Амилолитическая активность каталитических антител тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Бобрикова, Дина Робертовна

• Бобрикова, Дина Робертовна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бобрикова, Дина Робертовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность проблемы.

1.2. Цели и задачи исследования.

1.3. Основные положения, выносимые на защиту.

1.4. Научная новизна полученных результатов.

1.5. Теоретическое и практическое значение работы.

1.6. Апробация работы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Иммуноглобулины. Основные понятия.

2.1.1. Структура.

2.1.2. Типы иммуноглобулинов.

2.1.3. Генетические основы многообразия иммуноглобулинов.

2.1.4. Связывание гаптена.

2.1.5. Гибридомы и моноклональные антитела.

2.2. Абзимы — биокатализаторы с неограниченными возможностями.

2.2.1. Применение в медицине.

2.2.2.Применение в химии.

2.2.3. Возможная роль абзимов в химии углеводов.

2.3. Иммунная система обладает внутренним свойством генерировать абзимы при различных патологиях.

2.4. Возможные механизмы образования абзимов.

2.4.1. Анти-идиотипический.

2.4.2. Иммунный ответ на гаптен.

2.5. Доказательство принадлежности каталитической активности антителам.

2.6. Ферментативные свойства природных абзимов, гидролизующих нуклеиновые кислоты и фосфорилирующих белки.

2.7.Проблемы получения гомогенных препаратов абзимов.

2.8. Специфические субстраты для исследования глюкозидгидролаз.

2.8.1. Использование хромо- и флуорогенных меток.

2.8.2. Применение ферментативного подхода для синтеза субстратов.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Реактивы и ферменты.

3.2. Синтез субстратов.

3.2.1. п-Нитрофенил-а-О-глюкопиранозид.

3.2.2. Индолэтил-Р-Т)-глюкопиранозид. 49 3.2.3 МеишЬ-, рЫр- и 1гк1-мальтоолигосахариды

3.2.4.рЫр-(МеишЬ)-4.6-0-бензилиден-(этилиден-)мальтоолигосахариды.

3.2.5. Индолэтил-Р-0-галактопиранозил-4-0-бис-(а-0-глюкопиранозил)-4-0-а-0-глюкопиранозид.

3.2.6. Индолэтил 6-М-6-(5-(2-аминоэтиламино)-1-нафталенсульфонат)-6-дезокси-Р-0-галактопиранозил-4-0-бис-(а-0-глюкопиранозил)-4-0-а-Б-глюкопиранозид.

3.3. Доноры и пациенты.

3.4. Выделение абзимов.

3.5. Получение и очистка фрагментов иммуноглобулинов.

3.6. Другие методы.

3.7. Анализ степени очистки антител методом электрофореза в денатурирующих условиях

3.8. Анализ амилолитической активности антител методом электрофореза в денатурирующих условиях

3.9. Доказательство принадлежности амилолитической активности антителам.

3.10. Проверка активности.

3.11. Тип действия.

3.12. Измерение флуоресценции.

3.13. Анализ траисгликозилирующей активности. 58 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Электрофоретическая гомогенность препаратов абзимов.

4.2. Синтез субстратов.

4.3. Амилолитическая активность различных препаратов иммуноглобулинов.

4.4. Гидролитические свойства амилолитических абзимов.

4.4.1. рН-зависимость гидролиза субстратов.

4.4.2. Кинетические параметры гидролиза.

4.4.3. Зависимость каталитической эффективности от длины субстрата.

4.5. Тип действия.

4.5.1. а-Глюкозидазная активность.

4.5.2. Анализ конечных продуктов гидролиза субстратов.

4.5.3. Сравнительный анализ начальных и конечных продуктов гидролиза субстратов.

4.5.4. Различия в специфичности связывания субстратов препаратами антител из крови пациентов с СКВ.

4.6. Другие гликозидгидролазные активности.

4.7. Анализ констант ингибирования.

4.8. Трансгликозилирующая активность абзимов.

4.9. Субстратная специфичность абзимов в сравнении с а- амилазами.

4.10. Возможные пути образования амилолитических абзимов у людей с аутоиммунными заболеваниями и в человеческом молоке.

4.11. Тестирование амилолитической активности — дополнительный критерий для диагностики аутоиммунных заболеваний.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Амилолитическая активность каталитических антител»

1.1. Актуальность проблемы.

Феномен наличия у иммуноглобулинов каталитических свойств активно исследуется в течение последних десятилетий. Это привело к возникновению нового направления в классической иммунологии и энзимологии, новой области биокатализа - абзимологии. (Антитела-энзимы были названы «абзимами» как аббревиатура от AntiBody и enZIME).

Впервые гипотеза, согласно которой антитела, комплементарные структуре переходного состояния химической реакции, должны катализировать эту реакцию, ускоряя достижение переходного состояния и стабилизируя его, была высказана Б.Дженксом в 1969г (Jencks, W. 1969).Он же предвидел возможность получения абзимов как антител к стабильным аналогам переходных состояний. Идеи Дженкса получили экспериментальное подтверждение; в целом за последние 30 лет с использованием рассмотренного подхода направленного синтеза абзимов были получены антитела, способные катализировать более 100 различных химических реакций.

