Анализ баланса оппозитных цитокинов, ассоциированных с рецепторами врожденного иммунитета, у больных с острыми патологическими состояниями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Греченко, Вячеслав Владимирович

• Греченко, Вячеслав Владимирович
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Греченко, Вячеслав Владимирович

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. То11-подобные рецепторы, общие сведения.

1.2. Сигнальные пути То11-подобных рецепторов.

1.3. Эндогенные лиганды То11-подобных рецепторов.

1.3.1. Белки теплового шока.

1.3.2. Фибриноген.

1.3.3. Экстра домен А фибронектина.

1.3.4. Гепаран-сульфат.

1.3.5. Гиалуронат.

1.3.6. Белок HMGB1.

1.4. Роль эндогенных лигандов То11-подобных рецепторов в развитии патологии.

1.5. Роль баланса про- и противовоспалительных цитокинов при патологии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Клиническая характеристика обследованных больных.

2.3. Реактивы.

2.4. Выделение сыворотки крови.

2.5. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови человека.

2.6. Культивирование МНК периферической крови человека.

2.7. Оценка влияния лорноксикама на выработку цитокинов МНК периферической крови здоровых доноров in vitro.

2.8. Определение концентрации цитокинов в сыворотках и культуральных супернатантах методом иммуноферментного анализа.

2.9. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Разработка дизайна исследования.

3.2. Изучение выработки про- и противовоспалительных цитокинов МНК периферической крови больных ОДП в динамике.

3.2.1. Оценка спонтанной и индуцированной лигандами ТЬЯ продукции ФНОа МНК здоровых доноров и больных ОДП в динамике.

3.2.2. Оценка спонтанной и индуцированной лигандами ТЫ1 продукции ИЛ-6 МНК здоровых доноров и больных ОДП в динамике.

3.2.3. Оценка спонтанной и индуцированной лигандами ТЬЫ продукции ИЛ-8 МНК здоровых доноров и больных ОДП в динамике.

3.2.4. Оценка спонтанной и индуцированной лигандами ТЫ1 продукции ИЛ-10 МНК здоровых доноров и больных ОДП в динамике.

3.3. Изучение продукции про- и противовоспалительных цитокинов МНК периферической крови больных с различным течением ОДП.

3.3.1. Оценка продукции ИЛ-6 МНК периферической крови больных с разным течением ОДП.

3.3.2. Оценка продукции ИЛ-8 МНК периферической крови больных с разным течением ОДП.

3.3.3. Оценка продукции ИЛ-10 МНК периферической крови больных с разным течением ОДП.

3.4. Оценка баланса цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови больных с разным течением ОДП в динамике.

3.4.1 Оценка баланса цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови, здоровых доноров.

3.4.2 Оценка баланса цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови, у больных I группы в динамике ОДП.

3.4.3 Оценка баланса цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови, у больных II группы в динамике ОДП.

3.4.4 Сравнение баланса цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови, у больных I и II групп в динамике ОДП.

3.5 Исследование возможности коррекции цитокинового профиля с помощью нестероидного противовоспалительного средства лорноксикам.

3.5.1 Влияние лорноксикама на опосредованную TLR 1/2 и TLR 4 выработку про- и противовоспалительных цитокинов in vitro.

3.5.2 Влияние лорноксикама на продукцию про- и противовоспалительных цитокинов МНК периферической крови пациентов с ОДП в динамике.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ баланса оппозитных цитокинов, ассоциированных с рецепторами врожденного иммунитета, у больных с острыми патологическими состояниями»

Актуальность темы исследования

На сегодняшний день изучение системы врожденного иммунитета и, в частности, группы То11-подобных рецепторов (TLR) является актуальным и одним из наиболее перспективных направлений современной иммунологии. Известно, что TLR осуществляют распознавание молекулярных паттернов, ассоциированных с различными патогенными микроорганизмами (Pathogen-Associated Molecular Patterns - РАМР), запуская, таким образом, эффекторные механизмы врожденного иммунитета [27]. Активация TLR обуславливает экспрессию множества генов хемокинов и провоспалительных цитокинов. Помимо цитокинов, усиливается экспрессия молекул адгезии, противомикробных пептидов^ белков острой фазы воспаления, NO-синтазы, циклооксигеназы. Все это приводит к развитию воспалительной реакции [5].

Кроме того, в настоящее время известно, что помимо бактериальных и вирусных компонентов, TLR могут распознавать и эндогенные молекулы, появляющиеся при повреждении тканей, т.е. молекулярные паттерны, ассоциированные с повреждением (Damage-Associated Molecular Patterns -DAMP). За счет этого происходит вовлечение системы врожденного иммунитета в асептическое воспаление, удаление некротических масс и, впоследствии, восстановление поврежденной ткани [27, 40]. Однако, изменение активности TLR, в частности, чрезмерная продукция провоспалительных цитокинов, приводящая к усилению воспалительного ответа, может становиться повреждающим фактором, вовлекаясь тем самым в патогенез основного заболевания [6]. Установлено участие TLR в патогенезе множества воспалительных и аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, сепсис, системная красная волчанка, атеросклероз и инфаркт миокарда [40, 77].

Острый деструктивный панкреатит (ОДП) - заболевание, в основе которого лежит повреждение ткани поджелудочной железы, сопровождающееся воспалительной реакцией, приобретающей в той или иной степени системный характер, которая зачастую может приводить к полиорганной недостаточности [83, 173]. Этим объясняется высокий уровень смертности, составляющий более 10% в начальный период заболевания. В таких случаях очень важна возможность раннего прогноза течения острого деструктивного панкреатита, которая может дать преимущества при лечении заболевания.

