Аминокислоты и аминоферазы крови при ящуре крупного рогатого скота тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, Демин, В. Д.

• Демин, В. Д.
• 1966

Оглавление диссертации Демин, В. Д.

ВВЕДЕНИЕ.I

I.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I*Биологическое значение белков,аминокислот и ферментов.

•Белковые фракции,свободные аминокислоты и аминоферазы при некоторых патологических состояниях.

П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Характеристика животных и схема опытов.

2. Выделение свободных аминокислот из сыворотки крови.

3. Количественное определение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге.

4. Определение активности глютамико-аспара-гиновой и глютамико-аланиновой аминофераз:

5. Биометрия.

Ш.РЕЗУЛЬТАТЫ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ КЛИНИЧЕСКИ ЗДОРОВОГО КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.

I, Содержание свободных аминокислот.

2# Активность аминофераз.

1У. РЕЗУЛЬТАТЫ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВАКЦИНИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ.

1. При иммунизации опытной вакциной. а. Динамика свободных аминокислот. б. Динамика аминофераз.

- 2 - П

2* При иммунизации производственной вакциной.64а. Динамика свободных аминокислот«. 64б. Динамика аминофераз.

V. РЕЗУЛЬТАТЫ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ПРИ КОНТРОЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ.

1. При заражении животных,привитых опытной вакциной. а. Динамика свободных аминокислот. б. Динамика аминофераз.

2. При заражении животных,привитых производственной вакциной. а. Динамика свободных аминокислот. б. Динамика аминофераз*.

3. При экспериментальном ящуре. а. Динамика свободных аминокислот. б. Динамика аминофераз.III

VI. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

УП. ВЫВОДЫ.

УШ. Л И Т Е Р А Т У Р А.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Аминокислоты и аминоферазы крови при ящуре крупного рогатого скота»

Ящур - одно из наиболее опасных вирусных заболеваний , которое , вследствие биологических особенностей возбудителя , может быстро распространяться на больших территориях , поражая многие виды сельскохозяйственных животных и причиняя огромный экономический ущерб.

Создание и совершенствование профилактических , терапевтических и диагностических препаратов требует выяснения интимных сторон патогенеза и иммуногенеза. Для этого необходимо достаточно полное представление о качественном составе компонентов обмена веществ и динамике их количественных изменений , возникающих во внутренней среде макроорганизма при его контакте с инфекционным началом. В связи с этим внимание к изучению клинической биохимии при инфекционных заболеваниях с каждым годом возрастает.

Однако у больных ящуром и вакцинированных против этого заболевания животных достаточно хорошо исследована лишь динамика белкового спектра крови.

В то же время влияние ящурной инфекции на уровень других компонентов промежуточного обмена остается пока еще мало изученным .

Так , в известной нам литературе каких - либо сведений о поведении свободных аминокислот в крови крупного рогатого скота при этой инфекции не найдено. Между тем , изучение коли> чественных сдвигов свободных аминокислот при ящуре имеет весьма важное значение , поскольку они являются составными частями белковых молекул. Кроме того , свободные аминокислоты , являясь биологически активными соединениями , оказывают значительное влияние на обмен веществ и физиологическое состояние организма животных.

Равным образом и влияние ящурной инфекции на ферментативную активность аминофераз , участвующих в обмене аминокислот, также остается практически неизвестным.

В связи" с этим в задачу наших исследований входило изучение динамики свободных аминокислот и ферментативной активности аминофераз в крови крупного рогатого скота при ящуре в следующих направлениях: а) при иммунизации различными лапинизированными вакцинами (опытной фреоновой ВЙЭВ и производственной); б) при экспериментальном заражении вакцинированных и не-вакцинированных животных.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Ящур - острое, септическое, контагиозное заболевание, поражающее в основном как домашние, так и дикие виды двукопытных животных. Болезнь вызывается фильтрующимся вирусом и проявляется клинически, кроме лихорадки, развитием афтозных поражений в ротовой полости, на копытцах и реже на вымени.

Инкубационный период при ящуре характеризуется кратковременностью. Его продолжительность у крупного рогатого скота в естественных условиях заражения обычно находится в пределах от 16 часов до 7 дней ( А.Л.Скоморохов, 1928, 1952; О.К.Пешехонова, 1932; С.Н.Вышелесский, 1948),

Относительно патогенеза наиболее популярна и экспериментов, 1921)*На основании того,что особенно эффективны интракутан-ный и субкутанный, а не интравенозный , способы заражения ими было выдвинуто представление о двухфазном развитии ящурного процесса. Первой фазой они считали проникновение вируса ящура в слизистую оболочку пищеварительного тракта через какой-нибудь, часто очень незначительный дефект, где он размножаясь, образует первичную афту. Данная стадия протекает без особых клинических симптомов и часто без заметного повышения температуры тела животного, почему на практике заболевание в этот период обычно не замечается. Во второй фазе (после образования первичной афты ) ящурный вирус проникает в кровь и распространяется по всему организму, что приводит к формированию вторичных афт и сопровождается значительным повышением температуры , тела. Наличие второй стадии подтверждается тем, что тально обоснована гипотеза Вальдмана в крови лихорадящих, больных ящуром животных,как правило, обнаруживается возбудитель этого заболевания ( А.Л.Скоморо-хов, А.А.Дорофеев, А.А.Кудрявцев , 1929; Н. 1924).

X.Биологическое значение белков » аминокислот и ферментов

Кровь - единственная в организме ткань, которая является биологической жидкостью и находится в постоянном движении . Она состоит из плазмы и взвешенных в ней форменных элементов ( эритроцитов , тромбоцитов и лейкоцитов ). Сыворотка крови отличается от плазмы отсутствием в ней близкого к глобулинам белка - фибриногена. Главной составной частью сыворотки крови являются белки , качественный состав которых неоднороден. Они отличаются друг от друга величиной частиц , физи-ко-химическими и биологическими свойствами . Помимо того , в состав сыворотки крови входят витамины , гормоны , различные органические и неорганические вещества, полипептиды, аминокислоты , пуриновые и пиримидиновые основания , а также другие компоненты азотистого обмена и его конечные продукты -мочевина и мочевая кислота. Все составные части крови являются вторичными , так как поступают в нее из других тканей. Поэтому анализируя результаты гематологических и биохимических исследований можно получить ценные сведения о состоянии кроветворных и других органов и обменных процессов организма в целом. Наличие этих данных имеет большое диагностическое и прогностическое значение , позволяет назначать правильное лечение и контролировать его ( А.О.Войнар , 1950 ; С.Д.Бала-ховский, И.С.Балаховский , 1953; Д.Н.Яновский, 1957; М.Ф.

Мережинский , Л.С.Черкасова , 1965 )•

Название "белок" дано на основании характерного внешнего вида вещества яиц птиц , свертывающимся при нагревании в белую нерастворимую массу . В 1839 году датский ученый №и£о6г/1 ( по Я^л ,1957) , учитывая особую биологическую значимость белков , предложил называть их "протеинами" ( от греческого слова ръо^оЗ - первый , главный )♦

В отличие от всех других веществ ( углеводы , жиры , витамины и т.д. ) белки обладают исключительно большим разнообразием функций®

Белки являются основными созидательными частями клеток ( пластическая »структурная роль ).

Все ферменты , антитела и многие гормоны по своей природе являются белковыми веществами.

Служат источником энергии .

Поддерживают в организме водно-солевое равновесие и определенную величину рН.

Облегчают транспортирование ( передвижение ) ряда веществ и участвуют в обезвреживании ядов , токсинов и т.д.

Белки , благодаря этому многообразию функций , представляют материальную основу живой природы . Они входят в состав всех клеток и с ними мы встречаемся всюду „ где имеет место проявление жизни ( А.И. Опарин , 1957; Г.И.Азимов , Д.Я. Крини-цин, Н.Ф.Попов, 1958 ; Г.Нейрат , К.Бейли, 1959; С.И.Афонский, 1964 и др. ).

В настоящее время принято считать , что белки сыворотки крови состоят из альбуминов , альфа - бета - и гамма - глобулинов.

Альбумины по сравнению с другими б ежами обладают наибольшей электрофоретической подвижностью и наиболее симметричной формой молекул ( длина - 150 А0 , диаметр - 38 А0 )♦ Молекулярный вес колеблется в пределах - 67500 - 69000. Альбумины хорошо растворимы в воде • Их растворы имеют относительно малую вязкость, что объясняется округлой формой молекул этого белка. Так, его 25% раствор имеет вязкость, равную вязкости цельной крови. По сравнению с другими белками крови в альбуминах содержится наибольшее количество оксиаминокислот, сравнительно мало содержание глицина, изолейцина и триптофана. Имеются отличия в аминокислотном составе альбуминов у разных видов животных. Так, у крупного рогатого скота триптофана, в альбуминовой фракции содержится больше в три раза, а у лошадей - в два раза, чем в аналогичных белках человека. Предполагается , что альбумины состоят из молекул с разной антигенной структурой ( J, nttf, Т. (SednoLtift, J, fact, /Si3; V. ¿¿.ггг**^ jU, /Зх<мкоСУ 1964).

Альбумины, будучи высокодисперсными белками, играют существенную роль в коллоидноосмотическом давлении крови . Ими обеспечивается около 80 % осмотического давления плазмы ( А.Н. Филатов , 1959;

Установлено также, что они в организме являются основным фондом запасных белков ( Г.Нейрат , К.Бейли, 1959). Этими особенностями обусловлено то, что препараты альбуминов нашли широкое применение в клинике для повышения кровяного давления при шоковых состояниях и больших потерях крови, а также для парнн-терального питания при заболеваниях , обусловливающих невозможность приема пищи или сопровождающихся кахексией •

Альфа-глобулины при электрофорезе разделяются на под-Т 7 фракции ( альфах - и альфа - ) с различным молекулярным весом. Для альфа*- глобулинов он равен 200 ООО, а для второй подфрак-ции - 30О ООО. Молекулы этих белков имеют эллипсоидную форму, длина - 300 А0. Эта фракция сывороточных глобулинов образует биохимические комплексы с различными углеводами ( глюко- и муко-протеиды) и отчасти с липидами ( Г.А.Алексеев, 1962).