Открытие природных каталитических антител, явившееся реальным подтверждением теории, произошло лишь в 1989г (Paul et al., 1989). Столь значительное отставание практики от теории связано с уровнем развития методов выделения и очистки антител, а именно, с возможностью доказать принадлежность каталитической активности непосредственно антителам, а не каким-либо примесям ферментов. До этого считалось, что основная функция антител заключается только в связывании и элиминировании антигенов, а обнаруженная каталитическая активность (Slobin, 1966., Kit et al., 1991., Кульберг и др., 1969) принадлежит «ферментам, сорбированным на молекулах антител» (Slobin, 1966., Кульберг и др., 1969). Итак, в результате разработки методологии доказательства каталитической активности абзимов (Paul et al., 1989) (подробнее см. ниже), каталитические IgG и IgM, гидролизующие пептиды (Paul et al., 1989), белки (Kalaga et al., 1995), ДНК

Shuster et al., 1992; Gololobov et al., 1995), ДНК и РНК (Buneva et al., 1994; Vlassov ci a!., 1998a, 1998b; Andrievskaia et al., 2000; Baranovskiy et al, 2001) были обнаружены в сыворотке крови пациентов с различными аутоиммунными патологиями: бронхиальная астма (Paul et al., 1989), СКВ (системная красная волчанка) (Shuster et al., 1992; Gololobov et al., 1995; Buneva et al., 1994; Vlassov et al., 1998a, 1998b; Andrievskaia et al., 2000), аутоиммунный тиреоидит, полиартрит (Kalaga et al., 1995; Vlassov et al., 1998a, 1998b), PC (рассеянный склероз) (Baranovskii et al., 2001). Также абзимы с различными каталитическими активностями были найдены в крови и молоке здоровых матерей (Buneva et al., 1998; Nevinsky et al., 1998, 2000a, 2000b). Препараты slgA, выделенные из человеческого молока, обладают протеинкиназной (Nevinsky et al., 1998), ДНКазной или РНКазной активностями (Kanyshkova et al., 1997; Buneva et al., 1998; Nevinsky et al., 2000b), а также IgG и slgA способны гидролизовть ATP (Semenov et al., 1998).

В то же время антитела из крови здоровых доноров, а также больных гриппом, пневмонией, туберкулезом, тонзиллитом, язвой 12-перстной кишки и некоторыми онкологическими заболеваниями (рак матки, молочной железы, кишечника) не проявляли каталитических активностей (Baranovskii et al., 1997).

Давно известно, что аутоиммунные заболевания ассоциированы с циркуляцией аутоантител, связь которых с основным патологическим процессом установить удается не всегда. Так, ревматоидный фактор, который часто обнаруживают при ревматоидном артрите, представляет собой специфические антитела к сывороточному гамма-глобулину, но совершенно непонятно, почему они возникают и в чем заключается их действие. Аналогичным образом, при так называемых коллагенозах типа СКВ и дерматомиозита, часто находят циркулирующие антитела против ДНК или комплексов ДНК с гистонами, однако и в этом случае происхождение и функции аутоантител остаются неясными (Silverstein et al., 1987).

Перечисленные выше открытия каталитических функций у аутоантител поставили много дополнительных вопросов об их природе и возможной биологической роли. Можно предположить, что в каталитической активности абзимов запрограммированы дополнительные энзиматические возможности организма, появление которых происходит только в особых условиях, например, при беременности женщин, АИЗ, или других пока еще не обнаруженных случаях (Бешепоу ег а1., 1998). Перспективными направлениями дальнейших исследований в области биокатализа, обусловленного антителами, является поиск новых каталитических активностей антител, расширение круга исследованных заболеваний, а также детальное сравнение абзимов у здоровых людей и пациентов с АИЗ. Такие данные могут прояснить роль каталитических антител в этиологии и/или патогенезе различных заболеваний (так и их возможную функцию в случае здоровых рожениц), расширить наши представления о путях метаболизма биологически активных соединений в организме человека, привести к расширению классических представлений о роли иммуноглобулинов и могут способствовать более глубокому пониманию механизмов возникновения аутоиммунного ответа (АгкЫеузкша е1 а1.,1998).

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Бобрикова, Дина Робертовна

6. выводы.

1.Уровень амилолитической активности препаратов и ^М из сыворотки крови пациентов с подтвержденным диагнозом «рассеянный склероз» и «системная красная волчанка» на три порядка выше, чем у препаратов антител из крови здоровых доноров.

2.Высокочувствительный метод, основанный на измерении хромо- и флуорогенных меток синтезированных нами субстратов, дает возможность измерять скорость гидролитических реакций, катализируемых абзимами, при концентрациях субстратов порядка 10"6 М/л (порядка Км для антител), что необходимо для вычисления кинетических параметров амилолитических антител на основе стандартного метода начальных скоростей реакций.

3.Основной особенностью поликлональных абзимов является каталитическая гетерогенность.

4. Характер действия абзимов отличается от характера действия типичных а-амилаз по стереоспецифичности, кинетическим параметрам, типу действия в реакциях гидролиза субстратов.

6. ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ivanen, D.R., Kulminskaya, A.A., Eneyskaya, E.V., Ershova N.A., Shabalin, K.A., Savel'ev, A.N., Kanyshkova, T.G., Buneva, V.N., Nevinsky, G.A, Neustroev, K.N. (2002) Human autoantibodies with amylolytic activity. Biologia, Bratislava, vol. 57, Suppl. 11, 253-260

2. Saveliev, A.N., Ivanen, D.R., Kulminskaya, A.A., Ershova, N.A., Kanyshkova, T.G., Buneva, V.N., Mogelnitskii, A.S., Doronin, B.M., Favorova, O.O., Nevinsky, G.A., and Neustroev, K.N. (2003) Amylolytic activity of IgM and IgG antibodies from patients with multiple sclerosis. Immunol. Lett., 86 (3), 291 -297

3. Neustroev, K.N., Ivanen, D.R., Kulminskaya, A.A., Brumer III, H., Saveliev, A.N., Nevinsky, G.A. Amylolytic activity and catalytic properties of IgM and IgG antibodies from patients with systemic lupus erithematosus. Oral presentation at Human Antibodies and Hybridomas 2003, Osaka, Japan, October 2003; published in Human Antibodies (2003) 12 (l,2):31-34.