В настоящее время имеется достаточно работ, посвященных изучению уровня провоспалительных цитокинов при ОДП. Установлено, что ведущую роль в патогенезе играют такие провоспалительные цитокины как ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8 и ФНОа, именно их гиперпродукция («цитокиновый шторм») на первой неделе заболевания может привести к развитию системной воспалительной реакции [83, 100]. При этом повышение уровня ИЛ-6 и ИЛ-8 тесно коррелирует с тяжестью заболевания. Известно, что продукция этих цитокинов ассоциирована с активацией ТЬЯ [51].

Однако до настоящего времени роль функциональной активности ТЬЯ при ОДП изучена недостаточно. Кроме того, не встречается работ по изучению роли соотношения уровней различных провоспалительных цитокинов, а также баланса про- и противовоспалительных цитокинов при ОДП. По нашему мнению не столько уровень, сколько баланс цитокинов может определять направление течения заболевания. Также представляется актуальным изучить возможность терапевтического воздействия, направленного на коррекцию функциональной активности ТЬЯ при ОДП.

Цель исследования:

Определить выработку и баланс про- и противовоспалительных цитокинов, продуцируемых мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови больных ОДП, под действием лигандов ТЪЯ, в динамике заболевания, и оценить их прогностическую значимость.

Задачи исследования:

1) Оценить спонтанную и индуцированную лигандами ТЬЯ2 и ТЬЯ4 продукцию про- и противовоспалительных цитокинов МНК периферической крови больных ОДП, по сравнению со здоровыми донорами

2) Оценить возможные различия в цитокиновом профиле МНК периферической крови больных ОДП.

3) Разработать метод оценки баланса нескольких цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови больных ОДП, в динамике заболевания.

4) Оценить возможность прогноза течения заболевания по уровню и балансу цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови больных ОДП, на ранних сроках заболевания.

5) Исследовать возможность терапевтического воздействия, направленного на коррекцию функциональной активности ТЬЯ при ОДП.

Научная новизна работы.

Впервые получен профиль спонтанной и индуцированной лигандами ТЬЯ2 и ТЬЯ4 продукции провоспалительных (ФНОа, ИЛ-6, ИЛ-8) и противовоспалительных (ИЛ-10) цитокинов в культуре МНК периферической крови больных ОДП в динамике заболевания, установлена его связь с течением заболевания. На основе разработанного нами способа оценки баланса цитокинов, продуцируемых МНК периферической крови, сформулированы критерии для оценки прогноза течения ОДП.

В опытах in vitro установлено, что нестероидное противовоспалительное средство лорноксикам подавляет индуцированную лигандами TLR продукцию исследуемых цитокинов. Выявлена возможность коррекции спонтанной и индуцированной лигандами TLR продукции МНК периферической к ови больных ОДП провоспалительных цитокинов (преимущественно ФНОа и ИЛ-6) с помощью лорноксикама. Тяжесть течения и исход острого панкреатита зависят от смещения баланса цитокинов, индуцируемых через рецепторы врожденного иммунитета, фармакологическая коррекция позволяет изменять соотношения цитокинов, улучшая течение заболевания.

Практическая значимость.

Выявленные изменения в соотношении продукции цитокинов на ранних сроках заболевания у больных с различным клиническим течением острого деструктивного панкреатита могут служить прогностическим критерием течения заболевания. Показано, что подавление выработки провоспалительных цитокинов при использовании лорноксикама на ранней стадии улучшает течение заболевания.

Положения, выносимые на защиту:

1. Профиль цитокинов, продуцируемых мононуклеарными клетками периферической крови больных острым деструктивным панкреатитом, коррелирует с клиническим течением заболевания.

2. Баланс между ИЛ-6 и ИЛ-8 может служить прогностическим критерием течения и исхода острого деструктивного панкреатита на ранних сроках заболевания.

3. Коррекция профиля и баланса цитокинов позволяет изменять течение острого деструктивного панкреатита, направляя его в более благоприятную сторону.

Апробация результатов диссертационной работы

Диссертация апробирована на совместной научной конференции кафедры иммунологии, кафедры экспериментальной и клинической хирургии и отдела иммунологии ГБОУ ВПО "РНИМУ им Н.И. Пирогова" от 05 апреля 2011 года.

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на научных заседаниях кафедры иммунологии и отдела иммунологии ГБОУ ВПО "РНИМУ им. Н.И. Пирогова" МЗСР РФ, на Международной Пироговской Конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2011г.).

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 184 источников (11 отечественных и 173 зарубежных). Работа содержит 4 таблицы и 38 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Греченко, Вячеслав Владимирович

выводы

1. Изучение в динамике (1-14 сутки) профиля цитокинов (ФНОа, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10), продуцируемых мононуклеарными клетками периферической крови спонтанно и под влиянием лигандов ТЪЯ, позволило выделить среди исследуемых больных две подгруппы, клинически характеризующиеся различными сроками выздоровления.

2. Более благоприятному течению заболевания, с выздоровлением в течение 12±3 койко-дней, соответствует повышение по сравнению со здоровыми донорами индуцированной лигандами ТЬЯ выработки ИЛ-6 на 1 сутки, которая снижается к 3-м суткам заболевания. Спонтанная и индуцированная выработка ИЛ-8 в этой группе больных повышена и снижается к 14 суткам. Индуцированная лигандами ТЬЯ продукция противовоспалительного цитокина ИЛ-10 повышается к 7 суткам течения заболевания.

3. Менее благоприятное течение заболевания, с выздоровлением в течение 30±10 койко-дней, сопровождается повышением, по сравнению со здоровыми донорами, спонтанной и индуцированной лигандами ТЫ1 выработки ИЛ-6, который возрастает с 3-х суток заболевания и остается высоким на 14 сутки наблюдения. Спонтанная и индуцированная лигандами ТЫ1 продукция ИЛ-8 МНК не отличается от уровня здоровых лиц в начальный период и повышается к 3-м суткам заболевания. Индуцированная лигандами ТЪЯ продукция противовоспалительного цитокина ИЛ-10 повышается к 14 суткам заболевания.

