 1, 653 -650.

78. Kawai, Т., Matsumoto, M., Takeda, K., Sanjo, H., Akira, S. (1998). ZIP kinase, a novel serine/threonine kinase that mediates apoptosis. Mol Cell Biol. 18, 3, 1642- 1651.

79. Kelley, C.A., Takahashi, M., Yu, J.H., Adelstein, R.S. (1993) An insert of seven amino acids confers functional differences between smooth muscle myosins from the intestines and vasculature. J. Biol. Chem., 268, 7958 7964.

80. H. Khatri, J.J., Joyce, K.M., Brozovich, F.V., Fisher, S.A. (2001) Role of myosin phosphatase isoforms in cGMP-mediated smooth muscle relaxation. J Biol Chem, 276, 40, 3725037257.

81. Kim, K.Y., Kovacs, M., Kawamoto, S., Sellers, J.R., Adelstein, R.S. (2005) Desease-associated mutations and alternative splicing after the enzymatic and motile activity of non-muscle myosins II В and IIC. J. Biol. Chem, 280, 24, 22769-22775.

82. King, G.G., Pare, P.D., Seow, C.Y. (1999) The mechanics of exaggerated airway narrowing in asthma: the role of smooth muscle. Respir Physiol, 118, 1,1 -13.

83. Kitazawa, Т., Takizawa, N., Ikebe, M., Eto, M. (1999) Reconstitution of protein kinase C-induced contractile Ca2+ sensitization in triton Х-100-demembranated rabbit arterial smooth muscle. J Physiol, 520, 1,139-152.

84. Komatsu, S., Ikebe, M. (2004) ZIP kinase is responsible for the phosphorylation of myosin II and necessary for cell motility in mammalian fibroblasts, J Cell Biol, 165, 2, 243-254.

85. Krymsky, M. A., Kudryashov, D. S., Shirinsky, V. P., Lukas, T. J., Watterson, D. M., Vorotnikov, A. V. (2001) Phosphorylation of kinase-related protein (telokin) in tonic and phasic smooth muscles. J. Muscle Res. Cell. Motil., 22, 425-437.

86. Kuo, K.H., Herrera, A.M., Wang, L., Pare, P.D., Ford, L.E., Stephens, N.L., Seow, C.Y. (2003). Structure-function correlation in airway smooth muscle adapted to different lengths. Am J Physiol Cell Physiol., 285, 2, 384-390.

87. Kureishi, Y., Ito, M., Feng, J., Okinaka, Т., Isaka, N., Nakano, T.(1999) Regulation of Ca2+-independent smooth muscle contraction by alternative staurosporine-sensitive kinase. Eur J Pharmacol, 376, 3, 315-320.

88. Laemmli, U. K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227, 12257-12260.

89. Laudanna, С, Campbell, J.J., Butcher, E.C. (1996) Role of Rho in chemoattractant-activated leukocyte adhesion through integrins. Science, 271, 981-983.

90. Lauffenburger, D.A., Horwitz, A.F. (1996) Cell migration: a physically integrated molecular process. Cell, 9, 84, 359-369.

91. Lee, M.R., Li, L., Kitazawa, T. (1997) Cyclic GMP causes Ca2+ desensitization in vascular smooth muscle by activating the myosin light chain phosphatase. J Biol Chem, 272, 50635068.

92. Lehman, W., Craig, R., Vibert, P., Barany, M. (1996) Actin and structure of smooth muscle thin filaments. Biochem of Muscle Contr., 47 60, Acad. Press.

93. Leung, Т., Chen, X.Q., Manser, E., Lim, L. (1996) The pl60 RhoA-binding kinase ROK alpha is a member of a kinase family and is involved in the reorganization of the cytoskeleton. Mol Cell Biol. 16,10, 5313 5327.

94. Li, Z.H., Spektor, A., Varlamova, O., Bresnick, A.R. (2003) Mtsl regulates the assembly of nonmuscle myosin-IIA. Biochemistry, 42, 14258 14266.

95. Limouze, J., Straight, A.F., Mitchison, Т., Sellers, J.R. (2004) Specificity of blebbistatin, an inhibitor of myosin II. J Muscle Res Cell Motil, 25, 4-5, 337-341.

96. MacDonald, J.A., Eto, M., Borman, M.A., Brautigan, D.L., Haystead, T.A. (2001). Dual Ser and Thr phosphorylation of CPI-17, an inhibitor of myosin phosphatase, by MYPT-associated kinase. FEBS Lett, 493,2-3, 91-94.