4. Saveliev, A.N., Kulminskaya, A.A., Ivanen, D.R., Nevinsky, G.A., Neustroev, K.N. (2004) Human autoantibodies with amylolytic activity, Trends in Glycoscience and Glycotechnology. 16: 17-31.

5. Ivanen, D.R., Kulminskaya, A.A., Shabalin, K.A., Isaeva-Ivanova, L.S., Ershova, N.A., Saveliev, A.N., Nevinsky, G.A., Neustroev, K.N., Catalytic properties of IgMs with amylolytic activity isolated from patients with multiple sclerosis. Med. Sei. Monit. 2004. 10:273-280.

БЛАГОДАРНОСТИ

Я хочу выразить огромную благодарность своему научному руководителю, безвременно ушедшему из жизни к.б.н. Кириллу Николаевичу Неустроеву.

Я выражаю благодарность д.б.н., профессору Г. А. Невинскому за любезно предоставленные препараты антител и к.б.н. А.Н. Савельеву за любезно предоставленный фермент циклодекстрин глюкозилтрансферазу из Bacillus sp.

Я также хочу поблагодарить всех сотрудников лаборатории энзимологии отделения молекулярной и радиационной биофизики ПИЯФ РАН за поддержку, помощь в работе над диссертацией и полезное обсуждение результатов. Особенно хочу поблагодарить к.б.н. Савельева А.Н. за критический анализ подготовленной диссертации и ценные замечания.

Работа выполнена при финансовой поддержке Программы фундаментальных исследований «Молекулярная и клеточная биология» Президиума РАН и Российского фонда фундаментальных исследований (проекты 03-04-48756, 03-04-49741).

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе впервые показано наличие амилолитической активности у препаратов IgG и IgM сыворотки крови пациентов с подтвержденным диагнозом рассеянный склероз и системная красная волчанка (Ivanen et al., 2002; 2004; Savel'ev et al.,2003), а также у препаратов IgG и slgA из человеческого молока (Ivanen et al., 2002; Savel'ev et al., 2003). Нами установлено, что фракции IgM, выделенные из крови пациентов с PC и СКВ, имеют амилолитическую активность, на три порядка превышающую активность IgM из крови здоровых доноров (Ivanen et 31^2002; 2004; Savel'ev etal., 2003).

Установлено, что за реализацию амилолитической активности препаратов антител в значительной степени отвечают Fab-фрагменты:

• Уровни активности исходных иммуноглобулинов и соответствующих им Fab-фрагментов практически равны (Ivanen et al., 2002; 2004; Savel'ev et al., 2003).

• Значения кинетических параметров Км и kcat в реакции гидролиза п-нитрофенил-мальтопентаозида, катализируемой препаратами IgG из крови пациентов с СКВ и соответствующими Fab-фрагментами практически не меняются (Neustroev et al., 2003).

Для исследования амилолитической активности антител (определения кинетических параметров и типа действия) нами были синтезированы и использованы специфические субстраты, представляющие собой мальтоолигосахариды, содержащие хромо- и флуорогенные метки. Подобные субстраты отвечают требованиям кинетических экспериментов с антителами т.к. позволяют измерять скорость гидролитических реакций, катализируемых абзимами, при концентрациях субстрата порядка 10"6 М/л (порядка Км для антител), что необходимо для определения кинетических параметров на основе стандартного метода начальных скоростей реакций.

В результате экспериментов, проведенных с использованием синтетических субстратов, обнаружено, что амилолитические абзимы, полученные от различных доноров^ демонстрируют изменение репертуара от индивида к индивиду (обладают различными рН-оптимумами; различными кинетическими параметрами; часть абзимов проявляет только экзо-амилолитическую активность, другие обладают также а-глюкозидазной; часть препаратов с экзо-амилолилтческим действием способны связывать агликон ф сайтом +1 активного центра и отщеплять его, а другая часть -нет). т

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бобрикова, Дина Робертовна, 2004 год

1. Avalle В., Thomas D., Friboulet A. 1998. Functional mimcry: elicitation of a monoclonal anti-idiotypic antibody hydrolyzing beta-lactams. FASEB J. 12: 1055.

2. Adachi K, Suzuki K, OhnoY, Sato B. Impaired amylase activities caused by binding of abnormal immunoglobulin A in patients with macroamylasemia. Clin. Chim. Acta. 1986; 154: 103-113.

3. Andrievskaia OA, Buneva VN, Naumov VA, Nevinsky GA. Catalytic heterogeneity of polyclonal RNA-hydrolyzing IgM from sera of patients with lupus erythematosus. Med Sei Monit 2000;6:460 -70.