4. У больных с более благоприятным течением заболевания баланс провоспалительных цитокинов смещен в сторону ИЛ-8, в то время как у больных с менее благоприятным течением заболевания наблюдается смещение баланса в сторону ИЛ-6.

5. Изменение баланса спонтанной выработки ИЛ-6 и ИЛ-8 на 1-3 сутки заболевания может служить прогностическим критерием течения и исхода острого деструктивного панкреатита. Оценка ФНОа не информативна в данной системе.

6. Лорноксикам оказывает подавляющее действие на выработку цитокинов, ассоциированных с TLR. В культуре in vitro наблюдается ингибирование продукции как про-, так и противовоспалительных цитокинов МНК здоровых доноров, стимулированных лигандами TLR2 и TLR4. У больных ОДП, получавших лорноксикам, наблюдается снижение спонтанной и стимулированной лигандами TLR продукции провоспалительных цитокинов МНК периферической крови, преимущественно ФНОа и ИЛ-6.

Практические рекомендации

Предложенный метод оценки баланса цитокинов целесообразно использовать на 1-3 сутки заболевания, для определения прогноза течения ОДП, с целью определения тактики ведения пациентов и подбора соответствующего метода терапии.

Тяжелым больным ОДП для снижения риска развития системной воспалительной реакции в качестве дополнительной терапии рекомендуется применение нестероидных противовоспалительных средств, в частности лорноксикама.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Греченко, Вячеслав Владимирович, 2011 год

1. Винокурова Л.В., Живаева Н.С., Царегородцева Т.М., Серова Т.И., Цитокиновый статус при хроническом панкреатите алкогольной и билиарной этиологии, Терапевтический архив, 2006, №2, с. 57-60.

2. Винокурова Л.В., Трубицына И.Е., Царегородцева Т.М., Яшина Н.И. и др., Роль нейромедиаторов и цитокинов в патогенезе хронического панкреатита алкогольной этиологии, Терапевтический архив, 2008, №2, с. 78-81.

3. Иммунология (практикум). Под редакцией Л.В. Ковальчука, Г.А. Игнатьевой, Л.В. Ганковской. Москва: «Гэотар-Медиа». 2010.

4. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C. Цитокины, СПб ФОЛИАНТ, 2008.

5. Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Варивода A.C., Кондратенко И.В., Грачева Л.А. и др. Рецепторы врожденного иммунитета: подходы к количественной и функциональной оценке То11-подобных рецепторов. Иммунология, 2008, 4, 223-227.

6. Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Варивода A.C., Константинова Е.В., Юдин A.A. и др. Роль рецепторов врожденного иммунитета вразвитии острого инфаркта миокарда. Журн. Микробиологии, 2008,4, 64-68.

7. Охлобыстин А.В., Ивашкин В.Т., Алгоритмы ведения больных острым и хроническим панкреатитом, Consilium-Medicum, 2000, Т.2, №7.

8. Савельев B.C., Филимонов М.И., Бурневич С.З. Вопросы классификации и хирургического лечения при панкреонекрозе. Анналы хирургии. 1999; 4: 34-8.

9. Савельев B.C., Филимонов М.И., Гельфанд Б.Р. и др. Острый панкреатит как проблема ургентной хирургии и интенсивной терапии Consilium-Medicum, 2000, Т.2, №9.

10. Ярилин А.А. Основы иммунологии. Москва: «ГОЭТАР-Медиа», 2010.

11. Abulafia-Lapid R., Elias D., Raz L. et al. T cell proliferative responses of type 1 diabetes patients and healthy individuals to human hsp60 and its peptides. J Autoimmun, 1999, v. 12, pp. 121-129.

12. Agresti A and Bianchi ME. HMGB proteins and gene expression. Curr Opin Genet Dev, 2003, v.13, pp.170-178.

13. Akira S., Takeda K. Toll-like receptor signalling. Nature Reviews Immunology, 2004, vol.4, 499-511.

14. Andersson A., Covacu R., Sunnemarketal D., Pivotal advance: HMGB1 expression in active lesions of human and experimental multiple sclerosis, Journal of Leukocyte Biology, vol. 84, no.5, pp.1248-1255, 2008.

15. Andersson U, Erlandsson-Harris H, Yang H and Tracey KJ. HMGB 1 as a DNA-binding cytokine. J Leukoc Biol, 2002, v.72, pp. 1084-1091.

16. Andersson U, Wang H, Palmblad K. High Mobility Group 1 Protein (HMG-1) Stimulates Proinflammatory Cytokine Synthesis in Human Monocytes. J Exp Med, 2000, v. 192, pp.565-570.

17. Asea A, Rehli M, Kabingu E et al. Novel signal transduction pathway utilized by extracellular hsp70: role of toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4. J Biol Chem, 2002, v.277, pp. 15028-15034.

18. Ashida K, Miyazaki K, Takayama E et al. Characterization of the expression of TLR2 (Toll-like receptor 2) and TLR4 on circulating monocytes in coronary artery disease. J Atheroscler Thromb, 2005, v.12, pp.53-60.

19. Aukrust P, Gullestad L, Ueland T et al. Inflammatory and antiinflammatory cytokines in chronic heart failure: potential therapeuticimplications. Annab of Medicine, 2005, v.37, pp.74-85.

20. Avdiushko M.G., Akira S., Kaplan A.M., Cohen D.A., Inhibition of interleukin-10 signaling in lung dendritic cells by toll-like receptor 4 ligands. Exp Lung Res. 2009;35(l):l-28.

21. Baillie J. Predicting and preventing post-ERCP pancreatitis. Curr Gastroenterol Rep. 2002, 4(2): 112-9.

22. Bang UC, Semb S, Nojgaard C, Bendtsen F. Pharmacological approach to acute pancreatitis. World J Gastroenterol. 2008 May 21;14(19):2968-76.