Бета-глобулины имеют молекулярный вес в пределах 90 ООО -150 ООО, размер молекул - 190 х 37 А0. В зоне бета- глобулино-вой фракции находится существенная часть липопротеидов плазмы; в составе этих белков находится также металлосвязывающий ( железо, медь) белок - сидерофиллин. Бета-глобулины имеют большое значение в свертывании крови, так как с ними связана основная часть тромбина. Этой фракции приписывается высокая адсорбционная способность, что по мнению Г.В. Троицкого и Д.А. Соркиной (1956, 1957), имеет большое значение в переносе жира, холестерина, билирубина, каротина, витаминов А и Д. С этими белками связана активность гипериммунных сывороток анаэробных инфекций ^¡{¿iCuHCfC, й&с<ю£ш1).

Из всех белков сыворотки крови наиболее изучены гамма-гло-булины. Им в клинической и иммунобиологической практике придается особое значение в виду того,что функция антител тесно связана с этой фракцией ( Л.А. Зильбер, 1948, 1958; В.Бойд,1949; Ф.Гауровитц, 1953; В.В. Насилова, 1962; J. ^nofotS* 1944).

Снижение содержания в сыворотке крови гамма-глобулинов, вызванное недостатком белка в диете, сопровождается соответствующим снижением выработки антител ( А.П.Мороз, Ю.В.Игнатович,

- 8

1959; Н.П.Короткова, А.В.Игнатович, 1962) .

Размеры молекул гамма-глобулинов и антител человека равны 338 х 37 А0, лошади - 950 х 47 А0 , а их вес ( молекулярный) у человека, обезьяны и кролика равен 157000,, у лошади , быка и морских свинок - 930 000 ( В.Н. Орехович, 1952).

Существует огромное количество аминокислот, поскольку от любой органической кислоты можно получить несколько аминопро-изводных. Однако в составе белков обнаружено ограниченное число аминокислот ( Б.И.Збарский, М.И.Иванов,, С.Р.Мардашев, 1965; Дж.Гринштейн, М. Виниц, 1965).

Изучение аминокислот, входящих в состав белков, показало, что все они являются по своему строению альфа-аминокислота ми, т.е. их аминогруппа связана с ближайшим к карбоксилу угле родным атомом. Все альфа-аминокислоты, за исключением глицина, содержат асимметричный углеродный атом и поэтому являются оптически активными соединениями, т.е. способными вращать плоскость поляризованного луча ( аминокислоты) .

Физиологическое значение и обмен £~ и ¿/-аминокислот совершенно различны.Как правило, аминокислоты ¿/-ряда или совершенно не усваиваются или усваиваются гораздо хуже, поскольку ферментативные системы животных и растений специфически приспособлены к £-аминокислотам.

Важнейшими аминокислотами являются следующие: I.Ациклические, а) Моноаминомонокарбоновые. Алании ( -аминопропионовая кислота)^ Серин ( ¿¿-амино -р- оксипропионовая кислота).,

Цистеин ( о/ -амино - /3 -тиопропионовая кислота),

Цистин ( ди - «/ - амино - р -тиопропионовая кислота),

Метионин ( ¿¿-амино - у - метил - тиомасляная кислота),

Треонин ( аС -аиино - р - оксимасляная кислота),

Валин ( Л -аминоизовалериановая кислота),

Лейцин ( ¿С -аминоизокапроновая кислота) , йзолейцин ( (I -амино - р -метил - /Ь - этилпропионовая кислот

Глицин или гликокол (аминоуксусная кислота). б). Моноаминодикарбоновые.

Аспарагиновая кислота (аминоянтарная кислота), Глютаминовая кислота ( сС -аминоглютаровая кислота ). в) Диаминомонокарбоновые.

Лизин ( <¿1 £ -диаминокапроновая кислота), Аргинин ( / -амино - £ - гуанидино - валериановая кислота) .

2. Циклические.

Фенилаланин ( Л -амино - р - фенилпроиионовая кислота ), Тирозин ( р - оксифенилаланин; Л -амино - р -параоксифе-нилпропионовая кислота),

Триптофан ( -амино - /3 -индолилпропионовая кислота), Гистидин ( ¿¿-амино - р - имидааолилпропионовая кислота)

3. Иминокислоты.

Пролин ( пирролидин - <уС - карбоновая кислота), Оксипролин ( у-оксипирролидин - аС - карбоновая кислота).

Аминокислоты входят в качестве элементарных структурных соединений в состав белковых молекул. Их ассортиментом, количественным соотношением и взаиморасположением определяются все специфические физико-химические и биологические свойства отдельных белков. Помимо участия в образовании белков, белковых групп ферментов и полипептидов, аминокислоты выполняют в клетке ряд функций, которые не связаны непосредственно с белковым обменом. Свободные аминокислоты оказывают существенное влияние на обмен веществ, выступая в качестве ингибиторов, либо активаторов биохимических процессов. Установлено, что аминокислоты влияют на рост и развитие, подавляя или стимулируя его; известен ряд фактов мутагенного действия некоторых аминокислот и доказано участие аминокислот в синтезе гормонов, медиаторов и других биологически активных соединений ( А.М.Кузин; 1947; Д. Аллисон, 1952; Д.Вулли, 1954; А.Майстер, 1961; И.А.Рапопорт, 1962; £ 1962).

Аминокислоты оказывают стимулирующее или ингибирующее действие на рост микробных клеток, присутствуя в среде часто в очея малых количествах ( E.JI. Рубан, 1965 ).

Установлена взаимосвязь между функциональным состоянием нервной системы и содержанием в ней свободных аминокислот. Так, головной мозг спящих животных, по сравнению с бодрствующими, содержит на 20% меньше глютамина и на 40% больше тирозина (Н.С. Нилова, 1963 ).

В процессе старения содержание свободных аминокислот в тканях продолговатого мозга крыс повышается. Цистеин, введенный

6 TP отдельно иди совместно с витаминами В и В или фолиевой кислотой, способствует восстановлению ряда свободных аминокислот до величин, характерных для молодого возраста {^.О-е/ии^.^пМ^, 1963) .

В возбужденном нерве повышается на 15% содержание кислых аминокислот и на 13% нейтральных аминокислот.Наибольшие сдвиги наблюдаются в количественном содержании глютаминовой кислоты ( <§. СЛоск^^^/гу- ,1963). Кормление глютаминовой кислотой улучшает состояние пациентов, страдающих приступами эпилепсии ( Н. вие глютаминовой кислоты на обмен веществ ш в условиях гипоксии у белых крыс ( М.А.Добринская, 1962).

Показано, что при гипотермии в ткани головного мозга крыс накапливается аммиак. Введение аргинина ( 120 мг/100 г ) вызывает значительное повышение выживаемости этих животных, что З.С. Гершенович и Я.И. Векслер (1963) связывают с устранением аммиака данной аминокислотой.

Предполагается,что в состав активных центров ферментов входят отдельные аминокислоты. Так, остаток серина обнаруживается в активном центре некоторых эстераз, протеаз и аминофераз (Н.П.Лисовская, 1962).

Характер аминокислотной обеспеченности оказывает влияние на степень восприимчивости животных к возбудителям тех или иных заболеваний. Так, при экспериментальной недостаточности лизина, сопротивляемость к введенным подкожно спорам сибиреязвенной бациллы у этих животных резко падает ( Уъосу ,1963).

Мыши и крысы, зараженные спорами /Я OLn.tAtecci'S, обработанными яичным желтком, умирают быстрее, чем при заражении одними спорами \f% ]C&Ui, Я KctíM, В. лМмМ, 1963),

1944). Показано также благоприятное воздейст

Увеличение сопротивляемости к инфекции малярийным паразитом у стареющих комаров связывается с изменением с возрастом состава свободных аминокислот в организме этих насекомых ( i.%tticcfl, 1962).

Ответная реакция организма на введенные антигены существенно изменяется при одновременном применении некоторых аминокислот. Так, Н.П.Короткова и A.B. Игнатович (1962) сообщают, что метионин стимулирует синтез антител и белков сыворотки крови. Интенсивность воздействия этой аминокислоты более выражена в сочетании с терапевтическим кровопусканием. Терапевтическое кровопускание без метионина приводит к повышению количества антител и белков крови, но менее значительно.

А.В.Игнатович (1963) изучал влияние метионина, лизина и фенилаланина на синтез антител и регенерацию белков крови при кровопотерях. Автором установлено,что эти аминокислоты стимулируют синтез антител ( агглютининов и преципитинов) и белков сыворотки крови. Кровопускание без дачи аминокислот также повышало продукцию антител, но менее значительно. Интенсивность Воздействия на антителогенез аминокислот на фоне кровопускания оказалась более выраженной у лизина.

Сообщается о том, что диета, состоящая исключительно из белков снятого молока или содержащая избыток яичного желтка, вызывает резкое снижение образования антител у человека ( /?.

KociyeZ, ЖВшк, №. OMoft, Я. ВЛс-бл, т%\

С.В.Говоровли А.Г.Ревенков (1964) наблюдали, что добавление к питательной среде больших количеств шлюкозы и аминокислот ( аргинина и цистеина) благотворно оказывается на репродукции вируса ящура в культуре переживающего эпителия языка крупного рогатого скота,

Веймейер (ШеАиауМ, 1954, 1957) показал, что гликокол и ряд других аминокислот могут усиливать антигенное действие противоящурной вакцины.