97. Machevsky, L.M., Borners, M (2003) Cell structure and dynamics, Curr Opin in Cell Biol, 15,2-5.

98. Madaule, P., Eda, M., Watanabe, N., Fujisawa, K., Matsuoka, Т., Bito, H., Ishizaki, Т., Narumiya, S. (1998) Role of citron kinase as a target of the small GTPase Rho in cytokinesis, Nature, 394, 491-494.

99. Margossian, S.S., Lowey, S. (1982). Preparation of myosin and its subfragments from rabbit skeletal muscle. Methods Enzymol, 85B, 55-71.

100. Marston, S.B., Fraser, I.D., Huber, P.A., Pritchard, K., Gusev, N.B., Torek, K.(1994) Location of two contact sites between human smooth muscle caldesmon and Ca(2+)-calmodulin., J Biol Chem. 269, 11, 8134-8139.

101. Marston, S.B., Fraser, I.D., Huber, P.A. (1994) Smooth muscle caldesmon controls the strong binding interaction between actin-tropomyosin and myosin, J Biol Chem. 269, 32104- 32109.

102. Masato, Т., Numata, Т., Katoh, Т., Morita F., Yazawa, M. (1997) Crosslinking of telokin to chicken gizzard smooth muscle myosin. JBiochem (Tokyo), 121, 2, 225-230.

103. Matsumura, F. (2005) Regulation of myosin II during cytokinesis in higher eukaryotes, Trends. Cell. Biol., 15, 7, 371-377.

104. Matsumura, F., Ono, S., Yamakita, Y., Totsukawa, G., Yamashiro, S. (1998) Specific localization of serine 19 phosphorylated myosin II during cell locomotion and mitosis of cultured cells. J Cell Biol. 140(1), 119-129.

105. Meisheri, K.D., Ruegg, J.C. (1983) Dependence of cyclic-AMP induced relaxation on Ca2+ and calmodulin in skinned smooth muscle of guinea pig Taenia coli. Pflugers Arch, 399,4,315-320.

106. Meshel, A.S., Wei, Q., Adelstein, R.S., Sheetz, M.P. (2005). Basic mechanism of three-dimensional collagen fibre transport by fibroblasts. Nat Cell Biol., 1, 2,157-164.

107. Mitchinson, T.J., Cramer, A.L. (1996) Actin-based cell motility and cell locomotion. Cell. 84,3,371-379.

108. Nakayama, M., Amano, M., Katsumi, A., Kaneko, Т., Kawabata, S., Takefuji, M., Kaibuchi, K. (2005) Rho-kinase and myosin II activities are required for cell type and environment specific migration. Genes Cells, 10, 2, 107-117.

109. Nieznanski, K., Sobieszek, A. (1997) Telokin (kinase-related protein) modulates the oligomeric state of smooth-muscle myosin light-chain kinase and its interaction with myosin filaments. Biochem J, 322, 65-71

110. Niggli, V. (1999) Rho-kinase in human neutrophils: a role in signalling for myosin light chain phosphorylation and cell migration. FEBS Lett., 445, 1, 69-72

111. Niiro, N., Ikebe, M. (2001) Zipper-interacting protein kinase induces Ca (2+)-free smooth muscle contraction via myosin light chain phosphorylation. J Biol Chem., 276, 31, 2956729574.

112. Nishikawa, M., Shirakawa, S., Adelstein, R.S. (1985) Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by protein kinase C. Comparative study of the phosphorylated sites. J. Biol. Chem, 260, 8429-8436.

113. Nobes, C.D., Hal,l A. (1995) Rho, rac and cdc42 GTPases: regulators of actin structures, cell adhesion and motility. Biochem Soc Trans., 3, 456-459.

114. Okagaki, Т., Nakamura. A., Suzuki, Т., Ohmi, K., Kohama, K. (2000). Assembly of smooth muscle myosin by the 38k protein, a homologue of a subunit of pre-mRNA splicing factor-2. J Cell Biol, 148, 4, 653-663.

115. Palecek, S., Lauffenburger, D.A., and Horwitz, A.F. (1996) Integrin fates in the uropod of migrating fibroblasts. J.Cell.Sci., 12, 7, 1174 -1188.

116. Parsons, J.T., Martin, K.H., Slack, J.K., Taylor, J.M., Weed, S.A. (2000) Focal adhesion kinase: a regulator of focal adhesion dynamics and cell movement. Oncogene, 19, 49, 5606-13.