4. Andrievskaya OA, Buneva VN, Yamkovoy VI, Nevinskii GA: Monoclonal antibodies to DNA hydrolyze RNA better than DNA. Dokl. Russian Akad. Nauk (Moscow), 1997; 355: 401-3

5. Andrievskaia OA, Buneva VN, Zabara VG, Naumov VA, Yamkovoi VI, Nevinskii GA: Immunoglobulins M from serum from peripheral blood of patients with lupus erythematosus effectively split RNA. Mol Biol (Mosk). 1998; 32: 908-15

6. Armand S, Drouillard S, Schülein M, Henrissat B, Driguez H. A 1997 bifunctionalized fluorogenic tetrasaccharide as a substrate to study cellulases. J Biol Chem;272:2709-13.

7. Armand S, Vielle C, Gey C, Heyraud A, Zeikus G. Henrissat B. 1996. Stereochemical course and reaction products of the action of beta-xylosidase from Thermoanaerobacterium saccharolyticum strain B6A-RI. Eur. J. Biochem. 236, 706-713.

8. Baranovskii AG, Kanyshkova TG, Mogilnitskii AS, Naumov VA, Buneva VN, Gusev EI, Boiko AN, Zargarova ТА, Favorova OO, Nevinsky GA:

9. Polyclonal antiobodies from blood and cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis effectively hydrolyze RNA and DNA. Biochemistry (Moscow), 1998; 63: 1459-69

10. Baranovskii AG, Matyushin VG, Vlassov AV, Naumov VA, Giege R, Buneva VN, Nevinsky GA: DNA- and RNA-hydrolyzing antibodies from blood of patients with various forms of viral hepatitis. Biochemistry (Moscow), 1997; 62: 1590-1599

11. Benkovic SJ. Catalytic antibodies. Annu. Rev. Biochem. 1992; 61: 29-54

12. Braun C, Brayer GD, Withers SG. Mechanism-based inhibition of yeast a-glucosidase and human pancreatic a-amylase by a new class of inhibitors: 2-deoxy-2,2-difluoro-a-glycosides. J Biol Chem 1995;270:26778-81.

13. Buneva VN, Kudryavtseva AN, Dubrovskaya VV, Khokhlova OV, Galenok VA, Nevinsky GA. Dynamics of nuclease activity level from blood of pregnant and parturient women. Biochemistry (Moscow) 2003;68:890-900.

14. Buneva VN, Andrievskaya OA, Romannikova IV, Gololobov GV, Yadav RP, Yamkovoi VI, Nevinskii GA: Interaction of catalytically active antibodies with oligoribonucleotides. Mol Biol (Moscow), 1994; 28: 738-43

15. Buneva VN, Kanyshkova TG, Vlassov AV, Semenov DV, Chlimankov DYu, Breusova LR, Nevinsky GA: Catalytic DNA- and RNA-hydrolyzing antibodies from milk of healthy human mothers. Appl. Biochem. Biotechnol, 1998;75:63-76

16. Bronstein I.B., Shuster A.M., Gromova I.I., Krashuk O.A., Geva O.N., Alekberova Z.S., Gabibov A.G. 1991. Anti-idiotypic antibodies to topoisomerase I in serum from patients with autoimmune diseases. Dokl. Akad. Nauk SSSR. 318: 1496.

17. Bronstein I.B., Shuster A.M., Gololobov G.V., Gromova I.I., Krashuk O.A., Belostotskaya K.M., Alekberova Z.S., Prokaeva T.B., Gabibov A.G. 1992. DNA-specific antiidiotypic antibodies in sera of patients with autoimmune diseases. FEBS Lett. 314:259.

18. Deng SX, de Prada P, Landry DW. 2002. Anticocaine catalytic antibodies. J. Immunol Methods, 269(1-2), 299-310.

19. Dupuy G, Hilaire G, Aubru C. 1987. Rapid determination of alpha-amylase activity by use of a new chromogenic substrate. Clin., Chem. 33/4, 524528.

20. Earnshaw WC, Rothfield N. Identification of a family of human centromere proteins using autoimmune sera from patients with scleroderma. Chromosoma. 1985;91:313-320

21. Eggert FM, Gurner BW. Reaction of human colostral and early milk antibodies with oral streptococci. Infect. Immun.1984; 44: 660-4.

22. Eneyskaya EV, Brumer H III, Backinowsky LV, Ivanen DR, Kulminskaya AA, Shabalin KA, Neustroev KN. Enzymatic synthesis of P-xylnase substrates: transglycosylation reactions of the P-xylosidase from Aspergillus sp. Carbohydr Res 2003;338:313-25.

23. Engvall T., Pesce AJ., Quantitative enzime immunoassay, 1978., Scand J. Immunol., 8(Suppl 7), 23.

24. Farkas E., Janossy L., Harangi J., Kandra L., Liptak A. 1997. Synthesis of chromogenic substrates of a-amylases on a cyclodextrin basis. 303., 407-415.

25. Friboulet A., Avalle B., Débat H., Thomas D. 1999. A possible role of catalytic antibodies in metabolism. Immunol. Today. 20: 474.

26. Gololobov GV, Chernova EA, Schourov DV, Smirnov IV, Kudelina IA, Gabibov AG. Cleavage of supercoiled plasmid DNA by autoantibody Fab fragment: application of the flow linear dichroism technique. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995; 92: 254-257

27. Gololobov GV, Mikhalap SY, Starov AV, Kolesnikov AV, Gabibov AG. DNA-Protein complexes: Natural targets for DNA-hydrolyzing antibodies. Appl. Biochem. Biotech. 1994; 47: 303-315

28. Gabibov AG, Gololobov GV, Makarevich Ol, Schourov DV, Chemova EA, Yadav RP. DNA-hydrolyzing autoantibodies. Appl. Biochem. Biotechnol. 1994; 47: 293-303

29. Gregory RL, Kindle JC, Hobbs LC, Filler SS, Malmstrong HS. Function of anti-Streptococus mutants antibodies: inhibition of virulence factors and enzyme neutrolization.Oral Microbiol. Immunol. 1990; 5: 181-188

30. Guo J., Huang W., Zhou G. W., Fletterick R. J., Scanlan T. S. 1995, Mechanistically different catalytic antibodies obtained from immunization with a single transition-state analog. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 92, 1694-1698.