Процессы ассимиляции и ."диссимиляции- белков и аминокислот тесно взаимосвязаны друг с другом и обменом других веществ и энергии. Пищеварение и различного рода превращения этих веществ во внутренней среде организма протекают при активном участии ферментов - мощных биокатализаторов соответствующих биохимических реакций.

Л.Ингрэм ( 1964) указывает,что до настоящего времени не выработано удовлетворительное объяснение сущности действия ферментов и не установлен детальный механизм практически ни одного ферментативного процесса.Вместе с тем, огромное биологическое значение ферментов не вызывает каких-либо сомнений. И.П.Павлов считал,что ферменты "есть возбудители всех химических превращений в организме" ( по Д.Л. Фердману, 1962)., По мнению Вилылте-тера ( Я. ЪРи&Шиь ,1930, 1960) жизнь представляет собой регулированное взаимодействие энзимных процессов.

Через ферментные системы и их совокупности в живой клетке идет непрерывный поток вещества и энергии в силу обмена между этими системами , группами систем и, наконец, между клеткой и средой. Эти системы имеют способность к аутостабилизации вследствие обратимости большинства ферментативных реакций и регулирования их скорости и направления по принципу Ле Шателье, согласно которому.; процесс, выведенный из состояния равновесия» сгремитви вернуться к первоначальному состоянию, чем обеспечивается постоянство концентраций участников 'этих реакций

А.Г.Пасынский, 1962) . Помимо этого, в условиях организма существует ряд механизмов саморегуляции состояния ферментных систем и их отдельных ферментативных реакций, в основе которых лежит воздействие соотношения исходных, промежуточных и конечных продуктов реакции на активность и синтез ферментов ( Г.Е.Владимиров, С.Н. Лызлова, 1962; С.Е. Бреслер, 1963) • Большое значение имеет и наличие в организме некоторого резерва ферментов (Г.Мак-Ильвейн, 1962). Физиологический смысл сохранения ферментами некоторого "запаса мощности'" состоит в возможности повышения скорости данного биохимического процесса, если в этом возникает временная неибходимость, например, вследствие изменений в составе среды или при усилении той или иной жизненной функции организма ( К.А. Кафиани, 1963, 1964 ),

Установлено,что почти все отдельные ферменты представляют собой комплекс изоферментов • Мзоферменты отличаются друг от друга по составу входящих в их молекулу субъединиц, по сродству к коферментам и по антигенным свойствам ( /. КосрАк, 1963). Нередко встречаются ферменты, выполняющие одну и ту же каталитическую функцию, но существенно отличающиеся друг от друга по своей химической структуре ( ^ . йзоферментам изозимам), т.е. явлению множественности ферментов, придается большое значение в регуляции скорости реакций в расходящихся полиферментных системах. При этом начальный фермент системы может быть представлен несколькими изоферментами, обладающими избирательной чувствительностью к ингибирующему действию различных конечных продуктов ( {. МосоИтоаг ,1963).

В.В.Ковальский, И.А.Шумкова (1963) обнаружили адаптивные изменения оптимумов действия у изученных ими ферментов (аргиназы, катепсина, ксантиноксидазы и энзимов системы общего дегидрирования ) в зависимости от величин рй и уровня синтетических процессов в молочной железе коров. Авторы считают, что адаптивные изменения свойств ферментов вымени обеспечивают интенсивную деятельность этого органа в условиях изменчивой внутренней среды. Установлена также тесная связь протеолитической ферментной системы щитовидной железы с ее функциональной способностью ( Е.А. Колли, 1954; P.M. Усманова,1963 ).

Ммеется много работ, авторы которых отождествляют бактериальные токсины ( главным образом экзотоксины) с ферментами, а токсикоз рассматривают как следствие их действия на соответствующие субстраты. Однако токсины-ферменты обнаружены лишь у представителей грамположительных микробов, причем только у тех, у которых токсинообразование непосредственно связано с процессами питания клеток ( И.В.Доморадский, 1962; 9 Г.М.Машилова, 1963).

Наличие у патогенных микроорганизмов разнообразных токсинов и ферментов не объясняет в достаточной мере природу их вирулентности. Из молодых клеток ряда микроорганизмов удается получать вещества, которые лишены токсичности и ферментативной активности, но влияют на вирулентность, либо обладают иммуно-генными свойствами.Химическая природа этих веществ не установлена ( Л. ^госрр^Ш , 1964).

Способность к бактерицидному действию установлена лишь у одного фермента, а именно у лизоцима, который гидролизует ацетиламино-полисахариды, входящие в состав клеточных оболочек бактерий ( Р.Дюбо, 1957).

В организме человека и животных процессы переаминирования, т.е. обратимого переноса аминогруппы аминокислот на кетокислоты, осуществляется при помощи ферментов, получивших название ами-нофераз или трансаминаз. Выявлено большое число различных амино-фераз, катализирующих переаминирование отдельных аминокислот. Наиболее высокое содержание и наибольшую активность имеют два фермента: глютамико-аспарагиновая (ACT) и глютамико-аланиновая (AJIT) аминоферазы, играющих большую роль в процессах синтеза и распада аминокислот. В иностранной литературе тесту ACT соответствует " У£сс tocfrzoct -- Ox0C^0CCct0C~£

-JioLHAoc/nintä-e) ос мгодлт- 6У?Т

Хит- У^и teem at tfyr ш^рс п%ссггика&е) jTeS^. "

Глютамико-аспарагиновая аминофераза ( ACT) катализирует обратимую реакцию переаминирования между -¿^-аспарагиновой и ¿¿-кетоглютаровой кислотами с образованием щавелевоуксусной и ^-глютаминовой кислот,

Глютамико-аланиновая аминофераза (АЛТ) катализирует обратимую реакцию переаминирования между ^-аланином и й^-кето-глютаровой кислотой с образованием пировиноградной и <^-глюта-миновой кислот.

Содержание глютамико-аспарагиновой и глютамико-аланино-вой аминофераз в различных органах и тканях неодинаково; так , ACT в наибольшем количестве содержится в печени и сердечной мышце; содержание АЛТ в печени во много раз выше, чем в сердечной мышце. Высока активность аминофераз также в скелетных мышцах, почках и нервной ткани ( А.Е.Браунштейн, 1947, 1949, 1957; Д.Н.

Яхнина , 1962; Ж. /осЫ( К. ЫЛа/, №Луал^И&А др.).

Фляйзер и Ваким ( У.&и^Яс, К. Т^А&т ,1963) вводили в вену очищенный препарат глютамико-аланиновой аминоферазы. Оказалось, что скорость убыли из крови этого фермента была одинаковой у здоровых собак и у животных с удаленной селезенкой. Снижение концентрации фермента в сыворотке крови сопровождалось увеличением его количества в лимфе. Не обнаружено выделения активного фермента с мочой. Л.И.Комнатная (1963) установила наличие аминофераз в слюне человека. При этом активность глютамико-аспарагиновой аминоферазы незначительно отличалась от активности этого фермента в крови.

Специфика каталитического действия фермента обеспечивается его функциональными группами ( центрами ). Разрушение или блокирование той или иной группы, взаимодействующей с субстратом или зсофе]?ментом , ведет к прекращению или замедлению каталитической реакции ( О.Л.Поляновский, 1964).

Коферментом аминофераз является фосфопиридоксаль - фосфо-рилированный витамин В ( В.Н.Букин, 1940; Б.А.Кудряшов, 1948).

Ю.В.Букиным (1963) было показано, что в зоне инфаркта миокарда содержание глютамико-аспарагиновой аминоферазы и общего белка резко снижается. При лечении фоефориридоксалем содержание общего белка повышается, а содержание аминоферазы близко к норме или превышает ее. Однако Оэриу (1963) установил, что у животных с возрастом активность глютамико-аспарагиновой и глютамико-алани-новой аминофераз повышается, в то вре&я как содержание в организме витамина В^ понижается. Бонштейн, Фавец и Бракель ( Н. Вокип уи, /ЗгссюС,

1961) не отметили какого-либо влияния различных доз витамина В^ на активность глютамико-аспарагиновой аминоферазы в крови человека. Помимо того, даже показано, что витамин В^ оказывает угнетающее воздействие на аминоферазную активность обоих ферментов в эритроцитах ( Я.Л. Германюк, О.Ю. Летченко, М.М. Мартинюк, 1962).

2.Белковые фракции, свободные аминокислоты и аминоферазы при некоторых патологических состояниях

Исследования белкового состава крови при инфекционных заболеваниях показали,что в больном организме, прежде всего, наступает диспротеинемия. Установлено, что в большинстве случаев изменения в соотношениях белковых фракций носят однотипный характер и проявляются в виде гипоальбуминемии, гиперглобулинемии, увеличения содержания альфа - или гамма-глобулинов. Оказалось,что эти изменения представляют большую диагностическую ценность, особенно в комплексе с другими клиническими и лабораторными тестами

С.Я.Капланский, 1964; У, ВалЛос^аЖо, 1953;

1963 и др. ).

Н.М.Климов (1961) и сотрудники ( А.Г.Малахов, Т.Г.Нигмат-тулин, А.Г. Лубошников, В.Ф. Поляков, Г.Ф.Коромыслов ) провели значительные исследования по динамике белкового состава крови при ряде инфекционных заболеваний в комплексе с другими биохимическими тестами, показав этим его высокую диагностическую ценность. Данные авторов указывают на глубокие изменения уровня сывороточных белков, аминокислот, активности ферментов и морфологических элементов крови при различных заболеваниях.На примере бруцеллезной инфекции они показали,что чем больше микробных тел вводится в организм и чем они вирулентнее, тем выше уровень гамма-глобулинов в крови'и активнее лейкоцитарная реакция. Было установлено,что изменения биохимических показателей при инфекционной патологии в эксперименте отмечаются раньше проявления клинических признаков заболевания и степень этих изменений показывает направленность и тяжесть патологического процесса.