117. Persechini, A., Hartshorne, D.J. (1981) Phosphorylation of smooth muscle myosin: evidence for cooperativity between the myosin heads. Science, 213, 1383-1385.

118. Pfitzer, G. (1996) Penneabilized smooth muscle, In: Biochemistry of Smooth Muscle Contraction (Stephens, N.L., ed), CRS Press, Boca Raton, FL, 112-135.

119. Pfitzer, G. (2001) Invited review: regulation of myosin phosphorylation in smooth muscle. JAppl Physiol, 91, 1, 497-503.

120. Pfitzer, G., Hofmann, F„ DiSalvo, J., Ruegg, J.C. (1984) cGMP and cAMP inhibit tension development in skinned coronary arteries. Pflugers Arch. 401, 3, 277-280.

121. Pfitzer, G., Ruegg, J.C., Zimmer, M., Hofmann, F. (1985) Relaxation of skinned coronary arteries depends on the relative concentrations of Ca2+, calmodulin and active cAMP-dependent protein kinase. Pflugers Arch, 405, 1, 70-76.

122. Pfitzer, G., Zeugner, C., Troschka, M„ Chalovich, J.M. (1993) Caldesmon and a 20-kDa actin-binding fragment of caldesmon inhibit tension development in skinned gizzard muscle fiber bundles. Proc Natl Acad Sci USA. 90, 13, 5904-5908.

123. Pollard, T.D., and Cooper J.A. (1985) Actin and actin-binding proteins: a critical evaluation of mechanisms and functions. Annu.Rev.Biochem., 55, 987 -1035.

124. Post, P.L., DeBiasio, R.L., Taylor, D.L. (1995) A fluorescent protein biosensor of myosin II regulatory light chain phosphorylation reports a gradient of phosphorylated myosin II in migrating cells. Mol Biol Cell, 6, 12, 1755-1768.

125. Reisler, E. (1993) Actin molecular structure and function. Curr Opin Cell Biol. 5,1, 41-47.

126. Ridley, A.J. (2001) Rho GTPases and cell migration., J Cell Sci., 15, 2713-2722.

127. Rosenbluth, J. (1965) Smooth muscle: an ultrastructural basis for the dynamic of its contraction. Science. 4, 148, 1337-1339.

128. Rosenfeld, S.S., Xing, J., Chen, L.Q., Sweeney, H.L. (2003) Myosin lib is unconventionally conventional. J Biol Chem, 278, 30, 27449-27455.

129. Rottner, K., Hall, A., Small, J.V. (1999) Interplay between Rac and Rho in the control of substrate contact dynamics., Curr Biol, 9, 12, 640-648.

130. Rovner, A.S., Fagnant, P.M., Trybus, K.M. (2006) Phosphorylation of a single head of smooth muscle myosin activates the whole molecule. Biochemistry. 45, 16, 5280-5289

131. Ruppel, K.M., Spudich, J.A. (1996) Structure-function studies of the myosin motor domain: importance of the 50-kDa cleft. Mol Biol Cell, 7, 7, 1123-1136.

132. Rusconi, F., Potier, M.C., Le Caer, J.P., Schmitter, J.M., Rossier, J. (1997) Characterization of the chicken telokin heterogeneity by time-of-flight mass spectrometry. Biochemistry, 36, 36,11021-11026.

133. Sahai, E., Ishizaki, Т., Narumiya, S., Treisman, R. (1999) Transformation mediated by RhoA requires activity of ROCK kinases., Curr Biol. 9, 3, 136-145.

134. Saitoh, M., Ishikawa, Т., Matsushima, S., Naka, M., Hidaka, H. (1987) Selective inhibition of catalytic activity of smooth muscle myosin light chain kinase. J Biol Chem. 262, 16, 7796-7801.

135. Sellers, J.R. (1991) Regulation of cytoplasmic and smooth muscle myosin. Curr Opin Cell Biol 3, 98-104.

136. Sellers, J.R., Adelstein, R.S. (1985) The mechanism of regulation of smooth muscle myosin by phosphorylation. Curr Top Cell Regul, 27, 51-62.

137. Sellers, J.R., Adelstein, R.S. (1987). Regulation of Contractile Activity. In The Enzymes, vol. 18, ed. Boyer, P. D. & Krebs, E. G., 381-395. Academic Press Inc., Orlando, FL, USA.