31. Haegele EO, Kratzer M., Schaich E, Rauscher E. 1989. Mechanism of action of human pancreatic and salivary alpha-amylase on 4,6-ethylidene-alpha-4-nitrophenyl-maltoheptaoside substrate.Clin., Chem., 35, 188-199.

32. Haegele EO, Schaich E, Rauscher E, Lehmann P. 1982. Mechanism of action of human pancreatic and salivary alpha-amylase on alpha-4-nitrophenyl maltoheptaoside substrate. Clin., Chem., 28, 2201-2205

33. Hanson LA, Carlsson B, Cruz JR. Immune responce in the mammary glands. In: Ogra PL, Dayton DH, editors. Immunology of Breast milk. New York: Raven Press, 1979: 145-157.

34. Hanson LA, Hahn-Zoric M, Berndes M, et al. Breast feeding: overview and breast milk immunology. Acta Paediatr. Jpn. 1994; 36: 557-561

35. Harris H., Watkins JF. Hybrid cells derived from mouse and man: Artificial heterokaryons of mammalian cells from different species., 1965, 145, 709.

36. Hifumi E., Mitsuda Y., Ohara K., Uda T. 2002. Targeted destruction of the HIV-1 coat protein gp 41 by a catalytic antibody light chain. J. Immunol Methods. 269(1-2), 283-298.

37. Hifumi E., Okamoto Y., Uda T. 2001. How and why 41S-2 antibody subunits acquire the ability to catalyze decomposition of the conserved sequence of gp41 of HIV-1. Appl. Biochem. Biotechnol. 83: 209.

38. Hilvert D. Catalytic antibodies. Pyre Appl. Chem. 1992; 64: 1103-1113

39. Inaba T., Ohgushi T., Iga Y., Hasegava E. 1984. Sinthesis of 4-Methylcoumarin-7-yloxy Tetra-N-acetyl-b-chitotetraoside, a novel synthetic substrate for the fluorometric assay of Lysozyme. Chem. Pharm. Bull. 32(4) 1597 1603.

40. Ingana S. M., // S. J. Immunol. 1981., 13, 343.

41. Jencks W.P. Catalisis in chemistry and enzimology. N.Y.: McCraw -Hill, 1969. P 289.

42. Kakinuma YH, Fujii I, Nishi Y. 2002. Selective chemotherapeutic strategies using catalytic antibodies : a common pro-moiety for antibody-directed abzyme prodrug therapy. J. Immunol Methods. 269(1-2),269-281.

43. Kalaga R, James LL, O'Dell JR, Paul S. Unexpected presence of polyreactive catalytic antibodies in IgG from unimmunized donors and decreased levels in rheumatoid arthritis. J. Immunol. 1995; 155: 2695-2702

44. Kandra L, Gyemant G, Farkas E, Liptak A. Action patterns of porcine pancreatic alpha-amylase on three different series of P-maltooligosaccharide glycosides. CarbohydrRes 1997: 298:237-42.

45. Kandra L, Gyemant G. Examination of the active sites of human salivary a-amylase (HSA). Carbohydr Res 2000;329:579-85.

46. Kanyshkova TG, Semenov DV, Chlimankov DYu, Buneva VN, Nevinsky GA. DNA-hydrolyzing activity of the light chain of IgG antibodies from milk of healthy human mothers. FEBS Lett. 1997; 416: 23-27

47. Karush F., The interaction of purified anti-P-lactoside antibody with gaptens. 1957. J. Am. Chem. Soc., 79, 3380-3384.

48. Katayama S, Ikeuchi M, Kanazawa Y, et al. Amylase-producing lung cancer: case report and review of the literature. Cancer 1981; 48: 2499-2502

49. Katayama S., Ikeuchi M., Kanazava y., Akamuma Y., Kosaka K., Takeuchi T. And Nakayama T. 1981 Cancer, Amylase-producing lung cancer: case report and review of the literature.48, 2499-2502.

50. Kaufman RA, Dunca LJ, Hall LM. 1980. Recent advances in measurement of amylase activity—a comparative study. Clin., Chem., 26. 1018.

51. Kim K, Keller MA, Heiner DC. Immunoglobulin G subclasses in human colostrum, milk and saliva. Acta Paediatr.1992; 81: 113-118

52. Kimura A, Takewaki S, matsui H, Kubota M, Chiba S. Allosteric properties, substrate specificity, and subsite affinities of honeybee a-glucosidase I. J Biochem 1990;107:762-8.

53. Kit YuYa, Semenov DV, Nevinsky GA. Phosphorylation of different human milk proteins by human catalytic secretory immunoglobulin A. Biochem. Mol. Biol. Intern. 1996; 39: 521-527

54. Kit YuYa, Semenov DV, Nevinsky GA: Do catalytically active antibodies exist in healthy people. Mol Biol (Moscow), 1995; 29: 519-26

55. Kit Yu. Ya., Kim A.A., Sidirov V. N. 1991 Affinity-purified secretory immunoglobulin A possesses the ability to phosphorylate human milk casein. Biomed Sci., 2,201 -204.