Белковые фракции крови крупного рогатого скота изучались как при естественном заболевании ящуром ( Г.Г. Нуриев, 1962;

1961), так и в условиях эксперимента. В последнем случае применялись как электрофоретический ( А.Г.

Малахов, 1956, 1957; С, ВгасШсЛ/ 1954), определения белкового спектра, которые дали совпадающие результаты.

При экспериментальном ящуре в динамике белковой формулы сыворотки крови крупного рогатого скота было установлено закономерное снижение содержания альбуминов в первую неделю после заражения, кратковременное повышение содержания бета^глобули-нов между 5-7 днями после заражения с последующим возвращением их уровня к норме и во 2-4 недели после заражения значительное повышение содержания гамма-глобулинов.

При иммунизации животных различными антигенами белковый состав крови изменяется также однотипно. В результате первого цикла иммунизации'как простыми,так и сложными ассоциированными вакцинами увеличиваются все глобулиновые фракции. После длительного введения антигенов оказываются увеличенными только гамматак и полярографический (

1954, 1955) методы Г

- 20 глобулины ( О.А.Васильева,1960 ).

Таким же образом изменяются белковые фракции крови при иммунизации и гипериммунизации против ящура ( М.А.Белогорский, Г.И.Липатов, 1938'ТорЩШ, 1961;

С^/Зте^^шг)*

Сравнительно большой интерес к установлению закономерностей динамики белковой формулы крови при ящуре обусловлен двумя важными обстоятельствами.

Во-первых, белкам принадлежит .ведущая роль в обмене веществ. Выяснение сущности жизненного процесса, различных физиологических состояний организма и болезней возможно только через познание природы белка и его свойств в соответствующих условиях ( С.И.Афонский, 1964).

Во-вторых, в противовирусном иммунитете основное значение придается специфическим антителам. Вместе с тем установлено, что различного рода антитела тесно связаны с глобулино-вой ( преимущественно с гамма-глобулиновой ) фракцией белков сыворотки крови и неотделимы от нее ( В.Д.Соловьев, 1950, 1963; Л.Я.Закстельская, 1957; Г.Рамон, 1962 и др.).

Содержание отдельных свободных аминокислот при одном и том же патологическом состоянии в различных тканях и органах животного обычно изменяется неодинаковым образом. Так, у крыс при ожоге кожи значительно уменьшается содержание свободных аминокислот в почке. В селезенке уменьшается содержание аргинина, фенилаланина, аланина и серина и несколько увеличивается содержание сирозина. В надпочечниках снижается содержание тирозина, валина, аланина и увеличивается содержание фенилаланина, лейцина, глицина, аспарагиновой и аминоглютаровой : . кислот.В печени содержание большинства свободных аминокислот увеличивается, но снижается содержание фенилаланина и лейцина ( Д.ААоЛагп, 1963).

Е.М.Ларионова, Ю,К.Леденцев (1962) установили, что при местном охлаждении повышается содержание аспарагиновой кислоты в мышцах, крови и моче.Содержание глютаминовой кислоты увеличивается во всех органах, а в селезенке - уменьшается. Концентрация аланина уменьшается в печени, мышцах, почках и селезенке, а в мозгу, крови и моче - увеличивается.

Показано также, что повышение или понижение содержания той или иной аминокислоты в моче не всегда сопровождается соответствующим направлением изменения ее содержания в свободном виде в крови ( Ю.К.Леденцев, Е.М.Ларионова,1963; В.П. Волков, 1964 и др.).

При 'лейкозах распределение свободных аминокислот между плазмой и форменными элементами ( эритроцитами, лейкоцитами) крови иное, чем в норме ( М.Б.Свенцицкая, 1959; Н.М. Мацнева, 1962).

Герок ( ^ 54^/^,1963) установил, что в сыворотке крови при остром гепатите содержание свободной глютаминовой кислоты повышено, а в то же время содержание этой аминокислоты в ■ связанном виде ( в гидролизате) оказалось пониженным.

При некоторых патологических состояниях наблюдается многократное изменение содержания свободных аминокислот по сравнению с их исходным уровнем. Так, у животных, больных чумой, содержание свободных аминокислот в крови в -2-4 раза выше,чем в норме (М.Н. Джапаридзе, 1964) .»Аналогичная степень изменения концентрации некоторых свободных аминокислот в плазме крови отмечается и при экспериментальных тейлериозах у крупного рогатого скота ( В.Ф. Поляков, 1964).

Однако в ряде случаев исследователи не находят столь существенных колебаний в содержании свободных аминокислот. Так, А.К. Зязев, Ю.Ф. Щербак (1962) при болезни Боткина и механической желтухе резких отклонений от нормы в содержании отдельных аминокислот в крови не выявили. Кстати говоря, авторы при болезни Боткина зарегистрировали некоторое увеличение содержания глютаминовой кислоты, а содержание аспарагино-вой кислоты в крови соответственно пониженным, что связывается ими с известным из литературы повышением активности амино-фераз при этом заболевании.

И.П.Кондрахин (1963) указывает,что изменения содержания белка и свободных аминокислот в крови больных.диспепсией телят неоднозначны. Аналогичное явление наблюдается и при экспериментальных тейлериозах крупного рогатого скота ( В.Ф.Поляков, 1964).

В доступной нам литературе каких-либо сообщений о влиянии ящурной инфекции на уровень свободных аминокислот в организме крупного рогатого скота не найдено. Между тем, о перспективности исследований в области аминокислотного обмена при ящуре жвачных свидетельствуют данные Д.А.Цуверкалова (1964), ЛЛ.Коптевой, Д.А. Цуверкалова и Г.Е.Панковой (1964), которыми было установлено, что в культуре клеток почки крупного рогатого скота в процессе размножения вируса ящура наблюдаются значительные изменения количественных соотношений многих незаменимых аминокислот.

- 23

Относительно влияния ящурной инфекции на свободные аминокислоты у других видов животных нам известно только сообщение Н.З.Хазияова (1965), Автор изучал их содержание в печени и сыворотки крови больных ящуром крольчат ( тип "О"). Им было установлено повышение содержания адашта,глицина, глютаминовой и аспарагиновой кислот как в печени,так и в крови лабораторных подопытных животных« Однако количество большинства других аминокислот в печени понижалось, а в сыворотке крови повышалось«

Практика показала,что повышенное содержание глютамико-аспарагиновой аминоферазы в сыворотке крови может быть использовано для диагностики инфарктов миокарда.При этом заболевании содержание глютамико-аспарагиновой аминоферазы (ACT) увеличено весьма значительно, в то время как активность глютамико-аланиновой аминоферазы (АЛТ) остается в пределах нормы или только незначительно повышается.Величина коэффициента ACT/АЛТ при инфарктах миокарда выше единицы.

В отличие от инфарктов миокарда, при различных заболеваниях, связанных с поражением паренхимы печени ( болезнь Боткина, гепатит, цирроз и т.д.) в крови одновременно увеличивается содержание обоих ферментов, но более всего глютамико-аланиновой аминоферазы, вследствие чего коэффициент АСТ/АЛТ, как правило, меньше единицы ( Л.С. Оленичева, Р.С.Эйзенгарт, 1959; Т.С. Пасхина, 1959; A.A. Покровский , I960; Д.Т. Попов,1964 и др.).

Относительно механизма, ведущего к повышению активности аминофераз в сыворотке крови больных с поражениями печени, сердца и другими заболеваниями, мнения расходятся.

В то время как одни авторы считают,что это повышение является только непосредственным следствием нещ>оза клеток печени и других органов с последующим выхождением ферментов в кровеносную систему, другие полагают, что, по крайней мере в ряде случаев, повышение активности аминофераз отражает не степень некроза клеток,а увеличение в них образования этих ферментов в связи с состоянием стресса ( ЛЛ, Алиевская,1965).

Обычно при заболеваниях органов, содержащих незначительное количество аминофераз, активность этих ферментов в крови существенных изменений не претерпевает. Так, известно, что аминоферазная активность легочной ткани относительно невелика. Этим объясняется то, что при различных формах туберкулеза легких { 1/ Oiccjfùi- Я, CtâboKWtoL, 1962), а также при силикозе (А*. ,хотя ферментативная активность в крови глютамико-аспарагиновой и глютамико-аланиновой аминофераз повышается, но гораздо меные, чем при патологии печени или сердечной мышцы^

Считается,что при лейкемии <éit<fiS№f J. ¿¿tÎZW, 1959), туберкулезе легких ( ^ Gzotj/toc - y&co/o&JZZiï, Л. СкЛ'ип^Ка, 1962), диспепсии телят (И.П.Кондрахин, 1963) и других заболеваниях если и наблюдается повышение активности аминофераз крови, то оно обусловлено сопутствующими заболеваниями печени и сердечной мышцы или вовлечением в патологический процесс этих органов.

В одних случаях, после воздействия на организм тех или иных факторов,наблюдается сравнительно быстрое ответное изменение активности аминофераз. Так, В.Б.СлЬбодин (1964) вводил парентерально крысам мздный купорос из расчета 0,5 мг на I кг живого веса. Автором было найдено, что в печени активность глютамико-аспарагиновой аминоферазы (ACT) максимально увеличивается через 2 часа, в то время как активность глютамико-аланиновой аминоферазы ( АЛТ) постепенно снижается« В сердце активность ACT вначале падает, затем возрастает, достигая исходного уровня уже через час, в то время как активность АЛТ постепенно снижается и держится на этом уровне в течение одного часа, после чего начинается постепенный подъем активности этого фермента. Активность АЛТ в легких снижается.