23. Basu S, Binder RJ, Ramalingam T, Srivastava PK. CD91 is a common receptor for heat shock proteins gp96, hsp90, hsp70, and calreticulin. Immunity, 2001, v. 14, pp.303-313.

24. Berg S. Hyaluronan turnover in relation to infection and sepsis. J Intern Med, 1997, v.242, pp.73-77.

25. Beutler B., Hoebe H.,Ulevitch R.J. How we detect microbes and respond to them: the Toll-like receptors and their transducers. J.Leukoc.Biol. 2003, 74: 479-485.

26. Bianchi ME. DAMPs, PAMPs and alarmins: all we need to know about danger. J Leukoc Biol. 2007, 81,1-5.

27. Biffl W, Moore E, Moore F, Peterson V. Interleukin-6 in the injured patient. Ann Surg 1996; 224:647-664.

28. Browning D.D., Diehl W.C., Hsu M., et al., Autocrine regulation of interleukine-8 production in human monocytes // Am J Phisiol Lung Cell Mol Physiol, 2000, vol. 279, p. LI 129-L1136.

29. Campbell I. D., Spitzfaden C., Building proteins with fibronectin type III modules, Structure 2, 1994, 333-337.

30. Chen X, Ji B, Han B, et al. NF-kappaB activation in pancreas induces pancreatic and systemic inflammatory response. Gastroenterology 2002, 122:448-457.

31. Chi H., Barry S.P., Roth R.J. et al. Dynamic regulation of pro- and antiinflammatory cytokines by MAPK phosphatase 1 (MKP-1) in innate immune responses. Proc Natl Acad Sci USA. 2006 14; 103(7): 2274-9.

32. Cole JE, Georgiou E, Monaco C., The expression and functions of tolllike receptors in atherosclerosis. Mediators Inflamm. 2010; ID 393946.

33. Cremer J, Martin M, Redl H, Bahrami S, Abraham C, Graeter T, Haverich A, Schlag G, Borst H-G.

34. Czura CJ and Tracey KJ. Targeting high mobility group box 1 as a late-acting mediator of inflammation. Crit Care Med, 2003, v.31, pp.S46-S50.

35. Darvill AG and Albersheim P. Phytoalexins and their elicitors: a defense against microbial infection in plants. Annu Rev Plant Physiol, 1984, v.35, pp.243-275.

36. Demols A, LeMoine O, Desalle F, Quertinmont E, Van Laethem J-L, Deviere J. CD4+ T cells play an important role in acute experimental pancreatitis in mice. Gastroenterology 2000; 118:582-590.

37. Deviere J, Le Moine O, Van Laethem JL, Eisendrath P, Ghilain A, Severs N, Cohard M. Interleukin 10 reduces the incidence of pancreatitis after therapeutic endoscopic retrograde cholangiopancreatography. Gastroenterology. 2001 Feb;120(2):498-505.

38. Dintilhac A and Bernues J. HMGB1 interacts with many apparently unrelated proteins by recognizing short amino acid sequences. J Biol Chem, 2002, v.277, pp.7021-7028.

39. Drexler S.K., Foxwell B.M. The role of toll-like receptors in chronic inflammation. Int J Biochem Cell Biol. 2010, 42(4):506-18.

40. D'Souza El-Guindy NB, de Villiers WJ, Doherty DE. Acute alcohol intake impairs lung inflammation by changing pro- and antiinflammatory mediator balance. Alcohol. 2007 Aug;41(5):335-45.

41. Dumot JA, Conwell DL, Zuccaro G Jr, Vargo JJ, Shay SS, Easley KA, Ponsky JL. A randomized, double blind study of interleukin 10 for the prevention of ERCP-induced pancreatitis. Am J Gastroenterol. 2001 Jul;96(7):2098-102.

42. Dvorak H.F., Senger D.R. Dvorak A.M., Regulation of extravascular coagulation by micro vascular permeability, Science, vol.227, no.4690, pp.1059-1061,1985.

43. Erridge C., Endogenous ligands of TLR2 and TLR4: agonists or assistants? Journal of Leukocyte Biology, 2010, vol. 87 no. 6 989-999.

44. Feingold K. R., Funk J. L., Moser A. H., Shigenaga J. K., Rapp J. H., Grunfel, C. Role for circulating lipoproteins in protection from endotoxin toxicity, Infect. Immun. 63, 2041-2046, 1995.

45. Foell D., Wittkowski H., Vogl T., Roth J., S 100 proteins expressed in phagocytes: a novel group of damage-associated molecular pattern molecules, Journal of Leukocyte Biology, vol.81, no.l, pp.28-37, 2007.

46. Frantz S, Kelly RA and Bourcier T. Role of TLR2 in the activation of nuclear factor Kb by oxidative stress in cardiac myocytes. J Biol Chem, 2000, v.276, pp.5197-5203.

47. George J, Wang SS, Sevcsik AM et al. Transforming Growth Factor-ß Initiates Wound Repair in Rat Liver through Induction of the EIIIA-Fibronectin Splice Isoform. Am J Pathol, 2000, v.156, pp.115-124.

48. Giakoustidis A., Mudan S.S., Giakoustidis D. Dissecting the stress activating signaling pathways in acute pancreatitis. Hepatogastroenterology. 2010, 57(99-100): 653-6.

49. Gondokaryono S.P., Ushio H., Niyonsabaetal F., The extra domain A of fibronectin stimulates murine mast cells via Toll-like receptor 4, Journal of Leukocyte Biology, vol. 82, no. 3, pp. 657-665, 2007.

50. Granger J, Remick D. Acute pancreatitis: models, markers, and mediators.Shock. 2005 Dec;24 Suppl 1:45-51.

51. Habich C., Kempe K., van der Zee R., Rümenapf R., Akiyama H., Kolb H., Burkart V., Heat shock protein 60: specific binding of lipopolysaccharide, J. Immunol. 174, 1298-1305, 2005.