56. Kitahama S., Ocada S., Fukui T. 1978. Acceptor specificity of the transglicozilation catalyzed by cyclodextrin glucosyltranaferase. Agric Biol Chem. 42, 2369-2374.

57. Kobayashi S., Kashiva K., Kavasaki T., Shoda S. 1991. The pH dependence of the action pattern in porcine pancreatic alpha-amylase-catalyzed reaction for maltooligosaccharide substrates. J. Am. Chem. Soc . 113, 3079-3084.

58. Kobayashi S.,Shimada J., Kashiva K., Shoda S. 1992. Enzimatic polymerization of a-D-Maltosyl Fluoride utilizing a-amilase as the catalyst: a new approach for the synthesis of maltooligosaccharides. Macromolecules, 25, 3237-3241.

59. Köhler G., Howe SC., Milstein C. Fusion between immunoglobulin secreting and non-secreting mieloma cell lines. 1976a. Eur. J. Immunol., 6, 292.

60. Köhler G., Milstein C. Derivation of specific antibody producing tissue culture and tuneor lines by cell fusion., 1976b. Eur. J. Immunol., 6, 611.

61. Lacroix-Desmazes S, Misra N, Bayry J, Villard S, Kazatchkine MD, Kaveri SV. Antibodies with hydro lytic activity towards factor VIII in patients with hemophilia A. J Immunol Methods 2002;269:251-6.

62. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970; 227: 680-685

63. Leatherbarrow RT. Enzifitter. A non-linear regression data analysis program for IBM-PC. Elsevier Biosoft, Cambridge, 1987.

64. Lerner RA, Benkovic SJ, Shultz PJ. At the crossro ads of chemistry and immunology: catalytic antibodies. Science 1991; 252: 659-667

65. Lerner RA, Tramontano A. Catalytic antibodies. Sei. Am. 1981; 258: 58-60

66. Li L, Paul S, Tyutyulkova S, Kazatchkine MD, Kaveri S. Catalytic activity of anti-thyroglobulin antibodies. J. Immunol. 1995; 154: 3328-3332

67. Majima K, Teshima S, Hamada Y, Kikuchi T. 1995 Determination of alpha-amylase using a new blocked substrate (2-chloro-4-nitrophenyl 4(4)-0-beta-D-galactopyranosyl-beta-maltotetraoside). Clin., Chim Acta, 234, 177-179.

68. McCroskey T, Chang T, David H, Win E. 1982. Clin., Chem., 28, 17871791.

69. McGregor AW, Morgan JE, McGregor EA. 1992. C.R. 227, 301-313.

70. Maggro ED., ed. Enzime Immunoassay, CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980.

71. Malet C., Viladot J. L., Ochoa A., Gallego B., Brösa C., Planas A. 1995. Sinthesis of 4-Methilumbelliferyl-b-D-glucan oligosaccharides as specific chromoforic substrates of (1 3),(1 - 4)-b-D-glucan 4-glucanohydrolases. C. R. 274.285-301.

72. Marshall JJ, Miwa I. Kinetic difference between hydroyses of y-cyclodextrin by human salivary and pancreatic a-amylases. Biochim. Biophys. Acta. 1981; 661: 142-147

73. Mestecky J, Russell MW, Jackson S, Brown TA. The human IgA system: a reassessment.Clin. Immunol. Immunopathol.1986; 40: 105-114

74. Mei S., Modi B., Eklund S. H., Paul S. 1991, Vasoactive intestinal peptide hydrolysis by antibody light chains.J. Biol. Chem., 266, 15571-15574.

75. Moreau V, Drigues H. 1996. Design and chemoenzymatic synthesis of thiooligosaccharide inhibitors of 1,3:1,4-beta-D-glucanases.J. Chem. Soc. Perkin. Trans. I 525-527.

76. Nevinsky GA, Kit YuYa, Semenov DV, Buneva VN. Secretoiy Immunoglobulin A from Human Milk Catalyzes Reaction of the Milk Proteins Phosphorylation. Appl. Biochem. Biotechnol. 1998; 75: 77-91.

77. Nevinsky GA, Kanyshkova TG, Semenov DV, Vlassov AV, Gal'vita AV, Buneva VN. Secretoiy immunoglobulin A from Healthy Human Mothers Milk Catalyzes Nucleic Acid Hydrolysis. Appl. Biochem. Biotechnol. 2000; 83: 115-130

78. Nevinsky GA, Favorova OO, Buneva VN. Natural catalytic antibodies new characters in the protein repertoire. In: Golemis E, editor. Protein-protein interactions; a molecular cloning manual. Cold Spring Harbor: 2002; p. 523-34.

79. Nevinsky GA, Buneva VN. Human catalytic RNA- and DNA-hydrolyzing antibodies. J Immunol Methods 2002;269:235-45.

80. Nevinsky G. A, Kit Yu. Ya., Semenov D. V., Buneva B. N. 1998, Appl. Biochem. Biotechnol., 75, 77-91.

81. Nevinsky G.A., Kanyshkova T.G., Buneva V.N. Natural catalytic antibodies (abzymes) in normalcy and pathology. Biochemistry (Moscow), 65: 1245-1255,2000.

82. Nevinsky G.A., Buneva V.N. Human catalytic RNA- and DNA-hydrolyzing antibodies, J. Immunol. Methods, 269: 235-245, 2002.