Экспериментальная травма (особенно разможжение) печени также приводит к очень быстрому повышению в сыворотке крови активности обеих аминофераз ( Н. ,1963).

В других случаях активность аминофераз изменяется через продолжительный промежуток времени с момента воздействия на организм того или иного фактора. Так, заметное нарастание активности глютамико-аспарагиновой аминоферазы ( ACT) и альдолазы в сыворотке крови наблюдается только на 2-3 день после общего охлаждения крыс; на 5-6 день их активность возвращалась к норме. После повторного общего охлаждения возрастание активности ACT происходило в те же сроки, но было более выраженным ( O.K. Вихрова, 1963). Активность обеих сывороточных аминофераз (ACT и АЛТ) после введения метил - тестостерона несколько повышается лишь на 10-11 сутки и несмотря на продолжение инъекций этого гормона на 17-18 сутки возвращается к норме ( В.Петера, К.Бобек, В.Лан, 1962).

- 26

O.A. Каршок, Я.Л. Германюк (1962) нашли некоторый параллелизм между содержанием белковых фракций, активностью амино-фераз и тяжестью некоторых заболеваний органов брюшной полости»

О влиянии ящурной инфекции на ферментативную активность аминофераз, участвующих в обмене аминокислот, известна лишь работа Пиро и Зорце to, У, -¡охсе. ,1963). Указанные авторы свои исследования проводили на крупном рогатом скоте различного возраста ( от 6-ти месячного до 2-х летнего) при отсутствии контрольных животных. Они определяли в сыворотке крови подопытных животных ферментативную активность глютамико-аспа-рагиновой ( ACT) и глютамико-аланиновой ( АЛТ) аминофераз до заражения ящуром типа "Си и в разгар заболевания. Закономерных изменений активности этих ферментов исследователями не установлено. Однако ими отмечено незначительное повышение ферментативной активности глютамико-аланиновой аминоферазы (АЛТ) и некоторое уменьшение активности глютамико-аспараги-новой аминоферазы (ACT) и величины количественного соотношения активности этих ферментов - коэффициента АСТ/АЛТ.

Таким образом, из данного обзора литературы следует,что аминокислоты являются не только составными частицами белковых молекул,но и сами по себе, будучи биологически активными соединениями, оказывают значительное влияние на обмен веществ и физиологическое состояние животных. При возникновении патологии количественное соотношение свободных аминокислот подвергается более или менее существенным изменениям.

При этом содержание одних аминокислот может остаться неизменным, а других - повысится или понизится на различный срок.

Ферментативная активность отдельной аминоферазы при патологии может повышаться или понижаться на короткий или длительный срок. При этом, активность фермента изменяется вскоре или значительное время спустя с момента воздействия вредоносного агента.

Повышение активности в крови той или иной аминоферазы считается следствием деструкции содержащей ее ткани. При поражении печени,как правило, в крови возрастает активность, глютамико-аланиновой аминоферазы. При этом, если активность глютамшсо-аспарагиновой аминоферазы неизменна, величина коэффициента ACT/ АЛТ понижается.

При поражении сердечной и скелетных мышц возрастает активность глютамико-аспарагиновой аминоферазы. Величина коэффициента АСТ/АЛТ при этом повышается.

В свете изложенных литературных данных представляет особый интерес изучить колебания содержания свободных аминокислот и активности аминофераз, возникающих при вакцинации против ящура и при заражении вакцинированного и невакциниро-ванного крупного рогатого скота, а также выяснить отношение их динамики в крови к патогенезу и иммуногенезу при этой инфекции.

По СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Настоящая работа является частью исследований по ящуру крупного рогатого скота, проведенных в комплексе со старшим научным сотрудником лаборатории биохимии и полимеров ВЙЭВ А.Г. Малаховым.

I. Характеристика животных и схема опытов

Исследования проводились в июне-августе 1964 года на экспериментальной базе ВИЭВ ( о.Лисий).

Под опытом находилось 12 голов молодняка крупного рогатого скота (8 бычков и 4 телочки). Порода холмогорская, возраст 8-9 месяцев, упитанность средняя ( таблица I). Все животные поступили из благополучных по ящуру колхозов Вышневолоцкого района Калининской области и ранее профилактической вакцинации против этой инфекции не подвергались.

Подопытные животные за месяц до начала опытов были помещены в изолятор. Суточный рацион состоял из 2 кг комбикорма, 8 кг лугового сена и соли-лизунца. Кормление и водопой животных проводили 3 раза в сутки.

Подопытные животные были разделены по принципу аналогов на три группы ( по четыре головы в каждой). Животных первых двух групп иммунизировали против ящура типа Я0И различными ла-пинизированными вакцинами в дозе 5 мл подкожно.

Телят первой группы ( JBË 71, 72, 73, 74 ) иммунизировали опытной фреоновой вакциной ВИЭВ серии tel , изготовленной

Таблица I.

Характеристика подопытного крупного рогатого скота йй Г м пп I животных г----п - — —1 Порода Возраст вес | Упитанность 1 . . . 1

1 2 3 ^ 71 72 73 74 бычок телочка бычок холмогорская — 8 месяцев 9 -« - 9 9 НО 1 . Средняя Т 125 I -»- | 115 ! -и- \ 130 | -м- \

5 6 7 8 75 76 77 78 телочка бычок телочка бычок 1111 8 3 8 3 1111 9 \ 120 9 \ 130 8 месяцев { 105 9 ! 125 1 [ 1 1 1 -И- 1 ! |

9 10 11 12 - 79 80 81 82 бычок телочка 1 бычок бн^ок -П- 9 ! 125 9 -и- \ НО 8 | 115 9 месяцев | 125 • 1 ] 1 1 1

20 мая 1964 года ( Н.М. Климов, А.Г. Малахов, В.Н. Грибанов, 1961).

Телят второй группы ( №Ё 75, 76, 77, 78) иммунизировали производственной вакциной серии № 22, изготовленной Курской биофабрикой 21 марта 1964 года.

Телята третьей группы ( М№ 79, 80, 81, 82) служили в качестве контроля*

Через 30 дней с момента вакцинации все подопытные животные были подвергнуты контрольному заражению афтозным вирусом ящура гомологичного типа. Перед заражением стенки афт мелко разрезали ножницами и тщательно растирали с добавлением битого стекла в фарфоровой ступке. Полученную массу в разведении I : 500 ( на стерильном физиологическом растворе) втирали в Скарифицированную поверхность слизистой оболочки верхней губы.

После заражения все контрольные и привитые производственна вакциной животные заболели ящуром: одновременно в основном на 3-4 день с момента заражения ( таблица 2 )•

Заболевание ящуром как иммунизированных производственной вакциной,так и контрольных животных характеризовалось повышением температуры тела до 41°С (таблица 3) и сильными аф-тозными поражениями слизистой оболочки языка и десен. У этих животных в первые дни заболевания отмечалось обильное слюнотечение и отказ от корма и воды.На 4-5 день на месте афт образовались эрозии, полная эпителизация которых наблюдалась на 13 - 15 день с момента заражения. Лечение не применялось.

Что касается животных,привитых опытной фреоновой вакциной ВИЭВ, то они к заражению ящуром оказались невосприимчивыми« I I

Таблица 2

Схема опытов и результаты заражения подопытных животных Ш животных Вакцина лапини-зирован-ная Дата вакцинации Доза подкожно Дата контрольного заражения Результат заражения

71 72 Опытная ВИЭВ 6.У1- 1964г. 5 5 мл и 8.УП-1964г. Не заболел II

73 5 и и

74 5 и п

75 76 1 1 Производственная —И— 5 5 (1 и Заболел на 5 день " на 4 день

77 5 II ? на I день

78 5 п " на 2 день

79 т-1 1 Контроль — 5 11 Заболел на 2 день

80 1 1 1 1 -И— 5 (1 — п на 4 день

81 5 11 " на 3 дань

82 1 Л. 5 II " на 3 день I со

ТЕМПЕРАТУРНЫЙ ЛИСТ Таблица 3 подопытных животных в период после заражения (с 9 по 16 июля)

Группы животных

Вакцина опытная ВИЗ В животных и

72

73 7 4

9 10 II 12 13 14 июля июля июля июля июля июля

39,5 39,1 зэТб 3978 ~39,3 39,1

39,0 39,0 39,3 39,1 39,0 38,7

39,1 39,6 39,8 39,8 39,3 39,0

38,7 39,1 39,5 39,4 39,0 39,0

39,1 39,0 40,2 40,8 39,1 38,8

38,8 40,3 40,5 39,3 39,0 38,1

40,1 40,9 39,7 40,0 39,1 38,9

39,0 40,5 40,6 40,4 39,6 39,1

39,1 Г 40,7 40,9 40,3 40,2 39,6

38,9 39,1 40,1 40,0 40,5 39,2 зя а зд я } г 40,3 40,4 /ю т у -«- за т и-' } х

39,0 41,0 40,7 40,2 40,0 40,3

15 июля

38.6 38,5 39,0

38.7

16 июля

38,5 38,8 38,8 38,3

Вакцина производственная

Контроль

75

76

77

78

79

80 РТ

82

38.1

38.2

38.3

38.4

38,9 38,9 39,2 39,9

38.4

37.6

38.8

38.3

39.5

38.7

38.4

38.9

- 33

Однако следует заметить,что из четырех телят, иммунизированных опытной вакциной, у двух ( № 71 и 73) отмечалось незначительное повышение температуры тела ( до 39,8°С). Помимо того, у животного №73 на месте аппликации вируса возникла небольшая афта, наличие которой на слизистой оболочке верхней губы совершенно не нарушало у него приема корма и воды»

Подопытных животных в поствакцинальный период и в период после контрольного заражения ящуром подвергали клиническим обследованиям, которые" проводили по следующей схеме: общее состояние животного, температура тела, состояние сердечно -сосудистой системы, органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и выделения.