52. Hansson GK, Libby P, Schonbeck U et al. Innate and adaptive immunity in the pathogenesis of atheroscierosis. Circ Res, 2002, v.91, pp.281-291.

53. Hartl FU, Hayer-Hartl M. Molecular chaperones in the cytosol: fromnascent chain to folded protein. Science, 2002, v.295, pp. 18521858.

54. Heimberg H, Heremans Y, Jobin C, et al. Inhibition of cytokine-induced NF-kappaB activation by adenovirus-mediated expression of a NF-kappaB super-repressor prevents beta-cell apoptosis. Diabetes 2001;50:2219-2224.

55. Hernández Cruz A, Garcia-Jimenez S, Zucatelli Mendonga R, Petricevich VL. Pro- and anti-inflammatory cytokines release in mice injected with Crotalus durissus terrificus venom. Mediators of Inflammation. 2008; 87: 49-62.

56. Hidehiro Sawa., Takashi Ueda., Yoshifumi Takeyama, Takeo Yasuda, Makoto Shinzeri et al. Role of Toll-like receptor 4 in the pathophysiology of severe acute pancreatitis in mice. Surg.Today,2007,3 7,867-873.

57. Hirata N., Yanagawa Y., Ebihara T., Seya T. et al., Selective synergy in anti-inflammatory cytokine production upon cooperated signaling via TLR4 and TLR2 in murine conventional dendritic cells. Mol Immunol. 2008, 45(10):2734-42.

58. Hollestelle SC, De Vries MR, Van Keulen JK et al. Toll- like receptor 4 is involved in outward arterial remodeling. Circulation, 2004, v. 109, pp.393-398.

59. Hoshino K., Kaisho T., Inabe T. Et al. Differential involvement of IFN-(3 in Toll-like receptor-stimulated dendritic cell activation. Int.Immunol. 2000, 14:1225-1231.

60. Ihrcke NS, Parker W, Reissner KJ and Piatt JL. Regulation of platelet heparanase during inflammation: role of pH and proteinases. J Cell Physiol, 1998, v.175, pp.255-267.

61. Imler J-L., Zheng L. Biology of Toll receptors and their transducers. J.of Leucocyte Biology.2004,75:18-26.

62. Inagaki T., Hoshino M., Hayakawa T. et al. Interleukin-6 is a useful marker for early prediction of the severity of acute pancreatitis, Pancreas. 1997, 14(1): 1-8.

63. Ishii T, Udono H, Ohta H, et al. Isolation of MHC class 1-restricted antigen peptide and its precursors associated with heat shock proteins hsp70, hsp90, and gp96. J Immunol, 1991, v.162, pp.1303-1309.

64. Jaattela M. Heat shock proteins as cellular lifeguards. Ann Med, 1999, v.31, pp.261-271.

65. Jarnagin WR, Rockey DC, Koteliansky VE et al. Expression of variant fibronectins in wound healing: cellular source and biological activity of the EIIIA segment in rat hepatic fibrogenesis. J Cell Biol, 1994, v. 127, pp.2037-2048.

66. Jerin A, Pozar-Lukanovic N, Sojar V, Stanisavljevic D, Paver-Erzen V, Osredkar J. Balance of pro- and anti-inflammatory cytokines in liver surgery. Clin Chem Lab Med. 2003 Jul;41(7):899-903.

67. Johnson G.B., Brunn G.J., Piatt J.L., Cutting edge: an endogenous pathway to systemic inflammatory response syndrome (SIRS)-like reactions through Toll-Like receptor 4, Journal of Immunology, vol. 172, no. l,pp. 20-24, 2004.

68. Johnson GB, Brunn GJ, Kodaira Y, Piatt JL. Receptor-mediated monitoring of tissue well-being via detection of soluble heparan sulfate by Toll-like receptor 4. J Immunol, 2002, v. 168, pp.5233-9.

69. Jun-Li Ding,Yuan Li, Xiang-Yu Zhou, Ling Wang, Bin Zhou et al. Potential role of the TLR signaling pathway in the pathophysiology of acute pancreatitis in mice. Inflamm.Res.,2009, 34(4):430-41.

70. Kainulainen V, Wang H, Schick C and Bernfield M. Syndecans, heparin sulfate proteoglycans, maintain the proteolytic balance of acute wound fluids. J Biol Chem, v. 273, pp.11563-11569.

71. Kaisho T.,Takeuchi O., Kawai T et al. Endotoxin-induced maturation of Myd88-deficient dendritic cells.J.Immunol.2001, 166:5688-5694.

72. Key NS, Piatt JL and Vercellotti GM. Vascular endothelial cell proteoglycans are susceptible to cleavage by neutrophils. Arterioscler Thromb, 1992, v. 12, pp.836-842.

73. Kirschning C.J., Schumann R.R. TLR2: cellular sensor for microbial and endogenous molecular patterns. Curr Top Microbiol Immunol. 2002; 270:121-44.

74. Kita M., Ohmoto Y., Hirai Y. et al. Induction of cytokines in human peripheral blood mononuclear cells by mycoplasmas h Microbiol. Immunol. 1992.Vol.36.P.507-516.

75. Kol A, Sukhova GK, Lichtman AH, Libby P. Chlamydial heat shock protein 60 localizes in human atheroma and regulates macrophage tumor necrosis factor-a and matrix metalloproteinase expression. Circulation, 1998, v.98, pp.300-307.

76. Kusske AM, Rongione AJ, Ashley SW, McFadden DW, Reber HA., Interleukin-10 prevents death in lethal necrotizing pancreatitis in mice. Surgery. 1996; 120(2): 284-8.

77. Lehrer R. I., Barton A., Daher K. A., Harwig S. S. L., Ganz T., Selsted M. E., Interaction of human defensins with Escherichia coli J. Clin. Invest. 84,553-561, 1989.

78. Li Z, Menoret A, Srivastava P. Roles of heat shock proteins in antigen presentation and cross-presentation. Curr Opin Immunol, 2002, v. 14, p.45-51.