83. Nevinsky G.A., Buneva V.N. Catalytic antibodies in healthy humans and patients with autoimmune and viral pathologies, J. Cell. Mol. Med., 7: 265-276, 2003.

84. Nevinsky GA, Buneva VN. Natural catalytic antibodies abzymes. In "Catalytic antibodies" (Ed. Ehud Keinan). VCH-Wiley press. 2004.

85. Newman J. How breast milk protects newborns. Sci. Am. 1995; 273: 76-79

86. Okada G., Genghof DS., Hehre EJ. 1979. The predominantly nonhydrolytic action of alpha amylases on alpha-maltosyl fluoride.C.R. 71, 287-298.

87. Omichi K, Hase S, Ikenaka T. Examination of aglycone-binding site of human salivary a-amylase by means of transglycosylation reactions. J Biochem (Tokyo) 1991;109:410-5.

88. Paul S. 1998. Mechanism and functional role of antibody catalysis. Appl. Biochem. Biotechnol. 75: 37.

89. Paul S. Catalytic activity of anti-ground state antibodies, antibody subunits, and human autoantibodies. Appl. Biochem. Biotechnol. 1994; 5: 241-255

90. Paul S., Voile D.J., Beach C.M., Johnson D.R., Powell M.J., Massey R.J. 1989. Catalytic hydrolysis of vasoactive intestinal peptide by human autoantibody. Science. 244: 1158.

91. Paul S., Li L., Kalaga R., Wilkins-Stevens P., Stevens FJ., Solom'on A. 1995. Natural catalytic antibodies: peptide-hydrolyzing activities of Bence Jones proteins and VL fragment. J. Biol. Chem. 270: 15257.

92. Paul S, Mei S, Mody B, et al. Cleavage of vasoactive intestinal peptide at multiple sites by autoantibodies. J. Biol. Chem. 1991; 266: 16128-16134

93. Paul S, Li L, Kalaga R. et al. Characterization of thyroglobulin-directed and polyreactive catalytic antibodies in autoimmune disease. J. Immunol. 1997; 159: 1530-1536

94. Paul S, Lan L, Kalaga R, O'Dell J, Dannenbring RE Jr, Swindells S, Hinrichs S, Caturegli P, Rose NR. Characterization of thyroglobulin-directed and polyreactive catalytic antibodies in autoimmune disease. J Immunol 1997;159:1530-6.

95. Paul W. E. 1987. Иммунология. M.: Мир.

96. Ponteverco C., Production of indefinitely multiplying mammaliam somatic cell hybrids by polyehtilene glicol (PEG) treatment. 1976. Somatic Cell Genet., 1,397.

97. Poser CM. The diagnosis of multiple sclerosis. Thieme-Stratton (NY): 1984; p. 3-13.

98. Potter M, Immunoglobulin-producing tumors and mieloma proteins of mice. 1972, Phisiol. Rev., 5, 631.

99. Reimer C, Raska I, Tan EM, Sheer U. Human autoantibodies: probes for nucleolus structu re and function. Virchows Arch. В Cell Patho.l Inch Mol. Pathol. 1987; 54: 131-143

100. Sastry L., Mubaraki M., Janda K. D., Bencovic S. J., Lerner R. A. 1991, Ciba Found. Symp., 159, 145-151.

101. Satomura S, Sacata Y, Omichi K, Ikenaka T. 1988. Alpha-amylase assay with use of a benzyl derivative of p-nitrophenyl alpha-maltopentaoside, BG5P. Clin Chem Acta, 174, 315-324.

102. Savel'ev AN, Eneyskaya EV, Isaeva-Ivanova LS, Shabalin KA, Golubev AM, Neustroev KN. The carbohydrate moiety of a-galactosidase from Trichoderma reesei. Glycocon. J. 1997; 14: 897-905

103. Savel'ev AN, Eneyskaya EV, Shabalin KA, Filatov MV, Neustroev KN. Autoantibodies with amylolytic activity. Prot. Pept. Lett. 1999; 6: 179-184

104. Savel'ev AN, Kanyshkova TG, Kulminskaya AA, Buneva VN, Eneyskaya EV, Filatov MV, Nevinsky GA, Neustroev KN. Amylolytic activity of IgG and slgA immunoglobulins from human milk. Clin Chim Acta 2001;314:141-52.

105. Schultz P. G., Lerner R. A., 1995, From molecular diversity to catalysis: lessons from the immune system.Science, 269, 1835-1842.

106. Shuster AM, Gololobov GV, Kvashuk OA, Bogomolova AE, Smirnov IV, Gabibov AG. DNA hydrolyzing autoantibodies. Science 1992; 256: 665-667 Biochemistry. 1966. 5, 2836 2841.

107. Silverstein R. 1987. Иммунология // Под редакцией У. Пола. М.: Мир.

108. Simiand С, Cottaz S, Bosso С, Drigues Н. 1992. Chemoenzimatic synthesis of modified maltooligosaccharides from cyclodecstrin derivatives. Biochimie. 74, 75-80.

109. Stewart JD, Bencovic SJ. Catalytic antibodies: Mechanistic and practical considerations. Chem. Soc. Rev. 1993; 22: 213-219

110. Suga H, Tanimoto N, Sinskey AJ, Masamune S. Giycosidase antibodies induced to a half-chair transition-state analog. J. Am. Chem. Soc. 1994; 116: 11197-11198

111. Suganuma T., Maeda Y., Kitahara K., Nagahama T. 1997. Stady of action of human salivary alpha-amylase on 2-choro-4-nitrophenyl-a-maltotrioside in the presence of potassium thiocyanate. C. R. 303., 219-227.