До вакцинации ( в день вакцинации ) и через 3, 7, 14, 21 и 30 дней после вакцинацийув те же сроки после контрольного заражения от всех подопытных животных брали кровь для биохимических исследований.

Взятие крови производили в утреннее время до кормления и поения. Пробирки с пробами крови помещали в термостат при 27° на 2 часа, после чего обводили сгустки крови стерильной стеклянной палочкой и продолжали отстаивание в течение 24 часов при комнатной температуре. Сыворотки сливали в стерильные пробирки и исследовали по следующим биохимическим показателям:

1.Свободные аминокислоты,

2.Ферментативная активность глютамико-аспарагиновой и глютамико-аланиновой аминофераз.

Заключение диссертации по теме «Другие cпециальности», Демин, В. Д.

УЛ. выводы

1. Качественный состав свободных аминокислот сыворотки крови молодняка крупного рогатого скота как при вакцинации, так и при последующем заражении ящуром типа "О" вакцинированных и контрольных животных оставался однородным. Однако количественное содержание многих из них подвергалось существенным изменениям, особенно в период после заражения.

Равным образом и колебания ферментативной активности аминофераз, в основном ACT, оказались также наиболее выраженными в период после заражения.

2. Наибольшие сдвиги в содержании свободных ами-нркислот и активности аминофераз наблюдались в основном на 7-й день с момента вакцинации или заражения и в меньшей степени в другие сроки исследования.

3. При вакцинации содержание отдельных свободных аминокислот в основном повышалось. Это особенно было заметно у двух аминокислот (серина и аланина) при иммунизации опытной фреоновой вакциной, а у четырех аминокислот (серина, аланина, лейцинов и тирозина) при иммунизации производственной вакциной?

3 динамике аминофераз в поствакцинальный период характерно увеличение лоьффициента АСТ/АЛТ у животных, привитых производственной вакциной.

4. В период после заражения направление сдвигов изученных веществ у крупного рогатого скота ра&личных подопытных групп было едедущим:

А. У животных, привитых опытной вакциной, содержание фенилаланина и алашна, а также активность фермента ACT повышались, ааоборот, содержание валина, треонина, серина, глютаминовой и аспарагиновой кислот понижалось. Содержание лизина вначале (7-й день) было повышенным, а затем (14, 21 и 30-й день) значительно снижалось.

Б. У животных, привитых производственной вакциной, содержание аргинина, лейцинов, фенилаланина и алашна, а также активность ACT и величина коэффициента АСТ/АЛТ значительно повышались, а содержание лизина, треонина, серина, глютаминовой и аспарагиновой кислот соответственно понижалось. i. У контрольных (невакцинированных) животных содержание валина, фенилаланина и аланина, а также активность ACT существенно повышались, а содержание i лизина, аргинина, треонина, серина и гдютаминовой кислоты соответственно понижалось.

Установленные биохимические изменения крови при яду ре позволяют расширить и дополнить КаЖ представления о тропизме его возбудителя, о патогенезе я состоянии системы нейрогуморальной регуляции обмена ведеств, а также о сущности иммуногенеза при данной инфекции.

Выражаю искреннюю признательность и сердечно благодарю моего научного руководителя доктора биологических наук, профессора КЛИМОМ Николая Михайловича и кандидата ветеринарных наук МАЛАХОВА Алексея Григорьевича за предоставленную мне тему; за повседневное руководство и помощь при выполнении и оформлении настоящей работы.

Искренне благодарю сотрудника института,кандидата биологических наук ПОЛЯКОВА Виктора Филипповича за ценные советы по ароматографическому анализу и оформлению работы.

Глубоко благодарю весь коллектив лаборатории биохимии и полимеров за товарищескую помощь в работе.

• —, • , • • , , ,

Список литературы диссертационного исследования Демин, В. Д., 1966 год

1. АЗИМОВ Г.И., 1958. КРИНИЦИН Д.Я., ПОПОВ Н.Ф.2. АКУЛОВ А.В. 193I.3. АКУЛОВ А.В. 1932.4. АКУЛОВ А.В. 1932.5.АКУЛОВ А.В.1955.

2. Физиология сельскохозяйственных животных.

3. М. , " Сов ет ска я мау ка и.

4. О патогенезе щура. Вет.спец. 12, 20-25.

5. К вопросу о патогенезе ящура. В сб.,"Ящур в современном освещении", М.,Сельхозгаз, 33-40.

6. Патологоанатомические изменения при ящуре. В сб.: "Ящур в современном освещении", М.,Сельхозгиз, 40-55.

7. Патологические изменения при экспериментальном ящуре кроликов. Ветеринария, №1, 20-24.

8. АЛЕКСЕЕВ Г.А. 1962. Клиническая гематология. М.,Медгиз.7. ШЕВСКАЯ ЛЛ. 1965«8. АЛЛИСОН Д.1952.9. АСАТИАНИ B.C. 1959.1. Ю.АСАТИАНИ B.C. 1965.1.. АФОНОВА В.Н. 1963.

9. О регуляции активности глютамат-ала-нин и глютамат-аспартат-трансами-наз печени и почек гормонами коры надпочечников и щитовидной железы. Вопр,мед.химии, №3, 57-63.

10. Биологическая оценка белков. В сб.: "Белки и аминокислоты в питании человека и животных", М.,ИЛ, 52-98.

11. Биохимический анализ. Тбилиси, "ЦОДНА", ч.Ш.

12. Новые методы биохимической фотометрии. М.,"Наука".

13. Исследование аминокислотного состава сыворотки крови при отравлении сероуглеродом. Сб.научн.тр. Рязанского мед,ин-та, т.23, 59-64.

14. АФОНСКИЙ С.И. 1964. Биохимия животных. М./'Высшаятпи-п-гта Г'школа

15. БАЛАХОВСКИЙ С.Д., БАЛАХОВСКИЙ И.С. 1953.14. БЕЛОГОРСКИЙ М.А. 1938.

16. БЕЛОГОРСКИЙ М.А., 1938* ЛИПАТОВ Г«И.16. БЛОК Р., БОЛЛИНГ Д.17. БОЙД В.18. БОЛДУИН Э.22. БРЕСЛЕР С.Е.23. БУКИН В.Н.24. БУКИН Ю.В.

17. Методы химического анализа крови. М.,Медгиж.

18. Влияние ящурного вируса на кинетику ферментов.

19. Микробиол.,эпидемиол.и иммунобиологии, т.20, в.5, 74-76.

20. Выделение глобулинов из противо-ящурной сыворотки и их биологическая и химическая характеристика. Ж.микробиолв.эпидемиол. и иммунобиологии, т.21, в.1 (7), 42.1949. Определение аланина.

21. В кн. "Аминокислотный состав белков и пищевых продуктов", М^ИЛ, 328.1949. Основы иммунологии.М.,МЛ. 1949.19. БРАУНШТЕЙН А.Е. 1947.20. БРАУНШТЕЙН А.Е. 1949.21. БРАУНШТЕЙН А.Е. 1957.1963.1940. 1963.

22. Основы динамической биохимии. М.,ИЛ.

23. Переаминирование и химическая интеграция азотистого обмена. Труды УП-го Всес.съезда физиол., биохим. и фармакологов, Москва.

24. Биохимия аминокислотного обмена. М.,Медгиз.

25. Главные пути ассимиляции и диссимиляции азота у животных. М.,йзд-во АН СССР.

26. Введение в молекулярную биологию. М.-Л., изд-во АН СССР.

27. Витамины, М.-Л., Пищепромиздат.

28. Стимуляция активности глутамико-щавелевоуксусной аминоферазы в зоне экспериментального инфаркта миокарда, докл.АН СССР, т.148, №2, 452-455.25, ВАЛИЛО Г,1910. Гипоэозинофилия крови и гистоэозино-|илия при ящуре» Ветобозрение,586

29. ВАСИЛЬЕВА О.А. I960. Фракционный состав белков сывороткикрови кроликов при иммунизации различными антигенами.Тр.Томского нги. ин-та вакцин и сывороток, т.12, 208-213.

30. ВИХР0ВА O.K. 1963. Изменение сывороточной аспартикоаминоферазы и альдолазы в связи с общим охлаждением организма. Тр.Новосиб. мед.ин-та, т.40,102-104.

31. ГЕРШШЮК Я.Л., 1962. Влияние пиридоксина,инсулина и глю

32. ЛЕТЧЕНКО О.Ю., МАРТИНЮК М.М.

33. ГЕРЩЕНОВИЧ З.С., ВЕКСЛЕР Я.И. 1963.

34. ГОВОРОВА С.В., 1964« РЕВЕНКОВ А.Г.козы на активность аминофераз , эритроцитов у разных животных in ши

35. Укр,биохим.журнал, т.34, N33,417-423

36. Защитный эффект аргинина при гипотермии. Биохимия, т.28, N«6, 937-941.

37. Применение магниевой соли глютаминовой кислоты при лечении травматической эпилепсии. Врач.дело, №6,601.

38. Влияние чумного микроба на некоторые стороны метаболизма вов-приимчивых к чуме животных. Тезисы I Всес.биохим.съезда, М.-Л., в.З.40. ДОБРИНСКАЯ М.А. 1962.41. ДОМАРАДСКИЙ И.В. 1962.42. ДРАГУНОВА Н.С. 1955.43. ДЮБО Р,1957.