79. Liu Z, Shen Y, Cui N, Yang J. Clinical observation of immunity for severe acute pancreatitis. Inflammation. 2011, 34(5):426-31.

80. Lohmander LS, Dahlberg L, Ryd L and Heinegard D. Increased levels of proteoglycan fragment in knee joint fluid after injury. Arthritis Rheum, 1989, v.32, pp.1434-1442.

81. Mäher J.J., DAMPs ramp up drug toxicity, Journal of Clinical Investigation, vol. 119, no. 2, pp. 246-249, 2009.

82. Marshak-Rothstein A. Rifkin I. Immunologically Active Autoantigens: The Role of Toll-Like Receptors in the Development of Chronic Inflammatory Disease. Annu. Rev. Immunol. 2007. 25: 419-41.

83. McCachrenand S.S., Lightner V.A., Expression of human tenascin in synovitis and it's regulation by interleukin-1, Arthritis and Rheumatism, vol.35, no.10, pp.1185-1196, 1992.

84. McKay C., Imrie C.W., Baxter J.N., Mononuclear phagocyte activation and acute pancreatitis. Scand J Gastroenterol Suppl. 1996; 219:32-6.

85. Medzhitov R., Janeway C. Innate immunity. The New England Journal of Medicine, 2000, august, 338-344.

86. Medzhitov R., Preston-Hurlburt P.,Janeway C.A. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity. Nature 1997, 388: 394-397.

87. Michelsen KS, Wong MH, Shah PK et al. Lack of Toll-like receptor 4 or myeloid differentiation factor 88 reduces atherosclerosis and alters plaque phenotype in mice deficient in apolipoprotein E. Proc Natl Acad Sei USA, 2004, v. 101, pp. 10679-10684.

88. Midwood K., Sacre S., Piccininietal A.M., Tenascin-C is an endogenous activator of Toll-like receptor 4 that is essential for maintaining inflammation in arthritic joint disease, Nature Medicine, vol. 15, no.7, pp.774-780, 2009.

89. Mitchell RM, Byrne MF, Baillie J. Pancreatitis. Lancet 2003; 361:1447-1455.

90. Motzkus D., Schulz-Maronde S., Heitland A., Schulz A., Forssmann W. G., Jübner M., Maronde E. The novel ß-defensin DEFB123 prevents lipopolysaccharide-mediated effects in vitro and in vivo. FASEB J. 20,1701-1702, 2006.

91. Navab M., Hough G. P., Van Lenten B. J., Berliner J. A., Fogelman A. M. Low density lipoproteins transfer bacterial lipopolysaccharides across endothelial monolayers in a biologically active form, J. Clin. Invest. 81, 601-605, 1988.

92. Nham SU. Characteristics of fibrinogen binding to the domain of CD 11c, an a subunit of pi50,95. Biochem Biophys Res Commun, 1999, v. 264, pp.630-634.

93. Noble PW, McKee CM, Cowman M and Shin HS. Hyaluronan fragments activate an NF-icB/lK-Baautoregulatory loop in murine macrophages. J Exp Me, 1996, v.183, pp.2373-2378.

94. Norman J. The role of cytokines in the pathogenesis of acute pancreatitis. Am J Surg 1998;175:76-83.

95. Novovic S., Andersen A.M., Ersboll A.K., Nielsen O.H. et al. Proinflammatory cytokines in alcohol or gallstone induced acute pancreatitis. A prospective study. Journal of Pancreas 2009; 10 (3), 256-261.

96. Ohashi K, Burkart V, Flohe S, Kolb H. Cutting edge: heat shock protein 60 is a putative endogenous ligand of the toll-like receptor-4 complex. Journal of Immunology 2000 Jan 15; 164(2):558-61.

97. Okamura Y, Watari M, Jerud ES et al. The extra domain A of fibronectin activates Toll-like receptor 4. J Biol Chem, 2001, v.276, pp. 10229-33.

98. Opal S, DePalo V. Anti-inflammatory cytokines. Chest 2000; 117:1162-1172.

99. Oragui EE, Nadel S, Kyd P and Levin M. Increased excretion of urinary glycosaminoglycans in meningococcal septicemia and their relationship to proteinuria. Crit Care Med, 2000, v.28, pp.3002-3008.

100. Osman M, Jensen S. Acute pancreatitis: The pathophysiological role of cytokines and integrins. Dig. Surg 1999;16:347-362.

101. Pande H., Thuluvath P. Pharmacological prevention of post-endoscopic retrograde cholangiopancreatography pancreatitis. Drugs. 2003; 63(17):1799-812.

102. Panjwani NN, Popova L, Srivastava PK. Heat shock protein gp96 and hsp70 activate the release of nitric oxide by APCs. J Immunol, 2002, v.168, pp.2997-3003.

103. Park JS, Svetkauskaite D, He Q et al. Involvement of Toll-like receptors 2 and 4 in cellular activation by high mobility group box 1 protein. J Biol Chem, 2004, v.279, pp.7370-7.

104. Perera PY, Mayadas TN, Takeuchi O et al. CD lib/CD 18 acts in concert with CD 14 and Toll-like receptor (TLR) 4 to elicit full lipopolysaccharide and taxol-induciblegene expression. J Immunol, 2001, v.166, pp.574-581.

105. Piccininiand A.M. Midwood K.S. DAMPening Inflammation by Modulating TLR Signalling. Mediators of Inflammation Vol. 2010, Article ID 672395.

106. Piatt JL, Dalmasso AP, Lindman BJ et al. 1991. The role of C5a and Ab in the release of heparan sulfate from endothelial cells. Eur J Immunol, 1991, v.21, pp.2887-2890.

107. Pockley AG. Heat shock protein as regulators of the immune response. Lancet, 2003, v.362, pp.469-476.

108. Res PC, Schear CG, Breedveld FC et al. Synovial fluid T cell reactivity against 65 kD heat shock protein of mycobacteria in early chronic arthritis. Lancet, 1988, v.2, pp.478-480.