138. Sambrook, J., Fritsch, E.F., Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning. A Laboratory manual., 1.74-1.82.

139. Seow, C.Y. (2005) Myosin filament assembly in an ever-changing myofilament lattice of smooth muscle. Am J Physiol Cell Physiol. 289, 6,1363-1368.

140. Schmidt, C.E., Chen, Т., and Lauffenburger, D.A. (1994) Simulation of integrin-cytoskeletal interactions in migrating fibroblasts. Biophys. J., 67, 461 474.

141. Silver, D.L., Vorotnikov, A.V., Watterson, D.M., Shirinsky, V.P., Sellers, J.R. (1997) Sites of interaction between kinase-related protein and smooth muscle myosin. J Biol Chem. 272, 40, 25353-25359.

142. Small, J.V. (1977) Studies on isolated smooth muscle cells: The contractile apparatus. J Cell Sci. 24,327-349.

143. Small, J.V., Geiger, В., Kaverina, I., Bershadsky, A. (2002) How do microtubules guide migrating cells. Nat Rev Mol Cell Biol, 12, 957-964.

144. Small, J.V., Herzog, M., Barth, M., Draeger, A. (1990) Supercontracted state of vertebrate smooth muscle cell fragments reveals myofilament lengths. J Cell Biol. 111,6, 2451-2461.

145. Sobiezhek, A. (2005) Vectorial activation of smooth muscle myosin filaments and its modulation by telokin. Can J Physiol Pharmacol, 83, 10, 899 -912.

146. Sobieszek, A., Andruchov, O.Y., Nieznanski, K. (1997) Kinase-related protein (telokin) is phosphorylated by smooth-muscle myosin light-chain kinase and modulates the kinase activity. J. Biochem., 328, 425-430.

147. Somlyo, A.P., Somlyo, A.V. (1994) Signal transduction and regulation in smooth muscle, Nature, 372, 231-236.

148. Somlyo, A.P., Somlyo, A.V. (2003) Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase, Physiol Rev., 83(4), 1325-1358.

149. Somlyo, A.V., Bradshaw, D., Ramos, S., Murphy, C., Myers, C.E., Somlyo. A.P. (2000) Rho-kinase inhibitor retards migration and in vivo dissemination of human prostate cancer cells, Biochem. Biophys. Res. Commun. 269, 652-659.

150. Somlyo, A.V., Butler, T.M., Bond, M., Somlyo, A.P. (1981) Myosin filaments have non-phosphorylated light chains in relaxed smooth muscle. Nature, 294, 567-569.

151. Stull, J.T., Tansey, M.G., Tang, D.-C, Word, R.A., Kamm, K.E., and Tang, D.C.(1993) Phosphorylation of myosin light chain kinase: a cellular mechanism for Ca2+-desensitization. Mol. Cell.Biochem., 127/128, 229-237.

152. Suzuki, H., Onishi, H., Takahashi, K., Watanabe, S. (1978) Structure and function of chicken gizzard myosin, J Biochem (Tokyo), 84, 6, 1529-1542.

153. Takai, Y., Sasaki, Т., Tanaka, K., Nakanishi, H. (1995) Rho as a regulator of the cytoskeleton. Trends Biochem Sci, 20, 6, 227-231.

154. Takizawa, N., Schmidt, D.J., Mabuchi, K„ Villa-Moruzzi, E., Tuft, R.A., Ikebe, M. (2003) M20, the small subunit of PP1M, binds to microtubules. Am J Physiol Cell Physiol, 284, 250-262.

155. Tamaoki, T. (1991) Use and specificity of staurosporine, UCN-01, and calphostin С as protein kinase inhibitors. Methods Enzymol, 201, 340-347.

156. Tan, I., Cheong, A., Lim, L., Leung, T. (2003) Genomic organization of human myotonic dystrophy kinase-related Cdc 42- binding kinase alpha reveals multiple alternative splicing and functional diversity. Gene, 304,107 -115.

157. Tessier, D.J., Komalavilas, P., Panitch, A., Joshi, L., Brophy, C.M. (2003) The small heat shock protein (HSP) 20 is dynamically associated with the actin cross-linking protein actinin. J Surg Res. Ill, 1, 152-157.

158. Totsukawa, G., Wu, Y., Sasaki, Y., Hartshorne, D.J., Yamakita, Y., Yamashiro, S.,

159. Matsumura, F. (2004) Distinct roles of MLCK and ROCK in the regulation of membrane protrusions and focal adhesion dynamics during cell migration of fibroblasts. J Cell Biol., 164,3,427-439.