112. Suzuki H. Recent advances in abzyme studies. J. Biochem. 1994; 115: 623628

113. Takahashi N., Kakinuma H., Hamada K., Shimazaki K., Yamasaki Y., Matsushita H., Nishi Y. 2001. Improved generation of catalytic antibodies by MRL/MPJ-lpr/;pr autoimmune mice. J. Immunol. Methods. 235: 113.

114. Tawfik D.S., Chap R., Green B.S., Sela M., Eshhar Z. 1995. Unexpectedly high occurrence of catalytic antibodies in MRL/lpr and SJL mice immunized with a transition-state analog: is there a linkage to autoimmunity? Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 92:2145.

115. Teshima S, Mitshuhida N, Ando M. 1985. Determination of alpha-amylase using a new blocked substrate (3-ketobutylidene beta-2-chloro-4-nitrophenyl-maltopentaoside). 150, 165-174. Clin Chim Acta.

116. Teshima S, Hayashy Y. 1991. Determination of alpha-amylase in biological fluids using a new substrate (beta-2-chloro-4-nitrophenyl-maltopentaoside).Clin Chim Acta. 199, 23-32.

117. Towbin H, Staehen T, Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1979; 76:4350-4354

118. Tramontano A, Janda KD, Lerner RA. Catalytic antibodies. Science 1986; 234.

119. Usui T, Murata T. Enzymatic synthesis of p-nitrophenyl a-maltopentaoside in an aqueous-methanol solvent system by maltotetraose-forming amylase: A substrate for human amylase in serum. J Biochem 1988;103:969-72

120. Usui T, Murata T, Yabuuchi Y, Ogawa K. Transglycosylation reaction of maltotriose-forming amylase from Streptomyces grisens. Carbohydr Res 1993;250:57-66.

121. Usui T., Ogawa K., Nagai H., Matsui H. 1992. Enzimatic sinthesis of p-nitrophenil 45-0-P-D-galactosyl-a-maltopentaoside as a substrate for human a-amylases. Analitical Biochemistry 202, 61-67.

122. Vlassov A, Florentz C, Helm M, Naumov V, Buneva V, Nevinsky G, Giege R: Characterization and selectivity of catalytic antibodies from human serum with RNase activity. Nucleic Acids Res, 1998; 26: 5243-50

123. Walker GJ, Whelan WJ. The mechanism of carbohydrase action. Biochem. J. 1960; 76: 257-263

124. Wallenfels K., Foldi P., Niermann H., Bender H., Linder D. 1978. The enzymic synthesis, by transglucosylation of a homologous series of glycosidically substituted maltooligosaccharides, and their use as amylase substrates. C. R. 61., 359-368.

125. Wang J, Han Y, Wilinson MF. An active immunization approach to generate protective catalytic antibodies. Biochem J 2001;360:151-7.

126. Yanahira S., Kobayashi T., Suguru T., Nakakoshi M., 1995. Formation of oligosaccharides from lactose by Bacillus circulans beta-galactosidase. Biosci., Biotech., Biochem. 59, 1021-1026.

127. Yu J, Choi SY, Moon K-D, Chung H-H, Youn HJ, Jeong S, Park. H, Schultz PG. A glycosidase antibody elicidated against a chair-like transition state analog by in vitro immunization. Proc Natl Acad Sei (USA) 1998;95:2880-4.

128. Zhou YX., Karle S., Taguchi H., Planque S. 2002. Prospects for immunotherapeutic proteolitic antibodies. J. Immunol Methods. 269(1-2), 257-268.

129. Андриевская О. А., Бунева В. Н., Забара В. Г., Наумов В. А., Ямковой В. И., Невинский Г. А., 1998, Иммуноглобулины класса M из сыворотки крови больных системной красной волчанкой эффективно расщепляют РНК. Мол. Биол., 32, 908-915.

130. Барановский А. Г., Канышкова Т. Г., Могельницкий А. С. Наумов В.

131. A., Бунева В. Н., Гусев Е. И., Бойко А. Н., Заргарова Т. А., Фаворова О. О., Невинский Г. А. 1998, Поликлональные антитела из крови и спинномозговой жидкости больных рассеянным склерозом эффективно гидролизуют ДНК и РНК. Биохимия, 63, 1459-1469.

132. Власов А. В., Барановский А. Г., Канышкова Т. Г., Принц А. В., Забара

133. B. Г., Наумов В. А., Бреусов А. А., Жьеже Р., Бунева В. Н., Невинский Г. А. 1998, Субстратная специфичность ДНК- и РНК-гидролизующих антител из крови больных полиартритом аутоиммунным тиреоидитом. Мол. Биол., 32, 559-569.

134. Иммунологические методы. / Под ред. Фриммеля. М.: Медицина, 1987., 406-407.

135. Невинский А. Г., Канышкова Т. Г., Бунева В. Н. 2000. Природные каталитически активные антитела (абзимы ) в норме и при патологии. Обзор. Биохимия. 65, 1473-1487.

136. Семенов Д. В., Канышкова Т. Г., Кит Ю. А., Хлиманков Д. Ю., Акимджанов А. М., Горбунов Д. А., Бунева В. Н., Невинский Г. А., 1998,

137. Иммуноглобулины класса в молока человека гидролизуют нуклеотиды. Биохимия. 63 1097-1106.