109. Rongione AJ, Kusske AM, Reber HA, Ashley SW, McFadden DW. Interleukin-10 reduces circulating levels of serum cytokines in experimental pancreatitis. J Gastrointest Surg. 1997 Mar-Apr;l(2):159-65; discussion 165-6.

110. Saito S, Yamaji N, Yasunaga K et al. The Fibronectin Extra Domain A Activates Matrix Metalloproteinase Gene Expression by an Interleukin-1-dependent Mechanism J Biol Chem, 1999, v.274, pp.30756-30763.

111. Salter D.M., Tenascin is increased in cartilage and synovium from arthritic knees, British Journal of Rheumatology, vol.32, №.9, pp.780786, 1993.

112. Satoh M, Shimoda Y, Maesawa C et al. Activated toll-like receptor 4 in monocytes is associated with heart failure after acute myocardial infarction. International Journal of Cardiology, 2005, v. 31, №.8,1 pp. 180-186

113. Sawa H., Ueda T., Takeyama Y., Yasuda T., Shinzeki M., Nakajima T., t Kuroda Y., Blockade of high mobility group box-1 protein attenuatesexperimental severe acute pancreatitis, World J Gastroenterol 2006 December 21; 12(47): 7666-7670

114. Schenk S., Muser J., Vollmer G., Chiquet-Ehrismann R., Tenascin-C in serum: a questionable tumor marker, International Journal of Cancer,vol.61, no.4, pp.443-449, 1995.

115. Scott D.L., Delamere J.P., Walton K.W., The distribution of fibronectin in the pannus in rheumatoid arthritis, British Journal of Experimental Pathology, vol.62, no.4, pp.362-368, 1981.

116. Shen Y, Cui N, Miao B, Zhao E., Immune dysregulation in patients with severe acute pancreatitis. Inflammation. 2011; 34 (l):36-42.

117. Shishido T, Nozaki N, Yamaguchi S et al. Toll-like receptor-2 modulates ventricular remodeling after myocardial infarction. Circulation, 2003, v. 108, pp.2905-2910.

118. Shmarina G.V., Pukhalsky A.L., Kokarovtseva S.N. et al.,Tumor necrosis factor-alpha/interleukin-10 balance in normal and cystic fibrosis children. Mediators Inflamm. 2001, 10(4): 191-7.

119. Sitrin RG, Pan PM, Srikanth S et al. Fibrinogen activates NF-kB transcription factors in mononuclear phagocytes. J Immunol, 1998, v.161, pp.1462-1470.

120. Slogoff M.I., Ethridge R.T., Rajaraman S., Evers B.M. COX-2 inhibition results in alterations in nuclear factor (NF)-kappaB activation but not cytokine production in acute pancreatitis. J Gastrointest Surg. 2004; 8 (4), 511-519.

121. Smiley ST, King JA, Hancock WW. Fibrinogen stimulates macrophage chemokine secretion through Toll-like receptor 4. J Immunol, 2001, v.67, pp.2887-94.

122. Somersan S, Larsson M, Honteneau JFet al. Primary tumor tissue lysates are enriched in heat shock proteins and induce the maturation of human dendritic cells. J Immunol, 2001, v. 167, pp.4844-4852.

123. Srivastava PK, DeLeo AB, Old LJ. Tumor rejection antigens of chemically induced tumors of inbred mice. Proc Natl Acad Sci USA, 1986, v.83, pp.3407-3411.

124. Srivastava PK, Menoret A, Basu S et al. Heat shock proteins come of age: primitive functions acquire new roles in an adaptive world. Immunity, 1998, v.8, pp.657-665.

125. Srivastava PK. Role of heat shock proteins in innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol, 2002, v.2, pp. 185-194.

126. Stoelben E., Nagel M., Ockert D., Quintel M., Scheibenbogen C., Klein B., Saeger H.D. Clinical significance of cytokines 11-6, 11-8 and C-reactive protein in serum of patients with acute pancreatitis, Ghirurg. 1996, 67(12): 1231-6.

127. Systemic inflammatory response syndrome after cardiac operations. AnnThorac Surg, 1996, 61:1714-1720.

128. Szewezuk MR, Depew WT. Evidence for T lymphocyte reactivity to the 65 kilodalton heat-shock protein of mycobacteria in active Crohn's disease. Clin Invest Med, 1992, v.15, pp.494-505.

129. Tailor P., Tamura T., Kaisho T., Akira S., Ozato K., Induction of an anti-inflammatory cytokine, IL-10, in dendritic cells after toll-like receptor signaling. J Interferon Cytokine Res. 2006, 26(12):893-900.

130. Takeda K., Akira S. Toll-like receptors in innate immunity. International Immunology, 2005; vol.17, №1, 1-14.

131. Takeda K.,Kaisho T., Akira S. Toll-like receptors. Annu.Rev.Immunol. 2003,21:335-376.

132. Taniguchi N., Kawahara K.I., Yoneetal K., High mobility group box chromosomal protein 1 plays a role in the pathogenesis of rheumatoid arthritis as a novel cytokine, Arthritis and Rheumatism,vol.48, no:4, pp.971-981,2003.

133. Taro Kawai, Shizuo Akira. The role of pattern-recognition receptors in innate immunity: update on Toll-like receptors Nature immunology, 2010, vol. 11 № 5,373-384.

134. Termeer C, Benedix F, Sleeman J et al. Oligosaccharides of hyaluronan activate dendritic cells via Toll-like receptor 4. J Exp Med, 2002, v. 195, pp.99—111.

135. Termeer C, Hennies J, Voith U et al. 2000. Oligosaccharides of Hyaluronan are potent activators of dendritic cells. J Immunol, 2000, v.165, pp.1863-1870.