160. Towbin, H., Staehlin, Т., Gordon, J. (1979) Electrophoretic transfer of proteins from polyacrileamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl, acad. Sci. U. S. A., 76, 4350-4354.

161. Trybus, K.M. (1991) Regulation of smooth muscle myosin. Cell Motil Cytoskeleton., 18, 2, 81-85.

162. Trybus, K.M. (1996) Myosin regulation and assembly. In: Barany K. and Barany M., editors. Biochemistry of smooth muscle contraction. NY: Acad. Press. 1996, 37-46.

163. Trybus, K.M., Huiatt, T.W., Lowey, S. (1982) A bent monomeric conformation of myosin from smooth muscle. Proc Natl Acad Sci USA. 79, 20, 6151-6155

164. Van Aelst, L., D'Souza-Schorey, C. (1997) Rho GTPases and signaling networks. Genes Dev., 11, 18,2295-3222.

165. Verin, A.D., Gilbert-McClain, L.I., Patterson, C.E., Garcia, J.G. (1998) Biochemical regulation of the nonmuscle myosin light chain kinase isoform in bovine endothelium. Am JRespir Cell Mol Biol. 19, 5, 767-769.

166. Verin, A.D., Lazar, V., Torry, R.J, Labarrere, C.A„ Patterson, C.E, Garcia, J.G. (1998) Expression of a novel high molecular-weight myosin light chain kinase in endothelium. Am JRespir Cell Mol Biol. 19, 5, 758-766.

167. Verkhovsky, A.B, Borisy, G.G. (1993) Non-sarcomeric mode of myosin II organization in the fibroblast lamellum. J Cell Biol., 123, 3,637-652.

168. Verkhovsky, A.B, Svitkina, T.M, Borisy, G.G. (1995) Myosin II filament assemblies in the active lamella of fibroblasts: their morphogenesis and role in the formation of actin filament bundles. J Cell Biol. 131,4, 989-1002.

169. Vorotnikov, A.V. (1997) Kinase-related protein: a smooth muscle myosin-binding protein. Int J Biochem Cell Biol. 29, 5, 727-730.

170. Watterson, D.M, Collinge, M, Lukas, T.J, Van Eldik. L.J, Birukov, K.G, Stepanova, ON., Shirinsky, V.P. (1995) Multiple gene products are produced from a novel protein kinase transcription region, FEBS Lett., 373, 3, 217-220.

171. Wessels, D., Murray, J., Jung, G., Hammer, J.A., Soil, D.R. (1991) Myosin IB null mutants of Dictyostelium exhibit abnormalities in motility. Cell. Motil.Cytoskeleton, 20, 301 -315.

172. Wilkinson, S., Paterson, H.F., Marshall, C.J.(2005)Cde42-MRCK and Rho-ROCK signalling cooperate in myosin phosphorylation and cell invasion. Nat Cell Biol, 7, 3, 255261.

173. Wilson, D.P., Sutherland, C., Borman, M.A., Deng, J.T., Macdonald, J.A., Walsh, M.P. (2005) Integrin-linked kinase is responsible for Ca2+-independent myosin diphosphorylation and contraction of vascular smooth muscle. Biochem J., 392, 641-648.

174. Wirth, A., Schroeter, M., Kock-Hauser, C., Manser, E., Chalovich, J.M., De Lanerolle, P., Pfitzer, G. (2003) Inhibition of contraction and myosin light chain phosphorylation in guinea-pig smooth muscle by p21-activated kinase 1, J Physiol, 549, 489-500.

175. Wu, X., Haystead, T. A. J., Nakamoto, R. K., Somlyo, A. V., Somlyo, A. P. (1998) Acceleration of myosin light chain dephosphorylation and relaxation of smooth muscle by telokin. J. Biol. Chem., 273,11362-11369.

176. Xia, D., Stull, J.T., Kamm, K.E. (2005) Myosin phosphatase targeting subunit 1 affects cell migration by regulating myosin phosphorylation and actin assembly. Exp Cell Res. 304, 2, 506-517.

177. Мне бы хотелось поблагодарить всех преподавателей кафедры Биохимии биологического факультета МГУ и заведующего кафедрой профессора Николая Борисовича Гусева за полученное мною образование.

178. И, в заключении, мне бы хотелось выразить благодарность своей семье моим родителям и мужу за понимание, терпение и веру в мои силы.