39. ДЬЯЧКОВА А.Я., 1962. КИСЛЯК Н.С.45. ЗАКСТЕЛЬСКАЯ Л.Я. 1957.46. 3БАРСКИЙ Б.И., ИВАНОВ И.И., МАРДАШЕВ С.Р.1965.

40. Влияние глутаминовой кислоты на показатели углеводного обмена тканей белых крыс в условиях гипоксии.Тр.кафедры биохимии. 1-й Ленинград.мед.ин-т,в.2, 49-52.

41. Гипотеза "токсин-фермент" и роль ферментов бактерий в патогенезе бактерий. Усп.соврем, биологии,т.54, в.1, 57-70.

42. Лечение детских церебральных параличей глютаминовой кислотой. Педиатрия.М£, 59.

43. Биохимические факторы в микробных заболеваниях. М.,ИЛ.

44. Об обмене ароматических аминокислот у детей,больных острым лейкозом.

45. Вопр.мед.х:имии, т.8, №2, 144-149;

46. Проблема специфической профилактики гриппа. Докторская диссертация, Москва.

47. Биологическая химия. Л.,"Медицина".47. ЗИЛЬБЕР Л.А.48. ЗИЛЬБЕР Л.А.1948. Основы иммунитета.,М.,Медгиз. 1958. Основы иммунологии.М.,Медгиз,

48. ЗЯЗЕВ А.Ка, 1962. К вопросу исследования аминокислот ЩЕРБАК Ю.& в сыворотке крови в норме и при некоторых инфекционных болезнях. В сб.:"Лечение инфекц.больных". М., в.5, 301-307.

49. ИГНАТОВИЧ A.B. 1963. Влияние метионина, лизина, фенилаланина на синтез антител и регенерацию белков крови при кровопотерях»6 Сб. тр.Курского мед. ин-та, в. 18. 136-138.51. ЙНГРЭМ Л.1964. Механизмы биохимических реакций. М., "Мир".

50. КАПЕТАНАКИ К.Г. 1962. К методике определения трансаминазаминофераз) в сыворотке крови; Лабор.дело, М, 20-23.53.КАПЛАНСКИЙ С.Я.

51. КАРПЮК С.А., ГЕРМАНЮК Я.Л.55.КАФИАНИ К.А.56.КАФИАНИ К.А.57.КЛИМОВ Н.М.

52. Вопр. мед.химии, т.8, №8, 270-274.1963. Механизм внутриклеточной регуляции биосинтеза рибонуклеиновых кислот и их предшественников.

53. КОВАЛЬСКИЙ В.В., ШУМКОВА И.А.60. КОЛЛИ Е.А<61. КОМНАТНАЯ Л.И.62. КОНДРАХИН И.П,

54. КОПТЕВА Л.А., -ЦУВЕРКАЛОВ Д.А., ПАНКОВА Г.Е.

55. КОРОТКОВА Н.П., ИГНАТОВИЧ А.В.65. КОЧЕРГИН Б.Не- 139 1963.1954.1963.1963.

56. КОЧЕТКОВ Н.К. ТОРГОВ И.В., БОТВИНИК М.М.

57. Адаптивные изменения ферментов молочной железы коров. Докл.АН СССР, т.152, №5, 1243-1246.

58. Роль ферментных систем в синтезе тироксина и изменения их активности при различном функциональном состоянии щитовидной железы.

59. Тезисы докл.на объединен« сессии Всесоюзн. и Укр.ин-тов эксперим. эндокринологии,посвящен. 300-летию воссоединения Украины с Россией.

60. Ферменты переаминирования в слюне человека.Вопр.мед.химии, т.9,И£, 581-583.

61. КУДРЯШОВ Б.А. 1948. Биологические основы учения овитаминах. М.,"Советская наука".68. КУЗИН А.М.1947.

62. Аминокислоты как активаторы и ингибиторы биохимических процессов. В сб.:: "УП Всесоюзн.съезд физиологов,, биохимиков, фармакологови474.69. ШАЙНИС Р.А. 1952.

63. ЛАРИОНОВА Е.М., ЛЕДЕНЦОВ Ю.К.

64. ЛЕБЕДЕВА З.Н., НУРИАХМЕТОВА 3,Ю«

65. ЛЕДЕНЦОВ Ю.К., ЛАРИОНОВА Е.М.73. ЛИВШИН А.174. ЛИВШИН А.М.75. ЛИСОВСКАЯ Н.П.1962.

66. Изменение некоторых биохимических показателей щ)ови при применении тканевой терапии. Труды Ин-та ( Рижский науч*-ис-след.ин-т ортопедии и йосстан. хирургии), т.2, 307-314.

67. Материалы по изучению аминокислотного обмена между стельной коровой и плодом у телят разного возраста.Автореферат кандидатской■диссертации. Москва

68. К изучению обмена аминокислот между организмом матери (коровы) и плода в норме и при заболевании фасциолезом. Тр.Моск.вет.академии, т.36, 107-117.

69. Биохимия аминокислот.М.,ИЛ.

70. Биохимия и центральная нервная система. М. ,Ш1,

71. Электрофоретическая характеристика белковых фракций сыворотки крови крупного рогатого скота при ящуре.

72. Тр.Моск.вет.академии,т.18,58-67.

73. Электрофоретическое исследование белков сыворотки крови крупного рогатого скота при экспериман-тальном ящуре. Автореферат кандидатской диссертации.Москва.

74. Электрофоретическое исследование белков сыворотки крови у крупного рогатого скота при формировании противоящурного иммунитета. Материалы 3-й Всес.конференции по физиолог, и биохим.оснорам повышения продуктивности с.-х. животных.Боровск,338-339.

75. Содержание свободных аминокислот в плазме и форменных элементах крови при лейкозах. Тр.Узб.н.-и. ин-та гематол.и переливания крови т.2, 71-78. п

76. Некоторые ферменты как факторы патогенности микробов. Тр.Моск.н.-и.-ин-та вакцин и сывороток, т.19,57-65.85.88. НАШОВА В.Во89. НЕ0РАТ Г., ШЛИ К.90. НЕТЕСА А.И.91. НИЛОВА Н.С.92. НУРИЕВ Г.Г.

77. ОЛЕНИЧЕВА Л.С., ЭЙЗЕНГАРТ Р.С.94. ОПАРИН А.И.95. ОРЕХОВЫЧ В.Н.

78. МЕРЕШНСКИЙ М.Ф., ЧЕРКАСОВА Л.С.

79. В сб.:"Аминокислотное питание свиней и птицы". М,,Сельхоз-издат,131-135.1963. О содержании свободных аминокислот в больших полушариях головного мозга.

80. Исследование отношений между витаминами-коэнзимами и соответствующими ферментами в зависимости от возраста животного и под действием некоторых веществ, свойственных организму. Биохимия, т.28, в.1, 3-8.

81. Биофизическая химия.,М.,"Высшая школа".

82. Количественное определение аминокислот при помощи хроматографии на бумаге методом образования медных производных аминокислот с нингидрином. М.,(Акад.мед.наук СССР. Йн-т биол.и мед.химии).

83. Определение глутамико-аланиновой и глутамико-аспарагиновой ами-нофераз ( трансаминаз) в сыворотке крови человека.!.,(Акад. мед.наук СССР.Ин-т биол.и мед. химии).

84. Динамика свободных аминокислот крови у высокопродуктивных коров в норме и при нарушении обмена веществ.

85. Автореферат кандидатской диссертации.Москва Кузьминки - МВА.

86. Активность сывороточных глутами-но-щавелевоуксусной,глутамино-пировиноградной трансаминаз и лактико-дегидрогеназы после введения метилтевтостерона. Терапевт,.архив,т.34,„ №4. 95-97.

87. Клиническая картина ящура. В сб.:"Ящур в современном освещении", М.,Сельхозгиз,55-72.

88. Значение ферментных методов в диагностике заболеваний. Вопр.мед.химии,№6,228.104. ПОЛЯКОВ В.Ф.105. поляновскийо.л.106. ПОПОВ д.т.107. РАМОН Г.108. РАПОПОРТ И.А.109. РОКИЦКИЙ П.Фо110.РУБАН Е.Л.1. Ш.САНТОИ Я., КОВАЧ В.

89. В кн. "Вопросы биохимии мышц", Киев,Медгиз; 221.1928. К методике искусственного заражения ящурным вирусом крупного рогатого скота .ВСВ, №18,569-570.

90. СКОМОРОХОВ А.Л., 1929. ДОРОФЕЕВ А. А., КУДРЯВЦЕВ А.А.

91. СКОМОРОХОВ А.Л. 1952. П7.С10Б0ДИН В.Б. 1964.1. П8.С0ЛДАТ0В А.П. 1961.119.СОЛОВЬЕВ В.Д. 1950.120. СОЛОВЬЕВ В.Д. 1963.

92. ТР0ИЦКИЙ Г.В., 1956. СОРКИНА Д.А."

93. ТРОИЦКИЙ Г.В., 1957. СОРКИНА Д.А.123. УСМАНОВА P.M. 1963.124. УТЕВСЕ1Й A.M. 1950.125. ФЕРДМАН Д.Л. 1962.

94. Изменение состава крови при экспериментальном ящуре у крупного рогатого скота. Тр.ГИЭВ,т.6,3-П.1. Ящур. М.,Сельхозгиз.

95. О влиянии меди на активность аминофераз некоторых органов. В сб.: ''Материалы научн.конферен ции Челябинского мед.ин-та", Челябинск, 291-292.

96. Основы вариационной статистики. Москва.

97. Серологическая характеристика гриппа. 1.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиологии,№11,20-25.

98. Общие закономерности и особенности противовирусного иммунитета. 17-я сессия Акад.мед. наук,посвященная проблемам вирусологии, ,Л.,46-49.