136. Tian J., Avalos A.M., Maoetal S.Y., Toll-likereceptor 9 dependent activation by DNA-containing immune complexes is mediated by HMGB1 and RAGE, Nature Immunology, vol.8, no.5, pp. 487-496, 2007.

137. Tissieres A, Mitchell HK, Tracy U. Protein synthesis in salvary glands of Drosophila melanpgaster: relation to chromosome puffs. J Mol Biol, 1974, v.84, pp.389-398.

138. Torre-Amione G, Kapadia S, Benedict C et al. Proinflammatory cytokine levels in patients with depressed left ventricular ejection fraction: a report from the Stadies of Left Ventricular Dysfunction (SOLVD). J Am Coll Cardiol, 1996, v.27, pp.1201-1206.

139. Tsan MF, Gao B. Cytokine function of heat shock proteins. Am J Physiol, 2004, v.286, pp.C739-C744.

140. Tsan MF, Gao B. Heat shock proteins and immune system. J Leukoc Biol. 2009 Jun;85(6):905-10.

141. Tsan Min-Fu, Gao Baochong. Endogenous ligands of Toll-like receptors. Journal of leukocyte Biology. 2004, 76:1-6.

142. Tsung A, Sahai R, Tanaka H, Nakao A, Fink MP, Lotze MT, Yang H, Li J, Tracey KJ, Geller DA, Billiar TR. The nuclear factor HMGB1 mediates hepatic injury after murine liver ischemia-reperfusion. J Exp Med 2005; 201: 1135-1143.

143. Udono H, Srivastava PK. Comparison of tumor-specific immunogenicities of stress-induced proteins gp96, hsp90 and hsp70. J Immunol, 1994, v.152, pp.5398-5403.

144. Ugarova TP, Solovjov DA, Zhang L et al. 1998. Identification of a novel recognition sequence for integrin (xm|32 within the y-chain of fibrinogen. J Biol Chem, 1998, v.273, pp.22519-27.

145. Urbonaviciute V., Furnrohr B.G., Meisteretal S., Induction of inflammatory and immune responses by HMGBl-nucleosome complexes: implications for the pathogenesis of SLE, Journal of Experimental Medicine, vol.205, no.13, pp. 3007-3018, 2008.

146. Urbonaviciute V., Furnrohr B.G., Weberetal C., Factors masking HMGB1 in human serum and plasma, Journal of Leukocyte Biology, vol.81, no. 1, pp. 67-74, 2007.

147. Vabulas RM, Ahmad-Nejad P, da Costa C et al. Endocytosed HSP60s use Toll-like receptor 2 (TLR2) and TLR4 to activate the Toll/interleukin-1 receptor signaling pathway in innate immune cells. J Biol Chem, 2001, v.276, pp.31332-31339.

148. Vabulas RM, Braedel S, Hilf N et al. The endoplasmic reticulum-resident heat shock protein Gp96 activates dendritic cells via the Tolllike receptor 2/4 pathway. J Biol Chem, 2002, v.:277, pp.20847-20853.

149. Walley KR, Lukacs NW, Standiford TJ, Strieter RM, Kunkel SL. Balance of inflammatory cytokines related to severity and mortality of murine sepsis. Infect Immun. 1996 Nov;64(l l):4733-8.

150. Wallin RP, Lundqvist A, More SH et al. Heat-shock proteins as activators of the innate immune system. Trends Immunol, 2002, v.23, pp.130-135.

151. Walzog B, Weinmann P, Jeblonski F et al. A role for ß2 integrins (CD11 /CD 18) in the regulation of cytokine gene expression of polymorphonuclear neutrophils during the inflammatory response. FASEB J, 1999, v. 13, pp.1855-1865.

152. Wang H, Yang H, Czura CJ et al. HMGB1 as a Late Mediator of Lethal Systemic Inflammation. Am J Respir Crit Care Med, 2001, v. 164, pp.1768-1773.

153. Wang H., Bloom O., Zhangetal M., HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice, Science,vol.285, no.5425, pp. 248-251, 1999.

154. Weber C.K., Adler G. From acinar cell damage to systemic inflammatory response: current concepts in pancreatitis. Pancreatology 2001; 1,356-362.

155. Wright, S. D., Ramos, R. A., Tobias, P. S., Ulevitch, R. J., Mathison, J. C. CD 14, a receptor for complexes of lipopolysaccharide (LPS) and LPS-binding protein Science 249,1431-1433, 1990.

156. Xu Q, Schett G, Perschinka H, Mayr M, Egger G, Oberhollenzer F, Willeit J, Kiechl S, Wick G., Serum soluble heat shock protein 60 is elevated in subjects with atherosclerosis in a general population. Circulation. 2000, 4;102(l):14-20.

157. Xu Q. Role of heat shock proteins in atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2002, v.22, pp.1547-1559.

158. Yanagawa Y., Onoe K., Enhanced IL-10 Production by TLR4- and TLR2-Primed Dendritic Cells upon TLR Restimulation. Journal of immunology 2007, 15;178(10):6173-80.

159. Yasuda T., Ueda T., Takeyama Y., Shinzeki M. et al. Significant increase of serum high-mobility group box chromosomal protein 1 levels in patients with severe acute pancreatitis. Pancreas 2006; 33: 359-363.

160. Yin J., Huang Z., Xia Y. et al. Lornoxicam suppresses recurrent herpetic stromal keratitis through down-regulation of nuclear factor-kB: an experimental study in mice. Molecular Vision, 2009,15,1252-1259.

161. Yu D., Rumore P.M., Liu Q., Steinman C.R., Soluble oligonucleosomal complexes in synovial fluid from inflamed joints, Arthritis and Rheumatism,vol.40, no.4, pp.648-654, 1997.

162. Zhang Z., Schluesener H. J. Mammalian toll-like receptors: from endogenous ligands to tissue regeneration, Cell. Mol. Life Sei,. №. 63, pp. 2901-2907, 2006.2008.