99. Изменение белков сыворотки крови при их участии в переносе различных веществ. Биохимия, т.21, в.6, 784-792.

100. О происхождении альфа- и бета-глобулинов плазмы крови.Укр. биохим. журна л, №3,340-346.

101. Изменение протеолцтической активности щитовидной железы при различных формах зоба. Вопр. биол.и краевой мед «в.4, Ташкент АН Узб.ССР, 346-349.

102. Данные и перспективы изучения обмена адреналина в эксперименте и клинике. Усп.биол.химии, т.1,423.1. Биохимия. • М.,Медгиз.

103. ФИЛАТОВ A.H. 1959, Лечебные препараты из крови и ихклиническое применение,д.,Медгиз»

104. ХАЗИП0В Н.З. 1965. Содержание свободных аминокислотв печени и сыворотке крови больных ящуром крольчат. В сб."Актуальные вопросы ветовирусологии",М., ч.1, 83.

105. ХОМИЦКИЙ Ф.В. 1956. Патолого-анатомические измененияв сердце телят при ящуре. Труды Туркм.с.-х.ин-та им.М.И. Калинина, т.8,137-140.

106. ЦУВЕРКАЛОВ Д.А. 1964. Азотистый метаболизм первичнойкультуры эпителия почки крупного рогатого скота в норме и при инфицировании вирусом ящура.Материалы Всесоюзн. конференции по вопр.вет. вирусологии, M.,81-82.

107. ЧУЛК0ВА З.С., 1958. Хроматографическое определение ГУМИНА И.И. качественного состава аминокислотв сыворотке крови.Лабор.дело,!©, 22.

108. ШЕЙЕВСКИЙ H.A. 1946. Клиническая эндокринология.,1. М.,Медгиз.

109. ШУБИН В.А. 196I» Патоморфология злокачественногоящура ягнят. Тр.Всесоюзн.ин-та эксперим.ветеринарии,т.24,87-92.

110. ЯНОВСКИЙ Д.Н. 1957. Картина крови и ее клиническоезначение.Киев.

111. ЯХНИНА Д.Н. 1962. Аминоферазы и изменение их аквивности в организме. Тр.Тадж.мед.ин-та,52,25-31.i 35. ARMSTEIN H. 1954.

112. BARBAGALLO- 1953. SANGI0RG2 G.l37. BELFRAGE Sv. 1963.138. BERETTA C. Í962.

113. BLACK A.L., l9bl, LÜICK J.R., KLEIBER M., BAXTlütt Cl.P.

114. Metabolism of glycine. Advanc. Protein Obern»9 v. 9j p. 2

115. Comportamento electroforetico delle Sieroproteine selle malattie infettive. Boll. Soc. ital. biol. sperim, 29, M 5, 108I- 1084.

116. Plasma protein pattern in rourse of acute infectious disease. Acta med. scand., v. 173, öuppl. M 395, 169.

117. BONSTEIN H., I96l. PAVEZ G., BRAKEL H.

118. BRADISCH C.J. 1954. HENDERSON W.M, BROOKSBY J.B.

119. Eine Vereinfachung und Verbesserung der Methode sur quantitativen Bestimmung von Ajninosaüren und Peptiden mittels des Ninhydrin- Kupferkomplekes* Biochem. Zeitschr., N 32b, 433. t

120. De 1 effet des différentes doses de pyridoxins et d* isoniazide sur 1* acti -vite de la transaminase glutamique ox al ascétique dans le sang. Schweiz. %• Tuberk. 18, N 6, 416« 431.

121. Electrophoretic studies of Serum. I» The Sera of Normal cattle. Niochemioal J.,v. 56, ft 2, 329 335.

122. BRADISCH C.J., 1954. Electrophoretic Studies of Sera®. II. HENDERSON f.M., The Sera of cuttle Infected with the

123. BROOKSBY J.B. Virus of Foot- and« Mouth Disease. Biochemical J., v. 56, N 2, 336 341.

124. BRADISCH C.J., 1954. Electrophoretic studies of Serum. HI. HENDERSON W.M., The Sera of cattle infected with thevirus of vesicular stomatites. Biochemical J.# v. 56, N 2, 342- 344.1. BROOKSBY J.B.

125. CABAUDP., L P.BP ER R. t «ROBLEWSKI P.1956. Colorimetric measurement of serum glutamic- oxaloacetic transaminase.imer. J. , Clin. Pathol., N 26, IIOI.

126. CAPEZZUTO A. 1962 . Cotoportamento dell attivita transaminasica glutamico ossalacetica e glutamico piruvica in silicotic!. Folia med., 45, N 10, 872- 882.148. CHANG S.K. , I$63.1. PENG T.P.,

127. Changes of free amino acids content in stimulated nerve, Scientla sinica, v.12, N 10, 1591 1592.

128. CZAJKA- KROPAS-ZEK L.0STR01S-KA A. 1962.

129. Badania nad enzymaiai Icrwi w gruzlicy. I. Wartose oznaczania aktywnosci trans« aminaz w surowicy w gruzlicy. Gruzliea i choroby pluc,j 3o, N I, 27 34.

130. FELLER D.D.» 1963. FEIST E.

131. Conversion of methionine and threonine to fatty acids by adipose tissue. Canad. J. Biochem. and Physiol.,v. 41,1. N 2, 269 273.

132. FELSZEGHY E., 1963 CHIRICUTA I., ABRAHAM A., P APILI AN C,1.fluenta arsurilor asupra roetabo-lismului aminoacisilor la sobolani. I« Organe interne si glande endocrine. Studia üniv. Babaes- Bolyai. Ser.chem«,8, N I, 387 390.

133. FLEISHER G.Â., 1963, VAKIH s.a.

134. The fate of enzymes in body fluids -- an experimental study. I. Disappearance rates of glutamlcpyruvie transalnina-se under vatious conditions. J. Lab. and Clin. Med., 61 , H I, 76-85.155. FRAPPIER A. 1964.

135. KEKfICK R.t I94I. RECORD B.163. KLEIN F., $963»

136. HAINES B.W., MAHLftNDT B.G.164. LERNER A.B. 1953.

137. LOSOISKY M.S., 1962. ALLTREE E.M., ATKINSON M.

138. MAGILL G.B., 1959. VROBLEWSKI P.» La DOE J.S.167. MEISTER A. 1957.1.8* MOORE S., 1954.1. STEIN V.H.169. MUTING D. 1962.70. NATH K.f 1962.1. WAHAL K.7M., AGARWAL V.N.

139. Multiple forms of enzymes. Bacteriol. Revs., 27, N 2, 155 169.

140. Some phisical properties of diphtheria antitoxic horse sera. Brit. J* exp. Pathol., v. 22, 407.

141. Dual nature of resistance mechanises as revealed by studies of Anthrax septicemia. J. Bacteriol., 85, N 5, 1032-- 1038.

142. Metabolism of phenylalanine and tyrosine. Advanc. Ehzymol., v. 14,p. 73.

143. Plasma colloid osaiotic pressure and its relation to protein fractions. Clin., Sci., 22, M 2, 248 257.

144. Serum lactic dehydrogenase and serum transaminase in human leukemia. Blood 14, N 7, 870 881.

145. Biochemistry of the amino acids. N.Y.

146. Procedures for the chromatographic determination of amino acids on four per cent grosslinked sulphonated polystyrene resins. J. biol. Chea.fV. 211, p.893.

147. Changes in the gree amino acid composition of cerebrospinal fluid in liver disease. Proc. Soc. Exptl. Biol, and Ned., HO, N 3, 620 622.

148. POPESCÜ a., 1961. tican v., POPESCÜ L.i/8. REJNEK J., 1963. BEDNARIK T., KOCI J.

149. JBaer. J. reter. Res., т. 22, N 87, 217 223.

150. Reconvalescenti si hyperimmuni horezi sera u slintarky a Kulhavky. Vet.Ca s., 3, 133- 151.

151. Biochemicka kontrola protislintavkovy-en preparatu. Suboг. prac. hygienikov. Slovenska Akad. ried.,448- 452»

152. Cercetari electrophoretice asupra sero-proteinelor, in cursul hiperimmunizarii antiaftose a bovinelor» Lucrarile stiin-tifice aie inst. de seruri si raccinuri. Pasteur- BucurestiJt 5, 59 65.

153. Microheterogeneity of albumin. Clin» chim. acta, 8, N 8, Ц6- 126.179« RIVA G. 1957. Das Serumeiweissbild. Berlin,180. SPJÈNGLER 1963. H.

154. SZUMIEL I. 1963. Heterogennosc enzymow. Postepy biochem*,9, N 2, 153 172.183. THAYER D.W.1. TERZ IAN I962« L. A.

155. The free amino acids of the ageing fe-male Aedes algypti mosquito« J.Insect. Physiol., 8, March Apr., 133- 143.

156. TONHAZY 1950. A repid method for the estimation of1. N«H*t1. WHITE N.D.t1. UMBREIT W.W.the glutamic- aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness. Arch. Biochem., N 28, 36.

157. WAELSCH H. 1944. Arch. fleurol. Psychiat.,N 5l# 393. PRICE J.C.18 b. WAUMAN 0. »PAPE J.1921. Experimentelle Untersuchungen der Maul -und Klauenseuche. Beri. tierärztl.Wöchr, 30, 349 351.18/. WEHMEYER 1954. P.

158. WIELLST&TTER Z. physiol, Chenu, M 186., 85.

159. R.,»ANANN 1930. E. , H0NDE1ALD M.190. 1ISLLSTATTER Endocardial Fibroelastosis associated

160. H. I96u. with generalized Glycogenic. Pediatries,26, 86

161. WROHLEWSKI 1957 F. ,CABAUD P.